TW202104898A - 用於測量血漿樣本中的功能性c1-酯酶抑制子(c1-inh)的側流免疫分析 - Google Patents
用於測量血漿樣本中的功能性c1-酯酶抑制子(c1-inh)的側流免疫分析 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202104898A TW202104898A TW109112218A TW109112218A TW202104898A TW 202104898 A TW202104898 A TW 202104898A TW 109112218 A TW109112218 A TW 109112218A TW 109112218 A TW109112218 A TW 109112218A TW 202104898 A TW202104898 A TW 202104898A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- inh
- binding agent
- sample
- area
- reagent
- Prior art date
Links
- 229940009550 c1 esterase inhibitor Drugs 0.000 title claims abstract description 19
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 97
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000004891 communication Methods 0.000 claims abstract description 5
- 108700040183 Complement C1 Inhibitor Proteins 0.000 claims description 191
- 102000055157 Complement C1 Inhibitor Human genes 0.000 claims description 191
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 191
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 95
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 92
- 206010019860 Hereditary angioedema Diseases 0.000 claims description 87
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 68
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 60
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 50
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 49
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 47
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 47
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 47
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 39
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 32
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 30
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 29
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims description 26
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 26
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 25
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 25
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 25
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 25
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 25
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 20
- 108010080865 Factor XII Proteins 0.000 claims description 19
- 102000000429 Factor XII Human genes 0.000 claims description 19
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 claims description 18
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 14
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 14
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 10
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 6
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 claims description 5
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000005707 acquired angioedema Diseases 0.000 claims description 5
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 claims description 5
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 claims description 4
- IICCLYANAQEHCI-UHFFFAOYSA-N 4,5,6,7-tetrachloro-3',6'-dihydroxy-2',4',5',7'-tetraiodospiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound O1C(=O)C(C(=C(Cl)C(Cl)=C2Cl)Cl)=C2C21C1=CC(I)=C(O)C(I)=C1OC1=C(I)C(O)=C(I)C=C21 IICCLYANAQEHCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N Terfenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 claims description 3
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 claims description 3
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 claims description 3
- 229930187593 rose bengal Natural products 0.000 claims description 3
- 229940081623 rose bengal Drugs 0.000 claims description 3
- STRXNPAVPKGJQR-UHFFFAOYSA-N rose bengal A Natural products O1C(=O)C(C(=CC=C2Cl)Cl)=C2C21C1=CC(I)=C(O)C(I)=C1OC1=C(I)C(O)=C(I)C=C21 STRXNPAVPKGJQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims description 2
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 claims description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims 2
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 38
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 32
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 28
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 27
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 25
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 25
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 25
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 18
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 17
- 102000003827 Plasma Kallikrein Human genes 0.000 description 16
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 15
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 15
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- -1 cyanine Chemical class 0.000 description 10
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 9
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 9
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 8
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 8
- 238000005206 flow analysis Methods 0.000 description 8
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 7
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 7
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 6
- 239000011229 interlayer Substances 0.000 description 6
- 229910001112 rose gold Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101001081555 Homo sapiens Plasma protease C1 inhibitor Proteins 0.000 description 4
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 4
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 4
- 102100027637 Plasma protease C1 inhibitor Human genes 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 4
- 229940088949 cinryze Drugs 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 4
- 102000044507 human SERPING1 Human genes 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 3
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 102100035792 Kininogen-1 Human genes 0.000 description 3
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 3
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 3
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZOCSXAVNDGMNBV-UHFFFAOYSA-N 5-amino-1-[2,6-dichloro-4-(trifluoromethyl)phenyl]-4-[(trifluoromethyl)sulfinyl]-1H-pyrazole-3-carbonitrile Chemical compound NC1=C(S(=O)C(F)(F)F)C(C#N)=NN1C1=C(Cl)C=C(C(F)(F)F)C=C1Cl ZOCSXAVNDGMNBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 108010073361 BioXtra Proteins 0.000 description 2
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 2
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 108010008177 Fd immunoglobulins Proteins 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 2
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 2
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N anthracene Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C21 MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 2
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 2
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 239000000576 food coloring agent Substances 0.000 description 2
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000003657 middle cerebral artery Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical class [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- SLLFVLKNXABYGI-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-benzoxadiazole Chemical compound C1=CC=C2ON=NC2=C1 SLLFVLKNXABYGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 2',7'-difluorofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPPQGYCZBNURDG-UHFFFAOYSA-N 2-propionyl-6-dimethylaminonaphthalene Chemical class C1=C(N(C)C)C=CC2=CC(C(=O)CC)=CC=C21 MPPQGYCZBNURDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BNBQQYFXBLBYJK-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-2-yl-1,3-oxazole Chemical compound C1=COC(C=2N=CC=CC=2)=N1 BNBQQYFXBLBYJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OLQIKGSZDTXODA-UHFFFAOYSA-N 4-[3-(4-hydroxy-2-methylphenyl)-1,1-dioxo-2,1$l^{6}-benzoxathiol-3-yl]-3-methylphenol Chemical compound CC1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C(=CC(O)=CC=2)C)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 OLQIKGSZDTXODA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UWAUSMGZOHPBJJ-UHFFFAOYSA-N 4-nitro-1,2,3-benzoxadiazole Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC2=C1N=NO2 UWAUSMGZOHPBJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241001552669 Adonis annua Species 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 description 1
- 208000028185 Angioedema Diseases 0.000 description 1
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 description 1
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 description 1
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 229940123765 Bradykinin B2 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037823 Cerebral ischemia/reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- 208000018380 Chemical injury Diseases 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 108010028774 Complement C1 Proteins 0.000 description 1
- 102100025406 Complement C1s subcomponent Human genes 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000034454 F12-related hereditary angioedema with normal C1Inh Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 1
- 206010062506 Heparin-induced thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 102100027619 Histidine-rich glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010055171 Hypertensive nephropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010073257 Idiopathic angioedema Diseases 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102100033320 Lysosomal Pro-X carboxypeptidase Human genes 0.000 description 1
- 208000001344 Macular Edema Diseases 0.000 description 1
- 206010025415 Macular oedema Diseases 0.000 description 1
- 101710136697 Modular serine protease Proteins 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- ZCQWOFVYLHDMMC-UHFFFAOYSA-N Oxazole Chemical class C1=COC=N1 ZCQWOFVYLHDMMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 102000008847 Serpin Human genes 0.000 description 1
- 108050000761 Serpin Proteins 0.000 description 1
- 208000020307 Spinal disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGLGAKMTYHWWKW-UHFFFAOYSA-N acridine yellow Chemical compound [H+].[Cl-].CC1=C(N)C=C2N=C(C=C(C(C)=C3)N)C3=CC2=C1 BGLGAKMTYHWWKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940027998 antiseptic and disinfectant acridine derivative Drugs 0.000 description 1
