JP7475481B2 - ハロゲン化キサンテンの経口投与による固形癌性腫瘍の治療 - Google Patents

Description

本発明は、ハロゲン化キサンテンを用いた経口治療によって固形癌性腫瘍を治療するための方法及び組成物を意図する。

癌は２つの方法で、つまり、癌が由来する組織の種類（組織型）と、原発部位、すなわち癌が最初に発生した体内の場所とによって分類される。以下の考察は組織型に基づいた癌分類を対象とする。

組織型の分類及び命名の国際基準は、国際疾病分類、腫瘍学、第３版（ＩＣＤ‐Ｏ‐３）、世界保健機関、ジュネーブ、スイスである。組織学的観点から見れば、何百種類もの癌が存在し、上皮性悪性腫瘍、非上皮性悪性腫瘍、骨髄腫、白血病、リンパ腫、及び混合タイプの６つの主要カテゴリに分類される。

それらの６つのグループはまた、固形腫瘍と血液癌とに更に細分化される。固形腫瘍には上皮性悪性腫瘍、非上皮性悪性腫瘍、リンパ腫及び混合型が含まれるのに対し、骨髄腫及び白血病は血液癌である。この発明は固形腫瘍を対象とする。

非上皮性悪性腫瘍は、体の骨、又は軟骨、脂肪、筋肉、血管、繊維組織、他の結合組織若しくは支持組織を含む軟組織から始まる癌の一種である。異なる種類の非上皮性悪性腫瘍は、その癌がどこで生じるかに基づく。

リンパ腫は免疫系の細胞から始まる癌である。リンパ腫には２つの基本カテゴリがある。１つはホジキンリンパ腫であり、リードシュテルンベルグ細胞と呼ばれる種類の細胞の存在を特徴とする。もう１つのカテゴリは非ホジキンリンパ腫であり、大きくて多様な免疫細胞の癌のグループを含む。非ホジキンリンパ腫は更に、緩慢な経過をたどる（進行が遅い）癌と急速な経過をたどる（急激に成長する）癌とに分けられる。

混合型の癌は、少なくとも２つの異なる種類の胚細胞腫瘍（精子又は卵子を形成する細胞から始まる腫瘍）から構成される珍しい種類の癌である。これらには絨毛種、胎児性癌、卵黄嚢腫瘍、奇形腫、及び精上皮種が含まれる可能性がある。混合胚細胞腫瘍はほとんどの場合、卵巣又は精巣で発生するが、胸部、腹部、又は脳で発生することもある。

上皮性悪性腫瘍、上皮組織の悪性腫瘍は、全ての固形腫瘍癌症例の８０～９０パーセントを占める。「上皮性悪性腫瘍」という言葉は、上皮由来の悪性新生物又は体の内外層の癌を指す。

上皮組織は全身に見られる。上皮組織は、皮膚だけでなく、臓器及び消化（ＧＩ）管などの内部通路の外膜及び内膜にも存在する。大抵の上皮性悪性腫瘍は、乳汁を産生する乳房、粘液を分泌する肺、結腸、前立腺又は膀胱などの分泌能力がある臓器又は腺に影響を及ぼす。

上皮性悪性腫瘍は２つの主要なサブタイプ、すなわち臓器又は腺で増殖する腺癌と、扁平上皮から発生する扁平上皮癌とに分けられる。腺癌は一般に粘膜で発生し、初めは肥厚したプラーク様の白色粘膜に見える。腺癌は発生した軟組織を介して容易に広がることが多い。扁平上皮癌は体の多くの領域で発生する。

上皮性悪性腫瘍のうち、本発明が特に関心があるのは消化管の上皮性悪性腫瘍である。消化管は、食べ物や飲み物が飲み込まれ、消化吸収され、ふん便として体から出て行く際に通過する器官からなる。これらの器官には、口、咽頭（咽喉）、食道、胃、小腸、大腸、直腸、及び肛門が含まれる。ＧＩ管は消化管とも呼ばれる。

上皮性悪性腫瘍を取り扱いながら組織学的命名型から切り替えると、以上で命名された器官のそれぞれが、食道癌、胃癌、結腸癌など、より一般的に参照される器官名の付いた上皮性悪性腫瘍を有する可能性がある。消化管の一部であると見なされる又は時に見なされ得る膵臓、胆嚢、及び虫垂などの器官は本明細書には含まれない。それらの器官は口から肛門までの経路に接合されているが、口に進入するもののほとんどがそれらの３つの器官に進入することはない。むしろ流れは、各器官から肛門への経路への概ね一方向である。

口から始めると、口（口腔）及び周辺領域のいくつかの上皮性悪性腫瘍が存在する。口腔癌は、頭頸部癌と呼ばれるカテゴリに分類されるいくつかの種類の癌のうちの１つである。口腔癌及びその他の頭頸部癌は同様に治療されることが多い。

口腔癌は、唇及び口の内側を埋め尽くす扁平な薄い細胞（扁平上皮細胞）から始まることが最も多い。ほとんどの口腔癌が扁平上皮癌である。

鼻及び咽喉の上皮性悪性腫瘍も比較的よく見られる。これらの癌は鼻咽頭（上咽喉）、中咽頭（中咽喉）、及び下咽頭（下咽喉）に発生する可能性がある。これらは通常、口及び咽喉を埋め尽くす扁平上皮細胞から発生する。

食道の近位（上）３分の２における最も一般的な食道腫瘍は扁平上皮癌であり、遠位（下）３分の１では腺癌が最も一般的である。ほとんどの腺癌は、バレット食道から発生し、慢性の胃食道逆流症及び逆流性食道炎に起因する。バレット食道では、急性食道炎が治癒する過程で、治癒が胃酸の持続的存在下に起こる場合、食道下部の正常な重層扁平上皮が、刷子縁及び杯細胞を伴う化生性、円柱状、腺性の、腸様の粘膜に置き換わる。

胃癌は何年もかけてゆっくりと進行する傾向がある。本物の癌が進行する前に、前癌変化が胃の内壁（粘膜）に起こることがよくある。これらの初期変化はめったに症状を引き起こさないため、発見されないことがよくある。

胃の様々な部分から始まる癌が様々な症状を引き起こす可能性があり、様々な結果をもたらす傾向がある。癌の場所はまた治療選択肢に影響を及ぼす可能性がある。例えば胃食道（ＧＥ）接合部から始まる又は胃食道（ＧＥ）接合部に向かって成長する癌は通常、食道の癌と同様に段階分けされ治療される。

胃のほとんどの癌（約９０％～９５％）は腺癌である。これらの癌は、胃（粘膜）の最も内側の層の腺細胞から発生する。

胃腺癌には２つの主要な種類がある。腸型はわずかに予後が良い傾向がある。癌細胞は、標的薬剤治療による治療を可能にし得る一定の遺伝子変化が起きる可能性が高い。びまん型はより急速に成長し広がる傾向がある。びまん型は腸型より一般的でなく、治療がより困難な傾向がある。

小腸で発見される癌の種類は、腺癌、非上皮性悪性腫瘍、カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、及びリンパ腫である。腺癌は小腸の内層の腺細胞から始まるものであり、小腸癌の最も一般的な種類である。これらの腫瘍のほとんどは小腸の胃に近い部分に発生する。

結腸直腸癌は、米国において男女ともに３番目に多い癌で年間の新規発生数が約１５０，０００件であり、２番目に多い癌の死亡原因であり、約５３，０００人が死に至る［Ｃａｎｃｅｒ Ｆａｃｔｓ ＆ Ｆｉｇｕｒｅｓ ２０２１、米国癌協会、アトランタ、ジョージア州、２０２１年］。発生率は２０１３～２０１７年で１年に約１％低下し、死亡率は２０１４～２０１８年で１年に約２％低下しているが、５０歳未満の成人の発生率は一般集団の２倍で上昇しており、若い成人によりもたれされる死亡率の向上の反転の可能性の前兆となる。これらの統計のそれぞれは、発見、治療及び予防における更なる改善の切迫した必要性を強調する。

結腸直腸悪性腫瘍の９０％超は腺腫性ポリープから腺癌へと進展する。これらは、無制御な腺窩細胞の分裂によって境界の明瞭な上皮異形成塊と定義される可能性がある。いくつかのエビデンスは上皮性悪性腫瘍が通常は既存の腺腫から発生することを示しているが、これは全てのポリープが悪性変化を来すことを意味するのではなく、「デノボ」発癌を排除するものではない［Ｐｏｎｚ ｅｔ ａｌ．， Ｄｉｇｅｓｔ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓ ３３（４）：３７２‐３８８（２００１年５月）］。発生率及び疫学、病因、発症機序、及び検証推奨事項は結腸癌及び直腸癌の両方に共通である。

特定の非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が結腸直腸発癌を抑制する可能性があり、化学予防的であることを示す臨床研究［Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｉｎｔｅｒｎ． Ｍｅｄ．， １４０：１５７‐１６６（２００４年）］は、これらの傾向が改善し得るという希望を与える。追加の前臨床研究及び早期の臨床研究は、ＮＳＡＩＤの有益性が抗血管新生効果及びアポトーシス促進効果を介してＣＯＸ‐２阻害剤に及び得ることを示唆している［Ｇａｓｐａｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ．， ４：６０５‐６１５（２００３年）；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．， ９４：２５３－２５８（２００３年）；Ｒａｈｍｅ ｅｔ ａｌ．， Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ， １２５：４０４－４１２（２００３年）；Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．， ２６：Ｓ６２－６５（２００３年）；及びＲａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ， ４： ２９－４２（２００４年）］。しかし残念ながら、最も有効なＮＳＡＩＤ投与量は、長期療法に一般的に使用される量を優に上回る場合があり、予防的使用に伴う潜在的なリスクを示し［Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｉｎｔｅｒｎ． Ｍｅｄ．， １４０：１５７‐１６６（２００４年）；Ｒａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ， ４： ２９－４２（２００４年）；Ｍａｍｄａｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｌａｎｃｅｔ， ３６３：１７５１－１７５６（２００４年）；Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ａｍｅｒ Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃ， ２８６：９５４－９５９（２００１年）；及びＦｉｔｚｇｅｒａｌｄ， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ， Ｍｅｄ．， ３５１：１７０９－１７１１（２００４年）］、更なる臨床開発及び創薬の必要性を強調する。

肛門癌は肛門管で発生するまれな種類の癌である。肛門管は、直腸の端にある、ふん便が体から出る肛門縁までの短い管（約３～５ｃｍ）である。肛門縁は、肛門管が肛門で外側の皮膚に接合する場所である。この肛門縁の周りの皮膚は肛門周囲皮膚と呼ばれる。

肛門縁において、肛門管下部の扁平上皮細胞は、肛門のすぐ外側の皮膚と一体化する。この肛門縁の周りの皮膚は肛門周囲皮膚と呼ばれ、同様に扁平上皮細胞から構成されているが、肛門管下部の内壁には見られない汗腺及び毛包も含む。肛門管の内層は粘膜である。殆どの肛門癌は粘膜の細胞から発生し、米国における肛門癌の約９０パーセントは扁平上皮癌である。

