JP7481361B2 - 血漿サンプルにおいて機能的ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｃ１－ｉｎｈ）を測定するためのラテラルフローイムノアッセイ - Google Patents
血漿サンプルにおいて機能的ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｃ１－ｉｎｈ）を測定するためのラテラルフローイムノアッセイ Download PDFInfo
- Publication number
- JP7481361B2 JP7481361B2 JP2021559968A JP2021559968A JP7481361B2 JP 7481361 B2 JP7481361 B2 JP 7481361B2 JP 2021559968 A JP2021559968 A JP 2021559968A JP 2021559968 A JP2021559968 A JP 2021559968A JP 7481361 B2 JP7481361 B2 JP 7481361B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- inh
- agent
- sample
- zone
- binding agent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229940009550 c1 esterase inhibitor Drugs 0.000 title claims description 209
- 102000055157 Complement C1 Inhibitor Human genes 0.000 title claims description 196
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title description 4
- 108050007539 Plasma protease C1 inhibitor Proteins 0.000 title 1
- 108700040183 Complement C1 Inhibitor Proteins 0.000 claims description 195
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 168
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 135
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 122
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 81
- 206010019860 Hereditary angioedema Diseases 0.000 claims description 79
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 78
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 57
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 56
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 46
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 claims description 46
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 42
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 42
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 42
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 41
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 30
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 30
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 29
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 28
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 26
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 26
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 22
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 22
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 21
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims description 19
- 108010080865 Factor XII Proteins 0.000 claims description 18
- 102000000429 Factor XII Human genes 0.000 claims description 18
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 16
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 11
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 10
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 10
- 208000005707 acquired angioedema Diseases 0.000 claims description 9
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims description 9
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000004891 communication Methods 0.000 claims description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 claims description 5
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 claims description 4
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 claims description 4
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 4
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N Terfenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 claims description 3
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 claims description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 91
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 34
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 32
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 26
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 26
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 24
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 24
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 18
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 17
- 102000003827 Plasma Kallikrein Human genes 0.000 description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 9
- -1 cyanine Chemical class 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 229910001112 rose gold Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 4
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M sodium;1-hydroxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].ON1C(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C1=O RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 4
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 3
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 3
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 3
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 3
- 102100035792 Kininogen-1 Human genes 0.000 description 3
- 102100027637 Plasma protease C1 inhibitor Human genes 0.000 description 3
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 3
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 3
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZOCSXAVNDGMNBV-UHFFFAOYSA-N 5-amino-1-[2,6-dichloro-4-(trifluoromethyl)phenyl]-4-[(trifluoromethyl)sulfinyl]-1H-pyrazole-3-carbonitrile Chemical compound NC1=C(S(=O)C(F)(F)F)C(C#N)=NN1C1=C(Cl)C=C(C(F)(F)F)C=C1Cl ZOCSXAVNDGMNBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 2
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 2
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 2
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 2
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N anthracene Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C21 MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 2
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 2
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 2
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000003657 middle cerebral artery Anatomy 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 2
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 2
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical class [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- SLLFVLKNXABYGI-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-benzoxadiazole Chemical compound C1=CC=C2ON=NC2=C1 SLLFVLKNXABYGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 2',7'-difluorofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPPQGYCZBNURDG-UHFFFAOYSA-N 2-propionyl-6-dimethylaminonaphthalene Chemical compound C1=C(N(C)C)C=CC2=CC(C(=O)CC)=CC=C21 MPPQGYCZBNURDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BNBQQYFXBLBYJK-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-2-yl-1,3-oxazole Chemical compound C1=COC(C=2N=CC=CC=2)=N1 BNBQQYFXBLBYJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UWAUSMGZOHPBJJ-UHFFFAOYSA-N 4-nitro-1,2,3-benzoxadiazole Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC2=C1N=NO2 UWAUSMGZOHPBJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 description 1
- 208000028185 Angioedema Diseases 0.000 description 1
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 description 1
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 description 1
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 229940123765 Bradykinin B2 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037823 Cerebral ischemia/reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- 208000018380 Chemical injury Diseases 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010008177 Fd immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 1
- 206010062506 Heparin-induced thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 102100027619 Histidine-rich glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001081555 Homo sapiens Plasma protease C1 inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 206010055171 Hypertensive nephropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010073257 Idiopathic angioedema Diseases 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102100033320 Lysosomal Pro-X carboxypeptidase Human genes 0.000 description 1
- 208000001344 Macular Edema Diseases 0.000 description 1
- 206010025415 Macular oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101710136697 Modular serine protease Proteins 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010054048 Postoperative ileus Diseases 0.000 description 1
- WDVSHHCDHLJJJR-UHFFFAOYSA-N Proflavine Chemical compound C1=CC(N)=CC2=NC3=CC(N)=CC=C3C=C21 WDVSHHCDHLJJJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 102000008847 Serpin Human genes 0.000 description 1
- 108050000761 Serpin Proteins 0.000 description 1
- 208000020307 Spinal disease Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N [9-(dimethylamino)-10-methylbenzo[a]phenoxazin-5-ylidene]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].O1C2=CC(=[NH2+])C3=CC=CC=C3C2=NC2=C1C=C(N(C)C)C(C)=C2 ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGLGAKMTYHWWKW-UHFFFAOYSA-N acridine yellow Chemical compound [H+].[Cl-].CC1=C(N)C=C2N=C(C=C(C(C)=C3)N)C3=CC2=C1 BGLGAKMTYHWWKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940027998 antiseptic and disinfectant acridine derivative Drugs 0.000 description 1
- 208000007474 aortic aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N auramine O free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(=N)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000008236 biological pathway Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000003359 bradykinin B2 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- CZPLANDPABRVHX-UHFFFAOYSA-N cascade blue Chemical compound C=1C2=CC=CC=C2C(NCC)=CC=1C(C=1C=CC(=CC=1)N(CC)CC)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 CZPLANDPABRVHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229940088949 cinryze Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 108010020742 complement C1 inhibitor Ta Proteins 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001893 coumarin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000001295 dansyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=C2C([H])=C([H])C([H])=C(C2=C1[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 108010044853 histidine-rich proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000044507 human SERPING1 Human genes 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000001631 hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940039088 kininogenase Drugs 0.000 description 1
- 238000003475 lamination Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 108010057284 lysosomal Pro-X carboxypeptidase Proteins 0.000 description 1
- 201000010230 macular retinal edema Diseases 0.000 description 1
- FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M malachite green Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 description 1
- DZVCFNFOPIZQKX-LTHRDKTGSA-M merocyanine Chemical compound [Na+].O=C1N(CCCC)C(=O)N(CCCC)C(=O)C1=C\C=C\C=C/1N(CCCS([O-])(=O)=O)C2=CC=CC=C2O\1 DZVCFNFOPIZQKX-LTHRDKTGSA-M 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 150000002790 naphthalenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 1
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 description 1