- 208000007474 aortic aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N auramine O free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(=N)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008236 biological pathway Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000007767 bonding agent Substances 0.000 description 1
- 239000003359 bradykinin B2 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- CZPLANDPABRVHX-UHFFFAOYSA-N cascade blue Chemical compound C=1C2=CC=CC=C2C(NCC)=CC=1C(C=1C=CC(=CC=1)N(CC)CC)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 CZPLANDPABRVHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 108010020742 complement C1 inhibitor Ta Proteins 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001893 coumarin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002329 esterase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108010044853 histidine-rich proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 208000003243 intestinal obstruction Diseases 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001459 lithography Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 108010057284 lysosomal Pro-X carboxypeptidase Proteins 0.000 description 1
- 201000010230 macular retinal edema Diseases 0.000 description 1
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 description 1
- FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M malachite green Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DZVCFNFOPIZQKX-LTHRDKTGSA-M merocyanine Chemical compound [Na+].O=C1N(CCCC)C(=O)N(CCCC)C(=O)C1=C\C=C\C=C/1N(CCCS([O-])(=O)=O)C2=CC=CC=C2O\1 DZVCFNFOPIZQKX-LTHRDKTGSA-M 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 150000002790 naphthalenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 1
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 description 1
- XJCPMUIIBDVFDM-UHFFFAOYSA-M nile blue A Chemical compound [Cl-].C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4[O+]=C3C=C(N)C2=C1 XJCPMUIIBDVFDM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N nile red Chemical compound C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=O)C2=C1 VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 229920006284 nylon film Polymers 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- GHTWDWCFRFTBRB-UHFFFAOYSA-M oxazine-170 Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.N1=C2C3=CC=CC=C3C(NCC)=CC2=[O+]C2=C1C=C(C)C(N(C)CC)=C2 GHTWDWCFRFTBRB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000004893 oxazines Chemical class 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- JZRYQZJSTWVBBD-UHFFFAOYSA-N pentaporphyrin i Chemical compound N1C(C=C2NC(=CC3=NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 JZRYQZJSTWVBBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920006289 polycarbonate film Polymers 0.000 description 1
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 150000003220 pyrenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000003233 pyrroles Chemical class 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 208000005198 spinal stenosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
- G01N33/553—Metal or metal coated
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
一種用於偵測及/或定量功能性C1-酯酶抑制子(fC1-INH)之裝置,該裝置包含:(i)共軛物墊,其包含第一區域及第二區域,第一試劑及第二試劑分別固定於該第一區域及該第二區域上;及(ii)膜,其與該共軛物墊連通,其中該膜包含第三區域,第三試劑固定於該第三區域上。該共軛物墊可進一步包含用於置放生物樣本之第四區域,該生物樣本按該第一區域、該第二區域、及該第三區域之次序流動穿過該裝置。
Description
相關申請案
本申請案根據35 U.S.C. § 119(e)主張2019年4月12日申請之美國臨時申請案第62/833,235號及2019年11月5日申請之美國臨時申請案第62/930,615號之權益,該等申請案之全部內容以引用之方式併入本文中。
C1-酯酶抑制子(亦稱為C1-抑制子或C1-INH)為屬於絲胺酸蛋白酶抑制子(serpin)超家族之蛋白酶抑制子。其主要功能為抑制補體系統以防止自發活化。C1-INH亦為血漿激肽釋放素(pKal)之內源性抑制子。C1-INH中之常染色體顯性突變導致遺傳性血管性水腫(HAE),包括I型及II型HAE。
用於評定C1-INH功能性量之當前可用的分析利用顯色分析或複合ELISA方法,測量補體級聯之C1s藉由C1-INH之抑制。顯色分析一般視為較佳的,但兩種方法皆具有侷限性。顯色分析更可能具有偶發性假陽性,而複合ELISA具有僅62%之陰性預測值。
備受關注者為開發用於測量HAE疾病病理學中所涉及之功能性C1-INH的較新分析及/或平台。
本文提供用於以快速且具成本效益的定性及/或定量方式偵測功能性C1-INH(fC1-INH)之裝置及方法。在一些實施方式中,偵測fC1-INH係使用經裝配以經由側流免疫分析(LFA)偵測及/或定量fC1-INH之裝置來達成。
因此,本文之揭示內容之一個方面提供一種用於偵測及/或定量功能性C1-酯酶抑制子(fC1-INH)之裝置,該裝置包含(i)共軛物墊,其包含第一區域及第二區域,第一試劑及第二試劑分別固定於該第一區域及該第二區域上;及(ii)膜,其與該共軛物墊連通,其中該膜包含第三區域,第三試劑固定於該第三區域上。該第一試劑可為功能性C1抑制子(fC1-INH)結合劑或C1抑制子(C1-INH)結合劑。該第二試劑及該第三試劑為功能性C1抑制子(fC1-INH)結合劑、C1抑制子(C1-INH)結合劑、及捕捉劑中之一者。該第一試劑、該第二試劑、及該第三試劑彼此不同。該fC1-INH結合劑、該C1-INH結合劑、及該捕捉劑中之一者與可偵測標記共軛,且該fC1-INH結合劑及該C1-INH結合劑中之一者與銜接劑(docking agent)共軛。該可偵測標記及該銜接劑與不同試劑共軛。該共軛物墊進一步包含用於置放生物樣本之第四區域,該生物樣本按該第一區域、該第二區域、及該第三區域之次序流動穿過該裝置。在一些情況下,用於置放生物樣本之該第四區域可與該第二區域重疊,該fC1-INH結合劑可位於該第二區域上。
在一些實施方式中,該第一試劑、該第二試劑、及該第三試劑分別為該C1-INH結合劑、該fC1-INH結合劑、及該捕捉劑。在其他實施方式中,該第一試劑、該第二試劑、及該第三試劑分別為該fC1-INH結合劑、該C1-INH結合劑、及該捕捉劑。
在一些實例中,該第一試劑與該可偵測標記共軛,該第二試劑與該銜接劑共軛。在其他實例中,該第一試劑與該銜接劑共軛,該第二試劑與該可偵測標記共軛。
在一些實施方式中,該fC1-INH結合劑可為因子XII之活性形式(FXIIa)。替代地或另外,該C1-INH結合劑可為結合C1-INH之抗體。此外,該銜接劑及該捕捉劑可為受體-配位體對之成員。舉例而言,該受體-配位體對可包含生物素及抗生物素蛋白(例如鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)或聚鏈黴抗生物素蛋白)。
在一些實施方式中,該可偵測標記可為銪、膠體金、藻紅素、螢光素、玫瑰紅、綠色螢光蛋白、量子點、及發色團。在一些實施方式中,該可偵測標記為銪。在一些情況下,該可偵測標記可連接至乳膠粒子。
在一個實例中,該第一試劑為位於該第一區域之該C1-INH結合劑,該第二試劑為位於該第二區域之該fC1-INH結合劑,且該第三試劑為位於該第三區域之該捕捉劑。該C1-INH結合劑可為結合至C1-INH之抗體,其可與如本文所揭示之可偵測標記共軛。替代地或另外,該fC1-INH結合劑可為FXIIa,其可與銜接劑(例如生物素)共軛。此外,該捕捉劑可為抗生物素蛋白,諸如鏈黴抗生物素蛋白或聚鏈黴抗生物素蛋白。
在一些實施方式中,該裝置進一步包含與該膜連通之吸收墊。該吸收墊及該共軛物墊可藉由該膜分隔開。替代地或另外,該裝置可進一步包含支撐構件,該共軛物墊、該膜、及/或該吸收墊安裝在該支撐構件上。
此外,該裝置亦可包含外殼。在一些實施方式中,該外殼可包含形成緩衝液口之第一開口、形成取樣口之第二開口、及形成測試窗口之第三開口。該取樣口可位於該緩衝液口與該測試窗口之間。在一些實例中,該緩衝液口可與該第一區域對準,該C1-INH結合劑位於該第一區域上。在一些實例中,該取樣口可與該第二區域對準,該fC1-INH結合劑位於該第二區域上。在一些實例中,該測試窗口與該第三區域對準,該捕捉劑位於該第三區域上。
在另一方面中,本文之揭示內容提供使用本文所揭示之LFA裝置中之任一者偵測及/或定量樣本中之功能性C1-酯酶抑制子(fC1-INH)的方法。如此方法可包含:(i)將樣本置放於本文所描述之裝置之該取樣口中,(ii)將緩衝液置放於該裝置中的該緩衝液口中,其中該緩衝液以該第一區域往該第三區域的方向流動;(iii)檢查該裝置中之該測試窗口處的信號,及(iv)基於該測試窗口處的信號之存在或強度測定該樣本中fC1-INH之存在或測量該樣本中fC1-INH之量。在一些實施方式中,步驟(ii)在步驟(i)之後至少至少5分鐘之後進行。該fC1-INH結合劑可固定在該第二區域,該第二區域可與該取樣口對準。
本文亦提供用於偵測及/或定量樣本中之功能性C1-酯酶抑制子(fC1-INH)的方法,該方法包含使樣本與fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑、及捕捉劑接觸以形成複合物,其中該fC1-INH結合劑及該C1-INH試劑中之一者與結合該捕捉劑之銜接劑共軛,且其中該fC1-INH結合劑、該C1-INH試劑、及該捕捉劑中之一者與可偵測標記共軛,該可偵測標記及該銜接劑與不同試劑共軛;及偵測自該複合物中之該可偵測標記釋放之信號;其中自該複合物中之該可偵測標記釋放之信號的存在指示樣本中之fC1-INH的存在。如本文所揭示之該fC1-INH結合劑、該C1-INH結合劑、該銜接劑、該可偵測標記、及該捕捉劑中之任一者均可用於本文所揭示之方法中。
在一些實施方式中,步驟(i)可藉由以下者進行:(a)將該樣本與該fC1-INH結合劑一起培育至少5分鐘,及(b)使該樣本與該C1-INH結合劑及該捕捉劑接觸。在其他實施方式中,步驟(i)藉由以下者進行:(a)用該fC1-INH結合劑培育樣本至少5分鐘以形成第一複合物,(b)使該第一複合物與該C1-INH結合劑接觸以形成第二複合物,及(c)使該第二複合物與該捕捉劑接觸以形成該複合物,且其中該捕捉劑固定於支撐構件上。<
在本文所揭示之分析方法中之任一者中,待分析之樣本可為獲自個體之生物樣本,例如血清樣本、血漿樣本、或血液樣本(例如全血)。在一些實施方式中,該個體可為疑似患有fC1-INH缺乏介導之病症或處於該病症風險下的人類患者,該病症包括但不限於遺傳性血管性水腫(HAE)、獲得性血管性水腫(AAE)、及C1-INH相關免疫疾病。在一些實施方式中,該個體具有HAE症狀。在一些實施方式中,該HAE為I型HAE或II型HAE。在其他實施方式中,該個體不具有HAE之症狀、不具有HAE之症狀之病史、或不具有HAE之病史。在一些實施方式中,該個體對抗組織胺療法、皮質類固醇療法、或兩者具有抗性。
本文所描述之裝置及方法之若干實施方式的細節闡述於附圖式及以下實施方式中。本文所描述之裝置及方法之其他特徵、目標、及優點基於以下實施方式及自申請專利範圍會是顯而易見的。
本文之揭示內容至少部分基於用於測量功能性C1-酯酶抑制子(fC1-INH)之側流分析(LFA)方法及裝置之發展。LFA方法及裝置經設計用於特異性偵測fC1-INH(例如於生物樣本中)之存在及/或測量fC1-INH之量。fC1-INH之存在及/或量通常指示與C1-INH起作用之生物路徑相關之疾病的狀態。因此,LFA方法及裝置將特別適用於診斷及預後由C1-INH缺乏介導之疾病,例如由血漿激肽釋放素路徑介導之疾病(例如,諸如遺傳性血管性水腫之疾病),此係因為fC1-INH為pKal路徑之抑制子。
如本文所用,「功能性C1-INH」或「fC1-INH」係指呈能夠結合至蛋白因子之形式的C1-INH蛋白,實質上C1-INH結合且發揮其生物活性。如此蛋白因子包括但不限於C1s、因子XIIa(FXIIa)及血漿激肽釋放素(pKal)。fC1-INH之此亞群之偵測尤其有助於評定諸如HAE之疾病中之C1-INH的功能性量。
HAE為極罕見且潛在地危及生命之遺傳病況,約10,000人中有1人至50,000人中有1人出現此病況。症狀包括身體之各個部位,包括手、足、面部及呼吸道(咽喉)中之水腫(腫脹)。患者常常遭受由腸道壁中之腫脹造成之極度腹痛、噁心及嘔吐。呼吸道或咽喉之腫脹特別危險;其可由窒息而導致死亡。證實I型及II型HAE所需之三個特定血液測試為C1INH抗原、fC1INH及C4。許多診斷分析使用過時技術且並不快速或標準化或可為全世界可用的。
本文揭示之快速且靈敏的LFA方法及裝置可在醫師的辦公室實驗室中進行以便基於fC1INH量快速診斷HAE(例如I型及II型)。如此方法及裝置將引起由健康保險報銷之消耗品的成本低、定量結果中之可信度的程度高、醫師解釋資料容易及/或用於確認分析之需要程度低。在醫師的辦公室中診斷I型或II型HAE之如此快速分析可擴大HAE之篩檢且更快速地鑑別出新的HAE患者。目前,HAE之全球診斷率僅僅為40%;因此,未經診斷之患者具有高度未滿足之需求。常見裝置平台上之快速測試可用性可擴大HAE之辨識。另外,本文所揭示之fC1INH之快速測試可以及時方式在臨床配置中有助於監測HAE疾病進展或對療法之反應。
本文所揭示之LFA方法及裝置涉及特異性針對fC1-INH之第一結合劑(fC1-INH結合劑)、特異性針對C1-INH(特異性針對功能性C1-INH、非功能性C1-INH或兩者)之第二結合劑及捕捉劑。fC1-INH結合劑或C1-INH結合劑可與能夠結合至捕捉劑之銜接劑共軛。fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及捕捉劑中之一者可與可偵測標記共軛。因此,樣本(例如生物樣本)中之fC1-INH可與fC1-INH結合劑及C1-INH結合劑形成複合物。如此複合物可經由捕捉劑與銜接劑(其與C1-INH結合劑及fC1-INH結合劑中之一者共軛)之間的相互作用結合至捕捉劑。在偵測到自可偵測標記釋放之信號(例如存在或強度)後,樣本中fC1-INH之存在或量可基於連同的所測試標準測定及/或定量。舉例而言,以不同量之Cinryze®
,經純化之人類血漿衍生之C1INH可用作標準物,以產生標準曲線,從而推知及測定樣本中fC1INH之量,如藉由本文所揭示之方法中之任一者所測量。自可偵測標記釋放之信號之強度可基於標準定量為樣本中fC1INH的U/ml,且指示樣本中fC1-INH之量。 I. 用於側流分析( LFA )中之組分
本文所揭示之LFA方法及裝置涉及(i)fC1-INH結合劑,(ii)C1-INH結合劑,其中之一者與銜接劑共軛,及(iii)捕捉劑,其結合該銜接劑。(i)-(iii)中之一者與可偵測標記共軛。(a) fC1-INH 結合劑
fC1-INH結合劑為特異性結合功能性C1-INH之分子(例如結合fC1-INH之蛋白或其片段)。若分子與特定標靶(例如本文所揭示之彼等)之反應比其與替代性標靶(其可為特定標靶之變化形式)之反應更頻繁、更快速、持續時間更長及/或親和力更大,則稱其展現「特異性結合」。舉例而言,與諸如非功能性C1-INH之替代性標靶相比,特異性結合fC1-INH的分子之反應將更頻繁、更快速、持續時間更長及/或對fC1-INH的親和力更大。「特異性結合」或「優先結合」未必需要(儘管其可包括)獨佔式結合。
在一些情況下,能夠實質上結合至fC1-INH之蛋白或多肽或其結合片段可用作fC1-INH結合劑。在一些實例中,fC1-INH結合劑為FXII,例如,FXII之活性形式(FXIIa)。因子XII為參與血液凝固、纖維蛋白溶解之起始以及緩激肽及血管收縮素之產生的血清糖蛋白。前激肽釋放素藉由因子XII裂解以形成激肽釋放素,其接著活化因子XII,導致形成因子XIIa及因子XII片段(因子XIIf)(「Histidine-rich glycoprotein binds factor XIIa with high affinity and inhibits contact-initiated coagulation
」 Macquarrie,等人
,Blood 117
:4134-4141 2011)。已顯示出C1抑制子(C1-INH)為因子XIIa與因子XIIf之重要血漿抑制子(「Effect of negatively charged activating compounds on inactivation of factor XIIa by C1 inhibitor
」 Pixley,等人
,Arch Biochem Biophys 256
(2):490-8 1987)。
包括前驅體形式、成熟形式及其活性形式之FXII蛋白為此項技術中所熟知。舉例而言,人類因子XII及其活性形式之前驅蛋白序列以基因庫寄存編號(GenBank Accession Number):NP_000496.2提供。其他物種(例如非人類哺乳動物)之FXII蛋白亦為此項技術中已知的。可在此項技術中發現其結構資訊,例如使用人類FXII序列作為查詢自公開可用之基因資料庫鑑別。
「活性」或「功能性」因子XII係指保持生物活性的因子XII多肽或因子XII多肽片段,該生物活性類似於但可並非等同於包括成熟形式之天然存在之因子XII對應物。在一些實施方式中,活性或功能性因子XII為結合至fC1-INH之因子XII多肽或因子XII多肽片段。在一些實施方式中,活性或功能性因子XII為結合至fC1-INH之因子XIIa多肽或因子XIIa多肽片段。在一些實施方式中,活性或功能性因子XII為結合至fC1-INH之因子XIIf多肽或因子XIIf多肽片段。
在其他實例中,fC1-INH結合劑為血漿激肽釋放素(pKal),例如天然存在之pKal蛋白之催化片段。血漿激肽釋放素為接觸系統之絲胺酸蛋白酶組分。(Sainz I.M.等人, Thromb Haemost 98, 77-83, 2007)。接觸系統藉由在暴露於異質表面或帶負電表面時的因子XIIa或在藉由脯胺醯羧基肽酶之內皮細胞表面上得以活化(Sainz I.M.等人, Thromb Haemost 98, 77-83, 2007)。血漿激肽釋放素之活化經由其因子XII之反饋活化放大內源性凝血(intrinsic coagulation),且經由促炎性九肽緩激肽之產生促進發炎。作為循環中之初始激肽原酶,血漿激肽釋放素很大程度上引起脈管結構中之緩激肽之產生。
pKal蛋白為此項技術中所熟知。例示性血漿激肽釋放素序列可包括人類(寄存編號:NP_000883.2)、小鼠(寄存編號:NP_032481.1)或大鼠(寄存編號:NP_036857.2)血漿激肽釋放素胺基酸序列。
「活性」或「功能性」血漿激肽釋放素係指保持生物活性(例如蛋白酶活性)的血漿激肽釋放素多肽或血漿激肽釋放素多肽片段,該生物活性類似於但可並非等同於包括成熟形式之天然存在之血漿激肽釋放素對應物。在一些實施方式中,活性或功能性血漿激肽釋放素為結合至fC1-INH之血漿激肽釋放素多肽或血漿激肽釋放素多肽片段。
在又其他實例中,本文所揭示之fC1-INH結合劑可為C1s及C1r,或其活性/功能性片段。C1s及C1r為補體(C1)之第一組分的經活化同源絲胺酸蛋白酶。C1s與C1r皆可與C1-INH形成複合物。Arlaud等人
, (1993)Methods Enzymol
.223
, 61-82。C1s為模組化絲胺酸蛋白酶,其執行C1複合物之催化功能。C1r為藉由蛋白水解分裂使C1s活化成其活性形式的酶。
C1s及C1r蛋白亦為此項技術中所熟知。舉例而言,人類C1s之前驅蛋白序列以基因庫寄存編號:NP_001725.1提供,且人類C1r之前驅蛋白序列以基因庫寄存編號:NP_001724.4提供。
「活性」或「功能性」C1s及C1r係指保持生物活性的C1s及C1r多肽片段,該生物活性分別類似於但可並非等同於包括成熟形式之天然存在之C1s及C1r對應物。在一些實施方式中,活性或功能性C1s或C1r片段為結合至fC1-INH之C1s多肽或C1s多肽之部分。
fC1-INH結合劑中之任一者可經由重組技術產生,或自適合天然來源分離。(b) C1-INH 結合劑
用於本文所揭示之LFA方法及裝置中之C1-INH結合劑可為能夠結合至C1-INH之任何分子(例如蛋白或多肽)。在一些情況下,C1-INH結合劑特異性針對fC1-INH。在其他情況下,C1-INH結合劑對功能性及非功能性C1-INH兩者具有交叉反應性。
C1-INH結合劑可為結合C1-INH之抗體。如本文所用,術語「抗體」係指包括至少一個免疫球蛋白可變域或免疫球蛋白可變域序列之蛋白。舉例而言,抗體可包括重(H)鏈可變區(在本文中縮寫為VH)及輕(L)鏈可變區(在本文中縮寫為VL)。在另一實例中,抗體包括兩個重(H)鏈可變區及兩個輕(L)鏈可變區。術語「抗體」涵蓋抗體之抗原結合片段(例如單鏈抗體、Fab及sFab片段、F(ab')2
、Fd片段、Fv片段、scFv及域抗體(dAb)片段)(de Wildt等人
,Eur J Immunol.
