JPH01165599A - ヒルジンの単離および精製法 - Google Patents
ヒルジンの単離および精製法Info
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- JPH01165599A JPH01165599A JP63284093A JP28409388A JPH01165599A JP H01165599 A JPH01165599 A JP H01165599A JP 63284093 A JP63284093 A JP 63284093A JP 28409388 A JP28409388 A JP 28409388A JP H01165599 A JPH01165599 A JP H01165599A
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
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- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/815—Protease inhibitors from leeches, e.g. hirudin, eglin
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は複合体培養炉液および塩含有溶液からのヒルジ
ンの単離および精製の方法に関する。
ンの単離および精製の方法に関する。
ヒルである薬用ヒルから最初に単離されたポリペプチド
ヒルジンは、広い治療可能性を有する非常に特異的なト
ロンビン阻害剤である（Ｆ。
ヒルジンは、広い治療可能性を有する非常に特異的なト
ロンビン阻害剤である（Ｆ。
Ｍａｒｋｗａｒｄｔ氏著ｒＢｉｏｍｅｄ、旧ｏｃｈｉｍ
、 ＡｃｔａＪ ４４（１９８５） １００７〜１０
１３参照）。しかしながら、必要量は形質転換された微
生物による遺伝子操作によってのみ製造されうる。この
遺伝子操作から、正しく折りたたまれかつ十分に活性な
ヒルジンを製造するための宿主微生物としては酵母菌の
サツカロミセスセレビシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が適当であるということが分
かった（ヨーロッパ特許Ａｔ第１６８３４２号および同
特許Ａｌ第２００６５５号の各明細書参照）。この蛋白
質の分泌によって培養炉液ｌＱ当たりヒルジンが数百ミ
リグラムまでの濃度で得られる。しかしながら、該蛋白
質の高収量はその酵母発酵に用いる栄養培地が酵母エキ
ス、コーンステイープ、ペプトンまたはミートペースト
の加えられた複合体である場合のみに得られるので、該
蛋白質の精製において生ずる問題点は同時に生ずる蛋白
質様物質の混合物中における高希釈物からヒルジンを単
離することにある。ヒル抽出物からのヒルジンの単離に
ついて記載されているように（Ｐ、 Ｗａｌｓｍａｎ
ｎ氏等著ｒＴｈｒｏｍｂ、 Ｒｅｓ、Ｊ４０ （１９
８５） ５６３〜５７０参照）、イオン交換クロマトグ
ラフィーは使用する栄養溶液の塩含有量が高いために第
１段階として不適当である。蛋白質溶液から塩を除去し
そして該溶液を濃縮するのに普通用いられている限外が
過の方法もまた相当に不利である。すなわち高価な装置
を取り付ける必要があり、長期にわたる操作のために大
量生産は限定されそして同時に生ずる付随物の蓄積のた
めに栄養培地の各成分は沈殿し易くなって技術上の困難
をもたらす。
、 ＡｃｔａＪ ４４（１９８５） １００７〜１０
１３参照）。しかしながら、必要量は形質転換された微
生物による遺伝子操作によってのみ製造されうる。この
遺伝子操作から、正しく折りたたまれかつ十分に活性な
ヒルジンを製造するための宿主微生物としては酵母菌の
サツカロミセスセレビシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が適当であるということが分
かった（ヨーロッパ特許Ａｔ第１６８３４２号および同
特許Ａｌ第２００６５５号の各明細書参照）。この蛋白
質の分泌によって培養炉液ｌＱ当たりヒルジンが数百ミ
リグラムまでの濃度で得られる。しかしながら、該蛋白
質の高収量はその酵母発酵に用いる栄養培地が酵母エキ
ス、コーンステイープ、ペプトンまたはミートペースト
の加えられた複合体である場合のみに得られるので、該
蛋白質の精製において生ずる問題点は同時に生ずる蛋白
質様物質の混合物中における高希釈物からヒルジンを単
離することにある。ヒル抽出物からのヒルジンの単離に
ついて記載されているように（Ｐ、 Ｗａｌｓｍａｎ
ｎ氏等著ｒＴｈｒｏｍｂ、 Ｒｅｓ、Ｊ４０ （１９
８５） ５６３〜５７０参照）、イオン交換クロマトグ
ラフィーは使用する栄養溶液の塩含有量が高いために第