- XJCPMUIIBDVFDM-UHFFFAOYSA-M nile blue A Chemical compound [Cl-].C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4[O+]=C3C=C(N)C2=C1 XJCPMUIIBDVFDM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N nile red Chemical compound C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=O)C2=C1 VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 150000004866 oxadiazoles Chemical class 0.000 description 1
- GHTWDWCFRFTBRB-UHFFFAOYSA-M oxazine-170 Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.N1=C2C3=CC=CC=C3C(NCC)=CC2=[O+]C2=C1C=C(C)C(N(C)CC)=C2 GHTWDWCFRFTBRB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000004893 oxazines Chemical class 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- JZRYQZJSTWVBBD-UHFFFAOYSA-N pentaporphyrin i Chemical compound N1C(C=C2NC(=CC3=NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 JZRYQZJSTWVBBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 229960000286 proflavine Drugs 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 150000003220 pyrenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000012421 spiking Methods 0.000 description 1
- 208000005198 spinal stenosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000037816 tissue injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 125000001834 xanthenyl group Chemical class C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3C(C12)* 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
- G01N33/553—Metal or metal coated
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
関連出願
本出願は、それぞれの全内容が参照により本明細書に組み込まれる２０１９年４月１２日に出願された米国仮出願第６２／８３３，２３５号および２０１９年１１月５日に出願された米国仮出願第６２／９３０，６１５号の合衆国法典第３５編第１１９条（ｅ）に基づく恩典を主張する。
本出願は、それぞれの全内容が参照により本明細書に組み込まれる２０１９年４月１２日に出願された米国仮出願第６２／８３３，２３５号および２０１９年１１月５日に出願された米国仮出願第６２／９３０，６１５号の合衆国法典第３５編第１１９条（ｅ）に基づく恩典を主張する。
Ｃ１－エステラーゼインヒビター（Ｃ１－インヒビターまたはＣ１－ＩＮＨとしても知られている）は、セルピンスーパーファミリーに属するプロテアーゼインヒビターである。その主な機能は、自発的活性化を防ぐための補体系の阻害である。Ｃ１－ＩＮＨは、血漿カリクレイン（ｐＫａｌ）に対する内因性インヒビターでもある。Ｃ１－ＩＮＨにおける常染色体優性変異は、Ｉ型ＨＡＥおよびＩＩ型ＨＡＥを含む遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）を引き起こす。
Ｃ１－ＩＮＨの機能レベルを評価するために用いられる現在利用可能なアッセイは、発色アッセイ（chromogenic assay）または複合体ＥＬＩＳＡ法（complex ELISA method）のいずれかを利用して、Ｃ１－ＩＮＨによる補体カスケードのＣ１ｓの阻害を測定する。発色アッセイが好ましいと一般的に考えられているが、どちらの方法にも制限がある。発色アッセイのほうが、時折偽陽性になる可能性が高い一方で、複合体ＥＬＩＳＡの陰性適中率は６２％しかない。
ＨＡＥ疾患の病理に関与する機能的Ｃ１－ＩＮＨを測定するための、より新しいアッセイおよび／またはプラットフォームを開発することは興味深い。
機能的Ｃ１－ＩＮＨ（ｆＣ１－ＩＮＨ）を迅速で費用効果の高い定性的および／または定量的な様式で検出するための装置および方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、ｆＣ１－ＩＮＨの検出は、ラテラルフローイムノアッセイ（ＬＦＡ）によりｆＣ１－ＩＮＨを検出および／または定量化するように構成された装置を用いて達成される。
従って、本開示の一態様は、機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出および／または定量化するための装置であって、（ｉ）第１の作用物質および第２の作用物質がそれぞれ固定化されている第１のゾーンおよび第２のゾーンを含む、コンジュゲートパッド（conjugate pad）と、（ｉｉ）当該コンジュゲートパッドと連通しているメンブレンと、を含み、当該メンブレンが、第３の作用物質が固定化されている第３のゾーンを含む、装置を提供する。第１の作用物質は、機能的Ｃ１－インヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）結合物質またはＣ１－インヒビター（Ｃ１－ＩＮＨ）結合物質であってよい。第２の作用物質および第３の作用物質は、機能的Ｃ１－インヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）結合物質、Ｃ１－インヒビター（Ｃ１－ＩＮＨ）結合物質、および捕捉物質のうちの１つである。第１の作用物質、第２の作用物質、および第３の作用物質は、互いに異なる。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質のうちの１つは、検出可能な標識にコンジュゲートされ、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質およびＣ１－ＩＮＨ結合物質のうちの１つは、ドッキング物質（docking agent）にコンジュゲートされる。検出可能な標識およびドッキング物質は、別々の作用物質にコンジュゲートされる。コンジュゲートパッドは、第１のゾーン、第２のゾーン、および第３のゾーンの順に装置を通って流れる生体サンプルを配置するための第４のゾーンをさらに含む。一部の例では、生体サンプルを配置するための第４のゾーンは、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質が配置され得る第２のゾーンと重なってよい。
一部の実施形態において、第１の作用物質、第２の作用物質、および第３の作用物質は、それぞれ、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質である。他の実施形態では、第１の作用物質、第２の作用物質、および第３の作用物質は、それぞれ、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質である。
一部の例では、第１の作用物質は、検出可能な標識にコンジュゲートされ、第２の作用物質は、ドッキング物質にコンジュゲートされる。他の例では、第１の作用物質は、ドッキング物質にコンジュゲートされ、第２の作用物質は、検出可能な標識にコンジュゲートされる。
一部の実施形態において、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第ＸＩＩ因子の活性型（ＦＸＩＩａ）であってよい。代わりに、またはさらに、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体であってよい。さらに、ドッキング物質および捕捉物質は、受容体－リガンドのペアのメンバーであってよい。例えば、受容体－リガンドのペアは、ビオチンとアビジン（例えば、ストレプトアビジンまたはポリストレプトアビジン）を含んでよい。
一部の実施形態において、検出可能な標識は、ユウロピウム、コロイド金、フィコエリトリン、フルオレセイン、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、量子ドット、および発色団であってよい。一部の実施形態において、検出可能な標識は、ユウロピウムである。一部の例では、検出可能な標識は、ラテックス粒子に連結されてよい。
一つの例では、第１の作用物質は、第１のゾーンに配置されるＣ１－ＩＮＨ結合物質であり、第２の作用物質は、第２のゾーンに配置されるｆＣ１－ＩＮＨ結合物質であり、第３の作用物質は、第３のゾーンに配置される捕捉物質である。Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体であってよく、これは、本明細書で開示されるような検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。代わりに、またはさらに、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、ＦＸＩＩａであってよく、これは、ドッキング物質（例えば、ビオチン）にコンジュゲートされてよい。さらに、捕捉物質は、ストレプトアビジンまたはポリストレプトアビジンなど、アビジンであってよい。
一部の実施形態において、装置は、メンブレンと連通している吸収パッド（absorbent pad）をさらに含む。吸収パッドおよびコンジュゲートパッドは、メンブレンで隔てられてよい。代わりに、またはさらに、装置は、コンジュゲートパッド、メンブレン、および／または吸収パッドが取り付けられる、支持部材をさらに含んでよい。
さらに、装置は、ハウジングを含んでもよい。一部の実施形態において、ハウジングは、バッファーポート（buffer port）を形成するための第１の開口部と、サンプルポート（sample port）を形成するための第２の開口部と、試験窓（test window）を形成するための第３の開口部と、を含んでよい。サンプルポートは、バッファーポートと試験窓との間に配置されてよい。一部の例では、バッファーポートは、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質が配置される第１のゾーンと位置が合ってよい。一部の例では、サンプルポートは、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質が配置される第２のゾーンと位置が合ってよい。一部の例では、試験窓は、捕捉物質が配置される第３のゾーンと位置が合っている。
別の態様では、本開示は、本明細書で開示されるＬＦＡ装置のいずれかを用いてサンプル中の機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出および／または定量化するための方法を提供する。そのような方法は、（ｉ）本明細書で説明される装置のサンプルポートにサンプルを配置するステップと、（ｉｉ）装置のバッファーポートにバッファーを配置するステップであって、バッファーが、第１のゾーンから第３のゾーンへの方向に流れる、ステップと、（ｉｉｉ）装置の試験窓におけるシグナルを調べるステップと、（ｉｖ）試験窓におけるシグナルの存在または強度に基づいて、サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在を決定するかサンプル中のｆＣ１－ＩＮＨのレベルを測定するステップと、を含んでよい。一部の実施形態において、ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）の少なくとも５分後に実施される。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、サンプルポートと位置が合ってよい第２のゾーンに固定化されてよい。
また、サンプル中の機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出および／または定量化するための方法であって、（ｉ）サンプルをｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質と接触させて複合体を形成させるステップであって、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質およびＣ１－ＩＮＨ作用物質のうちの１つが、捕捉物質に結合するドッキング物質にコンジュゲートされており、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ作用物質、および捕捉物質のうちの１つが、検出可能な標識にコンジュゲートされており、検出可能な標識およびドッキング物質は、別々の作用物質にコンジュゲートされている、ステップと、（ｉｉ）複合体中の検出可能な標識から放出されるシグナルを検出するステップであって、複合体中の検出可能な標識から放出されるシグナルの存在が、サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在を示す、ステップと、を含む方法も本明細書で提供される。本明細書で開示されるようなｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、ドッキング物質、検出可能な標識、および捕捉物質のいずれも、本明細書で開示される方法において使用できる。
一部の実施形態において、ステップ（ｉ）は、（ａ）サンプルをｆＣ１－ＩＮＨ結合物質と少なくとも５分間インキュベートすることと、（ｂ）サンプルをＣ１－ＩＮＨ結合物質および捕捉物質と接触させることと、によって実施されてよい。他の実施形態では、ステップ（ｉ）は、（ａ）サンプルをｆＣ１－ＩＮＨ結合物質と少なくとも５分間インキュベートして第１の複合体を形成させることと、（ｂ）第１の複合体をＣ１－ＩＮＨ結合物質と接触させて第２の複合体を形成させることと、（ｃ）第２の複合体を捕捉物質と接触させて複合体を形成させることと、によって実施され、ここで、捕捉物質は、支持部材に固定化される。
本明細書で開示されるアッセイ法のいずれにおいても、分析されるサンプルは、対象から取得された生体サンプル（例えば、血清サンプル、血漿サンプル、または血液サンプル（例えば、全血））であってよい。一部の実施形態において、対象は、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害（fC1-INH deficiency-mediated disorder）を有することが疑われるかｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害のリスクがある、ヒト患者であってよく、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害は、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）、後天性血管性浮腫（ＡＡＥ）、およびＣ１－ＩＮＨが関連する免疫疾患を包含するが、これらに限定されない。一部の実施形態において、対象は、ＨＡＥの症状を有する。一部の実施形態において、ＨＡＥは、Ｉ型ＨＡＥまたはＩＩ型ＨＡＥである。他の実施形態では、対象は、ＨＡＥの症状を有さないか、ＨＡＥの症状の病歴を有さないか、ＨＡＥの病歴を有さない。一部の実施形態において、対象は、抗ヒスタミン療法、コルチコステロイド療法、またはその両方に対して抵抗性である。
本明細書で説明される装置および方法のいくつかの実施形態の詳細が、添付の図面および詳細な説明に記載されている。本明細書で説明される装置および方法の他の特徴、目的、および利点は、説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
以下の図面を参照して様々な態様および実施形態を説明する。図面は、必ずしも正確な縮尺で描かれているわけではない。
本開示は、機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を測定するためのラテラルフローアッセイ（ＬＦＡ）法および装置の開発に少なくとも部分的に基づく。これらのＬＦＡ法および装置は、例えば生体サンプルにおいて、ｆＣ１－ＩＮＨの存在を特異的に検出するために、および／またはｆＣ１－ＩＮＨのレベルを測定するために、設計されている。ｆＣ１－ＩＮＨの存在および／またはレベルは、Ｃ１－ＩＮＨが役割を担う生物学的経路に関連する疾患の状態を示すことが多い。従って、これらのＬＦＡ法および装置は、Ｃ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患（例えば、ｆＣ１－ＩＮＨはｐＫａｌ経路のインヒビターであるため、血漿カリクレイン経路によって媒介される疾患（例えば、遺伝性血管性浮腫などの疾患））の診断および予後診断において特に有用であろう。
本明細書で使用される場合、「機能的Ｃ１－ＩＮＨ（functional C1-INH）」または「ｆＣ１－ＩＮＨ」は、Ｃ１－ＩＮＨが天然に結合してその生物学的活性を発揮するタンパク質因子に結合することができる形態のＣ１－ＩＮＨタンパク質を指す。そのようなタンパク質因子は、Ｃ１ｓ、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、および血漿カリクレイン（ｐＫａｌ）を包含するが、これらに限定されない。このｆＣ１－ＩＮＨの亜集団の検出は、ＨＡＥなどの疾患におけるＣ１－ＩＮＨの機能レベルの評価において特に役立つ。
ＨＡＥは、約１０，０００人に１人～５０，０００人に１人に発生する、非常に稀で生命を脅かす可能性のある遺伝病である。症状には、手、足、顔および気道（喉）を含む身体の様々な部分における浮腫（腫れ）が包含される。患者は、腸壁における腫れによって引き起こされる極度の腹痛、吐き気、および嘔吐に苦しむことが多い。気道または喉の腫れは、特に危険であり、窒息死を引き起こし得る。Ｉ型およびＩＩ型のＨＡＥを確認するのに必要な３つの特定の血液検査は、Ｃ１ＩＮＨ抗原、ｆＣ１ＩＮＨおよびＣ４である。多くの診断アッセイは、時代遅れの技術を用いており、迅速であるわけでも、標準化されているわけでも、世界中で利用可能であるわけでもない。
本明細書で開示される迅速で高感度のＬＦＡ法および装置は、ｆＣ１ＩＮＨレベルに基づいたＨＡＥ（例えば、Ｉ型およびＩＩ型）の迅速な診断のために医師の診療所で実施することができる。そのような方法および装置は、健康保険によって払い戻される低コストの消耗品、定量的結果に対する高レベルの信頼性、医師によるデータ解釈の容易さ、および／または確認分析の必要性のレベルの低さをもたらすであろう。診療所においてＩ型またはＩＩ型のＨＡＥを診断するための、そのような迅速な分析は、ＨＡＥについてのスクリーニングを拡張し、より迅速に新たなＨＡＥ患者を特定できる。現在、世界的なＨＡＥの診断率は４０％しかなく、従って、診断されていない患者は、満たされていないニーズが高い。一般的な装置プラットフォームにおける迅速な試験の可用性は、ＨＡＥの認識を拡張する可能性がある。さらに、本明細書で開示されるｆＣ１ＩＮＨのための迅速な試験は、ＨＡＥの疾患進行または治療に対する反応を臨床現場で適時にモニタリングするのに役立ち得る。
本明細書で開示されるＬＦＡ法および装置は、ｆＣ１－ＩＮＨに対して特異的な第１の結合物質（ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質）と、Ｃ１－ＩＮＨに対して特異的な（機能的Ｃ１－ＩＮＨ、非機能的Ｃ１－ＩＮＨ、またはその両方に対して特異的な）第２の結合物質と、捕捉物質と、を伴う。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質またはＣ１－ＩＮＨ結合物質のいずれか一方は、捕捉物質に結合することができるドッキング物質にコンジュゲートされてよい。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質のうちの１つは、検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。従って、サンプル（例えば、生体サンプル）中のｆＣ１－ＩＮＨは、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質およびＣ１－ＩＮＨ結合物質と複合体を形成できる。そのような複合体は、捕捉物質とＣ１－ＩＮＨ結合物質およびｆＣ１－ＩＮＨ結合物質のうちの一方にコンジュゲートされたドッキング物質との間の相互作用を介して捕捉物質に結合できる。検出可能な標識から放出されたシグナル（例えば、存在または強度）を検出すれば、サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在またはレベルを、一緒に試験された標準に基づいて決定および／または定量化できる。例えば、種々のレベルのシンライズ（登録商標）（精製されたヒト血漿由来Ｃ１ＩＮＨ）を標準として用いて、本明細書で開示される方法のいずれかによって測定されたサンプル中のｆＣ１ＩＮＨのレベルを外挿および決定するための標準曲線を生成できる。検出可能な標識から放出されたシグナルの強度は、標準に基づいてサンプル中のｆＣ１ＩＮＨのＵ／ｍｌに定量化でき、サンプル中のｆＣ１ＩＮＨのレベルを示す。
Ｉ．ラテラルフローアッセイ（ＬＦＡ）において使用するための構成要素
本明細書で開示されるＬＦＡ法および装置は、（ｉ）ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質と、（ｉｉ）Ｃ１－ＩＮＨ結合物質と、（ｉｉｉ）捕捉物質と、を伴い、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質およびＣ１－ＩＮＨ結合物質のうちの一方はドッキング物質にコンジュゲートされ、捕捉物質はドッキング物質に結合する。（ｉ）～（ｉｉｉ）のうちの１つは、検出可能な標識にコンジュゲートされる。
本明細書で開示されるＬＦＡ法および装置は、（ｉ）ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質と、（ｉｉ）Ｃ１－ＩＮＨ結合物質と、（ｉｉｉ）捕捉物質と、を伴い、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質およびＣ１－ＩＮＨ結合物質のうちの一方はドッキング物質にコンジュゲートされ、捕捉物質はドッキング物質に結合する。（ｉ）～（ｉｉｉ）のうちの１つは、検出可能な標識にコンジュゲートされる。
（ａ）ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質
ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、機能的Ｃ１－ＩＮＨに特異的に結合する分子（例えば、ｆＣ１－ＩＮＨに結合するタンパク質またはそのフラグメント）である。分子は、特定の標的（例えば、本明細書で開示されるもの）と、別の標的（特定の標的の別の形態であってよい）と反応する場合に比べて、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／または、より高い親和性で、反応すれば、「特異的結合」を示すと言われる。例えば、ｆＣ１－ＩＮＨに特異的に結合する分子は、非機能的Ｃ１－ＩＮＨなどの別の標的に比べて、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／または、より高い親和性で、ｆＣ１－ＩＮＨに対して反応するであろう。「特異的結合」または「優先的結合」は、必ずしも排他的結合を必要とするわけではない（但し、排他的結合を含んでもよい）。
ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、機能的Ｃ１－ＩＮＨに特異的に結合する分子（例えば、ｆＣ１－ＩＮＨに結合するタンパク質またはそのフラグメント）である。分子は、特定の標的（例えば、本明細書で開示されるもの）と、別の標的（特定の標的の別の形態であってよい）と反応する場合に比べて、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／または、より高い親和性で、反応すれば、「特異的結合」を示すと言われる。例えば、ｆＣ１－ＩＮＨに特異的に結合する分子は、非機能的Ｃ１－ＩＮＨなどの別の標的に比べて、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／または、より高い親和性で、ｆＣ１－ＩＮＨに対して反応するであろう。「特異的結合」または「優先的結合」は、必ずしも排他的結合を必要とするわけではない（但し、排他的結合を含んでもよい）。
