JPH01179691A - 微生物による植物ウィルス防除剤の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はツリガネタケ属（Ｆｏｍｅ　ｓ　）に属する担
子菌によって生産される、抗植物ウィルス作用物質の製
造法に関する０本剤は農業あるいは園芸の分野において
ウィルス病の防除を目的として広く利用することができ
る。

［従来技術］ 畑、水田あるいは各種施設で栽培されるタバコ、ピーマ
ン、トマト、キュウリ、スイカなどはタバコモザイクウ
ィルス（以下ＴＭＶという）、キュウリモザイクウィル
ス、キュウリ緑斑モザイクウィルス、ジャガイモＹウィ
ルス等に罹病し、著しい被害を受けることが多い、これ
らの病原ウィルスは他作物、雑草、樹木、種苗、土壌中
などに存在し、作業時の接触、昆虫の吸汗等によって伝
染する０作物におけるこれらウィルス病の防除対策とし
て、従来はウィルスの発生源の除去または低減、土壌消
毒あるいは殺虫剤によるウィルス媒介者の殺減など、間
接的防除技術が主として用いられてきた。

植物ウィルスの直接防除剤としてはアルギン酸ナトリウ
ム剤（特許第７１７５９４、農林水産省登録第１３４４
０）及びシイタケ菌糸体培養抽出物（特許第１０１２０
１４、農林水産省登録第１５５８４）があるが、いずれ
も浸透移行性がないため、植物体の全面に漏れなく一様
に散布する必要があり、また畑での効果はあまり高くな
い、−方、最近、システミックな（見掛は上浸透移行性
の）効果を示す抗植物ウィルス物質として、オシロイバ
ナに含まれる蛋白質（特開昭６Ｏ−２４３１００）が知
られている。しかし、本物質の生産は農業的手段又は植
物組織培養（特開昭６ｌ−５７９０）によらねばならな
いことから、その生産性に関しては自ずと限界を有する
。

［発明が解決しようとする問題点］ 本発明は、従来の市販の植物ウィルス病防除剤に見られ
ない浸透移行性の効果を示し、安全で有効な化学物質を
、微生物を用いる醗酵工業的手段によって安価に大量に
提供する事を目的とする。

［問題点を解決するための手段］ 本発明者らは、上記の目的を達成するために、多種の微
生物の代謝産物についてスクリーニングを行った結果、
ツリガネタケ属（Ｆｏｍｅｓ）に属する菌が培養物中に
生産する高分子多糖類が顕著な抗ウィルス活性を示すこ
とを発見した。

ツリガネタケ属に属する菌としてはフォメス・フォメン
タリウス（Ｆｏｍｅｓ　　ｆｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ）、
フオメス・ゲオトロプス（Ｆｏｍｅｓ　　ｇｅｏｔｒｏ
ｐｕｓ）、フオメス・メラノボルス（Ｆｏｍｅｓ　　ｒ
ｒｒｅｌａｎｏｐｏｒｕｓ）等があるが、これらの培養
液はその程度に差はあるものの、いずれも抗ウィルス活
性を示した。

本発明に使用するツリガネタケ属に属する菌株としては
、天然のツリガネタケより分離した菌株、あるいは公知
の保存菌株、例えばフォメス・フォメンタリウス（Ｆｏ
ｍｅｓ　　ｆｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ）ＩＦＯ８２４６、
ＩＦＯ３０３７１、ＩＦＯ３０７７７（ＩＦＯは財団法
人・醗酵研究所の略〉、あるいは）オメス・フォメンタ
リウス（Ｆｏｍｅｓ　　ｆｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ）ＡＴ
ＣＣ２６７０８、ＡＴＣＣ３４６８７、ＡＴＣＣ４６２
１３（ＡＴＣＣはアメリカン・タイプ・カルチャー・コ
レクションの略）、フォメス・ゲオトロブス（Ｆｏｍｅ
ｓ　　ｇｅｏｔｒｏｐｌ至）ＡＴＣＣ２６７０９，フォ
メス・メラノボルス（Ｆｏｍｅｓ　　ｍｅｌａｎｏｐｏ
ｒｕｓ）ＡＴＣＣ２６１３２等があるが、酸性高分子多
糖類の生産量が高いフォメス・フォメンタリウス（Ｆｏ
ｍｅｓ　　ｆｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ）ＪＴＳ３０４６　
（微工研Ｎ寄第９７０４号）が最も望ましい菌株である
。なお、ＪＴＳ　　３０４６菌株は、ＩＦＯ８２４６菌
株を親株として継代培養し、選抜により得られた高生産
株である。