1996;26
(3):629- 39.))以及完整抗體。抗體可具有結構特徵IgA、IgG、IgE、IgD、IgM(以及其亞型)。
VH及VL區可進一步細分成高變區,稱為「互補決定區」(「CDR」),其穿插著更保守區,稱為「構架區」(「FR」)。已精確界定構架區及CDR之範圍(參見Kabat, E.A.,等人
(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services
, NIH出版物第91-3242號,及Chothia, C.等人
, (1987)J. Mol. Biol. 196
:901-917,亦參見www.hgmp.mrc.ac.uk)。本文中使用Kabat定義。各VH及VL典型地由自胺基末端至羧基末端按以下次序配置之三個CDR及四個FR構成:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
抗體之VH或VL鏈可進一步包括重鏈或輕鏈恆定區之全部或一部分,藉此分別形成重或輕免疫球蛋白鏈。在一個實施方式中,抗體為兩個重免疫球蛋白鏈及兩個輕免疫球蛋白鏈之四聚體,其中重及輕免疫球蛋白鏈藉由例如二硫鍵互連。在IgG中,重鏈恆定區包括三個免疫球蛋白域CH1、CH2及CH3。輕鏈恆定區包括CL域。重鏈及輕鏈之可變區含有與抗原相互作用之結合域。抗體之恆定區典型地介導抗體與宿主組織或因子(包括各種免疫系統之細胞(例如效應細胞)及經典補體系統之第一組分(C1q))之結合。免疫球蛋白之輕鏈可具有κ或λ鏈。在一個實施方式中,抗體經糖基化。抗體之功能可為抗體依賴性細胞毒性及/或補體介導之細胞毒性。
在一些實施方式中,結合C1-INH之抗體可特異性結合至Cl-INH,例如fC1-INH之抗原決定基或fC1-INH及非功能性C1-INH所共有之抗原決定基。「特異性結合」於抗原或抗原決定基之抗體為此項技術中所熟知之術語,且測定如此特異性結合之方法亦為此項技術中所熟知。若抗體與特定標靶抗原之反應或締合比其與替代性標靶之反應更頻繁、更快速、持續時間更長及/或親和力更大,則稱其展現「特異性結合」。若抗體與標靶抗原或抗原決定基之結合比其結合至其他物質之親和力、親合力更大、更容易及/或持續時間更長,則其「特異性結合」於標靶抗原或抗原決定基。舉例而言,特異性(或優先)結合至抗原(例如C1-INH)或其中之抗原抗原決定基的抗體為結合此標靶抗原比其結合至其他抗原或相同抗原中之其他抗原決定基的親和力、親合力更大、更容易及/或持續時間更長的抗體。藉由閱讀此定義亦應理解,例如特異性結合至第一標靶抗原之抗體可或可不特異性或優先結合至第二標靶抗原。因此,「特異性結合」或「優先結合」未必需要(儘管其可包括)獨佔式結合。一般而言,但不一定,提及結合意謂優先結合。在一些實例中,「特異性結合」於標靶抗原或其抗原決定基之抗體可不結合至其他抗原或相同抗原中之其他抗原決定基。
用於本文所揭示之LFA方法及裝置之結合至C1-INH之抗體可具有針對C1-INH或其適合抗原決定基之適合的結合親和力。如本文所用,「結合親和力」係指表觀締合常數或KA。KA為解離常數(KD)之倒數。本文所描述之抗體之結合親和力(KD)可為至少10-5
、10-6
、10-7
、10-8
、10-9
、10-10
M或更低。增加之結合親和力對應於降低之KD。抗體對第一抗原之親和力結合相對於第二抗原更高可由結合第一抗原之KA(或更小數值KD)比結合第二抗原之KA(或數值KD)更高指示。在如此情況下,相對於第二抗原,抗體對第一抗原具有特異性。結合親和力(例如對於特異性或其他比較)之差值可為至少1.5、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、500、1000、10,000或105
倍。結合親和力(或結合特異性)可藉由習知方法測定。
結合至C1-INH之抗體可為全長抗體。替代地,抗體為全長抗體之抗原結合片段。全長抗體之術語「抗原結合片段」係指保留特異性結合至相關標靶之能力的全長抗體之一或多個片段。全長抗體之術語「抗原結合片段」內所涵蓋之結合片段之實例包括(i)Fab片段,由VL、VH、CL及CH1域組成之單價片段;(ii)F(ab')2
,包括兩個在鉸鏈區藉由二硫橋鍵連接之Fab片段的二價片段;(iii)由VH及CH1域組成之Fd片段;(iv)由單個組之抗體的VL及VH域組成之Fv片段;(v)dAb片段(Ward等人
, (1989)Nature 341
:544-546),其由VH域組成;及(vi)保留功能性之分離之互補決定區(CDR)。此外,儘管Fv片段之兩個域VL及VH係由獨立基因編碼,但其可使用重組方法,藉由使其能夠以單一蛋白鏈形式製得之合成連接子接合,其中VL及VH區配對形成單價分子(已知為單鏈Fv(scFv))。參見例如美國專利5,260,203、4,946,778及4,881,175;Bird等人
, (1988)Science 242
:423-426;及Huston等人
, (1988)Proc. Natl. Acad. Sci.
USA85
:5879- 5883。抗體片段可使用任何適當的技術,包括熟習此項技術者已知之習知技術獲得。
如本文所描述之結合至C1-INH之抗體中之任一者可為單株或多株抗體。「單株抗體」係指均質抗體群體且「多株抗體」係指異質抗體群體。此等兩個術語並不限制抗體之來源或製得其之方式。
結合至C1-INH之抗體可藉由此項技術中已知之任何方法製得。參見例如,Harlow and Lane, (1998) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York。在一些實施方式中,特異性針對C1-INH(例如人類C1-INH)之抗體可藉由習知融合瘤技術製得。在其他實施方式中,特異性針對C1-INH之抗體可遵照習知抗體庫篩選技術自抗體庫分離。
在一些實施方式中,抗體為特異性結合至人類C1-INH之抗體。在一些實施方式中,抗體為特異性結合至人類C1-INH之單株抗體。在一些實施方式中,抗體為特異性結合至人類C1-INH之小鼠單株抗體,諸如抗體殖株MM06或MM03(來自Sino Biological公司,亦分別稱為10995-MM06及10995-MM03)。在一些實施方式中,抗體為特異性結合至人類C1-INH之多株抗體。在一些實施方式中,抗體為特異性結合至人類C1-INH之兔多株抗體,諸如抗體殖株RP01或RP02(來自Sino Biological公司,亦分別稱為10995-RP01及10995-RP02)。在一些實施方式中,抗體為RP02。(c) 銜接劑 - 捕捉劑
fC1-INH結合劑及C1-INH結合劑中之一者與銜接劑共軛,該銜接劑能夠結合至亦如本文所揭示之LFA方法及裝置中所用的捕捉劑。在一個實施方式中,銜接劑與fC1-INH結合劑(例如FXIIa)共軛。在其他實施方式中,銜接劑可與C1-INH(例如結合至C1-INH之抗體)共軛。
銜接劑及捕捉劑為受體-配位體對之成員,其係指能夠彼此結合以形成複合物之任何一對分子。在一個實例中,銜接劑及捕捉劑分別為生物素及抗生物素蛋白,或反之亦然。舉例而言,銜接劑可為生物素,且捕捉劑可為鏈黴抗生物素蛋白或聚鏈黴抗生物素蛋白。(d) 可偵測標記
用於如本文所揭示之LFA方法及裝置的fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及捕捉劑中之一者可與可偵測標記共軛。在一些實施方式中,fC1-INH結合劑與可偵測標記共軛。在其他實施方式中,C1-INH結合劑與可偵測標記共軛。替代地,捕捉劑與可偵測標記共軛。
如本文所用,「可偵測標記」係指能夠直接或間接釋放可偵測信號之任何分子。在一些實施方式中,可偵測標記可為螢光團(例如螢光素)。如本文所用,術語「螢光團」(亦稱為「螢光標記」或「螢光色素」)係指在界定之激發波長下吸收光能且在不同波長下發射光能的部分。
螢光團之實例包括但不限於二苯并哌喃衍生物(例如螢光素、玫瑰紅、俄勒岡綠(Oregon green)、伊紅及德克薩斯紅)、花青衍生物(例如花青、吲哚羰花青、氧雜羰花青、硫雜羰花青及部花青)、萘衍生物(例如丹醯基及普羅丹(prodan)衍生物)、香豆素衍生物、噁二唑衍生物(例如吡啶基噁唑、硝基苯并噁二唑及苯并噁二唑)、芘衍生物(例如級聯藍(cascade blue)、噁嗪衍生物(例如尼羅紅、尼羅藍、甲酚紫及噁嗪170)、吖啶衍生物(例如原黃素、吖啶橙及吖啶黃)、芳基次甲基衍生物(例如金胺、結晶紫及孔雀綠)、四吡咯衍生物(例如卟吩、酞花青及膽紅素),或螢光蛋白(例如綠色螢光蛋白)。
在一些實施方式中,可偵測標記為藻紅素。
在一些實施方式中,可偵測標記為發色團(例如蒽)。在一些實施方式中,可偵測標記為半導體粒子(例如量子點)。在一些實施方式中,可偵測標記連接至半導體粒子(例如量子點)。在一些實施方式中,可偵測標記為銪。在一些實施方式中,可偵測標記為膠體金。在一些實施方式中,可偵測標記連接至金粒子。在一些實施方式中,可偵測標記連接至紅色金粒子。在一些實施方式中,可偵測標記連接至乳膠粒子。在一些實施方式中,C1-INH結合劑為與銪共軛之抗體RP02。在一些實施方式中,C1-INH結合劑為與金粒子共軛之抗體RP02。在一些實施方式中,C1-INH結合劑為與紅色金粒子共軛之抗體RP02。在一些實施方式中,C1-INH結合劑為與乳膠粒子共軛之抗體RP02。II. LFA 裝置
在一些方面中,本文之揭示內容提供用於測量含有fC1-INH的樣本中之fC1-INH的側流分析(LFA)裝置。現參考圖 1-4
,其形象地說明本文所描述之例示性LFA裝置之各種實施方式。
如圖 1
中所示,在一些實施方式中,裝置100
包含共軛物墊200
、膜300
及視情況存在之吸收墊400
及支撐構件500
,共軛物墊200
、膜片300
及視情況存在之吸收墊400
安裝於該支撐構件上。
共軛物墊200
直接或經由連接子與膜300
連通。當裝置含有吸收墊400
時,共軛物墊200
及吸收墊400
藉由膜300
分隔開,該膜與吸收墊400
直接或間接連通。在一些實施方式中,共軛物墊200
與膜300
重疊,例如2-6 mm,諸如3 mm,如圖2中所示。替代地或另外,膜300與吸收墊400
重疊,例如2-6 mm,諸如3 mm,如圖2中所示。
可在必要時修改共軛物墊200
、膜300
、吸收墊400
及支撐構件500
之特定特徵及尺寸以實現所需結果。如圖 2
中所示,在一些實施方式中,支撐膜之長度為80 mm,其為共軛物墊(42 mm)、膜(25 mm)及吸收墊(19 mm)之組合長度減去膜上之樣本墊及吸收墊的重疊(3 mm,3 mm)。
如圖 3A
,裝置100
之俯視圖中所示,裝置可包含在一些實施方式中,適用於固定如本文所描述之fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及捕獲劑的各個區域(210
、220
、230
)。在一些實施方式中,裝置100
包含第一區域210
及第二區域220
,其可在共軛物墊200
上;及第三區230
,其可在膜300上。
fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及捕捉劑中之每一者可固定於區域210
、220
及230
(其可按任何次序)中之一者上。此等試劑中之任一者可使用此項技術中已知之任何方式固定。試劑可直接或間接固定於或結合於共軛物墊200
及/或膜300
之表面。在一些實施方式中,結合劑經由共價鍵固定於表面。在一些實施方式中,結合劑經由非共價鍵固定於表面。在一些實施方式中,結合劑經由連接子固定於表面。連接子之實例包括但不限於含碳鏈、聚乙二醇(PEG)、核酸、單醣單元、生物素、抗生物素蛋白及肽。
在一些實施方式中,諸如FXIIa之fC1-INH結合劑固定在第一區域210
上。fC1-INH結合劑可與諸如生物素之銜接劑共軛。諸如結合至C1-INH之抗體的C1-INH結合劑可固定在第二區域220
上。C1-INH結合劑可與可偵測標記,諸如本文所揭示之彼等共軛。諸如抗生物素蛋白(例如鏈黴抗生物素蛋白)之捕捉劑可固定在第三區域230
上。
在一些實施方式中,諸如FXIIa之fC1-INH結合劑固定在第一區域210
上。fC1-INH結合劑可與可偵測標記,如本文所描述之彼等共軛。諸如結合至C1-INH之抗體的C1-INH結合劑可固定在第二區域220
上。C1-INH結合劑可與諸如生物素之銜接劑共軛。諸如抗生物素蛋白(例如鏈黴抗生物素蛋白)之捕捉劑可固定在第三區域230
上。
在一些實施方式中,諸如結合至C1-INH之抗體的C1-INH結合劑可固定在第一區域210
上。C1-INH結合劑可與諸如生物素之銜接劑共軛。諸如FXIIa之fC1-INH結合劑可固定在第二區域220
上。fC1-INH結合劑可與可偵測標記,諸如本文所描述之彼等共軛。諸如抗生物素蛋白(例如鏈黴抗生物素蛋白)之捕捉劑可固定在第三區域230
上。
在一些實施方式中,諸如結合至C1-INH之抗體的C1-INH結合劑可固定在第一區域210
上。C1-INH結合劑可與可偵測標記,諸如本文所描述之彼等共軛。諸如FXIIa之fC1-INH結合劑可固定在第二區域220
上。fC1-INH結合劑可與諸如生物素之銜接劑共軛。諸如抗生物素蛋白(例如鏈黴抗生物素蛋白)之捕捉劑可固定在第三區域230
上。
在一些實施方式中,諸如FXIIa之fC1-INH結合劑固定在第一區域210
上。fC1-INH結合劑可與諸如生物素之銜接劑共軛。諸如抗生物素蛋白(例如鏈黴抗生物素蛋白)之捕捉劑可固定在第二區域220
上。捕捉劑可與可偵測標記,諸如本文所揭示之彼等共軛。諸如結合至C1-INH之抗體的C1-INH結合劑可固定在第三區域230
上。
在一些實施方式中,諸如FXIIa之fC1-INH結合劑固定在第一區域210
上。fC1-INH結合劑可與可偵測標記,諸如本文所描述之彼等共軛。諸如抗生物素蛋白(例如鏈黴抗生物素蛋白)之捕捉劑可固定在第二區域220
上。諸如結合至C1-INH之抗體的C1-INH結合劑可固定在第三區域230
上。C1-INH結合劑可與諸如生物素之銜接劑共軛。
