JPH01146819A - 有機化合物の改良または関連改良 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ この発明は、α−［１０−オキシ−４日−ベンゾ−［４
，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イ
リデン］−カルボン酸類、または生理学的に加水分解で
き生理学上許容し得るそのエステル類および製薬上許容
し得るその塩類からなる化合物群の新規用途、ことに新
規医薬用途に関するものであって、以下これらの化合物
群を総称して［この発明の化合物」と呼ぶ。

［従来の技術］ この発明の化合物は公知であり、その製造方法とともに
例えばヨーロッパ特許公開第０１３８７６５Ａ２号（出
願番号第８４Ｈ１０４７５号）に開示されている。

［発明の構成］ ヨーロッパ特許公開第０１３８７６５Ａ２号の開示によ
れば、この発明の化合物の４１（−ベンゾ［４，５］シ
クロヘプタ［１，２−ｂｌチオフェン核はその４位およ
び１０位に特定された置換基のほかに、さらに追加的に
置換基を持つことができる。ことにベンゼン環および／
またはチオフェン環がさらに置換基をもち得る。即ち、
４Ｈ−ベンゾ［４゜５〕シクロへ１夕［１，２−ｂ］チ
オフェン核は、４位および１０位の置換基以外に、例え
ばハロゲン（例えば塩素）またはヒドロキシでベンゼン
環が置換（例えばモノ置換）され得る。

ヨーロッパ特許公開第０１３８７６５Ａ２号に開示され
、その請求範囲に含まれるこの発明の化合物の特別な一
群は、下式（Ｉａ） ｒｌＬ ｏｃｓ４ ［式中、Ｒ１は水素、Ｃｌ−４アルキルまたはフェニル
−（Ｃ＋〜４アルキル）、 Ｒ２は水素またはＣＩ〜４アルキルであって、Ａ環は置
換されず、またはハロゲンまたはヒドロキシで置換され
る］ で示される化合物類、または生理学的に加水分解でき生
理学上許容し得るそのエステル類、または製薬上許容し
得るその塩類を含む。

ヨーロッパ特許公開第０１３８７６５Ａ２号の教示によ
れば、上記の式（Ｉａ）［ここで、Ｒ。

はＣ８〜４アルキル、Ｒ２は水素で、Ａ環は置換されす
５またはモノヒドロキシまたはモノハロゲン（例えばモ
ノクロロ）置換である（好ましくはＡ環は未置換）］で
示される化合物または生理学的に加水分解でき生理学上
許容し得るそのエステル類、または製薬上許容し得るそ
の塩類は好ましい一下位群をなす。

またこの発明の他の一下位群は、［２−ハロゲン−１０
−オキシ−４Ｈ−ベンゾ［，４，５］シクロヘプタ［１
，２−ｂ］チオフエン−４−イリデン］−酢酸、生理学
的に加水分解でき生理学上許容し得るそのエステル類、
および製薬上許容し得るその塩類１例えば下式Ｈｂ） Ｈ ０ＯＨ （式中、Ｒ１は水素またはＣＩ〜４アルキル、Ｒ４はハ
ロゲンである） で示される化合物類および生理学的に加水分解でき生理
学上許容し得るそのエステル類、および製薬上許容し得
るその塩類からなる。

これらもまた公知であり、その製造方法とともに公開さ
れたイギリス特許公開第２１８３６４ＨＡ号および世界
中に、例えば西ドイツ特許出願第３６４１９０７．９号
等を含む対応出断に開示されている。

上記のイギリス特許公開第２１８３６４ＨＡ号の教示に
よれば、上記の式（Ｉｂ）（ここでＲ。

はＣ１〜４アルキルである）の化合物、および生理学的
に加水分解でき生理学上許容し得るそのエステル、およ
び製薬上許容し得るその酸付加塩は好ましい一下位群を
なす。

先に定義した式（Ｉａ）および式（Ｉｂ）の化合物、そ
のエステルおよびその塩、および上に挙げたその下位群
も、この発明で提供する用途に好ましいこの発明の化合
物である。

式（Ｉａ）および式（Ｉｂ）の化合物において、Ｒ８、
Ｒ，およびＲ３で示したアルキル基およびＲ４で示した
フェニル−ＣＣ＋〜４Ｃ１〜４アルキル（Ｉａ）の場合
］のアルキル部分は分枝鎖または直鎖であり得る。Ｒ，
！ｔたはＲ１がＣ８−４アルキルの場合、これらは好ま
しくはメチルである。Ｒ４がハロゲンの場合１式（Ｉｂ
）］、これはフッ素、塩素１ｇＬ素またはヨウ素を表す
、好ましくはＲ４は塩素である。

「生理学的に加水分解でき生理学上許容し得るＪの用語
を例えば式（Ｉ　ａ）または式（Ｉｂ）の化合物に適用
する場合、それはカルボキシル基がエステル化され、生
理学的条件下に加水分解され、所望の投与量でそれ自体
生理学上許容され得る（例えば無毒な）アルコールを生
成し得るエステルを表す、そのようなエステルには、例
えば１〜４個の炭素原子を有する脂肪族アルコールとの
エステル等が含まれる。

例えば式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の化合物の製薬上許
容し得る塩としては、例えばナトリウム塩およびカリウ
ム塩のようなアルカリ金属塩およびカルシウム塩のよう
なアルカリ土類金属塩等が挙げられる。

１０−オキシ基が１０−ヒドロキシであるこの発明の化
合物［例えば式（１ａ）および式（Ｉｂ）の化合物（Ｒ
１またはＲ３は水素）］は、例えばヨーロッパ特許公開
第０１３８７６５Ａ２号およびイギリス特許公開第２１
８３６４ＨＡ号に記載の式（１ａ）および式（Ｉｂ）の
化合物の場合、何れもケトおよびエノールの両形態で存
在することは自明のことである。互変異性形態を生じた
場合この発明はケトおよびエノールの両形態の用途を包
含するものと理解すべきであり、即ち、便宜上エノール
形のみについて説明するが、この明細書で「この発明の
化合物」として規定する限り、特に命名法または図面上
の説明を行わない場合、これによってこの発明の範囲を
限定するものではない。

この発明の化合物［例えば式（１ａ）または式（Ｉｂ）
の化合物］はシスおよびトランスの両異性体形態、即ち
Ｚ−およびＳ−異性体で存在する。

この発明は、個々のシスおよびトランス異性体、および
それらの混合体の何れの用途をも包含するものである。

この発明の明細書およびその請求範囲では、シス（ｚ）
トランス（Ｅ）異性体は慣用のＣＩＰ命名法［アンゲバ
ンテ・ヒエミー（Ａｎｇｅｗｔ。

ＣＩ＋ｅｍ、　）、９４巻、６１４頁（１９８２年）お
よび前掲文献〕にしたがい、前記ヨーロッパ特許公開第
０１３８７６５Ａ２号およびイギリス特許公開第２１８
３６４ＨＡ号で一層詳細に説明したように命名した。

この発明の目的には、一般にこの発明の化合物の（Ｚ）
−異性体の使用が好ましい、したがって、この発明の用
途のためには、この発明の化合物は好ましくは専らＺ−
異性体型である。特に好ましくはそれらは純粋なまたは
実質上純粋なＺ−異性体型である。

この発明の用途に好適な個々の化合物は（Ａ）［１０−
メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］シクロヘプタ［１，
２−ｂ］チオフェン−４−イリデン］−酢酸エチルエス
テル：　［（Ｚ、Ｅ）−異性体混合！１Ｉｌｆｆ］。

（Ｂ）［７−クロロ−１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［
４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフエン−４−
イリデン〕酢酸エチルエステル：［（Ｂｌ）。

（Ｚ、Ｅ）−異性体混合物；（Ｂ２）、（Ｚ）−興性体
；（Ｂ３）、（Ｅ）−異性体Ｊ、 （Ｃ）［６−ヒドロキシ−１０−メトキシ−４Ｈ−ベン
ゾ［４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−
４−イリデン］−酢酸エチルエステル：〔（Ｃ１）、（
Ｚ、Ｅ）−異性体混合物：＜Ｃ２＞、（Ｚ）−異性体；
（Ｃ３）、（Ｅ）−異性体］。

（Ｄ）［１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］シク
ロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イリデン］−
酢ｆｉｌｌ：［（Ｄｌ）、（Ｚ、り一異性体混合物；（
Ｃ２）、（Ｚ）−異性体；（Ｃ３）、（Ｅ）−異性体］
、（Ｅ）［１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］シ
クロヘプタ［１，２−ｂ］チオフエン−４−イリデン］
−市酸メチルエステル：［（ＥＩ）、（Ｚ、Ｅ）−異性
体混合物：（Ｅ２）、（Ｚ）−異性体；（Ｅ３）、（Ｅ
）−異性体］。