これら菌株の培養物の培養Ｐ液あるいは菌体の熱水抽出
物をそのまま、あるいはその有効成分である高分子多糖
類を水に溶解し、タバコ、トマト、ピーマンなどの茎葉
に散布あるいは地下部から吸収させることなどによって
、ＴＭＶ等の感染発病を効果的に防除することができる
。

特にツリガネタケ属に属する菌株の生産する抗ウイルス
活性物質は従来知られている多糖類と異なり、処理植物
体においてシステミックに発現することから著効を示す
。

本発明において使用する菌株は一般の担子菌培養用培地
を用いて、静置又は撹拌培養でき、その効果は有効成分
である高分子多糖類、特に酸性高分子多糖類の量に依存
する。

本発明者らはこれらのことを実験的に確認し本発明を行
った。

以下に、順を追って詳細に説明する。

本発明において、高分子多糖類は、高分子多糖類生産菌
を培養した後、培養物の液体区分（培養ヂ液）および菌
体区分から分離採取することによって得る事ができるが
、特に、培養Ｐ液から多く得られる。

培養培地としては菌体がよく育つものであればいかなる
組成の培地でもよいが、一般の糸状菌用培地に酵母エキ
スなどを加えたものが好ましい。

本発明において、グルコース、ペプトン、酵母エキス、
麦芽エキス、リン酸−カリウム、硫酸マグネシウム及び
水道水からなる培地等で高分子多糖類生産菌を培養した
。

培養条件としては、例えば２０−３０°Ｃの静置培養で
十分であり、また高分子多糖類生産菌の生育が可能で高
分子多糖類を生産する条件であればいかなる条件でも良
いが、振盪培養又は通気撹拌培養が好ましい。

高分子多糖類生産菌の培養物から遠心分離又は−過によ
り液体区分（培養Ｐ液）及び菌体区分（菌体）を得、次
いで、これらから抗ウィルス活性を有する高分子多糖類
を採取する。培養Ｐ液から高分子多糖類を採取するには
常法によればよく、例として、透析、限外−過、分別沈
澱、溶媒分画、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾
過クロマトグラフィーなどの操作を単独あるいは適宜併
用すればよい、菌体から高分子多糖類を採取するには、
例えば熱水抽出を行い、その後は液体区分からの採取法
に準ずればよい。

有効成分は、透析により透析膜内に残り、フェノール・
硫酸反応及びカルバゾール・硫酸反応に陽性であり、ニ
ンヒドリン反応に陰性であることから、アミノ酸、タン
パク質及びアミノ糖を含まない高分子多糖類と考えられ
る。また、限外濾過により分子量１０万以上の中性多糖
類とそれ以下の酸性の多糖類に分れる。これらをそれぞ
れフェノール硫酸法により定量することができる。

両多糖類はいずれも植物ウィルス防除効果を示すが、シ
ステミックな（見掛上、浸透移行的）効果を示すのは酸
性高分子多糖類である。

以下に実施例により本発明をさらに具体的に説明する。

実施例１ ［菌の培養コ フオメスパ）オメンタリウス（Ｆｏｍｅｓ　　ｆｏｍｅ
ｎｔａｒｉｕｓ）ＪＴＳ　　３０４６菌株（微工研菌寄
第９７０４号）を、試験管内のバレイショ・ブドウ糖・
寒天培地（斜面、１０ｍ１）に接種し、２４〜２８°Ｃ
で１０日間培養し、保存菌株とした。この保存菌株を、
下記の培地１００ｍ１を入れた５００ｍ１容三角フラス
コに接種し、２５〜２８°ＣＣ１２０Ｏｒｐで１０日間
、回転振盪培養した。

培地ニゲルコース　　　　　　　５０ｇペプトン　　　
　　　　　　２ｇ 酵母エキス　　　　　　　　２ｇ 麦芽エキス　　　　　　　１０ｇ ＫＨ２ＰＯ４５ｇ Ｍｇ５０　　・７ＨＯＩｇ 水道水　　　　　　　１０１００Ｏ 他の菌株も同様の方法で培養し、菌糸培養物を得た。こ
れらの菌糸培養物を６０’Ｃで１５分加熱し、東洋２紙
Ｎｏ５ｃを用いて濾過し培養Ｐ液を得た。

