JPH01318002A - コンドロイチン硫酸塩の、デルマタン硫酸塩の、およびヒアルロン酸のスルホアミノ誘導体類、並びにそれらの薬学的性質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、グリコースアミノグリカン類の、特１：　コ
ンドロイチン硫酸塩およびヒアルロン酸の、新規な誘導
体類に関するものである、特に、コンドロイチン硫酸塩
群では、フンドロイチン硫酸塩類へおよびＣ並びに関連
混合物並びにデルマタン硫酸塩から得られる化合物類が
挙げられる。

本発明を要約すれば、ヘパリンのモル比のような硫酸塩
基とカルボン酸基のモル比を有しておりそしてさらにヘ
パリンの如くヘキースアミンの６位置の炭素原子のとこ
ろにスルホアミノ基を有することにより特徴づけられて
いる、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン硫酸塩および
ヒアルロン酸から得られる新規な誘導体類が開示される
ことである。

新規化合物は出発物質であるムコ多糖類と比較して非常
Ｌ：顕著な浄化活性を示し、この活性はヘパリンの活性
と同様でありそしである種の誘導体類に関してはヘパリ
ンの活性に匹敵する。

さらに、スルホムコ多糖類を硫酸化した場合に通常生じ
るものとは異なり、新規化合物の抗凝固活性は無視でき
るほどでありすなわち非常に減じられている。

本発明の化合物は動脈硬化症の治療における用途が見い
だされている。

グリコースアミノグリカン類またはスルホムコ多糖類も
しくは単なるムコ多糖類は、動物の器官および組織内で
非常に一般的な重合体である。これらの中で、治療分野
における最大の用途を有する重合体と言えば疑いなくヘ
パリンであり、それは高含有量の硫酸塩基により特徴づ
けられておりそして抗凝固活性、抗血栓症活性および浄
化活性を有する高分子であり、後者の活性はリポ蛋白質
リパーゼおよびヘパチン性リパーゼによるものである。

これらの独特の薬学的活性は近年注目をあびてきており
、（多くの面でこれらの研究は依然として継続中である
が）、重合体の構造および上記の活性の間の関係を明確
にするために多数の研究がなされている。最近の含蓄の
多い論文に関して言えば、Ｂ、カス（Ｃａｓｕ）、アト
パンセス・イン・カルボハイドレート・ケミストリイ・
アンド・バイオケミストリイ（Ａｄｖａｎｃｅｓ　Ｃａ
ｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｂｉ。

ｃｈｅｍ、）、土ユ、５１−１３４．１９８５；Ｌ、Ａ
。

フランソン（Ｆｒａｎｓｓｏｎ）、［多糖類Ｊ、Ｇ、Ｏ
，アスピナリ（Ａｓｐｉｎａｌｉ）編集、３巻、３３７
−４１５、アカデミア・プレス、ニューヨーク、１９８
５を参照のこと。

それらの活性に対してはスルホアミノ基および重合体の
充填密度の両者が関連して寄与していることがこれまで
に指摘されており、前者に関してはＩ、ダニシェフスキ
イ（Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ）、フェデラル・プロセソ
ンング・オブ・アメリカン・ソサイエティ・ユクスペリ
メンタル・バイオロジイ（Ｆｅｄ−Ｐｒｏｃ−Ａｍ、　
Ｓｏｃ、　Ｅｘｐ、　Ｂｉｏｌ、）、３６．３３−３５
頁、１９７７）を、そして後者に関してはバースト（Ｂ
ｕｒｓｔ）他、「ヘパリンの化学および生物学」、エル
スヴイアー・ノース・ホーランド、ニューヨーク、２９
−４０頁、２９８１；Ｒ，Ｅ、バースト他、ザ・ジャー
ナル・オブ・クリニカル・インヴエスチメント（Ｊ、　
Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、）、７２，１０４２−１０
４５．１９８３；Ｕ、リンダール（Ｌｉｎｄｈａｌ）他
、アニュアル・レヴイー・オブ・バイオケミストリイ（
Ａｎｎｕａｌ　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、）、４７頁
、４０１−４０６．１９７８を参照のこと。

充填密度に関しては述べると、それを硫酸塩基のモル数
とカルボン酸基の対応するモル数の間の比で表わす場合
、ヘパリンではそれは平均して２である（Ｂ、カス（Ｃ
ａｓｕ）、上記文献を参照のこと）。

数種のグリコースアミノグリカン類から直接的硫酸化反
応によりヘパリンと同様な性質を有する重合体を得るた
めに多くの試みが過去および最近に実施されてきていた
ことに注目すべきである。

例えば、直接的に硫酸化されるかまたは最初にＮ−説ア
セチル化されそして次に硫酸化されたコンドロイチン硫
酸塩類が抗凝固性質を有することが知られており、前者
に関してはに、Ｈ，マイヤー（Ｍｅｙｅｒ）、　　（Ｈ
ｅｋｖ、　　Ｃｈｉｍ、　　ＡｃＬａ）、　ツー」Σ、
　　５７４−５８８．１９５２を、そして後者に関して
はＭ。

Ｌ、ウォルフロム（Ｗｏｌｆｒｏｍ）、Ｊ、Ａ、Ｃ，Ｓ
、、７５．１５＋９．１９５３を参照のこと。

また、ヘパリン自体から並びに他のグリコースアミノグ
リカン類から出発して、最初の脱型台およびその後のヒ
ドロキシル基の位置での硫ヤ化により、ヘパリンと匹敵
するかまたはそれより大きい抗血栓症活性により特徴づ
けられている重合体を得ることもできる。しかしながら
、本発明中で記されている多糖類の中では後者の多糖類
の誘導体だけか非常に減じられた抗凝固活性を有するこ
とに注目すべきである（ヨーロッパ特許出願８６４０１
５６３．１）。

さらに、文献中ではグリコースアミノグリカン類の硫酸
化に関しては一般的にはヒドロキシル基の硫酸化だけを
実施可能な数種の方法が報告されているということもわ
かる。