１段階として不適当である。蛋白質溶液から塩を除去し
そして該溶液を濃縮するのに普通用いられている限外が
過の方法もまた相当に不利である。すなわち高価な装置
を取り付ける必要があり、長期にわたる操作のために大
量生産は限定されそして同時に生ずる付随物の蓄積のた
めに栄養培地の各成分は沈殿し易くなって技術上の困難
をもたらす。
ヨーロッパ特許Ａ２第０４９８４７号明細書には、吸着
樹脂を用いることによってストレプトミセステンデ（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｔｅｎｄａｅ）の培養か液か
らα−アミラーゼ阻害剤を精製する方法が開示されてい
る。ヨーロッパ特許Ａ２第１９７７６４号明細書には、
１０〜３０％のアセトンまたはアセトニトリルを含有す
る水性溶離剤を用いて、アンバーライト（■Ａｍｂｅｒ
ｌｉｔｅ） ＸＡＤ樹脂によりプロインシュリンを精製
する方法が記載されている。
樹脂を用いることによってストレプトミセステンデ（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｔｅｎｄａｅ）の培養か液か
らα−アミラーゼ阻害剤を精製する方法が開示されてい
る。ヨーロッパ特許Ａ２第１９７７６４号明細書には、
１０〜３０％のアセトンまたはアセトニトリルを含有す
る水性溶離剤を用いて、アンバーライト（■Ａｍｂｅｒ
ｌｉｔｅ） ＸＡＤ樹脂によりプロインシュリンを精製
する方法が記載されている。
本発明は複合体の酵母培養炉液から直接的手法および良
好な収率でヒルジンを単離することができる方法の開発
を目的とする。
好な収率でヒルジンを単離することができる方法の開発
を目的とする。
この目的は疎水クロマトグラフィーによって複合体およ
び塩含宵溶液からヒルジンを単離しそして精製する方法
による本発明に従って達成される。該方法は溶離剤とし
て水と混和しうる１種以上の有機溶媒のｌＯ〜４０％濃
度溶液を用いて、細孔直径が５０〜５０００ Ａであり
そして比表面積が少なくとも５０ｍ’／ｇである多孔質
の吸着樹脂上で疎水クロマトグラフィーを行うことから
なる。
び塩含宵溶液からヒルジンを単離しそして精製する方法
による本発明に従って達成される。該方法は溶離剤とし
て水と混和しうる１種以上の有機溶媒のｌＯ〜４０％濃
度溶液を用いて、細孔直径が５０〜５０００ Ａであり
そして比表面積が少なくとも５０ｍ’／ｇである多孔質
の吸着樹脂上で疎水クロマトグラフィーを行うことから
なる。
使用するのに好ましい多孔質の吸着樹脂はスチレンとジ
ビニルベンゼンとの共重合体例えばシアイオン（＠ Ｄ
ｉａｉｏｎ） ＨＰｌｏ、２０．３０．４０もしくは５
０、またはアクリレートエステルとジビニルベンゼンと
の共重合体例えばアンバーライト（■Ａｍｂｅｒｌｉｔ
ｅ） ＸＡＤ −７および８ （Ｒｏｈｍ ａｎｄＨａ
ａｓ社製）、特に■シアイオンＨＰ２０および■アンバ
ーライトＸＡＤ−７である。水と混和しうる適当な有機
溶媒の例としてはメタノール、エタノール、ｎ−プロパ
ノール、イソプロパノールおよびアセトンがある。水と
混和しうる有機溶媒１種の溶液を用いるのが好ましい。
ビニルベンゼンとの共重合体例えばシアイオン（＠ Ｄ
ｉａｉｏｎ） ＨＰｌｏ、２０．３０．４０もしくは５
０、またはアクリレートエステルとジビニルベンゼンと
の共重合体例えばアンバーライト（■Ａｍｂｅｒｌｉｔ
ｅ） ＸＡＤ −７および８ （Ｒｏｈｍ ａｎｄＨａ
ａｓ社製）、特に■シアイオンＨＰ２０および■アンバ
ーライトＸＡＤ−７である。水と混和しうる適当な有機
溶媒の例としてはメタノール、エタノール、ｎ−プロパ
ノール、イソプロパノールおよびアセトンがある。水と
混和しうる有機溶媒１種の溶液を用いるのが好ましい。
本発明方法はバッチクロマトグラフィーとカラムクロマ
トグラフィーの両形態で実施されうる。前記樹脂は緩衝
水溶液または有機酸例えば０〜０．２Ｍ酢酸の溶液であ
らかじめ平衡化させておく。使用するヒルジン含有溶液
特にサツカロミセスセレビシェの培養炉液をｐＨ２〜８
好ましくは３〜５に調整しそして樹脂と接触させる。ヒ
ルジンが完全に結合した後に樹脂を緩衝水溶液（ｐＨ２
〜９）例えばトリスまたはエチレンジアミンおよび／ま
たは有機酸例えば０〜０．２Ｍ酢酸の溶液で洗浄する。
トグラフィーの両形態で実施されうる。前記樹脂は緩衝
水溶液または有機酸例えば０〜０．２Ｍ酢酸の溶液であ
らかじめ平衡化させておく。使用するヒルジン含有溶液
特にサツカロミセスセレビシェの培養炉液をｐＨ２〜８
好ましくは３〜５に調整しそして樹脂と接触させる。ヒ
ルジンが完全に結合した後に樹脂を緩衝水溶液（ｐＨ２
〜９）例えばトリスまたはエチレンジアミンおよび／ま
たは有機酸例えば０〜０．２Ｍ酢酸の溶液で洗浄する。
