JPH01252280A - 新規エンドキシラナーゼｉ、その製法、該酵素を産生する微生物及び該酵素によるキシロオリゴ糖の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規エンドキシラナーゼＩ、その製法、該酵素
を産生ずる微生物及び該微生物によるキシロオリゴ糖の
製法に関する。

（従来の技術〕 キシランは稲ワラ等の農産廃棄物中に存在しているが、
加水分解によりキシロースを生産する以外は有効な利用
は行なわれていない。

しかし、最近、各種オリゴ糖が食品工業等において注目
されており、キシランを分解して得られるキシロオリゴ
糖も甘味料、保湿剤などの用途が期待出来、その効率的
な製造法の開発が望まれている。キシロオリゴ糖を製造
する方法として、酸による部分加水分解法が考えられる
が、この方法ではキシロオリゴ糖の収率は低く、かつ、
精製工程も繁雑であり、工業的方法としては適していな
い。キシラナーゼを生産する方法としては、従来からバ
シラス・アシドカルダリウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉ
ｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）が生産する酵素（Ａｇｒｉｃ
ａｌｔｕｒａｌａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈｅ
ｍｉＳｔｒｙ　４５．１１２１−１１２７．１９８１゜
同旦、９６５−９６７、１９８３）　、　　フミコーラ
・ラヌギノーサ（ｔｌ　ｕ　ｍ　ｉ　ｃ　ｏ　Ｉ　ａ　
ハ肚し閃組）が生産する酵素（Ｊ、Ｆｅｒｍｅｎｔ。

Ｔｅｃｈｎｏｌ　６２，４１５−４２０．１９８４）、
バシラス・プミラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｑ−が生産
する酵素（特開昭６ｌ−２４２５９２）　、クロストリ
デイウム属（Ｃ１ｏｓＬｒｉｄｉｕｎ＋　ｓｐ、）に属
する微生物が生産する酵素（特開昭６２−２９９７３゜
特開昭６２−２９９７４）などが知られている。しかし
ながら、従来知られている酵素はキシロビオース、キシ
ロトリオースを生産するか、キシロトリオース及びキシ
ロテトラオースを生産するかあるいはキシロトリオース
を主としたオリゴ糖を生産するかでキシロビオース、キ
シロトリオース、キシロテトラオース、及びキシロペン
タオースを含有するキシロオリゴ糖を製造する方法は知
られていな〔発明が解決しようとする課題〕 本発明は新規なエンドキシラナーゼ■、該酵素を産生ず
るバシラス・ステアロサーモフィラスの新菌株、該微生
物による酵素の製法及び該酵素による二トン口ビオース
、キシロトリオース、キシロテトラオース、キシロペン
タオースを含有するキシロオリゴ糖を効率的に製造する
方法を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは工業化する際、微生物汚染及びエネルギー
的な面から有利となる６０〜６５℃付近でオリゴ塘生産
能力の強い微化物の検索を行なった結果、土壌より分離
したバシラス・ステアロサーモフィラスと同定された微
生物が６０〜６５゛Ｃ付近で効率よくキシロオリゴ糖を
生成するキシラナーゼを菌体外に多量生産することを認
め、本発明を完成した。

以下にこの発明に使用するキシラナーゼ生産菌の代表で
あるバシラス・ステアロサーモフィラスＮｏ、２１株（
Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌ
ｕｓ　Ｎｏ、２１）　（微工研菌寄第９８８１号）の菌
学的性質を記載する。

Ａ、形態的特徴 ■細胞の形及び大きさ； 桿菌で大きさは０．６〜１．０×２．０〜３．５μｍ■
細胞の多形性；　無し ■運　動　性；　有り ■胞子形成能　；　有り、胞子の形状は楕円形で、ター
ミナル部に位置し、径は１．０×１．８μである。