在一些實施方式中,諸如結合至C1-INH之抗體的C1-INH結合劑可固定在第一區域210
上。C1-INH結合劑可與諸如生物素之銜接劑共軛。諸如抗生物素蛋白(例如鏈黴抗生物素蛋白)之捕捉劑可固定在第二區域220
上。捕捉劑可與可偵測標記,諸如本文所揭示之彼等共軛。諸如FXIIa之fC1-INH結合劑可固定在第三區域230
上。
在一些實施方式中,諸如結合至C1-INH之抗體的C1-INH結合劑可固定在第一區域210
上。C1-INH結合劑可與可偵測標記,諸如本文所描述之彼等共軛。諸如抗生物素蛋白(例如鏈黴抗生物素蛋白)之捕捉劑可固定在第二區域220
上。諸如FXIIa之fC1-INH結合劑可固定在第三區域230
上。fC1-INH結合劑可與諸如生物素之銜接劑共軛。
本文所揭示之LFA裝置中之任一者可進一步包含第4區域240
,其可用於置放樣本,諸如本文所描述之彼等,及視情況存在之第5區域250
,其可用於置放緩衝溶液。
第5區域250
可位於裝置之一端,使得當緩衝溶液置放於第5區域250
上時,緩衝溶液可自第1區域210
朝向第3區域230
流動穿過裝置。在一些實例中,第5區域250
可與第1區域210
重疊。參見圖3B。在此情況下,諸如結合至C1-INH之抗體的C1-INH結合劑可固定在與第5區域250
重疊之第1區域210
上。C1-INH結合劑可與可偵測標記共軛。
替代地或另外,第4區域240
可位於第5區域250
與第2區域220
之間。在一些情況下,第4區域240
與第2區域220
可重疊。參見圖3B。可與諸如生物素之銜接劑共軛之諸如FXIIa之fC1-INH結合劑可固定在第2區域220
上。
如圖 4
中所示,在一些實施方式中,裝置100
可進一步包含外殼600
,其可為可移除的。在外殼中之如本文所描述之裝置的影像顯示於圖5中。外殼600
可經裝配以暴露裝置100
之共軛物墊200
及膜300
之至少一部分。在一些實施方式中,外殼600
包含第一開口以形成緩衝液口610
,其可與第一區域210
對準。外殼600可進一步包含第二開口以形成取樣口620,其可與第二區域220
對準。另外,外殼600可包含第三開口以形成測試窗口630
,其可與第三區域230
對準。
在一些實施方式中,諸如結合至C1-INH之抗體的C1-INH結合劑固定在與緩衝液口610
對準之第1區域210
上。圖4。C1-INH結合劑可與可偵測標記,諸如本文所描述之彼等共軛。諸如FXIIa之fC1-INH結合劑可固定在第2區域220
上,其可與取樣口620
對準。fC1-INH結合劑可與諸如生物素之銜接劑共軛。諸如抗生物素蛋白(例如鏈黴抗生物素蛋白)之捕捉劑可固定在第3區域230
上,其可與測試窗口630
對準。
在一些實例中,樣本可置放於取樣口620
中,使得在其中之fC1-INH與FXIIa-生物素共軛物的結合。緩衝溶液可置放於緩衝液口610
中,使得在第1區域210
上之C1-INH結合劑與緩衝溶液一起朝向第2區域220
遷移。當在第2區域220
使C1-INH結合劑與fC1-INH-FXIIa複合物接觸時,形成C1-INH結合劑/fC1-INH/FXIIa-生物素之複合物。此複合物將與緩衝溶液一起朝向第3區域230
遷移,且經由在第3區域230
的生物素與鏈黴抗生物素蛋白之間的相互作用在第3區域230
經捕捉。可測量在與測試窗口630
對準之第3區域230自與C1-INH結合劑共軛之可偵測標記釋放的信號,其指示樣本中fC1-INH之存在或量。
替代地或另外,外殼600
可為透明的,以便於觀測取樣口610
及/或緩衝液口620
及/或測試窗口630
。在一些實施方式中,外殼之一部分為透明的。在一些實施方式中,整個外殼600
為透明的。
在一些實施方式中,外殼600
包含便於鑑別樣本或結果之標記。在一些實施方式中,外殼600
包含一或多個標記以便於鑑別測試窗口630
中之結果。在一些實施方式中,一或多個標記鑑別樣本結果。
應瞭解,如本文所描述之裝置之各種實施方式,包括裝置中之多個組件(例如共軛物墊、膜、吸收墊及支撐構件)可用適合之材料形成,例如用任何適合之共軛物墊、用任何適合之吸收墊、用任何適合之支撐構件、用任何適合之結合劑及用其任何適合之組合。
舉例而言,如本文所揭示之LFA裝置中之膜300
可為任何適合之膜,包括但不限於硝化纖維素膜、耐綸膜、纖維素膜、聚偏氟乙烯膜、聚碳酸酯膜、聚丙烯膜、聚乙烯膜、聚四氟乙烯膜及聚對伸苯基對苯二甲醯胺膜。在一些實施方式中,膜為硝化纖維素膜。
任何適合之支撐構件可用於本文所描述之裝置中。在一些實施方式中,支撐構件包含金屬。在一些實施方式中,支撐構件包含塑膠。在一些實施方式中,支撐構件包含選自由以下者組成之群的塑膠:苯乙烯、聚碳酸酯、聚丙烯、聚乙烯及聚氯乙烯。
任何適合之墊可用作本文所描述之裝置中之共軛物墊。在一些實施方式中,共軛物墊包含纖維素或玻璃纖維。在一些實施方式中,吸收墊包含纖維素或玻璃纖維。
本文所提供之裝置可進一步包含樣本墊。在一些實施方式中,樣本墊包含纖維素或玻璃纖維。
應瞭解,本發明之各種實施方式可由上述部件中之一或多者形成。本發明之上述方面及部件可以任何適合的組合使用,因此本發明就此而言不受限制。亦應瞭解,圖式說明可併入至本發明之各種實施方式中的各種組件及部件。為了簡化,一些圖式可說明超過一種視情況存在之部件或組件。然而,本發明不限於圖式中所揭示的特定實施方式。應認識到,本發明涵蓋可包括任一圖式中所說明之組件之僅一部分的實施方式,且/或亦可涵蓋不同圖示中所說明之組合組件的實施方式。III. 功能性 C1-INH 之測量
本文亦提供用於偵測及/或定量樣本中之功能性C1-酯酶抑制子(fC1-INH)之方法。本文所揭示之分析方法涉及使用fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及捕捉劑,其均揭示於本文中。fC1-INH結合劑及C1-INH試劑中之一者與結合捕捉劑之銜接劑共軛。fC1-INH結合劑、C1-INH試劑及捕捉劑中之一者與可偵測標記共軛。可偵測標記及銜接劑與不同試劑共軛。
為了進行本文所揭示之分析方法,可在允許形成包含fC1-INH、fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及捕捉劑(經由與銜接劑(其與fC1-INH結合劑或C1-INH結合劑共軛)之相互作用)之複合物的條件下使疑似含有fC1-INH之樣本與fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及捕捉劑接觸。樣本中fC1-INH之存在或量可藉由測量自可偵測標記釋放之信號來偵測及/或定量,該可偵測標記可與fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及捕捉劑中之任一者共軛。
在一些實例中,樣本及fC1-INH結合劑(例如FXIIa)可首先培育適合之時間段(例如至少5分鐘,諸如5-10分鐘)以允許形成fC1-INH/FXIIa複合物。複合物可隨後與C1-INH結合劑,諸如結合至C1-INH之抗體一起培育,以形成三組分複合物,該三組分複合物可隨後與結合銜接劑(其與fC1-INH結合劑或C1-INH結合劑共軛)之捕捉劑接觸。可測量自與最終複合物中之一種組分共軛之可偵測標記釋放的信號,以測定樣本中fC1-INH之存在/不存在及/或量。
在一些實施方式中,本發明提供用於偵測及/或定量fC1-INH的方法,其包含(i)使樣本與fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及捕捉劑接觸以形成複合物,其中fC1-INH結合劑及C1-INH試劑中之一者與結合捕捉劑之銜接劑共軛,且其中fC1-INH結合劑、C1-INH試劑及捕捉劑中之一者與可偵測標記共軛,可偵測標記及銜接劑與不同試劑共軛;及(ii)偵測自複合物中之可偵測標記釋放之信號;其中自複合物中之可偵測標記釋放之信號的存在指示樣本中之fC1-INH的存在。
本文所描述之方法涵蓋以任何適合之方式固定在任何適合之受質上的捕捉劑。受質之實例包括但不限於珠粒、粒子、載玻片及多孔盤。在一些實施方式中,捕捉劑共價結合至受質。在一些實施方式中,捕捉劑非共價結合至受質。在一些實施方式中,捕捉劑例如經由連接子間接結合至受質。
在一些實施方式中,本文所揭示之分析方法可使用本文所揭示之LFA裝置中之任一者進行。舉例而言,可將樣本置放於取樣口620
中(圖4)且可將緩衝溶液置放於緩衝液口610
中。取樣口620
可與第2區域220對準。緩衝液口610可與第1區域210
對準。緩衝溶液將自例如第1區域210
朝向第2區域220
及第三區域230
流動,以及使樣本及fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及/或捕捉劑固定在第1區域210
及第2區域220
上。當緩衝溶液穿過第1區域210
、第2區域220
及第3區域230
時,此允許樣本與fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及捕捉劑接觸,以使得可形成包含樣本中之fC1-INH、fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑及捕捉劑之複合物。樣本中之fC1-INH之存在或量可藉由測量自可偵測標記(其與複合物中之一種組分共軛)釋放之信號來測定。
在一個實例中,描述用LFA裝置(其包含FXIIa-生物素及與銪粒子共軛之抗C1-INH抗體,例如經裝配為如圖 4
中所示之裝置)偵測及/或定量fC1-INH的方法僅出於說明之目的。在此實例中,與銪粒子共軛之抗C1-INH抗體充當與偵測標記共軛之C1-INH結合劑,且抗C1-INH抗體共軛物固定在第一區域210
中。與生物素共軛之FXIIa充當與銜接劑共軛之fC1-INH結合劑,且FXIIa-生物素固定於第二區域220
中。為了偵測樣本中fC1-INH之存在,將樣本經由取樣口620
置放於共軛物墊200
上之第二區域220
。當樣本接觸第二區域220
中之FXIIa-生物素時,樣本中之fC1-INH結合至FXIIa,藉此形成FXIIa-生物素:fC1-INH複合物。
如本文所用,術語「接觸」係指樣本與一或多種結合劑暴露持續適合時間段,該時間段足以在樣本中形成與fC1-INH及/或C1-INH之複合物(若存在)。在一些實施方式中,樣本及/或緩衝液經由毛細作用接觸一或多種結合劑,其中樣本及/或緩衝液在共軛物墊或膜上移動。
緩衝液可經由緩衝液口610
置放於共軛物墊200
上之第一區域210
。在將樣本置放於第二區域220
之後的任何時間,可將緩衝液置放於第一區域210
,例如可在將樣本置放於裝置中之後至少5分鐘之後置放緩衝液。緩衝液溶解抗C1-INH抗體共軛物,且經由毛細作用使其沿著共軛物墊200
自第一區域210
朝向膜300
移動。當緩衝液到達第二區域220
時,其接觸FXIIa-生物素:fC1-INH複合物,且緩衝液中之抗C1-INH抗體共軛物結合至與FXIIa-生物素複合之fC1-INH,藉此形成「夾層」。在此實例中,fC1-INH夾層因此包含結合至fC1-INH的與生物素共軛之FXIIa,其藉由與銪粒子共軛之抗C1-INH抗體而結合。
包含fC1-INH夾層之緩衝液繼續向上移動共軛物墊200
至膜300
,鏈黴抗生物素蛋白在第三區域230
(例如測試線)固定在該膜上。在此實例中,鏈黴抗生物素蛋白充當結合至銜接劑,特異性為生物素之捕捉劑。當緩衝液與第三區域230
之鏈黴抗生物素蛋白接觸時,fC1-INH夾層中之生物素結合至第三區域230
之鏈黴抗生物素蛋白,藉此捕捉fC1-INH夾層。隨後基於來自第三區域230
之銪粒子的信號之存在經由測試窗口630
偵測樣本中fC1-INH之存在。fC1-INH夾層之偵測不限於經由銪粒子偵測。舉例而言,fC1-INH之存在可經由顏色或pH之可偵測變化來偵測。若樣本中不存在fC1-INH,則未形成fC1-INH夾層,且未在第三區域230
偵測到信號。
在移動至第三區域230
中之後,樣本繼續向上移動膜300
至吸收墊400
中,其充當芯體以將樣本向上拉動,因此自第三區域230
移除任何背景材料。
本文所提供之方法涵蓋偵測及/或定量各種樣本中之fC1-INH或其缺乏。在一些實施方式中,樣本為獲自個體之生物樣本。在一些實施方式中,生物樣本為血清樣本、血漿樣本或血液樣本。在一些實施方式中,樣本係獲自疑似患有fC1-INH缺乏介導之病症(例如HAE)或處於該病症風險下之個體。
在一些實施方式中,生物樣本為獲自個體之血液樣本,例如全血。全血包含紅血球、白血球、血小板及血漿。在一些實施方式中,可自血管(例如毛細血管、靜脈及動脈)收集血液樣本。在一些實施方式中,血液樣本可藉由產生血液滴之手指針刺而獲得。在一些實施方式中,在獲得血液樣本之後,在2-8℃下處理血液樣本。對於血漿或血清製備,可在藉由離心進行血液收集之後製備血漿或血清。在分析之前,血漿及血清樣本可儲存在-80℃下。
在一些實施方式中,本文所描述之方法及/或裝置可進一步包含對照線。如一般熟習此項技術者將理解,可使用對照線以確保方法及/或裝置如預期起作用,例如偵測fC1-INH。 IV. LFA 方法及裝置之應用
本文所描述之方法及裝置可應用於疾病之評價,例如疾病之診斷或預後。評價可包括鑑別個體係處於如本文所描述之疾病,例如fC1-INH缺乏介導之病症的風險下還是患有該疾病。評價亦可包括監測疾病之治療,諸如評價治療fC1-INH缺乏介導之病症之有效性。fC1-INH缺乏介導之病症的實例包括但不限於遺傳性血管性水腫(例如I型及/或II型HAE)、獲得性血管性水腫(例如I型及/或II型AAE)、C1-INH缺乏相關免疫疾病(例如全身性紅斑狼瘡症(SLE)及C1-INH缺乏相關癌症(例如淋巴瘤))。
在一些實施方式中,本文所用之方法及裝置用於評價個體是否患有遺傳性血管性水腫或處於遺傳性血管性水腫之風險。一般而言,存在不同類型之遺傳性血管性水腫,其展現類似發炎反應但其病因不同。舉例而言,1型HAE與功能性但低量之C1-INH相關,而II型HAE與以正常濃度存在之非功能性C1-INH相關。A. 診斷
