JPH01290667A - 新規抗生物質フタレキシンおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の目的〕 本発明は新規抗生物質フタレキシン（ｐｈｔｈａ−１ｅ
：ｃｉｎ　）　Ｉ’ｍ関するものである。本発明者らは
土壌よシ分離したニーペニシリウム属にｉｆる５ＡＮＫ
２３８８７株の培養液中に酵母、カビに対して抗菌力を
有する下記の新規抗生物質フタレキシン＋１１が生産さ
れることを見出した。

従来、式 で示されるマイコフェノール酸は、例えばペニシリウム
属に属する微生物より生産される抗生物質として知られ
てお、！７　（Ｊ、Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、＋　１９５Ｌ
１９４６、米国特許４１１５１９７号、特開昭５７−５
０８８９号など）、関節炎治療薬（米国特許３８８０９
９５号）、乾鮮治療薬（西独公開２１５８８２４号）、
高尿酸血症治療薬（米国特許３７０５９４６号）、抗腫
傷薬（南アフリカ特許６８−４９５９号）等に用いられ
ている。

更に、マイコフェノール酸誘導体としては、例えば式（
ＩＩＩ）で示される。６−（５−カシメキシ−４−ハイ
ドロキシ−３−メチルペンタン）−７−ハイドロキシ−
５−メトキシ−４−メチルフタラン−１−オフ　［Ｊ、
Ｃｈｅｍ、　５ｏｃ−＋ｆｅ１．　ＩＵ１１７２５〜１
７３７（１９７０））、その釉々の誘導体が知られてい
る（米国特許４６８６２３４号、西独公開２４２４１１
９号、米国特許４２３４６８４号、同３７０５８９４−
＠、４４１：開昭５７−１）３３７７６号、同５７−１
８３７７７号、同４８−８６８Ｇ１号、同４８−８６８
６０号、西独公開２２３７５４９号、フランス公開２１
００６５３号、特開昭５７−２４３８０号、英国特許１
２６１０６０号、同１１５７１００号など）。

本発明の新規抗生物質フタレキシンは、後述の式（１１
で示す構造ゲ有し、マイコフェノール酸とは４′位に水
酸基を有する点で異なり、６−（５−力ルボキシ〜４−
７１イドロキシ−３−メチルペンタン）−７−ハイドロ
キシ−５−メトキシ−４−メチルフタラン−１−オンと
は側釦に二重結合を有する点で異なる。

〔発明の構成〕

本発明のフタレキシンは下記の式を有する。

ここに、フタレキシンは下記のような理化学的性状を有
する。

１）紫外線吸収スペクトル：λｍａ：［”’１ａ＋）メ
タノール溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは第１
図に示す通シ、２１５　ｎｍ、２４９．９ｎｍ＊　３０
４．５　ｎｍに特異吸収を示す。

２）赤外線吸収スペクトル、νＩｎａｘｃｒｒＬＫＢｒ
ディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは第２図に示
す通りである。

４）核磁気共鳴スペクトル：δ：　ｐｐｍ重クロロホル
ム中で内部基準にＴｈ１８　（テトラメチルシラン）を
使用して測定した核磁気共鳴スペクトル（２７０ＭＥｚ
）は第３図に示す通りである。

５）＠点：１３３〜１３４℃ ６）分子値；３３６ 本発明においては、フタレキシンの塩も包含される。こ
のような塩としては、ナトリウム、カリウムのようなア
ルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウムのようなアル
カリ土類金属塩、アルミニウム塩などを挙げることがで
きる。

フタレキシンを生産する５ＡＮＫ　２３８３７株の菌学
的性状は次の通りである。

１、　各種培地における性状 ２５℃、７日間の各培地上における性状について記載す
る。

ＣＹＡ培地上ではコロニーは放射状に隆起し、その直径
は１２−１５　ｍｍで表面は羊毛状を呈する。

コロニーの周辺部はほぼ白色であるが中央部はＲｅｄｄ
ｉｓｈ　ｗｈｉｔｅ　（１０Ａ２）でワυ、赤橙色の浸
出液が観察される。未成熟の閉子真東をわずかに形成す
るが分生子の形成は認められない、コロニーの裏面はＯ
ｒａｎｇｅ　Ｇｒａｙ　（５Ｂ２）である。

ＭＥＡ培地上では１６−１８１１１に達し表面は羊毛状
であり、Ｗｈｉｔｅ　（−Ａｌ）ないしＰａ５ｔｓｌ　
’Ｌ’（３１１０Ｗ（２Ａ４）で放射状の隆起および浸
出液は観察されない。未成熟の閉子真東はわずかに見ら
れるが、分生子は全く観察されない。コロニーの裏面は
（）ｒｅｙｉｓｈ　ｙｅｌｌｏｗ　（２Ｂ５）である。

