JPH01110685A - 寄生虫駆除薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は寄生虫駆除薬、詳細にはミルベマイシン（ｍｉ
ｌｂｅ輪ｙｅｉｎｓ）関連化合物であって、２５−位に
新規なｙ１換基を有するもの、およびそれらの製法に関
する。

（従来の技術） ミルベマイシンはアベルメクチン（ａｖｅｒｍｅｃｔｉ
ｎｓ）に関連するが、１３−位に糖残基を欠如する点で
＼ それらと異なる一群の広域寄生虫駆除薬である。

本発明は詳細には微生物の菌株ストレプトミセス・シア
ネオグリセウス　ｓｓｐノンシアノゲヌス（ＳＬｒｅ　
　ｔｏｗ　　ｃｅｓ　　　ｃ　　ａｎｅｏ　　ｒｉｓｅ
ｕｓ　　　５ｓｎｏｎｅａｎｏｅｎｕｓ）ＮＲＲＬ　　
１５７７３またはストレプトミセス・サーモアーケンシ
ス（ＳｔｒｅｔＯ輸ｅｅ９ｔｈｅｒ＋ａｏａｒｃｌ＋ａ
ｅｎｓｉｓ）ＭＣＩ　８１２０１５の発酵により産生さ
れる、２５−位の置換基中に存在する不飽和を特色とす
るミルベマイシン亜群に関する。菌株Ｎ　ＲＲＬ　　１
５７フ３およびＮＣＩ　Ｂ　１２０１５の形態学的特性
および培養上の特性は欧州特許出願第０１７０００６号
および英国特許出願第２１６６４３６Ａ号明細書にそれ
ぞれ詳述されている。これら明細書のうちの１番目のも
のにはＬＬ　−Ｆ　２８２４９α−νと表示される１３
Ｆｌの各ミルベマイシンの分離法および識別法が記載さ
れ、２番目のものには５５４１因子Ａ−Ｆと表示される
６種の成分の複合体が記載されている。

本出願人による欧州特許出願第０２１４７３１号にはア
ベルメクチン産生菌の発酵に際しカルボン酸またはそれ
らの誘導体を添加することによる、２５−位に修飾され
た基を有する新規なアベルメクチンの製法が記載されて
いる。

（発明の構成） 本発明者らは、特定のカルボン酸またはそれらの誘導体
を上記ミルベマイシン産生菌の発酵に添加することによ
り、複合体Ｌ　Ｌ　−Ｆ　２８２４９および５５４１に
関連するが、２５−位に天然には存在しない置換基を含
む新規化き物が得られることを見出した。

ところが窓外にもこの基はアベルメクチンの場合のよう
に２５−位に直結しているのではなく、２−プロペニル
基を介して結合している。

これらの新規化合物は活性の高い寄生虫駆除薬であり、
駆虫薬、体外寄生虫駆除薬、殺昆虫薬およびダニ駆除薬
として特に有用である。

これらの化合物から更に別の誘導体を製造するためには
、通常の化学変換反応を採用しうる。

従って本発明によれば、構造式（１） （式中Ｒは水素原子でありかつＲ１は水酸基であるか、
またはＲおよびＲ１は一緒になってオキソ基であり； Ｒ２はＣ１Ｃｓの直鎖もしくは分枝鎖アルキル基、アル
ケニル基もしくはアルキニル基であり、これらは酸素原
子もしくはイオウ原子を鎖の一部として含んでいてもよ
く、またはＣ３ＣＩのシクロアルキル基もしくはシクロ
アルクニル基、または３〜６員の酸素もしくはイオウ含
有複素環であり、この複素環は飽和であっても、完全も
しくは部分的に不飽和であってもよく、かつ１個もしく
は２ｇ以上のＣ，−Ｃ，アルキル基もしくはハロゲン原
子により置換されていてもよく； Ｒ３はメチル基またはエチル基であり；Ｒ４は水素原子
またはメチル基であり；Ｒ５は水素原子もしくは水酸基
でありかつＲ６はメチル基もしくはヒドロキシメチル基
であるか、または２個の基Ｒ５およびＲ６は一緒になっ
て−０−ＣＨ２−であり； Ｒ７は水素原子、メチル基またはエチル基であり；そし
て Ｒ＠は水素原子またはハロゲン原子であり；ただしＲ２
が分枝鎖アルキル基である場合、これはイソプロピル基
ではない）を有する化合物が提供される。

上記の定義においてハロゲンはフッ素、塩素、臭素また
はヨウ素を意味する。

好ましい一部の化合物は構造式（ＩＩ）υに１ （式中、Ｒ２およびＲ４は先に定義したものである）を
有する。

特に好ましいものは、Ｒ２が、（１−メチルチオ）エチ
ル、２−ペンタ−４−エニルまたは２−ブチルである式
（Ｉｔ）の化合物である。

本発明によれば、Ｒ６が水素原子である式（１）の化合
物は、ミルベマイシン産生菌の菌株、ストレプトミセス
・シアネオグリセウス　ｓｓｐ　　ノンシアノゲヌスＮ
　ＲＲＬ　　１５７７３またはストレプトミセス・サー
モアーケンシスＮＣＩ　Ｂ　１２０１５を式Ｒ”Ｃ０２
Ｈ（Ｒ”は先に定義したものである）の適宜なカルボン
酸、またはそれらの塩、エステルもしくはアミド、また
はそれらの酸化的前駆物質の存在下に発酵させることに
より産生される。

これらの酸は接種時に、または発酵中に適当間隔で発酵
物に添加される０式（１）の化合物の生成は発酵物から
試料を取出し、有機溶剤で抽出し、式（１）の化合物の
出現をクロマトグラフィーにより、たとえば高圧液体ク
ロマトグラフィーにより追跡することによって監視でき
る０式（１）の化合物の収率が最大限となるまで、一般
に４〜６日間、インキュベーションを続ける。