ローズベンガル（４，５，６，７－テトラクロロ－２’，４’，５’，７’－テトラヨードフルオレセイン；ＲＢ）は、およそ９０年間にわたるヒトへの広範で安全な使用履歴を有する非毒性の小分子である。ＲＢの新規な治療上の使用の皮膚科学及び腫瘍学的な評価は文献で入手可能である［Ａ． Ｐｅｒｉａｓａｍｙ及びＰ．Ｔ． Ｓｏ， Ｐ．Ｔ． （Ｅｄｓ）， Ｍｕｌｔｉｐｈｏｔｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＩＩ． ＳＰＩＥ，ベリンガム，ワシントン州， ｖｏｌ． ４６２０， ｐｐ．１４３－１４７（２００２年）のＷａｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｌａｓｅｒｓ Ｓｕｒｇ． Ｍｅｄ．， ３２：１０１－１１０（２００３年）；Ｗａｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， “Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｉｍａｇｉｎｇ ｏｆ Ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒｓ Ｕｓｉｎｇ Ｍｕｌｔｉｐｈｏｔｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ”及びＤ．Ｌ． Ｆａｒｋａｓ及びＲ．Ｃ． Ｌｅｉｆ， Ｒ．Ｃ． （Ｅｄｓ） Ｏｐｔｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｌｉｖｉｎｇ Ｃｅｌｌｓ Ｖ． ＳＰＩＥ，ベリンガム，ワシントン州， ｖｏｌ． ４６２２， ｐｐ． １１２－１１８（２００２年）のＷａｃｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００２年）“Ｉｍａｇｉｎｇ Ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｕｓｉｎｇ Ｍｕｌｔｉｐｈｏｔｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ”］。長期の毒物学データの徹底的な見直しも公開されている［Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉ， ７７：２７７－２８１（１９８６年）］。

これらの出版物を検討して、我々は印象的だが明らかに認識されていない傾向、すなわち、Ｂ６Ｃ３Ｆ_１マウスへのＲＢ（飲用水中に０．１～０．５％の濃度）の持続的な経口投与によって、無治療対照群より８２週齢における生存率が大幅に高くなった（すなわち、雄の対照群については９４％対５２％、雌の対照群については９０％対６４％）ことに気が付いた。このマウス株は、自発的腫瘍形成、特に肝腺腫及び肝癌に対する著しい傾向を示すため［Ｈａｓｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｔｏｘｉｃｏｌ． Ｐａｔｈｏｌ．， ２６：４２８－４４１（１９９８年）］、これらのデータは、ＲＢの持続的投与が一部の腫瘍に対して予防、治療、化学的予防又は化学的治療効果をもたらし得ることを我々に示唆した。

本発明は、哺乳類の被験体内の固形癌性腫瘍を、有効量のハロゲン化キサンテン（ＨＸ）、そのラクトン、薬学的に受容可能な塩、又はＣ_１‐Ｃ_４アルキル若しくはその芳香族エステルを哺乳類の被験体に経口投与することによって治療する方法を意図する。好ましくは、上記ＨＸ、薬学的に受容可能な塩、又はＣ_１‐Ｃ_４アルキル若しくはその芳香族エステルはローズベンガルジナトリウムである。具体的には、意図される薬学的に受容可能な塩、Ｃ_１‐Ｃ_４アルキル及び芳香族エステルは以下で詳細に考察される。意図されるハロゲン化キサンテン、その薬学的に受容可能な塩、及びＣ_１‐Ｃ_４アルキル又はその芳香族エステルは、以下において表現の効率化のために「ＨＸ化合物」という用語の下にまとめられる。

固形癌性腫瘍の治療の一態様は、治療される腫瘍が上皮性悪性腫瘍、非上皮性悪性腫瘍、リンパ腫、及び混合型腫瘍である。好適な態様では、治療される固形腫瘍は上皮性悪性腫瘍である。更に好適な態様では、上皮性悪性腫瘍は消化（ＧＩ）管に存在している。

固形腫瘍組織の暴露は、消化（ＧＩ）管内での投与されたＨＸ化合物の直接相互作用（接触）によって、並びに／又は投与されたＨＸ化合物のＧＩ管から血流への吸収及び結果として生じる投与されたＨＸ化合物の一部の血流を介したＧＩ管内の腫瘍部位又はＧＩ管を越えた体内の他の場所への分配及び送達によって行われる可能性がある。

本明細書で意図される経口治療固形腫瘍の我々の研究の一部として発生した例示的な態様は、意図されるＨＸ化合物の哺乳類の被験体への経口投与が、既に形成された結腸直腸癌を治療するだけでなく、結腸直腸癌などの消化管（ＧＩ）の上皮性悪性腫瘍の形成を抑制することができることである。

好適なＨＸ化合物はローズベンガル、そのジナトリウム（ＲＢジナトリウム）塩、又はローズベンガルラクトンである。方法は一般的に、特に消化管癌の形成を抑制することが意図される場合に数回繰り返される。

好適な態様では、ＨＸ化合物は、哺乳類の被験体に投与される場合に水性希釈剤に溶解又は分散される。水性希釈剤が糖及び／又はフラボラントとして存在する緩衝剤を除いて等張化剤を含まないことがより好ましい。

別の好適な態様では、ＨＸ化合物は、哺乳類被験体に投与される場合に固体医薬組成物の一部である固体希釈剤マトリックス内にある。好ましくは、組成物は、ＧＩ管の上皮性悪性腫瘍が位置する部分の又は体内吸収が最適化されるｐＨ値でＨＸ化合物を放出する。例示的な癌の位置は、胃、小腸又は結腸内である。最適な体内吸収のための例示的な放出位置は、十二指腸及び小腸である。

一態様では、固体医薬組成物は錠剤である。別の態様では、固体医薬組成物は、ＨＸ化合物を含有する複数の被覆粒子を含むカプセルである。好ましくは、かかる被覆粒子のコーティングは、ＨＸ化合物を放出するために予め選択されたｐＨ値で溶解又は崩壊する。

各実施形態及び上記の本発明の態様では、ＨＸ化合物の活性成分は、体内に入ると塩又はエステルとして存在し得るローズベンガル（ＲＢ）であることが好ましい。ジナトリウムローズベンガル（ＲＢジナトリウム）が水媒体への溶解度の点で特に有用である。更に、ラクトン型のローズベンガルも、極めて純粋な形で調製することができ、約ｐＨ５より大きい管腔内ｐＨ値で吸収可能な塩形態に転換するために好ましい。

経口投与されたローズベンガルで治療されたＡｐｃ^Ｍｉｎマウス対無治療対照群の雌マウスの生存期間を示すグラフ（両群ともｎ＝８匹）。治療が約５週齢（症状の発現前）で始まり、マウスは飲用水として不断に連続投与される殺菌された水道水で４ｍｇ／ｍＬのＲＢジナトリウムを摂取した（治療群）又は殺菌された水道水を摂取した（対照群）。治療群マウスは（３０週齢まで）無症状であったのに対し、対照群は１６週で症状を示し始めた。対照群の平均生存期間＝１９．６±０．６週（ＳＥ）；治療群マウスの平均生存期間は定まらない。対照群は黒いひし形で示され、ローズベンガルで治療されたマウスは黒丸で示されている。 腸内出血が発生するまで殺菌された水道水に６週間戻された図１のように治療されたＡｐｃ^Ｍｉｎマウスの生存期間を示すグラフ。次いで１ｍｇ／ｍＬのＲＢジナトリウムを飲用水で摂取する（治療群）又は標準飲用水を摂取する（対照群）８匹のマウスが無作為に選ばれた（両群ともｎ＝４匹）。症状が発現したときに治療を開始した。対照群の平均生存期間＝８．９±０．８週；ＲＢ治療群＝１２．３±０．５週。対照群は黒いひし形で示され、ローズベンガルで治療されたマウスは黒丸で示されている。 投与されたローズベンガル濃度（モル濃度）の対数対固形腫瘍治療を評価するときまでのＨＸ化合物の被験体内における持続時間の対数をプロットした、いくつかの異なる研究からのデータの両対数グラフ。「病巣内投与」は、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ， Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ １８：４０５‐４１１（２００８年）に存在するデータを表し；「Ｓｗｉｆｔ ２０１８， ２０１９」は、Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ． Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ １２：１２９３－１３０７（２０１９年）及びＳｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３６：Ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒ １０５５７（２０１８年）からのものであり；「経口Ａｐｃ^Ｍｉｎ」は本研究からのデータである。

本発明は、哺乳類の被験体内の固形癌性腫瘍を、有効量のハロゲン化キサンテン（ＨＸ）、そのラクトン、薬学的に受容可能な塩、又はＣ_１‐Ｃ_４アルキル若しくはその芳香族エステル（ＨＸ化合物）を上記哺乳類の被験体に経口投与することによって治療する方法を意図する。

結腸直腸癌のようなＧＩ管の固形癌性腫瘍などの固形癌性腫瘍はもちろん、あらゆる癌が何らかの形で経口投与されたＨＸ化合物の影響を受けることは、ＨＸ化合物の低いバイオアベイラビリティ、薬剤の最初の減衰のため、更に他の文脈でローズベンガル（ＲＢ）などのＨＸ化合物について既に報告された半減期が比較的短い（約３０分）ため全く予想外であった。したがって、ローズベンガルジナトリウム、薬学的に受容可能な塩形態の例示的なＨＸ化合物の経口投与が、治療が行われない場合に結腸直腸腫瘍を増殖させるように特別に飼育された動物における結腸直腸腫瘍増殖の進行を遅らせることができたことは予想外であった。経口送達された意図されたＨＸ化合物がかかる特別に飼育された動物における結腸直腸癌性腫瘍の形成を抑制できたことは更に一層予想外であった。

使用対象動物の提供者であるジャクソン研究所が発行した電子ニュース（２０１５年４月８日）によれば、高脂肪食で育った（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ‐Ｍｉｎ／＋（ヘテロ接合）マウス（Ａｐｃ^Ｍｉｎ）の１００パーセント（１００％）が腸管中に３０個を超える腺腫を発症し、ほとんどが１２０日齢までに死亡した［Ｍｏｓｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：３２２－３２４（１９９０年）］。図１のデータは、全ての対照マウスが約２２週（１５４日）までに死亡していたのに対し、治療マウスは全て疾患発症の兆候なく約３０週（２１０日）間生きたことを示している。

腫瘍量の変化の評価は、癌治療の臨床評価の重要な特徴である。つまり、腫瘍縮小（客観的反応）、腫瘍停滞（疾患管理）、及び疾患進行が臨床試験の有益な指標である。腫瘍量の変化の評価基準は、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ４５：２２８‐２４７（２００９年）によって公開された。それらの改訂ガイドラインは、改訂ＲＥＣＩＳＴガイドライン（バージョン１．１）と呼ばれ、以下に記載される。

４．３．１ 標的病変の評価

完全奏効（ＣＲ）：全ての標的病変の消失。あらゆる病的リンパ節（標的又は非標的にかかわらず）は、短径で１０ｍｍ未満に縮小しなくてはならない。

部分奏効（ＰＲ）：ベースライン径和に比して、標的病変の径和が少なくとも３０％減少。

疾患進行（ＰＤ）：経過中の最小の径和（ベースライン径和が経過中の最小値である場合、これを最小の径和とする）に比して、標的病変の径和が少なくとも２０％増加、かつ、径和が絶対値でも少なくとも５ｍｍ増加。（注：１つ以上の新しい病変の出現も進行と見なされる。）