０２５Ｎ培地では生育は極めて悪く、Ｗｈｉｔｅ（−Ａ
Ｉ）、羊毛状の径２−３　、、のコロニーを形成する。

閉子真東および分生子の形成は認められない。コｏ＝−
ｉ面はＰａ５ｔｅｌ　Ｙｅｌｌｏｗ　（２Ａ４）である
。

３７℃、ＣＹＡ培地上での生育は１８−２２　ｍｒｘで
、２５℃の場合とほぼ同様の性状を示す。ただ、２５℃
では観察されないが３７℃ではごくわずかに淡桃色の可
溶性色素の産生が見られる。コロニーの裏面はＧｒｅｙ
ｉｓｈ　Ｏｒａｎｇｅ　（６Ｂ５）である。

５℃、ＣＹＡ培地上では全く生育が認められない。なお
、色の表示はＡ、　Ｋｏｒｎｅｉｒｕｐ及びＪ　、Ｈ。

Ｗａｎｓｃｈｅｒ　著、Ｍｅｔｈｕｅｎ　ｈａｎｄｂｏ
ｏｋ　ｏｆ　Ｃｏ１ｏｕｒ　、　（１９７８）　。

Ｅｙｒｅ　１Ｊｏｔｈｕｏｎ、　Ｌｏｎ＋ｉｏｎに従っ
た。

２、形態学的特徴 子真東の形成はワイツマン寒天斜面培地に接種して２５
〜３０℃で３〜４週間培養することＫよって成熟した状
態で観察することができ、分生子はワイツマンＰＤＡな
どの培地では形成されないが、Ｍ７ＯＹ　Ｑ天培地で２
５〜３０℃で１〜２週間培養することによって形成され
る。閉子真東（Ｃ１ｅｉｓｔｏｔｈｅｃｉａ　）は淡褐
色ないし褐色で径８〇−２３０μｍであり、子嚢はほと
んどが連鎖することなく早生し８胞子性、楕円形で５．
０〜６．５Ｘ６．５μｍである。子のう胞子は楕円形で
２．５〜３．５Ｘ２．２〜３．２μｍであり、表面には
しわを有し、赤道面に２本の隆起が認められる。分生子
形成構造は気菌糸上に形成され分生子柄はほぼ平滑で１
６〜２０Ｘ１．５〜２．０μｍである。ペニシリンはほ
とんど単輪生体である。フイアライドは６〜１０本輪生
し、アンプル型、４．５〜９．ＯＸｌ、５〜２．５μｍ
である０分生子は球形ないし亜球形、１．５〜２．５帆
でほぼ平滑で連鎖する。

以上の結果を文献（Ｊ、Ｉ　Ｐｉｔｔ著「Ｔｈｅ　ｇｅ
ｎｕｓＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　　ａｎｄ　　ｉｔｓ　
　ｔｅｌｅｍｏｒｐｈｉｃ　　ｓｔａｔｅｓＥｕｐｅｎ
ｉｃｉｌｌｉｕｍ　ａｎｄ　Ｔａｌａｖｏｍｙｃｅｓ　
Ｊ　１９７９年版、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ社発
行）で検索した結果、本菌をニーペニシリウム拳ノぐル
パム・レーバー・エト・フエネル・ストーク・エト・ス
コツトｅｔ　５ｃｏｔｔ　）と同定し、菌体番号として
５ＡＮＫ２３８８７（徴工研寄第９９５５号）を与えた
。なお本菌の次に、７タレキシンの製造法を実施例をあ
げて説明するが本発明はもちろんこれらの方法に限定さ
れるものでなく培養基のね類、培養条件、採取、精製方
法等は大幅に変えうるものであることは言うまでもない
。

以上５ＡＮＫ　２３８８７株について説明したがこれら
菌類の諸性質は一定したものではなく自然的、人工的に
容易に変化することは周知のとおりであシ、本発明で使
用し５る菌株はニーペニシリウム属に属するフタレキシ
ンを生産する菌株すべてを包含するものである。

本発明における培養は一般做生物における培養方法に準
じて行なわれ、液体培地中での振と５培養あるいは通気
攪拌培養によるのが好ましい・培地成分としてはたとえ
ば炭素源としてブドウ抛、クリセロール、マルトース、
シュクロース、マンニット、糖蜜、デキストリン、澱粉
、大豆粉、綿実油などが、窒素源としては、大豆粉、落
花生粉、綿実粉、ファーマミン、魚粉、コーン・スチー
プ・リカー、ペプトン、肉エキス、イースト、イースト
・エキス、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、硫酸アンモ
ニウム等が、また無機塩としては食塩、燐酸塩、炭素カ
ルシウム等が使用される。また必要に応じて微量の金属
塩が適宜添加される。液体培養に際してはシリコン油、
植物油、界面活性剤等が消泡剤として使用される。