在一些實施方式中,本文所描述之方法及裝置用於測定自個體(例如疑似患有fC1-INH缺乏介導之病症,諸如HAE之人類患者)收集之生物樣本(例如血清樣本或血漿樣本或血液樣本)中的fC1-INH之量。隨後將fC1-INH量與參考值相比,以確定個體是否患有fC1-INH缺乏介導之病症或處於該疾病風險下。參考值可為能夠結合至如本文所描述之fC1-INH結合劑(例如FXIIa)的fC1-INH之對照量。在一些實施方式中,對照量為能夠結合至fC1-INH結合劑之對照樣本中fC1-INH之量。在一些實施方式中,對照樣本獲自健康個體或健康個體群體。如本文所用,健康個體為在測量fC1-INH之量時明顯沒有fC1-INH缺乏介導之病症或無疾病病史的個體。
對照量亦可為預定量。如此預定量可表示不患有fC1-INH缺乏介導之病症或不處於該病症風險下的個體群體中的fC1-INH之量。預定量可呈多種形式。舉例而言,其可為單個閾值,諸如中值或平均值。在一些實施方式中,如此預定量可基於比較組確立,諸如其中一個經界定組已知為患有目標疾病而另一經界定組已知為不患有目標疾病。替代地,預定量可為一範圍,例如表示預定百分點內之對照群體中的fC1-INH之量之範圍。
如本文所描述之對照量可藉由各種方法測定。在一些實施方式中,可藉由執行已知方法獲得對照量。在一些實施方式中,可藉由進行用於確定來自個體之樣本中的fC1-INH之量的相同分析獲得對照量。在一些實施方式中,可藉由執行本文所描述之方法獲得對照量。在一些實施方式中,可用本文所描述之裝置獲得對照量。在一些實施方式中,可自對照群體之成員獲得對照量,且結果可藉由例如計算程式分析,以獲得表示對照群體中fC1-INH之量的對照量(預定量)。
藉由將自個體獲得之樣本中能夠結合至fC1-INH結合劑之fC1-INH的量與如本文所描述之參考值進行比較,可以確定個體是否患有fC1-INH缺乏介導之疾病(例如HAE)或處於該疾病風險下。舉例而言,若結合至個體之fC1-INH結合劑的fC1-INH之量偏離參考值(例如相較於參考值降低),則候選個體可鑑別為患有fC1-INH缺乏介導之疾病(例如HAE)或處於該疾病風險下。本文所揭示之分析可用於預定表示正常個體中之fC1-INH之閾值。如此閾值可用於確定個體是否患有fC1-INH缺乏介導之病症(例如HAE)或處於該病症風險下。在一些情況下,個體中fC1-INH之量低於閾值可指示疾病風險或發生率。
如本文所用,「降低之量或低於參考值之量」意謂結合至fC1-INH結合劑的fC1-INH之量低於參考值,諸如預定臨限值或對照樣本中結合至fC1-INH結合劑的fC1-INH之量。
結合至fC1-INH結合劑的fC1-INH之降低之量包括,即例如比參考值低50%、60%、70%、80%、90%、100%、150%、200%、300%、400%、500%或更大的fC1-INH量。結合至fC1-INH結合劑的fC1-INH之降低之量亦包括,將非零狀態(例如結合至樣本中fC1-INH結合劑的fC1-INH有一些或可偵測)之現象減小至零狀態(例如結合至樣本中fC1-INH結合劑的fC1-INH並沒有或不可偵測)。
在一些實施方式中,個體為具有fC1-INH缺乏介導之疾病(例如本文所揭示之彼等,諸如HAE)之症狀的人類患者。舉例而言,個體具有水腫、腫脹(其中該腫脹完全或主要為外周);蕁麻疹;發紅、疼痛及在不存在感染跡象下之腫脹;非組織胺介導之水腫、腫脹復發性發作或其組合。在一些實施方式中,在收集樣本時個體不具有fC1-INH缺乏介導之疾病之症狀、不具有fC1-INH缺乏介導之疾病之症狀之病史、或不具有諸如HAE之fC1-INH缺乏介導之疾病之病史。在一些實施方式中,個體對抗組織胺療法、皮質類固醇療法或兩者具有抗性。
fC1-INH缺乏介導之疾病的實例包括但不限於:非組織胺依賴性特發性血管性水腫、類風濕性關節炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、狼瘡、阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、敗血性休克、燒傷、腦局部缺血/再灌注損傷、腦水腫、糖尿病性視網膜病變、糖尿病性腎病變、黃斑水腫、血管炎、動脈或靜脈血栓、與心室輔助裝置或血管支架相關之血栓、肝素誘導之血小板減少伴血栓、血栓性疾病,及冠狀動脈心臟病伴不穩定型心絞痛、水腫、眼病、痛風、腸道疾病、口腔黏膜炎、神經性病變疼痛、發炎性疼痛、脊骨狹窄-退行性脊柱疾病、手術後腸阻塞、主動脈瘤、骨關節炎、遺傳性血管性水腫、肺栓塞、中風、頭部創傷或瘤周腦水腫、敗血症、急性中大腦動脈(MCA)局部缺血事件(中風)、再狹窄(例如血管成形術後)、全身性紅斑狼瘡腎炎、自體免疫疾病、發炎性疾病、心血管疾病、神經疾病、與蛋白摺疊異常相關之疾病、與血管產生相關之疾病、高血壓腎病變及糖尿病性腎病變、過敏性及呼吸道疾病(例如嚴重過敏、哮喘、慢性阻塞性肺病、急性呼吸窘迫症候群、囊腫性纖維化、持續性鼻炎)及組織損傷(例如燒傷或化學性傷害)。B. 評價治療有效性
亦可應用本文所描述之方法及裝置以評價治療fC1-INH缺乏介導之疾病(例如HAE)之有效性。舉例而言,可在治療之前及之後或在治療過程期間自進行治療之個體收集多個生物樣本(例如血清、血漿或血液樣本)。fC1-INH之量可藉由本文所描述之任何方法測量。若在治療之後或在治療過程期間fC1-INH之量增加(後續收集樣本中的fC1-INH之量與較早收集樣本中的量相比),保持不變或增加,則其指示該治療為有效的。
若個體經鑑別對治療無反應,則向所鑑別之個體投予更高劑量及/或給藥頻率之治療劑。在一些實施方式中,在經鑑別為對治療有反應或不需要進一步治療之個體中,保持、降低或停止治療劑之劑量或給藥頻率。替代地,可將不同治療應用於經發現對第一治療無反應之個體。
治療劑包括但不限於激肽釋放素結合劑、緩激肽B2受體拮抗劑、C1-INH置換劑、DX-2930及DX88(參見例如PCT公開案第WO 2014/113701號,其以全文引用之方式併入本文中)。實 施 例
為了可更充分理解本文中所描述之裝置及方法,闡述以下實施例。提供本申請案中所描述之實施例以說明本文所提供之方法及組成物,且不應理解為以任何方式限制其範疇。實施例 1 : 製備用於偵測及 / 或定量功能性 C1- 酯酶抑制子( fC1-INH ) 之側流分析 ( LFA ) 裝置 膜之剝離
FRONTLINE HR™ (BioDot)用於剝離膜。用10個循環的洗滌緩衝液(0.05% BIO-TERGE®
(Stepan公司)於diH2
O中)洗滌前線,且對準以使得測試線自膜底部分配11 mm。清空前線且用含0.5 mg/mL聚鏈黴抗生物素蛋白之10 mM磷酸鹽,pH 7.3、0.5%蔗糖預致敏。將聚鏈黴抗生物素蛋白之測試線剝離於膜上(參見例如圖3A
中之膜300
上的第三區域230
). 隨後,標記膜且在40℃下乾燥30分鐘。在剝離之後用10個循環的洗滌緩衝液洗滌前線。用於剝離膜之組分顯示於表1中。表 1.
用於膜之剝離的組分.
共軛物墊之剝離
組分 | 級別 | 供應商 | 零件編號 | 每毫升量 |
0.5 M磷酸鈉,pH 7.3 | N/A | DCN | 10026 | 可變 |
聚鏈黴抗生物素蛋白 | N/A | Biotez | PolyStrept R | |
蔗糖 | ACS | Sigma | S5500 | 5 mg |
水(diH2O) | ≥18 M ohm | Thermo | ≥18 M ohm | QS至最終體積 |
0.05% BIO-TERGE® | N/A | DCN | N/A | N/A |
膜 (25 mm x 300 mm) | CN95 | Sartorius | 1UN95ER1000025NTB | N/A |
前線剝離機 | N/A | BioDot | XYZ 3210 | N/A |
大箔包 | IMPAK | 125MF518 | 大箔包 | 大箔包 |
乾燥劑,0.5 g | IMPAK | 39SG03 | 乾燥劑 ,0.5 g | 乾燥劑 ,0.5 g |
使用FRONTLINE HR™ (BioDot)將抗C1-INH Eu粒子共軛物及FXIIa-生物素剝離於共軛墊(Ahlstrom)上。在剝離共軛物墊之前,將抗C1-INH Eu粒子共軛物稀釋至0.04 w/v於Eu乳膠稀釋劑中,且將FXIIa-生物素稀釋至2.4 μM於FXIIa-生物素稀釋劑中。隨後,用10個循環的洗滌緩衝液(0.05% BIO-TERGE®
(Stepan公司)於diH2
O中)洗滌前線。對準前線以使得抗C1-INH Eu粒子共軛物自共軛物墊底部剝離15 mm,且FXIIa-生物素共軛物分別以10及2.5 μL/cm之速率自共軛物墊頂部剝離8 mm。抗C1-INH Eu粒子共軛物及FXIIa-生物素共軛物之位置分別與定製SLA外殼卡匣中之緩衝液口及取樣口對準。
清空前線且用任一共軛物預致敏。將共軛物剝離於共軛物墊上,其隨後經標記且在40℃下乾燥30分鐘。將共軛物墊密封且乾燥。在剝離之後用10個循環的洗滌緩衝液洗滌前線。用於剝離共軛物墊之組分顯示於表2中。Eu乳膠稀釋劑及FXIIa-生物素稀釋劑之組分分別顯示於表3及表4中。表 2.
用於共軛物墊之剝離的組分
表 3.
用於Eu乳膠稀釋劑之組分
表 4.
用於FXIIa-生物素稀釋劑之組分
製備抗 C1-INH Eu 粒子共軛物
組分 | 級別 | 供應商 | 零件編號 |
共軛物墊 (42 mm x 300 mm) | 玻璃纖維 | Ahlstrom | 8951 |
抗C1-INH Eu粒子 | N/A | DCN | 如在NBR 715-001中製備 |
FXIIa-生物素 | N/A | Enzyme Research Labs | HFXIIa生物素3790 |
FXIIa-生物素稀釋劑: 10 mM Tris pH 8,0.1% Tween-20,2%酪蛋白,10%蔗糖,4%繭蜜糖,0.25%綠色食用色素 | N/A | DCN | N/A |
Eu乳膠稀釋劑: 10 mM Tris pH 8,0.1% Tween-20,2%酪蛋白,10%蔗糖,4%繭蜜糖 | N/A | DCN | N/A |
前線剝離機 | N/A | BioDot | XYZ 3210 |
大箔包 | N/A | IMPAK | 125MF518 |
乾燥劑,0.5 g | N/A | IMPAK | 39SG03 |
組分 | 級別 | 供應商 | 零件編號 | 每毫升量 |
Tris-HCl | 試劑 | Sigma | T3253 | N/A |
6%酪蛋白於50 mM Tris,pH 8,5中,7天固化 | N/A | DCN | 如21NOV21085M製備 | N/A |
Tween-20 | BioXtra | Sigma | P7949 | 10 μL |
蔗糖 | ACS | Sigma | S5500 | 100 mg |
繭蜜糖 | ACS | Fisher | BP2687100 | N/A |
水(diH2O) | ≥18 M ohm | Thermo | ≥18 M ohm | QS至最終體積 |
組分 | 級別 | 供應商 | 零件編號 | 每毫升量 |
Tris-HCl | 試劑 | Sigma | T3253 | N/A |
6%酪蛋白於50 mM Tris,pH 8,5中,7-天固化 | N/A | DCN | 如21NOV21085M製備 | N/A |
Tween-20 | BioXtra | Sigma | P7949 | 10 μL |
蔗糖 | ACS | Sigma | S5500 | 100 mg |
繭蜜糖 | ACS | Fisher | BP2687100 | N/A |
綠色食用色素 | 食品級 | Vons | N/A | 2.5 μL |
水(diH2O) | ≥18 M ohm | Thermo | ≥18 M ohm | QS至最終體積 |
為了製備抗C1-INH Eu粒子共軛物,使用製造商的方案將0.1 mg抗C1-INH抗體經由ZEBA™旋轉柱(Thermo Fisher)交換至50 mM硼酸鹽,pH 8中。藉由吸光度(A280
,1 mm,1 OD=1.4 mg/mL)測定抗體濃度。將儲備乳膠旋轉10分鐘,且隨後使用微尖超音波發生器(設置25)音波處理10-15秒。儲備乳膠溶液(10%)稀釋至1%於0.1 M MES,pH 6.5中,且在17,000 g下經微量離心10分鐘。移除上清液,且使糰粒再懸浮於0.1 M MES,pH 6.5中,其中緩衝液體積等於乳膠之起始體積。如先前所描述對所得溶液進行音波處理、微量離心且再懸浮。
為了製備含15 mg/mL EDC之0.1 M MES緩衝液,使EDC平衡至室溫,且稱重。在用於製備抗C1-INH Eu粒子共軛物之10分鐘內製備EDC溶液。將EDC原料粉末乾化且在-20℃下冷凍以用於長期儲存。
為了製備含50 mg/mL磺酸基-NHS之0.1 M MES緩衝液,使磺酸基-NHS平衡至室溫,且稱重。在用於製備抗C1-INH Eu粒子共軛物之10分鐘內製備磺酸基-NHS溶液。藉由在振盪器上在1000 rpm下培育30分鐘來活化磺酸基-NHS溶液。在17,000 g下將溶液微量離心8分鐘。將糰粒再懸浮於50 mM硼酸鹽緩衝液中,渦旋且音波處理。緩衝液體積等於乳膠溶液之起始體積(600 μL)。隨後將溶液微量離心,再懸浮於硼酸鹽緩衝液(300 μL)中,渦旋且音波處理,如先前所描述。將活化粒子等分至50 μL/管中,且添加適量緩衝液及蛋白(例如20 μg蛋白(亦即抗體))以獲得粒子與蛋白之質量與質量比為20:1。在添加緩衝液及蛋白之後立即使管渦旋。
在室溫下在振盪器上在1,000 rpm下培育管2小時。在培育之後,添加10 μL/mL之1 M乙醇胺,且在室溫下在振盪器上在1,000 rpm下培育管30分鐘。將管在17,000 g下微量離心10分鐘,且使糰粒再懸浮於1%酪蛋白7天固化且在振盪下培育隔夜。在隔夜培育之後,將管微量離心,且將糰粒再懸浮於1%酪蛋白7天固化中,渦旋且音波處理。隨後將粒子共軛物剝離於如本文所描述之共軛物墊上。用於抗C1-INH Eu粒子共軛物之組分顯示於表5中。表 5.