実施例２ 実施例１において得られた各種菌株の培養ｆ液及びその
水希釈液の抗ウィルス活性をＴＭＶについて検定した。

検定にはウィルスを接種することによって局部病斑を生
ずるタバコ品種（キサンチ・エヌシー）を用いた。検定
用のタバコ植物は直径１２ｃｍの鉢で育成し、１試料に
つき２鉢、３葉ずつ計６葉を用いた。展開した葉の表又
は裏側の主脈を境とする生葉に被験液を絵筆で塗布し、
片側の生葉には対照として水を塗布した。試料処理１日
後、葉の表側全面にカーボランダムを振掛け、純化ＴＭ
Ｖ　（０，０５μｇ／ｍｌ　）を塗抹接種した。ウィル
ス接種３−４日後、接種葉に現われた斑点の数を数え、
次式によって防除率を算出し、表１の結果を得な。

防除率（％）＝（１−（処理生葉の病斑数／対照生葉の
病斑数））Ｘ１００ 実施例３ 実施例２において最も強い効果を示したフオメス・フォ
メンタリウスＪＴＳ　　３０４６菌株の培養涙液及びそ
の水希釈液の抗ウィルス活性を、ＴＭＶについて、さら
に詳細に検討した。方法は実施例２に従った。

表２に見られるように、葉裏処理した場合には全ての試
料が１００％近い防除率を示した。

一方、表３に見られるように、葉裏処理でも効果が防除
率に現れるのみならず、主脈を境にして処理しなかった
生葉側にもその効果が及ぶことが認められた。即ち、葉
に全く試料を塗布せずにウィルスを接種した場合に比べ
て、試料を塗布した対照生葉の病斑の絶対数が減少する
効果が認められた。この結果は、本発明における活性物
質がシステミックに効くことを示している。

実施例４ 実施例１において得られたフオメス・フォメンタリウス
ＪＴＳ　　３０４６菌株の培養Ｐ液を透析膜（スペクト
ロボア３）に入れ、水を外液として十分透析した後、透
析膜内液をアサヒバツクＧ５−５１０にＧ５−３２０を
直列につないだカラムを装備した日本分析工業製ＬＣ−
０９型分取液体クロマトグラフにかけ、５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７，０）で溶出して、分子量１０万以上の
中性高分子多糖類（約２００ｍｇ／Ｐ液１０００ｍｌ）
と分子量１０万以下の酸性高分子多糖類（約１００ｍｇ
／Ｐ液１００１００Ｏを得た。

実施例２と同じ方法で培養Ｔ液、中性高分子多糖類及び
酸性高分子多糖類の検定を行った。

一方、播種後５５日、草丈的４５ｃｍのタバコ（キサン
チ・エヌシー）の下葉５枚に培養γ液及び培養Ｐ液から
得られる高分子多糖画分を散布し、散布１日後、その直
上値の３枚の葉に０．０５μｇ　／　ｍ　ＩのＴＭＶを
塗抹接種した。無処理対照区には蒸溜水散布を行った。

ＴＭＶ接種３〜４日後に、接種葉に現れた病斑を数え、
実施例２に準じて防除率を算出した。

表−４及び５で明らかなように、防除の効果が無処理生
葉に及ぶのみならず、タバコの一部の葉を培養Ｐ液及び
酸性高分子多糖類で処理すると、同一個体の無処理の上
位葉においても病斑数が減少することから、培養Ｐ液と
その中の酸性高分子多糖類の効果はシステミックである
と結論できる。また、検定の結果から培養Ｐ液中のシス
テミックな効果物質゛は酸性高分子多糖類であると考え
られる。

実施例５ 実施例１において得られたフオメス・フォメンタリウス
ＪＴＳ　　３０４６菌株の培養ｒ液を供試液とし、各種
植物を用いて、ＴＭＶに対する抗ウィルス活性を試験し
た。ウィルスは被検植物に対応する系統を用いた。培養
Ｔ液は水で適当な濃度に希釈して散布し、散布１日後に
ウィルスを塗抹接種し、接種１４日後に発病を調査した
。その結果を表−６に示す。