培地の声は弱酸性ないし中性付近、培養温度は２０〜３
０℃特に２６℃前後が好ましい。

培養の経過に伴って培養液中に生産されるフタレキシン
の力価の静時的変化は、被検菌キャンデイダ・アルビカ
ンス５ＡＮＫ　５０１５７株−楔環養液をサシロー寒天
培地〔田水製薬■製〕に０．３係イーストエキスを加え
て調製した寒天平板でペーパーディスク検定法により測
定される。通常１６０〜１９０時間の培養でフタレキシ
ンの生産量は最高直に達する。主として培養液中の液体
部分に存在するフタレキシンは培養終了後、菌体その他
の固型部分乏けいそう土をｐ過助剤とする濾過操作、あ
るいは遠心分離によって除去し、そのＰＭあるいは上滑
中に存在するフタレキシンをその物理化学的性状を利用
することによシ、抽出、ａ製することができる。吸着剤
としては、たとえば活性炭、あるいは吸着用樹脂である
アンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−７等
（ローム・アンド・ハース社製）やダイヤイオンＨＰＩ
Ｏ。

ＥＰ２０　、　ＣＨＰ２０Ｐ　、　ＨＦ２（１等〔三菱
化成工業■製〕が使用され、フタレキシンを含む液から
上記の如き吸着剤の層を通過させて、含まれる不純物を
吸着させて取りのぞくか、フタレキシンを吸着させた後
、メタノール水、アセトン水・ｎ−シタノール水等を用
いて溶出する。１だ水と混和しない有機溶媒たとえばク
ロロホルム、酢酸エチル、Ｄ−ブタノールなどの単独ま
たはそれらの組み合わせにより培養Ｐ准”または水溶液
から酸性で抽出・精製することも可能である。更にフタ
レキシンを精製するためにはシリカゲル、フロリソルの
ような担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィーやセ
ファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社！Ａ）などを
用いた分配カラムクロマトグラフィーならびに順相、逆
相カラムを用いた液体クロマトグラフィーで精製できる
。これらのオ°ｙ製手段を単独あるい（′ｆ、適亘組み
合せ反復して用いることによって、フタレキシ／を精製
することができる。そしてこのようにして得られたフタ
レキシンは所望により常法に従って、塩に変換すること
ができる。

実施例１ ニーペニシリウム・／ンルパム５ＡＮＫ　２３８８７株
を下記の培地組成−１２で示される培地８０酊を含む５
００ｍ容パンフル付き三角フラスコ５０本にそれぞれ一
白金耳接種し、２　（１０ｒｐｍの回転振盪培養機によ
り２６℃で１６８時間培養した。

〔培地組成−１〕 グリセリン　　　　　　　５０２ 化ジャガイモ　　　　　　　　５０２ イースト・エキス　　　　　　５１ 麦芽エキス　　　　　　　　　５２ 脱イオン水　　　　　　　　１０００肩ノ（ＰＨ６，０
） 得られた培養液４！にＦ、ｉ／Ｍ助剤と［７てセライ）
　５４５　（米国ヅヨンズ・マンビル・プロダクト・コ
ーポレーション製）を５００２加えて濾過することによ
り培養液３．７６７　（ＰＨ３，８２’）が得られた。

これをＰｌ（２５に稠整後、酢酸エチル１５にで２回抽
出し７タレキシンを含む酢酸エチル袖出液３！を得た。

抽出液を０．１　Ｍ　ＩＪン酸二ナトリウム水溶液１．
５！で２回抽出し、フタレキシ／ヲ含むリン酸ニナトリ
ウム水溶託３ｊを得た。このリン酸二ナトリウム水溶液
の〆）を２．５に開塾して再度酢酸エチル１．５７で２
回抽出し、得られた抽出液を餡和食塩水５００　ｍｌで
２回洗浄し、無水硫酸す）　ＩＪウムで脱水後減圧濃縮
して油状物１４？を得た。この油状物をあらかじめ酢酸
エチル：ジクロロメタン（１：１）で平衡化して充填し
たセファデックスＬＨ−２０のカラム１７０＋１／（φ
３０Ｘ２４０ｎｍ）に同混合溶媒で溶解して吸着させた
後、同一溶媒で展開溶出した。