（Ｆ）［７−クロロ−１Ｏ−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［
４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ　］チオフェン−４
−イリデン］−酢酸［（ＰＬ）、（Ｚ、Ｅ）−異性体混
合物、（Ｆ２）、（Ｚ）−異性体；　（Ｆ３）：　（Ｅ
）−異性体］、 （Ｇ）［６−ヒドロキシ−１０−メトキシ−４Ｈ−ベン
ゾ［４，５］シシフへブタ［１，２−ｂ］チオフエン−
４−イリデン］−酢酸：［（Ｇｌ）、（Ｚ、Ｅ）−異性
体混合物；（Ｇ２）、（Ｚ）−異性体；（Ｇ３）、（Ｅ
）−異性体］、 （）ｌ）［１０−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］
シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イリデン
］−酢酸：［（Ｚ）−異性体］、 （Ｊ）［２−クロロ−１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［
４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフエン−４−
イリデン］−酢酸エチルエステル：［（Ｊｌ）、（Ｚ　
Ｅ　）−異性体混合物；（Ｊ２）、（Ｚ）−異性体；（
Ｊ３）：（Ｅ）−異性体］。

（Ｋ）［２−クロロ−１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［
４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ　］チオフェン−４
−イリデン］−酢Ｍ［（Ｋｌ）、（Ｚ）−異性体；（Ｋ
２）、ｔＥ）−異性体］ である。

この発明の用途に好ましい化合物は、上記化合物Ｄ２お
よびに１であり、特に化合物Ｄ２およびに１のＺ−異性
体形態、より具体的には純粋なまたは実質上純粋な２−
異性体形態が優れている。

ヨーロッパ特許公開第０１３８７６５Ａ２号およびイギ
リス特許公開第２１８３６４Ｈ号に報告されたこの発明
の化合物は、例えばアジュバント関節炎試験（ラット）
、リポ多糖類（ＬＰＳ）誘発による発熱試験（ラット）
および関節炎疼痛試験（ラット）における観察から抗炎
症剤、解熱剤、鎮痛剤として有用であることが判明した
。

この発明では、今回予想外にもこの発明の化合物がモノ
カイン阻害、特にＩ　Ｌ−１（インターロイキン−１）
阻害作用、とりわけＩ　Ｌ−１放出または分泌抑制作用
を示すということが判明した。したがってこの発明の化
合物は、今回これまで予想もしなかったさらに広範囲の
状態ないし疾患の処置または支持的処置への使用に有用
であることが判明した［疾患およびその他の病的状層の
病因におけるＩＬ−１の役割に関する一最的考察につい
ては例えばディナレロ、ジャーナル・オブ・クリニカル
・イムノロジー（Ｊ、　　Ｃ１ｉ、　Ｉｍａ＋ｕｎｏ１
．）、５巻（５）、２８７〜２９７頁（１９８５年）参
照］・この発明の格別な知見にしたがい、この発明は第
一の態様として １、抗炎症または解熱手段以外の治療手段として、その
治療を必要とする対象にこの発明の化合物の有効量を投
与することからなるモノカイン阻害、ことにＩ　Ｌ−１
放出または分泌抑制を発現する方法 を提供する。

この発明はまた、一連の特殊ｓａＩもしくは別の態様と
して ２、抗炎症または解熱手段以外の外因性ないし内因性障
害（ｉｎｓｕｊｔ、発作）の処置の一部として、または
処置のための治療手段として、その治療を必要とする対
象にこの発明の化合物の有効量を投与することからなる
モノカイン阻害、特にＩ　Ｌ−１放出または分泌抑制を
発現する方法 を提供する。

またこの発明は、同様にまたは別の態様として２．１．
外因性ないし内因性傷害に対し発熱または炎症性反応以
外の急性期反応の処置、または潜伏性感染症ないし慢性
疾患の結果生じた発熱または炎症以外の急性期変化の処
置のために、その処置を必要とする対象にこの発明の化
合物の有効量を投与することからなる処置方法 を提供する。

さらにこの発明は、同様にまたは別の態様として ２．２９例えば外因性ないし内因性傷害に対する急性期
反応、または潜伏性感染症または慢性疾患の結果、急性
期変化に立ち至った好中球増加症、単核細胞浸潤、充血
、低亜鉛血症、低鉄血症、筋肉タンパク質分解、食欲不
良または病的傾眠の処置のために、その処置を必要とす
る対象にこの発明の化合物の有効量を投与することから
なる処置方法 を提供する。

外因性ないし内因性傷害の例を挙げれば、例えば細菌性
またはウィルス性感染（インフルエンザ等）のような微
生物侵入、有害または病的な免疫反応、新生物性障害、
火傷または損傷等である。

潜伏性感染症または慢性疾患の例を挙げれば、特に関節
炎（特に慢性関節リウマチ）および炎症性腸疾患等であ
る。

この発明はまた、一連の特殊態様もしくは別の態様とし
て ３、免疫抑制を誘導または発現し、特に自己免疫疾患の
処置のため、その処置を必要とする対象にこの発明の化
合物の有効量を投与することからなる処置方法 を提供する。

上記の方法を適用し得る特異的自己免疫疾患として、例
えば強直性を椎炎、自己免疫性血液疾患（例えば溶血性
貧血、再生不良性貧血、真性赤血球貧血および特発性血
小板減少症等）、全身性紅斑性狼癒、多発軟骨炎、硬皮
症、ウェブネル肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動型肝炎、
重症筋無力症、乾田、特発性脂肪下痢症、自己免疫性炎
症性腸疾患（ｒ！４えば潰瘍性大腸炎およびクローン病
等）、内分泌性眼病、グレーラス病、サルコイド−シス
、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変症、若年型糖尿病
（１型糖尿病）、ライチル症候群、非感染性ブドー膜炎
（前眼部および後眼部）、自己免疫性角膜炎（例えば乾
性角結膜炎および春季角結膜炎等）１間質性肺繊維症、
乾瘤性関節炎および糸球体腎炎（腎症状を伴うものおよ
び伴わないもの、例えば特発性腎症状または最小病変腎
臓病等）が挙げられる［ここで下線を付したものは特に
興味がある］。

これらの目的のため、この発明の化合物は、所望により
または好適である場合、他の免疫抑制ステロイド治療ま
はシクロスポリン治療、ことに免疫抑制薬物質シクロス
ポリンまたはシクロスポリンＡ［これらもまた公知であ
り、サンジミューン（ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ（商標））
またはサンジマン（ＳＡＮＤ−ＩＭＭＵＮ（商標）〕と
して商業的に入手できる］を使用する治療の添加薬また
は佐薬として使用し得る。

４、＜ａ）組織カルシウムの枯渇、または（ｂ）骨また
は軟骨の変性過程を処置するため、その処置を必要とす
る対象にこの発明の化合物の有効量を投与することから
なる処置方法。

またこの発明は、同様のまたは別の態様として下記の処
置を必要とする対象にこの発明の化合物の有効量を投与
することからなる ４、１．骨の脱石灰化または骨吸収（骨マトリックス・
カルシウムの欠乏等）の処置方法、または４．２．歯ま
たは歯周囲カルシウム欠乏の処置方法、または ４．３．骨関節部または骨関節内における吸収過程（例
えばカルシウム吸収）または線維芽細胞浸潤の処置方法 を提供する。

特殊態様として、この発明は、例えば歯または歯周囲の
カルシウム欠乏、種々の原因に由来する骨粗しよう症（
例えば気候性または閉経期骨粗しよう症および老齢、非
動化または外傷の結果生じる骨粗しよう症等）、骨格の
脱石灰化に伴う急性または慢性状態を含む骨店、骨軟化
症（例えば特殊療法の補助として）、骨治癒または骨再
生、およびテタニーおよび潜伏性テタニー等を含む歯周
囲疾患、骨関節炎および特に強直性を椎炎、およびその
他任意の疾患要素として、骨または軟骨における組織カ
ルシウムの欠乏または変性過程の上記４．および４．１
．〜４．３．に示した処置方法を提供する。

カルシウム吸収または骨カルシウム欠乏の過程を修飾す
るこの発明の化合物の有用性に鑑み、この発明の化合物
は、特にそのような過程が主な要因である関節炎様状態
の処置、とりわけ骨関節炎および強直性を椎炎の処置に
有用である。

