JPH01304890A - アルテヌシンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、アルテヌシンの製造方法に関するものである
。

［従来の技術］ アルテヌシンはアルタナリア・テヌイス（Ａｌｔｅｒｎ
ａｒｉａ　ｔｅｎｕｉｓ　）から、最初に分離された菌
代謝産物で、下記のような構造を有することが確認され
ている化合物である（Ｂｔｏｃｈｅｍ、Ｊ、、６７．１
ｊ５７．ｐ３！１０　：　、八ｕｓｔ、Ｊ、Ｃｈｅｍ、
、２３．＋９７０．ｐ２３４３〜５１）　　。

またアルテヌシンは米国特許４．２４２，１２１号°゛
ダイズおよび綿の除草剤の中和法（ＭＥＴＨＯＤ　ＯＦ
　ＡＮＴ八ＧへＮＩＺＥＩＮＧ　　）ＩＥＲＢＩＣＩＤ
ＥＳ　　ＯＮ　　５ＯＹＡＢεＡＮ　　八ＮＤ　　ＣＯ
Ｔ丁ＯＮ）°゛の中で合成による製造法が記載されでい
る。

しかしながら、合成によるアルテヌシンの製造は、多く
の化学合成方法による合成と同様に非常に煩雑であり、
一般に化学合成方法よりも微生物を使った発酵法による
生産が有利なことは周知の事実である。

［発明が解決しようとする課題］ また、アルタナリア属（Δ１ｔｅｎａｒｉａ　）を培養
して培養物から、菌代謝産物を分離する方法も当然考え
られるが、従来の発酵法で使用していた菌ではないので
、主通培養条件の確立は当然のことながら、バイオハザ
ード等その菌の安全性にまで新たな研究を進めねばなら
ない。さらに、今後の遺伝子操作の手法を応用する場合
、やはり従来から使用されている菌を使用する方が有利
であり、馴染のある菌属の生産菌が望まれていた。

［課題を解決するための手段］ 本発明者らは、新規なアルテヌシンの製造方法、すなわ
ち従来使用されていた菌を使った培養法により、有利に
アルテヌシンを製造する方法を得ることを目的として、
アルテヌシン生産能を有する菌を従来から発酵法で使用
されているカビの中から精−鋭検索研究をした結果、ペ
ニシリウム属からアルテヌシン高生産株を得ることによ
り、本発明を完成するに至った。

本発明に係るアルテヌシンの製造方法は、アルテヌシン
産生能を有するペニシリウム属のカビを培養し、培養物
中にアルテヌシンを生成蓄積させ採取するものである。

更に付言すると、上記目的を達成することに成功した本
発明のアルテヌシン製造法は合成法によるものではなく
、土壌中に棲息するペニシリウム？−１０８株もしくは
、これと同一の属に属しアルテヌシン生産能を有するカ
ビにより製造が可能であるという本発明者らによる新規
な知見に基づくものであって、上記のカビを培養し培養
液中よりアルテヌシンを採取することを特徴とするもの
である。

前記ペニシリウム？−１０８株は、工業技術院微生物工
業技術研究所に昭和６３年３月２８日に受託番号微工研
菌寄第９９６５号として寄託されている。

前記７−１０８株は土壌中よりアルテヌシン産生能を有
するカビとして見い出された菌株である。この菌株は下
記のような特性を有し、ペニシリウム属のカビであるこ
とは確認されている。

培養温度：２７℃より３７℃の方が育成が良好である。

、また、４５℃では生育しない。

培　　地：コーンミール〉麦芽エキス〉ポテトデキスト
ロース寒天、ツアペック、Ｍ４０Ｙの順で生育が良好で
ある。

なお、使用した培地は以下に示す。コーンミール培地（
コーンミール３０ｇ、寒天２０ｇ、蒸留水１、（Ｍり、
麦芽エキス培地（日水製薬株式会社製）、ポテトデキス
トロース寒天培地（宋研化学株式会社製）、ツアペック
培地（日水製薬株式会社製）、Ｍ４０Ｙ寒天培地（シヨ
糖４００ｇ、麦芽エキス　２０ｇ、酵母エキス５ｇ　、
寒天２０ｇ、蒸留水！、Ｑｊ！　） 形　　態：胞子は緑色を呈し、長期間培養すると赤い色
素を産生ずる。

ペニシリウム属菌は、微生物の一般的性質として人為的
、自然発生的に変異を起し得る０例えば、紫外線・Ｘ線
・ガンマ線等の放射線の照射や、単胞子分離、種々の薬
剤による処理または薬剤を含有する培地での培養、その
他の手段で人為的に変異させて得られる多くの変異°体
、あるいは自然に得られた突然変異体等であっても、ア
ルテヌシンを生産する性質を有するものは全て本発明の
方法に利用し得る。

本発明方法の培養に用いられる培地は用いられる菌株が
利用し得る栄養源を含むものなら、液状でも固状でもよ
い、また天然培地でも合成培地でもよく、培地には必要
とする炭素源、窒素源、無機物質、微量栄養素が適宜配
合される。もちろんｐＨを調節する目的で無機または有
機酸、アルカリ類、１＆？ＴＩ剤等を加え、あるいは消
泡の目的で油脂類、表面活性剤等の適量が添加される。