実際に、これらの方法によってはヘキソースアミンの２
位置における窒素原子の選択的硫酸化は得られない。し
かしながら、以下に示されている如く特定の条件を適用
することにより重合体鎖の比較的立体障害の少ない位置
を占めているヒドロキシル基の選択的硫酸化をすること
ができる。

しかしながら、これらの反応は一般的には高含有量の硫
黄を有する生成物を生成し、そこではいろいろな位置で
の硫酸塩基の分布は非特定方法で起きている。

これらの反応は大部分の場合に不均質相で、−船釣には
無水ピリジン中でそして硫酸化剤としてピリジン−無水
硫酸付加物またはタロロスルホン酸を使用して実施され
る。

均質相で、非極性の非水性溶媒（例えばジメチルホルム
アミド）中で、そして硫酸化剤として三酸化硫黄または
トリメチルアミン−三酸化硫黄付加物を使用して、実施
することもできる１、Ｆ。

ケネディ（Ｋｅｎｎｅｄｙ）、アドヴアンセス・イン・
カルボハイドレート・ケミストリイ・アンド・バイオケ
ミストリイ（Ａｄｖａｎｃｅｓ　Ｃａｒｂｏｈｙｄ、　
Ｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、）、２９．３３５−３３
７．１９７４）。Ｅ。

Ｅ、ギルバー）　（Ｇｉｌｂｅｒｔ）、「スルホン化お
よび関連反応」、インターサイエンス・パブリッシャー
、ニューヨーク、１０６５．３５４−３６０頁；ＲｌＧ
、シュヴアイゲル（Ｓｃｈｖｅｉｇｅｒ）、［多糖類硫
酸塩類、■、高置換度を有するセルロース硫酸塩」、カ
ルボハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄ、　Ｒ
ｅｓ、）、−λ」工、２１９．１９７２：に、ナガサヮ
（Ｎａｇａｓａｗａ）他、「コンドロイチン４および６
硫酸塩並びにデルマタン硫酸塩の化学的硫酸化による製
造、コンドロイチン硫酸塩からのコンドロイチン硫酸塩
Ｅ−状物質の製造」、カルボハイドレート・リサーチ（
Ｃａｒｂｏｈｙｄ、　Ｒｅｓ、）、１５８．１９８３．
１９８６）。

本発明が関与しているグリコースアミノグリカン類とは
詳しく言えばコンドロイチン硫酸塩ＡおよびＣ並びにそ
れらの混合物、デルマタン硫酸塩またはコンドロイチン
硫酸塩Ｂおよびヒアルロン酸であり、それの関連繰り返
し二糖類単位の構造式を以下に記す。

デルマタン硫酸塩。（２−アセトアミド、２−デオキシ
、３−０−σ−Ｄ−グルコビラニジュロシス、 ４−硫酸塩、β−Ｄ−ガラクトピラノース）。

コンドロイチン４−硫酸塩。

（２−アセトアミド、２−デオキシ、３−０−一β−Ｄ
−グルコビラヌロンス、４ｉ酸塩、β−Ｄ−ガラクトピ
ラノース）。

コンドロイチン６−硫酸塩。

（２−アセトアミド、２−デオキシ、３−〇−β−Ｄ−
グルコビラヌロシス、６−ｔ［塩、β−Ｄ−ガラクトピ
ラノース）。

Ａ ヒアルロン酸。（２−アセトアミド、２−デオキソ、３
−０−β−Ｄ−グルコピラヌロシス、６−硫酸塩、β−
Ｄ−ガラクトピラノース）。

従って本発明の第一の目的は、ある種のグリコースアミ
ノグリカン類の、正確にはコンドロイチン硫酸塩へおよ
びＣまたはそれらの混合物、コンドロイチン硫酸塩およ
びヒアルロン酸の、新規な合成誘導体類であり、それら
は選択的なＮ−説アセチル化およびその後の窒素原子の
位置での硫酸化（これはヒアルロン酸の場合には実施例
６および７に開示されている如く６位置にあるヒドロ上
シルのところの硫酸化により進行または実施される）に
より得られ、それにより上記で定義されているヘパリン
の特徴である充填密度の他に硫酸塩基で置換されたヘキ
ソースアミン環上の２位置に窒素原子も有している重合
体が得られる。

さらに、これらの高分子が浄化活性を有することも見い
だされ、そしてそれが本発明の他の目的である。

新規重合体は、上記の浄化活性のためおよび顕著な抗凝
固活性がないことのために、動脈硬化症の治療薬として
有用である。本発明の化合物により示される上記の薬学
的活性の中ではヘパチン性リパーゼによる活性の関連増
加が注目されており、それはデルマタン硫酸塩およびコ
ンドロイチンの誘導体の場合には浄化活性に対して５０
％以上寄与している。実際に、リポ蛋白質の代謝および
それらの影響に関するヘパチン性リパーゼの薬理性にお
ける重要な役割はコレステレール異化作用によるものだ
とされている（Ｔ、クーラ（Ｋｕｕｓｉ）およびアリ、
ＦＥＢＳレタース（ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、）、１０４．
３８４．２９７９；Ｈ，ジャンセン（Ｊａｎｓｅｎ）他
、バイオシミ力・工・バイオフィジカ・リサーチ・コミ
ッション（Ｂｉｏｃｈｉｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ
、　Ｃｏｍｍ、）、且、５３．１９８０、Ａ、ファン・
トル（Ｖａｎ　Ｔ。

１）他、バイオシミ力・工・バイオフィジカ・リサーチ
赤コミッ’ｙ　ａン（Ｂｉｏｃｈｉｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ
、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ、）、９４、ｉｏｌ、１９８０
；Ｍ、ベンベルゲル（Ｂａｍｂｅｒｇｅｒ）他、ザ・ジ
ャーナル・オブ・リビド・リサーチ（Ｊ、　Ｌｉｐｉｄ
　Ｒｅｓ、）、斐１．８６９．１９８１Ｈ，ジャンセン
他、トレンズ・オブ・バイオケミカル・サイエンス（Ｔ
ｒｅｎｄｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｓｃｉ、）、豆、２６
５．１９８０）。