疾患安定（ＳＤ）：経過中の最小の径和に比して、ＰＲに相当する縮小がなくＰＤに相当する増大がない。

上記の基準を使用して、ＨＸ化合物を含有する組成物を少なくとも疾患安定が得られるまで投与する（疾患管理）。より好ましくは、かかる投与は部分奏効が得られるまで継続される。最も好ましくは、完全奏効が得られるまで治療が継続する。

したがって、投与は好ましくは複数回繰り返され、予防が意図される一部の場合には、哺乳類被験体の寿命の残りの期間繰り返される。治療は治療医の命令で毎日１回以上の頻度又は少ない頻度で行われる可能性がある。

ジナトリウムＲＢなどのＨＸ化合物を含有する医薬組成物が投与される、治療を必要としている固形癌性腫瘍を有する哺乳類被験体は、ヒトなどの霊長類；チンパンジーやゴリラなどの類人猿；カニクイザル若しくはマカクなどのサル；ラット、マウス、又はうさぎなどの実験動物；犬、猫、馬などのコンパニオンアニマル；又は雌牛若しくは去勢雄牛、羊、子羊、豚、山羊、ラマなどの食用動物などである可能性がある。

一態様では、本発明は、固形腫瘍癌を有する哺乳類被験体を、癌治療有効量のハロゲン化キサンテン（ＨＸ）、そのラクトン、薬学的に受容可能な塩、Ｃ_１‐Ｃ_４アルキル又はその芳香族エステル、すなわちまとめて「ＨＸ化合物」をかかる哺乳類被験体に経口投与することによって治療することを意図する。

上記の態様の特定の態様が、哺乳類被験体の消化管癌を治療する又はその形成を抑制する方法を意図する。かかる方法は、そのＧＩ管において（ａ）癌が生じることが抑制される又は（ｂ）治療すべき癌が存在している哺乳類被験体に、癌形成抑制又は癌治療有効量のハロゲン化キサンテン（ＨＸ）、そのラクトン、薬学的に受容可能な塩、又はＣ_１‐Ｃ_４アルキル若しくはその芳香族エステルを経口投与することを含む。

ハロゲン化キサンテンの経口投与

固形癌性腫瘍治療有効量のハロゲン化キサンテン、そのラクトン、薬学的に受容可能な塩、又はＣ_１‐Ｃ_４アルキル若しくはその芳香族エステルを、固体又は液体の状態で経口投与することができる。ハロゲン化キサンテンは、好ましくはローズベンガルであり、より好ましくはジナトリウム又はジカリウム塩などのローズベンガルの薬学的に受容可能な塩である。

意図されるＨＸ化合物には、特に好適なローズベンガル（４，５，６，７‐テトラクロロ‐２’，４’，５’，７’‐テトラヨードフルオレセイン；ＲＢ）、エリトロシンＢ、フロキシンＢ、４，５，６，７‐テトラブロモ‐２’，４’，５’，７’‐テトラヨードフルオレセイン、２’，４，５，６，７‐ペンタクロロ‐４’，５’，７’‐トリヨードフルオレセイン、４，４’，５，６，７‐ペンタクロロ‐２’，５’，７’‐トリヨードフルオレセイン、２’，４，５，６，７，７’‐ヘキサクロロ‐４’，５’‐ジヨードフルオレセイン、４，４’，５，５’，６，７‐ヘキサクロロ‐２’，７’‐ジヨードフルオレセイン、２’，４，５，５’，６，７‐ヘキサクロロ‐４’，７’‐ジヨードフルオレセイン、４，５，６，７‐テトラクロロ‐２’，４’，５’‐トリヨードフルオレセイン、４，５，６，７‐テトラクロロ‐２’，４’，７’‐トリヨードフルオレセイン、４，５，６，７‐テトラブロモ‐２’，４’，５’‐トリヨードフルオレセイン、及び４，５，６，７‐テトラブロモ‐２’，４’，７’‐トリヨードフルオレセインが含まれる。

読者は、上記のハロゲン化キサンテンなどの医薬組成物とともに薬学的に受容可能な塩を形成する一般的に使用される薬学的に受容可能な酸及び塩基のリストについて、Ｂｅｒｇｅ， Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． １９７７ ６８（１）：１‐１９に向けられる。例示的な陽イオンには、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属と、アンモニウム塩並びにマグネシウム及びカルシウムなどのアルカリ土類塩が含まれる。ローズベンガルのジナトリウム塩は特に好ましい。

上記ハロゲン化キサンテン化合物のうちの１つのＣ_１‐Ｃ_４アルキルエステルが使用される可能性もあり、Ｃ_２、すなわちエチルエステルが好ましい。ＲＢ、エチルレッド ３（エリトロシンエチルエステル；２’，４’，５’，７’‐テトラヨード‐フルオレセインエチルエステル）、４，５，６，７‐テトラブロモ‐２’，４’，５’，７’‐テトラヨードフルオレセイン及びエチル‐フロキシンＢ（４，５，６，７‐テトラクロロ‐２’，４’，５’，７’‐テトラブロモ‐フルオレセインエチルエステル）のそれぞれを使用したｉｎ ｖｉｔｒｏ試験は、ＣＣＬ‐１４２腎臓腺癌に対して同様の抗腫瘍活性を示した。

意図される芳香族エステルが、ＨＸ化合物と、５若しくは６員の芳香環、又は独立して窒素、酸素又は硫黄である０個、１個若しくは２個のヘテロ環原子を含む５，６若しくは６，６縮合芳香環系を有する芳香族アルコールとの反応によって形成される。芳香族エステルが使用される場合、好ましくはベンジル、フェニル又は２‐、３‐、若しくは４‐ピリジル（ピリジル）エステルであり、以下で考察されるように他の芳香族単環及び縮合環含有エステルも意図される。ベンジルエステルは「アラルキルエステル」と考えられることが多いが、この発明の目的のために芳香族エステルと見なされることが理解されるべきである。

かかる芳香族アルコールのエステル部位の実例が以下に名前付きで示されている。ここでＯは酸素原子であり、線Ｏは、環酸素が環の利用可能な炭素からのものであり得ることを示し、波線が交差したＯ線は、描かれたアルコキシ基が別の分子、エステル化されたＨＸ分子の一部分であることを示す。

ローズベンガルは好適なＨＸ化合物であり、そのジナトリウム塩、ローズベンガルジナトリウムが最も好ましい。ローズベンガルジナトリウムの構造式を以下に示す：

上記のＨＸ化合物を含有する医薬組成物の医学的用途の更なる詳細は、その開示内容が参照によって本明細書に全体として組み込まれる米国特許第５，９９８，５８７号、第６，３３１，２８６号、第６，４９３，５７０号、第７，３９０，６８８号、第７，６４８，６９５号、第８，９７４，３６３号、第９，１０７，８８７号、第９，８０８，５２４号、第９，８３９，６８８号、第１０，１３０，６５８号及び第１０，４７１，１４４号に記載されている。

投与－図３

腫瘍細胞がＨＸ化合物に暴露されるとき、ＨＸ化合物の不可逆的な蓄積が腫瘍リソソームで起こり、リソソームの完全性を不安定にするのに十分な濃度が達成されると腫瘍の自己分解を誘発する［Ｗａｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， ＳＰＩＥ ４６２０：１４３‐１４７（２００２年）］。これは、この細胞死の免疫原性メカニズムが、細胞毒性が２つのパラメータの積に比例する（すなわち、細胞毒性＝ｆ（［ＨＸ］・ｔ））、濃度・時間関数に基づいた暴露条件の範囲にわたって引き起こされ得ることを示唆している。

例えば、ＲＢが様々な固形腫瘍（例えば、黒色腫、肝細胞癌、乳癌）への病巣内注射によってｉｎ ｖｉｖｏで投与されるとき、腫瘍組織（２５‐５０ｍＭ）における約２５‐５０ｍｇ／ｇの腫瘍内ＲＢ濃度について約３０分以内の急性腫瘍細胞毒性が明らかである［Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ， Ｍｅｌａｎｏｍａ Ｒｅｓ １８：４０５‐４１１（２００８年）］。

Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．［Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ １２：１２９３‐１３０７（２０１９年）］は、約５０～１００μＭの濃度での９６時間のＲＢへのｉｎ ｖｉｔｒｏ暴露の際に難治性小児固形腫瘍（神経芽細胞腫及び神経上皮腫）の細胞毒性を示した。また、Ｓｗｉｆｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３６：Ｓｕｐｐｌｅ； ａｂｓｔｒ １０５５７（２０１８年）は、同等の暴露の下で追加の難治性小児固形腫瘍（ユーイング肉腫、骨肉腫及び横紋筋肉腫）に細胞毒性を示した。

持続的経口投与によるＲＢへの長期間の暴露は、マウスＡｐｃ^Ｍｉｎ結腸直腸腫瘍モデルにおいて結腸癌の形成を防ぐこと（予防活性）及び結腸癌の進行を止めること（治療活性）が示されている。治療的使用について、１ｍｇ／ｍＬの濃度のＲＢを飲用水で不断に摂取した症状のあるマウスは、未治療のマウスに比べて平均生存期間が約３８％延びた（１２．３±０．５週対９．８±０．８週）。１日当たりの飲用水消費率を体重１０ｇ当たり約２ｍＬと仮定すると、これは１０ｇ当たり約２ｍｇ（２００ｍｇ／ｋｇ）のＲＢの消費量に相当する。経口経路を介して水溶液で投与されたＲＢジナトリウムのバイオアベイラビリティは、発明者らが行ったマスバランス試験に基づいて制限されていると思われ、０．２～２ｍｇ／ｋｇの一日全身暴露量に相当する０．１～１％と推定される可能性がある。この量が血流を通じて分配され、血液量が体重の約１０％であると仮定すると、これはＲＢの血中推定濃度２～２０μＭに等しい。

これらのデータをプロットすると、仮説的な関係（すなわち細胞毒性＝ｆ（［ＨＸ］・ｔ））が、図３に示すように実験結果によって裏付けられることが確かめられる。

より重要なことは、この関数関係は、全身投与の際に抗腫瘍予防結果又は抗腫瘍治療結果を得るのに適切な投与量及びスケジュールの予測を可能にすることである。Ａｐｃ^Ｍｉｎモデルで調査されたものと同等の延長された治療スケジュールでは、循環するＨＸ化合物の低いマイクロモル濃度（すなわち約１０μＭ）が、約３カ月間にわたってリソソーム蓄積及び腫瘍細胞破壊を達成するのに十分である一方、マイクロモルからマイクロモル以下の濃度（すなわち約１μＭ）が、約１２カ月間にわたって腫瘍細胞破壊を達成するのに十分である。