［５］グラム染色性；　陽性 ■抗　酸　性；　無し Ｂ、生理学的性質 ■硝酸塩の還元　　　　　士 ■ＭＲテスト　　　　　　− ■ＶＰテスト　　　　　　± 、■インドールの生成　　　− ■硫化水素の生成　　　　− ■デンプンの加水分解　　士 ■ゼラチンの液化能　　　十 ■色素の生成　　　　　　微弱に水溶性褐色色素を生成
する ■カタラーゼの生成　　　士 ［相］オキシダーゼの生成　　士 ■生育の範囲　　　　　　ｐＨ中性付近温度５４〜７０
℃ ＠酸素に対する態度　　　絶対好気性 ［相］下記の糖類から酸及びガスの生成の有無酸　　ガ
ス （１）Ｌ−アラビノース　　　十　　　−（２）Ｄ−キ
シロース　　　　士　　　−（３）Ｄ−グルコース　　
　　＋　　　−（４）Ｄ−マンノース　　　　十　　　
−（５）Ｄ−フラクト−ス　　　十　　　−（６）Ｄ−
ガラクトース　　　±　　　−（７）麦芽糖　　　　　
　　士　　　−（８）　　ショ糖　　　　　　　　＋　
　　−（９）乳糖　　　−− 〇〇）トレハロース　　　　＋　　　−ＣＩＩ）　　Ｄ
−ソルビット　　　　　−−０２）Ｄ−マンニット　　
　　士　　　−０３）　　イノシシ１−　　　　−　　
−圓　グリセリン　　　　±　　− ０５１デンプン　　　　　　＋　　　−０ω　キシラン
　　　　　　＋　　− 以上の菌学的性質に従い、本発明の菌株Ｎｏ、２１株の
分類学的地位をハージェーズ・マニュアル・オブ・デタ
ーミネティブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒ−ｇｅｙ’ｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版より求めると、好気
性、グラム陽性桿菌、胞子を形成する等の理由により、
本菌株はバシラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する細菌
であると同定された。

さらに６５℃以上でも生育する事により、本菌株はバシ
ラス・ステアロサーモフィラス（Ｂ、　ｓｔｅａｒｏ−
ｔｈｅｒｍｏ　ｈｉｌｕｓ）　、　バシラス・シェレゲ
リ−（Ｌ赳旦」１旦）、バシラス・アジドカルダリウス
（Ｂ。

ａｃｉｄｏｃａｌｄａ■）らに近縁の種であることがわ
かった。

さらに胞子の位置、生育ｐＨ、スターチの分解能力等の
性質から、本菌株はバシラス・ステアロサーモフィラス
の新菌株であると同定した。

このバシラス・ステアロサーモフィラスＮｏ、２１　株
はキシラナーゼとして新規なエンドキシラナーゼＩ及び
エキソキシラナーゼ■を産生ずる。

エンドキシラナーゼＩの特性は次の通りである。

Ａ１作用 本酵素はキシランに作用し、キシロビオース、キシロト
リオースを多量及びキシロテトラオース、キシロペンタ
オースを少量生成する。しかし、キシロースは少量しか
生成しない。

Ｂ、基質特異性 キシランを分解する。

Ｃ０至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 ｐＨ５，０〜９．０の範囲で作用し、至適ｐＨは７．０
付近である（１％キシラン、５５°ｃ、１２時間反応）
、（このｐＨ測定において、基質としては０．１Ｍリン
酸緩衝液に−１−シラン２％を加えたものを使用した）
。又、ｐＨ５〜８の範囲にて安定である（０．１Ｍ酢酸
又は０．１Ｍリン酸緩衝液中で１時間室温Ｍ置後、残存
活性を測定した。）Ｄ１作用温度範囲及び最適作用温度 的７０℃まで作用し、最適作用温度は６１℃である（１
％キシラン、ｐＨ７，０，１２時間反応）。

Ｅ、熱安定性 ｐＨ７，０，６０分間加熱処理後、残存活性を測定した
。その結果７０℃で４５％、７５℃で１５％、８０℃で
ほぼ完全に失活した。

Ｆ３等電点　　　ｐ　Ｈ４，５付近 Ｇ、力価の測定法 ２％キシランを含有するＯ、　ｌ　Ｍリン酸緩衝液の１
ｍｌに酵素溶液１ｍｌを混合し、５５℃で６時間反応後
、遠心分離した上清液の還元糖を３．５−ジニトロサリ
チル酸法で測定した。この条件下で１時間にキシロース
］　ｍｇに相等する還元力を示す酵素量を１単位と定義
した。