さらに、重い動脈硬化合併症にかかっている患者ではヘ
パチン性リパーゼの血清値はリボ蛋白質リパーゼのもの
とは異なり通常の患者のものより低いことが臨床的な薬
学実験において最近指摘されている（シャツカース−Ｄ
−パース（Ｊａｃｑｕｅｓ　Ｄ。

Ｂａｒｔｈ）他、動脈硬化症、±１．２３５．１９８３
および６８，５１　１９８７）。これらの情報はそれ自
体でこれらの疾病の治療において薬品として使用できる
将来性があり非常に重要性があることを示しており、そ
の薬品は言直に影響を与えずに血液循環中のヘパチン性
リパーゼの有効活性を刺激することができる。

これらの化合物の化学的構造に戻ると、それ自体は公知
の方法で実施できるＮ−説アセチル化反応およびその後
の選択的なＮ−硫酸化反応により最初に重合体中に存在
している硫酸塩基の量および分布が変化しない点に注目
すべきである。

さらに、以下に示されている如く、部分的にまたは全体
的にＮ−説アセチル化されている化合物の存在下でさえ
グリコースアミノグリカン類の硫酸化用のこれまでに文
献中に記されている他の方法では同含有量の硫黄は有し
ていながら硫酸基の同一分布を有する重合体は得られな
いことも記しておかなければならない。

上記の高分子に対して上記の反応を実施することにより
得られる構造は、以下に報告されている構造式により合
成表示することができる。

（Ｕ） 式Ｉはそれぞれコンドロイチン硫酸塩ＡおよびＣまたは
それらの混合物、並びにデルマタン硫酸塩またはコンド
ロイチン硫酸塩Ｂから出発して得られる誘導体類に関し
ており、さらに詳しくは一コンドロイチン６−硫酸塩Ｎ
−硫酸塩（二量体単位：２−スルホアミノ、２−デオキ
シ、３−○−β−Ｄ−グルコビラヌロシル、６−硫酸塩
、β−Ｄ−ガラクトピラノース）：Ｒ−Ｓ　Ｏ３−１Ｒ
’＝Ｈ，Ｙ−Ｈ，Ｘ−ＣＯＯ−、−コンドロイチン４−
硫酸塩Ｎ−硫酸塩（二量体単位：２−スルホアミノ、２
−デオキソ、３−〇−β−Ｄ　−クルコビラヌロシル、
１−ｆｆｌ酸塩、β−Ｄ−ガラクトピラノース）：Ｒ＝
ＯＨ，Ｒ，＝ｓｏ、−１Ｙ＝Ｈ。

ｘ＝ｃｏｏ−、 −デルマタンＷｉ酸塩Ｎ−硫酸塩（二量体単位：２−ス
ルホアミノ、２−デオキシ、３−０−α−Ｄ−グルコビ
ラニジュロノシル、４−硫酸塩、β−Ｄ−ガラクトピラ
ノース）： Ｒ＝　ＯＨ、Ｒ＋　−Ｓ　Ｏ３−、Ｙ　−ＣＯ０−１Ｘ
＝Ｈ。

に関している。

それとは対照的に、式■はヒアルロン酸から得られる化
合物（二量体単位：２−スルホアミノ、２−デオキシ、
３−０−β−Ｄ−グルコビラニジュロノシル、６−硫酸
塩、β−Ｄ−ガラクトピラノース）に関している。

上記の二量体単位は重合体中で１当量当たり４〜５２回
繰り返されており、対応するナトリウム塩の場合には約
２，３００〜３０，０００の分子量となる。

上記の化合物の合成を行うための反応は文献から公知で
あり、そしてそれはコンドロイチン硫酸塩に関してはカ
リエス管中で物質を過剰のヒドラジン硫酸塩および無水
ヒドラジンと共に６時間以内の時間にわたり１０５℃の
温度に加熱することにより行われる最初のＮ−説アセチ
ル化を含んでいる（Ｂ、Ａ、ジミトレヴ（Ｄｉｍｉｔｒ
ｅｖ）他、　［グリコシド結合の選択的分割」、カルボ
ハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄ−Ｒｅｓ、
）、２９．４５１、ｌ９７３；　「グリコシド結合の選
択的分割、モデル化合物であるベンジル−２−アセトア
ミド−チオキン−６一〇−Ｄ−マンノピラノシル−Ｄ　
−クルコビラノシドを用いる研究Ｊ、カルボハイドレー
ト・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄ、　Ｒｅｓ、）、３０
．４５．１９７３；　［グリコシド結合の選択的分割、
シゲラ・ジセンテリエ型３からの〇−特異性多糖類に関
する研究」、カルボハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂ
ｏｈｙｄ、　Ｒｅｓ、）、〜先」−１３６５，１９７５
）、次の選択的なＮ−硫酸化反応は水相中でｐＨ９にお
いて過剰の硫酸化剤であるトリメチルアミン−無水硫酸
を使用して行われる（Ｌ、レヴイ（Ｌｅｖｙ）他、「Ｎ
−再硫酸化されたヘパリンｔこ関する化学的および薬学
的研究」、プロシーデインダス・オブ・ソサイエティ・
フォア・エクスペリメンタル・バイオロジイ・アンド・
メディスン（Ｐｒｏｃ、　Ｓｏｃ、　Ｅｘｐ、　Ｂｉｏ
ｌ、　Ｍｅｄ、）、１０９．９０１．１９８２；Ｙ、ヌ
ー工（Ｙｎｏｕｅ）他、［水およびメタノールを含をし
ているジメチルスルホキシドを用いるヘパリンの選択的
なＮ−脱硫酸化」、カルボハイドレート・リサーチ（Ｃ
ａｒｂｏｈｙｄ、　Ｒｅｓ、）、４６１８７．１９７６
）。

第一段階で得られなかった時には、Ｎ−説アセチル化反
応を２回繰り返してアセチル基の含有量を要求される水
準まで低められることは注目に値する。

本発明に添付されている１３ＣＮＭＲスペクトル、特に
第１．２．３および６図のもの、適用採用条件下ではＮ
−説アセチル化だけでなく次のＮ−硫酸化もほとんど完
全に起きていることを明確に示しており、そのことはス
ルホアミノ基に関するピーク（約５５ｐｐｍ）およびそ
れより重要性の少ないアセチルアミノ基に相当するピー
ク（２５ｐｐｍ）により示されている。