次いで水と混和しうるを機溶媒のｌＯ〜４０％強度溶液
で溶離させる。溶離剤の水性部分は緩衝水溶液、有機酸
例えば酢酸の溶液または水からなることができる。しか
しながら、塩を含まない溶離物を得るには２０〜３０％
のイソプロパノールを含有する０〜０．１Ｍ酢酸の溶液
を用いるのが好ましい。
で溶離させる。溶離剤の水性部分は緩衝水溶液、有機酸
例えば酢酸の溶液または水からなることができる。しか
しながら、塩を含まない溶離物を得るには２０〜３０％
のイソプロパノールを含有する０〜０．１Ｍ酢酸の溶液
を用いるのが好ましい。
該方法は塩含有溶液例えばイオン交換体からの溶離物か
ら塩を含有しないヒルジンを得るのに類似方法として適
当である。
ら塩を含有しないヒルジンを得るのに類似方法として適
当である。
本発明は組換えヒルジン類特にその形質発現がサツカロ
ミセスセレビシェにおいてもたらされたヒルジン類を精
製するのに使用される。ヒルジン類は、少なくとも１０
、０ＯＯＡＴ −Ｕ／ ｍｇの比活性を有し、薬用ヒ
ル種から既知のインヒルジン類より誘導されそしてその
本質的構造特徴特に３個のジスルフィド橋の特徴的結合
を有するペプチド様トロンビン阻害剤であると理解され
るべきである（Ｊ、 Ｄｏｄｔ氏等著「旧ｏ１． Ｃｈ
ｅｍ、ＪＨｏｐｐｅ−５ｅｙｌｅｒ ３６６ （１９８
５） ３７９−３８５、例えばヨーロッパ特許ＡＩ第１
５８５６４号、同特゛許Ａｌ第１６８３４２号、ドイツ
特許Ａ１第３４４５５１７号、ヨーロッパ特許Ａ２第１
９３１７５号、同特許Ａｌ第２００６５５号、同特許Ａ
ｌ第１５８９８６号、同特許Ａｌ第２０９０６１号、ド
イツ特許第３３４２１３９号およびヨーロッパ特許ＡＩ
第１７１０２４号の各明細書参照）。
ミセスセレビシェにおいてもたらされたヒルジン類を精
製するのに使用される。ヒルジン類は、少なくとも１０
、０ＯＯＡＴ −Ｕ／ ｍｇの比活性を有し、薬用ヒ
ル種から既知のインヒルジン類より誘導されそしてその
本質的構造特徴特に３個のジスルフィド橋の特徴的結合
を有するペプチド様トロンビン阻害剤であると理解され
るべきである（Ｊ、 Ｄｏｄｔ氏等著「旧ｏ１． Ｃｈ
ｅｍ、ＪＨｏｐｐｅ−５ｅｙｌｅｒ ３６６ （１９８
５） ３７９−３８５、例えばヨーロッパ特許ＡＩ第１
５８５６４号、同特゛許Ａｌ第１６８３４２号、ドイツ
特許Ａ１第３４４５５１７号、ヨーロッパ特許Ａ２第１
９３１７５号、同特許Ａｌ第２００６５５号、同特許Ａ
ｌ第１５８９８６号、同特許Ａｌ第２０９０６１号、ド
イツ特許第３３４２１３９号およびヨーロッパ特許ＡＩ
第１７１０２４号の各明細書参照）。
それらは特にヨーロッパ特許Ａ ｌ 第１７１０２４号
、同特許Ａｌ第１５８９８６号および同特許Ａｌ第２０
９０６１号の各明細書に記載のヒルジン類を包含するこ
とを理解すべきである。
、同特許Ａｌ第１５８９８６号および同特許Ａｌ第２０
９０６１号の各明細書に記載のヒルジン類を包含するこ
とを理解すべきである。
本発明方法は３次構造および活性を損わずに、複合体お
よび塩含有溶液例えば複合体の酵母培養炉液からヒルジ
ンを定量的に吸着樹脂上に結合させることができる点に
特徴を有する。
よび塩含有溶液例えば複合体の酵母培養炉液からヒルジ
ンを定量的に吸着樹脂上に結合させることができる点に
特徴を有する。
塩および濁りを生ずる物質を含まずしかもさらに例えば
イオン交換クロマトグラフィーによって直接処理するこ
とができる溶液中に富化されたヒルジンを得ることは、
水と混和しうる有機溶媒を加えた水溶液での溶離によっ
て可能である。
イオン交換クロマトグラフィーによって直接処理するこ
とができる溶液中に富化されたヒルジンを得ることは、
水と混和しうる有機溶媒を加えた水溶液での溶離によっ
て可能である。
以下に本発明の詳細な説明するために実施例を記載する
が、それらは本発明を限定するものではない。
が、それらは本発明を限定するものではない。
実施例 ｌ
マット（Ｍａｔ）α交配型に相当し、そしてＢｒａｋｅ
氏等著ｒ ＰＮＡＳＪ第８１巻（１９８４年）第４６３
２〜４６４６頁に記載の方法と類似の方法で酵母のヒル
ジン発現プラスミドを用いて形質転換された種サツカロ
ミセスセレビシェの酵母菌株の発酵から培地を採取する
。
氏等著ｒ ＰＮＡＳＪ第８１巻（１９８４年）第４６３
２〜４６４６頁に記載の方法と類似の方法で酵母のヒル
ジン発現プラスミドを用いて形質転換された種サツカロ
ミセスセレビシェの酵母菌株の発酵から培地を採取する
。
酵母エキス２０ｇ／１２およびヒルジン１２ｍｇ／Ｉ２
ヲ含有するサツカロミセスセレビシェの培養炉液９５０
ａを、２０ｍＭ酢酸で平衡化させた１００Ｑのシアイオ
ン（■Ｄｉａｉｏｎ） ＨＰ２０のカラムに入れた。続
いて１０００１２の５０ｍＭ ）リス／ ＨＣＱ （ｐ
Ｈ８，５）、次に３００ａの２０ｍＭ酢酸で洗浄した。