カルボン酸またはそれらの誘導体の好ましい添加Ｉはそ
れぞれ０．０５〜１０ｇ／ｌである０式（１）の化合物
の最良の収率は、発酵に際して酸を徐々に添加すること
により、たとえば上記の酸またはそれらの誘導体を数日
間にわたって毎日添加することにより得られる。上記の
酸は好ましくは塩類、・たとえばナトリウム塩またはア
ンモニウム塩として添加されるが、エステル、たとえば
メチルもしくはエチルエステルとして、またはアミドと
して添加してもよい０発酵に用いられる他の基質は、上
記カルボン酸の酸化的前駆物質であり；たとえば適切な
基質は式Ｒ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈのアミノ酸、式Ｒ
２ＣＯＣＯｔ　Ｈのグリオキシル酸、式Ｒ”ＣＨ，ＮＨ
，のメチルアミン誘導体、式％式％） の置換低級アルカン酸、式Ｒ”ＣＨ２０Ｈのメタノール
誘導体、または式Ｒ２ＣＨＯのアルデヒドである。これ
らの式中Ｒ２は先に定義したものである０発酵に用いら
れる培地は、同化可能な炭素、窒素およびその他の微量
元素の供給源を含む通常の複合培地であってよい。

好ましくは２４〜３３℃の温度で数日間の発酵ののち、
発酵ブロスを遠心分離またはｒ過し、菌糸体ケークをア
セトンまたはメタノールで抽出する。溶剤抽出物を濃縮
し、次いで水と非混和性の有機溶剤、たとえば塩化メチ
レン、酢酸エチル、クロロホルム、ブタノールまたはメ
チルイソブチルケトン中へ目的生産物を抽出する。溶剤
抽出物を濃縮し、式（１）の化合物を含有する粗生成物
をさらに必要に応じクロマトグラフィーにより、たとえ
ば調製用逆相高圧液体クロマトグラフィーにより精製す
る。

生成物は一般４：ｌ：Ｒ，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ’、Ｒ’、Ｒ
’、Ｒ’およびＲ７が先に定義したものであり、Ｒ“が
Ｈである式（１）の化合物の混合物として得られる；な
だし各成分の割合は用いる個々の生物、用いるカルボン
酸および用いる条件に応じて異なる可能性がある。

Ｒ”Ｃ０２Ｈにより定められる広範なカルボン酸を発酵
に際し添加して、２５−位に新規な置換基をもつミルベ
マイシン誘導体が得られることを見出した。使用できる
個々の酸には下記のものが含まれる。

２−メチルペンタ−４−エン酸 ２−メチル酪酸 ２−メチルチオプロピオン酸 本発明の詳細な好ましい一観点においては、発酵が２−
メチルチオプロピオン酸ナトリウム塩の存在下で行われ
、主としてＲ２が（１−メチルチオ）エチルであり、Ｒ
４がＨである式（ＩＩ）の化合物を与える。

本発明の他の好ましい観点においては、発酵が２−メチ
ル醋酸ナトリウム塩の存在下で行われ、主としてＲ２が
２−ブチルであり、Ｒ４がＨまたはメチルである式（■
）の化合物が得られる。

本発明の他の好ましい観点においては、発酵が２−メチ
ルペンター４−エン酸ナトリウム塩の存在下で行われ、
主としてＲ２が２−ペンター４−エニルであり、Ｒ４が
Ｈである式（ＩＩ）の化合物が得られる。

ＲｅがＨである式（１）の化合物は文献記載の方法によ
りＲ１がハロゲン原子である対応する化合物に変換する
ことができる。この反応はまず５゜６．８ａおよび２３
−位に存在する各水酸基をたとえばｔ−ブチルジメチル
シリルオキシアセチル誘導体として保護したのち、たと
えばＮ−ブロムスクシンイミドを用いて光の存在下に１
３−位をハロゲン化し、次いで脱保護することにより行
われる。あるいはこの処理は、１４．１５二重結合を過
酸、たとえば鵬−クロル過安息香酸により酸化すること
によって行われる。５，６．８ａおよび２３−位に存在
する水酸基をたとえばｔ−ブチルジメチルシリル誘導体
として保護し、この化合物をあらかじめ形成したアジ化
水素酸（ＨＮ　ｆｆ）とトリエチルアルミニウムの錯体
で不活性溶剤中において処理すると、１５−ヒドロキシ
−Δ１コ・＋４−ミルベマイシン誘導体が得られる０次
いでこの化合物を適宜なハロゲン化剤、たとえば三臭化
リンで処理することにより１３−ハロゲノミルベマイシ
ンに変換して、１３−ブロム誘導体を得る。これらの工
程ならびに適宜な試薬および反応条件は欧州特許出願第
０１８４９８９号明細書に記載されている。

八日化合物は有効な寄生虫駆除薬であるほか、対応する
アベルメクチン誘導体の製造のための中間体としても使
用できる。たとえば保護されたハロ誘導体を酢酸中の酢
酸ナトリウムの混合物で処理することにより１３−アセ
トキシ誘導体に変換する。後続の水酸化ナトリウムとの
反応によって１３−ヒドロキシミルベマイシンが得られ
、これに三糖類のアセトハロ誘導体を反応させてＬ−オ
レアンドロシル−α−Ｌ−オレアンドロシルオキシ基を
結合させることができる０次いでこの生成物を最終的に
脱保護して、アベルメクチンを得る。

これらの工程ならびに適宜な試薬および反応条件は米国
特許第４０９３６２９号および英国特許第１５７９１１
８号明ａｔ書に記載されている。この方法により製造さ
れるある種のアベルメクチン生成物はこれまで得られて
いない新規化合物である。