低分子量を有する化合物の製造に関しては、必要に応じ
てグリコースアミノグリカン類をそれ自体は公知である
化学的または酵素的に実施される脱型台予備反応を実施
する（Ｌ、Ａ、フランソン（Ｆｒａｎｓｓｏｎ）、［哺
乳動物のグリコースアミノグリカン類］、Ｇ、○、アス
ピナール（Ａｓｐｉｎａｌｌ）、「多糖類」、アカデミ
ツク・プレス、３巻、３３７．１９８５）。

最後に、ヒアルロン酸に関しては酸素原子の位置での硫
酸化は脱型台の前に実施することもでき、または好適に
は、この段階後に実施することもできる。硫酸化反応は
６位置の炭素原子のヒドロキシルのところで当接術で公
知の方法、例えばトリエチルアミン−三酸化硫黄付加物
を使用するジメチルホルムアミドで中の反応（実施例４
）または硫酸−クロロスルホン酸の混合物を用いる硫酸
化（Ａ、ナギ（Ｎａｇｇｉ）他、「超硫酸化されたヘパ
リン部分、新規な型の低分子量ヘパリン」、バイオケミ
カル０フアーマコロジイ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌ、）、３６．１７．１９８５．１９８７）を
使用して選択的に実施される。

上記の反応により得られる重合体を特徴づける化学的指
数を以下に記す（データは乾燥基準でこれらの物質の対
応するナトリウム塩に関して計算されている）ニ ースルホン酸硫黄：　　　　　８．０−１２％、　　好
適には９．５−１１．４％−硫酸塩／カルボキシル：　
　１．５−２．３、　　好適には１．８−２．１−残存
Ｎ−アセチル基：　　３％、　　　　好適には１％−零
分子量：　　　　　　　　２．３−３０ＸＩＯ’、好適
には３−１５ＸｌＯ”＊　（Ｅ、Ａ、ジョンソン（Ｊｏ
ｈｎｓｏｎ）他、カルボハイドレート・リサーチ（Ｃａ
ｒｂｏｈｙｄ、　Ｒｅｓ、）、Σ土、１１９．１９７６
）。

ヒドロキシルの硫酸化用に使用される方法によると上記
のスルホムコ多糖類から出発して本発明に記されている
化学的性質を有する化合物は得られないことを示すため
に、ヨーロッパ特許比＠８６４０１５６３．１の開示に
従うジメチルホルムアミド中でのトリメチルアミン−三
酸化硫黄との反応によるこれまでに選択的にＮ−説アセ
チル化されているデルマタン硫酸塩の製造に関して硫酸
化を行った。上記の特許出願中に記されている方法に必
要な重合体は、予め第四級アンモニウムカチオン（トリ
エチルアンモニウム）を用いて対応する塩に転化されて
いた。

実験およびそれから得られた結果は実施例４に記されて
いる。本発明に関するある範囲（１，５−２，３）の硫
酸塩基／カルボン酸基の間の比では、上記の条件下では
重合体鎖中で比較的立体障害が少ない位置を有している
すなわちガラトサミン環の６位置における炭素原子と結
合しているアルコール基の酸素原子のところで硫酸化反
応がほとんど起きることが指摘されている。

Ｍ、Ｌ、つオルフロによりＪ　、Ａ、Ｃ，Ｓ、７５．１
５１９．１９５３に報告されている条件（ピリジン＋ク
ロロスルホン酸）を適用しそして予めＮ−脱アセチル化
されたデルマタン硫酸塩の製造から出発しても、ガラク
トースアミンのアンモニウム基のところで反応が起きな
いことも指摘されている（実施例５）。実際に、この場
合には反応はヒドロキシル基のところで起き、さらに詳
細には硫酸化はガラコースアミンの６位置のヒドロキシ
ルのところおよびヒアルロン酸の２位置のところで起き
ることが示されている（第５図）。

前記の情報から、本発明の硫酸化生成物は特定の硫酸化
条件下でのみ得られることは明白である。

本発明の新規誘導体類の薬学的性質の評価用に使用され
ている方法に関しては、抗凝固活性は試験管内で方法Ｕ
ＳＰ　　ＸＸに従いヘパリンの第三国際標準を参照物と
して使用して評価される。

リポ蛋白質リパーゼおよびヘパチン性リパーゼの両者に
より誘発される浄化活性は、Ｒ，ペスカドール（Ｐｅｓ
ｃａｄｏｒ）他により論文（バイオケミカル・ファーマ
コロジイ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、）
、３６゜４．２５３、ｌ　９８７）中に記されている方
法に従い評価される。

以下で表１を参照しながら述べられている理由のために
、投与量の中で最低および最高値に関するリポ蛋白質リ
パーゼおよびヘパチン性リパーゼの活性（遊離脂肪酸の
マイクロモルで表示されている）に対して得られた結果
を報告する。

予備実験で得られるデータは表１に示されており、そこ
では出発物質であるグリコースアミノグリカン類に関す
るデータと比較されている。

しかしながら、これらの物質に関しては投与量と対応す
る活性の間に満足のいく意味のある関係は指摘されてい
ない。これらの理由のために、表■中の結果は比較を可
能にするためにこれらの投与量の中の最低投与量および
最高投与量に対応して報告されている。

表１から、出発物質であるスルホムコ多糖類と比べた場
合の新規化合物の浄化活性の相当な増加が明らかである
。

さらに、コンドロイチンおよびデルマタン硫酸塩の誘導
体類の場合には、ヘパチン性リパーゼが全体の浄化活性
に５０％以上寄与していることが観察された。

上記の表中に報告されているデータを参照すると、１．
２５ｍｇ／ｋｇの投与量においてはヘパチン性リパーゼ
の活性はヘパリンのものと同様であり、そしてデルマタ
ン硫酸塩およびヒアルロン酸から得られた化合物の場合
には１　、４　ｍ　ｇ　／　ｋｇの投与量においてヘパ
リンのものと匹敵するということが指摘される。