抗C1-INH Eu粒子共軛物
將組分層壓於襯底卡上
組分 | 級別 | 供應商 | 零件編號 | 每毫升量 |
抗C1-INH抗體 | N/A | Shire | AbD28387.2 | 0.05 mg |
Eu乳膠粒子,0.2 μm | N/A | Thermo | 93470520010150 | 1 mg |
共軛物儲存稀釋劑:10 mM Tris pH 8,1%酪蛋白 | DCN | DCN | N/A | 1 mL |
0.1 M MES,pH 6.5 | N/A | DCN | N/A | N/A |
0.1 M硼酸鹽,pH 8 | N/A | DCN | 10061 | N/A |
水(diH2O) | ≥18 M ohm | Thermo | ≥18 M ohm | QS至最終體積 |
6%酪蛋白於50 mM Tris,pH 8.5中,7天固化 | N/A | DCN | 如21NOV2108SM製備 | N/A |
EDC | N/A | Thermo | 22980 | N/A |
NHS | N/A | Thermo | 24500 | N/A |
乙醇胺 | N/A | TCI | A0297 | N/A |
科學離心 | N/A | Thermo | Legend XTR | N/A |
微盤混合器 | N/A | Scilogex | 82200004SX | N/A |
超音波發生器 | N/A | Qsonica | Q55 | N/A |
為將組分層壓於80 mm長之襯底卡(DCN)上,使用直緣剃刀片自卡底部在39 mm處切割襯底貼紙。將襯底貼紙自卡頂部上之39 mm位置移除。膜自卡底部在39 mm處黏附至卡。吸收墊(Ahlstrom)黏附至卡頂部,使得墊與膜頂部重疊3 mm。移除剩餘襯底貼紙,且將共軛物墊黏附至卡底部以使得墊與膜底部重疊3 mm。組分及組分次序分別顯示於表6及表7中。表 6.
卡組分
表 7.
層壓組分次序、定向及位置
製備測試條帶
組分 | 材料 | 長度( mm ) | 自條帶底部之位置 ( mm ) |
膜 | Sartorius CN95 | 25 mm | 39 mm |
共軛物墊 | Ahlstrom 8951 | 42 mm | N/A |
芯吸墊 (吸收墊) | Ahlstrom 243 | 19 mm | 61 mm |
襯底卡 (支撐膜) | DCN P/N P12-651 | 80 mm | N/A |
測試線之位置 | 自膜底部邊緣11 mm(中心)。總計1 mm寬。 | ||
總條帶寬度 | 5.0 mm |
次序 # | 組分 | 定向 | 自卡底部之位置 | 膜上之重疊 |
1 | 經剝離之膜 | 膜側朝上,測試線最接近卡底部 | 39 mm | N/A |
2 | 吸收墊 | 光滑側朝下 | 61 mm | 3 mm |
3 | 經剝離之共軛墊 | Eu共軛物最接近卡底部 | N/A | 3 mm |
將卡置放於Kinematic Cutter(Kinematic)中,且將卡切割成5.0 mm寬條帶。丟棄短於5.0 mm之條帶或在剝離期間已用筆標記之條帶。將切割條帶置放於具有乾燥劑之箔包中。將箔包密封且儲存於乾燥箱中直至使用。實施例 2 : LFA 裝置用於偵測來自患者之血漿樣本中的功能性 C1- 酯酶抑制子 ( fC1-INH )之用途 .
為進行側流分析(LFA)以便測定fC1-INH濃度,將如以上實施例1中所描述製備之測試條帶置放於定製立體微影(SLA)卡匣中(參見例如圖 4
)。藉由將C1-INH參考標準物(批號TCP103,Shire,Takeda公司)外加至C1-INH耗竭之人類K3-EDTA血漿(由Shire,Takeda公司製備)來製備標準物及品質對照組。使用含有0 mU/mL至800 mU/mL經純化之C1-INH的對照樣本產生校準曲線。將對照樣本於C1-INH耗竭之培養基中以1:20稀釋。將樣本添加至取樣口中且培育5分鐘。將流動緩衝液(30 μL)添加至取樣口,讓樣本流至膜上且直至測試窗口。接著將流動緩衝液(150 μL)添加至緩衝液口,且再培育卡匣20分鐘。自卡匣移除測試條帶,且使用Axxin AX-2X螢光讀取器(Axxin)測量測試線區域之強度。卡匣中之測試條帶的影像顯示於圖 5
中。測試線區域之測量強度相對於C1-INH濃度作圖以產生圖 6
中所示之校準曲線,且得到R2
為0.97。
商業上獲得五十個正常K3-EDTA血漿樣本且在患者同意下使用來自SAHARA、III期、隨機、雙盲、安慰劑對照、雙期、三序列、部分交叉研究之五十個HAE血漿樣本,評價皮下注射投予2000 IU C1酯酶抑制子[人類]液體預防患有HAE之青少年及成年人之血管性水腫發作的功效及安全性。
接著利用圖 6
之校準曲線測定來自對照個體及患有遺傳性血管性水腫(HAE)之個體之血漿樣本中的fC1-INH濃度。簡言之,將來自個體之血漿樣本於C1-INH耗竭之血漿中以1:20稀釋。將經稀釋之血漿樣本(20 μL)添加至取樣口,且培育5分鐘。使用測試條帶測定之fC1-INH濃度在ELISA測定之濃度值之20%內。
如圖 8
中所示,相比於兩種方法中之健康對照組,HAE個體中之C1-INH量較低。所測量之平均C1-INH濃度,對於健康對照組為1345及1089 mU/mL,且對於顯色及LFA方法中之HAE個體,分別為275及163 mU/mL(表8)。該等測量之SEM及95%信賴區間提供於表8中。獲自兩種方法之所有HAE個體,包括在健康對照組範圍內具有C1-INH濃度之兩個HAE個體的C1-INH資料彼此相關(其中R2
為0.86)(圖 9
)。在顯色及LFA方法中,fC1INH經測量之正常對照組與HAE個體之間的平均比率分別為4.9及6.7。
基於來自對照個體及患有HAE之個體之樣本的診斷效能之接收者操作曲線(ROC)為0.98,其指示藉由LFA測定之C1-IHN濃度在對照組與HAE個體之間經精確鑑別(圖 7
)。ROC曲線指示496 mU/mL之C1-INH分界點產生94%之靈敏度(真陽性率)及96%之特異性(假陽性率)(圖 7
);假陰性及假陽性列於表9中。
如表8及圖 8-9
中所示,將使用LFA獲得之結果與使用顯色分析藉由ELISA之分析進行比較。簡言之,顯色方法直接測量fC1-INH量,涉及C1s裂解合成受質以形成有色化合物,其中降低之顏色強度展現C1s酶活性之抑制。顯色分析之精確度、準確度、線性及定量的上限及下限均合格。C1-INH蛋白(2000 IU C1酯酶抑制子[人類]液體用於注射,Shire,Takeda公司)用於製備三個品質對照組以及具有介於1000-1.95 mU/mL範圍內的十個標準點之標準曲線。使用標準曲線之最高點及最低點作為錨點。簡言之,在室溫(RT)下在聚丙烯盤中將K3-EDTA血漿樣本及參考蛋白與重組人類補體組分C1s蛋白(R&D System)一起預培育30分鐘。所形成之C1-INH及C1s複合物以1:5稀釋於分析緩衝液中且與受質溶液((具有苯甲硫醇酯基之合成受質,M-1300,Bachem)及5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB) #D-8000,Biosynth)混合,且使反應物在室溫下培育40分鐘。使用具有SoftMax Pro軟體之SpectraMax M5盤式讀取器在405 nm下記錄吸光度。表 8.
比較顯色分析與LFA以測定fC1-INH濃度之結果
表 9.
顯示對照組及HAE樣本之假陽性及陰性之結果.
使用顯色分析之fC1INH測量 | 使用LFA之fC1INH測量 | ||
正常對照組血漿樣本 | 平均值 | 1345 mU/mL | 1089 mU/mL |
n | 50 | 50 | |
SEM | 36 mU/mL | 38 mU/mL | |
95%信賴區間 | 1272 - 1418 mU/mL | 1011 - 1166 mU/mL | |
HAE血漿樣本 | 平均值 | 275 mU/mL | 163 mU/mL |
n | 50 | 50 | |
SEM | 39 mU/mL | 32 mU/mL | |
95%信賴區間 | 196 - 354 mU/mL | 100 - 227 mU/mL |
LFA fC1-INH分界點= 496mU/mL | ||
HAE樣本 | 正常對照組 | |
HAE之LFA陽性 | 47 | 2 |
HAE之LFA陰性 | 3 | 48 |
綜合而言,此等結果表明藉由LFA及ELISA(稱為顯色分析)在患者血漿樣本中偵測到類似的fC1-INH濃度。因此,本文所描述之LFA及測試條帶可為基於來自患者之血漿樣本中之fC1-INH量,用於鑑別患有HAE之患者的有效工具。使用本文所描述之LFA獲得之結果與用於評定fC1-INH之顯色分析之結果相關。
本文揭示之快速且靈敏的LFA方法及裝置可在醫師的辦公室實驗室中進行以便基於fC1INH量快速診斷HAE(例如I型及II型)。如此方法及裝置可引起由健康保險報銷之消耗品的成本低、定量結果中之可信度的程度高、醫師解釋資料容易及/或用於確認分析之需要程度低。在醫師的辦公室中診斷I型或II型HAE之如此快速分析可擴大HAE之篩檢且更快速地鑑別出新的HAE患者。目前,HAE之全球診斷率僅僅為40%;因此,未經診斷之患者具有高度未滿足之需求。常見裝置平台上之快速測試可用性可擴大HAE之辨識。另外,本文所揭示之fC1INH之快速測試可以及時方式在臨床配置中有助於監測HAE疾病進展或對療法之反應。
參考文獻
1. Maurer, M.等人(2018) The international WAO/EAACI guideline for the management of hereditary angioedema - the 2017 revision and update.World Allergy Organization Journal
2. Aabom, A.等人(2017) Complement factor C4 activation in patients with hereditary
angioedema.Clinical Biochemistry
50 (15), 816-821.
3. Bork, K.及Davis-Lorton, M. (2013) Overview of hereditary angioedema caused by C1-
inhibitor deficiency: assessment and clinical management.Eur Ann Allergy Clin Immunol
45
(1), 7-16.
4. Csuka, D.等人(2017) The role of the complement system in hereditary angioedema.Mol Immunol
89, 59-68.
5. Li, H.H.等人(2015) Comparison of chromogenic and ELISA functional C1 inhibitor tests in diagnosing hereditary angioedema.J Allergy Clin Immunol Pract
3 (2), 200-5.
6. Campbell, R.L., Wagner, D.B.及O'Connel, J.P. (1987). Solid phase assay with visual readout. 美國專利第4,703,017號.
7. Rosenstein, R.W.及Bloomster, T.G. (1989). Solid phase assay employing capillary flow. 美國專利第4,855,240號.
8. May, K., Prior, M.E.及Richards, I. (1997). Capillary immunoassay and device therefore comprising mobilizable particulate labelled reagents. 美國專利第5,622,871號.
9. O'Farrell, B. (2009). Evolution in Lateral Flow-Based Immunoassay Systems. 於: Wong, R.C. 及Tse, H.Y. (編).Lateral Flow Immunoassay
. Humana Press New York (NY).
10. Zahedi R, Aulak KS, Eldering E, Davis AE 3rd (1996). Characterization of C1 inhibitor-Ta. A dysfunctional C1INH with deletion of lysine 251.J Biol Chem
. 1996 Sep 27;271(39):24307-12實施例 3 : 競爭性結合分析展現用於偵測功能性 C1- 酯酶抑制子( fC1-INH ) 之側流分析 ( LFA ) 裝置之特異性 .
藉由在不同競爭性結合蛋白存在下進行分析來檢查如本文所描述之用於測定fC1-INH濃度的側流分析(LFA)裝置之特異性。樣本含有100 mU/mL經純化之C1-INH。不將競爭蛋白添加至對照樣本中。測量測試線區域之強度,且計算各樣本自對照反應之信號之減少百分比。對於具有競爭蛋白之樣本,相較於對照樣本,測試線(TL)強度降低40%至60%(表10)。藉由添加經生物素標記之BSA的TL強度降低55%,這證實在分析中未偵測到不相關蛋白(表10)。對於未標記之FXIIa及未標記之抗體,TL強度分別降低61%及48%,這表明FXIIa及具有C1-INH之抗體對信號產生之特異性(表10)。表 10.
特異性測試之結果
測試線 | 經標記之共軛物 | 經生物素化之結合蛋白 | 競爭蛋白 | 自 100 mU/mL 之信號 | TL 信號之減少 % |
AbD28387 | 中性抗生物素蛋白 -Eu | 50 nM FXIIa | 無 | 2400 | N/A |
3 μM BSA-生物素 | 1080 | 55% | |||
200 nM FXIIa (無生物素) | 930 | 61% | |||
900 nM AbD28387 | 1240 | 48% | |||
AbD28384 | 中性抗生物素蛋白 -Eu | 50 nM FXIIa | 無 | 3700 | N/A |
900 nM AbD28384 | 2150 | 42% |
使用已藉由加熱變性之C1-INH蛋白進一步測試偵測之特異性。藉由在40℃下加熱,TL強度未降低,但在53℃下加熱使TL強度降低至背景信號之強度(表11)。表 11.
用經熱處理之C1-INH進行之特異性測試的結果
測試線 | 經標記之共軛物 | 經生物素化之結合蛋白 | 熱處理 | 自血漿中之 1000 mU/mL 的信號 | 自 耗竭 血漿之信號 |
AbD28387 | 中性抗生物素蛋白-Eu | 50 nM FXIIa | 無 | 5410 | 360 |
40℃持續120 min | 7110 | 360 | |||
53℃持續120 min | 370 | 420 |
綜合而言,此等結果表明本文所描述之LFA及測試條帶對血漿樣本中的fC1-INH之偵測具有特異性。實施例 4 : 來自患者之血液樣本用以檢測 LFA 裝置中之功能性 C1- 酯酶抑制子( fC1-INH ) 之用途 .