本明細書のＡｐｃ^Ｍｉｎデータは、ＲＢのジナトリウム塩の単純な剤形が治療効果のあるＲＢの量を送達するのに十分であることを示すが、これはバイオアベイラビリティに関して理想的な効率性に満たないことがある。したがって、経口送達されたＨＸ化合物の効率的な遊離及び吸収を達成するのに適当な剤形を決定することが、当業者によく知られている標準的な医薬開発の問題であり、剤形の特性を、溶解したＨＸ化合物の血流への吸収を最大化するために、ＧＩ管内の適切な箇所での遊離（崩壊、解離及び溶解）の制御によって所望のバイオアベイラビリティを達成するために変化させることができる。

処方の最適化は、投与量及び剤形が所望の投与スケジュールどおりに必要な全身暴露を達成するために調整されるように（例えば、数日ほどの短期間の暴露の場合は血流に約１００μＭ、数カ月ほどの中期間の暴露の場合は約１～約１０μＭ、１年以上の長期暴露の場合は約１μＭ以下）、吸収の標準的な薬物動態学的試験によって導かれる可能性がある。

ＨＸ化合物の二塩基塩形態は約５より大きいｐＨを有する溶液に存在するのに対し、ｐＨ＜５ではＨＸ化合物は自発的にそのラクトン型に変換する。二塩基塩形態は水媒体に極めて溶解しやすいのに対し、ラクトン型は水媒体に溶解しにくいため、前者は後者と比較してＧＩ管においてより高いバイオアベイラビリティを示す。したがって、ＧＩ管のｐＨ値を適切に補償するために剤形を最適化することは、おそらくバイオアベイラビリティに影響を及ぼす最も重要なパラメータである。例えば胃は、ｐＨ＜４の場合、溶解したＨＸ化合物が不溶性のラクトン型に急速に変換される。ラクトン型になると、ＨＸ化合物はヒステリシス及び吸収性塩形態への再鹸化の障害を示し、下流でのバイオアベイラビリティを遅延又は抑制する。

しかしながら、管腔内ｐＨ値は胃での強酸性から十二指腸での約ｐＨ６に急速に増加し、更に小腸でのｐＨ６から回腸末端での約ｐＨ７．４に増加し、ｐＨが盲腸で５．７に下がった後、徐々に増加して直腸でｐＨ６．７になる。［ｐｕｂｍｅｄ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／１０４２１９７８／．］したがって、好ましいｐＨ値が溶解可能な吸収性二塩基塩形態でのＨＸ化合物の遊離を促進する腸内遊離を達成するために、製剤処方の分野における標準的な手段を適用することによって、バイオアベイラビリティを最適化することができる。

１２カ月の治療計画の場合、これらのデータは、約１μＭ（１ｍｇ／Ｌ）の目標濃度が血流中で達成されなければならないことを示す。７０ｋｇの成人の場合、血液量が体重の約１０％を占める（すなわち約７Ｌ）が、これは１日当たり７ｍｇのＨＸ化合物の吸収を意味する。バイオアベイラビリティが投与されるＨＸ化合物の１％に制限される場合、この目標血中濃度を達成するために経口で（ＰＯ）７００ｍｇのＨＸ化合物が１日に必要になる。

しかしながら、吸収を投与量の５０％に最適化することによって、必要なＰＯ投与量は１日当たり約１５ｍｇに減る。短期の治療計画（すなわち３カ月）の場合、これらのデータは、約１０μＭ（１０ｍｇ／Ｌ）の目標血中濃度が達成されなければならないことを示す。バイオアベイラビリティを１％と仮定すると、ＰＯで７ｇのＨＸ化合物が１日当たり必要となるのに対し、５０％のバイオアベイラビリティでは必要な投与量が１日当たり約１５０ｍｇに減る。

本発明の一態様では、意図される経口投与用のＨＸ化合物は通常、無菌水性医薬組成物に溶解又は分散させて使用される。滅菌水道水又は別のソースからの滅菌水を使用することができる。

ＨＸ化合物は通常、意図される水性医薬組成物に約０．１～約２０％（ｗ／ｖ）で存在する。より好ましくは、かかる濃度は約０．２～約１０％（ｗ／ｖ）であり、最も好ましくは、濃度は約０．２～約５％（ｗ／ｖ）である。したがって、例えば上記の１日当たり１５０ｍｇの投与量は、５％（ｗ／ｖ）水溶液を３ｍＬ使用することによって容易に達成される可能性がある。

ジナトリウムローズベンガルなどの様々なＨＸ化合物のバイオアベイラビリティはよく特徴付けられていない。譲受人の１人により委託された研究は、ジナトリウムローズベンガルのバイオアベイラビリティが１％未満であると、^１４Ｃ‐ＲＢ水溶液を経口でマウスに与えた放射性標識試験に基づいて結論付けた。胃ではｐＨ値が＜４であり、ＨＸ化合物がラクトン型になる可能性が高い。胃でのラクトンへの変換はＨＸ化合物を破壊しないが、かかるラクトン型への変換は腸での吸収に必要な可溶性塩形態への再変換に対する速度論的及び／又は熱力学的障壁となる可能性がある。

以下で考察されるＡｐｃ^Ｍｉｎマウスの研究は、４ｍｇ／ｍＬを飲用水で不断に消費したマウスが疾患の発症を阻止したことを示した。したがって、それらのＡｐｃ^Ｍｉｎマウスは、８ｍｇ／１０ｇ／日＝８００ｍｇ／ｋｇ／日を消費したことがわかる。かかる量は、そのような投与量に耐性があることを示す毒物学データと一致する。したがって、ローズベンガルを食品着色料（食品赤第１０５号）として研究しているＩｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉ， ７７：２７７－２８１（１９８６年）は、Ｃ５７ＢＬ６Ｎマウスに９７０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で２年間持続的に不断給餌されたローズベンガルが良好な耐容性を示すことがわかった。以前使用された静脈注射（ＩＶ）肝臓診断薬は、標準的な６０ｋｇの成人の場合の１．９ｍｇ／ｋｇに等しい、１１２ｍｇのローズベンガルをボーラスとして送達したところ、これが病的状態をもたらすという報告はされていない。

意図される医薬組成物の一般的特性

組成物は、マンニトール及びブドウ糖のような糖などの等張化剤（又は張性調整剤）、プロピレングリコール、グリセロール及びソルビトールなどのＣ_３‐Ｃ_６ポリヒドロキシ化合物、塩化ナトリウムや塩化カリウムなどの等張塩、並びに／又はクエン酸、リンゴ酸、酢酸、その他の食品酸及びフレーバー及び軽度の緩衝（５ｍｍｏｌ未満の緩衝剤）のために提供され得るそれらの塩以外の緩衝剤を含んでいないことが好ましい。胃及び下部ＧＩ管は、更なる塩及び／又は緩衝剤が必要とされないように中を流れる物質に適切な張性を与えるようにうまく適合されている。１つ以上のよく知られている薬学的に受容可能な矯味剤又はフラボラントが、組成物の飲用性を高めるために最大約５重量％で存在する可能性がある。

液体医薬組成物

ＧＩ管内又は体の他の部分にある固形癌性腫瘍を治療するために、固形癌性腫瘍治療量のＨＸ化合物を含有する水性液体医薬組成物を、飲むことによって又は強制経口で投与することができる。治療対象の腫瘍が口腔内にある場合、かかる水性液体医薬組成物でうがいをし、口腔内に保持した後、吐き出すことができる。鼻咽喉癌などの腫瘍の場合、ネティポットを使用して液体を鼻腔に投与し、ネティポット装置の説明書に従って除去する。

固形薬剤組成物により送達されるＨＸ化合物の量は、水性組成物からのものと実質的に同じである。これは、特にＨＸ化合物放出が十二指腸で又は直腸側にこれを過ぎた辺りで行われ、ｐＨ値に敏感な放出コーティングが、胃におけるＨＸ化合物のラクトン型の制御されない形成を回避できるように、十二指腸又は腸の管腔内ｐＨ値で固形薬剤に利用される場合である。

ＨＸ化合物の水性媒体への最大溶解度をもたらし、生体組織との適合性を保証するために、薬学的に受容可能な水性希釈剤のｐＨ値が約５～約９であることが好ましい。特に好適なｐＨ値は約５～約８であり、より好ましくは約６～約７．５である。これらのｐＨ値において、ハロゲン化キサンテンは一般に、低いｐＨ値で生じるラクトンではなく二塩基形態のままである。

ローズベンガルなどのＨＸ化合物は、ｐＫ_ａ値が２．５２及び１．８１である二塩基である。いくつかの意図されるハロゲン化キサンテンのためのｐＫ_ａ値決定が、Ｂａｔｓｉｔｅｌａ ｅｔ ａｌ．， Ｓｐｅｃｔｒｏｃｈｉｍ Ａｃｔａ Ｐａｒｔ Ａ ７９（５）：８８９－８９７（２０１１年９月）に見られる。

ローズベンガルジナトリウムなどのＨＸ化合物の経口送達のための液体医薬組成物は、口、喉頭及び食道の固形癌性腫瘍を治療又は予防するのに特に有用である可能性があるが、かかる使用は、ＨＸ化合物が一般に接触したあらゆる組織を染色するため見苦しい可能性がある。結果として、固形のＨＸ化合物含有医薬組成物も本発明の別の態様として意図される。

固体医薬組成物

ＲＢ若しくはジナトリウムＲＢなどのＨＸ化合物、又はＲＢラクトンなどのＨＸ化合物ラクトンが、腫瘍の部位の背側の組織に結合する無駄なＨＸ化合物を少なくし、組織染色を見えにくくするように、胃を通過し（口より近い）癌の部位の比較的近くでＨＸ化合物を放出するために腸溶性被覆されている、経口投与用の固体医薬組成物で投与されることが更に意図される。ＨＸ化合物は一般に、固体希釈剤マトリックス中に溶解若しくは分散されるか、又は固体希釈剤マトリックス上に分散される。

哺乳類の体内における経口投与された固体医薬品の溶解に作用するいくつかの要因がある。それらの要因は、ＧＩ管に沿った様々な場所における薬剤の滞留時間、粒子サイズ、口から肛門にかけて遭遇する可能性がある体液への薬剤の個々の成分の溶解度、様々なコーティング層がある場合に薬剤に施される順序、及び特定のコーティング層が溶解できるｐＨ値である。

例えば強酸性の胃環境（絶食状態でｐＨ１．５～２；摂食状態でｐＨ３～６）は、十二指腸で約ｐＨ６に急速に上昇し、小腸に沿って増加して回腸末端でｐＨ７．４になる。盲腸におけるｐＨ値はｐＨ６よりやや下落し、結腸で再度上昇して直腸でｐＨ６．７に達する［Ｈｕａ， Ｆｒｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １１：Ａｒｔｉｃｌｅ ５２４（２０２０年４月）］。ヒトの胃のｐＨ値を有する水溶液に混入されたジナトリウムＲＢの溶液の観察によって、混合剤の急速な混濁及び以前の可溶性ジナトリウムＲＢの恐らくはラクトン型への凝集が明らかになった。

胃通過は、絶食状態で０から２時間に及ぶ可能性があり、摂食状態で６時間まで延びる可能性がある。一般に、小腸の通過時間は比較的一定で約３～４時間と考えられるが、健常人で２～６時間に及ぶ可能性がある。結腸通過時間は非常にばらつきがある可能性があり、６～７０時間の範囲が報告されている［Ｈｕａ， Ｆｒｏｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １１：Ａｒｔｉｃｌｅ ５２４（２０２０年４月）］。