Ｈ０精製方法 本菌の培養上清液に６０％飽和の硫酸アンモニウムを加
えて塩析した。次いで塩析沈澱物をｐＨ５，５、５０ｍ
Ｍ酢酸緩衝液にとかし、セファデックス０１００カラム
に通した。次いでｐＨｓ、５゜５０ｍＭ酢酸緩衝液で平
衡化したＣＭ−セファデックスＣ−５０に通過させ、凍
結乾燥し、濃縮後ファルマシアＦＰＬＣのクロマトフオ
ーカシングにかけた。ｐＨ４，５付近で？岩田したエン
ドキシラナーゼＩを得た。

■９分子量 セファクリルＳ−２００カラム（ファルマシア製）を用
いたゲル濾過により推定されたエンドキシラナーゼＩの
分子量は約２５．０００であった。

次にエキソキシラナーゼＨの特性は次の通りである。

Ａ０作用 本酵素はキシランに作用し、キシロース及び少量のキシ
ロビオースを生成する。

Ｂ、基質特異性 キシランを分解する。

Ｃ１至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 ｐＨ５〜９の範囲で作用し、至適ｐＨは６．５付近であ
る（１％キシラン、５５°ｃ、１２時間反応）。

（このｐＨ測定において、基質としては０．１　Ｍリン
酸緩衝液にキシラン２％を加えたものを使用した）。又
、ｐＨ５〜８の範囲にて安定である（リン酸緩衝液中で
１時間室温放置後、残存活性を測定した。） Ｄ０作用温度範囲及び最適作用温度 温度４０〜８０℃の範囲で作用し、最適作用温度は７０
℃付近である（１％キシラン、ｐｌ−１７，０，１２時
間反応）。

Ｅ、熱安定性 ｐＨ７，０，６０分間加熱処理後、残存活性を測定した
。その結果７０℃で６０％、７５℃で２５％、８０℃で
ほぼ完全に失活した。

Ｆ１等電点　　ｐＨ４，０付近 Ｇ、力価の測定法 ２％キシランを含有する０、１Ｍリン酸緩衝液の１−に
酵素量＠１−を混合し、５５℃で６時間反応後、遠心分
離した上清液の還元糖を３，５−ジニトロサリチル酸法
で測定した。この条件下で１時間にキシロース１　ｍｇ
に推定する還元力を示す酵素量を１単位と定義した。

Ｈ０精製方法 木閑の培養上清液に６０％飽和の硫酸アンモニウムを用
いて塩析した。次いで塩析沈澱物をｐＨ５，５、５０ｍ
Ｍ酢酸緩衝液にとかし、セファデックス６１００カラム
に通した。次いでｐＨ５，５゜５０ｍＭ酢酸緩衝液で平
衡化したけ一セファデックスＣ−５０に通過させ、凍結
乾燥し、濃縮後ファルマシアＦ　Ｐ　Ｌ　Ｃのクロマト
フオーカシングにかけた。ｐ　Ｈ４，５付近で溶出した
エキソキシラナーゼ■を得た。

１、分子量 セファクリルＳ−２００カラム（ファルマシア製）を用
いたゲル濾過により推定されたエキソキシラナーゼＨの
分子量は約ｉｏｏ、ｏｏｏであった。

本菌を用いてエンドキシラナーゼＩを生産せしめる為の
培養方法は通常の細菌の培養法が使用できる。

炭素源としては、各種キシラン、小麦ふすま、パルプ廃
液や穀物糖化粕、稲ワラ等　のキシランを含む各種原料
あるいはその他の糖類を単独または組み合わせて用いる
事が出来る。

窒素源としては、有機窒素含有物として各種アミノ酸、
コーン、ステイープリカー、マルトエキス、ペプトン、
イース１〜エキス等が、又、無機窒素化合物としては、
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素等が単独ま
たは組メ合わせて用いる事が出来る。

その他、ミネラル、ビタミン類等を適時添加するとよい
。

培養温度は５５℃〜７０℃が適しており、更に好ましく
は５５℃〜６０℃がよい。培養ｐＨは６．５〜７．５が
適しているが、更に好ましくは７．０がよい。培養日数
は１〜３日である。

培養方法は、液体培養、固体培養いずれでもよいが、好
気的に液体培養するのが好ましい。

培養終了後、公知の手法によりエンドキシラナーゼＩを
得る事が出来るが、次のその一例を示す。

まず、培養液中の菌体等を遠心分離し上清液を得る。こ
の上清液を粗酵素として利用する事も可能である。この
上清液を６０％０％硫酸アンモニラで沈澱させ、粗酵素
を得る。この粗酵素を一晩透析し、その透析内液をゲル
濾過、クロマトフオーカシングを行ないエンドキシラナ
ーゼＩの最終標品を得る。