ヒアルロン酸の誘導体の場合には、リポ蛋白質リパーゼ
の活性はヘパリンのものと匹敵している。

表■においては、コンドロイチン硫酸塩のＮ−脱アセチ
ル化されそしてその後にＮ−硫酸化された誘導体（この
場合にはコンドロイチン硫酸塩Ａ＋Ｃ）中にヒドロキシ
ルの位置で硫酸塩基を加えることにより（関連単位に関
しては、前記の構造式を参照のこと）出発重合体のもの
より３倍はど大きい抗凝固活性の関連増加が得られるこ
とが示されている。

表■には、いくつかのヒドロキシル官能基により置換さ
れた硫酸塩基を有しておりしかも２の硫酸塩基およびカ
ルボン酸基の間の比を有しており従って本発明により予
測される範囲内に正式に含まれるデルマタン硫酸塩試料
（ＧＡＧ９３８）の抗凝固活性に関するデータが示され
ている。

上記の表は、酸素原子の位置での硫酸化はガラクトース
アミンの窒素原子の位置での反応の如く抗凝固活性に関
しては同じ効果を生じないことを示している。

実際に、ＧＡＧ９３８の場合にはこの活性は出発重合体
に関して少なくとも２倍でありそして硫酸化が対照的に
ガラクトースアミンの窒素原子の位置で起きている対応
する誘導体（ＧＡＧＡ　９４４■、表１）のものより大
きい。

これらの実施例は、コンドロイチン硫酸塩、デルマタン
硫酸塩およびヒアルロン酸の硫酸塩誘導体の浄化活性を
有する薬品としての治療用途に関して言えば、これらの
化合物が菅血副作用を有していない時には、二種の構造
的条件、すなわちヘキソースアミンのピラノース環の２
位置における窒素原子のところの選択的硫酸化並びに本
発明により意図されている範囲内の硫酸塩基およびカル
ボン酸基の間の比、が必須である。

凝固に対する望ましくない効果を与えずに明白な浄化活
性を有する化合物を得るために重要である上記の構造条
件の確認事項として考えると、例えばヒアルロン酸の如
きヒドロキシルの位置に硫酸塩基を含存していない重合
体に対して実施例６に記されている方法に従いヘキソー
スアミンの２位置における窒素原子のところでＮ−硫酸
化反応を行うことにより、６位置のヒドロキシルも基−
０ＳＯ３で置換された対応する誘導体に比べて非常に減
じられた浄化活性を有する物質（ＧＡＧＩ０４５）が得
られたことは注目に値する。

表■ 物質　　　　　　　　　　　　抗凝固活性５０３−／Ｃ
ＯＯ−ＵＳＰ １、Ｕ、／ｍｇ コンドロイチン硫酸塩Ａ＋Ｃｌ　　　　　１０（ＧＡＧ
　２６７） コンドロイチン硫酸塩Ａ＋Ｃ２，７３１，７Ｎ−硫酸塩
およびさらに酸素 のところで硫酸化されている （ＧＡＧ　９５２） 投与量　　　浄化活性（マイクロモル、ＦＦＡ）ｍｇ／
ｋｇ　　　　ＬＰＬ　　　　　ヘパチン性静脈内　　　
　　　　　　リパーゼ ５−２０　　　　０．２５−０．５０　１．９７−２．
７６０．６２５−２．５　７．９２−２２．４５　６．
８６−１３．４６表■ 物質　　　　　　　　　　　　　抗凝固活性ＳＯ，−／
ＣＯＯ−ＵＳＰ １、Ｕ、／ｍｇ デルマタン酸塩（ＧＡＧ　９６８）　　　　　１　　　
　４０デルマタン酸塩〇−硫酸塩　　　２２０（にＡＧ
　９３８） 投与量　　　浄化活性（マイクロモル、ＦＦＡ）ｍｇ／
ｋｇ　　　　ＬＰＬ　　　　　ヘパチン性静脈内　　　
　　　　　　リパーゼ ５−２０　　　　０．５９−０．７５　４．５７−３．
９８０．３１３−１．２５　３．１６−１２．９９　３
．８０−９．０６本発明に従う物質は薬学的に許容可能
な塩類の形状で、例えば非限定的な例としてはナトリウ
ムおよびカルノウム塩類の如さアルカリおよびアルカリ
土類金属との対応する塩類の形状で、投与できる。

予測される薬学的形状は、標準的なものすなわち非経口
的および皮膚方式により投与するための投与時に溶媒中
に溶解させる予定の瓶中の殺菌性およびアピロゲン性（
ａｐｉｒｏｇｅｎｉｃ）溶液並びに殺菌性の瓶中に包装
されている親液性化された調合物：経口的投与用の錠剤
、ゼラチンまたは耐胃姓カプセル、顆粒、である。

非経口的投与用の溶液は１〜２５０ｍｇ／ｍ（１、好適
には１〜ｌ　５０　ｍ　ｇ／ｍ（１，の活性成分を含有
できるが、経口的使用のための組成物はｌ−５００ｍｇ
の単位投与量としての活性成分含有量を有する。

一日の薬量は１〜２　、　ＯＯＯｍ　ｇ、好適には１〜
５００ｍｇ、で変えることができる。

実施例１ Ｉｇのコンドロイチン４−硫酸塩（硫酸塩基／カルボン
酸基の比−１，０７；同定番号ＧＡＧ９２０：分子量１
２，０００）を０．３２５ｇの無水ヒドラジンとカリエ
ス管中で直接混合し、それを直ちに密閉した。

管を１０５℃に５時間にわたり加熱することにより、Ｎ
−説アセチル化反応を行った。

終点時に、液相を減圧下で蒸発させて次のトルエンの添
加用に使用してヒドラジンの除去を促進させｊ二。

残渣を水中に加え、そしてＩＭ　ＨＣＱの添加並びに水
および水浴中での冷却によりアルカリ度を中和した。

溶液を次に蒸留水を用いて３５００Ｄの透析膜（トーマ
ス透析器チューブ３７８７−Ｈ４７）を通して透析した
。

溶液を次に減圧下で蒸発させて、７００ｍｇのＮ−説ア
セチル化されたコンドロイチン４−硫酸塩（同定番号Ｇ
ＡＧ９５７）を回収した。

１ｇの生成物を２０ｍ（ｌの蒸留水中に溶解させ、生成
した溶液のｐＨを２．３滴の２Ｎ　　ＮａＯＨにより９
に調節した。

溶液を５５℃に加熱し、そしてアルカリ性ｐＨを保つた
めに撹拌しながらＩｇのトリメチルアミン−三酸化硫黄
錯体を約９００ｍｇの炭酸水素ナトリウムと一緒に加え
た。次に４時間間隔で（４時間後および８時間後に）Ｉ
ｇの反応物および９ｏ　Ｑｍｇの塩の添加を繰り返した
。