簡言之,藉由根據一般技術者將顯而易見之實驗室實踐進行手指針刺來收集全血樣本。在擦拭掉第一血液液滴之後,在手指上形成第二血液液滴。取樣環用於接觸第二血液液滴,用血液填充環(圖 10A
)。隨後將環添加至容器,諸如SampleTainer®瓶(圖 10B
)。在環觸碰瓶之底部的情況下,將瓶搭扣且擰扭以使軸之底部斷裂至瓶子中。最後,置換瓶之蓋子且振盪瓶以混合。可將全血樣本添加至用於分析之裝置中之任一者中。實施例 5 : 試劑之選擇
選擇試劑用於本文所描述之方法及/或裝置。開發兩種初始偵測劑:採用與抗fC1-INH Fab共軛之銪奈米粒子之一種偵測劑(圖 11A
)及使用與抗fC1-INH Fab共軛之紅色金奈米粒子之一種偵測劑(圖 11B
)。
觀測到動態範圍之下端處之信號急劇減小,這表明系統達到最大信號。致力於降小關係之斜率,評價不同量之不同試劑。兩種試劑評定為測試系:以0.5 mg/mL之濃度印記之鏈黴抗生物素蛋白及鏈黴抗生物素蛋白之聚合型式(聚鏈黴抗生物素蛋白R)。發現與聚鏈黴抗生物素蛋白相比,鏈黴抗生物素蛋白具有較高信號,然而發現聚鏈黴抗生物素蛋白具有較高線性(圖 12
)。銪共軛物自0.1%經調整至0.05%固體。培育步驟中所用之FXIIa與C1-INH/CINRYZE®之濃度自1 pmol/μL降至0.5 pmol/μL,以降低分析之動態範圍。此產生具有可偵測範圍內之信號的分析。
亦評定測試線之不同試劑。簡言之,產生三個不同測試線:將人類經生物素化之FXIIa(B-HFXIIa)與鏈黴抗生物素蛋白混合,將B-HFXIIa與聚鏈黴抗生物素蛋白混合,且單獨HFXIIa(未經生物素化)。使用HFXIIa提供陽性、但低信號,而B-HFXIIa及鏈黴抗生物素蛋白與B-HPFXIIa及聚鏈黴抗生物素蛋白不具有任何明顯的陽性信號(圖 13
)。
另外,亦評定用於本文所描述之方法中的抗C1-INH抗體。在四種濃度(1200 mU/mL、600 mU/mL、100 mU/mL及9 mU/mL)下對四種銪共軛物(抗C1-INH Fab以及來自Sino Biological公司之抗C1-INH抗體RP01、RP02、MM03及MM06抗體)進行評價(圖 14
)。相較於Fab共軛物,使用抗體RP01、RP02、MM03及MM06中之每一者獲得之信號增強。選擇多株抗體RP02用於進一步分析。
亦評價緩衝液條件。舉例而言,具有無機緩衝劑(IBA)之緩衝液或具有有機緩衝劑(OBA)之緩衝液各自在7.0-9.5之不同pH下製備。具有IBA之緩衝液在pH範圍之較高端處(pH 9.5)表現得較好(例如信號較高),而具有OBA之緩衝液在生理pH範圍(約7-7.5)下表現得較好(例如信號較高) (圖 15
)。
最後,亦評價與抗C1-INH結合劑共軛之可偵測試劑。特定言之,使用銪共軛物或紅色金共軛物評定抗體RP02且與抗C1-INH Fab相比較。Fab共軛物不產生陽性信號,而具有紅色金共軛物之RP02抗體產生陽性信號(圖 16
)。
其他實施方式
本說明書中揭示之所有特徵可以任何組合形式組合。本說明書中揭示之各特徵可經用於相同、等效或類似目的之替代性特徵置換。因此,除非另外明確說明,否則所揭示之各特徵僅為一系列通用等效或類似特徵之一個實例。根據以上描述,熟習此項技術者可容易確定本文之揭示內容之基本特徵,且在不背離其精神及範疇之情況下可對本文之揭示內容作出各種改變及修改以使其適應多種用途及條件。因此,其他實施方式亦屬於申請專利範圍內。
等效物及範疇
熟習此項技術者將認識到或能夠僅使用常規實驗即可確定本文所描述之本文之揭示內容特定實施方式的許多等效物。本文之揭示內容之範疇不意欲受限於以上描述,而實際上如隨附申請專利範圍中所闡述。
在申請專利範圍中,除非相反地指示或另外自上下文顯而易見,否則諸如「一(a/an)」及「該」之冠詞可意謂一或大於一。除非相反地指示或另外自上下文中顯而易見,否則若一個、大於一個或所有群成員存在於、用於給定產物或方法中或以其他方式與給定產物或方法相關,則在該群組的一或多個成員之間包括「或」的申請專利範圍或描述視為滿足。本文之揭示內容包括群組中恰好一個成員存在於、用於給定產物或方法中或以其他方式與給定產物或方法相關之實施方式。本文之揭示內容包括大於一個或所有群組成員存在於、用於給定產物或方法中或以其他方式與給定產物或方法相關之實施方式。
此外,本文之揭示內容涵蓋所有變化、組合及排列,其中將來自所列的申請專利範圍中之一或多者之一或多個限制、要素、條款及描述性術語引入另一申請專利範圍中。舉例而言,依附於另一申請專利範圍之任何申請專利範圍可經修改以包括在依附於同一基本申請專利範圍之任何其他申請專利範圍中可見的一或多個限制。在要素以清單形式,例如呈馬庫什(Markush)群組形式呈現下,亦揭示要素之各子組,且可自該群組移除任何要素。應理解,一般而言,當本文之揭示內容或本文之揭示內容之方面稱為包含特定要素及/或特徵時,本文之揭示內容之某些實施方式或本文之揭示內容之方面由如此要素及/或特徵組成或基本上由其組成。出於簡單之目的,彼等實施方式尚未具體地以詞語闡述在本文中。亦應注意,術語「包含」及「含有」意欲係開放性的且允許包括額外要素或步驟。當給出範圍時,包括端點。此外,除非另外指示或另外從上下文及一般技術者的理解顯而易見,否則表示為範圍之值可在本文之揭示內容之不同實施方式中採用所述範圍內之任何特定值或子範圍,除非上下文另外明確規定,否則達到該範圍下限之單位的十分之一。
本申請案提及各種頒予的專利、公開的專利申請案、期刊文章及其他出版物,以上所有者均以引用的方式併入本文中。若任何併入之參考文獻與本說明書之間存在衝突,則應以本說明書為准。另外,本文之揭示內容之屬於先前技術之任何特定實施方式可明確地自申請專利範圍中之任何一或多項排除。因為如此實施方式被認為是一般熟習此項技術者所已知的,所以可對其進行排除,即使未在本文中明確地闡述該排除。本文之揭示內容之任何特定實施方式可出於任何原因自任何申請專利範圍排除,無論是否與先前技術之存在相關。
熟習此項技術者僅使用常規實驗將認識到或能夠確定本文所描述之特定實施方式之許多等效物。本文所描述之本發明實施方式之範疇不意欲受限於以上描述,而實際上如隨附申請專利範圍中所闡述。一般技術者將瞭解,可在不脫離如以下申請專利範圍所定義之本文之揭示內容之精神或範圍的情況下對本說明書進行各種改變及修改。
將參考以下圖式描述各種方面及實施方式。該等圖式未必按比例繪製。[ 圖 1]
為用於偵測及/或定量功能性C1-酯酶抑制子(fC1-INH)之例示性側流分析(LFA)裝置100
之示意性描繪。根據本文所描述技術之一些實施方式,LFA裝置100
包含共軛物墊200
、膜300
、及視情況存在之吸收墊400
、及支撐構件500
。[ 圖 2]
為例示性LFA裝置100
之示意性描繪,根據本文所描述技術之一些實施方式,其顯示各組件之例示性尺寸及兩個相鄰組件之間的例示性重疊尺寸。[ 圖 3A]
為用於偵測及/或定量fC1-INH之例示性LFA裝置100
之俯視圖的示意性描繪。根據本文所描述技術之一些實施方式,LFA裝置100
包含共軛物墊200
,其包含第一區域210
及第二區域220
;以及膜300
,其包含第三區域230
。[ 圖 3B]
為用於偵測及/或定量fC1-INH之例示性LFA裝置100
之俯視圖的示意性描繪。根據本文所描述技術之一些實施方式,LFA裝置100
包含共軛物墊200
,其包含與用於置放樣本之第五區域250
重疊之第一區域210
及與用於置放緩衝液之第四區域240
重疊之第二區域220
,以及包含第三區域230
之膜300
。[ 圖 4]
為用於偵測及/或定量fC1-INH之例示性LFA裝置100
之俯視圖的示意性描繪。根據本文所描述技術之一些實施方式,LFA裝置100
進一步包含外殼600
,其形成有緩衝液口610
、取樣口620
及測試窗口630
。亦指示第一區域210
、第二區域220
、第三區域230
、共軛物墊200
、膜300
、及吸收墊400
。[ 圖 5]
為根據本文所描述技術之一些實施方式的例示性LFA裝置之影像。[ 圖 6]
圖示使用本文所揭示之LFA裝置,自稀釋入C1-INH耗竭之血漿中之功能性C1-酯酶抑制子(fC1-INH)產生之校準曲線。[ 圖 7]
為使用本文所揭示之LFA裝置,基於來自對照個體及患有遺傳性血管性水腫(HAE)之個體之樣本的診斷效能之接收者操作曲線(ROC)圖。[ 圖 8]
圖示使用顯色分析(Chrom)或本文所描述之LFA裝置(LFA)之正常個體(正常(Normal))及患有遺傳性血管性水腫(HAE)之個體中之功能性C1-INH之量。[ 圖 9]
圖示如藉由顯色分析所測定與本文所描述之LFA裝置所測定之患有遺傳性血管性水腫(HAE)之個體中之功能性C1-INH之量之間的相關性。[ 圖 10A]
為顯示使用取樣環及手指針刺收集血液樣本的示意圖。[ 圖 10B]
為顯示將圖10A之填充有血液的取樣環添加至SampleTainer®瓶中之示意圖。[ 圖 11A]
為顯示在指定條件下使用與銪奈米粒子共軛之抗C1-INH Fab的圖。[ 圖 11B]
為顯示在指定條件下使用與紅色金奈米粒子共軛之抗C1-INH Fab的圖。[ 圖 12]
為顯示來自在測試線中作為捕捉劑之聚鏈黴抗生物素蛋白R相比於鏈黴抗生物素蛋白之結果的圖。R2
值指示與模型線(點線)之擬合。[ 圖 13]
為顯示來自在測試線中使用指定試劑作為捕捉劑之結果的圖。[ 圖 14]
為顯示來自指示抗C1-INH Fab或抗體殖株作為偵測劑之結果的圖。對於各抗體,條柱係指偵測劑之濃度,自左至右,1200 mU/mL,600 mU/mL,100 mU/mL,0 mU/mL。[ 圖 15]
為顯示在不同pH下使用含有無機阻斷劑(IBA)或有機阻斷劑(OBA)之緩衝液之結果的圖。[ 圖 16]
為顯示使用鏈黴抗生物素蛋白測試線(0.75 mg/mL鏈黴抗生物素蛋白)及指定濃度之C1-INH/CINRYZE®之結果的圖。[ 圖 17]
為本文所描述之例示性方法之示意圖。捕捉蛋白(諸如鏈黴抗生物素蛋白)與其對(例如生物素)相互作用,該對與捕捉劑共軛(例如經生物素化之FXIIa),該捕捉劑結合至功能性C1INH(fC1-INH,CINRYZE®)。使用偵測劑,諸如與金粒子共軛之抗C1-INH抗體(抗C1-INH Au共軛物)來偵測結合之fC1-INH。
100:LFA裝置
200:共軛物墊
300:膜
400:吸收墊
500:支撐構件
Claims (55)
- 一種用於偵測及/或定量功能性C1-酯酶抑制子(fC1-INH)之裝置,該裝置包含: (i)共軛物墊,其包含第一區域及第二區域,第一試劑及第二試劑分別固定於該第一區域及該第二區域上,及 (ii)膜,其與該共軛物墊連通,其中該膜包含第三區域,第三試劑固定於該第三區域上, 其中該第一試劑為功能性C1抑制子(fC1-INH)結合劑或C1抑制子(C1-INH)結合劑; 其中該第二試劑及該第三試劑各自選自由以下者組成之群:功能性C1抑制子(fC1-INH)結合劑、C1抑制子(C1-INH)結合劑、及捕捉劑,該第一試劑、該第二試劑、及該第三試劑彼此不同; 其中該fC1-INH結合劑、該C1-INH結合劑及該捕捉劑中之一者與可偵測標記共軛,且該fC1-INH結合劑及該C1-INH結合劑中之一者與銜接劑(docking agent)共軛,該可偵測標記及該銜接劑與不同試劑共軛;且 其中該共軛物墊進一步包含用於置放生物樣本之第四區域,該生物樣本以該第一區域、該第二區域、及該第三區域之次序流動穿過該裝置。
- 如請求項1之裝置,其中該第一試劑、該第二試劑、及該第三試劑分別為該C1-INH結合劑、該fC1-INH結合劑、及該捕捉劑,或其中該第一試劑、該第二試劑、及該第三試劑分別為該fC1-INH結合劑、該C1-INH結合劑、及該捕捉劑。
- 如請求項1或請求項2之裝置,其中該第一試劑與可偵測標記共軛,該第二試劑與銜接劑共軛,或其中該第一試劑與銜接劑共軛,該第二試劑與可偵測標記共軛。
- 如請求項1至3中任一項之裝置,其中該fC1-INH結合劑為因子XII之活性形式(FXIIa)。
- 如請求項1至4中任一項之裝置,其中該C1-INH結合劑為結合C1-INH之抗體。
- 如請求項1至5中任一項之裝置,其中該銜接劑及該捕捉劑為受體-配位體對之成員。
- 如請求項6之裝置,其中該受體-配位體對包含生物素及抗生物素蛋白。
- 如請求項7之裝置,其中該銜接劑為生物素且該捕捉劑為抗生物素蛋白。
- 如請求項8之裝置,其中該抗生物素蛋白為鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)或聚鏈黴抗生物素蛋白。
- 如請求項1至9中任一項之裝置,其中該可偵測標記係選自由以下者組成之群:銪、膠體金、藻紅素、螢光素、玫瑰紅(rhodamine)、綠色螢光蛋白、量子點、及發色團。
- 如請求項10之裝置,其中該可偵測標記為銪。
- 如請求項10之裝置,其中該可偵測標記為膠體金。
- 如請求項1至12中任一項之裝置,其中該可偵測標記連接至乳膠粒子。
- 如請求項1至13中任一項之裝置,其中該第四區域與該第二區域重疊。
- 如請求項1至14中任一項之裝置,其中該第一試劑為位於該第一區域之該C1-INH結合劑,該第二試劑為位於該第二區域之該fC1-INH結合劑,且該第三試劑為位於該第三區域之該捕捉劑。
- 如請求項15之裝置,其中C1-INH結合劑為與該可偵測標記共軛之結合至C1-INH的抗體,該fC1-INH結合劑為與該銜接劑共軛之FXIIa,該銜接劑為生物素,且該捕捉劑為抗生物素蛋白,其視情況為鏈黴抗生物素蛋白或聚鏈黴抗生物素蛋白。
- 如請求項15或請求項16之裝置,其中用於置放該生物樣本之該第四區域與該第二區域重疊,該fC1-INH結合劑位於該第二區域上。
- 如請求項1至17中任一項之裝置,其進一步包含與該膜連通之吸收墊,其中該吸收墊及該共軛物墊藉由該膜分隔開。
- 如請求項1至18中任一項之裝置,其進一步包含支撐構件,該共軛物墊、該膜、及/或該吸收墊安裝在該支撐構件上。
- 如請求項1至19中任一項之裝置,其進一步包含外殼。
- 如請求項20之裝置,其中該外殼包含形成緩衝液口之第一開口、形成取樣口之第二開口、及形成測試窗口之第三開口。
- 如請求項21之裝置,其中該取樣口位於該緩衝液口與該測試窗口之間。
- 如請求項21或請求項22之裝置,其中該緩衝液口與該第一區域對準,該C1-INH結合劑位於該第一區域上。
- 如請求項21至23中任一項之裝置,其中該取樣口與該第二區域對準,該fC1-INH結合劑位於該第二區域上。
- 如請求項21至24中任一項之裝置,其中該測試窗口與該第三區域對準,該捕捉劑位於該第三區域上。
- 一種用於偵測及/或定量樣本中之功能性C1-酯酶抑制子(fC1-INH)之方法,該方法包含: (i)將樣本置放於如請求項21至25中任一項之裝置之該取樣口中, (ii)將緩衝液置放於該裝置中的該緩衝液口中,其中該緩衝液以該第一區域往該第三區域的方向流動; (iii)檢查該裝置中之該測試窗口處的信號,及 (iv)基於該測試窗口處的該信號之存在或強度測定該樣本中fC1-INH之存在或測量該樣本中fC1-INH之量。
- 如請求項26之方法,其中步驟(ii)在步驟(i)之後至少5分鐘之後進行,且其中該fC1-INH結合劑固定在與該取樣口對準的該第二區域。
- 如請求項26及請求項27之方法,其中該樣本為獲自個體之生物樣本。
- 如請求項28之方法,其中該生物樣本為血清樣本、血漿樣本、或血液樣本。
- 如請求項26至29中任一項之方法,其中該個體為疑似患有fC1-INH缺乏介導之病症或處於該病症風險下的人類患者。
- 如請求項30之方法,其中該fC1-INH缺乏介導之病症係選自由以下者組成之群:遺傳性血管性水腫(HAE)、獲得性血管性水腫(AAE)、及C1-INH相關免疫疾病。
- 如請求項31之方法,其中該個體具有HAE之症狀。