ＲとＲ′が一緒になってオキソ基である式（！）の化合
物は生物ストレプトミセス・サーモアーケンシスＮ　Ｃ
Ｉ　Ｂ　１２０１５またはその変異体を英国特許出願第
２１７６１８２Ａ号明ＭＡ書の記載に従って発酵させる
際に得られる生成物の混合物から分離でき、またはこれ
らはＲがＨであり、Ｒ１がＯＨである対応する式＜１）
の化合物を酸化することにより得られる。酸化を行うの
に適した試薬および方法は英国特許出願第２１７６１８
２Ａ号明細書に記載されている Ｒ４がＨである式！の化合物もＲ４がＣＨ，である対応
する化合物から脱メチル化により製造できる。この反応
は５−メトキシ化合物または適切に保護されたそれらの
誘導体を酢酸水銀で処理し、得られた３−アセトキシエ
ノールエーテルを希酸で加水分解して５−ケト化合物を
得ることにより行われる０次いでこれをたとえば水素化
ホウ素ナトリウムにより還元すると、５−ヒドロキシ誘
導体が得られる。これらの工程に適した試薬および反応
条件は、米国特許第４４２３２０９号明細書に記載され
ている。

本発明の化合物は駆虫薬、外部寄生虫駆除薬、駆虫薬お
よびダニ駆除薬として特に有用である。

たと・えばこれらの化合物は、体内寄生虫によって引き
起こされる各種状態の治療に有効であり、これには特に
、線虫と呼ばれる一部の寄生虫によって起こることが最
も多く、ブタ、ヒツジ、ウマおよびウシに著しい経済的
損失を与え、かつ家畜および家禽に影響を与える可能性
のあるぜん（嬬）重症が含まれる。これらの化合物は種
々の動物種に影響を与える他の線虫に対しても有効であ
り、これにはたとえばイヌにおけるジロフイラリア属（
Ｄ　１ｒｏｆ工Ｉａｒｉａυ、およびヒトに感染する可
能性のある胃腸管寄生虫を含む各種寄生虫、たとえば鈎
生成（Ｎ咳れ坦販吐）、鉤生成（遼ｅｃａＬｏｒ）　＋
蛎生成（Ａ　５ｃａｒｉｓ）　ｒストロンギロイデス属
（Ｓ　Ｌｒｏｎ　　１ｏｉｄｅｓ　、旋毛生成（Ｔ　ｒ
ｉｃｌ＋　１ｎｅｌ　ｌａ＞　、カビラリア属（ｑ」１
ｉｕ１Ｌｉ２）　、　＄１！　！ｉｔ属（Ｔｒｉｃｂｕ
ｒｉｑつ、焼生成（旦」１幻四ｌ暉す→、ならびに血液
または池の組織および器官中に見出される寄生虫、たと
えば糸状生成寄生虫、ならびにストロンギロイデス属お
よび旋毛生成の腸管外期のものが含まれる。

これらの化り物は体外寄生虫感染の治療にも有効であり
、これには特に、動物および鳥類の節足動物系寄生虫、
たとえばマダニＱ　１ｃｋ）、ダニ（ｍｉＬｅ）、シラ
ミ、ノミ、キンバエ（クロバエ）；ウシおよびウマに影
響を及ぼす可能性のある刺咬性昆虫および移動性の双翅
目昆虫の幼虫がよまれる。

これらの化合物は家庭内害虫、たとえばゴキブリ、イガ
（ｃｌｏｔｌ＋ｅｓ　　＋＊ｏＬｌ＋）、カツオンシム
シ（ＣαｒｐｅＬＬ＋ｅｅＬｌｅ）およびイエバエに対
して有効な殺駆虫薬でもあり、かつ貯蔵穀物ならびに農
業および園芸作物の有害昆虫、たとえばクモ、ダニ、ア
リマキ、チョウおよびガの幼虫（ｃａｔｅｒｐｉｌｌａ
ｒ）、雑食性アリ（ｆｉｒｅ　　ａｎｔ）、シロアリに
対して、また移動性の直翅類昆虫、たとえばバッタに対
しても有用である。

式（１）の化合物は意図する個々の用途に、ならびに処
置される宿主動物の個々の種および関与する寄生虫また
は昆虫に適した配合物として投与される。駆虫薬として
はこれらの化合物は経口的にカプセル剤、大丸薬、錠剤
または好ましくは液状飲薬の形で投与することができ、
あるいはこれらは注射により、または埋込み剤として投
与することができる。これらの配合物は常法により標準
的獣医業務に従って調製される。たとえばカプセル剤、
大丸薬または錠剤は、さらに崩壊剤および／または結合
剤と含有する適切な微粉状の希釈剤またはキャリヤー、
たとえばデンプン、乳糖、タルク、ステアリン酸マグネ
シウムと有効成分を混合することにより製造できる。飲
薬配合物は有効成分を水溶液中ｌ＼分散剤または湿潤剤
などと共に分散させることにより調製できる。注射用配
合物は無菌液剤の形で調製することができ、これは池の
物質、たとえば液剤を血液と等張にするのに十分な塩類
またはグルコースを含有してもよい、これらの配す物は
有効化り物の重量に関して、処置すべき宿主動物、感染
の程度および種類、ならびに宿主の体重に応じて異なる
であろう、一般に経口投与のためには約０．００１〜１
０＋ｓｇ／に！？（動物の体！Ｉりの用量を一回量とし
て、または１〜５日間の分割量として投与するのが好ま
しいと思われるが、もちろんこれより高いかまたは低い
用量範囲が指示される場合もありうる。これらも本発明
の範囲に含まれる。