ＧＩ管内の特定の場所への薬剤の予測可能な放出に有用な１つのアプローチは、上記のような予め選択されたＧＩ管ｐＨ値で溶解又は崩壊するｐＨ特異的なコーティング及びマトリックスに依存する。結腸内又はその付近での放出に特に好ましい中性又は弱アルカリ性のｐＨ値を使用して、小腸の遠位部分又は結腸において薬物を放出する。

下の表は、結腸ターゲティング（局所治療）のために単独又は組み合わせて使用されてきたｐＨ依存ポリマーコーティングの一部の例を示しており、一部のメタクリル樹脂（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）としてドイツのエッセンにあるＥｖｏｎｉｋ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， ＡＧから市販されている）、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ；Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）としてデラウェア州ウィルミントンにあるＤｕＰｏｎｔ及びＢｅｎｅｃｅｌ（登録商標）としてデラウェア州ウィルミントンにあるＡｓｈｌａｎｄ， Ｉｎｃ．から入手可能）誘導体を含んでいる。また、特定のｐＨ値範囲での放出をトリガすることに加えて、腸溶性コーティングは、過酷なＧＩ管環境（例えば、胃液、胆汁酸、及び微生物分解）から取り込まれた活性薬剤を保護することができるとともに、治療効率を高めるために薬物の持続及び遅延放出特性を生み出すことができる。

下の表は、いくつかの市販の腸溶性コーティングポリマー及びそれらのメーカーの「公表ｐＨ放出」値を示している。「公表ｐＨ放出」値は、全ての組成物又は環境に対して絶対的というわけではなく、溶解又は崩壊のための本明細書に記載のｐＨ値はそれらの公表値に基づいている。

結腸癌の局所治療については、従来の非標的療法は望ましくない副作用があり、標的部位に到達する前の薬物の体内吸収により有効性が低いため、結腸標的薬物送達システムが積極的に追及されてきている。Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｉｏｐｈａｒｍ． ７４：３１１－３１５（２０１０年）は、緩衝剤を含むＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓのアルカリ性水溶液を内層に、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓの有機溶液を外層に使用することによる二重コーティングアプローチを採用し、７より大きいｐＨ値での薬物溶解を加速させた。その後、Ｖａｒｕｍ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｉｏｐｈａｒｍ． ８４：５７３－５７７（２０１３年）は、この二重被覆システムのヒトにおけるｉｎ ｖｉｖｏパフォーマンスを評価し、主に下部腸管で二重被覆錠剤のより着実な崩壊を示した。

Ｈａｓｈｅｍ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ． ３：４２０－４３４（２０１３年）は、プレドニソロンの結腸送達のための時間依存システム及びｐＨ依存システムを組み合わせたマイクロスフィアを開発した。Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓとエチルセルロースを組み合わせて使用することによって、腸上部での早過ぎる薬物放出を防ぎながらより優れた結腸薬物送達を達成した。

Ｅｕｄｒａｃｏｌ（登録商標）は、薬物放出が遅延して均一な、結腸への標的薬物送達を行うマルチユニット技術の別の例である。このシステムは、ペレットをＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＬ／ＲＳ及びＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳ３０Ｄで被覆することに基づいており、ｐＨ及び時間依存的に結腸特異的な薬物放出を行う［Ｐａｔｅｌ， Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ． ８：１２４７－１２５８（２０１１年）］。

小腸を標的にする１つの組成物は、約６０～約９５重量％のアクリル酸又はメタクリル酸のフリーラジカル重合されたＣ_１‐Ｃ_４アルキルエステル、及び約５～約４０重量％の酸性基をアルキルラジカルに含む（メタ）アクリル酸モノマーから構成される１又は複数の（メタ）アクリル酸コポリマー層で被覆されている微粒子ローズベンガル（ＲＢ）で被覆された糖／スクロースビーズの希釈剤マトリックスを含む。

特に適している（メタ）アクリル酸コポリマーは、約１０～約３０重量％のメタクリル酸メチル、約５０～約７０重量％のアクリル酸メチル、及び約５～約１５重量％のメタクリル酸を含む（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳタイプ）。同様に適しているのは、約２０～約４０重量％のメタクリル酸及び約８０～約６０重量％のメタクリル酸メチルの（メタ）アクリル酸コポリマーである（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓタイプ）。「（メタ）アクリル酸」という語は、アクリル酸モノマー及びメタクリル酸モノマーの一方又は両方を使用できることを意味するのに使用されている。

これらのコーティングポリマーは、粒子が胃から出る前のＨＸ化合物放出をほとんど許可しない。十二指腸内の流体のｐＨ値は一般に約６であり、回腸に向かって約７．４に上昇する。したがって、癌性腫瘍が胃に近い場合、より多量の遊離カルボン酸基を有するコーティングポリマーが使用されるのに対し、腫瘍が回腸寄りにある場合、より少量の酸性基を有するポリマーを使用することができる。

通常の錠剤又はトローチ剤を、ラクトース（２０％）及び活性成分（８０％；ＨＸ化合物）を高速混合器（ドイツのオスナブリュックにあるＤＩＯＳＮＡ社のタイプＰ１０）で混合した混合物によって調製することができる。ポビドン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＧｍｂＨ、ブフス、スイス）などの賦形剤ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を含有する水溶液を、均一な組成物が得られるまで少しずつ添加する。湿潤粉体混合物をスクリーニングする。その後、よく知られているようにこれから錠剤を作り、乾燥させる。

その後、結果として生じた錠剤又はトローチ剤は、好ましくはしばしば流動床装置を使用して保護ポリマーフィルムで被覆される。フィルム形成ポリマーが通常、可塑剤と混合され、適切なプロセスによって薬剤を放出する。フィルム形成剤はこの場合、溶液又は懸濁液の形態である可能性がある。フィルム形成のための賦形剤は、同様に溶解又は懸濁される可能性がある。有機溶媒若しくは水性溶媒、又は分散剤を使用することができる。分散を安定させるために安定剤を使用することもできる（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０又はその他の適当な乳化剤若しくは安定剤）。

離型剤の例は、グリセロールモノステアレート又は他の適当な脂肪酸誘導体、ケイ酸誘導体若しくはタルクである。可塑剤の例は、プロピレングリコール、フタル酸塩、ポリエチレングリコール、セバシン酸塩又はクエン酸塩、及び前述し文献に記載されたその他の物質である。

別の好適な薬剤の種類は、水溶性のカプセル又はブリスターであり、カプセルの水又は体液への溶解又は崩壊の際にＨＸ化合物を素早く放出する１つ以上のポリマー樹脂層で覆われる、ローズベンガルジナトリウム又はローズベンガルラクトンなどのＨＸ化合物の複数の粒子を含有する。カプセルは通常、ゼラチンから作られており、ジェルキャップと呼ばれることが多い。ゼラチンは動物製品である。ベジタリアンカプセルは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）で作られることが多い。

一部の実施形態では、ＨＸ化合物は、形が概ね球状の粒子を形成するために１つ以上のポリマーのコートが直接積層される。そのような粒子はビーズと呼ばれることが多い。好ましい態様では、粒子（ビーズ）は、約９０重量パーセントが２０メッシュの篩（開口＝８５０μｍ）スクリーンを通過し、約９０重量％が８０メッシュの篩（開口＝１８０μｍ）スクリーン上に保持される大きさとされる。

例示的なｐＨ値に敏感なコーティングポリマー樹脂を以上で考察した。例示的なｐＨ値に鈍感なコーティングポリマー樹脂を以上で考察した。コーティングポリマー樹脂のｐＨ値感度は、以上で考察したようなＧＩ管に沿って生理学的に存在するｐＨ値という観点から理解されるべきである。

他の実施形態では、小さい概ね球状のコアである、糖／デンプン種子などの小さいペレット、ノンパレイユ又は顆粒が、ＨＸ化合物の１つ又は複数の層及びポリマーコーティングの１つ以上の層で被覆される。例示的な糖／デンプンコアは、約４０メッシュの篩（４２５μｍ開口）スクリーンから約５０メッシュの篩（３００μｍ開口）スクリーンを通過し、無水ベースで計算して６２．５パーセント以上９１．５パーセント以下のスクロースを含有し、残りが主としてデンプンから構成される糖球体ＮＦである。（ＵＳＰ ＮＦ １９９５ ２３１３）。

具体例では、１００キログラム（ｋｇ）量のジナトリウムローズベンガル、７．１ｋｇ量の架橋カルボキシメチルセルロース（好ましくはクロスカルメロースナトリウムＮＦ）、及び１１．９ｋｇ量のデンプンＮＦをそれぞれ二分し、２つの同じバッチを形成するために３つの成分を混合する。バッチのそれぞれをフィッツパトリックミルなどのミルを使用して８０メッシュスクリーンを通して粉砕する。次いで２つの粉砕したバッチを、混合物を形成するために混ぜ合わせ、当業者によく知られている認められた品質保証検査法に従って混合物の組成を検査する。

その後、ジナトリウムローズベンガル混合物を３つの等しい部分に分け、第１の部分を全体のままとし、第２及び第３の部分をそれぞれ５０パーセント、３０パーセント及び２０パーセントのロットに分割する。２５．６ｋｇ量の４０～５０メッシュ糖／デンプン種子（例えば糖球体ＮＦ）をステンレス鋼コーティングパンに入れる。８０リットル（Ｌ）量の５パーセントのポビドン／ＩＰＡ溶液を粒子に噴霧するために用意する。

コーティングパンは糖球体から始まり、その上にポビドンのアルコール溶液の塗装（１回につき約０．１７３ｋｇ）を噴霧し、またその上に第１の部分（全体のままの部分）からジナトリウムローズベンガル混合物の塗装（約０．３２ｋｇ）を振りかける。振りかけは標準的な振りかけ器を使用して行う。噴霧及び振りかけステップは、混合物の第１の部分が糖球体に塗装されて一群の部分的に被覆された球体を形成するまで継続される。

次いで部分的に被覆された球体を２つの同一のロットに分け、各ロットをコーティングパンに入れる。２つのロットのそれぞれに別々に、ポビドン／ＩＰＡ溶液の噴霧及び５０パーセントロットに分割されているジナトリウムローズベンガル混合物の振りかけを、５０パーセントロットが球体に塗装されるまで継続する。５０パーセントロットの塗装の後に、球体を必要であれば２５メッシュスクリーンを使用してスクリーニングすることができる。

ポビドン／ＩＰＡ溶液の噴霧及び３０パーセントロットに分割されているジナトリウムローズベンガル混合物の振りかけを開始し、３０パーセントロットが球体に塗装されるまで継続する。被覆された球体を２５メッシュスクリーンを使用して再度スクリーニングすることができる。

ポビドン／ＩＰＡ溶液の噴霧及びジナトリウムローズベンガル混合物の振りかけを、２０パーセントロットに分割されている混合物を使用して、２０パーセントロットが球体に塗装されるまで継続する。プロセスのこの時点で、ジナトリウムローズベンガル混合物の全量が球体に塗装され、約５０ｋｇの５パーセントのポビドン／ＩＰＡ溶液が球体に塗装されている。