- 如請求項31或32之方法,其中該HAE為I型HAE或II型HAE。
- 如請求項31之方法,其中該個體不具有HAE之症狀、不具有HAE之症狀之病史、或不具有HAE之病史。
- 一種用於偵測及/或定量樣本中之功能性C1-酯酶抑制子(fC1-INH)之方法,該方法包含: (i)使樣本與fC1-INH結合劑、C1-INH結合劑、及捕捉劑接觸以形成複合物,其中該fC1-INH結合劑及C1-INH試劑中之一者與結合該捕捉劑之銜接劑共軛,且其中該fC1-INH結合劑、該C1-INH試劑、及該捕捉劑中之一者與可偵測標記共軛,該可偵測標記及該銜接劑與不同試劑共軛;及 (ii)偵測自該複合物中之該可偵測標記釋放之信號;其中自該複合物中之該可偵測標記釋放之該信號的存在指示該樣本中存在fC1-INH。
- 如請求項35之方法,其中步驟(i)係藉由以下進行:(a)將該樣本與該fC1-INH結合劑一起培育至少5分鐘,及(b)使該樣本與該C1-INH結合劑及該捕捉劑接觸。
- 如請求項35或請求項36之方法,其中該fC1-INH結合劑為因子XII之活性形式(FXIIa)。
- 如請求項35至37中任一項之方法,其中該銜接劑及該捕捉劑為受體-配位體對之成員。
- 如請求項38之方法,其中該銜接劑為生物素且該捕捉劑為抗生物素蛋白;或該銜接劑為抗生物素蛋白且該捕捉劑為生物素。
- 如請求項39之方法,其中該抗生物素蛋白為鏈黴抗生物素蛋白或聚鏈黴抗生物素蛋白。
- 如請求項35至40中任一項之方法,其中該C1-INH結合劑為結合C1-INH之抗體。
- 如請求項35至41中任一項之方法,其中該可偵測標記係選自由以下者組成之群:銪、膠體金、藻紅素、螢光素、玫瑰紅、綠色螢光蛋白、量子點、及發色團。
- 如請求項42之方法,其中該可偵測標記為銪。
- 如請求項42之方法,其中該可偵測標記為膠體金。
- 如請求項35至44中任一項之方法,其中該可偵測標記連接至乳膠粒子。
- 如請求項35至45中任一項之方法,其中該fC1-INH結合劑為與生物素共軛的因子XII之活性形式(FXIIa),其中該C1-INH結合劑為結合C1-INH之抗體,該抗體與該可偵測標記共軛,且其中該捕捉劑為鏈黴抗生物素蛋白。
- 如請求項46之方法,其中步驟(i)藉由以下者進行:(a)將該樣本與該fC1-INH結合劑一起培育至少5分鐘以形成第一複合物,(b)使該第一複合物與該C1-INH結合劑接觸以形成第二複合物,及(c)使該第二複合物與該捕捉劑接觸以形成該複合物,且其中該捕捉劑固定於支撐構件上。
- 如請求項35至47中任一項之方法,其中該樣本為獲自個體之生物樣本。
- 如請求項48之方法,其中該生物樣本為血清樣本、血漿樣本、或血液樣本。
- 如請求項48或請求項49中任一項之方法,其中該個體為疑似患有fC1-INH缺乏介導之病症或處於該病症風險下的人類患者。
- 如請求項50之方法,其中該fC1-INH缺乏介導之病症係選自由以下者組成之群:遺傳性血管性水腫(HAE)、獲得性血管性水腫(AAE)、及C1-INH相關免疫疾病。
- 如請求項51之方法,其中該個體具有HAE症狀。
- 如請求項51或52之方法,其中該HAE為I型HAE或II型HAE。
- 如請求項48至53中任一項之方法,其中該個體對抗組織胺療法、皮質類固醇療法、或兩者具有抗性。
- 如請求項50之方法,其中該個體不具有HAE之症狀、不具有HAE之症狀之病史、或不具有HAE之病史。 鏈黴抗生物素蛋白鏈黴抗生物素蛋白鏈黴抗生物素蛋白鏈黴抗生物素蛋白鏈黴抗生物素蛋白鏈黴抗生物素蛋白鏈黴抗生物素蛋白鏈黴抗生物素蛋白
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201962833235P | 2019-04-12 | 2019-04-12 | |
US62/833,235 | 2019-04-12 | ||
US201962930615P | 2019-11-05 | 2019-11-05 | |
US62/930,615 | 2019-11-05 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW202104898A true TW202104898A (zh) | 2021-02-01 |
Family
ID=70476506
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW109112218A TW202104898A (zh) | 2019-04-12 | 2020-04-10 | 用於測量血漿樣本中的功能性c1-酯酶抑制子(c1-inh)的側流免疫分析 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP3953711A1 (zh) |
JP (2) | JP7481361B2 (zh) |
KR (1) | KR20210151180A (zh) |
CN (1) | CN114341643A (zh) |
AU (1) | AU2020271846A1 (zh) |
BR (1) | BR112021020410A2 (zh) |
CA (1) | CA3136694A1 (zh) |
CO (1) | CO2021014018A2 (zh) |
IL (1) | IL287208A (zh) |
MX (1) | MX2021012444A (zh) |
TW (1) | TW202104898A (zh) |
WO (1) | WO2020210446A1 (zh) |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5622871A (en) | 1987-04-27 | 1997-04-22 | Unilever Patent Holdings B.V. | Capillary immunoassay and device therefor comprising mobilizable particulate labelled reagents |
US4703017C1 (en) | 1984-02-14 | 2001-12-04 | Becton Dickinson Co | Solid phase assay with visual readout |
US4881175A (en) | 1986-09-02 | 1989-11-14 | Genex Corporation | Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
US5260203A (en) | 1986-09-02 | 1993-11-09 | Enzon, Inc. | Single polypeptide chain binding molecules |
US4855240A (en) | 1987-05-13 | 1989-08-08 | Becton Dickinson And Company | Solid phase assay employing capillary flow |
GB9823397D0 (en) | 1998-10-27 | 1998-12-23 | Rsr Ltd | Assays for thyroid autoantibodies |
US20080138842A1 (en) * | 2006-12-11 | 2008-06-12 | Hans Boehringer | Indirect lateral flow sandwich assay |
EP3470837A1 (en) | 2013-01-20 | 2019-04-17 | Dyax Corp. | Treatment of pkal-mediated disorders |
AU2016366557B2 (en) | 2015-12-11 | 2024-01-25 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating hereditary angioedema attack |
-
2020
- 2020-04-09 WO PCT/US2020/027406 patent/WO2020210446A1/en active Application Filing
- 2020-04-09 BR BR112021020410A patent/BR112021020410A2/pt unknown
- 2020-04-09 MX MX2021012444A patent/MX2021012444A/es unknown
- 2020-04-09 CN CN202080042522.1A patent/CN114341643A/zh active Pending
- 2020-04-09 EP EP20722896.6A patent/EP3953711A1/en active Pending
- 2020-04-09 AU AU2020271846A patent/AU2020271846A1/en active Pending
- 2020-04-09 JP JP2021559968A patent/JP7481361B2/ja active Active
- 2020-04-09 KR KR1020217036781A patent/KR20210151180A/ko not_active Application Discontinuation
- 2020-04-09 CA CA3136694A patent/CA3136694A1/en active Pending
- 2020-04-10 TW TW109112218A patent/TW202104898A/zh unknown
-
2021
- 2021-10-12 IL IL287208A patent/IL287208A/en unknown
- 2021-10-20 CO CONC2021/0014018A patent/CO2021014018A2/es unknown
-
2024
- 2024-04-25 JP JP2024071630A patent/JP2024087052A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA3136694A1 (en) | 2020-10-15 |
AU2020271846A1 (en) | 2021-11-18 |
CO2021014018A2 (es) | 2021-10-29 |
JP2022526186A (ja) | 2022-05-23 |
KR20210151180A (ko) | 2021-12-13 |
EP3953711A1 (en) | 2022-02-16 |
MX2021012444A (es) | 2021-12-10 |
IL287208A (en) | 2021-12-01 |
WO2020210446A1 (en) | 2020-10-15 |
CN114341643A (zh) | 2022-04-12 |
BR112021020410A2 (pt) | 2021-12-07 |
JP2024087052A (ja) | 2024-06-28 |
JP7481361B2 (ja) | 2024-05-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20240103018A1 (en) | Galectin-3 immunoassay | |
JP2020097606A (ja) | pKal関連疾病の評価、アッセイおよび治療 | |
US8030097B2 (en) | Lipocalin-2 as a prognostic and diagnostic marker for heart and stroke risks | |
CA2575475C (en) | Method for diagnosing liver fibrosis | |
JP2003524187A (ja) | 体液、例えば尿におけるマーカーと血液凝固活性とを相互関連づけるための方法 | |
WO2005080982A1 (ja) | A型及びb型急性大動脈解離と急性心筋梗塞の鑑別方法及び鑑別用キット | |
US20070178442A1 (en) | Method for diagnosing liver fibrosis | |
US20200340987A1 (en) | Lateral flow immunoassay for measuring functional c1-esterase inhibitor (c1-inh) in plasma samples | |
WO2002079782A1 (fr) | Reactif et procede pour l'immunoanalyse de l'elastase 1, et procede de detection de pathologie pancreatique | |
CA2361000C (en) | Urinary trypsin inhibitor to diagnose aids | |
CN114573692B (zh) | 用于检测嗜铬粒蛋白a的免疫测定与抗体 | |
WO2003083486A1 (fr) | Procédé d'évaluation de la cardiotoxicité d'une substance thérapeutique chimique anticancéreuse du type anthracycline par détection de la protéine de liaison d'acides gras du coeur humain (h-fabp) et réactif associé | |
TW202104898A (zh) | 用於測量血漿樣本中的功能性c1-酯酶抑制子(c1-inh)的側流免疫分析 | |
US8852879B2 (en) | Materials and methods for the detection of nitrated fibrinogen | |
US20050244905A1 (en) | Nitrated fibrinogen as a marker for coronary artery disease and rapid blood clot formation | |
US9140707B2 (en) | Sensors and methods for detecting diseases caused by a single point mutation | |
JP2024039982A (ja) | 急性腎障害の発症リスクの評価方法 | |
KR20240151234A (ko) | 세린 프로테아제의 검출용 또는 측정용 시약 | |
JP6093943B2 (ja) | 急性冠症候群のマーカー及びその利用 | |
JP2023021650A (ja) | 高血圧、心筋症、及び心房細動よりなる群から選択されるいずれか一つ疾患の罹患を測定する方法、前記疾患の罹患を測定するための検査試薬、及び前記疾患の罹患を測定するための検査キット | |
WO2007119481A1 (ja) | 血中腸型脂肪酸結合蛋白測定による急性腸炎診断 | |
OA19228A (en) | Point of care assays | |
FR2769093A1 (fr) | Procede in vitro d'evaluation des risques thrombotiques par dosage du fibrinogene plasmatique |