別法として、これらの化合物を動物用銅Ｆ１と共に投与
することもでき、この目的のなめには濃縮された飼料用
の添加物またはプレミックスを、普通の動物用飼料との
混合用として調製することができる。

殺虫剤として用いるためには、また農業有害生物を処理
するためには、これらの化合物を標準的な農業実務に従
って噴霧剤、散粉剤、乳剤などとして施す。

ヒトに用いるためには、これらの化合物を標準的な医療
実務に従って薬剤学的に受容できる配合物として投与す
る。

本発明を下記の実施例により説明する。実施例１〜５は
式（１）の化合物のｖＪ造を示す例であり、実施例６お
よび７はこれらの化合物の寄生虫駆除活性および殺虫活
性を示す、ミルベマイシンＡ。

およびミルベマイシンＢ２という表示は、式（ＩＩ）の
天然ミルベマイシン（抗生物質Ｂ−４１）であるが、た
だし２３−位の水酸基を欠如し、２５−位にメチル基を
有し、Ｒ４がそれぞれ水素原子またはメチル基であるも
のを意味する。

実施例１ ２３−ヒドロキシ−２５−デスメチル−２５−（１−メ
チル−３−メチルチオ−ブタ−１−エニル）ミルベマイ
シンＡ３（式■；Ｒ’＝Ｈ，Ｒ”＝ＣＨ３ＣＨ（Ｓ　Ｃ
Ｈ３）　　） え、えユ）９−１＝７．、シアネーグ１セウス　５ｓｐ
２Ｌン」ムア、仁ゲ」Ｌ区−ＮＲＲＬ　１５７７３の凍
結菌糸イ本調製物を、グルコース（ｌｆＩ）、醸造家の
可溶成分（ｄｉｓＬｉｌｌｅｒｓ　　５ｏｌｕｂｌｅｓ
）（０，７５ｙ）および酵母エキス（０，２５ｆＩ）を
含有する培地５０ｎｌに接種し、２８℃で２日間、撹拌
下にインキュベニトした。この培養物を用いて、上記と
同じ培地６００社を入れた３１のフラスコに接種し、こ
れを上記と同様にさらに２日間インキュベートした。こ
の培養物（１００ｍｌ）を用いて、５１の発酵槽に入れ
た下記組成の培地２．５１に接種した。

グルコース（６８，５９）、ドルソイ（Ｔｒｕｓｏｙ）
粉末（３１，２５ＦＩ）Ｊウキビ糖密（ｃａｎｅ　　ｎ
ｏｌａｓｓｅｓ）　（３，７５ｇ）、リン酸水素二カリ
ウム（０，３７５ｇ）　、炭酸カルシウム（３，１２５
ｙ）、およびＮ−モルホリノプロパンスルボン酸（２５
ｙ＞、Ｑ静物は２８℃で１２００ｒｐｍの撹拌および２
．５１７分の通気下にインキュベートされた。

２４時間のインキュベーション後に２−メチルチオプロ
ピオン酸（ｌｙ）を添加し、さらに１２０時間発酵を続
けた。菌糸体を枦取し、アセトン（１，５１）　、次い
で塩化メチレン（１，５／）で抽出した。

上記による発酵６回分からの塩化メチレン抽出液を会わ
せて濃縮乾固し、粗生成物を暗色ゴム状物として得た。

この物質を塩化メチレンおよびヘキサン（１：４）の混
な物に溶解し、塩基性アルミナ（１６０ｆＩ）のカラム
に添加した。カラムを同一組成の溶剤４００＋ａ１で溶
離した０次いでシラン、をメタノールで溶離して、１０
０＋＊ｌの画分を採取した０両分１〜４をきわせて濃縮
して、部分精製された物質（１５，８ｇ）を黄色の油と
して得た。この油をイソオクタン（１００＋ａｉ’）と
メタノール（５０ｍｌ）の間で分配した。メタノール層
を分離し、水（１００ｍｌ）を添加した。この混合物を
塩化メチレン（２×５０ｍ１）で抽出し、下層を無水硫
酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、部分精ｆＲされ
た生成物を油（１０ｇ）として得た。この物質を塩化メ
チレンおよび酢酸メチル（３：１）の混合物に溶解し、
シリカ（２５０ｇ）のカラムに添加した。カラムを同一
組成の溶剤で溶離し、５０−１の画分を採取した。

目的生成物を含有する両分を分析用ＩＩ　Ｐ　Ｌ　Ｃに
より同定し、きわせて濃縮し、重積製ミルベマイシン誘
導体を得た。この物質（１５０ｍｇ）をさらに０１８ゾ
ルパツクス０ＤＳ（Ｃ１８Ｚｏｒｂａｘ　　ＯＤＳ。

商標、デュポン）カラム（２１ｍｍＸ２５ｃ輪）上でメ
タノールおよび水（７８：２２）の混合物により９繭１
／分の流Ｉで溶離するクロマトグラフィーにより精製し
た。７０分付近で採取された両分を会わせて溶剤を蒸発
させ、Ｒ２が（ｌ−メチルチオ）エチルであり、Ｒ４が
Ｈである式（ＩＩ）の化合物を白色粉末として得た。融
点１２０〜１２２℃、生成物の構造は質Ｉ分析およびＣ
１３核磁気共鳴スペクトル分析により下記のとおり確認
された。

高速原子ボンバードメント質量分析、（ｆａｓｔａｔｏ
ｍ　　ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ　　ｍａｓｓ　　ｓｐｅ
ｃＬｒｏｍｅｔｒｙ）はＶＧモデル７０７０Ｅ質量分析
器によりグリセロール、チオグリセロール、水および塩
化ナトリウムの試料マトリックスを用いて行われた。（
Ｍ＋Ｎａ”　）はｍ／ｅ６６７に認められた（理論値６
６７）。

