JPH01320995A - ヌクレオシド化合物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ この発明は、微生物またはその処理物による塩基交換反
応を利用したヌクレオシド化合物の製造方法に関する。

［従来の技術］ 酵素を用いてヌクレオシドの塩基部分を他の塩基と交換
して新たなヌクレオシドを製造する方法は１例えば特開
昭５６−１０２７９４号公報に記載されている。この公
開公報には、セラチア属の常温菌セラチア会マルセッセ
ンス（５ｅｒｒａｔｉａｔｓａｒｃｅｓｃｅｎｓ）　Ｉ
　Ｆ　Ｏ３０５２の菌体から調製した粗酵素液を用いて
チミジンとウリジンまたは２°−デオキシウリジンとを
リン酸カリウムの存在下に塩基交換させて５−メチルウ
リジンまたはチミジンを生成させる方法が開示されてい
る。

［発明が解決しようとする課題］ 上記従来の方法に用いられている菌は、常温菌であるた
め、高温下では短時間で失活しやすく、再利用すること
ができない。

一般に、上記塩基交換反応等化学反応は、温度が高い方
が反応速度が速い、また、一般に反応物質の溶解度も温
度が高い方が高い。

したがって、高温下においても長時間にわたり安定に塩
基交換反応をおこなうことができる微生物ないし酵素を
利用できれば、塩基交換反応を高い基質濃度でおこなえ
るので高い濃度で生成物を得ることができるとともに、
反応時間も短縮されることとなる。しかしながら、従来
、そのような微生物ないし酵素を用いた塩基交換反応に
よるヌクレオシド化合物を製造する方法は知られていな
い。

［課題を解決するための手段］ 本発明者らは、上記課題を解決するために６５℃で生育
する好熱性菌的ｔｏｏｏ株を検索した。

その結果、バチルス属好熱性菌が耐熱性に優れ、塩基交
換反応を高い反応速度でおこなうことを見出し、本発明
を完成するにいたった。

すなわち、この発明は、チミンと、イノシン、アデノシ
ン、グアノシンおよびウリジンからなる群の中から選ば
れたリボヌクレオシド、または２°−デオキシイノシン
、２′−デオキシアデノシン、２′−デオキシグアノシ
ンおよび２゛−デオキシウリジンからなる群の中から選
ばれたデオキシリボヌクレオシドとを、水溶液中、リン
酸またはリン酸塩の存在下に、バチルス属好熱性菌生菌
体もしくはその菌体処理物により塩基交換反応させて５
−メチルウリジンまたはチミジンであるヌクレオシド化
合物を生成させることを特徴とするヌクレオシド化合物
の製造方法である。

バチルス属好熱性菌は、好ましくは、バシルスやステア
ロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｔｅａｒｏｔ
ｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）Ｊ　Ｔ　Ｓ　　８５９　テあ
り、上記塩基交換反応は通常４０℃ないし７０℃の温度
でおこなわれる。

以下、この発明をさらに詳しく説明する。

この発明は、チミンと特定のリボヌクレオシドまたはデ
オキシリボヌクレオシドとをバチルス属好熱性菌の生菌
体もしくはその処理物を用いて塩基交換させ、対応する
ヌクレオシド化合物すなわち５−メチルウリジンまたは
チミジンを製造する方法である。

バシルス・　　　− このｌＪｆの方法に用られるバシルスＯステアロサーモ
フィルスに属する菌株としては、既に保存されている種
々の既知の菌株を用いることができる。しかしながら、
使用する菌株としては、酵素生産ｌの高いバシルス・ス
テアロサーモフィルスＪＴＳ８５９が最も好ましいもの
である。この菌株は１通商産業省工業技術院微生物工業
技術研究所において寄託されており、その寄託番号は、
微工研菌寄第９６６６号（ＦＥＰＮ　Ｐ−９１３８８）
である。