１６時間後に、反応混合物を室温に冷却することにより
反応を停止させた。

次に、上記と同じ膜を使用するが蒸留水の代わ　・りに
塩化ナトリウムの０．５Ｍ溶液を用いて溶液を透析した
。減圧下での蒸発により、１．１ｇのフンドロイチン硫
酸塩Ｎ−硫酸塩（硫酸塩／カルボン酸基の比＝２．２；
分子量８０００　、同定番号ＧＡＧ９７３を有する）が
得られた。１３ｃＮＭＲスペクトル（第１図）は、２５
ｐｐｍにおける弱い信号（ｃ　Ｈ３基、文字Ａ）、ＮＨ
−３ｏ、基を有するガラクトースアミンの２位置におけ
る炭素原子に相当する約５５ｐｐｍの信号（文字Ｅ）を
示しｌ：。さらに、出発重合体中での如く、ヒドロキン
基を有するガラクトースアミンの６位置における炭素原
子に相当する約６０ｐｐｍの信号（文字Ｃ）および硫酸
塩基ををするガラクトースアミンの４位置における炭素
原子に関係する約７０ｐｐｍの信号（文字Ｄ）も見られ
た。

第１図で文字Ｂで示されている信号は、置換基として基
−Ｎ　Ｈ−ＣＨ、を有するガラクトースアミンの２位置
における炭素原子に相当している。

実施例２ １ｇのコンドロイチン６−硫酸塩（硫酸塩基／カルボン
酸基の比−１：同定番号ＧＡＧ９２１；分子ｆｆ１１８
，０００）を上記で示されているのと同量のヒドラジン
硫酸塩と混合した。Ｎ−説アセチル化反応は上記の如く
して実施された。

次にＮ−硫酸化を行って、２．１の硫酸塩基とカルボン
酸基の間の比および分子量１５．０００を有する１、２
ｇの最終生成物（同定番号ＧＡＧ９７４）を得た。

第２図で報告されているスペクトルは、Ｎ−アセチル基
がほとんど全く存在していないことおよびスルホアミノ
基に相当する信号の出現に関して、第１図に示されてい
るスペクトルに共通な信号とは異なっており、硫酸塩基
を有するガラクトースアミンの６位置における炭素原子
の約７０ｐｐｍの信号（文字Ｃ）を示している。

実施例３ １ｇのデルマタン硫酸塩（１，１の硫酸塩基とカルボン
酸基の間の比：同定番号ＧＡＧ９６８；分子量９０００
）をＮ−説アセチル化反応およびその後のＮ−硫酸化に
かけた。

６９５ｍｇの対応する誘導体が得られた。この物質（同
定番号ＧＡＧ９４４１Ｖ）は、硫酸塩基／カルボン酸基
の比＝１．８および分子量６０００を有していた。

”ＣＮＭＲスペクトル（第３図）は、出発重合体中での
如く、ヒドロキシ基を有するガラクトースアミンの６位
置における炭素原子に相当する約６０ｐｐｍの１つのピ
ーク（文字Ｃ）、基ＮＨ−３Ｏ３を有するガラクトース
アミンの２位置における炭素原子に関係する約５５　ｐ
　ｐｍの１つのピーク（文字Ｅ）、および最後にデルマ
タン硫酸塩と同様に硫酸塩基を有するガラクトースアミ
ンの４位置における炭素原子に関係する約７７ｐｐｍの
１つのピーク（文字Ｄ）を示した。

実施例４ この実施例はヨーロッパ特許出願８６４０１５６３、ｌ
による予備実施例に従い製造されたＮ−脱アセチル化さ
れたデルマタン硫酸塩の一例を実施するためのスルホン
化に関するものである。

Ｎ−説アセチル化された試料（Ｉｇ）をｌＱｍＱの蒸留
水中に溶解させそしてアンベルライトｌＲ１２０（Ｈ＋
形）と混合することにより、対応する酸性形にした。樹
脂を遠心により除去し、そして溶液のｐＨをトリエチル
アミンのエタノール中１０重量／容量溶液により５の値
にした。溶液をエーテルで抽出した。

水相を最後に親液性化した。Ｉｇの得られた塩（Ｎ−説
アセチル化されたデルマタン硫酸塩とトリエチルアンモ
ニウムとの塩）を１４０＋＋＋１２のジメチルホルムア
ミド中に溶解させた。それを０℃に冷却し、そして予め
６０ｍＱのジメチルホルムアミド中に溶解されているｌ
ｏｇのトリメチルアミン−三酸化硫黄付加物を加えた。

反応を指定温度において１時間にわたり実施した。次に
＋５℃に冷却されている水を加え、５ＮＮａＯＨの添加
によりｐＨを急いで９にし、モして６００ｍｆｆの酢酸
ナトリウムで飽和させたエタノールの添加により生成物
を沈澱させた。この段階中の温度は＋５℃に一定に保た
れていた。それを濾過し、再び水中に溶解させ、そして
上記の透析膜を使用して蒸留水に対して透析した。

硫酸塩基／カルボン酸基の比＝１．５を有する９　００
ｍｇの生成物（同定番号ＧＡＧ９４１）が得られた。

ＮＭＲスペクトル（第４図）は、第一級アミノ基（−Ｎ
　Ｈ２）を有するガラクトースアミンの２位置における
炭素原子に相当する約５０ｐｐｍの強い信号（文字Ｄ）
、遊離ヒドロキシルを有するガラクトースアミンの６位
置における炭素原子に相当する６０〜６５ｐｐｍの間の
１つの信号（文字Ｃ）、および最後に置換基−８ｏ、を
有するガラクトースアミンの４位置における炭素原子に
相当する６５〜７０ｐｐｍの間の信号（文字Ｅ）を示し
た。