７．５パーセントのポビドン／ＩＰＡ溶液を用意し、密封剤として球体に塗装する。密封した球体を約１時間乾燥機で乾燥させ、重さを量り、約１２２°Ｆ（５０℃）のオーブンに２４時間入れる。乾燥後、球体を２０メッシュスクリーン及び３８メッシュスクリーンでスクリーニングして即時（遅延と比較して急速又は高速）放出粒子を形成する。

以上で考察したＨＸ化合物含有球体又はそのカプセル（若しくはブリスター）はまた、ＧＩ管に放出されると、ｐＨ値が所望のＧＩ管位置のものでない限り球体がその活性成分であるＨＸ化合物をその周囲に提供しないように、既に考察したｐＨ値に敏感な腸溶性コーティングポリマーで被覆される可能性がある。

ＨＸ化合物の放出位置を制御する別の方法は、以上で考察した球体（ＨＸ被覆粒子）を、ＨＸ化合物の球体からの放出が制御され６～１０時間にわたって放出されるように、球体の表面に塗装されたポリマー樹脂の溶出制御被膜で更に被覆することである。この目的で使用される物質は、これらに限定されるわけではないが、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ニトロセルロース、カルボキシメチルセルロース、並びにエタクリル酸及びメタクリル酸のコポリマー（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標））、又は任意の他のアクリル酸誘導体（Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）など）である可能性がある。

また、腸溶性コーティング剤が、単独で、又は上記のｐＨに鈍感なコーティングと組み合わせて使用される可能性もある。これらの材料には、これらに限定されるわけではないが、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース及び全てのセルロースエーテルのフタル酸エステルが含まれる。また、アクリル酸誘導体（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標））のフタル酸エステル、又は酢酸フタル酸セルロース。

これらのコーティング剤は、コーティング面に約１．０％（Ｗ／Ｗ）～約２５％（Ｗ／Ｗ）の量で用いられる可能性がある。好ましくは、これらのコーティング剤は約８．０～約１２．０パーセント（Ｗ／Ｗ）で存在する。

賦形剤

薬学において慣習的な賦形剤を、剤型の製造においてそれ自体が知られている方法で使用することができる。これらの賦形剤は、コア又はコーティング剤中に存在する可能性がある。

ポリマー

ＨＸ化合物を糖顆粒又は球体に付着させるのに役立つ接着剤として使用される高分子材料は、ＨＸ化合物のコーティング層が使用される場合に賦形剤と見なされる。そのようなポリマーの例は、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、及びヒドロキシプロピルセルロースなどの他の水溶性の薬学的に受容可能なフィルム形成ポリマーである。

乾燥剤（非粘着剤）

乾燥剤は次のような特性を有する：比表面積が大きいこと、化学的に不活性であること、流動性があること、及び微粒子を含むこと。これらの特性によって、乾燥剤は、極性コモノマーを官能基として含有するポリマーの粘着性を低下させる。乾燥剤の例は、アルミナ、酸化マグネシウム、カオリン、タルク、微粒子シリカ、硫酸バリウム及びセルロースである。

崩壊剤

経口固形製剤にその分解を助けるために崩壊剤を添加する。崩壊剤は、水分と接触したときに固形製剤の急速な崩壊を引き起こすように処方される。崩壊は通常、溶出プロセスの第１のステップと見なされる。例示的な崩壊剤は、クロスカルメロースナトリウム、内部架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン（クロスポビドン）及びデンプングリコール酸ナトリウムを含む。

離型剤

離型剤の例は、脂肪酸又は脂肪アミドのエステル、脂肪族長鎖カルボン酸、脂肪アルコール及びそのエステル、モンタンワックス又はパラフィンワックス及び金属石鹸；特に言及すべきはグリセロールモノステアレート、ステアリルアルコール、グリセロールベヘン酸エステル、セチルアルコール、パルミチン酸、カルナウバワックス、密ろうなど。通常の量の割合は、コポリマーに対して０．０５～５重量％、好ましくは０．１～３重量％の範囲である。

製薬的に常用の他の賦形剤

ここで言及すべきは、例えば安定剤、着色剤、抗酸化剤、湿潤剤、顔料、光沢剤などである。賦形剤は通常、加工助剤として使用され、確実で再現可能な製造プロセスと良好かつ長期の保存安定性とを保証することが意図される。製薬的に常用される別の賦形剤は、ポリマーコーティングに対して０．００１～１０重量％、好ましくは０．１～１０重量％の量で存在することがある。

可塑剤

可塑剤として適当な物質は一般的に１００～２０，０００の分子量を有し、分子中に１個以上の親水基、例えばヒドロキシル、エステル又はアミノ基を有する。クエン酸塩、フタル酸塩、セバシン酸塩、ヒマシ油が適当である。更なる適当な可塑剤の例は、クエン酸アルキル、グリセロールエステル、フタル酸アルキル、セバシン酸アルキル、スクロースエステル、ソルビタンエステル、セバシン酸ジブチル及びポリエチレングリコール４０００～２０，０００である。好ましい可塑剤はクエン酸トリブチル、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリエチル、セバシン酸ジブチル及びセバシン酸ジエチルである。使用量は（メタ）クリル酸コポリマーに対して１～３５重量％、好ましくは２～１０重量％である。

全身バイオアベイラビリティを最適化すること

本明細書に記載の固体医薬組成物はＧＩ管内の病変組織への直接送達を最適化することに関連して考察されているが、送達部位及び送達速度を制御するこれらのアプローチは、送達部位及び速度を制御することに基づいて全身摂取のバイオアベイラビリティを最適化することに同様に適用可能である。

併用治療

腫瘍症状におけるＨＸ化合物との併用治療に有用な第２の治療薬は、特別な全身抗癌剤とも見なされ得る免疫チェックポイント阻害剤である。免疫チェックポイント阻害剤は、Ｔ細胞などの免疫細胞及び一部の癌細胞により作られる特定のチェックポイントタンパク質に結合しこれを遮断する薬剤である。遮断されない場合、それらのタンパク質は免疫反応を阻害し、免疫反応を抑制するのを助けＴ細胞が癌細胞を殺さないようにする。それらの免疫チェックポイントタンパク質を遮断することは、免疫系に対する「ブレーキ」を解除してＴ細胞が活性化し癌細胞を殺すことを可能にする。

このような免疫チェックポイント阻害剤は、適応免疫系への各作用を介してＨＸ化合物と相加的又は相乗的に機能することができ、ＨＸ化合物は、癌細胞の死骸により開始される下流シグナル伝達及びＳＴＩＮＧ活性化によって適応免疫系の抗腫瘍機能を活性化する働きをするのに対し、免疫チェックポイント阻害剤は、同じ適応免疫系成分でかかる成分のダウンレギュレーションの抑制を介して機能する働きをする。

有用な免疫チェックポイント阻害剤は、好ましくはその投与がかかる自己認識Ｔ細胞の作用を遮断するヒト又はヒト化モノクローナル抗体又はその結合部分である。かかる遮断によって免疫系は癌細胞を異物として認識し、かかる癌細胞を体内から除去するのを助けることができる。

例示的な免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ‐４活性を遮断することによって免疫系のダウンレギュレーションに対抗し、これによって癌に対するＴ細胞応答を増強するように設計されている抗ＣＴＬＡ‐４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４）モノクローナル抗体であるイピリムマブ及びトレメリムマブを含む。同様に、ピディリズマブ、ニボルマブ、及びペムブロリズマブなどのモノクローナル抗体は、免疫系のダウンレギュレーションに対抗し、癌性細胞に対するＴ細胞応答を増強するためにＰＤ－１（プログラム細胞死１）受容体に結合する。ＰＤ－１受容体用の免疫チェックポイントタンパク質リガンド（ＰＤ－Ｌ１）を標的にする３つの抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ及びデュルバルマブである。ＰＤ－Ｌ１に対するＢＭＳ‐９３６５５９及びＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）などの、ＰＤ－１受容体リガンドＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に対する抗体に関する最初の研究もまた、免疫系のダウンレギュレーションの抑制及び癌に対する増強されたＴ細胞応答を示す。

チェックポイント阻害剤のような活性を有する抗体の別のグループは、メモリー及びエフェクターＴリンパ球の増殖を刺激することによって、癌性細胞に対するＴ細胞媒介性免疫反応を刺激するために、細胞表面受容体ＯＸ４０（ＣＤ１３４）と免疫反応する。かかる例示的なヒト化抗ＯＸ４０モノクローナル抗体は、現在上記文献においてｇｓｋ３１７４９９８（ＩｇＧ１）、ポガリズマブ（ＭＯＸＲ０９１６）、タボリキシズマブ（ＭＥＤ１０５６２）、及びＰＦ－０４５１８６００（ＰＦ－８６００）と表されるヒト抗ＯＸ４０ ＩｇＧ２抗体と呼ばれているものを含む。抗ＯＸ４０抗体の活性が上記の免疫チェックポイント阻害剤により示されたものと非常に似ているため、抗ＯＸ４０モノクローナル抗体は、この発明の目的のために免疫チェックポイント阻害剤と見なされる。

無傷モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２及びＦｖ領域などのそれらのパラトープ含有部分（結合部位含有部分）、並びに一本鎖ペプチドの抗体結合配列は、免疫チェックポイントタンパク質阻害剤として有用である可能性がある。

免疫チェックポイント阻害剤は、個々のラベルの指示に従って投与される。無傷のチェックポイント阻害モノクローナル抗体は人体における半減期が約１～３週間である［例えば、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ）終末相ｔ_１／２＝１５．４日；添付文書１２／２０１３；Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペムブロリズマブ）終末相ｔ_１／２＝２３日；添付文書０３／２０１７、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（アテゾリズマブ）終末相ｔ_１／２＝２７日；添付文書０５／２０２０、そして一本鎖オリゴ又はポリペプチドは、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期がより短い傾向がある。

ＲＢジナトリウムなどのＨＸ化合物の第１の抗癌剤が経口投与され、チェックポイント阻害剤などの第２の抗癌剤が非経口的に、一般的にはＩＶ注射によって投与されるため、２つの薬剤は別々の組成物中にある。両タイプの抗癌剤を互いに数分から約８時間以内に投与することが好ましい。より好ましくは、両者は他方の１時間未満に投与される。

本明細書で使用するとき、「投与」は治療計画の始まりを意味するのに使用される。したがって、液体、錠剤又はその他の経口製剤を飲み込むことは、ＩＶフローが始まるのと同様、治療計画の始まりである。

第２の抗癌剤がモノクローナル抗体などの免疫チェックポイント阻害剤である場合、両抗癌剤は以上で考察したように投与されることが好ましいが、ＨＸ化合物及び第２の抗癌剤免疫チェックポイント阻害剤は、ほぼ同時に投与されるか、又は第２の抗癌剤免疫チェックポイント阻害剤の投与がＨＸ化合物を投与する前後約１カ月以内に始まるなど前後して投与される可能性がある。より好ましくは、２つの抗癌剤は同時に投与されるか、又は第２の抗癌剤免疫チェックポイント阻害剤がＨＸ化合物の前後数日以内に投与される。