一部の例では、ｆＣ１－ＩＮＨに天然に結合することができるタンパク質もしくはポリペプチドまたはその結合フラグメントが、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質として使用されてよい。一部の例では、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質はＦＸＩＩ、例えばＦＸＩＩの活性型（ＦＸＩＩａ）、である。第ＸＩＩ因子は、血液凝固の開始、線維素溶解、およびブラジキニンとアンジオテンシンの生成に関与する、血清糖タンパク質である。プレカリクレインは、第ＸＩＩ因子によって切断されてカリクレインを形成し、次いで、このカリクレインが第ＸＩＩ因子を活性化して、第ＸＩＩａ因子および第ＸＩＩ因子フラグメント（第ＸＩＩｆ因子）の形成をもたらす（「Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ－ｒｉｃｈ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｂｉｎｄｓ ｆａｃｔｏｒ ＸＩＩａ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｃｏｎｔａｃｔ－ｉｎｉｔｉａｔｅｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ」 Ｍａｃｑｕａｒｒｉｅ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１７：４１３４－４１４１ ２０１１）。Ｃ１インヒビター（Ｃ１－ＩＮＨ）は、第ＸＩＩａ因子と第ＸＩＩｆ因子の両方の重要な血漿インヒビターであることが示されている（「Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｃｈａｒｇｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｏｎ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｆａｃｔｏｒ ＸＩＩａ ｂｙ Ｃ１ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」 Ｐｉｘｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ２５６（２）：４９０－８ １９８７）。
ＦＸＩＩタンパク質は、その前駆体型、成熟型、および活性型を含め、当技術分野においてよく知られていた。例えば、ヒト第ＸＩＩ因子の前駆体タンパク質配列およびその活性型は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿０００４９６．２で提供されている。また、他の種（例えば、ヒト以外の哺乳動物）のＦＸＩＩタンパク質も当技術分野において知られていた。それらの構造情報は、当技術分野において見出すことができ、例えば、ヒトＦＸＩＩの配列をクエリとして用いて、公開されている遺伝子データベースから特定できる。
「活性型」または「機能的」第ＸＩＩ因子は、成熟型を含む天然に存在する第ＸＩＩ因子の対応物と類似しているが必ずしも同一でなくてもよい生物学的活性を保持する、第ＸＩＩ因子ポリペプチドまたは第ＸＩＩ因子ポリペプチドのフラグメントを指す。一部の実施形態において、活性型または機能的第ＸＩＩ因子は、ｆＣ１－ＩＮＨに結合する、第ＸＩＩ因子ポリペプチドまたは第ＸＩＩ因子ポリペプチドのフラグメントである。一部の実施形態において、活性型または機能的第ＸＩＩ因子は、第ＸＩＩａ因子ポリペプチド、またはｆＣ１－ＩＮＨに結合する第ＸＩＩａ因子ポリペプチドのフラグメント、である。一部の実施形態において、活性型または機能的第ＸＩＩ因子は、第ＸＩＩｆ因子ポリペプチド、またはｆＣ１－ＩＮＨに結合する第ＸＩＩｆ因子ポリペプチドのフラグメント、である。
他の例では、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、血漿カリクレイン（ｐＫａｌ）、例えば天然に存在するｐＫａｌタンパク質の触媒フラグメント、である。血漿カリクレインは、接触系のセリンプロテアーゼ成分である（Ｓａｉｎｚ Ｉ．Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ９８， ７７－８３， ２００７）。接触系は、異種表面または負に帯電した表面への曝露時に第ＸＩＩａ因子によって、あるいは内皮細胞表面上でプロリルカルボキシペプチダーゼによって、活性化される（Ｓａｉｎｚ Ｉ．Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ９８， ７７－８３， ２００７）。血漿カリクレインの活性化は、その第ＸＩＩ因子のフィードバック活性化を介して内因性凝固を増幅し、炎症促進性ノナペプチドであるブラジキニンの産生を介して炎症を亢進する。循環における第１のキニノゲナーゼとして、血漿カリクレインは、血管系におけるブラジキニンの生成に大きく関与している。
ｐＫａｌタンパク質は、当技術分野においてよく知られている。例示的な血漿カリクレインの配列は、ヒト（アクセッション番号：ＮＰ＿０００８８３．２）、マウス（アクセッション番号：ＮＰ＿０３２４８１．１）、またはラット（アクセッション番号：ＮＰ＿０３６８５７．２）の血漿カリクレインのアミノ酸配列を包含してよい。
「活性型」または「機能的」血漿カリクレインは、成熟型を含む天然に存在する血漿カリクレインの対応物と類似しているが必ずしも同一でなくてもよい生物学的活性（例えば、プロテアーゼ活性）を保持する、血漿カリクレインポリペプチドまたは血漿カリクレインポリペプチドのフラグメントを指す。一部の実施形態において、活性型または機能的血漿カリクレインは、ｆＣ１－ＩＮＨに結合する、血漿カリクレインポリペプチドまたは血漿カリクレインポリペプチドのフラグメントである。
さらに他の例では、本明細書で開示されるｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、Ｃ１ｓおよびＣ１ｒ、またはそれらの活性／機能的フラグメント、であってよい。Ｃ１ｓおよびＣ１ｒは、補体の最初の成分（Ｃ１）の、活性化された相同的なセリンプロテアーゼである。Ｃ１ｓおよびＣ１ｒは両方とも、Ｃ１－ＩＮＨと複合体を形成できる。Ａｒｌａｕｄ ｅｔ ａｌ．， （１９９３） Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ２２３， ６１－８２。Ｃ１ｓは、Ｃ１複合体の触媒機能を遂行するモジュラーセリンプロテアーゼである。Ｃ１ｒは、タンパク質分解的切断によってＣ１ｓをその活性型へと活性化する酵素である。
また、Ｃ１ｓタンパク質およびＣ１ｒタンパク質も当技術分野においてよく知られている。例えば、ヒトＣ１ｓの前駆体タンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿００１７２５．１で提供されており、ヒトＣ１ｒは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿００１７２４．４で提供されている。
「活性型」または「機能的」Ｃ１ｓおよびＣ１ｒは、成熟型を含む天然に存在するＣ１ｓおよびＣ１ｒの対応物とそれぞれ類似しているが必ずしも同一でなくてもよい生物学的活性を保持する、Ｃ１ｓおよびＣ１ｒのポリペプチドのフラグメントを指す。一部の実施形態において、活性型または機能的Ｃ１ｓまたはＣ１ｒフラグメントは、ｆＣ１－ＩＮＨに結合する、Ｃ１ｓポリペプチドまたはＣ１ｓポリペプチドの一部である。
ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質のいずれも、組換え技術によって作製されてよいか、適切な天然源から単離されてよい。
（ｂ）Ｃ１－ＩＮＨ結合物質
本明細書で開示されるＬＦＡ法および装置において使用するためのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、Ｃ１－ＩＮＨに結合することができる任意の分子（例えば、タンパク質またはポリペプチド）であってよい。一部の例では、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、ｆＣ１－ＩＮＨに対して特異的である。他の例では、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、機能的Ｃ１－ＩＮＨおよび非機能的Ｃ１－ＩＮＨの両方と交差反応する。
本明細書で開示されるＬＦＡ法および装置において使用するためのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、Ｃ１－ＩＮＨに結合することができる任意の分子（例えば、タンパク質またはポリペプチド）であってよい。一部の例では、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、ｆＣ１－ＩＮＨに対して特異的である。他の例では、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、機能的Ｃ１－ＩＮＨおよび非機能的Ｃ１－ＩＮＨの両方と交差反応する。
Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体であってよい。本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメインまたは免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質を指す。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）、および軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）を含んでよい。別の例では、抗体は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域および２つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。用語「抗体」は、抗体の抗原結合フラグメント（例えば、一本鎖抗体、ＦａｂおよびｓＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ、ならびにドメイン抗体（ｄＡｂ）フラグメント（ｄｅ Ｗｉｌｄｔ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９６； ２６（３）：６２９－３９））ならびに完全抗体を包含する。抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（ならびにそれらのサブタイプ）の構造的特徴を有してよい。
ＶＨ領域およびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）と呼称される、より保存された領域が散在する、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と呼称される超可変性の領域にさらに細分できる。フレームワーク領域とＣＤＲの範囲は、正確に定義されている（Ｋａｂａｔ， Ｅ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． （１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２、およびＣｈｏｔｈｉａ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， （１９８７） Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １９６：９０１－９１７を参照のこと；また、ｗｗｗ．ｈｇｍｐ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋも参照のこと）。本明細書ではＫａｂａｔの定義が用いられる。ＶＨおよびＶＬはそれぞれ、典型的には、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
抗体のＶＨ鎖またはＶＬ鎖は、重鎖または軽鎖の定常領域の全部または一部をさらに含むことにより重鎖または軽鎖の免疫グロブリン鎖をそれぞれ形成してよい。一実施形態では、抗体は、２つの重鎖免疫グロブリン鎖と２つの軽鎖免疫グロブリン鎖の四量体であり、ここで、重鎖免疫グロブリン鎖と軽鎖免疫グロブリン鎖は、例えばジスルフィド結合によって、相互連結されている。ＩｇＧにおいて、重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３という３つの免疫グロブリンドメインを含む。軽鎖定常領域は、ＣＬドメインを含む。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は通常、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の最初の成分（Ｃ１ｑ）が包含される宿主組織または因子への抗体の結合を媒介する。免疫グロブリンの軽鎖は、カッパ鎖またはラムダ鎖のものであってよい。一実施形態では、抗体はグリコシル化される。抗体は、抗体依存性細胞傷害および／または補体媒介性細胞傷害に関して機能的であってよい。
一部の実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体は、Ｃ１－ＩＮＨ、例えばｆＣ１－ＩＮＨのエピトープまたはｆＣ１－ＩＮＨと非機能的Ｃ１－ＩＮＨが共有するエピトープ、に特異的に結合してよい。抗原またはエピトープに「特異的に結合する」抗体は、当技術分野においてよく理解されている用語であり、また、そのような特異的結合を決定する方法も当技術分野においてよく知られている。抗体は、特定の標的抗原と、別の標的と反応または結合する場合に比べて、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／または、より高い親和性で、反応または結合すれば、「特異的結合」を示すと言われる。抗体は、他の物質に結合する場合に比べて、より高い親和性で、より高い結合活性で、より容易に、および／または、より長い持続時間で、結合する場合、標的となる抗原またはエピトープに「特異的に結合する」。例えば、抗原（例えば、Ｃ１－ＩＮＨ）またはその中の抗原性エピトープに特異的に（または優先的に）結合する抗体は、この標的抗原と、他の抗原または同じ抗原における他のエピトープに結合する場合に比べて、より高い親和性で、より高い結合活性で、より容易に、および／または、より長い持続時間で、結合する抗体である。また、この定義を読むことにより、例えば、第１の標的抗原に特異的に結合する抗体は、第２の標的抗原に特異的または優先的に結合してもしなくてもよい、ということも理解される。従って、「特異的結合」または「優先的結合」は、必ずしも排他的結合を必要とするわけではない（但し、排他的結合を含んでもよい）。一般的に、但し必ずしもそうであるわけではないが、結合への言及は、優先的結合を意味する。一部の例では、標的抗原またはそのエピトープに「特異的に結合する」抗体は、他の抗原にも同じ抗原における他のエピトープにも結合しない可能性がある。
本明細書で開示されるＬＦＡ法および装置において使用するためのＣ１－ＩＮＨに結合する抗体は、Ｃ１－ＩＮＨまたはその適切なエピトープに対して適切な結合親和性を有してよい。本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、見かけの結合定数またはＫＡを指す。ＫＡは、解離定数（ＫＤ）の逆数である。本明細書で説明される抗体は、少なくとも１０－５、１０－６、１０－７、１０－８、１０－９、１０－１０Ｍの、またはそれよりも低い、結合親和性（ＫＤ）を有してよい。結合親和性の増加は、ＫＤの減少に対応する。第２の抗原と比べて第１の抗原に対してより高い親和性で抗体が結合することは、第２の抗原との結合についてのＫＡ（または数値ＫＤ）よりも第１の抗原との結合についてのＫＡが高いこと（または、数値ＫＤが小さいこと）によって示すことができる。そのような場合、抗体は、第２の抗原よりも第１の抗原に対して特異性を有する。（例えば、特異性または他の比較についての）結合親和性の差は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、５００、１０００、１０，０００または１０５倍であってよい。結合親和性（または結合特異性）は、従来の方法で決定されてよい。
Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体は、完全長抗体であってよい。あるいは、抗体は、完全長抗体の抗原結合フラグメントである。完全長抗体の「抗原結合フラグメント」なる用語は、目的の標的に特異的に結合する能力を保持する、完全長抗体の１つ以上のフラグメントを指す。完全長抗体の「抗原結合フラグメント」なる用語に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメントである、Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメントである、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の一本の腕のＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨドメインからなる、ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．， （１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；および（ｖｉ）機能性を保持する単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；が挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、組換え法を用いて、それらを、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている一価の分子を形成するようにＶＬ領域とＶＨ領域がペアになる一本のタンパク質鎖とすることが可能な合成リンカーにより、それらを連結させることができる。例えば、米国特許第５，２６０，２０３号、同第４，９４６，７７８号、および同第４，８８１，１７５号；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照のこと。抗体フラグメントは、当業者に知られている従来の技術を含む任意の適切な技術を用いて取得されてよい。
本明細書で説明されるようなＣ１－ＩＮＨに結合する抗体のいずれも、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれかであってよい。「モノクローナル抗体」は、同種抗体集団を指し、「ポリクローナル抗体」は、異種抗体集団を指す。これら２つの用語は、抗体の供給源または抗体が作製される様式を限定するものではない。
Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体は、当技術分野において知られている任意の方法によって作製されてよい。例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， （１９９８） Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。一部の実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨ（例えば、ヒトＣ１－ＩＮＨ）に対して特異的な抗体は、従来のハイブリドーマ技術によって作製されてよい。他の実施形態では、Ｃ１－ＩＮＨに対して特異的な抗体は、従来の抗体ライブラリースクリーニング技術に従って抗体ライブラリーから単離されてよい。
一部の実施形態において、抗体は、ヒトＣ１－ＩＮＨに特異的に結合する抗体である。一部の実施形態において、抗体は、ヒトＣ１－ＩＮＨに特異的に結合するモノクローナル抗体である。一部の実施形態において、抗体は、抗体クローンＭＭ０６またはＭＭ０３（それぞれ１０９９５－ＭＭ０６および１０９９５－ＭＭ０３とも呼称される；Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．社）など、ヒトＣ１－ＩＮＨに特異的に結合するマウスモノクローナル抗体である。一部の実施形態において、抗体は、ヒトＣ１－ＩＮＨに特異的に結合するポリクローナル抗体である。一部の実施形態において、抗体は、抗体クローンＲＰ０１またはＲＰ０２（それぞれ１０９９５－ＲＰ０１および１０９９５－ＲＰ０２とも呼称される；Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．社）など、ヒトＣ１－ＩＮＨに特異的に結合するウサギポリクローナル抗体である。一部の実施形態において、抗体はＲＰ０２である。
（ｃ）ドッキング－捕捉物質（Docking-Capture agent）
ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質およびＣ１－ＩＮＨ結合物質のうちの１つは、本明細書で開示されるようなＬＦＡ法および装置においてやはり使用される捕捉物質に結合することができる、ドッキング物質（docketing agent）とコンジュゲートされる。一実施形態では、ドッキング物質は、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質（例えば、ＦＸＩＩａ）にコンジュゲートされる。他の実施形態では、ドッキング物質は、Ｃ１－ＩＮＨ（例えば、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体）にコンジュゲートされてよい。
ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質およびＣ１－ＩＮＨ結合物質のうちの１つは、本明細書で開示されるようなＬＦＡ法および装置においてやはり使用される捕捉物質に結合することができる、ドッキング物質（docketing agent）とコンジュゲートされる。一実施形態では、ドッキング物質は、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質（例えば、ＦＸＩＩａ）にコンジュゲートされる。他の実施形態では、ドッキング物質は、Ｃ１－ＩＮＨ（例えば、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体）にコンジュゲートされてよい。
ドッキング物質および捕捉物質は、互いに結合して複合体を形成することができる任意の分子のペアを指す受容体－リガンドのペアのメンバーである。一つの例では、ドッキング物質および捕捉物質は、それぞれビオチンおよびアビジンであるか、またはその逆である。例えば、ドッキング物質はビオチンであってよく、捕捉物質はストレプトアビジンまたはポリストレプトアビジンであってよい。
（ｄ）検出可能な標識
本明細書で開示されるようなＬＦＡ法および装置において使用するためのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質のうちの１つは、検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。一部の実施形態において、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質が、検出可能な標識にコンジュゲートされる。他の実施形態では、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質が、検出可能な標識にコンジュゲートされる。あるいは、捕捉物質が、検出可能な標識にコンジュゲートされる。
本明細書で開示されるようなＬＦＡ法および装置において使用するためのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質のうちの１つは、検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。一部の実施形態において、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質が、検出可能な標識にコンジュゲートされる。他の実施形態では、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質が、検出可能な標識にコンジュゲートされる。あるいは、捕捉物質が、検出可能な標識にコンジュゲートされる。