電子衝撃型質量分析（ｅｌｅｃｔｒｏｎ　　ｉｍｐａｃ
ｔ　　ｍａｓｓｓｐｅｅｔｒｏｍｅｔｒｙ）はＶＧモデ
ル７０７０Ｆ質量分析器を用いて行われた。主断片のｔ
５７ｅ値は６４４（Ｍ”　）、６２６，６０８，５７９
，５６１，４９８，４８０，４５０，３５４，３１５゜
１８５．１５１であった。

Ｃ１３核磁気共鳴スペクトルデータはニコレット（Ｎ　
１ｃｏｌｅＬ）Ｑ　Ｅ　３００スペクトロメーターによ
り、ジューテロクロロホルム中２０　ｍｙ／　ｍｌの試
料濃度を用いて得られた。テトラメチルシランに対する
化学シフト（ｐｐｍ）は以下のとおりであった。

１１．６，１４．’０（分解されない２信号）、１５．
６．１９．９゜２０．８．２２．３．３４．８．３５．
９．３６．０．３Ｇ、２．３８．４゜４０．８．４１．
２．４５．８．４８．５．８７．７（分解されない２信
号）、６８．５．６８．７．６９．１．７６．６．７９
．３．８０．３．９！１．８゜１１８．０．１２０．２
．１２０．４．１２３．４．１３２．６．１３４．１゜
１３７．４．１３８．０．１３９．５．１４２．８．１
７３．−４゜実施例２ ２３−ヒドロキシ−２５−デスメチル−２５−（１，３
−ジメチルベンターｌ−エニル）ミルベマイシンＡ３（
式ｎ　、　Ｒ’　＝　Ｈ、Ｒ２＝　ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（
ＣＨ３）） ２−メチル醋酸を基質として用いた点以外は実施例１の
条件に従った。２．５１の発酵は１２回分から得た塩「
ヒメチレン抽出液を蒸発させて褐色の油（２７，２ｇ）
を得た。これをジクロルメタンおよび酢酸エチル（４：
ｌ）の混合物に溶解し、シリカ（２５０ｇ）のカラムに
添加することにより部分精製した。カラムを同一組成の
溶剤で溶離し、５０＋ａ１の画分を採取した０画分４お
よび５を合わせて実施例３に用い、表題の化合物を含有
する両分７〜１１（薄層クロマトグラフィーにより同定
）をきわぜて蒸発させ、重積製ミルベマイシン誘導体（
２，７３ｇ）を得た。この物質をさらにダイナマックス
６０−ＡＣ−１８（Ｄｙｏａｍｕｘ　　６０−Ａ　　Ｃ
−１８、商標、レイニン（Ｒａｉ＋＋１ｎ））カラム（
４１Ｘ　２５０＋ａｍ）上で水およびメタノール（１：
４）の混合物により溶量するクロマトグラフィーによっ
て精製した。最終積装はＣ１８ゾルパックス（Ｚ　ｏｒ
ｂａｘ）　ＯＤ　Ｓ　（商標、デュポン）カラム（２１
１論×２５ｃ輪）上で水およびメタノール（１：４）の
混合物により９ｎｌ１分の流量で溶離するクロマトグラ
フィーによって行われた、９０分付近で採取された両分
をきわせて溶剤を蒸発さ１、Ｒ２が２−ブチルであり、
Ｒ４がＨである式（ＩＩ）の表題化合物を融点１２５〜
１２８℃の白色粉末として得た。生成物の構造は質量分
析、ならびにＣ１３およびプロトン核磁気共鳴スペクト
ル分析により下記のとおり確認された。

高速原子ボンバードメント質量分析はＶＧモデル７０７
０Ｅ質量分析器により、グリセロール、チオグリセロー
ル、水および塩化ナトリウムの試１：１マトリックスを
用いて行われた。（Ｍ十Ｎａ”　）は＋情／ｅ６４９に
コ２められた（Ｔ！Ｉｔ論値６’４９）。

を子ｖＲａ型質量分析ハＶ　Ｇ−Ｔ＝デル７０７ＯＦｆ
ｆ量分析器を用いて行われた。主要断片のＩＩ／ｅ値は
６２６　（Ｍ　”　）　、６０８，５９０，４８０，４
６２，４２５，３５４，３１４，２４８゜１５１であっ
た。

Ｃ１３核磁気共鳴スペクトルデータはニコレットＱＥ３
００スペクトロメーターにより、ジューテロクロロホル
ム中２０　ｍｇ／　ｍｌの試料濃度を用いて得られた。

テトラメチルシランに対する化学シフト（ｐｐｍ）は以
下のとおりであった。　１１．５゜１２．１，１４．１
．　１５．７．　２０．１．　２０．４．　２２．４．
　３０．２゜３３．８．　３４．９．　３６．１．　３
６．２．　３６．３．　４０．９．　４１．３゜４５：
８．　４８．６．　６７．８．　６７．９．　６８．６
．　ｅｓ、ｅ、　　６９．５゜７６．８．　７９．４．
　８０．３．　９９．９．　１１８．２．　１２０．４
．　１２３．５゜１３１．６，１３８．２，１３７．５
，１３８．０，１３９．５，１４２．９゜１７３．５゜ 生成物のプロトン核磁気共鳴スペクトルデータはニコレ
ットＱＥ３００スペクトロメーターにより、ジューテロ
クロロホルム溶液中の試料を用いて得られた。テトラメ
チルシランに対する特徴的信号の化学シフトは以下のと
おりであった。５．８５−５．７（ｍ、２１１）、　５
．４５（ｂｓ、１ｌｌ）、　５．４５−５．２５（ｍ、
２Ｈ）。