５、線維症または線維化状態、例えば先天性肝線維症、
心内膜心筋線維症、嚢胞性線維症、ケイ藻土線維症、肺
線維症、後腹膜線維症、腫瘍性線維組織形成、傍尿管線
維症、後線維素性線維症、増殖性線維化、修復性線維化
、子宮線維症、術後癒着および瘉痕化等を含む線維症ま
たは線維化状態を処置するため、その処置を必要とする
対象にこの発明の化合物の有効量を投与することからな
る処置方法。

この発明の化合物は、肺線維症の処置に特に有用である
。

６、その処置を必要とする対象にこの発明の化合物の有
効量を投与することからなる。ｍ瘍侵大またはｔｉ瘍増
殖に伴う症状（筋肉タンパク質分解を含む）、クロイツ
フェルド・ヤコブ病、アルツハイマー病、病的頻拍、痛
風、内毒素ショックまたは表皮水庖症の処置、または支
持的ないし補助的な処置方法。

上記の６に示したこの発明の用途において、この発明の
化合物は腫瘍増殖に伴う症状（筋肉タンパク質分解等）
、痛風または内毒素ショックの処置に特に有用である。

以上に記載のほか、この発明はまた Ａ、上記１〜６に記載の任意の方法に使用するこの発明
の化合物、または Ｂ、上記１〜６に記載の任意の方法に使用する医薬組成
物の製造に用いるこの発明の化合物、Ｃ０製薬上許容し
得る１またはそれ以上の希釈剤または担体とともにこの
発明の化合物を含有してなる上記１〜６に記載の任意の
方法に使用する組成物 を提供する。

モノカイン阻害剤、特にＩ　Ｌ−１の放出または分泌抑
制剤としてのこの発明の化合物の有用性、および上記記
載の疾患および状態の処置におけるこの発明の化合物の
有用性は、損率的な薬理学的試験および臨床によって、
例えば以下に説明する方法により証明し得る。

１　、　　　Ｉ　Ｌ−１（インターロイキン−１）分泌
抑制御、１．軟骨細胞試験（バイオアッセイ）（緒言） 集密的な家兎軟骨細胞培養は、Ｉ　Ｌ−１に対して比較
的特異的な標的細患であることが知られている。精製し
たＩＬ−１［シュナイダーら、ジャーナル・オプ・イム
ノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、１３８巻、４９
６頁（１９８７年）］、組換え体ヒトＩ　Ｌ−１−β（
ｒｈｌＬ−１）、または刺激されたヒト単球、マウスお
よび家兎腹腔マクロファージまたはマウス細胞系Ｐ　３
８８　Ｄ　Ｉから採取したならし培地［コーレンら、ジ
ャーナル・オプ・イムノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ
、）、１１４巻、８９４頁（１９７５年）］は、軟骨細
砲の分泌パターンに特徴的な変化を生じる。ことに潜在
性金属１０テアーゼ（Ｍ　Ｐ　）は誘導されるが、１ラ
スミノーゲン・アクチベータ（ＰＡ）の分泌は低下する
。ＭＰ一応答は比較的Ｉ　Ｌ−１に特異的であるが、Ｉ
Ｌ−２、ＴＮＦ−α１組換え体ヒトα−インターフェロ
ン（ｒｈＩＦＮ−ａ）、ｒｈ　　ＩＦＮ−ｙ、ホルボー
ルミリステートアセテート、コンカナバリン−Ａ、Ｅ−
型プロスタグランジンおよびインドメタシンには何ら影
響しない、モノカインで誘導されるＰＡ分泌低下はＭＰ
分泌はど特異的ではないが高感度の指標を提供する（Ｌ
ＡＦ試験に匹敵、後述）　【エベクオッツら、バイオケ
ミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｊ、）、２１９巻、６６７〜６７７頁（１９８４年）：
シュナイダーら、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・
リウマトロジー（Ｂｒｉｔ、　Ｊ、　Ｒｈｅｕｍａｔ、
）、２４巻（増刊１）、１２８〜１３２頁（１９８５年
）；シュナイダーら、ジャーナル・オブ・イムノロジー
（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、１３８巻、４９６〜５０
３頁（１９８７年）］。

１．１．ａ　マウス・マクロファージ・モノカイン阻害 イン・ビトロで、マウス腹腔常在性マクロファージ［シ
ュナイダーら、ジャーナル・オプ・エキスペリメンタル
・メジシン（Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、）、１４Ｈ巻、
４３５〜４５０頁（１９７８年）１をさまざまな濃度の
試験化合物と一緒に１日間培養する。

この培地を、調製したでの培地で１：１に希釈しくｖ：
ｖ）、これを集密的な家兎軟骨ａｍへ加える。さらに２
日間経過後、軟骨細胞培養中のＭＰ活性を測定する。上
記の試験方法で、この発明の化合物、特に化合物Ｄ２は
約３．０〜約１００μＭの濃度でモノカイン放出を抑制
する活性を示す。

３〜５実験系列でそれぞれ３回ずつ並行して実施した実
質上純粋な２−異性体形態の化合物Ｄ２のこのように測
定したＥＤ、。は１００μＭの濃度である。

１．１．ｂ　ヒト単球モノカイン阻害 健常志願者の血液から単球を得て、これを遠心後、さま
ざまな濃度の試験化合物と組織培養皿上で培養する［シ
ュナイダーら、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ、
　Ｉｍａ＋ｕｎｏ１．）、１３８巻、４９６〜５０３頁
（１９８７年）］、４４時間後数回洗浄することにより
非粘着性のリンパ球を除去する。

新たに調製した培地、試験化合物および刺激剤としてリ
ボ多糖類（Ｌ　Ｐ　Ｓ　）を添加し、さらに１９時間、
単球をインキュベートする。調製し立ての培地で、プー
ルした培地を１：１０（ｖ：ｖ）に希釈し、集密的な家
兎軟骨＃ｌＪ１ｍをこれに加える。

さらに２日間経過後、軟骨細胞培地中のＭＰ活性を測定
するＪ 上記の試験方法で、この発明の化合物、ことにＤ２およ
びに１は約３０〜約１００μＭの濃度でモノカイン放出
を抑制する活性を示す、３〜７実験系列でそれぞれ３回
ずつ並行して実施した実質上純粋なＺ−異性体形態の化
合物Ｄ２およびＫｌのこのようにして測定したＥ　Ｄ　
ｓｏは、何れの化合物とも６０〜１００μＭの濃度であ
る。

１．２　　ＬＡＦ試験（胸腺細胞増殖）リンパ球増殖は
モノカイン活性の代表的な試験１である。この方法は＋
’Ｔ、Ｌ−２、ホルボールミリステートアセテート、コ
ンカナバリンＡ、Ｅ−型１０スタグランジンおよびイン
ドメタシンでは何れも妨害が起こり、やや特異的ではな
いが高い感受性を示す、前記１．１．ｂの記載と同様に
、ヒト単球培地を調製して、１：１０．１：２０および
１：４０（ｖ：ｖ）に希釈し、これに２０ｍＭヒドロキ
シエチルピペラジン−エタンスルホン酸、１２ｍＭ　Ｎ
ａＨｃＯｓ、２ｍＭグルタミン、２％ウシ胎児血清、１
０μＭ　２−メルカプトエタノール、０．１μＭインド
メタシンおよび抗生物質を含有したダルベツコ修飾イー
グル培地１ｍｌ当り１．５Ｘ１０−−胸腺細胞（Ｃ３Ｈ
／ＨｅＪマウスから採取）を浮遊した液を加える。９６
大の培養平板で細胞を２日間インキュベートし、最後の
６時間、３Ｈ−チミジン・パルス（１μＣＩホール）を
用いて増殖速度を測定する。取り込まれた放射能を濾紙
に採取し計数する。上記の試験方法で。

この発明の化合物は約３０〜約１００μＭの濃度で七ツ
カイン産生を抑制する。２実験系列でそれぞれ３回ずつ
並行して実施した、実質上純粋なＺ−異性体形態の化合
物Ｄ２およびに１のこのようにして測定したＥＤｓｓは
３０μＭの濃度である。

上記のＬＡＦ−試験に使用したマウス胸腺細胞の増殖に
対するこの発明の化合物の拮抗作用もしくは直接的な影
響を排除するため、組換え体ヒトＩ　Ｌ−１またはＩＬ
−２で胸腺細胞を刺激した後、１Ｈ−チミジンの取り込
みに対するこの発明の化合物の効果を検討する。この試
験モデルにおいて、この発明の化合物、特にＤ２および
に１は、組換え体ヒトＩＬ−２１０ｎｇ／ｍｌまたは組
換え体ヒトｒＬ−１７５ｎｇ／ｍｌで誘導された増殖に
対し何ら有意な影響を示さず、また濃度依存性も認めら
れない。