本明細書で使用される場合、「検出可能な標識」は、検出可能なシグナルを直接、あるいは間接的に、放出することができる任意の分子を指す。一部の実施形態において、検出可能な標識は、フルオロフォア（例えば、フルオレセイン）であってよい。本明細書で使用される場合、用語「フルオロフォア」（「蛍光標識」または「蛍光色素」とも呼称される）は、定義された励起波長で光エネルギーを吸収して異なる波長で光エネルギーを放出する部分を指す。
フルオロフォアの例としては、限定するものではないが、キサンテン誘導体（例えば、フルオレセイン、ローダミン、オレゴングリーン、エオシン、およびテキサスレッド）、シアニン誘導体（例えば、シアニン、インドカルボシアニン、オキサカルボシアニン、チアカルボシアニンおよびメロシアニン）、ナフタレン誘導体（例えば、ダンシルおよびプロダン誘導体）、クマリン誘導体、オキサジアゾール誘導体（例えば、ピリジルオキサゾール、ニトロベンゾオキサジアゾールおよびベンゾオキサジアゾール）、ピレン誘導体（例えば、カスケードブルー（cascade blue））、オキサジン誘導体（例えば、ナイルレッド、ナイルブルー、クレシルバイオレットおよびオキサジン１７０）、アクリジン誘導体（例えば、プロフラビン、アクリジンオレンジおよびアクリジンイエロー）、アリールメチン誘導体（例えば、オーラミン、クリスタルバイオレットおよびマラカイトグリーン）、テトラピロール誘導体（例えば、ポルフィン、フタロシアニンおよびビリルビン）、または蛍光タンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質）が挙げられる。
一部の実施形態において、検出可能な標識はフィコエリトリンである。
一部の実施形態において、検出可能な標識は発色団（例えば、アントラセン）である。一部の実施形態において、検出可能な標識は半導体粒子（例えば、量子ドット）である。一部の実施形態において、検出可能な標識は、半導体粒子（例えば、量子ドット）に連結される。一部の実施形態において、検出可能な標識はユウロピウムである。一部の実施形態において、検出可能な標識はコロイド金である。一部の実施形態において、検出可能な標識は、金粒子に連結される。一部の実施形態において、検出可能な標識は、赤色金粒子（red gold particles）に連結される。一部の実施形態において、検出可能な標識は、ラテックス粒子に連結される。一部の実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、ユウロピウムにコンジュゲートされた抗体ＲＰ０２である。一部の実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、金粒子にコンジュゲートされた抗体ＲＰ０２である。一部の実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、赤色金粒子にコンジュゲートされた抗体ＲＰ０２である。一部の実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、ラテックス粒子にコンジュゲートされた抗体ＲＰ０２である。
ＩＩ．ＬＦＡ装置
一部の態様では、本開示は、ｆＣ１－ＩＮＨを含むサンプルにおいてｆＣ１－ＩＮＨを測定するためのラテラルフローアッセイ（ＬＦＡ）装置を提供する。ここでは、本明細書で説明される例示的なＬＦＡ装置の様々な実施形態を図示する図１～４を参照する。
一部の態様では、本開示は、ｆＣ１－ＩＮＨを含むサンプルにおいてｆＣ１－ＩＮＨを測定するためのラテラルフローアッセイ（ＬＦＡ）装置を提供する。ここでは、本明細書で説明される例示的なＬＦＡ装置の様々な実施形態を図示する図１～４を参照する。
図１で示されるように、装置１００は、一部の実施形態では、コンジュゲートパッド２００と、メンブレン３００と、任意選択で吸収パッド４００および支持部材５００と、を含み、支持部材５００にコンジュゲートパッド２００と、メンブレン３００と、任意選択で吸収パッド４００と、が取り付けられる。
コンジュゲートパッド２００は、メンブレン３００と直接、あるいはリンカーを介して、連通している。装置が吸収パッド４００を含む場合、コンジュゲートパッド２００および吸収パッド４００は、吸収パッド４００と直接、あるいは間接的に、連通しているメンブレン３００によって隔てられる。一部の実施形態において、コンジュゲートパッド２００は、例えば２～６ｍｍ（図２で示されるように３ｍｍなど）、メンブレン３００と重なる。代わりに、またはさらに、メンブレン３００は、例えば２～６ｍｍ（図２で示されるように３ｍｍなど）、吸収パッド４００と重なる。
コンジュゲートパッド２００、メンブレン３００、吸収パッド４００、および支持部材５００の特定の特徴および寸法は、所望の結果を達成するように必要に応じて改変されてよい。図２で示されるように、一部の実施形態では、支持メンブレンは８０ｍｍの長さを有し、これは、コンジュゲートパッド（４２ｍｍ）とメンブレン（２５ｍｍ）と吸収パッド（１９ｍｍ）の長さの合計からメンブレンに対するサンプルパッドと吸収パッドの重なり（３ｍｍ、３ｍｍ）を差し引いたものである。
装置１００の上面図である図３Ａで示されるように、装置は、一部の実施形態では、本明細書で説明されるもののようなｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質を固定化するのに有用である、様々なゾーン（２１０、２２０、２３０）を含んでよい。一部の実施形態において、装置１００は、コンジュゲートパッド２００上にあってよい第１のゾーン２１０および第２のゾーン２２０と、メンブレン３００上にあってよい第３のゾーン２３０と、を含む。
ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質の各々は、（任意の順序であってよい）ゾーン２１０、２２０、および２３０のうちの１つの上に固定化されてよい。これらの作用物質のいずれも、当技術分野で知られている任意の手段を用いて固定化されてよい。作用物質は、コンジュゲートパッド２００および／またはメンブレン３００の表面に直接、または間接的に、固定化または結合されてよい。一部の実施形態において、結合物質は、共有結合により表面に固定化される。一部の実施形態において、結合物質は、非共有結合により表面に固定化される。一部の実施形態において、結合物質は、リンカーにより表面に固定化される。リンカーの例としては、炭素含有鎖、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、核酸、単糖ユニット、ビオチン、アビジン、およびペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。
一部の実施形態において、ＦＸＩＩａなどのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第１のゾーン２１０に固定化される。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、ビオチンなどのドッキング物質にコンジュゲートされてよい。Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体などのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第２のゾーン２２０に固定化されてよい。Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、本明細書で開示されるものなどの検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。アビジン（例えば、ストレプトアビジン）などの捕捉物質は、第３のゾーン２３０に固定化されてよい。
一部の実施形態において、ＦＸＩＩａなどのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第１のゾーン２１０に固定化される。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、本明細書で説明されるもののような検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体などのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第２のゾーン２２０に固定化されてよい。Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、ビオチンなどのドッキング物質にコンジュゲートされてよい。アビジン（例えば、ストレプトアビジン）などの捕捉物質は、第３のゾーン２３０に固定化されてよい。
一部の実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体などのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第１のゾーン２１０に固定化されてよい。Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、ビオチンなどのドッキング物質にコンジュゲートされてよい。ＦＸＩＩａなどのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第２のゾーン２２０に固定化されてよい。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、本明細書で説明されるものなどの検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。アビジン（例えば、ストレプトアビジン）などの捕捉物質は、第３のゾーン２３０に固定化されてよい。
一部の実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体などのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第１のゾーン２１０に固定化されてよい。Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、本明細書で説明されるものなどの検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。ＦＸＩＩａなどのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第２のゾーン２２０に固定化されてよい。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、ビオチンなどのドッキング物質にコンジュゲートされてよい。アビジン（例えば、ストレプトアビジン）などの捕捉物質は、第３のゾーン２３０に固定化されてよい。
一部の実施形態において、ＦＸＩＩａなどのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第１のゾーン２１０に固定化される。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、ビオチンなどのドッキング物質にコンジュゲートされてよい。アビジン（例えば、ストレプトアビジン）などの捕捉物質は、第２のゾーン２２０に固定化されてよい。捕捉物質は、本明細書で開示されるものなどの検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体などのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第３のゾーン２３０に固定化されてよい。
一部の実施形態において、ＦＸＩＩａなどのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第１のゾーン２１０に固定化される。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、本明細書で説明されるものなどの検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。アビジン（例えば、ストレプトアビジン）などの捕捉物質は、第２のゾーン２２０に固定化されてよい。Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体などのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第３のゾーン２３０に固定化されてよい。Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、ビオチンなどのドッキング物質にコンジュゲートされてよい。
一部の実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体などのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第１のゾーン２１０に固定化されてよい。Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、ビオチンなどのドッキング物質にコンジュゲートされてよい。アビジン（例えば、ストレプトアビジン）などの捕捉物質は、第２のゾーン２２０に固定化されてよい。捕捉物質は、本明細書で開示されるものなどの検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。ＦＸＩＩａなどのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第３のゾーン２３０に固定化されてよい。
一部の実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体などのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第１のゾーン２１０に固定化されてよい。Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、本明細書で説明されるものなどの検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。アビジン（例えば、ストレプトアビジン）などの捕捉物質は、第２のゾーン２２０に固定化されてよい。ＦＸＩＩａなどのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第３のゾーン２３０に固定化されてよい。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、ビオチンなどのドッキング物質にコンジュゲートされてよい。
本明細書で開示されるＬＦＡ装置のいずれも、本明細書で説明されるものなどのサンプルを配置するためのものであってよい第４のゾーン２４０と、任意選択で、バッファー溶液を配置するためのものであってよい第５のゾーン２５０と、をさらに含んでよい。
第５のゾーン２５０は、バッファー溶液が第５のゾーン２５０に配置された際にバッファー溶液が第１のゾーン２１０から第３のゾーン２３０へと装置を通って流れることができるように装置の一端に配置されてよい。一部の例では、第５のゾーン２５０は、第１のゾーン２１０と重なってよい。図３Ｂを参照のこと。この場合には、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体などのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第５のゾーン２５０と重なる第１のゾーン２１０に固定化されてよい。Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。
代わりに、またはさらに、第４のゾーン２４０は、第５のゾーン２５０と第２のゾーン２２０との間に配置されてよい。一部の例では、第４のゾーン２４０と第２のゾーン２２０は重なってよい。図３Ｂを参照のこと。ビオチンなどのドッキング物質にコンジュゲートされてよいＦＸＩＩａなどのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、第２のゾーン２２０に固定化されてよい。
図４で示されるように、装置１００は、一部の実施形態では、取り外し可能であってよいハウジング６００をさらに含んでよい。ハウジング内にある本明細書で説明されるような装置の画像が図５で示されている。ハウジング６００は、装置１００のコンジュゲートパッド２００とメンブレン３００の少なくとも一部を露出するように構成されてよい。一部の実施形態において、ハウジング６００は、第１のゾーン２１０と位置が合ってよいバッファーポート６１０を形成するための第１の開口部を含む。ハウジング６００は、第２のゾーン２２０と位置が合ってよいサンプルポート６２０を形成するための第２の開口部をさらに含んでよい。さらに、ハウジング６００は、第３のゾーン２３０と位置が合ってよい試験窓６３０を形成するための第３の開口部を含んでよい。
一部の実施形態において、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体などのＣ１－ＩＮＨ結合物質は、バッファーポート６１０と位置が合う第１のゾーン２１０に固定化される。図４。Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、本明細書で説明されるものなどの検出可能な標識にコンジュゲートされてよい。ＦＸＩＩａなどのｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、サンプルポート６２０と位置が合ってよい第２のゾーン２２０に固定化されてよい。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、ビオチンなどのドッキング物質にコンジュゲートされてよい。アビジン（例えば、ストレプトアビジン）などの捕捉物質は、試験窓６３０と位置が合ってよい第３のゾーン２３０に固定化されてよい。
一部の例では、サンプルは、サンプルポート６２０に配置されてよく、これにより、サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨとＦＸＩＩａ－ビオチンコンジュゲートとの結合が可能になる。バッファー溶液は、バッファーポート６１０に配置されてよく、これにより、第１のゾーン２１０上のＣ１－ＩＮＨ結合物質が第２のゾーン２２０へとバッファー溶液とともに移動することが可能になる。Ｃ１－ＩＮＨ結合物質が第２のゾーン２２０でｆＣ１－ＩＮＨ－ＦＸＩＩａ複合体と接触すると、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質／ｆＣ１－ＩＮＨ／ＦＸＩＩａ－ビオチンの複合体が形成される。この複合体は、第３のゾーン２３０へとバッファー溶液とともに移動し、第３のゾーン２３０におけるビオチンとストレプトアビジンとの間の相互作用により第３のゾーン２３０で捕捉されるであろう。試験窓６３０と位置が合う第３のゾーン２３０においてＣ１－ＩＮＨ結合物質にコンジュゲートされた検出可能な標識から放出されたシグナルが、測定されてよく、これが、サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在またはレベルを示す。
代わりに、またはさらに、ハウジング６００は、サンプルポート６１０および／またはバッファーポート６２０および／または試験窓６３０の可視化を容易にするために透明であってよい。一実施形態において、ハウジングの一部は透明である。一部の実施形態において、ハウジング６００全体が透明である。
ハウジング６００は、一部の実施形態では、サンプルまたは結果の識別を容易にするためにラベルを含む。一部の実施形態において、ハウジング６００は、試験窓６３０における結果の識別を容易にするために１つ以上のラベルを含む。一部の実施形態において、１つ以上のラベルは、サンプル結果を識別する。
本明細書で説明されるような装置中の複数の構成要素（例えば、コンジュゲートパッド、メンブレン、吸収パッド、および支持部材）を含め、装置の様々な実施形態は、適切な材料を用いて、例えば、任意の適切なコンジュゲートパッドを用いて、任意の適切なメンブレンを用いて、任意の適切な吸収パッドを用いて、任意の適切な支持部材を用いて、任意の適切な結合物質を用いて、およびそれらの任意の適切な組み合わせを用いて、形成されてよい、ということが理解されるべきである。
例えば、本明細書で開示されるようなＬＦＡ装置中のメンブレン３００は、ニトロセルロースメンブレン、ナイロンメンブレン、セルロースメンブレン、ポリビニリデンフルオライドメンブレン（polyvinylidine fluoride membrane）、ポリカーボネートメンブレン、ポリプロピレンメンブレン、ポリエチレンメンブレン、ポリテトラフルオロエチレンメンブレン、およびポリパラフェニレンテレフタルアミドメンブレンを包含するがこれらに限定されない、任意の適切なメンブレンであってよい。一部の実施形態において、メンブレンは、ニトロセルロースメンブレンである。
任意の適切な支持部材が、本明細書で説明される装置において使用されてよい。一部の実施形態において、支持部材は、金属を含む。一部の実施形態において、支持部材は、プラスチックを含む。一部の実施形態において、支持部材は、スチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエチレン、およびポリ塩化ビニルからなる群より選択されるプラスチックを含む。
任意の適切なパッドが、本明細書で説明される装置においてコンジュゲートパッドとして使用されてよい。一部の実施形態において、コンジュゲートパッドは、セルロースまたはガラス繊維を含む。一部の実施形態において、吸収パッドは、セルロースまたはガラス繊維を含む。
本明細書で提供される装置は、サンプルパッドをさらに含んでよい。一部の実施形態において、サンプルパッドは、セルロースまたはガラス繊維を含む。
本発明の様々な実施形態は、上記の特徴のうちの１つ以上を備えて形成されてよい、ということが理解されるべきである。本発明の上記の態様と特徴は、任意の適切な組み合わせで使用されてよく、これは、本発明がこの点では限定されないためである。また、図面は、本発明の様々な実施形態に組み込まれてよい様々な構成要素と特徴を図示している、ということも理解されるべきである。簡略化のために、一部の図面は、２つ以上の任意選択の特徴また構成要素を図示している可能性がある。しかし、本発明は、図面において開示される特定の実施形態に限定されない。本発明は、任意の１つの図面において図示される構成要素の一部のみを含んでよい実施形態を包含する、および／または異なる図に図示される構成要素を組み合わせた実施形態を包含してもよい、ということが認識されるべきである。
ＩＩＩ．機能的Ｃ１－ＩＮＨの測定
また、サンプル中の機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出および／または定量化するための方法も本明細書で提供される。本明細書で開示されるアッセイ法は、全て本明細書で開示されているｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質の使用を伴う。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質およびＣ１－ＩＮＨ作用物質のうちの１つは、捕捉物質と結合するドッキング物質にコンジュゲートされる。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ作用物質、および捕捉物質のうちの１つは、検出可能な標識にコンジュゲートされる。検出可能な標識およびドッキング物質は、別々の作用物質にコンジュゲートされる。
また、サンプル中の機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出および／または定量化するための方法も本明細書で提供される。本明細書で開示されるアッセイ法は、全て本明細書で開示されているｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質の使用を伴う。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質およびＣ１－ＩＮＨ作用物質のうちの１つは、捕捉物質と結合するドッキング物質にコンジュゲートされる。ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ作用物質、および捕捉物質のうちの１つは、検出可能な標識にコンジュゲートされる。検出可能な標識およびドッキング物質は、別々の作用物質にコンジュゲートされる。
本明細書で開示されるアッセイ法を実施するために、ｆＣ１－ＩＮＨを含む疑いのあるサンプルが、（ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質またはＣ１－ＩＮＨ結合物質のいずれかにコンジュゲートされたドッキング物質との相互作用を介した）ｆＣ１－ＩＮＨ、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質を含む複合体の形成を可能にする条件下でｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質と接触させられてよい。サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在またはレベルは、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質のうちのいずれか１つにコンジュゲートされていてよい検出可能な標識から放出されるシグナルを測定することによって検出および／または定量化できる。