溶出液を５ｍずつ分画しフタレキシンを含むフラクショ
ン人５７〜７４を集め、減圧下濃縮して油状物９０１．
３■を得た。

この油状物の全量をジクロロメタン２０ｍ１に溶解し室
温に放置することにより、フタレキシンの無色針状結晶
５７７．７ηを得た。

〔発明の効果〕

本発明の抗生物質フタレキシンは下記の生物学的性状を
示す。

１）抗菌カニ 種々の微生物に対する抗生物質フタレキシンの最小阻止
濃度（ＭＩＣ）は第１表に示す通りである。なお、本検
定は、サブロー寒天培地〔日永製薬■〕に０３チイース
トエキスを加えた寒天希釈法で行った。

第　　１　　表 カンジダ・アルビカンス　　　　　５ＡＮＫ　５０１５
７　　１００ｓ　　　　　　　　　　　　５ＡＮＫ　５
０１６９　　１００カンノダ・クラプラータ　　　　　
　５ＡＮＫ　５（１１６７２００カン・ツタ・トロピカ
リス　　　　　　Ｓ　ＡＮ　Ｋ　５９２６３　　）　４
００シゾサツカロミセス・ポンベ　　　　　　５ＡＮＫ
　５７３６２　　４００サツカロミセス・セルビシエ　
　　　　５ＡＮＫ　　５０２６５　　）４００クリプト
コツカス・ネオホルマンス　　　　５ＡＮＫ　　５８０
６３　　　４００アスペリギルス・オリゼ　　　　　　
　５ＡＮＫ　１１１４７　　）４００アスベリギルス・
フミガタス　　　　　５ＡＮＫ　１０６６２　　）４０
０フザリウム・オキシスポラム　　　　　５ＡＮＫ　１
７０７６　　＞４００ペニシリウム・クリソゲナム　　
　　　５ＡＮＫ　１２７６８　　＞４００ピリキユラリ
ア・オリゼ　　　　　　　５ＡＮＫ　１１４６８　　）
４００トリコフイトン・ルブラム　　　　　　５ＡＮＫ
　　１１７６８　　２Ｆ１０トリコフイトン・メンタグ
ロファイテス　５ＡＮＫ　　１１８６８　　２００以上
から、抗生物質フタレキシンは種々の微生物に対して抗
菌力を示し、人、動物及び植物の病害の予防・治療に有
用である。

、２）他の抗真菌剤との併用による相乗作用：フタレキ
シンはクロトマゾール、ミコナゾールもしくはケトコナ
ゾールなどのアゾール系抗真菌剤、あるいはナフテイフ
インなどのアリールアミン系の抗真菌剤との間に強い相
乗作用を有している６例えば、カンジダ・アルビカンス
５ＡＮＫ　５０１５７株を被検菌とし、培地サブロー〔
白水製薬■製）　＋０．３　％イーストエキスを用いて
チエッカ−ホード法によりクロトリマゾールとの併用効
果をみてみると、フタレキシン、クロトリマゾール単独
でのＭＩＣはそれぞれ５０μＷ、Ｉｒｎ１゜０．７８μ
？／ｍｌであるが、その併用効果はＦＩＣ１ｎｄｅｘＯ
，１８９と非常に強い相乗作用を示した。従って単独に
よる真菌症の治療薬のみならずアゾール系あるいはアリ
ールアミン系抗真菌剤との併用によシ、−ｆｆｉその効
果を高めることができる。

３）ｓ性： マウスに５００　ｒｑ／ｋｑのフタレキシンを腹腔内投
与したが毒性は認められなかった。一方マイコフェノー
ル酸を腹腔内投与した場合のより５ｏは１００η〜であ
った。

以上から、フタレキシンは各種真菌性疾患を対照とする
抗菌剤として使用される。その投与形態としては、皮下
注射、静脈内注射、筋肉注射、坐剤などによる非経口投
与法あるいは錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などによ
る経口投与法があげられる。投与量は対象疾患、投与経
路および投与回数などによって異るが、例えば成人に対
しては通常は１００η〜５，０００ｍｇを１日１回また
は数回に分けて投与するのが好ましい。

【図面の簡単な説明】

第１図はフタレキシンの紫外線吸収スペクトルを示す。 第２図はフタレキシンの赤外線吸収スペクトルを示す。 第３図はフタレキシンの核母気共鳴吸収スペクトルを示
す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する新規抗生物質フタレキシンおよびその塩。 ２、ユーペニシリウム属に属するフタレキシン生産菌を
   培養し、培養物からフタレキシンを単離することよりな
   るフタレキシンの製造法。 ３、ユーペニシリウム属に属するフタレキシン生産菌が
   、ユーペニシリウム・パルバムＳＡＮＫ２３８８７株（
   微工研寄第９９５５号）である請求項２記載の製造法。