ヲ含有するサツカロミセスセレビシェの培養炉液９５０
ａを、２０ｍＭ酢酸で平衡化させた１００Ｑのシアイオ
ン（■Ｄｉａｉｏｎ） ＨＰ２０のカラムに入れた。続
いて１０００１２の５０ｍＭ ）リス／ ＨＣＱ （ｐ
Ｈ８，５）、次に３００ａの２０ｍＭ酢酸で洗浄した。
次いで２０％イソプロパノールを含有する２０ｍＭ酢酸
３００１２続いて３０％イソプロパノールを含有する２
０ｍＭ酢酸５００Ｑで溶離させた。溶離物の各フラクシ
ョンをそれらのヒルジン含量について分析した。３個の
フラクション（１５０１２）は−緒にしたところ、８４
％の収率に相当する９、５ｇのヒルジンを含有していた
。次ニ酢酸溶液を１ＭピペラジンでｐＨ６，０に調整シ
、２０ｍＭピペラジン（ｐＨ６，０）で平衡化したマド
レックス（Ｍａｔｒｅｘ）のセルフイン（■Ｃｅｌｌｕ
ｆｉｎａ）Ａ１４１０７２ｇとともに撹拌した。これよ
りイオン交換体上で定量的に結合したヒルジンが得られ
た。
３００１２続いて３０％イソプロパノールを含有する２
０ｍＭ酢酸５００Ｑで溶離させた。溶離物の各フラクシ
ョンをそれらのヒルジン含量について分析した。３個の
フラクション（１５０１２）は−緒にしたところ、８４
％の収率に相当する９、５ｇのヒルジンを含有していた
。次ニ酢酸溶液を１ＭピペラジンでｐＨ６，０に調整シ
、２０ｍＭピペラジン（ｐＨ６，０）で平衡化したマド
レックス（Ｍａｔｒｅｘ）のセルフイン（■Ｃｅｌｌｕ
ｆｉｎａ）Ａ１４１０７２ｇとともに撹拌した。これよ
りイオン交換体上で定量的に結合したヒルジンが得られ
た。
この物質を２０ｍＭピペラジン（ｐ Ｈ６＋ Ｏ） テ
洗浄り次いでカラム中に詰めた。同一緩衝液中における
０〜０．３ｍＭ ＮａＣｆｆの塩で匂配溶離させて、溶
液６Ｑ中に非常に富化されかつ濃縮された状態でヒルジ
ン６．７ｇを得た。
洗浄り次いでカラム中に詰めた。同一緩衝液中における
０〜０．３ｍＭ ＮａＣｆｆの塩で匂配溶離させて、溶
液６Ｑ中に非常に富化されかつ濃縮された状態でヒルジ
ン６．７ｇを得た。
実施例 ２
２．０ｇノヒルジン、２０ｍＭ（’）ｌ：”ベラシフ
（ｐＨ６，０）および２００ｍＭのＮａＣＱを含有する
イオン交換体がらの溶離物１．２２を酸性化して０．Ｉ
ＩＶ［酢酸にし次いで０．１Ｍ酢酸中における１０ｈ＋
ｆｆのダイアイオン（■Ｄｉａｉｏｎ） ＨＰ２０のカ
ラム上に毎時４００ｍＱの流速で入れた。この試料を入
れた後に、塩の除去された樹脂を１０ｍＭ酢酸で洗浄し
た。次いで１０ｍＭ酢酸中における３０％イソプロパノ
ールを用いて毎時２００ｍａの流速で溶離させた。ヒル
ジンを全容量２００ｍ（２中に集めた。この溶液を凍結
乾燥して塩を含まないヒルジン１．７ｇヲｌだ。
（ｐＨ６，０）および２００ｍＭのＮａＣＱを含有する
イオン交換体がらの溶離物１．２２を酸性化して０．Ｉ
ＩＶ［酢酸にし次いで０．１Ｍ酢酸中における１０ｈ＋
ｆｆのダイアイオン（■Ｄｉａｉｏｎ） ＨＰ２０のカ
ラム上に毎時４００ｍＱの流速で入れた。この試料を入
れた後に、塩の除去された樹脂を１０ｍＭ酢酸で洗浄し
た。次いで１０ｍＭ酢酸中における３０％イソプロパノ
ールを用いて毎時２００ｍａの流速で溶離させた。ヒル
ジンを全容量２００ｍ（２中に集めた。この溶液を凍結
乾燥して塩を含まないヒルジン１．７ｇヲｌだ。
実施例 ３
ヒルジン２７．２ｇを含有するサツカロミセスセレビシ
ェの培養が液７５４ａを酢酸４．９ρでｐＨ４に調整し
、そして７５Ｑの３０％強度イソプロパノール中に懸濁
した７５ｋｇのダイアイオン（■Ｄｉａｉｏｎ）ＨＰ２
０の懸濁液とともに撹拌した。３０分後培養が液を圧力
漏斗によるが過で取り出し、捨てた。
ェの培養が液７５４ａを酢酸４．９ρでｐＨ４に調整し
、そして７５Ｑの３０％強度イソプロパノール中に懸濁
した７５ｋｇのダイアイオン（■Ｄｉａｉｏｎ）ＨＰ２
０の懸濁液とともに撹拌した。３０分後培養が液を圧力
漏斗によるが過で取り出し、捨てた。
漏斗中に残留する吸着樹脂を７００Ｑの２０ｍＭトリス
／ＨＣα（ｐＨ８，５）および２５０Ｑの０．１Ｍ酢酸
で洗浄した。次に毎回２０ｍＭ酢酸中における３０％イ
ソプロパノール５０Ｑを用いる１０回の連続洗浄により
ヒルジンを溶離させた。溶離物をそれらのヒルジン含量
について分析した。４個のフラクション（１９５１２）
は−緒にしたところ、８３％の収率に相当する２２．６
ｇのヒルジンを含有していた。
／ＨＣα（ｐＨ８，５）および２５０Ｑの０．１Ｍ酢酸
で洗浄した。次に毎回２０ｍＭ酢酸中における３０％イ
ソプロパノール５０Ｑを用いる１０回の連続洗浄により
ヒルジンを溶離させた。溶離物をそれらのヒルジン含量
について分析した。４個のフラクション（１９５１２）
は−緒にしたところ、８３％の収率に相当する２２．６
ｇのヒルジンを含有していた。
特許出願人 ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト外