文字ＡおよびＢにより示されているピークはそれぞれ第
１図中でそれらに関して示されている意味を有している
。

実施例５ Ｍ、Ｌ、ウォルフロム（Ｗｏｌｆｒｏｍ）、Ｊ、Ａ、Ｃ
，Ｓ、、７５．１５Ｉ９．１９５３により記されている
方法に従い予めＮ−説アセチル化されているデルマタン
硫酸塩の硫酸化（ピリジン士クロロスルホン酸） １ｇのＮ−説アセチル化されたデルマタン硫酸塩を２ｏ
ｍ（ｌの蒸留水中に溶解させ、そして次に６０ｍＱのメ
タノールの添加により沈澱させた。沈澱を乾燥した。

窒素雰囲気下に保たれているコンデンサーおよび滴下漏
斗を備えたフラスコ中に、最初に３０ｍＱの無水ピリジ
ンを０℃において充填した。液体中でその温度を保ちな
がら、４ｍＱのクロロスルホン酸をゆっくりと嫡々添加
した。添加が完了した時に、同じ入り口を通して、予め
０℃に冷却されているＮ−説アセチル化されたデルマタ
ン硫酸塩の無水ピリジン中懸濁液を急いで加えた。

混合物を中位の速度で室温に加熱しそして次に急速に１
００℃に加熱し、反応をその温度において１時間続行さ
せた。混合物を冷却し、上澄み液を傾斜させ、モして２
０ｍＱ部分の蒸留水を加えた。

溶液を５Ｎ　　ＮａＯＨで中和した。

次に、それを蒸留水に対して透析した。液体のほとんど
を減圧下で３５℃においてメチルアルコールを用いて蒸
発させ、そして次に親液性化した。

１．３の硫酸塩基とカルボン酸基の間の比を有する７５
０ｍｇの生成物（同定番号ＧＡＧ９８６）が得られた。

ＮＭＲスペクトル（第５図）は、−Ｎｆ（２を有するガ
ラクトースアミンの２位置における炭素原子に相当する
約５０ｐｐｍの信号（文字Ａ）、ヒドロキシルを有する
ガラクトースアミンの６位置における炭素原子に相当す
る約６０ｐｐｍの１つの信号（文字Ｂ）、および硫酸塩
基を有するイズロン酸の環の２位置における炭素原子に
相当する７４ｐｐｍの１つのピーク（文字Ｃ）を示した
。

実施例６ ヒアルロン酸Ｎ、６−二硫酸塩の合成 １ｇの予め脱型台されている１５０００の分子量を有す
る化合物（ＧＡＧ　Ｉ　Ｏ３９）を実施例１に従うＮ−
説アセチル化反応にかけた。

次にＮ−硫酸化を上記の如〈実施して、８００ｍｇのＮ
−硫酸塩化合物を得た。

グルコースアミンの６位置における炭素原子のところで
行われる次の〇−硫酸化反応をＮ−説アセチル化された
デルマタン硫酸塩の同様な反応に関して前記の実施例４
に示されている条件に従い実施して、１．９の硫酸基と
カルボン酸基との間の比を有する分子量が７０００の６
５０ｍｇの上記の化合物（ＧＡＧ９０２）を得た。

”ＣＮＭＲスペクトルは、基ＮＨ−３ｏ３を有するガラ
クトースアミンの２位置における炭素原子に相当する約
５５ｐｐｍの信号および硫酸塩基を有するガラクトース
アミンの６位置における炭素原子に相当する約７０ｐｐ
ｍの信号を示した。

実施例７ ヒアルロン酸Ｎ、６−二硫酸塩の合成 Ｎ−説アセチル化およびその後のＮ−硫酸化に関しては
、前記の実施例を繰り返した。得られた誘導体（ＧＡＧ
１０４５．０．９６ｇ）は０．９の硫酸塩／カルボキシ
ル基の比を有していた。グルコースアミンの６位置の酸
素原子のところで行われる次の硫酸化反応は、対照的に
、硫酸およびクロロスルホン酸の混合物（Ａ、ナギイ（
Ｎａｇｇｉ）他、バイオケミカル・ファーマコロジイ（
Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏ　Ｉ　、　）、３
６．１２．１８９５．１９８７）を使用することにより
実施された。

２０ｍＱの９５％Ｈ２Ｓｏ、および１０ｍＱのＨＣＱ　
Ｓ　Ｏｓをフラスコ中で一４℃において混合した。予め
乾燥されているＩｇのＮ−説アセチル化されモしてＮ−
硫酸化されたヒアルロン酸を撹拌下に保たれている液相
に上記と同じ温度において加えた。反応を一４℃におい
て１時間、そして２５℃においてさらに６０分間、続け
た。

次に溶液を５００ｍｆｆの一４℃のエチルエーテル中に
注ぐことにより、硫酸化を終了させた。沈澱を濾過し、
２０ｍＱの蒸留水中に溶解させ、そして得られた溶液に
０．５Ｎ　　ＮａＯＨを反応物が中性になるまで加えた
。

それを蒸留水に対して透析し、そして生成物を減圧下で
の蒸留により回収し、次に親液性化した。

１８の硫酸塩基とカルボン酸基の間の比を有する分子量
が８０００の９００ｍｇの化合物（ＧＡＧ　ｌ　０４６
）が得られた。１３ＣＮＭＲスペクトルは、硫酸塩基の
分布に関してはＧＡＧ９０２に対して報告されているも
のと異なっていなかった。

実施例８ ＧＡＧ９５２の合成（コンドロイチン硫酸塩Ａ＋Ｃ１窒
素原子および酸素原子の両方で脱−アセチル化されそし
て次に硫酸化された） １．５ｇのフンドロイチン硫酸塩Ａ十Ｃを実施例１に記
されている如く処理して、ガラクトースアミンの２位置
における炭素原子と結合している窒素原子がほとんど定
量的に硫酸塩基で置換されている１、３ｇの生成物を与
えた。