これまでの実施例において認められた効果は、キサンチ
・エヌシーとＴＭＶの組合わせだけでなく、その他の植
物とＴＭＶとの組合わせにおいても認められた。

［発明の効果コ 実施例によって示されたように、ツリガネタケ属から選
ばれた菌が生産する高分子多糖類は、高い植物ウィルス
防除効果を示し、その効果はシステミックであることが
明らかとなった。また、該高分子多糖類は菌を培養する
ことに上り醗酵工業的に容易に生産できることが示され
た。本発明により従来にない、新しい抗植物ウィルス剤
の供給が可能となった。

手続補正書（自発） 平成１年１月１０日 特許庁長官　吉　１）文　毅　　殿 １、事件の表示 昭和６３年特許願第３．１２１号 ２、発明の名称 微生物による植物ウィルス防除剤の製造法３、補正をす
る者 事件との関係　特許出願人 東京都港区虎ノ門二丁目２番１号 （４５６）　　日本たばこ産業株式会社明細書の特許請
求の範囲及び発明の詳細な説明特願昭６３−３１２１号
１手続補正書 （１）明細書の特許請求の範囲を、別紙の通り補正しま
す。

（２）明細書第９頁第１行目の、「２４〜２８°Ｃ」を
、「２８℃」と補正します。

（３）同書第９頁第４行目の、「２５〜２８°Ｃ」を、
「２８℃」と補正します。

（４）同書第９頁第１１行目の、’ＩｇＪを、’２．５
ｇ」と補正します。

（５）同書第１４頁第１５行目の、「アザヒバツク」を
、ｒＡｓａｈ　ｉ　ｐａｋ」と補正します。

−以上− 特許請求の範囲 １、ツリガネタケ属（Ｆｏｍｅｓ）から選ばれる菌を培
養し、菌体又は培地中に植物ウィルス防除活性を有する
物質を生成せしめ、これを採取することを特徴とする植
物ウィルス防除剤の製造法。

２、ツリガネタケ属から選ばれる菌がフオメス・フォメ
ンタリウス（Ｆｏｍｅｓ　　ｆｏｍ、ｅｎｔａｒｉｕｓ
）である第１項記載の植物ウィルス防除剤の製造法。

３、ツリガネタケ属から還ばれる菌がフォメス・ゲオト
ロプス（Ｆ　ｏ　ｒｎ　ｅ　ｓ　　　ｅ　ｏ　ｔ　ｒ　
。

ＬＬＬ＞である第１項記載の植物ウィルス防除剤の製造
法。

４、ツリガネタケ属から選ばれる菌がフォメス・メラノ
ボルス（Ｆｏｒｎｅｓ　　ｍｅｌａｎ。

Ｌ工り工Ｌ）である第１項記載の植物ウィルス防除剤の
製造法。

受託番号変更届 平成１年１月１０日 特許庁長官　吉　１）文　毅　　殴 １、事件の表示 昭和６３年特許願第３．１２１号 ２、発明の名称 微生物による植物ウィルス防除剤の製造法３、手続をし
た者 事件との関係　特許出願人 東京都港区虎ノ門二丁目２番１号 （４５６）　　日本たばこ産業株式会社工業技術院微生
物工業技術研究所 ５、旧受託番号　　ＦＥＲＭ　　Ｐ−９７０４８６、新
寄託機関の名称 工業技術院微生物工業技術研究所 ７、新受託番号　　ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２２３０８、添
付書類の目録

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ツリガネタケ（￥Ｆｏｍｅｓ￥）属から選ばれる菌
   を培養し、菌体又は培地中に植物ウイルス防除活性を有
   する物質を生成せしめ、これを採取することを特徴とす
   る植物ウイルス防除剤の製造法。 ２、ツリガネタケ属から選ばれる菌がフォメス・フォメ
   ンタリウス（￥Ｆｏｍｅｓ￥￥ｆｏｍｅ￥￥ｎｔａｒｉ
   ｕｓ￥）である第１請求項記載の植物ウイルス防除剤の
   製造法。 ３、ツリガネタケ属から選ばれる菌がフォメス・ゲオト
   ロプス（￥Ｆｏｍｅｓ￥￥ｇｅｏｔｒｏ￥￥ｐｕｓ￥）
   である第１請求項記載の植物ウイルス防除剤の製造法。 ４、ツリガネタケ属から選ばれる苗がフォメス・メラノ
   ポルス（￥Ｆｏｍｅｓ￥￥ｍｅｌａｏ￥￥ｐｏｒｕｓ￥
   ）である第１請求項記載の植物ウイルス防除剤の製造法
   。