２名
２名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）溶離剤として水と混和しうる１種以上の有機溶媒の
１０〜４０％濃度溶液を用いて、細孔直径が５０〜５０
００Åでありそして比表面積が少なくとも５０ｍ＾２／
ｇである多孔質の吸着樹脂上で疎水クロマトグラフィー
を行うことからな る、該クロマトグラフィーによる複合体および塩含有溶
液からのヒルジンの単離および精製法。 ２）多孔質の吸着樹脂としてスチレンとジビニルベンゼ
ンとの共重合体またはアクリレートエステルとジビニル
ベンゼンとの共重合体を用いる請求項１記載の方法。 ３）水と混和しうる有機溶媒としてメタノール、エタノ
ール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールおよびアセ
トンを用いる請求項１または２に記載の方法。 ４）ヨーロッパ特許Ａ１第１５８９８６号、同特許Ａ１
第１７１０２４号および同特許Ａ１第２０９０６１号の
各明細書中に記載の定義に従うヒルジン類が得られる請
求項第１〜３のいずれかに記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3738541.0 | 1987-11-13 | ||
| DE19873738541 DE3738541A1 (de) | 1987-11-13 | 1987-11-13 | Verfahren zur isolierung und reinigung von hirudin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01165599A true JPH01165599A (ja) | 1989-06-29 |
| JP2756279B2 JP2756279B2 (ja) | 1998-05-25 |
Family
ID=6340409
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63284093A Expired - Lifetime JP2756279B2 (ja) | 1987-11-13 | 1988-11-11 | ヒルジンの単離および精製法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5095092A (ja) |
| EP (1) | EP0316650B1 (ja) |
| JP (1) | JP2756279B2 (ja) |
| AT (1) | ATE100109T1 (ja) |
| DE (2) | DE3738541A1 (ja) |
| DK (1) | DK173366B1 (ja) |
| ES (1) | ES2049238T3 (ja) |
| IE (1) | IE62538B1 (ja) |
| PT (1) | PT88975B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008505065A (ja) * | 2004-06-29 | 2008-02-21 | リライアンス ライフ サイエンシーズ ピーヴィーティー エルティーディー | ウイルス安全性生物学的流体の調製のための方法 |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5268296A (en) * | 1988-06-11 | 1993-12-07 | Ciba-Geigy Corporation | DNA vector and recombinant host cell for production of hirullin P6 and P18 |
| DE3835815A1 (de) * | 1988-10-21 | 1990-04-26 | Hoechst Ag | Neue isohirudine |
| DE4140381A1 (de) * | 1991-12-07 | 1993-06-09 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt, De | Neue synthetische isohirudine mit verbesserter stabilitaet |
| DE4404168A1 (de) * | 1994-02-10 | 1995-08-17 | Hoechst Ag | Hirudinderivate und Verfahren zu deren Herstellung |
| KR0141651B1 (ko) * | 1994-09-07 | 1998-06-15 | 강재헌 | 금속이온 친화성 크로마토그라피를 이용한 히루딘의 정제방법 |