このようにして得たエンドキシラナーゼＩを用い、キシ
ロオリゴ糖を製造する為の酵素反応は５５〜６０°ｃ、
ｐＨ６，０〜８．０、反応時間１２〜２４時間、ギシラ
ン濃度は０．５〜１％で行なうとよい。反応液の組成は
キシロース（×１）約５−／讐χ（３〜６騙／Ｗ％）（
当初の酵素反応ではキシロースが検出されなかったが、
上記反応条件ではキシロースが有意に検出された）、キ
シロビオース（Ｘ２）約２０Ｗ八χ（１８〜２３Ｗ／Ｗ
り　、キシロトリオ−，２，（Ｘ３）約２５Ｗ／Ｗ％　
（２３〜２８Ｗ／間）、キシロテトラオース（×４）約
２１−ハχ（２０〜２５−／は）、キシロペンタオース
（×５）約２９Ｗ／Ｗ　（２７〜３３−／顕）であった
。この発明のエンドキシラナーゼＩを作用させるキシラ
ン含有物質としては小麦麩等が挙げられる。

上記酵素反応を利用したキシロオリゴ糖の製造には、精
製酵素にかえるバシチス属に属するエンドキシラナーゼ
■生産能を有する菌体またはその処理物を用いることが
できる。そしてそれらの具体例としては、菌体培養液あ
るいはその遠心分離の上清液等が挙げられる。

また、エンドキシラナーゼＩとエキソキシラナーゼ■と
を所望の割合で混合した混合酵素をキシラン含有物質に
作用させることにより、キシロビオース、キシロトリオ
ース、キシロテトラオース及びキシロペンタオースが任
意の比率で含まれる生成物が得られる。

［発明の効果］ 本発明は新規なエンドキシラナーゼ■、バシラス属に属
する微生物による該酵素の製法、バシラス・ステアロサ
ーモフィラスの新菌株、及び新規なエンドキシラナーゼ
Ｉによるキシロトリオースを製造する方法が提供された
。本発明の方法によるエンドキシラナーゼＩの製法にお
いては、該酵素が菌体外に産生される利点がある。また
、本発明により得られるキシロオリゴ糖は甘味料、保湿
剤等として食品工業、化粧品工業等に有効に利用しうる
ちのである。

〔実施例］ 次に実施例により、本発明を具体的に説明する。

実施例１　　粗酵素液の調製 キシラン１り八χ、酵母エキス０．１誓ハχ、ＮＩｌ、
ＣＩＯ，２Ｗ／甑、ＫＩＩ２ＰＯ４０，４Ｗ／ＷＸ、Ｎ
ａＣ１Ｏ，２Ｗ／ＷＸ、ＭｇＳＯ４、ｌＮ２Ｏ０，ＩＷ
／ＷＸ、Ｆｅ５Ｏａ・ＩＨｚＯＯ，００５Ｗ／間、Ｍｎ
５ＯａＯ，００５Ｗ／Ｗχ、ＣａＣ１ｚ　・２１ｈＯＯ
，０２Ｗ／Ｗ！からなる培地（ｐＨ＝７．０）　１００
ｍＮを１２の三角フラスコに仕込み、バシラス・ステア
ロサーモフィラスＮｏ、２１　（微工研菌寄第９８８１
号）を接種した。本仕込み液を５５”Ｃ，４８時間振盪
培養した。培養後、培養液を遠心分離し上清液を得た。

この上清液は０．２４ユニツト／ｍｌのエンドキシラナ
ーゼＩ及びエクソキシラナーゼ■を含有していた。

実施例２　　粗酵素液の調製 実施例１の培地３！を５１のジャーファーメンタ−に仕
込め、実施例１の培養液１００ｍ１全量を接種し０．８
ｖｖｍ、　２０Ｏｒｐｍにて６０℃３３０時間培養した
。