５．２０（ｄ、ｉｌｌ＞、　４．９８（噛、１１１）、
　４．７０（鍋、２１１）、　４．３２（ｔ。

１１り、　　３．９９（ｄ、ｌ１ｌ）、　　３．９０（
ｓ、ＩＩＩ）、　　３．８０（ｄ、ＩＩＩ）、３．６１
（ｄ、ＩＩＩ）、　３．３０（ｍ、１ｌｌ）、　１．９
０（ｂｓ、３１１）、　１．６４（ｓ、３１１）；１．
５６（ｓ、３１１）　、　１．０３（ｄ、３Ｈ）　、　
０．８４（ｄ、３Ｈ）　。

実施例３ ２３−ヒドロキシ−２５−デスメチル−２５−（１，３
−ジメチルペンタ−１−エニル）ミルベマイシンＢ２（
式ｎ　、　Ｒ’　＝　ＣＨ３、Ｒ”　＝　ＣＨ３ＣＨ２
ＣＩ−（（ＣＨ２＞−） 実施例２で得た画分４および５を合わせて蒸発乾固させ
、残渣２．２５．を得た。これを２回に等分してグイナ
マックス６０−Ａ　　Ｃ−１８（商標、レイニン）カラ
ム（４１Ｘ２５０輪論）上でメタノールおよび水（８５
：１５）の温き物により４５ｍ１／分の流量で溶層する
クロマトグラフィーによってさらに精製した。７０分付
近で溶出する、表題化ａ物を含有する両分をきわせて溶
剤を蒸発させ、重積装された上記ミルベマイシンを得た
。この物質をさらにシリカゲル上でジクロルメタンおよ
び酢酸エチル（４：　１　）の混合物により溶離するカ
ラムクロマ１−グラフィーにより精製し、最後にウルト
ラスフェア−ＯＤ　Ｓ　（Ｕ　Ｉｔｒａｓｐｌ＋ｅｒｅ
　−ＯＤ　Ｓ、商標、ベックマン）カラム（１０Ｘ２５
０ｍｍ）を用いてメタノールおよび水（７２：２８＞の
混合物により４　ｍｌ１分の流量で溶離する高圧液体ク
ロマトグラフィーによって精製した。７０分付近で溶出
する両分が純粋な表題化合物を含有し、蒸発乾固された
。生成物の構造はＶＧモデル７０７０Ｅ質量分析器によ
りトリゴール（ｔｒｉｇｏｌ）、テトラゴール（ｔｅＬ
ｒａｇｏｌ）、水および塩化ナトリウムの試料マトリッ
クスを用いて確認された。（Ｍ十Ｎａ”　）はｍ／ｅ６
６３に認められた（Ｆｌｌ論値６６３）。

実施例４ ２３−ヒドロキシ−２５−デスメチル−２５−（１，３
−ジメチル−ヘキサ−１，５−ジェニル）ミルベマイシ
ンＡ２（式１１．Ｒ’＝Ｈ，Ｒ２＝ＣＨ，＝ＣＨＣＨ２
ＣＨ（ＣＨ３）　　） ２−メチルペンタ−４−エン酸を基質として用いる点以
外は実施例１の条件に従った。　２．５Ｎの発酵１２回
分から得た粗抽出物（３０ｇ）をアルミナ（活性、中性
、ブロックマン等級１、Ｂ　Ｄ　Ｈケミカルズ社、５０
０ｇ）を用いて、まずヘキサンで、次いでジクロルメタ
ンおよびメタノール（１：１）の混合物により溶離する
カラムクロマトグラフィーによって部分精製し、２００
〜２５０ｍ／の両分を採取した。これらの両分をＴＬＣ
により分析し、目的生成物を含有するものを合わせて真
空下に蒸発させた。この物質の一部（１０ｇ）をさらに
シリカゲル（キーゼルゲル６０．２３０〜４００メツシ
ユ、メルク、５００ｇ）により、ジクロルメタンおよび
酢酸エチル（４：　１　）の混合物で溶離するカラムク
ロマトグラフィーによって精製した。目的生成物を含有
する両分を合わせて真空下に蒸発させた。この物質をさ
らに少量ずつダイナマックス６０−Ａ　　Ｃ−１８（商
標、レイニン）カラム（４１Ｘ２５０ｍｍ）を用いてメ
タノールおよび水（１：４）の混合物により５２＋＊ｉ
’／分の流量で溶離するＩ−Ｉ　Ｐ　Ｌ　Ｃによって精
製した。各両分をウルトラスフェア−０ＤＳ（５μｍ）
（商標−ベックマン）カラム（１０Ｘ　２５　Ｏｎ＋＊
）によりメタノール−水の濃度勾配を用いて溶離するＨ
ＰＬＣによって分析し、表題の化合物を含有する両分を
合わせて真空下に蒸発させた０Ｍｔ終精製はウルトラス
フェア−ＯＤ　Ｓ　（５μｍ−）（商標−ベックマン＞
ＨＰＬＣカラム（１０Ｘ２５０ｍｍ）を用いて水および
メタノール（１８：８２）の混合物により３　ｍｌ１分
の流量で溶離することにより行われた。純粋な表題化合
物を含有する両分を合わせて真空下に蒸発乾固した。

生成物の構造は質量分析およびプロトン核磁気共鳴スペ
クトル分析によって以下のとおり確認された。

高速原子ボンバードメント質量分析はＶＧモデル７０７
０Ｅ質量分析器によりグリセロール、チオグリセロール
、水および塩化ナトリウムの試料マトリックスを用いて
行われた。（Ｍ＋Ｎａ”　）はｎ／ｅ６６１に認められ
たく理論値６６１）。

電子衝撃型質量分析はＶＧモデル７０７０Ｆ質量分析器
により行われた。主断片のｍ／ｅ値は６２０（Ｍ−Ｈ２
Ｏ）＋、６０２（Ｍ−２８，Ｏ）”　、４９２，４７０
゜４４２．４２５であった。