この菌株の菌学的性質をバージェイス・マニュアルＯオ
ブ・システマティックーアナリシス、第２巻に準じて検
討した結果を以下に示す。

１、形態 桿菌：　５．４〜８．５　ｇｍｘＯ−７〜０．９　ｇｍ
ｍ同円形胞子形成：　２．０〜２．３　ｇ　ｍ　ｘ　１
．１〜１．２１Ｌｍ　　、１細胞に１個、位置は末端２
、培養的性質 ＮＢ培Ｊ１！４：　６２℃２日間培養。

平板上：白色僅かに黄色を含む、光沢あり、不透明、盛
り上らない、コロ ニーの形は円形波状。

スラント上：白色僅かに黄色を含む、光沢あり、不透明
、盛り上らない、生 育は中程度。

３、生化学的性質 １　グラム染色　　　　　　陽性 ２　産気的培養　　　　　　生育せず ３　運動性　　　　　　　　あり　周毛４　オキシダー
ゼ　　　　　陽性 ５　カタラーゼ　　　　　　陽性 ６　ゼラチンの液化　　　　液化能あり７　リドマスミ
ルク　　　　凝固させる８　　０Ｆテスト　　　　　　
発酵タイプ９　　Ｖ−Ｐ、ＭＲテスト　　瞼性 １０　　グルコースからの ガスの発生　　　　　発生せず １１　　グルコースからの 酸の産生　　　　　　産生した １２　アラビノースからの 酸の産生　　　　　　産生ぜず １３　マニトールからの 酸の産生　　　　　　産生した １４　キシロースからの 酸の産生　　　　　　産生せず １５　サブロー培地での生育 スラント　　　　生育した 液体　　　　　　生育した １　６　０．００１％リゾチーム 下での生育　　　　　生育せず １７　０．０２％アザイド 下での生育　　　　　生育せず １８　７％ＮａＣ１ 下での生育　　　　　生育せず （２％まで生育した） １９　カゼインの加水分解　　分解能あり２０　デンプ
ンの加水分解　　分解能あり２１　ジヒドロキシアセ トンの生成　　　　　生成せず ２２　エラグヨーク試験　　　生育せず２３　クエン酸
の利用　　　　陰性 ２４　インドールの産生　　　陰性 ２５　ウレアーゼ活性　　　　陽性 ２６　フェニルアラニンの 脱アミノ化　　　　　陰性 ２７　アルギニンデヒドロ ラーゼ活性　　　　　陽性 ２８　チロシンの分解　　　　陰性 ２９　レバン産生　　　　　　陰性 ３０　硝酸塩の還元　　　　　陽性 ３１　硝酸ナトリウムの 脱窒１＠　　　　　　　陰性 ３２　硫化水素の生成　　　　陽性 ３３　無機窒素源の利用 Ｎｏ３を唯一の窒 素源として　　　生育した ＮＨ４を唯一の窒 素源として　　　生育した ３４　　ＧＣ含量　　　　　　　４７．３％３５　生育
温度　　　　４０〜７１℃で生育最適　６０〜６８℃ ３６　　ＰＨ範囲　　ｐＨ５，７〜８．５で生育最適　
ｐＨ６，０〜７．０ 以上の性質に基づき、本菌株は、バシルスΦステアロサ
ーモフィルスと同定される。

上記菌株の培養に際しては、窒素源として、トリプトン
、ペプトンまたはカザミノ酸を、および炭素源としてグ
ルコースまたはスクロースを含み、さらに酵母エキスと
塩化ナトリウムを含む培地を用いる。培地の初発のｐＨ
は６．０〜７．０が好ましい。

培養は、６０〜６５℃、１８０〜２２０ｒｐｍで振盪培
養するか、通気攪拌培養によりおこなう、集菌時期は、
対数増殖期の中期から後期がよく、振盪培養の場合には
、培養開始４時間後から６時間後に当る。７時間を越え
培養終期になると菌体の持つ酵素活性は激減する。