培養後、培養液を遠心分離し上清液を得た。この上清液
は０．２４ユニット／−のエンドキシラナーゼＩ及びエ
クソキシラナーゼ■を含有していた。

実施例３ 実施例１で得られた上清液１ｍｌを１％キシランを含む
ｐＨ７，０の０．１　Ｍリン酸緩衝液１−に添加し５５
℃９１２時間反応させた。生成糖を高速液体クロマトグ
ラフィー（カラム　ナカライ５ＮＨ２，ｆ′ｊＩ出液　
メチルシアン；　１４：２６．　　検出器　昭和電エソ
ーデックスＲＩＳＥ−１１）にて分析した結果、キシロ
ース５　Ｗ／Ｗχ、キシロビオース２０Ｗ／Ｗχ、キシ
ロトリオース２５Ｗ／Ｗ％、キシロテトラオース２１Ｗ
／Ｗχ、キシロペンタオース２９−ハχからなる生成物
が得られた。

実施例４ 実施例２で得られた培養上清液３００ｍｆを、６０％（
訂（ホ）飽和の硫酸アンモニウムで塩析した。塩析沈澱
物をｐＨ５，５の５０ｍＭ酢酸緩衝液に溶解し、セファ
デックスＧ−１００カラムに通してキシラナーゼ活性画
分を集めた。その活性画分をｐＨ５，５５０ｍＭ酢酸緩
衝液で平衡化した側−セファデックスＣ−５０カラムに
通過させ、活性画分を集め、濃縮後、ファルマシア製Ｆ
ＰＬＣを用いたクロマトフオーカシングにより、ｐＨ４
，５付近に溶出する精製エンドキシラナーゼＩ溶液４　
ｄ　（１，３ユニット／ｍりを得た。

本精製酵素液１ｍｌに２％キシランを添加し、５５’Ｃ
，ｐＨ７，０で１２時間反応を行なった。生成糖を分析
した結果、キシロース３　（Ｗ／Ｗ）χ、キシロビオー
ス１９（智へ）χ、キシロトリオース２０側ハ）χ、キ
シロテトラオース２５　（Ｗ／Ｗ）χ、キシロペンタオ
ース３３（Ｗ／Ｗ）Ａからなる生成物が得られた。

実施例５ 実施例２で得られた培養上清液３００−を、６０％（Ｗ
／Ｗ）飽和の硫酸アンモニウムで塩析した。塩析沈澱物
を、ｐＨ５，５の５０ｍＭ酢酸緩衝液に溶解し、セファ
デックスＣ−５０カラムに通してキシラナーゼ活性画分
を集めた。その活性画分を、ｐＨ５，５で５０ｍＭ酢酸
緩衝液で平衡化したＣＭ−セファデックスＣ−５０カラ
ムに通過させ、活性画分を集め、濃縮後、ファルマシア
製ＦＰＬＣを用いたクロマトフオーカシングにより、ｐ
Ｈ４，５付近に溶出する精製エキソキシラナーゼ■熔液
４ｍ１（２，４ユニット／ｍｌ）を得た。

この精製エキソキシラナーゼＵｉＢ液０．５　ｍｌと、
実施例４で得られた精製エンドキシラナーゼＩ溶液Ｑ、
５　ｍｌを混合し、２％キシランを添加して、５５’ｃ
、ｐＨ７，０で１２時間反応を行なった。生成糖を分析
した結果、キシロース３１　（Ｗ／Ｗ）χ、キシロビオ
ース２８（−八）χ、キシロトリオース１９（Ｗ／Ｗ）
χ、キシロテトラオース１５　（Ｗ／Ｗ）χ、キシロペ
ンタオース７側ハ）χからなる生成物が得られた。