またＩＬ−１に対する楓的システムとして、軟骨細胞を
使用しＩ　Ｌ−１で誘発されたＭＰ分泌に対する影響を
検討する。ＩＬ−１［ジェンザイム“コーポレーション
（Ｇｅｎｚｙｍｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）＋ＵＳＡ
Ｉをこの発明の化合物またはデキサメタゾン（対照）と
−緒にまたは単独で軟骨細胞に加え、２日間インキュベ
ートした培地上清中の金属１０テアーゼ活性を測定する
。この試験方法で、この発明の化合物、特にＤ２および
に１はＩＬ−１の誘導するＭＰ分泌に影響を与えない。

１．３　　ＲＩＡ−キット、ＩＬ−１定量化上記の例１
．１．ｂの方法を繰り返し、希釈していない回収培地中
のＩ　Ｌ−１濃度を、シストロンＩ　Ｌ−１（ＣＩＳＴ
ＲＯＮ　ＩＬ−１）放射免疫測定キット［シストロン・
キット（ＣＩＳＴＲＯＮ　ｋｉｔ）は、シストロン（Ｃ
ＩＳＴＲＯＮ　）、１０、ブｌレームフィールド・アベ
ニ：ｘ、　−（Ｂｌｏｏｍｆｉｅｌｄ　Ａｖｅｎｕｅ）
、ｐ、ｏ、ボックス　２００４、パイン・プルツク（Ｐ
ｉｎｅ　Ｂｒｏｏｋ）、ＮＪＯ７０５８（ＬＩＳＡ）か
ら入手する。このキットはＩ　Ｌ−１βに特異的であっ
て細胞内およびｍ砲外双方の物質を認識する］を用いて
測定する。

この発明の化合物、特に化合物Ｄ２およびに１は、上記
の試験方法で測定された細胞外Ｉ　Ｌ−１濃度を抑制す
る活性を有する。これに反し、測定された細胞内ＩＬ−
１濃度は実質上影響されずに残存する。２〜８実験系列
でそれぞれ３回ずつ並行して実施した実質上純粋な２−
異性体形態の化合物Ｄ２およびに１の、細胞外Ｉ　Ｌ−
１濃度抑制に対するこのようにして測定したＥＤＩ。は
それぞれ４Ｑおよび２５μＭの濃度である。各測定にお
いて細胞外含量は何れも有意に減少する。

１．４　　放出−合成阻害 １．４．ａ　ホモジネートおよび゛溶解物のｌｌ製熱に
よって不活性化した１％ＡＢ−ヒト血清を含有するリン
酸ＭｆＲ食塩液０．３ｍｌを洗浄した粘着性単球に添加
し、ラバー・ポリスマンを使用して細胞を分離する。つ
いで細胞含有液を同一のグループに属する別の２個のホ
ールへと移す、この方法を３回縁り返す、Ｂ−内筒で７
つの衝撃を５回繰り返すダウンス（Ｄｏｕｎｃｅ）ホモ
ジナイザー［コンテス社（Ｃｏｎｔｅｇ　Ｃｏ、）、パ
インランド（Ｖｉｎｅ−Ｉａｎｄ＞、ＮＪＩを使用して
、最終プールした懸濁液（０，９ｍ１）をホモジナイズ
する。

洗浄したヒト単球単層に０．０１％ジギトニン水溶液０
．３ｍｌを加えることによって溶解物を調製する。

１．４．ｂ　　ＩＬ−１合成および放出に対する効果ホ
モジネート５０μｍを培地で５００μｌに希釈し、これ
を集密的な軟骨細胞に加え、ＩＬ−１含量の尺度として
金属１０テアーゼを誘導する活性を測定する。

またＲＩＡキットを用いて、培地中、および繕脂ホモジ
ネートならびに細胞溶解物中のＩ　Ｌ−１含量を測定し
た（１．３９照）。

これらの試験で、この発明の化合物、特に化合物Ｄ２は
培地上清中のＩＬ−１濃度を有意に低下させるが、ホモ
ジネートおよび溶解物双方のＩＬ−１の平均含量は僅か
しか低下せず、あるいは未変化のまま残存した。

１．５　　単球粘着に対する効果 新たに採取したヒト単核細胞の単球を、試験すべき化合
物または担体の存在で調製する。４時間後、培地を吸引
して、細胞単層）通常通り洗浄する。ついでジギトニン
水溶液を用いて粘着性単球を溶解し、そのＤＮＡ量およ
び細胞質ゾルのＬＤＨ酵素活性を測定する。この試験に
おいて、この発明の化合物、特に化合物Ｄ２および担体
は何れも単球の粘着性を低下させない。

１．６　　単球分泌に対する効果 Ｉ　Ｌ−１ばかりでなく、ＴＮＦ−ａおよびＩＬ−６も
また、刺激された単球から放出されたモノカインをよく
認識する。

上記と同様に、ヒト単球からの培養培地を調製する。Ｒ
ＴＡテストによりｘ　ｔ、−ｉおよびＴＮＦ−ａ含量を
測定し、Ｉ　Ｌ−６は下記に示したようにバイオアッセ
イにより測定する。この発明の化合物、特に化合物Ｄ２
は、Ｉ　Ｌ−１の放出をＩＬ−６およびＴＮＦ−ａの場
合より一層有意に抑制する。

［Ｉ　Ｌ−６バイオアフセイ］ ヒト単球からのならし培地中のＩＬ−６を測定するため
、９６大の平板〔コスタ−（Ｃｏｓｔａｒ）　］で２．
４Ｘ１０’細胞／ｍｌ　（Ｂｌ　３．２９）０．２ｍｌ
を培地とともに４Ｈ時間培養し、これを組携え体１＝Ｌ
−６（２００ＬＪ／ｍ＋）　、２−メルカプトエタノー
ル５０μＭおよび抗生物質を加えた血清無添加イスコー
プ修飾ダルベツコ培地に希釈する。最終６時間の増殖速
度を、１Ｈ−チミジン・パルス（１μＣ／ホール）を用
いて測定する。取り込まれた放射能をｒ紙に採取し、計
数し、ＩＬ−６の基準標品と比較する。

１．７　　ラクテートデヒドロゲナーゼの漏出およびリ
ゾチーム分泌に対する効果 上記と同様に、ヒト単球からの培養培地をｌ１ｌｌ！す
る。パーソナルコンピュータとつないだツインリーダー
（Ｔｗｅｅｎｒｅａｄｅｒ）　［フロー・ラボラトリー
ズ社（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　ＡＧ）］
を使用して、リゾチームおよびラクテートデヒドロゲナ
ーゼ（ＬＤＨ）を速度論的に測定する。ＬＤＨの試料（
５０μｍ）を、最終濃度５０ｍＭのリン酸Ｍｆｒ液（ｐ
Ｈ７，５）、０．８ｍＭピルビン酸ナトリウム、０．２
４　ｍ　Ｍ　Ｎ　ａ　Ｄ　Ｈｘおよび０．０４％ウシ血
清アルブミンを含有する基質２００μｍと混合し、３４
０ｎｍにおける吸収の変化を、１分間隔で１１回測定す
る。コンピュータは初回速度を計算して、単位を決定す
るのに使用する。リゾチームの試料（５０μｍ）を、ミ
クロコツカス・リゾデイクテイカス（Ｍ、　Ｉｙｓｏｄ
ｅｊｋｔｉｃｕｓ）　１　、２　ｍ　ｇ　７ｍ　＋の６
７ｍＭリン酸Ｍｔｌｔ液（ｐＨ６，２＞浮遊液１００μ
＋と混合し、４９２ｎｍにおける濁度の変化を４分間隔
で１１回測定する。一連の測定毎に、ニワトリ卵白リゾ
チーム結晶で校正曲線を描く［Ｊ、シュナイダーら、ジ
ャーナル・オプ・エキスペリメンタル・メジシン（Ｊ、
　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、）、１４Ｈ巻、４３５頁（１９７
８年）〕、対照および処理した細胞培養から何ら有意な
ＬＤＨｆｉ出は認められない。