研究

薬学的に受容可能なキャリア又は希釈剤である殺菌した水道水（オートクレーブ滅菌した後に０．２μｍフィルタに通された）に溶解した、例示的なＨＸ化合物であるＲＢの化学予防効果及び化学治療効果を、Ａｐｃ^Ｍｉｎマウスモデルを用いて評価した。このモデルは、自然発生多発性腸腫瘍（Ｍｉｎ）を引き起こし得るマウス大腸腺腫用ポリポーシス（Ａｐｃ）遺伝子における第１８番染色体の常染色体優性突然変異を有する［Ｓｕ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２５６：６６８－６７０（１９９２年）］。この遺伝子はヒトＡｐｃ遺伝子と相同であり、このモデルはヒト結腸直腸癌（腺癌）の散発型及び遺伝型の両方にとって有用な代用となる。

Ａｐｃ^Ｍｉｎマウスは、経口投与される（不断に）ローズベンガルジナトリウム水溶液で治療されたのに対し、対照群の雌マウスは無治療（殺菌した水道水）とした（両群ともｎ＝８）。治療は約５週齢（症状の発現前）から始め、治療マウスには殺菌した水道水で４ｍｇ／ｍＬのＲＢを経口摂取させ、対照群には殺菌した水道水を添加物なしで摂取させた。治療群マウスは（３０週齢まで）無症状であったのに対し、対照群は１６週で症状を示し始めた。対照群の平均生存期間＝１９．６±０．６週（ＳＥ）；治療群マウスの平均生存期間は定まらない。これらのデータは図１に示されている。

８匹の治療されたＡｐｃ^Ｍｉｎマウスは、殺菌した水道水に６週間戻され、腸内出血を起こした。次いで８匹のマウスを無作為に選び４匹ずつ２つの群に分けた。１つの群は１ｍｇ／ｍＬのＲＢジナトリウム水溶液を経口投与して治療したのに対し、無治療対照群マウス（両群ともｎ＝４）は水道水のみで処置した。症状が発現したときに治療を開始した。対照群の平均生存期間＝８．９±０．８週に対し、ＲＢジナトリウム治療群の生存期間＝１２．３±０．５週。これらのデータは図２に示されている。

生存期間

この研究の化学予防段階における対照群マウスは、平均生存期間が１９．６±０．６週齢（１６．４～２０．４週の範囲）であった。これに対し、経口でのＲＢジナトリウムによる継続的な治療を受けた全てのマウスは、この研究段階の期間（３０週齢まで）を生き延びた。これらの結果を図１に示す。これらのデータのログランク統計値（１５．８）は、２つの群の生存期間の差が非常に有意である（Ｐ＜０．００１）ことを示す。

この研究の後続の化学治療段階の対照群マウスは、疾患発症後の平均生存期間が８．９±０．８週（８．１～１１．３週の範囲）であった。これに対し、経口でのＲＢジナトリウムによる継続的な治療を受けたマウスは、１２．３±０．６週（１１．３～１３．４週の範囲）の平均生存期間を示した。これらの結果を図２に示す。ログランク統計値（５．７）は、これらの生存期間の差が有意である（Ｐ＝０．０１７）ことを示す。

罹患及び死亡

この研究の化学予防段階では、全ての対照群マウスは約１００日齢までに便潜血（ＦＥＯＢ）が陽性であったのに対し、ＲＢ治療群マウスはいずれもＦＥＯＢ結果が陽性であること（ＦＥＯＢ陽性）を示さなかった。対照群のマウスは約１００日齢後に体重が不変であったのに対し、治療群のマウスは研究の間中ずっと体重が増え続けた。

３匹の対照群マウスが約１１５日齢で病気のように見えたとき最初の明らかな罹患が観察され、この群の１匹の重症のマウスはこの時点で安楽死された（以下の表Ａ）。次の数週間で対照群マウスの残りは発病し、安楽死されたり死んでいるのが見つかったりした。研究のこの段階（３０週齢に対する２５週の全期間）のどの時点でも、ＲＢを摂取したどのマウスも病気のように見えずまた死ななかった。

以下の表Ａは、化学予防研究の罹患及び死亡の概要を提供する。対象動物の日齢（ｄ）が示されている。研究中の対照及び治療群マウスについて平均体重及び標準偏差が示されている。「Ｓｙｍ」と表示された欄は、症状のある（すなわち貧血症や衰弱を示している）動物の数を各群の示された日齢に示す一方、「Ｄｅｃ」は死んだ動物の累積数を示し、「Ｓｕｒ」は生存しているマウスの数である。１００日齢までに、全ての対照群マウスはＦＥＯＢ陽性であったのに対し、治療群マウスはいずれも陽性結果を示さなかった。ＲＢジナトリウム治療は約５週齢（症状の発現前）から始めた。

この研究の化学治療段階の初期に、（合わせて８匹のうち）７匹のマウスがＦＥＯＢ陽性であった。対照群の３匹のマウスは８．１週で死んでいるのが見つかり、この群の最後のマウスは１１．３週で安楽死された。治療群マウスは、治療の１１．３、１１．９、１２．６及び１３．４週後に重症化したときに安楽死された。

レトロスペクティブ分析

比較のため、Ｂ６Ｃ３Ｆ１マウスへの０．１２５又は０．５％のＲＢジナトリウムの飲用水による長期の経口投与研究において報告された生存期間データを、フィッシャーの直接確率検定を使用して分析した［オリジナルデータはＩｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉ， ７７：２７７－２８１（１９８６年）に示されている］。Ｂ６Ｃ３Ｆ１マウスは、雄ＣＨ３マウスと雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスとの交配種として生産される交雑株である。Ｂ６Ｃ３Ｆ１マウスは、自然発生新生物、特に肝腺腫及び癌の際立った傾向を示し［Ｈａｓｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｐａｔｈｏｌ ２６：４２８－４４１（１９９８年）］、国家毒性プログラム（ＮＴＰ）バイオアッセイプログラムについて行われたマウス発癌性評価に長年にわたり使用されてきた。これらの研究は、このマウスモードにおける自然発生腫瘍の背景発生率の非常に大きい歴史的対照群データベースを作成している。

８２週間に及ぶ０．５％ＲＢの継続的投与後の生存期間は、対照群と比べて治療群マウスについて統計的に有意な生存期間の延長を示した（雄についてＰ＜０．００１、９４％対５２％の生存期間；雌についてＰ＝０．００４、９０％対６４％）。０．１２５％ＲＢの場合の同様のデータ分析は、雄のマウスについて統計的に有意な生存期間の延長を示した（Ｐ＜０．００１、９２％対５２％の生存期間）が、雌のマウスについては示さなかった（Ｐ＝０．４、７４％対６４％）。２年間の試験の終わりの公表生存率と体重増加パターンは、長期研究においてこれらの同じ動物を使用する研究者を導くための対照群として用いられることがよくある［Ｃａｍｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｆｕｎｄａｍ Ａｐｐｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ５（３）：５２６－５３８（１９８５年６月）］。

考察

Ａｐｃ^Ｍｉｎモデルは、これらのマウスが異常な細胞増殖及び癌への転換を継続的に促進するＡｐｃ遺伝子の常染色体優性欠陥を有するがために、薬剤の化学予防又は化学治療特性の特に厳しい試験を意味する。Ａｐｃ腫瘍抑制遺伝子に誘起欠陥を有するヘテロ接合マウスは、自発的な腸腺腫形成（一般的に３０個を超える腸腺腫を発症する）を非常に起こしやすく、平均余命が約１２０日（すなわち１７週）である。これらのマウスは一般に貧血症になり、最終的に病変が増殖するとともに衰弱に苦しむ。このモデルには治癒の可能性がなく、孤発型の自然発生腫瘍と闘うというタスクが特に困難になる。

化学予防効果

この研究の化学予防段階におけるナイーブな対照群Ａｐｃ^Ｍｉｎマウスの生存期間（すなわち平均生存時間１９．６±０．６週齢）は平均余命と一致する。経口によるＲＢジナトリウムを用いた継続的治療を受けた全てのＡｐｃ^Ｍｉｎマウスが研究のこの段階の期間を（３０週齢まで；図１）生き延びたため、この群の生存時間を決定することは不可能である。ただし、ログランク検定を用いた統計分析は、２つの群の生存期間の差が非常に有意であることを示した。

これらの結果の差は、対照群マウスが１４週齢以内の腸内出血の発現及び約１６週齢から始まる明確な臨床疾患を示した罹患データによって裏付けられる。これに対し、治療群マウスは、研究期間の間中臨床症状を示さなかった。

体重増加の傾向は対照群における疾患発症を反映し、ＦＥＯＢ陽性反応の発現と同時に治療群から逸れていく。治療群動物の体重の継続的な増加は更に、これらの動物の健康全般の維持を示す。生存期間データと照らし合わせると、これらの結果は、ＲＢジナトリウム治療が疾患の発症と、腸内出血及び成長遅延を含むその症状とを抑制することに成功したことを示す。

この明らかな化学予防効果は、Ｂ６Ｃ３Ｆ_１マウスの長期経口投与研究からのデータのレトロスペクティブ分析で明らかなものと一致し［Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉ， ７７：２７７－２８１（１９８６年）］、ほぼ２年に及ぶ０．５％ＲＢの継続的投与後の報告された生存期間データは、治療群マウスについて統計的に有意な生存期間の延長を示した。より低い投与量（すなわち０．１２５％ＲＢ）では効果が小さいことは明らかであるが、雄及び雌はいずれも対照群に対して延長した生存期間を示した。これは、これらのマウスにおける化学予防効果の存在を示唆している。ただし、甲状腺腫瘍を除いて、この腫瘍が発生しやすいことで有名なモデルにおいて、腫瘍発生の有意な傾向は顕著でなく［Ｈａｓｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｔｏｘｉｃｏｌ． Ｐａｔｈｏｌ．， ２６：４２８－４４１（１９９８年）］、したがって、これらの生存期間の差の下地となる根拠を断定的に特定することは不可能である。

ＲＢジナトリウムの長期の経口投与は、３，５，３’‐トリヨードチロニン（Ｔ３）のチロキシン（Ｔ４）への変換の見かけの阻害及び甲状腺ペルオキシダーゼの潜在的阻害によってＢ６Ｃ３Ｆ１マウスのコロイド甲状腺腫と関連性がある［Ｋｕｒｅｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｔｏｘｉｃｏｌ． Ｓｃｉ．， １３：６１－７０（１９８８年）］が、ＲＢジナトリウムの雄のウィスター系ラットへの投与は甲状腺腫瘍形成や異常なホルモンレベルと関連性がなかった［Ｈｉａｓａ ｅｔ ａｌ．， Ｊｐｎ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ７９：３１４－３１９（１９８８年）；及びＫａｎｎｏ ｅｔ ａｌ．， Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ， ９９：１０７－１１１（１９９５年）］。したがって、Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．［Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉ，７７：２７７－２８１（１９８６年）］により観察された甲状腺腫の発生率の上昇は発見的であるが、他の種の重大な甲状腺リスクよりはむしろＢ６Ｃ３Ｆ１モデルの独自の特徴を示すことがある。