| US7638618B2 (en) | 2001-02-20 | 2009-12-29 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Nucleic acids encoding a hirudin and pro-insulin as superscretable peptides and for parallel improvement of the exported forms of one or more polypeptides of interest |
| DE10108211A1 (de) * | 2001-02-20 | 2002-08-22 | Aventis Pharma Gmbh | Verwendung von Fusionsproteinen, deren N-terminaler Anteil aus einem Hirudinderivat besteht, zur Herstellung rekombinanter Proteine über Sekretion durch Hefen |
| EP1463942B2 (en) * | 2001-12-21 | 2012-06-20 | Immunex Corporation | Methods for purifying protein |
| US7795205B2 (en) | 2004-04-12 | 2010-09-14 | Canyon Pharmaceuticals, Inc. | Methods for effecting regression of tumor mass and size in a metastasized pancreatic tumor |
| WO2016096071A1 (en) * | 2014-12-15 | 2016-06-23 | Merck Patent Gmbh | Target molecule capture from crude solutions |
| CN107353338B (zh) * | 2017-07-27 | 2020-11-17 | 宁波博睿修存生物科技有限公司 | 一种分离水蛭素发酵液中色素分子的方法 |
| CN113984936A (zh) * | 2021-12-09 | 2022-01-28 | 车延柠 | 一种水蛭酶解多肽的lc-ms特征图谱、检测方法及其应用 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES8207217A1 (es) * | 1980-10-09 | 1982-09-01 | Hoechst Ag | Procedimiento para la preparacion de un inactivador de alfa-amilasa |
| DE3342139A1 (de) * | 1983-11-22 | 1985-05-30 | Ciba-Geigy Ag, Basel | Desulfatohirudine, verfahren zu ihrer herstellung und pharmazeutische mittel |
| DE3438296A1 (de) * | 1984-04-18 | 1985-11-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue polypeptide mit blutgerinnungshemmender wirkung, verfahren zu deren herstellung bzw. gewinnung, deren verwendung und diese enthaltende mittel |
| DE3429430A1 (de) * | 1984-08-10 | 1986-02-20 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von hirudin und mittel zur durchfuehrung dieses verfahrens |
| US4616078A (en) * | 1985-04-08 | 1986-10-07 | Eli Lilly And Company | Process for purifying proinsulin-like materials |
| FR2593518B1 (fr) * | 1985-05-02 | 1989-09-08 | Transgene Sa | Vecteurs d'expression et de secretion de l'hirudine par les levures transformees |