この発明の化合物、特に化合物Ｄ２は、限界的にだけり
ゾチーム放出を減少し、刺激されない対照の濃度では放
出を誘導しない。

２、　　骨吸収の防止（組織カルシウム欠乏の処置） 生後４〜５日のスイス・アルピノマウスから得た半頭蓋
冠（前頭部および頭頂部）をステンレススチール製グリ
ッド上で、培地とガスとの界面に湿めらせた大気（９５
％空気７５％Ｃ〇−を通じたＢＳＡ　　１ｍｇ／ｍｌを
添加したＢＧＪ骨組織培養培地中で、３７℃で培養する
［レイノルズら、［オーガニック・カルチャー・イン・
バイオメジカル・リサーチ（叶ｇａｎｉｃ　Ｃｕ１ｔｕ
ｒｅ　ｉｎ　Ｂｉｏｍｅｄ。

Ｒｅｓ、）Ｊ　、ボールズおよびマミケンダム編、ケン
ブリッジ・ユニバージティー・プレス社（Ｃａ＋ｎｂｒ
ｉ−ｄｇｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ）、３
５５〜３６６頁（１９７６年）参照］。

カルシウム放出刺激物質［ＰＧＥ＊、ＬＰＳまたは１．
２５ジヒドロビタミンＤ３　（１，２５Ｄ３）］の存在
で、試験培地中へ放出されるカルシウム放出に対する試
験物質の種々の濃度における影響を検討する。この目的
のため７２時間および１４４時間培養物から得た骨培養
土清および培養終了時の頭蓋冠のＴＣＡ抽出物中のカル
シウム濃度を、分光学的な方法により測定する［ギンド
ラ−ら、アメリカン・ジャーナル・オブ・クリニカル・
バンロジー（Ａｍ、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｐａｔｂｏｌ
、）、５８巻、３７６〜３８２頁（１９７２年）］、ま
た骨培養上清および培養後の頭蓋冠のトリトン１００抽
出物中のライソソーム酵素、Ｎ−アセチルグルコースー
アミニダーゼ活性をバナージーおよびバスの方法を用い
て測定する［バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏ−ｃ
ｈｅＩＩｌ、　Ｊ、）、４５巻、１１３〜１１８頁（１
９７５年）］、酵素活性の変化をμ単位ｌ半頭蓋冠およ
び放出％で表す。

上記の試験方法でこの発明の化合物、例えば実質上純粋
な２−異性体形態の化合物Ｄ２またはに１は、ｌＸｌ０
−”および５Ｘ１０−’Ｍの濃度でカルシウム放出を抑
制すると同時に、それに付随してＮ−アセチルグルコー
スーアミニダーゼに対し影響を示す、実質上純粋な２−
異性体形態の化合１１１１Ｄ２について測定したＩＣｓ
。値は１例えば下表の通りである。

（ｒｃｓｏ値の計算では、対照培養における吸収率と最
大限に刺激した培養における吸収との差を１００％とし
た。ＩＣｓ、は最大吸収を５０％抑制する試験物質濃度
で表した）。

３、　　慢性関節リウマチ動物モデルにおける疾患修飾
活性 成熟雌性ラット４Ｈ匹にアジュバント関節炎を誘発し、
試験化合物を４０日間経口投与する。関節の膨張および
骨の密度を１０日、２０日、３０日および４０日目に測
定し、プラシーボを投与した対照動物と比較する。さら
に処置期間完了時、大腿顆を取って軟骨のグリコサミノ
グリカン（ＧＡＧ）を測定する。血清中のα、−マクロ
グロブリンを０日、３日、６日、９日、１６日および２
２日目に測定する。

この発明の化合物を２．５〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の投与
割合で経口投与することにより、炎症過程で初期に起こ
った骨密度の低下が、徐々に正常ミネラル含量へ回復す
るのが観察される。下記に示した方法による密度測定に
よって明らかなように骨密度増大ばかりでなく、投与量
に依存して血清α、−マクログロブリン濃度の低下が認
められる。

さらに、障害した軟骨のＧＡＧ含量分析により投与量に
比例したプロテオグリカンの増加が見られる。

この慢性関節リウマチ試験モデルにおいて、この発明の
化合物、例えば実質上純粋な２−異性体形態の化合物Ｄ
２は、特に３０日の処置期間後疾患修飾活性を示し、と
りわけアジュバント関節炎ラットの軟骨および骨に対す
る防御効果を示す。

上記試験方法に用いた成熟ラットの骨の密度のイン・ビ
ボ評価方法は、アルバニースらによって報告されたｘａ
ｉ影によ否密度測定方法に基づくものである［ジャーナ
ル・オブ・アメリカン・ゼリアｌヘリツク・ソサイエテ
ィー（Ｊ、＾ｍｅｒ、　Ｇｅｒ。

Ｓａｃ、）、１７巻、１４２〜１５３頁（１９６９年）
］。

試験化合物による処置期間中、関節炎ラットにおいて縦
方向の骨の検査を行い、未処置ラットおよび対照動物と
を比較する。骨柱量を指標としてとり、イン・ビボの定
量的なＸ線走査を実施する。

ついでＸ線画像を走査し、高解像能密度計装置を使用し
て灰色値を比光学密度（ＲＯＤ　）単位に変換する。こ
の方式の特徴的な理由から（画像の暗部は比光学密度の
増加を表す）、Ｘ線の生物学的な効果を骨組織と一致さ
せるために、記録された値を（１−Ｘ）［ここでＸはＲ
ＯＤの実測値］で表す［即ちフィルムの暗部は骨の密度
の減少を表す］、得られた密度測定値を動物の体重によ
って１０ツトし、同じ体重範囲の動物群を選ぶ。

４、　　免疫抑制活性（自己免疫疾患）下記の各試験方
法において、試験化合物（即ちこの発明の化合物）１例
えば実質上純粋な２−異性体形態の化合物Ｄ２またはに
１［投与割合、約５〜６０ｍｇ／ｋｇ／日（経口）］を
オリーブ油に溶かし、単独またはシクロスポリンＡ［投
与割合、約１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日（経口）］と組合わ
せて投与する（即ち、この試験モデルで、投与量は免疫
抑制効果を得るのに通常必要とされる量より実質上低い
）。

４．１．ブドウ膜炎：実駒的自己免疫ブドウ膜炎（Ｅ　
Ａ　Ｖ　）の修ｆＩＩｌ］ ヌッセンブラットらにより報告された一般的な方法で試
験を実施する［アーカイブ・オブ・オフタルモロジー（
Ａｒｃｈ、　０ｐｈｔｈａ＋、）、１００巻、１１４６
〜１１４９頁（１９８２年）］、１１群６〜１０らから
なる体重的１５０〜２００ｇのルイス・ラット（♀）の
後足踵に、ミコバクテリウム・ラベルクローシス（Ｍｙ
ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）
Ｈ３７ＲＡ　　２．５ｍｇ／ｍｌで強化した完全フロイ
ンドアジュバントに乳化したウシＳ抗原（ｌ：１、重量
部）３０μｇを注射して免疫する。

免疫して７日後から７日間連続して、試験化合物を前記
投与量で、（ｉ）単独または（ｉ）シクロスポリンＡ治
療と併用して投与する。対照群は試験化合物の代わりに
１ラシーボを投与する。免疫ｆ＆１４日目にラットを層
殺し、直ちに眼球を摘出してホルムアルデヒドで固定し
、パラフィンワックスに包埋してヘマトキシリン−エオ
シンおよびＰＡＳで染色する。盲験法により、炎症の程
度を０（炎症なし）から４（全眼炎）までの尺度で組織
病理学的評価を行う０選ばれた例について透過および走
査電子顕微鏡により検査する。ＥＡＶを起こした動物の
眼は硝子体腔、網膜下部および前眼房で生じた線維性滲
出液によって網の目状に被覆された炎症性細胞を伴う網
膜および脈絡膜の全般的炎症を示す。

前述の投与量の（ｉ）試験化合物または（ｉ）試験化合
物とシクロスポリンＡとの投与により、同投与量の（ｉ
）プラシーボまたは（ｉ）ブラシーボとシクロスポリン
Ａとを投与した対照群と比較して、ＥＡＶ徴候を示した
動物数の実質的な減少が観察される。

４．２．ａ　多発性硬化症Ｉ：実験的アレルギー性脳を
髄炎（ＥＡＥ）に対する予防効果ボレルらによって報告
された一般的な方法で試験を実施する［エージェンッ・
アンド・アクションズ（Ａｇｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ａｃｔ
ｉｏｎｓ）、６巻、４６８頁（１９７６年）］、１１群
８〜１２の体重的１５０〜２００ｇのウィスター・ラッ
ト（♀）またはルイス・ラット（♂）に、ウシを髄（凍
結乾燥しＨｌ。