化学治療効果

疾患の進行は、症候性疾患の発現の後に治療を始めた場合、治療群動物と対照群動物とで質的に同様であった。

しかしながら、治療群マウスの生存期間は、対照群マウスの生存期間より大幅に改善した（約３８％の平均生存期間の延長を含む）。この効果の大きさは化学予防で観察されたものほど劇的ではないが、かかる反応は、両現象の根底にある共通の抗腫瘍メカニズムを示唆する。また、ＲＢ投与量は予防研究において投与された量の４分の１であった。

メカニズム

ＲＢのいくつかの腫瘍株との相互作用についての追加研究は、Ａｐｃ^ＭｉｎモデルにおけるＲＢの化学予防効果及び化学治療効果の根底にあるメカニズムについての可能性のある洞察を提供する。例えば、マウス肝細胞癌細胞［Ａ． Ｐｅｒｉａｓａｍｙ及びＰ．Ｔ．Ｓｏ， Ｐ．Ｔ．（Ｅｄｓ）， Ｍｕｌｔｉｐｈｏｔｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＩＩ． ＳＰＩＥ，ベリンガム，ワシントン州，ｖｏｌ．４６２０，ｐｐ．１４３－１４７（２００２年）のＷａｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， “Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｉｍａｇｉｎｇ ｏｆ Ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒｓ Ｕｓｉｎｇ Ｍｕｌｔｉｐｈｏｔｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ”及びＤ．Ｌ．Ｆａｒｋａｓ及びＲ．Ｃ．Ｌｅｉｆ，Ｒ．Ｃ．（Ｅｄｓ） Ｏｐｔｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｌｉｖｉｎｇ Ｃｅｌｌｓ Ｖ． ＳＰＩＥ，ベリンガム，ワシントン州，ｖｏｌ．４６２２，ｐｐ．１１２－１１８（２００２年）のＷａｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００２年）“Ｉｍａｇｉｎｇ Ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｕｓｉｎｇ Ｍｕｌｔｉｐｈｏｔｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ”］は、ＲＢの高選択的取り込み（ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び腫瘍同種移植片を用いた全身送達による）を示し、最終的に酸性のリソソームへの両性分子の不可逆的な蓄積をもたらす。本発明者らによる追加の組織培養研究は、ヒト乳癌（ＨＴＢ－１３３）及び多剤耐性小細胞肺癌（Ｈ６９ＡＲ）の細胞株への同様のリソソーム蓄積を示した。

いずれの場合にも、この蓄積は、ＲＢ媒介のリソソーム破裂が起こるとこれらの細胞の自己分解をもたらす。これに対し、正常細胞からＲＢを排除することは、同様の細胞内蓄積及び細胞毒性を防ぐように思われる。

同様のプロセスが、腸管内の初期の異形成又は新生物のリソソームへのＲＢジナトリウムの蓄積時にそれらの組織を選択的に破壊することによって、本研究において指摘した化学予防効果をもたらし得ると考えられる。これは特に、血流中の循環ＲＢ及び肝臓により継続的に排出され腸の異常組織に局所的に送達される高濃度の無傷のＲＢへのかかる病変の二重暴露を考慮する可能性が高いと思われる。

結論

この研究の肯定的な結果に基づくと、全身性ＲＢジナトリウムは、ＧＩ管の癌、結腸直腸癌に対する実質的な化学予防及び化学治療的有用性を示すように思われる。ＲＢジナトリウムの静脈注射肝臓診断薬［Ｄｅｌｐｒａｔ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ． Ｉｎｔｅｒｎ． Ｍｅｄ．， ３４：５３３－５４１（１９２４年）］としての、局所的眼科用診断薬［Ｓｊｏｇｒｅｎ， Ａｃｔａ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．（ｓｕｐｐｌ．２），１１：１－１５１（１９３３年）］としての、及び食用色素［Ｔａｎａｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｊｐｎ Ｊ． Ｈｙｇ．， ３０：５７４－５７８（１９７５年）；及びＳａｋｏ ｅｔ ａｌ．， Ｔｏｘ． Ａｐｐｌ． Ｐｈａｒｍａ．， ５４：２８５－２９２（１９８０年）］としての安全な使用の長く多様な歴史を考慮すると、この新規の用途は効果的であることに加えて安全であることが予想される。

材料及び方法

結腸直腸癌

ローズベンガル

１ｍｇ／ｍＬ（０．１％ｗ／ｖ）又は４ｍｇ／ｍＬ（０．４％ｗ／ｖ）のローズベンガルジナトリウム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，セントルイス，ミズーリ州）を、オートクレーブ滅菌した後にろ過滅菌した水道水（０．２μｍ）に溶解することによって、投与のための溶液を調製した。

動物

約４週齢の１６匹の雌Ａｐｃ^Ｍｉｎマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ－Ａｐ－ｍｉｎ／Ｊ， Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，バーハーバー，メイン州）を研究に使用した。動物の住環境及び世話は、国際実験動物ケア評価認証協会により確立された基準及び米国保健福祉省公衆衛生局の実験動物の人道的管理と使用に関する規範に記載された指針に基づいた。全ての動物はマイクロアイソレータケージに収容され、標準的な放射線滅菌飼料（７９１２，Ｈａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ，マジソン、ワイオミング州、１９％のタンパク質、５％の脂肪及び５％の食物繊維を含む栄養強化穀物飼料）が与えられた。

群割り当て

化学的予防の評価のためにマウスを無作為に２つの治療群（１群当たりｎ＝８）に分けた。治療は、順化直後（約５週齢に）、症候性疾患（すなわちポリープに特有の貧血症や新成形の兆候である衰弱）の発症の特色を示す週齢よりかなり前に開始した。

治療群動物（開始時の平均体重１６．０±１．１ｇ）にはＲＢ溶液（４μｇ／ｍＬ）を不断に継続的に飲むことを許可し、対照群動物（１６．８±０．７ｇ）には殺菌した水道水を不断に与えた。

研究の化学予防的段階の終わりに、ＲＢ治療群の生き残っているマウスを、疾患発症を許すために６週間水道水に戻し、この時点で８匹のマウスのうちの７匹が腸腫瘍の症状がはっきりと現れ、ＦＥＯＢ陽性結果を示した。これらのマウスを、化学治療的可能性の評価のために治療群と対照群（１群当たりｎ＝４）に再び無作為に分けた。治療群動物は１ｍｇ／ｍＬのＲＢ溶液を継続的に不断に摂取したのに対し、対照群動物には殺菌した水道水を不断に与えた。研究の両段階において、ＲＢ及び水道水供給量を毎週変更した。

臨床観察

マウスを重篤な疾患の発症を示す行動変化又は身体的変化（すなわち、不活発な行動、貧血又は衰弱）について毎日観察した。重症疾患の発症と一致する症状を示すマウスを二酸化炭素吸入によって直ちに安楽死させた。定期に全てのマウスについて市販の検査キット（Ｈｅｍｏｃｃｕｌｔ Ｆｅｃａｌ Ｏｃｃｕｌｔ Ｂｌｏｏｄ Ｔｅｓｔ， Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ， Ｉｎｃ．，フラートン、カリフォルニア州）を使用して便潜血を調べた。ＦＥＯＢ検査の直前に、ＲＢ（鮮やかな赤色で、代謝されずに便中に排泄される）とＦＥＯＢ比色試験との干渉の可能性を最小限に抑えるために、治療群マウスに３日間オートクレーブ滅菌した水道水を与えた。これらの動物について便サンプリングの直後にＲＢ治療を再開した。

統計分析

マウスの生存期間を治療群と対照群とで比較した。治療群と対照群との間で経験した生存期間の差の統計的有意性を判断するためにログランク検定を用いてデータを解析した。文献データのレトロスペクティブ分析はフィッシャーの直接確率検定を用いて行われた。ＳｉｇｍａｔＳｔａｔ ３．０（Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ， Ｉｎｃ．， ポイントリッチモンド、カリフォルニア州）を全ての統計分析に使用した。

冠詞「ａ」及び「ａｎ」（「１つの」）は、冠詞の文法的目的語の１又は複数（すなわち、少なくとも１つ）を指すのに本明細書において使用される。例として、「１つの要素」は１つの要素又は１つより多い要素を意味する。本明細書で引用した特許、特許出願及び論文は、それぞれ参照によって本明細書に組み込まれる。

Claims (17)

1. 固形腫瘍治療有効量のローズベンガルジナトリウム化合物をその被覆が５以上の生物学的ｐＨ値で溶解又は崩壊する腸溶解性被覆された固体希釈剤マトリックス内に含有する経口送達用の医薬組成物。
2. 前記腸溶性被覆された固体希釈剤マトリックスが、錠剤、トローチ剤、又は複数の概ね球状の糖顆粒の形態をとる、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記ローズベンガルジナトリウム化合物が、固体希釈剤マトリックス中に溶解若しくは分散されるか又は固体希釈剤マトリックス上に分散される、請求項１に記載の医薬組成物。
4. 固体希釈剤マトリックスが、前記ローズベンガルジナトリウム化合物の１つ又は複数の層で被覆された糖球体から構成される、請求項３に記載の医薬組成物。
5. 前記腸溶性コーティングが、５．５から７．０の公表ｐＨ値で溶解又は崩壊する、請求項１に記載の医薬組成物。
6. 哺乳類の被験体内の固形癌性腫瘍の治療に使用するための医薬組成物であって、前記医薬組成物は、前記固形癌性腫瘍治療有効量のローズベンガルジナトリウム化合物を含み、胃のｐＨ値を上回るｐＨ値で溶解又は分散するポリマー膜で被覆され前記哺乳類の被験体に経口投与される、医薬組成物。
7. 前記投与が、少なくとも前記固形癌性腫瘍の体積が少なくとも３０パーセント減少するまで複数回繰り返される、請求項６に記載の医薬組成物。
8. 前記ローズベンガルジナトリウム化合物が固体医薬組成物の一部として投与される、請求項６に記載の医薬組成物。
9. 前記固体医薬組成物が錠剤又は複数の概ね球状の顆粒の形態をとる、請求項８に記載の医薬組成物。
10. 哺乳類の被験体内の消化管の癌の治療、又は癌の形成の抑制に使用するための固形薬剤の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、癌形成抑制又は癌治療有効量のローズベンガルジナトリウム化合物を含み、前記哺乳類の被験体に経口投与され、前記投与が、前記哺乳類の被験体の消化管の癌を治療し、前記固形薬剤が、前記消化管の前記癌が位置する部分のｐＨ値で、前記ローズベンガルジナトリウム化合物を放出する、医薬組成物。
11. 前記投与が繰り返される、請求項１０に記載の医薬組成物。
12. 前記癌が胃にある、請求項１０に記載の医薬組成物。
13. 前記癌が小腸にある、請求項１０に記載の医薬組成物。
14. 前記癌が結腸にある、請求項１０に記載の医薬組成物。
15. 前記固形薬剤が錠剤である、請求項１０に記載の医薬組成物。
16. 前記固形薬剤が、前記ローズベンガルジナトリウム化合物を含有する複数の被覆された粒子を含むカプセルである、請求項１０に記載の医薬組成物。
17. 前記被覆された粒子のコーティングが、前記ＨＸ化合物を放出するために、５．５から７．０の公表ｐＨ値で溶解又は崩壊する、請求項１６に記載の医薬組成物。

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