一部の例では、サンプルとｆＣ１－ＩＮＨ結合物質（例えば、ＦＸＩＩａ）が最初に、ｆＣ１－ＩＮＨ／ＦＸＩＩａ複合体の形成を可能にするために適切な期間（例えば、少なくとも５分間（５～１０分間など））インキュベートされてよい。次いで、この複合体が、三成分の複合体を形成させるためにＣ１－ＩＮＨ結合物質（Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体など）とインキュベートされてよく、その後、この三成分の複合体が、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質またはＣ１－ＩＮＨ結合物質のいずれかにコンジュゲートされたドッキング物質と結合する捕捉物質と接触させられてよい。最終的な複合体中の１つの成分にコンジュゲートされた検出可能な標識から放出されるシグナルが、サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在／不在および／またはレベルを決定するために測定されてよい。
本明細書で提供されるｆＣ１－ＩＮＨを検出および／または定量化するための方法は、一部の実施形態では、（ｉ）サンプルをｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質と接触させて複合体を形成させるステップであって、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質およびＣ１－ＩＮＨ作用物質のうちの１つが、捕捉物質に結合するドッキング物質にコンジュゲートされており、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ作用物質、および捕捉物質のうちの１つが、検出可能な標識にコンジュゲートされており、検出可能な標識およびドッキング物質は、別々の作用物質にコンジュゲートされている、ステップと、（ｉｉ）複合体中の検出可能な標識から放出されるシグナルを検出するステップであって、複合体中の検出可能な標識から放出されるシグナルの存在が、サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在を示す、ステップと、を含む。
本明細書で説明される方法は、任意の適切な様式で任意の適切な基材上に固定化された捕捉物質を包含する。基材の例としては、ビーズ、粒子、スライド、およびマルチウェルプレートが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、捕捉物質は、共有結合で基材に結合される。一部の実施形態において、捕捉物質は、非共有結合で基材に結合される。一部の実施形態において、捕捉物質は、例えばリンカーを介して、間接的に基材に結合される。
一部の実施形態において、本明細書で開示されるアッセイ法は、本明細書で開示されるＬＦＡ装置のいずれかを用いて実施されてよい。例えば、サンプルは、サンプルポート６２０（図４）に配置されてよく、バッファー溶液は、バッファーポート６１０に配置されてよい。サンプルポート６２０は、第２のゾーン２２０と位置合わせされてよい。バッファーポート６１０は、第１のゾーン２１０と位置合わせされてよい。バッファー溶液は、例えば、第１のゾーン２１０から第２のゾーン２２０および第３のゾーン２３０へと、サンプル、ならびに第１のゾーン２１０および第２のゾーン２２０に固定化されたｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および／または捕捉物質、とともに流れるであろう。これは、バッファー溶液が第１のゾーン２１０、第２のゾーン２２０、および第３のゾーン２３０を通過する際にサンプルがｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質と接触することを可能にし、その結果、サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨ、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質を含む複合体を形成させることができる。サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在またはレベルは、複合体中の１つの成分にコンジュゲートされた検出可能な標識から放出されるシグナルを測定することによって決定できる。
一つの例では、ＦＸＩＩａ－ビオチンとユウロピウム粒子にコンジュゲートされた抗Ｃ１－ＩＮＨ抗体とを含むＬＦＡ装置（例えば、図４において示されるように構成された装置）を用いてｆＣ１－ＩＮＨを検出および／または定量化するための方法が、単に例示を目的として説明される。この例では、ユウロピウム粒子にコンジュゲートされた抗Ｃ１－ＩＮＨ抗体は、検出用標識にコンジュゲートされたＣ１－ＩＮＨ結合物質として機能し、抗Ｃ１－ＩＮＨ抗体コンジュゲートは、第１のゾーン２１０に固定化される。ビオチンにコンジュゲートされたＦＸＩＩａは、ドッキング物質にコンジュゲートされたｆＣ１－ＩＮＨ結合物質として機能し、ＦＸＩＩａ－ビオチンは、第２のゾーン２２０に固定化される。サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在を検出するために、サンプルは、サンプルポート６２０を介してコンジュゲートパッド２００上の第２のゾーン２２０に配置される。サンプルが第２のゾーン２２０においてＦＸＩＩａ－ビオチンと接触すると、サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨがＦＸＩＩａに結合し、それにより、ＦＸＩＩａ－ビオチン：ｆＣ１－ＩＮＨ複合体が形成される。
本明細書で使用される場合、用語「接触」は、存在する場合にサンプル中のｆＣ１－ＩＮＨおよび／またはＣ１－ＩＮＨとの複合体が形成されるのに十分である適切な期間にわたってサンプルが１つ以上の結合物質に曝露されることを指す。一部の実施形態において、サンプルおよび／またはバッファーは、サンプルおよび／またはバッファーがコンジュゲートパッドまたはメンブレンを横切って移動する毛管作用を介して１つ以上の結合物質と接触する。
バッファーは、バッファーポート６１０を介してコンジュゲートパッド２００上の第１のゾーン２１０に配置されてよい。バッファーは、サンプルを第２のゾーン２２０に配置してから任意の長さの時間の後に第１のゾーン２１０に配置されてよく、例えば、バッファーは、サンプルを装置に配置してから少なくとも５分後に配置されてよい。バッファーは、抗Ｃ１－ＩＮＨ抗体コンジュゲートを可溶化し、それを、毛管作用により第１のゾーン２１０からメンブレン３００へとコンジュゲートパッド２００に沿って移動させる。バッファーが第２のゾーン２２０に到達すると、それは、ＦＸＩＩａ－ビオチン：ｆＣ１－ＩＮＨ複合体と接触し、バッファー中の抗Ｃ１－ＩＮＨ抗体コンジュゲートが、ＦＸＩＩａ－ビオチンと複合体を形成しているｆＣ１－ＩＮＨに結合し、それにより、「サンドイッチ」が形成される。この例では、従って、ｆＣ１－ＩＮＨサンドイッチは、ユウロピウム粒子にコンジュゲートされた抗Ｃ１－ＩＮＨ抗体が結合しているｆＣ１－ＩＮＨに結合した、ビオチンにコンジュゲートされたＦＸＩＩａを含む。
ｆＣ１－ＩＮＨサンドイッチを含むバッファーは、ストレプトアビジンが第３のゾーン２３０（例えば、テストライン）に固定化されているメンブレン３００へとコンジュゲートパッド２００を上に移動し続ける。この例では、ストレプトアビジンは、ドッキング物質（具体的にはビオチン）に結合する捕捉物質として機能する。バッファーが第３のゾーン２３０でストレプトアビジンと接触すると、ｆＣ１－ＩＮＨサンドイッチ中のビオチンが第３のゾーン２３０でストレプトアビジンに結合し、それにより、ｆＣ１－ＩＮＨサンドイッチが捕捉される。次いで、サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在が、試験窓６３０を介して、第３のゾーン２３０におけるユウロピウム粒子からのシグナルの存在に基づいて検出される。ｆＣ１－ＩＮＨサンドイッチの検出は、ユウロピウム粒子を介した検出に限定されない。例えば、ｆＣ１－ＩＮＨの存在は、色またはｐＨの検出可能な変化を介して検出されてよい。ｆＣ１－ＩＮＨがサンプル中に存在しない場合、ｆＣ１－ＩＮＨサンドイッチは形成されず、第３のゾーン２３０においてシグナルは検出されない。
第３のゾーン２３０内に移動した後、サンプルは、吸収パッド４００中へとメンブレン３００を上に移動し続けるが、この吸収パッド４００は、サンプルを上方に引き寄せるための芯として機能し、従って、第３のゾーン２３０からバックグラウンド物質（background material）を除去する。
本明細書で提供される方法は、様々なサンプルにおいてｆＣ１－ＩＮＨ、またはその欠如、を検出および／または定量化することを包含する。一部の実施形態において、サンプルは、対象から取得された生体サンプルである。一部の実施形態において、生体サンプルは、血清サンプル、血漿サンプル、または血液サンプルである。一部の実施形態において、サンプルは、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害（例えば、ＨＡＥ）を有することが疑われるかｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害（例えば、ＨＡＥ）のリスクがある、対象から取得される。
一部の実施形態において、生体サンプルは、対象から取得された血液サンプル（例えば、全血）である。全血は、赤血球、白血球、血小板、および血漿を含む。一部の実施形態において、血液サンプルは、血管（例えば、毛細血管、静脈、および動脈）から採取されてよい。一部の実施形態において、血液サンプルは、血液の滴（複数可）を生じさせるフィンガースティック法によって取得されてよい。一部の実施形態では、血液サンプルを取得した後、血液サンプルは、２～８℃で取り扱われる。血漿または血清の調製の場合、血漿または血清は、採血後に遠心分離によって調製されてよい。血漿サンプルおよび血清サンプルは、分析の前に－８０℃で保存されてよい。
一部の実施形態において、本明細書で説明される方法および／または装置は、対照ラインをさらに含んでよい。当業者であれば理解するように、対照ラインは、方法および／または装置が目的通りに機能している（例えば、ｆＣ１－ＩＮＨを検出している）ことを確認するために使用されてよい。
ＩＶ．ＬＦＡ法と装置の用途
本明細書で説明される方法および装置は、疾患の評価（例えば、疾患の診断または予後診断）に適用できる。評価は、対象に本明細書で説明されるような疾患（例えば、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害）のリスクがあるか対象がそのような疾患を有すると特定することを含んでよい。また、評価は、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害に対する治療の有効性を評価することなど、疾患の治療をモニタリングすることを含んでもよい。ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害の例としては、遺伝性血管性浮腫（例えば、Ｉ型ＨＡＥおよび／またはＩＩ型ＨＡＥ）、後天性血管性浮腫（例えば、Ｉ型ＡＡＥおよび／またはＩＩ型ＡＡＥ）、Ｃ１－ＩＮＨの欠陥が関連する免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））、およびＣ１－ＩＮＨの欠陥が関連する癌（例えば、リンパ腫）が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で説明される方法および装置は、疾患の評価（例えば、疾患の診断または予後診断）に適用できる。評価は、対象に本明細書で説明されるような疾患（例えば、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害）のリスクがあるか対象がそのような疾患を有すると特定することを含んでよい。また、評価は、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害に対する治療の有効性を評価することなど、疾患の治療をモニタリングすることを含んでもよい。ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害の例としては、遺伝性血管性浮腫（例えば、Ｉ型ＨＡＥおよび／またはＩＩ型ＨＡＥ）、後天性血管性浮腫（例えば、Ｉ型ＡＡＥおよび／またはＩＩ型ＡＡＥ）、Ｃ１－ＩＮＨの欠陥が関連する免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））、およびＣ１－ＩＮＨの欠陥が関連する癌（例えば、リンパ腫）が挙げられるが、これらに限定されない。
一部の実施形態において、本明細書で用いられる方法および装置は、対象が遺伝性血管性浮腫を有するかどうか、または対象に遺伝性血管性浮腫のリスクがあるかどうか、を評価するために用いられる。一般に、同様の炎症反応を示すがその病因が異なっている、異なる型の遺伝性血管性浮腫が存在する。例えば、Ｉ型ＨＡＥが、機能的ではあるが低レベルのＣ１－ＩＮＨに関連しているのに対し、ＩＩ型ＨＡＥは、正常な濃度で存在する非機能的Ｃ１－ＩＮＨに関連している。
Ａ．診断
一部の実施形態において、本明細書で説明される方法および装置は、対象（例えば、ＨＡＥなどのｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害を有することが疑われるヒト患者）から採取された生体サンプル（例えば、血清サンプルまたは血漿サンプルまたは血液サンプル）におけるｆＣ１－ＩＮＨのレベルを決定するために用いられる。次いで、ｆＣ１－ＩＮＨのレベルは、対象がｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害を有するかどうか、または対象にｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害のリスクがあるかどうか、を決定するために基準値と比較される。基準値は、本明細書で説明されるようなｆＣ１－ＩＮＨ結合物質（例えば、ＦＸＩＩａ）に結合することができるｆＣ１－ＩＮＨの対照レベルであってよい。一部の実施形態において、対照レベルは、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質に結合することができる対照サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨのレベルである。一部の実施形態において、対照サンプルは、健康な対象、または健康な対象の集団、から取得される。本明細書で使用される場合、健康な対象は、ｆＣ１－ＩＮＨのレベルが測定された時点においてｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害を明らかに有さないか、または当該疾患の病歴を有さない、対象である。
一部の実施形態において、本明細書で説明される方法および装置は、対象（例えば、ＨＡＥなどのｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害を有することが疑われるヒト患者）から採取された生体サンプル（例えば、血清サンプルまたは血漿サンプルまたは血液サンプル）におけるｆＣ１－ＩＮＨのレベルを決定するために用いられる。次いで、ｆＣ１－ＩＮＨのレベルは、対象がｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害を有するかどうか、または対象にｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害のリスクがあるかどうか、を決定するために基準値と比較される。基準値は、本明細書で説明されるようなｆＣ１－ＩＮＨ結合物質（例えば、ＦＸＩＩａ）に結合することができるｆＣ１－ＩＮＨの対照レベルであってよい。一部の実施形態において、対照レベルは、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質に結合することができる対照サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨのレベルである。一部の実施形態において、対照サンプルは、健康な対象、または健康な対象の集団、から取得される。本明細書で使用される場合、健康な対象は、ｆＣ１－ＩＮＨのレベルが測定された時点においてｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害を明らかに有さないか、または当該疾患の病歴を有さない、対象である。
また、対照レベルは、所定のレベルであってもよい。そのような所定のレベルは、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害を有さないかｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害のリスクのない対象の集団におけるｆＣ１－ＩＮＨのレベルを表してよい。所定のレベルは、様々な形態をとってよい。例えば、それは、中央値または平均など、単一のカットオフ値であってよい。一部の実施形態において、そのような所定のレベルは、ある定義された群が標的疾患を有することが知られており、別の定義された群が標的疾患を有さないことが知られている場合など、群の比較に基づいて確立されてよい。あるいは、所定のレベルは、範囲、例えば、所定のパーセンタイル内の対照集団におけるｆＣ１－ＩＮＨのレベルを表す範囲、であってよい。
本明細書で説明されるような対照レベルは、様々な方法によって決定されてよい。一部の実施形態において、対照レベルは、公知の方法を実施することによって取得されてよい。一部の実施形態において、対照レベルは、対象からのサンプルにおいてｆＣ１－ＩＮＨのレベルを決定するために用いられるのと同じアッセイを実施することによって取得されてよい。一部の実施形態において、対照レベルは、本明細書で説明される方法を実施することによって取得されてよい。一部の実施形態において、対照レベルは、本明細書で説明される装置を用いて取得されてよい。一部の実施形態において、対照レベルは、対照集団のメンバーから取得されてよく、その結果を、例えば計算プログラムによって、分析して、対照集団におけるｆＣ１－ＩＮＨのレベルを表す対照レベル（所定のレベル）を取得することができる。
対象から取得されたサンプルにおけるｆＣ１－ＩＮＨ結合物質に結合することができるｆＣ１－ＩＮＨのレベルを本明細書で説明されるような基準値と比較することによって、対象がｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患（例えば、ＨＡＥ）を有するかどうか、または対象にｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患（例えば、ＨＡＥ）のリスクがあるかどうか、について決定できる。例えば、対象のｆＣ１－ＩＮＨ結合物質に結合するｆＣ１－ＩＮＨのレベルが基準値から逸脱する（例えば、基準値に比べて低下している）場合、その候補対象は、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患（例えば、ＨＡＥ）を有する、またはそのリスクがある、と特定される可能性がある。本明細書で開示されるアッセイは、正常な対象におけるｆＣ１－ＩＮＨを表すカットオフ値を事前に決定するために用いられてよい。そのようなカットオフ値は、対象がｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患（例えば、ＨＡＥ）を有するかどうか、または対象にｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患（例えば、ＨＡＥ）のリスクがあるかどうか、を決定するために用いられてよい。一部の例では、カットオフ値よりも低い対象におけるｆＣ１－ＩＮＨのレベルは、疾患のリスクまたは発生を表す可能性がある。
本明細書で使用される場合、「低下したレベルまたは基準値未満のレベル」は、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質に結合するｆＣ１－ＩＮＨのレベルが基準値（所定の閾値または対照サンプルにおけるｆＣ１－ＩＮＨ結合物質に結合するｆＣ１－ＩＮＨのレベルなど）よりも低い、ということを意味する。
ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質に結合するｆＣ１－ＩＮＨの低下したレベルには、例えば、基準値よりも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％以上、低いｆＣ１－ＩＮＨレベルが包含される。また、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質に結合するｆＣ１－ＩＮＨの低下したレベルには、現象を非ゼロ状態（例えば、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質に結合するｆＣ１－ＩＮＨがいくらか、または検出できる程度に、サンプル中に存在する）からゼロ状態（例えば、ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質に結合するｆＣ１－ＩＮＨが全く、または検出できない程度にしか、サンプル中に存在しない）に減少させることも包含される。
一部の実施形態において、対象は、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患（例えば、ＨＡＥなどの本明細書で開示されるもの）の症状を有するヒト患者である。例えば、対象は、浮腫、完全または主に末梢性である腫れ；蕁麻疹；感染の証拠が存在しない、発赤、疼痛、および腫れ；非ヒスタミン媒介性浮腫、腫れの再発性発作、またはそれらの組み合わせを有する。一部の実施形態において、対象は、サンプルが採取された時点ではｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患の症状を有さないか、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患の症状の病歴を有さないか、ＨＡＥなどのｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患の病歴を有さない。一部の実施形態において、対象は、抗ヒスタミン療法、コルチコステロイド療法、またはその両方に対して抵抗性である。
ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患の例としては、非ヒスタミン依存性特発性血管性浮腫、関節リウマチ、クローン病、狼瘡、アルツハイマー病、敗血症性ショック、火傷、脳虚血/再灌流傷害、脳浮腫、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、黄斑浮腫、血管炎、動脈もしくは静脈の血栓症、心室補助装置またはステントに関連する血栓症、血栓症を伴うヘパリン起因性血小板減少症、血栓塞栓性疾患、および不安定狭心症を伴う冠動脈心疾患、浮腫、眼疾患、痛風、腸の腸疾患（intestinal bowel disease）、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症－変性脊椎疾患、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、遺伝性血管性浮腫、肺塞栓症、脳卒中、頭部外傷または腫瘍の周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血性イベント（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後のもの）、全身性エリテマトーデス腎炎、自己免疫疾患、炎症性疾患、心血管疾患、神経疾患、タンパク質のミスフォールディングに関連する疾患、血管新生に関連する疾患、高血圧性腎症および糖尿病性腎症、アレルギー性および呼吸器の疾患（例えば、アナフィラキシー、喘息、慢性閉塞性肺疾患、急性呼吸窮迫症候群、嚢胞性線維症、持続性鼻炎）、ならびに組織の損傷（例えば、火傷または化学的損傷）が挙げられるが、これらに限定されない。
Ｂ．治療の有効性の評価