こうして集菌した菌株は生菌体のままもしくは処理して
使用することができる（以下これらを総称して生菌体等
という）、処理物には、生菌体を超音波により破砕した
後遠心分離して得られる上清、またはこの上清を６５℃
で１時間熱処理した後遠心分離して得られる上清が含ま
れる。さらに、この上清をアセトン処理し、プロテアー
ゼ等の不要なタンパク賀を除去してより安定な形態とし
たものを用いることもできる。

ちなみに、上記菌体を破砕して得られた粗酵素液中の酵
素の６３℃における酵素活性の半減期は３９２〜４０１
時間であった。この値は、上記従来のセラチア・マルセ
ッセンスＩＦＯ３０５２から得られた酵素の６０℃にお
ける酵素活性の半減期が１時間であるのに比べて非常に
長いことを示している。

ヌクレオシド　　　の１ この発明により、５−メチルウリジンまたはチミジンで
あるヌクレオシド化合物を製造するには、」二記生菌体
等によりチミンを水溶液中でリポヌクレオシドまたはデ
オキシリボヌクレオシドと塩基交換反応させる。この反
応はリン酸またはリン酸塩の存在下でおこなう、リン酸
塩としてはリン酸カリウムを用いることができる。

チミンと塩基交換させるリポヌクレオシドはイノシン、
アデノシン、グアノシンおよびウリジンからなる群の中
から選ばれる。また、デオキシヌクレオシドは２°−デ
オキシイノシン、２′−デオキシアデノシン、２°−デ
オキシグアノシンおよび２°−デオキシウリジンからな
る群の中から選ばれる。

反応水溶液はチミン、リポース供与体であるリポヌクレ
オシドもしくはデオキシリポース供与体であるデオキシ
リボヌクレオシド、並びにリン酸塩を含んでいればよく
、これに上記生菌体等を加える。水溶液中のチミンの濃
度は２０〜１００ｍＭ、リポヌクレオシドまたはデオキ
シヌクレオシドの濃度は２０〜１００ｍＭ、およびリン
酸塩の濃度は５〜１００ｍＭであることが好ましいが、
チミンおよびリポヌクレオシドまたはデオキシリボヌク
レオシドの濃度はこれ以上であっても反応は生じる。

上記生菌体等のおこなう酵素反応は平衡反応であり、そ
の平衡定数は、例えばチミンとイノシンを反応させて５
−メチルウリジンとヒポキサンチンを生成させる場合６
３℃で０．２５であり、チミンとウリジンを反応させ５
−メチルウリジンとウラシルを生成させる場合６３℃で
１．６０である。また、チミンと２°−デオキシイノシ
ンを反応させてチミジンとヒボキサンチンを生成させる
場合の反応平衡定数は６３℃で０．２７であり、またチ
ミンと２′−デオキシウリジンを反応させてチミジンと
ウラシルを生成させる場合の反応平衡定数は６３℃で１
．２９である。従って、５−メチルウリジンまたはチミ
ジンの生成濃度は、反応液中のチミンとリポヌクレオシ
ドもしくはデオキシリボヌクレオシドの初期濃度によっ
て決まる。この発明における反応は、平衡定数に基づく
理論値まで進行する。

反応液のｐＨは通常６．０〜８．５、好ましくは６．５
〜７．０である。また、反応は４０〜７０℃でおこなう
ことができるが、温度が高いほど反応速度は速く、６０
〜７０℃の温度で反応させることが好ましい。

［実施例］ 以下、実施例によりこの発明をさらに具体的に説明する
。

実施例　１ （Ａ）　　トリプトン１０ｇ／Ｊ１．イーストエキス５
ｇ／文、グルコース３　ｇ／ｌ、グリセロール１８．９
ｇ／ｉおよび塩化ナトリウム３　ｇ／ｌからなる液体培
地（ｐＨ７，０）１００ｍｆＬを５００ｍＭの三角フラ
スコに入れ、滅菌した。これに、バシルス・ステアロサ
ーモフィルスＪＴＳ８５９を５白金耳接種し、６５℃、
相対湿度３５％、２１０ｒｐｍで４時間振盪培養した。