１２ｍｌに溶解）２．５ｇ、アーラセル（Ａｒｌａｃｅ
ｌ）Ａ　　１．５ｍｇ、ヌジョール（Ｎｕｊｏｌ）　８
．０　ｍ　ｌおよび死１１１１屹燥ミコバクテリウム・
フレイ（Ｍｙｃｏｂａ−ｃｔｅｒｉｕｍ　ｐｈｌｅｉ）
　２０　ｍ　ｇを含有する食塩液０．２ｍｌからなるエ
マルション０．１ｍｌを、それぞれ後足踵皮肉に注射す
ることによってＥＡＥを誘発する。（１）試験化合物ま
たは（ｉ）試験化合物とシクロスポリンＡとを、感作当
日から１週間に５日間ずつ３３Ｉ問続けて投与する。対
照群におけるＥＡＥの起始は、全般に感作後９日〜１６
日目に始まり後肢および尾の麻痺徴候が顕著である。

試験動物は、後肢および尾に完全病変を認めたときをも
って陽性とする疾患および発症徴候について毎日検査し
て採点する。試験動物は合計２５日間観察を続ける。

前述の投与量の（ｉ）試験化合物または（ｉ）試験化合
物とシクロスポリンＡとの投与により、同投与量の（ｉ
）プラシーボまたは（ｉ）プラシーボとシクロスポリン
Ａとを投与した対照群と比較して、ＥＡＥの徴候を示し
た動物数の実質的な減少が観察される。

４．２．ｂ　多発性硬化症ｌ：確立したＥＡＥに対する
活性 ４．２．ａと同様にして、ただし感作後、８日目または
９日目（即ち疾患症状発現の直前）から、（ｉ）試験化
合物または（ｉ）試験化合物とシクロスポリンＡとの投
与を開始して、毎日または１日おきに約１４Ｈ閏投与を
続ける。処置期間中、毎日動物を疾患の症状について検
査し、４．２．ａの記載と同様に採点する。

前述の投与量の（ｉ）試験化合物または（ｉ）試験化合
物とシクロスポリンＡとの投与により、同投与量の（ｉ
）プラシーボまたは（ｉ）プラシーボとシクロスポリン
Ａとを投与した対照群と比較して、ＥＡＥ疾患の症状を
示した動物数の実質的な減少が観察される。

４．３　全身性紅斑性狼瘤：　（ＮＺＢ／ＮＺＷ）Ｆ１
マウス・モデル スタインバーブらによって報告され、議論された（ＮＺ
Ｂ／ＮＺＷ）Ｆｌ系マウスを用いて試験を実施する［ビ
ニレチン・オン・ザ・リューマチック・デイシージズ（
Ｂｕｌｌｅｒｔｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｒｈｅｕｓ＋ａｔｉ
ｃＤｉｓｅａｓｅｓ）、２８巻、４〜５号、９４０〜９
４６頁（１９７７〜７８年）、ジ・アートリティス・フ
ァアウンデーシラン（Ｔｈｅ　Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｆ
ｏｕｎｄａｔｉｏｎ）刊（アトランク、ジョーシア）］
、この系の雌は約５〜７．５月−で抗ＤＮＡならびに抗
赤血球自己抗体、およびタンパク尿症の発現を伴うＳＬ
Ｅ症候群徴候を自然発症する。この状態は究極的には死
に至る。

試験のため、１群６〜８匹のマウス（♀）を使用する。

（ａ’）自己抗体の自然発生前（例えば約５月齢）に、
または（ｂ）自己抗体の自然発生後（例えば約８〜９月
齢）から、（＋）試験物質または（ｉ）試験物質とシク
ロスポリンＡとを、１週間に５回投与で約８〜１０週間
継続させる治療を開始する。ＥＬＩＳＡ手技を用い、治
療開始の約１３１問前から試験期間中、一定期間毎に抗
ＤＮＡ抗体および抗赤血球抗体価を測定する。対照にお
ける追加的な指橡としてタンパク尿の発現（週１回測定
）および生存期間が挙げられる。上記の（ａ）および（
ｂ）処置群の成績から予防的および治療的有効性がそれ
ぞれ認められる。

前述の投与量の（ｉ）試験物質または（ｉ）試験物質と
シクロスポリンＡとの投与により、同投与量の（＋）プ
ラシーポまたは（ｉ）プラシーボとシクロスポリンＡと
を投与した対照群と比較し、予防的および治療的処置計
画の双方において、自己抗体値およびタンパク尿の発生
の実質的な減少および平均生存期間の増大が観察される
。

５、　　肺繊維症 Ｇ、Ｊ　、ローレントらによって報告された一般的な方
法で試験を行う［ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ク
リニカル・インベステイゲーシリン（Ｅｕｒ、　　Ｊ、
　　Ｃｌ１ｎ、　　　Ｉｎｖｅｓｔ、）、　　１１　巻
　、　　４４１〜４４Ｈ頁（１９８１年）］０体重２．
０〜２．５ｋｇのニューシーラント白色家兎１群４匹（
実験開始時の日齢１２７日）に、ブレオマイシン１０ｍ
ｇ／ｋｇを気管内点滴注入することにより肺繊維症を発
症させる。試験動物の肺を２．４および８週間後に調べ
る。試験化合物（即ち、この発明の化合物）、例えばそ
れぞれ実質上純粋な異性体形態の化合物Ｄ２またはに１
を、約２．５〜６０ｍｇ／ｋｇ１日の投与割合で経口投
与することにより、ブラシーボ投与を受けた対照群と比
較して肺線維症の実質的な減少が観察される。

６、　　臨床試験■：乾病症 ９つの基準によって評価して体表面の２０％またはそれ
以上に慢性重症乾廖症を有し、現治療により疾患状態が
安定し、もしくは進行している成人男女の対象により試
験を実施する。試験開始の少なくとも２３！１間前から
、全身的、局所的に、または特に皮膚疾患に対して行う
光線治療をすべて中止する。この期間中、緩和な皮膚軟
化剤、２％サリチル酸−オリーブ油、コールタール・シ
ャンプーおよび／または１％ハイドロコーチシンクリー
ムまたは軟膏、および関節炎または乾瘤症に併発してい
るその他の合併症の薬物投与だけを継続した。

２週間の「つオツシュ・アウト」期間を置いた後、患者
は一夜８〜１０時閏絶食を行った後、試験に９加した。

試験に際して、下記の臨床検査を実施した。完全皇軍、
血清電解質、グルコース、カルシウム、リン、尿酸、Ａ
ＬＴ／ＡＳＴ／ＬＤＨ（アラニン・アミノトランスフェ
ラーゼ／アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ／乳
酸デヒドロゲナーゼ）、血漿上皮成長因子、成長ホルモ
ン、尿ＥＧＦ、臨床的な乾田症の程度を９つの基準によ
って評価し、発赤、肥厚および落屑について、クラグバ
レらが記載しているＯ−４点尺度を用いて病変の程度を
評価する［クラグバレら、アーカイブズ・オブ・デルマ
トロジ−（Ａｒｃｈ、　Ｄｅｒａａｔｏｌ、）。

１１９巻、５４Ｈ〜５５２頁（１９８３年）］０選ばれ
た病変については臨床写真を撮影した。１％リドカイン
浸潤麻酔を用い、６ｍｍパンチによる皮膚生検を実施す
る。

試験期間中、患者は、この発明の化合物、例えばそれぞ
れ実質上純粋なＺ−異性体形層である化合物Ｄ２または
に１を、１日投与量約４００〜約１２００ｍｇ／日（経
口）で１日に１回または４回まで分割して投与した。

試験期間中は、「つオツシュ・アウト」の期間中に既に
使用したちの以外の治療を許可しなかった。試験開始時
に実施したすべての検査（空腹時血糖、尿、乾廖症の臨
床的評価、臨床写真、パンチ皮膚生検）は試徹期間中、
７日、１４日、２１日および２８日目に繰り返し実施す
る。

試験に参加し、この発明の治療を受けた患者は、乾瘤症
の漸進的な臨床程度の減少、特に胞子性病変程度の減少
により、また病変状態程度の著しい減少によって証明し
得る乾瘤症状態の著明な改善を示した。さらに連続的な
パンチ皮膚生検によって１分裂指数の低下、炎症性浸潤
の減少、脈管構造の著しい改善等、病変に関係する顕著
な組織学的変化を示す。

さらに２群の患者を対象にして、１群には上記の投与計
画によるこの発明の化合物を投与し、他の１群はプラシ
ーボだけを投与する、両群の病変程度をマツチングさせ
た二重盲検交差試験を繰り返すことにより効果を証明し
得る。