次の硫酸化は酸素位置における硫酸化に関して前記の実
施例７で記されている如くして実施されＩこ　。

２．７の硫酸塩とカルボン酸基の間の比を有する１、３
ｇの生成物が得られた。

実施例９ ＧＡＧ９３８の合成（鎖のヒドロキシル基の位置で硫酸
化されたデルマタン硫酸塩） １ｇのデルマタン硫酸塩ＧＡＧ９６８を、グルコースア
ミンの６位置における炭素原子のところの硫酸化に関し
て実施例７で記されている条件下で硫酸化した。硫酸基
／カルボン酸基の比＝２を存する０、９ｇの生成物が得
られた。１３ＣＮＭＲスペクトルは、基ＮＨ−ＣＨ３を
有するガラクトースアミンの２位置における炭素原子に
相当する約２５ｐｐｍの強い信号および第一級アミノ官
能基−Ｎ８２基を有する同じ炭素原子に相当する約５０
ｐｐｍの弱い信号を示した。

本発明の主なる特徴および態様は以下のとおりである。

■、コンドロイチン硫酸塩ＡおよびＣ１それらの混合物
、デルマタン硫酸塩、並びにコンドロイチン硫酸塩Ｂか
らなる群で選択されるグリコサミノグリカン類の合成ス
ルホアミノ誘導体類であり、ここでそれの二量体単位が
下式： ［式中、 ＲはＯＨ，Ｓｏ、−を表わし、 Ｒ１はＨ，Ｓｏ、−を表わし、 ＹはＨ，Ｃｏｏ−を表わし、そして ＸはＨ，Ｃｏｏ−を表わす］ を有する、該合成スルホアミノ誘導体類。

２、それの二量体単位が式： を有する、ヒアルロン酸の合成スルホアミノ誘導体類。

３　乾燥基準でそして対応するナトリウム塩に関して計
算されている下記の指数： スルホン酸硫黄　　　　　８．０−１２％硫酸塩／カル
ボン酸基　　１．５−２．３残存Ｎ−アセチル基　　　
く３％ 分子量　　　　　　　　　２．３−３０　Ｘ　１０３に
より特徴づけられている、上記ｌおよび２に従う合成誘
導体類。

４、該指数に下記の範囲： スルホン酸硫黄　　　　　９．５−１１．４％硫酸塩／
カルボン酸基　　１．８−２．１残存Ｎ−アセチル基　
　　〈１％ 分子量　　　　　　　　　３−１５　Ｘ　１０３が含ま
れていることを特徴とする、上記３に従う合成誘導体類
。

５、出発物質であるグリコースアミノグリカンを過剰の
ヒドラジン硫酸塩および無水ヒドラジンと共に６時間以
内の時間にわたり１０５℃の温度に加熱することにより
最初の脱アセチル化段階を実施し、そして水性媒体中で
ｐＨ９において過剰の硫酸化剤を用いて次の選択的Ｎ−
硫酸化を実施することを特徴とする、上記ｌおよび２に
従う誘導体類の製造方法。

６、該硫酸化剤がトリエチルアミン−無水硫酸およびク
ロロスルホン酸から選択されることを特徴とする、上記
５に従う方法。

７、該Ｎ−説アセチル化反応を、アセチル基の含有量が
次のＮ−硫酸化用に必要な水準となるまで、複数回実施
されることを特徴とする、上記５に従う方法。

８、該Ｎ−説アセチル化段階の前に、予備的脱重合段階
をそれ自体は公知である方法で実施することを特徴とす
る、上記５に従う方法。

９、該脱型合段階をＮ−硫酸化段階の前に実施すること
を特徴とする、上記８に従う方法。

１０、活性成分としての上記ｌおよび２に従うグリコー
スアミノグリカン誘導体を一般的賦形薬と一緒に含有し
ていることを特徴とする、薬学的組成物。

＋１．浄化活性を有する、上記ＩＯに従う薬学的組成物
。

１２、該活性成分が１−５００ｍｇの単位投与量で含ま
れていることを特徴とする、上記１１に従う組成物。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１の生成物のＮＭＲスペクトル図であ
る。 第２図は、実施例２の生成物のＮＭＲスペクトル図であ
る。 第３図は、実施例３の生成物のＮＭＲスペクトル図であ
る。 第４図は、実施例４の生成物のＮＭＲスペクトル図であ
る。 第５図は、実施例５の生成物のＮＭＲスペクトル図であ
る。 ８０　６０　　４０　　２０　　ｐｐｍＦＩＧ、　２ ８０６０　４０　２０　　ρ帥 ８０　　６０　　４０　　２０ｐｐｍ ＦＩＧ、　４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、コンドロイチン硫酸塩ＡおよびＣ、それらの混合物
   、デルマタン硫酸塩並びにコンドロイチン硫酸塩Ｂより
   なる群から選択されるグリコースアミノグリカン類の合
   成スルホアミノ誘導体類であり、ここでそれの二量体単
   位が下式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ） ［式中、 ＲはＯＨ、ＳＯ＿３＾−を表わし、 Ｒ＿１はＨ、ＳＯ＿３＾−を表わし、 ＹはＨ、ＣＯＯ＾−を表わし、そして ＸはＨ、ＣＯＯ＾−を表わす］ を有する、該合成スルホアミノ誘導体類。 ２、それの二量体単位が式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （II） を有する、ヒアルロン酸の合成スルホアミノ誘導体類。 ３、出発物質であるグリコースアミノグリカンを過剰の
   ヒドラジン硫酸塩および無水ヒドラジンと共に６時間以
   内の時間にわたり１０５℃の温度に加熱することにより
   最初の脱アセチル化段階を実施し、そして水性媒体中で
   ｐＨ９において過剰の硫酸化剤を用いて次の選択的Ｎ−
   硫酸化を実施することを特徴とする、特許請求の範囲第
   １又は２項に記載の誘導体類を製造する方法。 ４、活性成分としての特許請求の範囲第１又は２項記載
   のグリコースアミノグリカン誘導体を一般的賦形薬と一
   緒に含有していることを特徴とする、薬学的組成物。