このとき菌の生育は対数増殖の中期であった。得られた
培養液を遠心分離器（１００ＯＧ、１０分）にかけ集菌
し、湿菌２６０　ｍ　ｇを得た。

（Ｂ）　　イノシン５．３６ｇ／ｆｉ、チミン２．５２
ｇ／交、リン酸−カリウム４．０８ｇ／文、リン酸二カ
リウム５．２２ｇ／Ｊｌ、およびグルコース２．０ｇ／
ｌからなる反応水溶液（ｐＨ７，０）１０ｍＪＬを仕込
んだ５０ｍＪｌ三角フラスコに上記（Ａ）で得た湿ｉＪ
　１３０　ｍ　ｇを入れ、６５℃で３時間反応させた。

生成した５−メチルウリジンを高速液体クロマトグラフ
ィーで定性定量分析した結果、１．５７ｇ／見（６，１
ｍＭ）の５−メチルウリジンが生成していることがわか
った。この濃度は、平衡定数０．２５から計算される理
論値６．６ｍＭの９２％に相当する０反応をさらに続け
れば１反応は理論値まで進む。

なお、高速液体クロマトグラフィーの分析には、ポンプ
に島津製作所製ＬＣ−６Ａを用い、カラムにはケムコソ
ルブ５−００５−Ｈφ　４ｘ３００を用いた。また、溶
離液には水：メタノール＝９５：５（Ｖ／Ｖ）を用い、
流速０−８ｍＪ１／分、カラム温度３８℃で分析した。

検出には紫外２５４ｎｍを用いた。ヒボキサンチン、チ
ミン、イノシンおよび５−メチルウリジンの保持時間は
、それぞれ、６．２．８．７．１０．４および１２．２
分であった。

実施例　２ 実施例１　（Ａ）と同様に培養して得られた湿菌４００
ｍｇを２０ｍＭリン酸カリウム水溶液（ｐＨ７，０）４
ｍ文に懸濁し、超音波で２分間処理し、遠心分離しく１
２０００Ｇ、１０分）、上清を得た。

イノシン２２　、３５　ｇ／ｌ、チミン１０．５０ｇ／
交、リン酸−カリウム１．３６ｇ／ｉ、リン酸二カリウ
ム１．７４ｇ／ｉからなる反応水溶液（ｐＨ７，０）３
６ｍＭに上記上清４　ｍ　４１を添加し、６５℃で１６
時間反応させた。生成した５−メチルウリジンは６．４
５ｇ／ｌであり、反応は完全に平衡状態に達していた。

反応後、反応液を陽イオン交換樹脂ダウエックス５０Ｗ
Ｘ（Ｈ＋型）１００ｍＭに通し、チミンおよび５−メチ
ルウリジンを含みヒボキサンチンおよびイノシンを含ま
ない通過画分を得た。この両分を濃縮後、高速液体クロ
マトグラフィーを用いて５−メチルウリジンを単離し１
７７ｍｇを得た。

なお、高速液体クロマトグラフィーによる分取には、ポ
ンプに島津製作所製ＬＣ−６Ａを用い、カラムにはりク
ロソルブＲＰ−１８φ　８ｘ２５０を用いた。また、溶
離液には水：メタノール＝　９７　、５　：　２　、５
　（Ｖ／Ｖ）を用い、流速４ｍ１１分でおこなった。検
出には紫外２５４ｎｍを用いた。

実施例　３ 実施例２と同様に調製した上清５０終見をイノシン５．
３６５ｇ／文、チミン２．５２２ｇ／見、リン酸−カリ
ウムＬ、３６ｇ／ｆＬおよびリン酸二カリウム１．７４
２ｇ／ｉからなる反応水溶液（ｐＨ７，０）９５０１Ｌ
！Ｌに添加し、４０℃、５０℃、６０℃および７０℃の
各温度で、１時間、２時間、および３時間反応させた。