７、　　臨床試験Ｉ！＝アルツハイマー病（ＡＤ／ＳＤ
ＡＴ） ＤＳＭ−１［ダイアグノスティック・アンド・スタティ
スティカル・マニュアル・オン・メンタル・デイスオー
ダーズ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ａｎｄ　５ｔａｓｔｉ
ｃ−ａｌ　Ｍａｎｎｕａｌ　ｏｒ　Ｍｅｎｔａｌ　Ｄｉ
ｓｏｒｄｅｒｓ）、第３版］に規定された指標にしたが
い、ＡＤ／５ＤＡＴ型の軽度ないし中等度の痴呆を示す
と確認された６〜１０例の男女対象からなる試験群を用
いて試験を実施する。ただし重症の心脈管疾患、低血圧
（収縮期血圧＜１２０＞、重症の内分泌疾患、重症の肝
疾患、腎不全および／または吸収不良症候群の対象は除
く。

試験開始時に脳波および精神測定学的テストを行う、つ
いで患者はプラシーボまたは下記に示す試験薬物の投与
を受け、投与後６０分、１２０分および１８０分に脳波
および精神測定学的テストを繰り返す。

用いた精神測定は （ｉ）選択的連想テスト［ブシュケ、【セレクティプ・
リマインディング・フォー・アナリシス・オン・メモリ
ー・アンド・ラーニング（ＳｅｌｅｃｔｉｖｅＲｅｍｉ
ｎｄｉｎｇ　ｆｏｒ　Ａｎｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｍｅｍｏ
ｒｙ　ａｎｄ　Ｌｅａｒｎｉｎｇ）１、ジャーナル・オ
ン・バーパル・ラーニング・アンド・バーパル・ビヘイ
ビア（Ｊ、　Ｖｅｒｂａｌ　Ｌｅａｒｎｉｎｇａｎｄ　
Ｖｅｒｂａｌ　Ｂｅｈａｖｉｏｒ）、１２巻、５４３〜
５５０頁（１９７３年）］、 （ｉ　）　構成能力の測定［ムラモトら、「エフェクト
・オン・フィジオスティグミン・オン・コンストラクシ
ョナル・アンド・メモリー・タスクス・イン・アルツハ
イマーズ・デイシーズ（Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆＰｂｙｓｉ
ｏｓｔｉｇｎｉｎ　ｏｎ　Ｃｏｎ５ｔｒｕｃｔｉｏｎ　
ａｎｄ　Ｍｅｍｏｒｙ　Ｔａ５ｋｓｉｎ　Ａｌｚｈｅｊ
ｍｅｒ’ｓ　Ｄｉｓｅａｓｅ）」、アーカイブズ・オン
・ニューロロジー（Ａｒｃｈ、　Ｎｅｕｒｏｌ、）、３
６巻、５０１〜５０３頁（１９７３年）］、および（ｉ
）幾何学図形の記憶（ベントン改訂、視覚配路テスト） である。

試験期間中、患者はプラシーボまたはこの発明の化合物
、例えば実質上純粋なＺ−異性体形態である化合物Ｄ２
またはに１を、１日約４５０〜約１２００ｍｇ（経口）
を１回にまたは２〜３回に分割して投与される。

下記の追加的な指標を検査した。

血液学的検査：赤血球数、ヘモグロビン、ヘマトクリッ
ト、白血球数、白血球百分 率、沈降速度、血糖 尿　　　　　：アルブミン、グルコース血清　　　　：
アルカリン・フォスファターゼ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、５−
ＧＴ、Ｓ−ビ リルビン、５−Ｔ４，５−Ｔ３．５ −ＴＳＨ、クレアチニン 上記の投与量でこの発明の化合物の投与を受けた患者は
、プラシーボ投与を受けた患者と比較して、脳波成績お
よび精神測定学的な成績によって明白な病状の著明な改
善を示した。

８、　　臨床試験璽：カルシウム吸収−歯周囲疾患 歯周囲疾患を有する男女志願者を対象に試験を実施した
。この発明の化合物、例えば実質的に純粋なＺ−異性体
形態の化合物Ｄ２またはに１を、約４００〜１２００ｍ
ｇ／日（経口）の投与量で、１回に、または４回まで分
割して投与するか、あるいは疾患部位の歯肉に約０．５
または１．０〜約５．０ｍｇの投与量で各歯肉溝へ注射
することにより投与する。患者は毎週または週２回定期
的間隔で疾患の進行について検査を受ける。患者は約２
〜３週問連続して治療後、状態に著しい改善を示すこと
が判明した。

９、　　臨床試験■：退行性骨閏節疾患９２瘤性関節炎
または血清陰性のを椎関節炎または骨関節炎の何れかの
男女志願者を対象として試験を実施する。この発明の化
合物、例えば実質上純粋なＺ−異性体形態の化合物Ｄ２
またはに１を、約２００−１２００ｍｇ／日（経口）の
投与量で１回にまたは４回まで分割して、８週間投与し
た。

患者は２週間の定期的間隔で関節部の痛み感覚、スタイ
ンプルツカ−によるｔｌｌＩＩｉ的能力の評価、握力ま
たはりヒター指数のような疾患の進行について検査する
。８週間の処置期間経過後、患者は状態の著しい改善を
示すことが判明した。

先に特定したその他の疾患または状態（例えば筋肉タン
パク質分解、病的頻拍等を含む）に関しても、この発明
の化合物、特にそれぞれ実質上純粋なＺ−異性体形態の
化合物Ｄ２またはに１を。

前記記載のように同等または等価な投与量水準を適用し
て実施する試験において等価な結果が得られる。

言うまでもなく、この発明の方法を実施するのに必要な
毎日の投与量は、例えば特に選ばれたこの発明の化合物
、処置すべき特殊状態および所望する効果等さまざまな
要素の変化によって変わる。

しかしながら、−ａにこの発明の化合物を約１００ｍｇ
〜約２．０ｍｇまで、好ましくは約３５０ｍｇ〜約２．
０ｇまで、例えば約１．５ｇまでの１日投与量を１回に
または１日２〜４回に分割して、または持続性形態で経
口投与することにより満足すべき結果が達成される。し
たがって好適な単位用量形態は、約２５ｍｇ〜約１．０
ｇの活性成分を１またはそれ以上の製薬上許容し得る希
釈剤または担体とともに含有する経口投与形態である。

この発明の化合物を、例えば他の免疫抑制療法の補助薬
として、例えば前記に挙げた特殊疾患または状態の処置
に組合わせて投与する場合、併用する免疫抑制剤の投与
量は、採用した免疫抑制剤の種類（例えばステロイド剤
またはシクロスポリンかとか）、使用した特殊薬物、処
置すべき状態、所望する治療等によって変わることは言
うまでもない、しかしながら一般に、それら併用する免
疫抑制剤を、単独治療に使用する際に通常必要とする量
の８０％（例えば５０％）の投与量で併用免疫抑制剤を
投与することにより満足すべき結果が得られる。即ちシ
クロスポリンを併用免疫抑制剤として採用する場合、約
１〜約２５ｍｇ／ｋｇ／日（例えばシクロスポリンＡの
場合、約５〜約１５ｍｇ／ｋｇ／日）の投与量範囲で経
口的に患者に１回にまたは１日２〜３回に分割投与する
ことにより満足すべき結果が得られる。シクロスポリン
の静注投与を必要とする場合、例えば点滴で投与する場
合（例えば初期治療の場合）は、低投与量、例えば約０
．５〜約５．０ｍｇ／ｋｇ／日（例えばシクロスポリン
Ａの場合、初期投与量として約１〜約３ｍｇ／ｋｇ／日
、ｌｉ持量として約２ｍｇ／ｋｇ／日）が一般に好まし
い。

以上のことから、この発明はさらに ７、免疫抑制剤、例えば免疫抑制ステロイド剤または免
疫抑制剤シクロスポリン（例えばシクロスポリンＡ）を
、例えば先に説明した免疫抑制治療によって処置し得る
任意の疾患または状態の処置にこの発明の化合物の有効
量、例えばここに説明した投与量で併用することからな
る方法によって、免疫抑制治療を受ける患者の有効な処
置に必要な免疫抑制剤の投与量を減少させる方法 を提供し、さらに ８、免疫抑制方法、例えば（ａ）この発明の化合物およ
び（ｂ）免疫抑制剤、例えば免疫抑制ステロイド剤また
は免疫抑制剤シクロスポリン（例えばシクロスポリンＡ
）からなる第二の薬物の有効量を、そのような処置を必
要とする患者に投与することからなる、先に説明した任
官の特殊免疫疾患の処置を行う処置方法 を提供する。