プロトン核磁気共鳴スペクトルデータはニコレットＱＥ
３００スペクトロメーターによりジューテロクロロホル
ム溶液中の試料を用いて得られた。テトラメチルシラン
に対する特徴的信号の化学シフト（ｐｐｍ）は以下のと
おりであった。　５．９５−５゜７０　（３１１、ｍ）
　、　５．４５　（ｂｓ　、　１ｌｌ）　、５．４−５
．２７　（＋＊　、　２１１）　、５．２３（ｄ　。

ＩＨ）　、５．１０（ｄ　、　ＩＨ）　、５．０５（ｂ
ｓ　、　ＩＩＩ）　、　４．９８（ＩＩ　、　ＩＩＩ）
　、４．７０（＋＊　、２Ｈ）　、　４．３１　（Ｌ　
、　１ｌｌ）　、４．００（ｄ　、　１ｌｌ）　、３．
９−３．８（ｍ　、２１１）　。

３．８（ｄ、Ｉｌｌ）、３．７−３．６（輪、１１１）
　、３．６０（ｄ、Ｉｌｌ＞　、３．３（論、１１１）
。

１．９０（ｂｓ　、３１１）　、１．６５（ｓ　、３Ｈ
）　、　１．５７（ｓ　、３）１）　、　１．４３（ｔ
　、　ＩＨ）　。

１．０３（ｄ、３１１）　、０．９８（ｄ、３＋１）　
、０．８３（ｄ、３８）　。

実施例５ ２３−ヒドロキシ−２５−デスメチル−２５−（１，３
−ジメチル−ヘキサ−１，５−ジェニル）ミルベマイシ
ンＡ３（式ＩＩ　、　Ｒ’　＝　Ｈ、Ｒ”　＝　ＣＨ２
＝ＣＨＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２＞　　） ストレプトミセス・　−モ　−　ンシスＮＣＩ　Ｂ　１
２０１５の接種物は、水道水（１１）中の酵母エキス（
０，，５ｇ＞、麦芽エキス（３０ｇ）、ペプトン（５ｇ
）および寒天（２０ｙ）から調製された培地（ｐＨ５，
４に調整）上で維持された斜面培養を無菌水（１０ｍｌ
）で洗浄することにより調製された。グルコース（０，
８ｆＩ）、グリセロール（０，８ｇ）、ペプトン（０，
８ｙ＞、Ｎ　ａＣ／（０，０６ｙ）、ＣａＣＯ、（０，
０２ｇ＞を水道水中に含有する培地（ｐＨ７に調ｆｉ＞
５０＋４’を入れたエルレンマイヤーフラスコにこの接
種物を移した。

フラスコを１７０　ｒｐｍで作動してい−るロータリー
シェーカー上で２８℃において４８時間インキュベート
した。得られた増殖期培養物を、水道水（２１）中のグ
ルコース（５ｇ）、デキストリン（５０ｇ）、ドルソイ
粉末（２５１Ｆ）、ドウキビ糖密（３ｇ）、Ｋ　２ＨＰ
　Ｏ４（０，２５ｙ）、ＣａＣＯｚ（２，５ｙ）オよび
３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホンｌｉ！（４２
，ｈ）（１゜Ｎ−ＮａＯＨの添加によりｐＨ６，５に調
整）を入れた、機械的に撹拌された３！の容器に移した
。容器は２８℃で撹拌速度１０００　ｒｐ＋＾および空
気流２／／分においてインキュベートされた。

７２時間後に２−メチルベンター４−エン酸（０，８＋
ａ１）を添加し、発酵をさらに７２時間維持した。ｒＭ
糸体を枦取シ、アセトン（５００Ｉ１１１）中ニ１時間
懸濁したのち濾過した。固体をアセトン（５００ｎ１）
に０．５時間再懸濁し、濾過した。Ｐ液を合わせて真空
下に蒸発乾固して、暗色の油（８，０ｇ）を得た。この
物質をシリカゲル（キーイルゲル６０，２３０〜４００
メツシユ、メルク−商標、２４０ｇ）上でジクロルメタ
ンおよび酢酸エチル（４：１）の混合物を用いて溶離す
るカラムクロマトグラフィーにより精製し、５０＋ａｌ
の両分を採取した、これらをＴＬＣにより分析し、表題
の化合物を含有する両分を合わせて真空下に蒸発させた
。

この物質をさらにシリカゲル（１３０１？）上でジクロ
ルメタンおよびジエチルエーテルの混合物（Ｍ初は４：
１、次いで２：１）、！＆後にジエチルエーテルのみに
より溶離するカラムクロマトグラフィーにより精製した
。目的生成物に富む画分を合わせて真空下に蒸発乾固し
、メタノール（３＋ａ１）に溶解した。このｉ８液をグ
イナマツクス６０−Ａ　　Ｃ−１８（商標、レイニン）
カラム（４１Ｘ２５０ｍｍ＞を用いてメタノールおよび
水（４：　１　’）の混合物により流量５２社／分で溶
離するＨＰＬＣによって精製した。３〜５分間隔で両分
を採取し、ＩＩＰＬＣにより分析した。目的生成物を含
有する両分を合わせて真空下に蒸発させた。最終精製は
ウルトラスフェア−０ＤＳ（５μｍ）（商標−ベックマ
ン）ＨＰ　Ｌ　Ｃカラム（１０Ｘ２５０ｍｓ）を用いて
水およびメタノール（１８：８２）の混合物により３　
ｍｌ／分の流量で溶離するＨ　Ｐ　Ｌ　Ｃによって行わ
れた。