生成した５−メチルウリジンを高速液体クロマトグラフ
ィーで分析した結果を下記表１に示す、この結果から、
反応温度の上昇とともに反応速度が速くなることがわか
る。

表　　１ 実施例　４ 実施例２と同様にして得た上清を６３℃で１時間加熱し
た後、遠心分離しく１２０００Ｇ、１０分）、上清を得
た。この上清を下記のアセトン処理に供して部分精製を
おこない、不要なタンパク質を除去した。

すなわち、上記上清ｌ容に対し０．８容の一１０℃のア
セトンを添加し、水冷下で１５分間攪拌した。これを遠
心分離しく１２０００Ｇ。

１０分）、上清を得た。この上清にさらに０．６容の一
１Ｏ℃のアセトンを添加し、水冷下で１５分間攪拌した
。これを遠心分離しく１２００Ｇ、１０分）、得られた
沈殿を０．５容の２０ｍＭリン酸カリウム溶液に溶解さ
せ、アセトン処理済み酵素液を得た。

熱処理後の酵素の回収率は９０．６％であり、アセトン
処理後のそれは９０．４％であった。また、タンパク質
当りの酵素の比活性は全体で２．７倍増加した。

こうして得たアセトン処理済み酵素液５０延又と２０ｍ
Ｍリン酸カリウム溶液（ＰＨ７，０）１５０ｇＲをチミ
ン２５ｍＭ、リン酸−カリウム１０ｍＭ、リン酸二カリ
ウム１０ｎｏ、Ｍおよび表２に示すリポヌクレオシド２
５ｍＭからなる反応水溶液（ｐＨ７，０）８００涛見に
添加し、６０℃で３０分間反応させた。生成した５−メ
チルウリジンを高速液体クロマトグラフィーで定性定量
分析した。結果を表２に併記する。

表　　２ 実施例　５ 実施例２と同様にして得た上清ｌ容に、チミン１．３ｍ
Ｍ、イノシン１．３ｍＭおよびリン酸カリウム２０ｍＭ
よりなる溶液（ｐＨ７，０）３容を添加した後、６３℃
で加熱した。得られた加熱処理済み粗酵素液１００ル又
をチミン２５ｍＭ、イノシン２５ｍＭおよびリン酸カリ
ウム２０ｍＭからなる反応水溶液（ｐＨ７，０）４００
μ交に添加し、６０分間反応させた。下記表３に、加熱
処理時１１１’ｆと、生ＩＯ＆５−メチルウリジンの濃
度を示す。

この結果から、酵素の活性と加熱処理の関係を表す以下
の式を得た。

１ｏｇＹ＝−７，５！１０　Ｔ＋Ｉａｇ１．１３２　ｙ
＝−０，１１８０上記式において、Ｔは加熱処理時Ｆｉ
ｎ　（時１？Ｊｆ）。

Ｙは熱処理をおこなった酵素液を用いて上記反応をおこ
なったときに生成する５−メチルウリジンの濃度、γは
相関係数である。この式から、酵素活性の半減期が４０
１時間であることがわかり、耐熱性が高いことが示され
た。

表　　３ 実施例　６ 実施例１　（Ａ）と同様にして得た湿菌１０ｍｇを２０
ｍＭリン酸カリウム溶液（ｐＨ７，０）２００ｇ見に懸
濁し、これを２°−デオキシイノシン２５ｍＭ、チミン
２５ｍＭおよびリン酸カリウム２０ｍＭからなる反応水
溶液（ｐＨ７，０）に添加し、６０℃で２時間反応させ
た。

生成したチミジンを高速液体クロマトグラフィーで定性
定量分析した結果、４．６２ｍＭのチミジンが生成して
いることがわかった。この濃度は、平衡定数０．２７か
ら計算される理論値６．８３ｍＭの６８％に相当する０
反応をさらに続ければ、反応は理論値まで進む。