本明細書で説明される方法および装置はまた、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患（例えば、ＨＡＥ）に対する治療の有効性を評価するために適用されてもよい。例えば、複数の生体サンプル（例えば、血清サンプル、血漿サンプル、または血液サンプル）が、治療が施される対象から当該治療の前と後に、あるいは当該治療の過程において、採取されてよい。ｆＣ１－ＩＮＨのレベルは、任意の本明細書で説明される方法によって測定されてよい。ｆＣ１－ＩＮＨのレベルが治療後に、または治療の過程にわたって（後で採取されたサンプルにおけるｆＣ１－ＩＮＨのレベルが先に採取されたサンプルにおけるレベルに比べて）、増加する場合、同じままであるか増加する場合、それは、治療が有効であることを示す。
本明細書で説明される方法および装置はまた、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される疾患（例えば、ＨＡＥ）に対する治療の有効性を評価するために適用されてもよい。例えば、複数の生体サンプル（例えば、血清サンプル、血漿サンプル、または血液サンプル）が、治療が施される対象から当該治療の前と後に、あるいは当該治療の過程において、採取されてよい。ｆＣ１－ＩＮＨのレベルは、任意の本明細書で説明される方法によって測定されてよい。ｆＣ１－ＩＮＨのレベルが治療後に、または治療の過程にわたって（後で採取されたサンプルにおけるｆＣ１－ＩＮＨのレベルが先に採取されたサンプルにおけるレベルに比べて）、増加する場合、同じままであるか増加する場合、それは、治療が有効であることを示す。
対象が治療に反応しないと特定された場合、より高い用量および／または投与頻度の治療剤が、特定された対象に投与される。一部の実施形態において、治療剤の投与量または投与頻度は、治療に反応すると特定された対象またはさらなる治療を必要としない対象において、維持、低減、または中止される。あるいは、異なる治療が、最初の治療に反応しないことが判明した対象に適用されてよい。
治療剤は、カリクレイン結合物質、ブラジキニンＢ２受容体アンタゴニスト、Ｃ１－ＩＮＨ補充剤（C1-INH replacement agents）、ＤＸ－２９３０、およびＤＸ８８を包含するが、これらに限定されない（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１４／１１３７０１号を参照のこと）。
本明細書で説明される装置および方法がより完全に理解されることを目的として、以下の実施例を示す。本出願で説明される実施例は、本明細書で提供される方法および組成物を説明するために提供されるものであり、決して、それらの範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
実施例１：機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出および／または定量化するためのラテラルフローアッセイ（ＬＦＡ）装置の調製
メンブレンのストライピング（Striping）
ＦＲＯＮＴＬＩＮＥ ＨＲ（商標）（ＢｉｏＤｏｔ）を使用してメンブレンをストライピングした。フロントライン（Front lines）を、１０サイクルの洗浄バッファー（ｄｉＨ２Ｏ中の０．０５％ ＢＩＯ－ＴＥＲＧＥ（登録商標）（Ｓｔｅｐａｎ Ｃｏｍｐａｎｙ））で洗浄し、テストラインがメンブレンの最下部から１１ｍｍの位置に施されるように位置合わせした。フロントラインを空にして、１０ｍＭリン酸塩、ｐＨ７．３、０．５％スクロース中の０．５ｍｇ／ｍＬポリストレプトアビジンでプライミングした。ポリストレプトアビジンのテストラインをメンブレン上にストライピングした（例えば、図３Ａにおけるメンブレン３００上の第３のゾーン２３０を参照のこと）。次いで、メンブレンにラベルを付け、４０℃で３０分間乾燥させた。ストライピング後、１０サイクルの洗浄バッファーでフロントラインを洗浄した。メンブレンをストライピングするための構成要素を表１に示す。
メンブレンのストライピング（Striping）
ＦＲＯＮＴＬＩＮＥ ＨＲ（商標）（ＢｉｏＤｏｔ）を使用してメンブレンをストライピングした。フロントライン（Front lines）を、１０サイクルの洗浄バッファー（ｄｉＨ２Ｏ中の０．０５％ ＢＩＯ－ＴＥＲＧＥ（登録商標）（Ｓｔｅｐａｎ Ｃｏｍｐａｎｙ））で洗浄し、テストラインがメンブレンの最下部から１１ｍｍの位置に施されるように位置合わせした。フロントラインを空にして、１０ｍＭリン酸塩、ｐＨ７．３、０．５％スクロース中の０．５ｍｇ／ｍＬポリストレプトアビジンでプライミングした。ポリストレプトアビジンのテストラインをメンブレン上にストライピングした（例えば、図３Ａにおけるメンブレン３００上の第３のゾーン２３０を参照のこと）。次いで、メンブレンにラベルを付け、４０℃で３０分間乾燥させた。ストライピング後、１０サイクルの洗浄バッファーでフロントラインを洗浄した。メンブレンをストライピングするための構成要素を表１に示す。
コンジュゲートパッドのストライピング
ＦＲＯＮＴＬＩＮＥ ＨＲ（商標）（ＢｉｏＤｏｔ）を使用してコンジュゲーションパッド（Ａｈｌｓｔｒｏｍ）上に抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートおよびＦＸＩＩａ－ビオチンをストライピングした。コンジュゲートパッドをストライピングする前に、抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートをＥｕラテックス希釈剤中に０．０４％（ｗ／ｖ）まで希釈し、ＦＸＩＩａ－ビオチンをＦＸＩＩａ－ビオチン希釈剤で２．４μＭまで希釈した。次いで、フロントラインを、１０サイクルの洗浄バッファー（ｄｉＨ２Ｏ中の０．０５％ ＢＩＯ－ＴＥＲＧＥ（登録商標）（Ｓｔｅｐａｎ Ｃｏｍｐａｎｙ））で洗浄した。それぞれ１０μＬ／ｃｍおよび２．５μＬ／ｃｍの速度で、抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートがコンジュゲートパッドの最下部から１５ｍｍの位置にストライピングされ、ＦＸＩＩａ－ビオチンコンジュゲートがコンジュゲートパッドの最上部から８ｍｍの位置にストライピングされるように、フロントラインを位置合わせした。抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートおよびＦＸＩＩａ－ビオチンコンジュゲートの位置は、カスタムＳＬＡハウジングカセット（custom SLA housing cassettes）のバッファーポートおよびサンプルポートとそれぞれ位置が合っている。
ＦＲＯＮＴＬＩＮＥ ＨＲ（商標）（ＢｉｏＤｏｔ）を使用してコンジュゲーションパッド（Ａｈｌｓｔｒｏｍ）上に抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートおよびＦＸＩＩａ－ビオチンをストライピングした。コンジュゲートパッドをストライピングする前に、抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートをＥｕラテックス希釈剤中に０．０４％（ｗ／ｖ）まで希釈し、ＦＸＩＩａ－ビオチンをＦＸＩＩａ－ビオチン希釈剤で２．４μＭまで希釈した。次いで、フロントラインを、１０サイクルの洗浄バッファー（ｄｉＨ２Ｏ中の０．０５％ ＢＩＯ－ＴＥＲＧＥ（登録商標）（Ｓｔｅｐａｎ Ｃｏｍｐａｎｙ））で洗浄した。それぞれ１０μＬ／ｃｍおよび２．５μＬ／ｃｍの速度で、抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートがコンジュゲートパッドの最下部から１５ｍｍの位置にストライピングされ、ＦＸＩＩａ－ビオチンコンジュゲートがコンジュゲートパッドの最上部から８ｍｍの位置にストライピングされるように、フロントラインを位置合わせした。抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートおよびＦＸＩＩａ－ビオチンコンジュゲートの位置は、カスタムＳＬＡハウジングカセット（custom SLA housing cassettes）のバッファーポートおよびサンプルポートとそれぞれ位置が合っている。
フロントラインを空にして、いずれかのコンジュゲートでプライミングした。コンジュゲートパッド上にコンジュゲートをストライピングし、次いで、このコンジュゲートパッドにラベルを付け、４０℃で３０分間乾燥させた。コンジュゲートパッドを密封して乾燥させた。ストライピング後、１０サイクルの洗浄バッファーでフロントラインを洗浄した。コンジュゲートパッドをストライピングするための構成要素を表２に示す。Ｅｕラテックス希釈剤およびＦＸＩＩａ－ビオチン希釈剤のための構成要素をそれぞれ表３および表４に示す。
抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートの調製
抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートを調製するために、０．１ｍｇの抗Ｃ１－ＩＮＨ抗体を、製造業者のプロトコルを用いてＺＥＢＡ（商標）スピンカラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）により５０ｍＭホウ酸塩、ｐＨ８中に交換した。抗体の濃度を吸光度によって決定した（Ａ２８０， １ｍｍ， １ＯＤ＝１．４ｍｇ／ｍＬ）。ストックのラテックスを１０分間回転させた後、マイクロチップソニケーター（設定２５）を用いて１０～１５秒間超音波処理した。ストックのラテックス溶液（１０％）を０．１ＭのＭＥＳ、ｐＨ６．５で１％に希釈し、１７，０００ｇで１０分間微量遠心分離した。上清を除去し、ペレットを０．１ＭのＭＥＳ、ｐＨ６．５に再懸濁したが、バッファーの体積は、ラテックスの最初の体積と等しくした。得られた溶液を超音波処理し、微量遠心分離し、先に説明したように再懸濁した。
抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートを調製するために、０．１ｍｇの抗Ｃ１－ＩＮＨ抗体を、製造業者のプロトコルを用いてＺＥＢＡ（商標）スピンカラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）により５０ｍＭホウ酸塩、ｐＨ８中に交換した。抗体の濃度を吸光度によって決定した（Ａ２８０， １ｍｍ， １ＯＤ＝１．４ｍｇ／ｍＬ）。ストックのラテックスを１０分間回転させた後、マイクロチップソニケーター（設定２５）を用いて１０～１５秒間超音波処理した。ストックのラテックス溶液（１０％）を０．１ＭのＭＥＳ、ｐＨ６．５で１％に希釈し、１７，０００ｇで１０分間微量遠心分離した。上清を除去し、ペレットを０．１ＭのＭＥＳ、ｐＨ６．５に再懸濁したが、バッファーの体積は、ラテックスの最初の体積と等しくした。得られた溶液を超音波処理し、微量遠心分離し、先に説明したように再懸濁した。
１５ｍｇ／ｍＬの、０．１ＭのＭＥＳバッファー中のＥＤＣを調製するために、ＥＤＣを室温に平衡化させ、重量を測定した。ＥＤＣ溶液は、抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートの調製における使用の１０分以内に調製した。長期保存のために、ＥＤＣのストック粉末は、乾燥させて－２０℃で凍結した。
５０ｍｇ／ｍＬの、０．１ＭのＭＥＳバッファー中のスルホ－ＮＨＳを調製するために、スルホ－ＮＨＳを室温に平衡化させ、重量を測定した。スルホ－ＮＨＳ溶液は、抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートの調製における使用の１０分以内に調製した。スルホ－ＮＨＳ溶液を振盪機上で１０００ｒｐｍにて３０分間インキュベートすることにより活性化させた。この溶液を１７，０００ｇで８分間微量遠心分離した。ペレットを５０ｍＭホウ酸バッファーに再懸濁し、ボルテックスし、超音波処理した。バッファーの体積は、ラテックス溶液の最初の体積（６００μＬ）と等しくした。次いで、この溶液を微量遠心分離し、ホウ酸バッファー（３００μＬ）に再懸濁し、ボルテックスし、先に説明したように超音波処理した。活性化された粒子をチューブ１つ当たり５０μＬで分注し、粒子対タンパク質の質量比が２０：１になるように適切な量のバッファーとタンパク質（例えば、２０μｇのタンパク質（すなわち、抗体））を添加した。バッファーとタンパク質を添加した直後にチューブをボルテックスした。
チューブを振盪機上で１，０００ｒｐｍにて室温で２時間インキュベートした。インキュベーション後、１０μＬ／ｍＬの１Ｍエタノールアミンを加え、チューブを振盪機上で１，０００ｒｐｍにて室温で３０分間インキュベートした。チューブを１７，０００ｇで１０分間微量遠心分離し、ペレットを、７日間保存された（7-day cured）１％カゼインに再懸濁し、振盪しながら一晩インキュベートした。一晩のインキュベーションの後、チューブを微量遠心分離し、ペレットを、７日間保存された１％カゼインに再懸濁し、ボルテックスし、超音波処理した。次いで、粒子コンジュゲートを、先に説明したようにコンジュゲートパッド上にストライピングした。抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｅｕ粒子コンジュゲートのための構成要素を表５に示す。
裏張りカード（backing card）上への構成要素の積層
８０ｍｍの長さの裏張りカード（ＤＣＮ）上に構成要素を積層するために、西洋かみそりの刃を用いてカードの最下部から３９ｍｍの位置で裏張りステッカー（backing sticker）を切断した。カードの最上部側で上記の３９ｍｍの位置から裏張りステッカーを除去した。カードの最下部から３９ｍｍの位置でメンブレンをカードに接着させた。吸収パッド（Ａｈｌｓｔｒｏｍ）をカードの最上部に、パッドがメンブレンの最上部と３ｍｍ重なるように接着させた。残っている裏張りステッカーを除去し、コンジュゲートパッドをカードの最下部に、パッドがメンブレンの最下部と３ｍｍ重なるように接着させた。構成要素および構成要素の順序をそれぞれ表６および表７に示す。
８０ｍｍの長さの裏張りカード（ＤＣＮ）上に構成要素を積層するために、西洋かみそりの刃を用いてカードの最下部から３９ｍｍの位置で裏張りステッカー（backing sticker）を切断した。カードの最上部側で上記の３９ｍｍの位置から裏張りステッカーを除去した。カードの最下部から３９ｍｍの位置でメンブレンをカードに接着させた。吸収パッド（Ａｈｌｓｔｒｏｍ）をカードの最上部に、パッドがメンブレンの最上部と３ｍｍ重なるように接着させた。残っている裏張りステッカーを除去し、コンジュゲートパッドをカードの最下部に、パッドがメンブレンの最下部と３ｍｍ重なるように接着させた。構成要素および構成要素の順序をそれぞれ表６および表７に示す。
テストストリップの調製
カードをキネマティックカッター（Kinematic Cutter）（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃ）に入れ、カードを幅５．０ｍｍのストリップに切断した。５．０ｍｍよりも短いストリップまたはストライピング中にペンで印を付けたストリップは廃棄した。切断されたストリップを乾燥剤とともにホイルバッグに入れた。ホイルバッグは密封し、使用するまで、乾燥した箱で保管した。
カードをキネマティックカッター（Kinematic Cutter）（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃ）に入れ、カードを幅５．０ｍｍのストリップに切断した。５．０ｍｍよりも短いストリップまたはストライピング中にペンで印を付けたストリップは廃棄した。切断されたストリップを乾燥剤とともにホイルバッグに入れた。ホイルバッグは密封し、使用するまで、乾燥した箱で保管した。
実施例２：患者からの血漿サンプルにおいて機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出するためのＬＦＡ装置の使用
ｆＣ１－ＩＮＨの濃度を決定するためのラテラルフローアッセイ（ＬＦＡ）を実施するために、上記の実施例１で説明されるように調製されたテストストリップをカスタムステレオリソグラフィー（ＳＬＡ）カセットに入れた（例えば、図４を参照のこと）。基準および品質対照は、Ｃ１－ＩＮＨを枯渇させたヒトＫ３－ＥＤＴＡ血漿（Ｓｈｉｒｅ／武田薬品が調製）にＣ１－ＩＮＨ標準品（ロット番号ＴＣＰ１０３、Ｓｈｉｒｅ／武田薬品）を加えることによって調製した。０ｍＵ／ｍＬ～８００ｍＵ／ｍＬの精製Ｃ１－ＩＮＨを含む対照サンプルを用いて較正曲線を生成した。対照サンプルをＣ１－ＩＮＨ枯渇培地で１：２０に希釈した。サンプルをサンプルポートに加え、５分間インキュベートした。ランバッファー（３０μＬ）をサンプルポートに加え、これによりサンプルをメンブレン上に、および試験窓まで、流れさせた。次いで、ランバッファー（１５０μＬ）をバッファーポートに加え、カセットをさらに２０分間インキュベートした。カセットからテストストリップを取り外し、Ａｘｘｉｎ ＡＸ－２Ｘ蛍光リーダー（Ａｘｘｉｎ）を使用してテストライン領域の強度を測定した。カセット内のテストストリップの画像を図５に示す。測定されたテストライン領域の強度をＣ１－ＩＮＨの濃度に対してプロットして、図６に示される較正曲線を生成し、０．９７というＲ２を得た。
ｆＣ１－ＩＮＨの濃度を決定するためのラテラルフローアッセイ（ＬＦＡ）を実施するために、上記の実施例１で説明されるように調製されたテストストリップをカスタムステレオリソグラフィー（ＳＬＡ）カセットに入れた（例えば、図４を参照のこと）。基準および品質対照は、Ｃ１－ＩＮＨを枯渇させたヒトＫ３－ＥＤＴＡ血漿（Ｓｈｉｒｅ／武田薬品が調製）にＣ１－ＩＮＨ標準品（ロット番号ＴＣＰ１０３、Ｓｈｉｒｅ／武田薬品）を加えることによって調製した。０ｍＵ／ｍＬ～８００ｍＵ／ｍＬの精製Ｃ１－ＩＮＨを含む対照サンプルを用いて較正曲線を生成した。対照サンプルをＣ１－ＩＮＨ枯渇培地で１：２０に希釈した。サンプルをサンプルポートに加え、５分間インキュベートした。ランバッファー（３０μＬ）をサンプルポートに加え、これによりサンプルをメンブレン上に、および試験窓まで、流れさせた。次いで、ランバッファー（１５０μＬ）をバッファーポートに加え、カセットをさらに２０分間インキュベートした。カセットからテストストリップを取り外し、Ａｘｘｉｎ ＡＸ－２Ｘ蛍光リーダー（Ａｘｘｉｎ）を使用してテストライン領域の強度を測定した。カセット内のテストストリップの画像を図５に示す。測定されたテストライン領域の強度をＣ１－ＩＮＨの濃度に対してプロットして、図６に示される較正曲線を生成し、０．９７というＲ２を得た。
５０個の正常なＫ３－ＥＤＴＡ血漿サンプルを商業的に入手し、５０個のＨＡＥ血漿サンプルは、ＨＡＥを有する青年および成人における血管浮腫発作の予防のための注射用Ｃ１エステラーゼインヒビター［ヒト］液の２０００ＩＵの皮下投与の有効性と安全性を評価するＳＡＨＡＲＡ、第ＩＩＩ相、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、２期間、３シーケンス、部分的クロスオーバー試験からの患者の同意を得て使用した。
次いで、図６の較正曲線を用いて、対照となる対象および遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）を有する対象からの血漿サンプルにおけるｆＣ１－ＩＮＨの濃度を決定した。簡潔に説明すると、対象からの血漿サンプルをＣ１－ＩＮＨ枯渇血漿で１：２０に希釈した。希釈された血漿サンプル（２０μＬ）をサンプルポートに加え、５分間インキュベートした。テストストリップを用いて決定されたｆＣ１－ＩＮＨの濃度は、ＥＬＩＳＡによって決定された濃度値から２０％以内の範囲であった。
図８に示されるように、両方の方法において、Ｃ１－ＩＮＨのレベルは、ＨＡＥの対象では、健康な対照に比べて低かった。測定された平均のＣ１－ＩＮＨ濃度は、発色法およびＬＦＡ法でそれぞれ、健康な対照では１３４５ｍＵ／ｍＬおよび１０８９ｍＵ／ｍＬであり、ＨＡＥの対象では２７５ｍＵ／ｍＬおよび１６３ｍＵ／ｍＬであった（表８）。測定値についてのＳＥＭと９５％信頼区間を表８に提示する。２つの方法から取得された、全てのＨＡＥの対象についてのＣ１－ＩＮＨのデータは、健康な対照の範囲内にあるＣ１－ＩＮＨ濃度を有していた２人のＨＡＥの対象を含め、０．８６というＲ２で互いに相関していた（図９）。ｆＣ１－ＩＮＨを測定した正常な対照とＨＡＥの対象の間の平均比は、発色法およびＬＦＡ法でそれぞれ４．９および６．７であった。
対照となる対象およびＨＡＥを有する対象からのサンプルに基づく診断能についての受信者動作曲線（ＲＯＣ）は、０．９８であったが、これは、ＬＦＡによって決定されたＣ１－ＩＮＨ濃度が、対照となる対象とＨＡＥの対象とを正確に区別した、ということを示す（図７）。ＲＯＣ曲線は、４９６ｍＵ／ｍＬというＣ１－ＩＮＨのカットポイント（cut point）は９４％という感度（真陽性率）および９６％という特異度（偽陽性率）をもたらす、ということを示した（図７）。偽陰性および偽陽性を表９に列挙する。
表８および図８～９で示されるように、ＬＦＡを用いて取得された結果を、ＥＬＩＳＡによる発色アッセイを用いた分析と比較した。簡潔に説明すると、発色法は、ｆＣ１－ＩＮＨのレベルを直接測定するものであり、Ｃ１ｓが合成基質を切断して有色の化合物を形成することを伴い、色の強度の低下がＣ１ｓの酵素活性の阻害を示す。発色アッセイは、精度、正確性、直線性、および定量の上限と下限に関して適格であった。Ｃ１－ＩＮＨタンパク質（２０００ＩＵの注射用Ｃ１エステラーゼインヒビター［ヒト］液、Ｓｈｉｒｅ／武田薬品）を用いて、３つの品質対照、ならびに１０００～１．９５ｍＵ／ｍＬの範囲の１０個の標準点を伴う標準曲線、を用意した。標準曲線の最も高い点と最も低い点は、アンカーポイントとして使用した。簡潔に説明すると、ポリプロピレンプレートにおいて室温（ＲＴ）で３０分間、Ｋ３－ＥＤＴＡ血漿サンプルおよび基準タンパク質を組換えヒト補体成分Ｃ１ｓタンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）とプレインキュベートした。形成されたＣ１－ＩＮＨとＣ１ｓの複合体をアッセイバッファーで１：５に希釈し、基質溶液（（チオベンジルエステル基を有する合成基質、Ｍ－１３００， Ｂａｃｈｅｍ）および５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ） ＃Ｄ－８０００， Ｂｉｏｓｙｎｔｈ）と混合し、反応物を室温で４０分間インキュベートした。ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏソフトウェアを備えたＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーを使用して４０５ｎｍで吸光度を記録した。
まとめると、これらの結果は、ＬＦＡおよびＥＬＩＳＡ（発色アッセイと呼称される）によって同様のｆＣ１－ＩＮＨ濃度が患者の血漿サンプルにおいて検出された、ということを実証する。従って、本明細書で説明されるＬＦＡおよびテストストリップは、患者からの血漿サンプルにおけるｆＣ１－ＩＮＨのレベルに基づいてＨＡＥを有する患者を特定するための有効なツールである可能性がある。本明細書で説明されるＬＦＡを用いて取得された結果は、ｆＣ１－ＩＮＨを評価するための発色アッセイの結果と相関していた。
本明細書で開示される迅速で高感度のＬＦＡ法および装置は、ｆＣ１ＩＮＨのレベルに基づくＨＡＥ（例えば、Ｉ型およびＩＩ型）の迅速な診断のために医師の診療所で実施することができる。そのような方法および装置は、健康保険によって払い戻される低コストの消耗品、定量的結果に対する高レベルの信頼性、医師によるデータ解釈の容易さ、および／または確認分析の必要性のレベルの低さをもたらす可能性がある。診療所においてＩ型またはＩＩ型のＨＡＥを診断するための、そのような迅速な分析は、ＨＡＥについてのスクリーニングを拡張し、より迅速に新たなＨＡＥ患者を特定できる。現在、世界的なＨＡＥの診断率は４０％しかなく、従って、診断されていない患者は、満たされていないニーズが高い。一般的な装置プラットフォームにおける迅速な試験の可用性は、ＨＡＥの認識を拡張する可能性がある。さらに、本明細書で開示されるｆＣ１ＩＮＨのための迅速な試験は、ＨＡＥの疾患進行または治療に対する反応を臨床現場で適時にモニタリングするのに役立ち得る。
参考文献
1. Maurer, M. et al. (2018) The international WAO/EAACI guideline for the management of hereditary angioedema - the 2017 revision and update. World Allergy Organization Journal
2. Aabom, A. et al. (2017) Complement factor C4 activation in patients with hereditary angioedema. Clinical Biochemistry 50 (15), 816-821.
3. Bork, K. and Davis-Lorton, M. (2013) Overview of hereditary angioedema caused by C1-inhibitor deficiency: assessment and clinical management. Eur Ann Allergy Clin Immunol 45 (1), 7-16.