【図面の簡単な説明】

第１回はエンドキシラナーセＩのｐＨと活性の関係を示
すグラフであり、第２図は該酵素のｐＨ安定性を示すグ
ラフであり、第３図は該酵素の温度と活性の関係を示す
グラフであり、そして第４図は該酵素の温度安定性を示
すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）下記特性を有する新規エンドキシラナーゼ I Ａ
   、作用 本酵素はキシランに作用し、キシロビオース、キシロト
   リオース、キシロテトラオース、キシロペンタオースを
   多量生成する。しかし、キシロースは少量しか生成しな
   い。 Ｂ、基質特異性 キシランを分解する。 Ｃ、至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 ｐＨ５．０〜９．０の範囲で作用し、至適ｐＨは７．０
   付近である。又、ｐＨ５〜８の範囲で安定である。 Ｄ、作用温度範囲及び最適作用温度 温度４０〜７５℃の範囲で作用し、最適温度は６１℃付
   近である。 Ｅ、分子量約２５０００ Ｆ、等電点ｐＨ４．５付近 （２）バシラス・ステアロサーモフィラスに属し、下記
   菌学的性質を有する新菌株 Ａ、形態的特徴 ［１］細胞の形及び大きさ； 桿菌で大きさは０．６〜１．０×２．０〜３．５μｍ ［２］細胞の多形性；無し ［３］運動性；有り ［４］胞子形成能；有り、胞子の形状は楕円形で、ター
   ミナル部に位置し、 径は１．０×１．８μである。 ［５］グラム染色性；陽性 ［６］抗酸性；無し Ｂ、生理学的性質 ［１］硝酸塩の還元：＋ ［２］ＭＲテスト：− ［３］ＶＰテスト：± ［４］インドールの生成：− ［５］硫化水素の生成：− ［６］デンプンの加水分解：＋ ［７］ゼラチンの液化能：＋ ［８］色素の生成：微弱に水溶性褐色 色素を生成する ［９］カタラーゼの生成：＋ ［１０］オキシダーゼの生成：± ［１１］生育の範囲：ｐＨ中性付近 温度５４〜７０℃ ［１２］酸素に対する態度：絶対好気性 ［１３］下記の糖類から酸及びガスの生成の有無 （１）Ｌ−アラビノース；酸：＋，ガス：− （２）Ｄ−キシロース；酸：±，ガス：− （３）Ｄ−グルコース；酸：＋，ガス：− （４）Ｄ−マンノース；酸：＋，ガス：− （５）Ｄ−フラクトース；酸：＋，ガス：− （６）Ｄ−ガラクトース；酸：±，ガス：− （７）麦芽糖；酸：±，ガス：− （８）ショ糖；酸：＋，ガス：− （９）乳糖；酸：−，ガス：− （１０）トレハロース；酸：＋，ガス：− （１１）Ｄ−ソルビット；酸：−，ガス：− （１２）Ｄ−マンニット；酸：＋，ガス：− （１３）イノシット；酸：−，ガス：− （１４）グリセリン；酸：±，ガス：− （１５）デンプン；酸：＋，ガス：− （１６）キシラン；酸：＋，ガス：− （３）バシラス属に属する下記の特性を有するエンドキ
   シラナーゼ I 生産菌を培地に培養し、培養物からエン
   ドキシラナーゼ I を製造する方法。 Ａ、作用 本酵素はキシランに作用し、キシロビオース、キシロト
   リオース、キシロテトラオース、キシロペンタオースを
   多量生成する。しかし、キシロースは少量しか生成しな
   い。 Ｂ、基質特異性 キシランを分解する。 Ｃ、至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 ｐＨ５．０〜９．０の範囲で作用し、至適ｐＨは７．０
   付近である。又、ｐＨ５〜８の範囲で安定である。 Ｄ、作用温度及び最適作用温度 温度４０〜７５℃の範囲で作用し、最適温度は６１℃付
   近である。 Ｅ、分子量約２５０００ Ｆ、等電点ｐＨ４．５付近 （４）バシラス属に属する微生物がバシラス・ステアロ
   サーモフィラスＮｏ．２１である請求項３記載のエンド
   キシラナーゼ I を製造する方法。 （５）キシラン含有物質にエンドキシラナーゼ I を作
   用させてキシロオリゴ糖を製造する方法。 （６）キシロオリゴ糖がキシロビオース、キシロトリオ
   ース、キシロテトラオース、キシロペンタオースを主体
   とするものである請求項５記載のキシロオリゴ糖を製造
   する方法。（７）キシラン含有物質にバシラス属に属す
   るエンドキシラナーゼ I 生産菌又はその処理物を作用
   させてキシロオリゴ糖を製造する方法。 （８）処理物がエンドキシラナーゼ I の粗酵素である
   請求項７記載のキシロオリゴ糖の製造法。 （９）キシラン含有物質にエンドキシラナーゼ I とエ
   キソキシラナーゼIIとの任意な混合比率から成る混合酵
   素を作用させてキシロオリゴ糖を製造する方法。