この発明に使用する組成物は、この発明の化合物を製薬
上許容し得る希釈剤または担体と密に混和し、これを製
剤化し、あるいは都合よい投与を提供し、または可、能
とする剤形とすることにより調製することができる。

以下、この発明の固体組成物の調製について説明する。

［実施例］ 経口適用の固体組成物の調製 錠剤またはカプセル剤は、活性成分を通常の製薬上許容
し得る賦形薬、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム
、乳糖およびタルクのような不活性な希釈剤、例えばデ
ンプンおよびアルギン酸のような顆粒化剤および崩壊剤
、香料、着色剤および甘味剤、例えばデンプン、ゼラチ
ンおよびアラビアゴム等の結合剤、およびステアリン酸
マグネシウム、ステアリン酸およびタルク等の潤滑剤と
混和して含有し得る。

下記の実施例はカプセル形態の調製を例示的に示したも
のである。

成分　　　　　　重量／１力プセル 活性成分（例えば実質上純粋な Ｚ−異性体形態の化合物Ｄ２ またはＫｌ）　　　　　　　　　２００．００ｍｇ乳糖
（２００メツシユ）　　　　　１０９．７５ｍｇコーン
・スターチ　　　　　　　３５．００ｍｇ二酸化ケイ素 ［アエロジル２００（商標）１　　　１．７５ｍｇステ
アリン酸マグネシウム　　　　　３．５０ｍｇ全量３５
０．００ｍｇ 通常の製剤方法を用いて活性成分を密に混和し、硬ゼラ
チンカプセルに充填してカプセルを密封する。カプセル
重量は９７．０ｍｇ、充填したカプセルの重量合計は４
４７．０ｍｇである。

この発明の化合物はこの発明の用途に必要とする投与量
で良好な耐容性を示す。

即ち実質上純粋な２−異性体形態の化合物Ｄ２のマウス
およびラットにおける１４日閘経口投与（ｐ、ｏ、）お
よび７日間静注投与（ｉ、ｖ、）のＬＤ、。

は、マウス、ｐ、ｏ、１６２３ｍｇ／ｋｇ、ｉ、ｖ。

１６３ｍｇ／ｋｇ、ラット、ｐ、０．１７２１ｍｇ／ｋ
ｇ、ｉ、ｖ、５０ｍｇ／ｋｇである。

ピーグル犬でこの化合物の２００ｍｇ／ｋｇ／日の高投
与量を２６週間投与したときの全般的な耐容性は良好で
あることが判明した。

実質上純粋なＺ−異性体形態の化合物に１の場合、ピー
グル犬を使用したパイロット的な毒性試験で、１５０お
よび２００　ｍ　ｇ／ｋ　ｇ　（ｐ、ｏ、）の投与量を
、ゼラチンカプセルで５週問およびオリーブ油に溶かし
て６〜８３１！問投与し何ら病理学的な影響は認められ
なかった。

製薬上許容し得る酸付加塩形態は遊離酸と同一または同
水準の耐容性／活性を示す。

特許出願人　サンド・アクチェンゲゼルシャフト代理人
　弁理士前　山　葆　ほか１名

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. （１）α−［１０−オキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］シ
   クロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イリデン］
   −カルボン酸類、または生理学的に加水分解でき生理学
   上許容し得るそのエステル類、または製薬上許容し得る
   その塩類を活性成分として含有し、抗炎症または解熱手
   段以外の治療手段としてモノカイン阻害を発現するのに
   使用する組成物。
2. （２）上記モノカインがインターロイキン−１である特
   許請求の範囲第１項記載の組成物。
3. （３）外因性ないし内因性傷害の処置に使用される特許
   請求の範囲第１または２項の何れか１項記載の組成物。
4. （４）免疫抑制を誘導し、またはこれを発現するのに使
   用する特許請求の範囲第１または２項の何れか１項記載
   の組成物。
5. （５）組織カルシウムの欠乏、または骨または軟骨の変
   性過程を処置するのに使用する特許請求の範囲第１また
   は２項の何れか１項記載の組成物。
6. （６）線維症または線維症様状態の処置に使用する特許
   請求の範囲第１または２項の何れか１項記載の組成物。
7. （７）腫瘍進入または腫瘍の増殖に随伴した症状の処置
   または支持的ないし補助的処置、またはクロイツフェル
   ド・ヤコブ病、アルツハイマー病、病的傾眠、痛風、内
   毒素ショックまたは表皮水疱症の処置に使用する特許請
   求の範囲第１または２項の何れか１項記載の組成物。
8. （８）免疫抑制を発現する免疫抑制剤と併用される特許
   請求の範囲第１項記載の組成物。
9. （９）免疫抑制剤の投与量を減少させる特許請求の範囲
   第８項記載の組成物。
10. （１０）α−［１０−オキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］
    シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフエン−４−イリデン
    ］−カルボン酸が、下式（ I ａ） ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１は水素、Ｃ＿１＿〜＿４アルキルまたは
    フェニル−（Ｃ＿１＿〜＿４アルキル）、 Ｒ＿２は水素またはＣ＿１＿〜＿４アルキルであって、
    Ａ環は置換されず、またはハロゲンまたはヒドロキシで
    置換されている］ で示される化合物または生理学的に加水分解でき生理学
    上許容し得るそのエステル、または製薬上許容し得るそ
    の塩である特許請求の範囲第１〜９項の何れか１項記載
    の組成物。
11. （１１）α−［１０−オキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］
    シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イリデン
    ］−カルボン酸が、下式（ I ｂ） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿３は水素またはＣ＿１＿〜＿４アルキル、
    Ｒ＿４はハロゲンである） で示される化合物または生理学的に加水分解でき生理学
    上許容し得るそのエステル、または製薬上許容し得るそ
    の塩である特許請求の範囲第１〜９項の何れか１項記載
    の組成物。
12. （１２）α−［１０−オキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］
    シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イリデン
    ］−カルボン酸または生理学的に加水分解でき生理学上
    許容し得るそのエステルが （Ａ）［１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］シク
    ロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イリデン］−
    酢酸エチルエステル、 （Ｂ）［７−クロロ−１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［
    ４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−
    イリデン］酢酸エチルエステル、 （Ｃ）［６−ヒドロキシ−１０−メトキシ−４Ｈ−ベン
    ゾ［４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−
    ４−イリデン］−酢酸エチルエステル、（Ｄ）［１０−
    メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］シクロヘプタ［１，
    ２−ｂ］チオフェン−４−イリデン］−酢酸、 （Ｅ）［１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］シク
    ロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イリデン］−
    酢酸メチルエステル、 （Ｆ）［７−クロロ−１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［
    ４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−
    イリデン］−酢酸、 （Ｇ）［６−ヒドロキシ−１０−メトキシ−４Ｈ−ベン
    ゾ［４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−
    ４−イリデン］−酢酸、 （Ｈ）［１０−ヒドロキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］シ
    クロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イリデン］
    −酢酸、 （Ｊ）［２−クロロ−１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［
    ４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−
    イリデン］−酢酸エチルエステル、 （Ｋ）［２−クロロ−１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［
    ４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−
    イリデン］−酢酸 から選ばれた化合物または製薬上許容し得るその塩であ
    る特許請求の範囲第１〜１１項の何れか１項記載の組成
    物。
13. （１３）α−［１０−オキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］
    シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イリデン
    ］−カルボン酸が［１０−メトキシ−４Ｈ−ベンゾ［４
    ，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イ
    リデン］酢酸または製薬上許容し得るその塩である特許
    請求の範囲第１０項記載の組成物。
14. （１４）α−［１０−オキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］
    シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イリデン
    ］−カルボン酸が［２−クロロ−１０−メトキシ−４Ｈ
    −ベンゾ［４，５］シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフ
    ェン−４−イリデン］酢酸または製薬上許容し得るその
    塩である特許請求の範囲第１１項記載の組成物。
15. （１５）α−［１０−オキシ−４Ｈ−ベンゾ［４，５］
    シクロヘプタ［１，２−ｂ］チオフェン−４−イリデン
    ］−カルボン酸または生理学的に加水分解でき生理学上
    許容し得るそのエステル、または製薬上許容し得るその
    塩が純粋もしくは実質上純粋なシス型形態である特許請
    求の範囲第１〜１４項の何れか１項記載の組成物。