4. Csuka, D. et al. (2017) The role of the complement system in hereditary angioedema. Mol Immunol 89, 59-68.
5. Li, H.H. et al. (2015) Comparison of chromogenic and ELISA functional C1 inhibitor tests in diagnosing hereditary angioedema. J Allergy Clin Immunol Pract 3 (2), 200-5.
6. Campbell, R.L., Wagner, D.B., and O’Connel, J.P. (1987). Solid phase assay with visual readout. U.S. Patent No. 4,703,017.
7. Rosenstein, R.W. and Bloomster, T.G. (1989). Solid phase assay employing capillary flow. U.S. Patent No. 4,855,240.
8. May, K., Prior, M.E., and Richards, I. (1997). Capillary immunoassay and device therefore comprising mobilizable particulate labelled reagents. U.S. Patent No. 5,622,871.
9. O’Farrell, B. (2009). Evolution in Lateral Flow-Based Immunoassay Systems. In: Wong, R.C. and Tse, H.Y. (eds.). Lateral Flow Immunoassay. Humana Press New York (NY).
10. Zahedi R, Aulak KS, Eldering E, Davis AE 3rd (1996). Characterization of C1 inhibitor-Ta. A dysfunctional C1INH with deletion of lysine 251. J Biol Chem. 1996 Sep 27;271(39):24307-12
1. Maurer, M. et al. (2018) The international WAO/EAACI guideline for the management of hereditary angioedema - the 2017 revision and update. World Allergy Organization Journal
2. Aabom, A. et al. (2017) Complement factor C4 activation in patients with hereditary angioedema. Clinical Biochemistry 50 (15), 816-821.
3. Bork, K. and Davis-Lorton, M. (2013) Overview of hereditary angioedema caused by C1-inhibitor deficiency: assessment and clinical management. Eur Ann Allergy Clin Immunol 45 (1), 7-16.
4. Csuka, D. et al. (2017) The role of the complement system in hereditary angioedema. Mol Immunol 89, 59-68.
5. Li, H.H. et al. (2015) Comparison of chromogenic and ELISA functional C1 inhibitor tests in diagnosing hereditary angioedema. J Allergy Clin Immunol Pract 3 (2), 200-5.
6. Campbell, R.L., Wagner, D.B., and O’Connel, J.P. (1987). Solid phase assay with visual readout. U.S. Patent No. 4,703,017.
7. Rosenstein, R.W. and Bloomster, T.G. (1989). Solid phase assay employing capillary flow. U.S. Patent No. 4,855,240.
8. May, K., Prior, M.E., and Richards, I. (1997). Capillary immunoassay and device therefore comprising mobilizable particulate labelled reagents. U.S. Patent No. 5,622,871.
9. O’Farrell, B. (2009). Evolution in Lateral Flow-Based Immunoassay Systems. In: Wong, R.C. and Tse, H.Y. (eds.). Lateral Flow Immunoassay. Humana Press New York (NY).
10. Zahedi R, Aulak KS, Eldering E, Davis AE 3rd (1996). Characterization of C1 inhibitor-Ta. A dysfunctional C1INH with deletion of lysine 251. J Biol Chem. 1996 Sep 27;271(39):24307-12
実施例３：競合的結合アッセイは、機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出するためのラテラルフローアッセイ（ＬＦＡ）装置の特異性を実証する。
ｆＣ１－ＩＮＨ濃度を決定するための本明細書で説明されるようなラテラルフローアッセイ（ＬＦＡ）装置の特異性を、異なる競合結合タンパク質の存在下でアッセイを実施することにより調べた。サンプルは、１００ｍＵ／ｍＬの精製Ｃ１－ＩＮＨを含んだ。対照サンプルには競合タンパク質を添加しなかった。テストライン領域の強度を測定し、対照反応のシグナルからのシグナルの減少率を各サンプルについて算出した。競合タンパク質を含むサンプルの場合、テストライン（ＴＬ）の強度は、対照サンプルに比べて４０％～６０％減少した（表１０）。ＴＬの強度は、ビオチンで標識されたＢＳＡの添加により５５％減少したが、これは、アッセイにおいて無関係のタンパク質は検出されない、ということを実証する（表１０）。標識されていないＦＸＩＩａおよび標識されていない抗体の場合、ＴＬの強度は、それぞれ６１％および４８％減少したが、これは、シグナル生成に関してのＣ１－ＩＮＨとのＦＸＩＩａおよび抗体の特異性を実証する（表１０）。
ｆＣ１－ＩＮＨ濃度を決定するための本明細書で説明されるようなラテラルフローアッセイ（ＬＦＡ）装置の特異性を、異なる競合結合タンパク質の存在下でアッセイを実施することにより調べた。サンプルは、１００ｍＵ／ｍＬの精製Ｃ１－ＩＮＨを含んだ。対照サンプルには競合タンパク質を添加しなかった。テストライン領域の強度を測定し、対照反応のシグナルからのシグナルの減少率を各サンプルについて算出した。競合タンパク質を含むサンプルの場合、テストライン（ＴＬ）の強度は、対照サンプルに比べて４０％～６０％減少した（表１０）。ＴＬの強度は、ビオチンで標識されたＢＳＡの添加により５５％減少したが、これは、アッセイにおいて無関係のタンパク質は検出されない、ということを実証する（表１０）。標識されていないＦＸＩＩａおよび標識されていない抗体の場合、ＴＬの強度は、それぞれ６１％および４８％減少したが、これは、シグナル生成に関してのＣ１－ＩＮＨとのＦＸＩＩａおよび抗体の特異性を実証する（表１０）。
加熱によって変性させたＣ１－ＩＮＨタンパク質を用いて検出の特異性をさらに試験した。ＴＬの強度は、４０℃での加熱では減少しなかったが、５３℃での加熱により、ＴＬの強度はバックグラウンドシグナルの強度まで減少した（表１１）。
まとめると、これらの結果は、本明細書で説明されるＬＦＡおよびテストストリップが血漿サンプルにおけるｆＣ１－ＩＮＨの検出に関して特異的である、ということを実証する。
実施例４：ＬＦＡ装置における機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出するための患者からの血液サンプルの使用
簡潔に説明すると、当業者には明らかであろう実験室での慣行に従いフィンガースティック法を実施することによって全血サンプルを採取する。最初の血滴を拭き取った後、２番目の血滴が指に形成される。サンプル用ループを用いて２番目の血滴に接触し、ループを血液で満たす（図１０Ａ）。次いで、ループをＳａｍｐｌｅＴａｉｎｅｒ（登録商標）ボトルなどの容器に入れる（図１０Ｂ）。ループがボトルの底に触れたら、ボトルをスナップしてねじり、シャフトの最下部を折ってボトル内に残す。最後に、ボトルのキャップを元に戻し、ボトルを振って混合する。全血サンプルは、分析用の装置のいずれかに加えられてよい。
簡潔に説明すると、当業者には明らかであろう実験室での慣行に従いフィンガースティック法を実施することによって全血サンプルを採取する。最初の血滴を拭き取った後、２番目の血滴が指に形成される。サンプル用ループを用いて２番目の血滴に接触し、ループを血液で満たす（図１０Ａ）。次いで、ループをＳａｍｐｌｅＴａｉｎｅｒ（登録商標）ボトルなどの容器に入れる（図１０Ｂ）。ループがボトルの底に触れたら、ボトルをスナップしてねじり、シャフトの最下部を折ってボトル内に残す。最後に、ボトルのキャップを元に戻し、ボトルを振って混合する。全血サンプルは、分析用の装置のいずれかに加えられてよい。
実施例５：試薬の選択
本明細書で説明される方法および／または装置で使用するために試薬を選択した。２つの最初の検出剤を開発した：１つは、抗ｆＣ１－ＩＮＨ Ｆａｂにコンジュゲートされたユウロピウムナノ粒子を利用するもの（図１１Ａ）であり、１つは、抗ｆＣ１－ＩＮＨ Ｆａｂにコンジュゲートされた赤色金ナノ粒子を使用するもの（図１１Ｂ）である。
本明細書で説明される方法および／または装置で使用するために試薬を選択した。２つの最初の検出剤を開発した：１つは、抗ｆＣ１－ＩＮＨ Ｆａｂにコンジュゲートされたユウロピウムナノ粒子を利用するもの（図１１Ａ）であり、１つは、抗ｆＣ１－ＩＮＨ Ｆａｂにコンジュゲートされた赤色金ナノ粒子を使用するもの（図１１Ｂ）である。
ダイナミックレンジの下端におけるシグナルの急激な減少が観察されたが、これは、この系が最大シグナルに達していることを示唆する。関係の傾きを減らすために、種々の量の種々の試薬を評価した。２つの試薬をテストラインとして評価した：０．５ｍｇ／ｍＬの濃度でプリントされたストレプトアビジンおよびストレプトアビジンのポリマーバージョン（ポリストレプトアビジンＲ）。ストレプトアビジンは、ポリストレプトアビジンに比べて高いシグナルを有することが見出された一方で、ポリストレプトアビジンは、より直線性を有することが見出された（図１２）。ユウロピウムコンジュゲートを０．１％から０．０５％固形分に調整した。Ｃ１－ＩＮＨ／シンライズ（登録商標）とのインキュベーションステップで使用されるＦＸＩＩａの濃度を１ｐｍｏｌ／μＬから０．５ｐｍｏｌ／μＬに減少させてアッセイのダイナミックレンジを減少させた。これは、検出可能な範囲内のシグナルを伴うアッセイをもたらした。
また、異なる作用物質もテストラインのために評価した。簡潔に説明すると、３つの異なるテストラインを生成した：ヒトビオチン化ＦＸＩＩａ（Ｂ－ＨＦＸＩＩａ）をストレプトアビジンと混合した；Ｂ－ＨＦＸＩＩａをポリストレプトアビジンと混合した；およびＨＦＸＩＩａ（ビオチン化されていないもの）単独。ＨＦＸＩＩａの使用は、陽性の、但し低い、シグナルをもたらしたが、Ｂ－ＨＦＸＩＩａとストレプトアビジンならびにＢ－ＨＰＦＸＩＩａとポリストレプトアビジンは、感知できるほどの陽性のシグナルを有さなかった（図１３）。
さらに、抗Ｃ１－ＩＮＨ抗体をも、本明細書で説明される方法における使用のために評価した。４つのユウロピウムコンジュゲート（抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｆａｂ、ならびに抗Ｃ１－ＩＮＨ抗体であるＳｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．のＲＰ０１、ＲＰ０２、ＭＭ０３およびＭＭ０６抗体）を４つの濃度（１２００ｍＵ／ｍＬ、６００ｍＵ／ｍＬ、１００ｍＵ／ｍＬ、および９ｍＵ／ｍＬ）で評価した（図１４）。抗体ＲＰ０１、ＲＰ０２、ＭＭ０３およびＭＭ０６の各々を用いて得られたシグナルは、Ｆａｂコンジュゲートに比べて増強された。さらなる分析のためにポリクローナル抗体ＲＰ０２を選択した。
また、バッファーの条件も評価した。例えば、無機性緩衝剤（ＩＢＡ）を含むバッファーまたは有機性緩衝剤（ＯＢＡ）を含むバッファーを、７．０～９．５という種々のｐＨでそれぞれ調製した。ＩＢＡを含むバッファーは、ｐＨ範囲の上限（ｐＨ９．５）において、より良好（例えば、より高いシグナル）であった一方で、ＯＢＡを含むバッファーは、生理学的なｐＨの範囲（約７～７．５）において、より良好（例えば、より高いシグナル）であった（図１５）。
最後に、抗Ｃ１－ＩＮＨ結合物質にコンジュゲートされた検出可能物質をも評価した。特に、抗体ＲＰ０２を、ユウロピウムコンジュゲートまたは赤色金コンジュゲートを用いて評価し、抗Ｃ１－ＩＮＨ Ｆａｂと比較した。Ｆａｂコンジュゲートは、陽性のシグナルをもたらさなかったのに対し、赤色金コンジュゲートを伴うＲＰ０２抗体は、陽性のシグナルをもたらした（図１６）。
他の実施形態
本明細書で開示される特徴は全て、任意の組み合わせで組み合わされてよい。本明細書で開示される特徴はそれぞれ、同じ目的、同等の目的または類似の目的を果たす代替的な特徴で置き換えられてよい。従って、特に明記しない限り、開示される特徴はそれぞれ、一般的な一連の同等または類似の特徴の一例に過ぎない。上記の説明から、当業者は、本開示の本質的な特徴を容易に確認でき、それらの趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な用途および条件に適合させるために本開示の様々な変更および改変を行うことができる。従って、他の実施形態も特許請求の範囲内に属する。
本明細書で開示される特徴は全て、任意の組み合わせで組み合わされてよい。本明細書で開示される特徴はそれぞれ、同じ目的、同等の目的または類似の目的を果たす代替的な特徴で置き換えられてよい。従って、特に明記しない限り、開示される特徴はそれぞれ、一般的な一連の同等または類似の特徴の一例に過ぎない。上記の説明から、当業者は、本開示の本質的な特徴を容易に確認でき、それらの趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な用途および条件に適合させるために本開示の様々な変更および改変を行うことができる。従って、他の実施形態も特許請求の範囲内に属する。
均等物および範囲
当業者であれば、本明細書で説明される本開示の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識する、またはただの通例に過ぎない実験法を用いてそれらを確認することができる。本開示の範囲は、上記の説明に限定されることを意図されず、むしろ添付の特許請求の範囲に記載される通りである。
当業者であれば、本明細書で説明される本開示の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識する、またはただの通例に過ぎない実験法を用いてそれらを確認することができる。本開示の範囲は、上記の説明に限定されることを意図されず、むしろ添付の特許請求の範囲に記載される通りである。
特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」などの冠詞は、そうでないと示されていない限り、あるいは文脈から明らかでない限り、１つまたは複数を意味し得る。群の１つ以上のメンバーの間に「または」を含む請求項または説明は、そうでないと示されていない限り、あるいは文脈から明らかでない限り、群のメンバーの１つ、２つ以上または全てが所与の産物またはプロセスに存在するか、所与の産物またはプロセスにおいて使用されるか、あるいは所与の産物またはプロセスに関連する場合に、成立するとみなされる。本開示は、群のまさに１つのメンバーが所与の産物またはプロセスに存在するか、所与の産物またはプロセスにおいて使用されるか、あるいは所与の産物またはプロセスに関連する、実施形態を包含する。本開示は、群のメンバーの２つ以上または全てが所与の産物またはプロセスに存在するか、所与の産物またはプロセスにおいて使用されるか、あるいは所与の産物またはプロセスに関連する、実施形態を包含する。
さらに、本開示は、列挙される請求項のうちの１つ以上からの１つ以上の限定、要素、条項および説明用語が別の請求項に導入された、全ての変形、組み合わせおよび置換を包含する。例えば、別の請求項に従属する任意の請求項が、同じ基本請求項に従属する任意の他の請求項に見出される１つ以上の限定を含むように改変されてよい。要素がリストとして（例えば、マーカッシュグループ形式で）提示されている場合、要素の各サブグループも開示されており、任意の要素（複数可）が、そのグループから削除されてよい。一般に、本開示または本開示の態様が特定の要素および／または特徴を含むと言及される場合、本開示または本開示の態様の特定の実施形態は、そのような要素および／または特徴からなるか、本質的にそれらからなる、ということが理解されるべきである。簡潔にするために、それらの実施形態は、本明細書では、それらの言葉によって具体的には記載されていない。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、開放的であることを意図され、追加の要素またはステップを含めることを許容する、ということも留意されるべきである。範囲が与えられている場合、端点が含まれる。さらに、別段の指示がない限り、あるいは文脈および当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表される値は、本開示の種々の実施形態において、記載された範囲内の任意の特定の値または部分範囲を、文脈が明らかにそうではないことを示さない限り、範囲の下限の１０分の１の単位まで、想定し得る。
本出願は、様々な発行された特許、公開された特許出願、学術論文および他の刊行物に言及するが、これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる。組み込まれた参考文献のいずれかと本明細書との間に矛盾がある場合、本明細書が優先されるものとする。さらに、先行技術に含まれる本開示の特定の実施形態はいずれも、請求項のうちの１つ以上から明示的に除外され得る。そのような実施形態は、当業者に公知であると見なされるため、その除外が本明細書に明示的に記載されていない場合でも、それらは除外され得る。本開示の特定の実施形態はいずれも、先行技術の存在に関連するか否かにかかわらず、任意の理由で、任意の請求項から除外され得る。
当業者であれば、本明細書で説明される特定の実施形態に対する多くの均等物を認識する、またはただの通例に過ぎない実験法を用いてそれらを確認することができる。本明細書で説明される本実施形態の範囲は、上記の説明に限定されることを意図されず、むしろ添付の特許請求の範囲に記載される通りである。当業者は、以下の特許請求の範囲で定義されるような本開示の趣旨または範囲から逸脱することなく、この説明に対する様々な変更および改変を行ってよい、ということを理解するであろう。
Claims (23)
- 機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出および／または定量化するための装置であって、
前記装置は、
（ｉ）第１の作用物質および第２の作用物質がそれぞれ固定化されている第１のゾーンおよび第２のゾーンを含む、コンジュゲートパッドと、
（ｉｉ）前記コンジュゲートパッドと連通しているメンブレンと、
を含み、
前記メンブレンは、第３の作用物質が固定化されている第３のゾーンを含み、
前記第１の作用物質は、機能的Ｃ１－インヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）結合物質またはＣ１－インヒビター（Ｃ１－ＩＮＨ）結合物質であり、
前記第２の作用物質および前記第３の作用物質はそれぞれ、機能的Ｃ１－インヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）結合物質、Ｃ１－インヒビター（Ｃ１－ＩＮＨ）結合物質、および捕捉物質からなる群より選択され、前記第１の作用物質、前記第２の作用物質、および前記第３の作用物質は、互いに異なっており、
前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、前記Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および前記捕捉物質のうちの１つは、検出可能な標識にコンジュゲートされており、前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質および前記Ｃ１－ＩＮＨ結合物質のうちの１つは、ドッキング物質にコンジュゲートされており、前記検出可能な標識および前記ドッキング物質は、別々の作用物質にコンジュゲートされており、
前記コンジュゲートパッドは、前記第１のゾーン、前記第２のゾーン、および前記第３のゾーンの順に前記装置を通って流れる生体サンプルを配置するための第４のゾーンをさらに含む、
装置。 - （ｉ）前記第１の作用物質、前記第２の作用物質、および前記第３の作用物質が、それぞれ前記Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、および前記捕捉物質であるか、または前記第１の作用物質、前記第２の作用物質、および前記第３の作用物質が、それぞれ前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、前記Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および前記捕捉物質である；
（ｉｉ）前記第１の作用物質が、検出可能な標識にコンジュゲートされており、前記第２の作用物質が、ドッキング物質にコンジュゲートされているか、または前記第１の作用物質が、ドッキング物質にコンジュゲートされており、前記第２の作用物質が、検出可能な標識にコンジュゲートされている；
（ｉｉｉ）前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質が、第ＸＩＩ因子の活性型（ＦＸＩＩａ）である；
（ｉｖ）前記Ｃ１－ＩＮＨ結合物質が、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体である；ならびに／あるいは