なお、高速液体クロマトグラフィー分析は、実施例１と
同じ条件でおこなった。ヒボキサンチン、チミン、２°
−デオキシイノシンおよびチミジンの保持時間は、それ
ぞれ、６．２．８．７．１２．７および１８．３分であ
った。

実施例　７ 実施例１（Ａ）と同様に培養して得られた湿菌４００ｍ
ｇを２０ｍＭリン酸カリウム水溶液（ｐＨ７，０）４ｍ
文に懸濁し、超音波で２分間処理し、遠心分離しく１２
０００Ｇ、１０分）。

１：情を得た。

２゛−デオキシイノシン２１．０ｇ／４１．チミン１０
．５０ｇ／立、リン酸−カリウム１．３６ｇ／見、リン
酸二カリウム１．７４ｇ／ｉからなる反応水溶液（ｐＨ
７，０）３６ｍ文に上記上清４　ｍ　ｌを添加し、６５
℃で１６時間反応させた。

生成したチミジンは６　、２１　ｇ／ｌであり１反応は
完全に平衡状態に達していたφ 反応後１反応液を陽イオン交換樹脂ダウエックス５０Ｗ
Ｘ（Ｈ＋型）１００ｍｆＬに通し、チミンおよびチミジ
ンを含みヒボキサンチンおよび２′−デオキシイノシン
を含まない通過画分を得た。

この両分を濃縮後、高速液体クロマトグラフィーを用い
てチミジンを単離し１５８　ｍ　ｇを得た。

なお、高速液体クロマトグラフィーによる分取は実施例
２と全く同様におこなった。

実施例　８ 実施例７と同様に調製した上清１００ｇ文および２０ｍ
Ｍリン酸カリウム水溶液（ｐＨ７，０）１００鉢愛を２
°−デオキシイノシン２５ｍＭ。

チミン２５ｍＭ、およびリン酸カリウム２０ｍＭからな
る反応水溶液（ｐＨ７，０）８００μ文に添加し、４０
℃、５０℃、６０℃ｓよび７０”Ｃ（７）各温度で、１
時間、２時間、および３時間反応させた。生成したチミ
ジンを高速液体クロマトグラフィーで分析した結果を下
記表４に示す、この結果から、反応温度の」−Ｈととも
に反応速度が速くなることがわかる。

表　　４ 実施例　９ 実施例７と同様にして得た上清を６３℃で１時間加熱し
た後、遠心分離しく１２０００Ｇ、１０分）、上清を得
た。この上清を下記のアセトン処理に供して部分精製を
おこない、不要なタンパク質を除去した。

すなわち、上記上清１容に対し０．８容の一１０℃のア
七トンを添加し、水冷下で１５分間攪拌した。これを遠
心分離しく１２０００Ｇ、１０分）、上清を得た。この
上清にさらに０．６容の一１Ｏ℃のア七トンを添加し、
水冷下で１５分間攪拌した。これを遠心分離しく１２０
０Ｇ。

１０分）、得られた沈殿を０．５容の２０ｍＭリン酸カ
リウム溶液に溶解させ、アセトン処理済み酵素液を得た
。

熱処理後の酵素の回収率は９０．６％であり、アセトン
処理後のそれは９０．４％であった。また、タンパク質
当りの酵素の比活性は全体で２．７倍増加した。

こうして得たアセトン処理済み酵素液５０ル交と２０ｍ
Ｍリン酸カリウム溶液（ｐＨ７，０）１５０、文をチミ
ン２５ｍＭ、　リン酸−カリウム１０ｍＭ、　　リン酸
二カリウム１０ｍＭおよび表５に示すデオキシリボヌク
レオシド２５ｍＭからなる反応水溶液（ｐＨ７，０）８
００ｇＭに添加し、６０℃で３０分間反応させた。生成
したチミジンを高速液体クロマトグラフィーで定性定量
分析した。結果を表５に併記する。