| US4617376A (en) * | 1985-07-01 | 1986-10-14 | Eli Lilly And Company | Process for recovering glucagon from pancreas glands |
| DE3689525D1 (de) * | 1985-07-17 | 1994-02-24 | Hoechst Ag | Neue Polypeptide mit blutgerinnungshemmender Wirkung, Verfahren zu deren Herstellung bzw. Gewinnung, deren Verwendung und diese enthaltende Mittel. |
| DE3526995A1 (de) * | 1985-07-27 | 1987-02-05 | Hoechst Ag | Fusionsproteine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
-
1987
- 1987-11-13 DE DE19873738541 patent/DE3738541A1/de not_active Withdrawn
-
1988
- 1988-11-02 DE DE88118182T patent/DE3887095D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-11-02 AT AT88118182T patent/ATE100109T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-11-02 ES ES88118182T patent/ES2049238T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-11-02 EP EP88118182A patent/EP0316650B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-11-10 PT PT88975A patent/PT88975B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-11-11 JP JP63284093A patent/JP2756279B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-11-11 DK DK198806306A patent/DK173366B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-11-11 IE IE339388A patent/IE62538B1/en not_active IP Right Cessation
-
1990
- 1990-09-27 US US07/590,581 patent/US5095092A/en not_active Expired - Lifetime
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008505065A (ja) * | 2004-06-29 | 2008-02-21 | リライアンス ライフ サイエンシーズ ピーヴィーティー エルティーディー | ウイルス安全性生物学的流体の調製のための方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| PT88975A (pt) | 1989-11-30 |
| IE62538B1 (en) | 1995-02-08 |
| ES2049238T3 (es) | 1994-04-16 |
| DK630688D0 (da) | 1988-11-11 |
| DE3738541A1 (de) | 1989-05-24 |
| IE883393L (en) | 1989-05-13 |
| US5095092A (en) | 1992-03-10 |
| ATE100109T1 (de) | 1994-01-15 |
| EP0316650B1 (de) | 1994-01-12 |
| EP0316650A3 (en) | 1990-07-25 |
| DE3887095D1 (de) | 1994-02-24 |
| EP0316650A2 (de) | 1989-05-24 |
| PT88975B (pt) | 1994-11-30 |
| DK173366B1 (da) | 2000-08-14 |
| DK630688A (da) | 1989-05-14 |
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