適宜な両分を合わせて真空下に蒸発させ、あらゆる点て
実施例４の生成物と一致する白色１５）末を得た。

実施ＰＡ６ １九譚１ セノルハビディチス・エレガンス（Ｃａ　ｃ　ｎ　ｏ　
ｒ　ｌ＋　ａ　Ｉ３−直頂ｓ　　７）に対する駆虫活性
をに、Ｇ、シンプキン（Ｓｉ諭ｐｋｉｎ）およびＧ、Ｌ
、コールズ（Ｃｏｌｅｓ）、Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ
、　１９７９．７９　、１９に記載のインビＩ・ロスク
リーニング試験により評価した。実施例１および２の生
成物はウェル濃度０．０ｉｐ、―において上記寄生虫を
１００％死滅させた。

実施例７ Ｕ九Ｌ１ キンバエ（オーストラリア産キンバエ（Ｌｕｃｉｌｉａ
セ律工逍リョ）（Ｑ株す）の幼虫期に対する活性を標準
法により証明した。その際、第−令幼虫を、被験化す物
で処理したｒ紙と接触させた。被験化合物をまずアセト
ン溶液として２紙に施した。次いでウシ新生仔血清１ｗ
＋１を入れた試験管に処理済み２紙を挿入し、第−令幼
虫を入れた。実施例１および２の生成物は１０　ｔａｇ
／　ｍ”の量で２紙に施された際に幼虫を１００％死滅
させた。

（外４名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼−−−（ I ） （式中、Ｒは水素原子でありかつＲ＾１は水酸基である
   か、またはＲおよびＲ＾１は一緒になつてオキソ基であ
   り； Ｒ＾２はＣ＿３−Ｃ＿８の直鎖もしくは分枝鎖アルキル
   基、アルケニル基もしくはアルキニル基であり、これら
   は酸素原子もしくはイオウ原子を鎖の一部として含んで
   いてもよく、またはＣ＿３−Ｃ＿８のシクロアルキル基
   もしくはシクロアルケニル基、または３〜６員の酸素も
   しくはイオウ含有複素環であり、この複素環は飽和であ
   っても、完全もしくは部分的に不飽和であつてもよく、
   かつ１個もしくは２個以上のＣ＿１−Ｃ＿４アルキル基
   もしくはハロゲン原子により置換されていてもよく； Ｒ＾３はメチル基またはエチル基であり； Ｒ＾４は水素原子またはメチル基であり； Ｒ＾５は水素原子もしくは水酸基でありかつＲ＾６はメ
   チル基もしくはヒドロキシメチル基であるか、または２
   個の基Ｒ＾５およびＲ＾６は一緒になつて−Ｏ−ＣＨ＿
   ２−であり； Ｒ＾７は水素原子、メチル基またはエチル基であり；そ
   して Ｒ＾２は水素原子またはハロゲン原子であり；ただしＲ
   ＾２が分枝鎖アルキル基である場合、これはイソプロピ
   ル基ではない）を有する化合物。 ２、構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼−−−（II） （式中、Ｒ＾２およびＲ＾４は請求項１において定義し
   たものである）を有する、請求項１に記載の化合物。 ３、Ｒ＾２が（１−メチルチオ）エチル、２−ペンタ−
   ４−エニルまたは２−ブチルである、請求項２に記載の
   化合物。 ４、ミルベマイシン産生菌の菌株ストレプトミセス・シ
   アネオグリセウスｓｓｐ．ノンシアノゲヌスＮＲＲＬ１
   ５７７３またはストレプトミセス・サーモアーケンシス
   ＮＣＩＢ１２０１５を式Ｒ＾２ＣＯ＿２Ｈ（Ｒ＾２は請
   求項１において定義したものである）のカルボン酸また
   はそれらの塩、エステルもしくはアミド、またはそれら
   の酸化的前駆物質の存在下で発酵させ、そしてＲ＾３が
   Ｈである式（ I ）の化合物を分離し、場合により通常
   の合成法によりＲ＾３がハロゲン原子である化合物に変
   換することよりなる、請求項１に記載の式（ I ）の化
   合物の製法。 ５、ミルベマイシン産生菌の菌株ストレプトミセス・シ
   アネオグリセウスｓｓｐ．ノンシアノゲヌスＮＲＲＬ１
   ５７７３またはストレプトミセス・サーモアーケンシス
   ＮＣＩＢ１２０１５を、２−メチルチオプロピオン酸ナ
   トリウム塩、２−メチル酪酸ナトリウム塩、または２−
   メチルペンタ−４−エン酸ナトリウム塩の存在下で発酵
   させ、そして式（II）の化合物を分離することよりなる
   、Ｒ＾２が（１−メチルチオ）エチル、２−ペンタ−４
   −エニルまたは２−ブチルである、請求項４に記載の式
   IIの化合物の製法。 ６、請求項１ないし３のいずれかに記載の式（ I ）ま
   たは（II）の化合物および不活性希釈剤またはキャリヤ
   ーからなる、外部寄生虫駆除用、殺昆虫用、ダニ駆除用
   および駆虫用組成物を含む、ヒトおよび動物における寄
   生虫感染の治療または予防のための組成物。 ７、液状飲薬または経口用もしくは注射用配合物の形の
   、請求項６に記載の組成物。 ８、動物用飼料の形の、または動物用飼料に添加するた
   めのプレミックスもしくは補強剤の形の、請求項６に記
   載の組成物。 ９、有効量の請求項１ないし３のいずれかに記載の式（
   I ）または（II）の化合物を、感染もしくは侵入に関
   与する生物またはその存在場所に施すことよりなる、動
   物における寄生虫感染状態ならびに農業および園芸にお
   ける有害生物侵入を含む、昆虫または寄生虫の感染また
   は侵入の処置法。