表　　５ 実施例　１０ 実施例７と同様にして得た上清ｌ容に、チミン１．３ｍ
Ｍ、２゛−デオキシイノシン１．３ｍＭおよびリン酸カ
リウム２０ｍＭよりなる溶液（ｐＨ７，０）３容を添加
した後、６３℃で加熱した。得られた加熱処理済み粗酵
素液１　ｏｏ＝文をチミン２５ｃｎＭ、２′−デオキシ
イノシン２５ｍＭおよびリン酸カリウム２０ｍＭからな
る反応水溶液（ＰＨ７，０）４００経文に添加し、６０
分間反応させた。下記衣６に、加熱処理時間と、生成チ
ミジンの濃度を示す。

この結果から、酵素の活性と加熱処理の関係を表す以下
の式を得た。

１ｏｇＹ＝　　−０，８７ｘ　　１０　　丁＋ｌｏｇ２
．１０７　＝　　−０，９８９上記式において、Ｔは加
熱処理時間（時間）、Ｙは熱処理をおこなった酵素液を
用いて上記反応をおこなったときに生成するチミジンの
濃度（ｍＭ）、　γは相関係数である。この式から、酵
素活性の半減期が３９２時間であることがわかり、耐熱
性が高いことが示された。

表　　６ 比較例 セラチア・ブルセツセンスＩＦＯ３０５２の菌体から調
製した粗酵素液を用いて、ウリジンまたはデオキシウリ
ジンとチミンとを水溶液中、リン酸カリウムの存在下で
３７℃および６０℃の温度でそれぞれ反応させた。得ら
れる５−メチルウリジンまたはチミジンの生成速度は、
反応を３７℃でおこなった場合よりも６０℃でおこなっ
た方が２．８倍速かった。

次に、上記粗酵素液を予め６０℃で３時間゛加熱処理し
た粗酵素液を用いて上記と同様の反応をおこなったとこ
ろ、３７℃および６０℃の反応温度のいづれにおいても
５−メチルウリジンまたはチミジンは生成しなかった。

この結果から、５−メチルウリジンまたはチミジンの生
成速度は反応温度を高くすれば速くできが、上記常温菌
からＷｌした酵素は高温下で失活してしまうので、再利
用できず、また長期間にわたって反応をおこなうことが
できないことがわかる。

［発明の効果］ 以上述べたように、この発明においては、バシルス属好
熱性菌の生菌体もしくはその菌体処理物を用いることに
より、チミンとリボヌクレオシドまたはデオキシリボヌ
クレオシドとの塩基交換反応を高温下でおこなうことが
できるので、対応するヌクレオシド化合物すなわち５−
メチルウリジンまたはチミジンを速い速度でしかも高濃
度で得ることができる。また、高温下で塩基交換反応を
おこなうことができるので、高温下では生存し得ない常
温菌による汚染の問題も回避できる。さらに、用いる菌
体またはその処理物は、活性の半減期が非常に長く、繰
返し長期の使用に耐える。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）チミンと、イノシン、アデノシン、グアノシンお
   よびウリジンからなる群の中から選ばれたリボヌクレオ
   シド、または２′−デオキシイノシン、２′−デオキシ
   アデノシン、２′−デオキシグアノシンおよび２′−デ
   オキシウリジンからなる群の中から選ばれたデオキシリ
   ボヌクレオシドとを、水溶液中、リン酸またはリン酸塩
   の存在下に、バシルス属好熱性菌生菌体もしくはその菌
   体処理物により塩基交換反応させて５−メチルウリジン
   またはチミジンであるヌクレオシド化合物を生成させる
   ことを特徴とするヌクレオシド化合物の製造方法。
2. （２）バシルス属好熱性菌がバシルス・ステアロサーモ
   フィルスＪＴＳ８５９である請求項１に記載の製造方法
   。
3. （３）塩基交換反応を４０℃ないし７０℃の範囲の温度
   でおこなうことを特徴とする請求項１または２記載の製
   造方法。