（ｖ）前記ドッキング物質および前記捕捉物質が、受容体－リガンドのペアのメンバーである；
請求項１に記載の装置。 - 前記受容体－リガンドのペアは、ビオチンとアビジンを含む、請求項２に記載の装置。
- 前記ドッキング物質がビオチンであり、前記捕捉物質がアビジンである、請求項３に記載の装置。
- 前記アビジンはストレプトアビジンまたはポリストレプトアビジンである、請求項３または４に記載の装置。
- 前記検出可能な標識は、ユウロピウム、コロイド金、フィコエリトリン、フルオレセイン、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、量子ドット、および発色団からなる群より選択される、請求項１～５のいずれか１項に記載の装置。
- （ｉ）前記検出可能な標識は、ラテックス粒子に連結されている；
（ｉｉ）前記第４のゾーンが、前記第２のゾーンと重なっている：および／または
（ｉｉｉ）前記第１の作用物質は、前記第１のゾーンに配置されたＣ１－ＩＮＨ結合物質であり、前記第２の作用物質は、前記第２のゾーンに配置されたｆＣ１－ＩＮＨ結合物質であり、前記第３の作用物質は、前記第３のゾーンに配置された捕捉物質である；
請求項１～６のいずれか１項に記載の装置。 - （ｉ）Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、前記検出可能な標識にコンジュゲートされている、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体であり、前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、ビオチンであるドッキング物質にコンジュゲートされたＦＸＩＩａであり、前記捕捉物質は、アビジンである；および／または
（ｉｉ）前記生体サンプルを配置するための第４のゾーンは、前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質が配置されている前記第２のゾーンと重なっている；
請求項７に記載の装置。 - 前記アビジンはストレプトアビジンまたはポリストレプトアビジンである、請求項８に記載の装置。
- （ｉ）前記メンブレンと連通している吸収パッドであって、前記吸収パッドおよび前記コンジュゲートパッドは、前記メンブレンで隔てられている、吸収パッド；
（ｉｉ）前記コンジュゲートパッド、前記メンブレンおよび／または前記吸収パッドが取り付けられている、支持部材；ならびに／あるいは
（ｉｉｉ）ハウジング；
をさらに含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の装置。 - 前記ハウジングが、バッファーポートを形成するための第１の開口部と、サンプルポートを形成するための第２の開口部と、試験窓を形成するための第３の開口部と、を含む、請求項１０に記載の装置。
- （ｉ）前記サンプルポートは、前記バッファーポートと前記試験窓との間に配置されている；
（ｉｉ）前記バッファーポートは、前記Ｃ１－ＩＮＨ結合物質が配置されている前記第１のゾーンと位置が合っている；
（ｉｉｉ）前記サンプルポートは、前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質が配置されている前記第２のゾーンと位置が合っている；および／または
（ｉｖ）前記試験窓は、前記捕捉物質が配置されている前記第３のゾーンと位置が合っている；
請求項１１に記載の装置。 - サンプル中の機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出および／または定量化するための方法であって、
（ｉ）請求項１１または１２に記載の装置のサンプルポートにサンプルを配置するステップと、
（ｉｉ）前記装置のバッファーポートにバッファーを配置するステップであって、前記バッファーが、前記第１のゾーンから前記第３のゾーンへの方向に流れる、ステップと、
（ｉｉｉ）前記装置の試験窓におけるシグナルを調べるステップと、
（ｉｖ）前記試験窓におけるシグナルの存在または強度に基づいて、前記サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在を決定するか前記サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨのレベルを測定するステップと、
を含む、方法。 - （ａ）ステップ（ｉｉ）が、ステップ（ｉ）の少なくとも５分後に実施され、前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質が、前記サンプルポートと位置が合っている前記第２のゾーンに固定化される；
（ｂ）前記サンプルは、対象から取得された生体サンプルである；および／または
（ｃ）前記対象は、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害を有することが疑われるかｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害のリスクがある、ヒト患者である；
請求項１３に記載の方法。 - （ｉ）前記生体サンプルは、血清サンプル、血漿サンプル、または血液サンプルである；および／または
（ｉｉ）前記ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害は、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）、後天性血管性浮腫（ＡＡＥ）、およびＣ１－ＩＮＨが関連する免疫疾患からなる群より選択される；
請求項１４に記載の方法。 - （ｉ）前記対象は、ＨＡＥの症状を有する；
（ｉｉ）前記ＨＡＥは、Ｉ型ＨＡＥまたはＩＩ型ＨＡＥである；または
（ｉｉｉ）前記対象は、ＨＡＥの症状を有さないか、ＨＡＥの症状の病歴を有さないか、ＨＡＥの病歴を有さない；
請求項１５に記載の方法。 - サンプル中の機能的Ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｆＣ１－ＩＮＨ）を検出および／または定量化するための方法であって、
（Ａ）サンプルをｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、Ｃ１－ＩＮＨ結合物質、および捕捉物質と接触させて複合体を形成させるステップであって、前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質および前記Ｃ１－ＩＮＨ作用物質のうちの１つが、前記捕捉物質に結合するドッキング物質にコンジュゲートされており、前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質、前記Ｃ１－ＩＮＨ作用物質、および前記捕捉物質のうちの１つが、検出可能な標識にコンジュゲートされており、前記検出可能な標識および前記ドッキング物質は、別々の作用物質にコンジュゲートされている、ステップと、
（Ｂ）前記複合体中の前記検出可能な標識から放出されるシグナルを検出するステップであって、前記複合体中の前記検出可能な標識から放出されるシグナルの存在が、前記サンプル中のｆＣ１－ＩＮＨの存在を示す、ステップと、
を含む、方法。 - （ｉ）ステップ（Ａ）は、
（ａ）前記サンプルを前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質と少なくとも５分間インキュベートすることと、
（ｂ）前記サンプルを前記Ｃ１－ＩＮＨ結合物質および前記捕捉物質と接触させることと、
によって実施される；
（ｉｉ）前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質が、第ＸＩＩ因子の活性型（ＦＸＩＩａ）である；および／または
（ｉｉｉ）前記ドッキング物質および前記捕捉物質が、受容体－リガンドのペアのメンバーである；
請求項１７に記載の方法。 - （ｉ）前記ドッキング物質がビオチンであり且つ前記捕捉物質がアビジンであるか、または前記ドッキング物質がアビジンであり且つ前記捕捉物質がビオチンであり；
（ｉｉ）前記アビジンがストレプトアビジンまたはポリストレプトアビジンである；
請求項１７または１８に記載の方法。 - （ｉ）前記Ｃ１－ＩＮＨ結合物質が、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体である；および／または
（ｉｉ）前記検出可能な標識は、ユウロピウム、コロイド金、フィコエリトリン、フルオレセイン、ローダミン、緑色蛍光タンパク質、量子ドット、および発色団からなる群より選択される；
請求項１７～１９のいずれか１項に記載の方法。 - （ｉ）前記検出可能な標識は、ラテックス粒子に連結されている；
（ｉｉ）前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質は、ビオチンにコンジュゲートされている第ＸＩＩ因子の活性型（ＦＸＩＩａ）であり、前記Ｃ１－ＩＮＨ結合物質は、前記検出可能な標識にコンジュゲートされている、Ｃ１－ＩＮＨに結合する抗体であり、前記捕捉物質は、ストレプトアビジンである；および／または
（ｉｉｉ）前記サンプルは、対象から取得された生体サンプルである；
請求項１７～２０のいずれか１項に記載の方法。 - ステップ（Ａ）は、
（ａ）前記サンプルを前記ｆＣ１－ＩＮＨ結合物質と少なくとも５分間インキュベートして第１の複合体を形成させることと、
（ｂ）前記第１の複合体を前記Ｃ１－ＩＮＨ結合物質と接触させて第２の複合体を形成させることと、
（ｃ）前記第２の複合体を前記捕捉物質と接触させて複合体を形成させることと、
によって実施され、
前記捕捉物質は、支持部材に固定化されている、
請求項１７に記載の方法。 - （ｉ）前記生体サンプルは、血清サンプル、血漿サンプル、または血液サンプルである；
（ｉｉ）前記対象は、ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害を有することが疑われるかｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害のリスクがある、ヒト患者である；
（ｉｉｉ）前記ｆＣ１－ＩＮＨの欠陥によって媒介される障害は、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）、後天性血管性浮腫（ＡＡＥ）、およびＣ１－ＩＮＨが関連する免疫疾患からなる群より選択される；および／または
（ｉｖ）前記対象は、抗ヒスタミン療法、コルチコステロイド療法、またはその両方に対して抵抗性である；
請求項２１または２２に記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201962833235P | 2019-04-12 | 2019-04-12 | |
| US62/833,235 | 2019-04-12 | ||
| US201962930615P | 2019-11-05 | 2019-11-05 | |
| US62/930,615 | 2019-11-05 | ||
| PCT/US2020/027406 WO2020210446A1 (en) | 2019-04-12 | 2020-04-09 | Lateral flow immunoassay for measuring functional c1-esterase inhibitor (c1-inh) in plasma samples |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2022526186A JP2022526186A (ja) | 2022-05-23 |
| JPWO2020210446A5 JPWO2020210446A5 (ja) | 2023-04-18 |
| JP7481361B2 true JP7481361B2 (ja) | 2024-05-10 |
Family
ID=70476506
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021559968A Active JP7481361B2 (ja) | 2019-04-12 | 2020-04-09 | 血漿サンプルにおいて機能的ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｃ１－ｉｎｈ）を測定するためのラテラルフローイムノアッセイ |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP3953711A1 (ja) |
| JP (1) | JP7481361B2 (ja) |
| KR (1) | KR20210151180A (ja) |
| CN (1) | CN114341643A (ja) |
| AU (1) | AU2020271846A1 (ja) |
| BR (1) | BR112021020410A2 (ja) |
| CA (1) | CA3136694A1 (ja) |
| CO (1) | CO2021014018A2 (ja) |
| IL (1) | IL287208A (ja) |
| MX (1) | MX2021012444A (ja) |
| TW (1) | TW202104898A (ja) |
| WO (1) | WO2020210446A1 (ja) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002528722A (ja) | 1998-10-27 | 2002-09-03 | アールエスアール リミテッド | 自己抗体のためのアッセイ |
| JP2016511394A (ja) | 2013-01-20 | 2016-04-14 | ダイアックス コーポレーション | ｐＫａｌ関連疾病の評価、アッセイおよび治療 |
| JP2019501886A (ja) | 2015-12-11 | 2019-01-24 | ダイアックス コーポレーション | 遺伝性血管性浮腫の発作を治療するための血漿カリクレイン阻害薬およびその用途 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5622871A (en) | 1987-04-27 | 1997-04-22 | Unilever Patent Holdings B.V. | Capillary immunoassay and device therefor comprising mobilizable particulate labelled reagents |
| US4703017C1 (en) | 1984-02-14 | 2001-12-04 | Becton Dickinson Co | Solid phase assay with visual readout |
| US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
| US4881175A (en) | 1986-09-02 | 1989-11-14 | Genex Corporation | Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides |
| US5260203A (en) | 1986-09-02 | 1993-11-09 | Enzon, Inc. | Single polypeptide chain binding molecules |
| US4855240A (en) | 1987-05-13 | 1989-08-08 | Becton Dickinson And Company | Solid phase assay employing capillary flow |
| US20080138842A1 (en) * | 2006-12-11 | 2008-06-12 | Hans Boehringer | Indirect lateral flow sandwich assay |
-
2020
- 2020-04-09 WO PCT/US2020/027406 patent/WO2020210446A1/en active Application Filing
- 2020-04-09 BR BR112021020410A patent/BR112021020410A2/pt unknown
- 2020-04-09 KR KR1020217036781A patent/KR20210151180A/ko not_active Application Discontinuation
- 2020-04-09 CN CN202080042522.1A patent/CN114341643A/zh active Pending
- 2020-04-09 MX MX2021012444A patent/MX2021012444A/es unknown
- 2020-04-09 JP JP2021559968A patent/JP7481361B2/ja active Active
- 2020-04-09 CA CA3136694A patent/CA3136694A1/en active Pending
- 2020-04-09 EP EP20722896.6A patent/EP3953711A1/en active Pending
- 2020-04-09 AU AU2020271846A patent/AU2020271846A1/en active Pending
- 2020-04-10 TW TW109112218A patent/TW202104898A/zh unknown
-
2021
- 2021-10-12 IL IL287208A patent/IL287208A/en unknown
- 2021-10-20 CO CONC2021/0014018A patent/CO2021014018A2/es unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002528722A (ja) | 1998-10-27 | 2002-09-03 | アールエスアール リミテッド | 自己抗体のためのアッセイ |
| JP2016511394A (ja) | 2013-01-20 | 2016-04-14 | ダイアックス コーポレーション | ｐＫａｌ関連疾病の評価、アッセイおよび治療 |
| JP2019501886A (ja) | 2015-12-11 | 2019-01-24 | ダイアックス コーポレーション | 遺伝性血管性浮腫の発作を治療するための血漿カリクレイン阻害薬およびその用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2020210446A1 (en) | 2020-10-15 |
| JP2022526186A (ja) | 2022-05-23 |
| EP3953711A1 (en) | 2022-02-16 |
| CN114341643A (zh) | 2022-04-12 |
| AU2020271846A1 (en) | 2021-11-18 |
| BR112021020410A2 (pt) | 2021-12-07 |
| CA3136694A1 (en) | 2020-10-15 |
| TW202104898A (zh) | 2021-02-01 |
| CO2021014018A2 (es) | 2021-10-29 |
| MX2021012444A (es) | 2021-12-10 |
| IL287208A (en) | 2021-12-01 |
| KR20210151180A (ko) | 2021-12-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20240103018A1 (en) | Galectin-3 immunoassay | |
| JP5744385B2 (ja) | Ｃｖｄ分析 | |
| JP2020097606A (ja) | ｐＫａｌ関連疾病の評価、アッセイおよび治療 | |
| US8030097B2 (en) | Lipocalin-2 as a prognostic and diagnostic marker for heart and stroke risks | |
| CA2897336C (en) | Evaluation and treatment of pkal-mediated disorders | |
| JP2003524187A (ja) | 体液、例えば尿におけるマーカーと血液凝固活性とを相互関連づけるための方法 | |
| JP6812521B2 (ja) | クロモグラニンａを検出するための免疫アッセイ法および抗体 | |
| US20200340987A1 (en) | Lateral flow immunoassay for measuring functional c1-esterase inhibitor (c1-inh) in plasma samples | |
| Ma et al. | The role of antibody-based troponin detection in cardiovascular disease: A critical assessment | |
| JP7481361B2 (ja) | 血漿サンプルにおいて機能的ｃ１－エステラーゼインヒビター（ｃ１－ｉｎｈ）を測定するためのラテラルフローイムノアッセイ | |
| JP2008541051A (ja) | 炭水化物バイオマーカーの検出 | |
| EP2689252A1 (en) | MEASUREMENT OF C-TERMINAL proSP-B | |
| JP7168688B2 (ja) | 補体Ｃ４ｄアッセイ | |
| WO2023100910A1 (ja) | 糞便中エラスターゼ１を測定する方法 | |
| JP2008538610A (ja) | 糖タンパク質ＩＢα（ＧＰＩＢα）タンパク質の測定方法 | |
| US9140707B2 (en) | Sensors and methods for detecting diseases caused by a single point mutation | |
| JP3768165B2 (ja) | 抗カルパスタチン抗体の測定法及び測定キット | |
| JP2006250862A (ja) | 妊娠中毒症の検知方法及び検知キット | |
| OA19228A (en) | Point of care assays |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230410 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230410 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240109 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240308 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240326 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240425 |