培養の手段は固体培養、静置培養、振盪培養あるいは通
気攪拌培養等の手段を用いてもよく、大量培養を目指す
のであれば液体培地を用い、通気攪拌培養をする手段が
有効である。

培養の条件は、培地の状態、組成、菌株の種類、培養手
段等によって一定しないのは当然であるが、本発明に用
いる属に属する菌株の場合、通常的２５℃〜３７℃の温
度で、初発ｐＨ約３〜８付近に選択するのがよい、これ
に要する時間は、固体培地を用いる場合は２〜１０日間
程度であり、液体培地を用いて振盪培養または通気攪拌
培地の場合は通常約３〜１２日間程度である。

また、前記ペニシリウム７−１０８株を培養する場合で
は、炭素源として可溶性デンプン、窒素源として酵母エ
キスを含有する培地を用い、ｐ）Ｉ５．０、培養温度２
８℃にてジャーファメンターにより通気培養を行なうと
き、培養液中に最もよくアルテヌシンを産生ずる。

生成したアルテヌシンを採取するには、微生物が生産す
る代謝産物を採取するのに通常用いられる手段を適宜利
用することが出来る。例えば、液体培養の場合は、主と
して培養液中に存在するので、培養物を遠心分離あるい
は濾過によって上清液と菌体とに分離し、その上清液か
ら分離・精製するのが有利である。すなわち適当な溶媒
に対する溶解性および溶解度の差、溶液からの析出法お
よび析出速度の差、種々の吸着親和力の差、イオン交換
体によるイオン交換クロマトグラフィーあるいは減圧濃
縮、凍結乾燥、結晶化・再結晶、乾燥などの手段が単独
あるいは任意の順序に組合せて、または反復して利用さ
れる。

その−例を示すと、培養終了後培養液からアルテヌシン
を採取するには、菌体を遠心分離により除いた後、たと
えばセファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）の
カラムを通して、アルテヌ・シンの存在する分画を採取
する。なお分離の指標としては、ＮＢＴ法（炎症、　３
．２６１〜２６７、１９８３）が適当である。得られた
活性分画を高速液体クロマトグラフィーにより更に精製
すると、アルテヌシンが得られる。

［実施例］ 以下実施例を示して本発明を説明する。

培養液７１（可溶性デンプン３０　ｇ／Ｉ！、　、酵母
エキス　５ｇ／１１　、ＮａＮ０，３ｇ／ｕ　、　Ｋ２
ＨＰＯ４１，５ｇ／Ａ　。

ＫＨ２ＰＯ４１，５ｇ／ｊ２　、　Ｍｇ５０４１Ｎ２０
０．５ｇ／Ｊ２　、　ＮａＣ１Ｏ，２ｇ／　１１　、　
ＦｅＳＯ４・７Ｈｚ０　０．０１ｇ／ＪＺを蒸溜水７Ｊ
２に溶解）に、ペニシリウム？−１０８株（徹工研菌寄
第９９６５号）を接種し、発酵槽でｐ）１４．０に制御
し、２８℃で３日間通気攪拌培養した。培養終了後、培
養液を遠心分離して菌体を除いた後、上溝をセファデッ
クスＬＨ−２０のカラムを通し、アルテヌシンを含む分
画を採取した。得られた活性分画を更に高速液体クロマ
トグラフィーにより分離した。以上の処理により該培養
液７Ｊ２よりアルテヌシン８４０ｍｇが得られた。

得られたアルテヌシンの融点を測定したところｍ、ｐ、
＝　１９５〜１９８℃（文献値ｍ、ｐ、＝　２０２〜２
０３℃）であり、さらにこれを、高分解能質量分析、核
磁気共鳴スペクトル、赤外線吸収スペクトル、結晶化し
Ｘ線結晶解析によりアルテヌシンであることを確認した
。

第１図は本発明で得られたアルテヌシンの赤外線吸収ス
ペクトルを示すチャートを示す図である。

［発明の効果］ 本発明は以上説明したとおり、煩雑な有機合成法によら
ずに、何時でも必要な量だけアルテヌシンを製造するこ
とが可能になる。しかも、生産菌がペニシリウム属であ
るので、従来のペニシリウム属を培養した方法・装置を
使用でき、さらに、今後の遺伝子操作の手法を応用する
場合を想定してもやはり従来から使用されている菌属を
使用するため有利である。さらにアルテヌシンを研究用
試薬あるいは食品添加物・化粧品・医薬として実用化す
ることが可能になるという効果がある。

【図面の簡単な説明】

第１図はアルテヌシンの赤外線吸収スペクトルを示すチ
ャートを示す図である。 代理人　弁理士　佐　藤　正　年 第１図 手続補正書３．え） 昭和６３年０７月θ名日

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. アルテヌシン産生能を有するペニシリウム属（Ｐｅｎｉ
   ｃｉｌｌｉｕｍ）のカビを培養し、培養物中にアルテヌ
   シンを生成蓄積させ採取することを特徴とするアルテヌ
   シンの製造方法。