JP7474269B2 - がんを治療するための組成物及び方法 - Google Patents

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Description

関連出願
本出願は、２０１９年３月１５日出願の米国仮出願第６２／８１９，３２２号及び２０１９年９月２３日出願の米国仮出願第６２／９０４，２４１号の利益を主張するものであり、その内容全体は参照により完全に本明細書に組み込まれる。
膠芽腫（多形膠芽腫、ＧＢＭ）は、成人における原発性悪性脳腫瘍の大部分を占めている。上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）遺伝子の増幅及び変異は、ＧＢＭにおいて生じている特徴的な遺伝子異常である（Ｓｕｇａｗａ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：８６０２－８６０６；Ｅｋｓｔｒａｎｄ，ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８９：４３０９－４３１３）。チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）、モノクローナル抗体、ワクチン、及びＲＮＡベース薬剤を含む、ＥＧＦＲまたはその変異構成的活性化形態であるΔＥＧＦＲを標的とする一連の有望なＧＢＭ治療用治療薬は、現在、開発中または臨床試験中である。しかしながら、臨床におけるその効果はこれまでのところ、事前薬剤耐性と獲得薬剤耐性の両方による制約を受けている（Ｔａｙｌｏｒ，ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｃｕｒｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ．１２：１９７－２０９）。主な制約は、現行の治療薬、例えば、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、及びアファチニブなどの脳透過性が不十分であることである（Ｒａｚｉｅｒ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎｅｕｒｏ－Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １２：９５－１０３；Ｒｅａｒｄｏｎ，ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｎｅｕｒｏ－Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １７：４３０－４３９；Ｔｈｉｅｓｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６５：３５３－３６１）。
分子標的治療薬はがん治療に革命を起こし、最新の精密医薬品への道筋をつけるものである。しかしながら、明確な利用可能な遺伝子変異にもかかわらず、標的薬剤は、膠芽腫（ＧＢＭ）患者において機能していない。これは、大部分において、ほとんどの標的薬剤における、腫瘍殺傷に必要なレベルには不十分なＣＮＳ透過性によるものであり、治療耐性を促進する強力な適応機構を誘導する場合がある。原発巣と代償性シグナル伝達経路（複数可）の両方を阻害する薬剤の組み合わせが魅力的ではあるが、これらの組み合わせ治療戦略は高い毒性による制約を受けており、それぞれの薬剤の閾値下投与量につながっている。
代替的な治療アプローチでは、腫瘍の生存にとって重要な機能特性を調節するために発がんドライバーを標的としているが、細胞が、直交するｓｅｃｏｎｄ ｈｉｔ６の影響を受けやすくなっている。この「合成致死」戦略は、がん遺伝子が調節する機能的ネットワーク（複数可）が腫瘍細胞死経路と重複している場合に特に魅力的となり得る。特定の例では、発がんシグナル伝達により、グルコース代謝が促進されて、内因性アポトーシスが抑制され生存が助長される。標的治療薬で発がんドライバーを阻害することにより、グルコース消費低下の直接的な結果として、内因性アポトーシス機構を誘発することができる。これら腫瘍形成経路の交錯した性質により、合理的な組み合わせ治療の治療機会が提供され得るが、これについては更なる調査が必要である。
上記を考慮すると、膠芽腫及びその他のがんを治療するための脳透過性化学療法剤に対する臨床的ニーズが残されている。
一態様では、本開示は、式Ｉまたは式Ｉ＊の化合物、
Figure 0007474269000001
 またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
Ｚはアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ２ａ及びＲ２ｂはそれぞれ、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から独立して選択され、
Ｒ３は、水素、アルキル、またはアシルであり、
Ｒ４はアルコキシであり、
Ｒ５はアルキルであり、Ｒ７及びＲ８はそれぞれ、水素、アルキル、例えば、アルコキシアルキル、アラルキルなど、またはアリールアシルから独立して選択され、
Ｒ１１が、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲ７、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールであり、
Ｒ１２が、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲ８、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールであるか、または、Ｒ１１及びＲ１２が共に炭素環または複素環を完成させるかである。
特定の態様では、本開示は、ある量の本開示の化合物を対象に投与することを含む、ＥＧＦＲまたはΔＥＧＦＲを阻害するための方法を提供する。
特定の態様では、本開示は、がんの治療を必要とする対象にある量の本開示の化合物を投与することを含む、がんを治療するための方法を提供する。一部の実施形態では、がんは多形膠芽腫である。
特定の態様では、本開示は、グルコース代謝阻害剤及び細胞質ｐ５３安定化剤を対象に投与することを含む、がんを治療するための方法を提供し、グルコース代謝阻害剤は本開示の化合物である。一部の実施形態では、がんは多形膠芽腫である。
特定の態様では、本開示は、式Ｉまたは式Ｉ＊の化合物を作製するための方法を提供する。
１０ｍｇ／ｋｇにおけるＪＧＫ００５の経口薬物動態、及び２５ｍｇ／ｋｇにおけるエルロチニブの経口薬物動態を示す。ＪＧＫ００５はエルロチニブと比較して良好なＣＮＳ透過性を示している。 それぞれＥＧＦＲ変異膠芽腫ＨＫ３０１及びＧＢＭ３９に対する、エルロチニブ（左側のカラム）及びＪＧＫ００５（右側のカラム）の活性を示す。ＪＧＫ００５は、両方の症例において、エルロチニブと比較してより低い活性を示している。 エルロチニブ及びＪＧＫ０１０の無細胞ＥＧＦＲキナーゼ活性を示す。両方の化合物は約８ｎＭのＩＣ５０を示している。 ＨＫ３０１細胞及びＧＢＭ３９細胞に対する、エルロチニブ（左側のカラム）、ＪＧＫ００５（中央のカラム）、及びＪＧＫ０１０（右側のカラム）の力価を示す。 １０ｍｇ／ｋｇにおけるＪＧＫ００５の経口薬物動態、及び１０ｍｇ／ｋｇにおけるＪＧＫ０１０の経口薬物動態を示す。 複数種の原発性膠芽腫細胞株におけるＥＧＦＲ阻害剤の比較を示す。カラム１～４：ＧＢＭ３９（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、５～８：ＧＳ１００（ＥＧＦＲｗｔ／ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、９～１２：ＧＳ０１７（Ａ２８９Ｔ）、１３～１６：ＧＳ０２４（ＥＧＦＲ多染色体性）。 ＥＧＦＲ変異肺癌におけるＪＧＫ０１０活性を示す。 ＥＧＦＲ増殖類表皮癌におけるＪＧＫ０１０活性を示す。 ６ｍｇ／ｋｇにおけるＪＧＫ０１０経口薬物動態を示す。 １０ｍｇ／ｋｇにおけるＪＧＫ０１０経口薬物動態を示す。 ６ｍｇ／ｋｇにおけるＪＧＫ０１０ ＩＶ薬物動態を示す。 ６ｍｇ／ｋｇにおけるＪＧＫ０１０ ＩＰ薬物動態を示す。 ＥＧＦＲ増幅ＷＴ＋ｖＩＩＩ ＨＫ３０１に対する、エルロチニブ及び本開示の例示化合物の活性を示す。 ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ増幅ＧＢＭ３９に対する、エルロチニブ及び本開示の例示化合物の活性を示す。 ＨＫ３０１細胞に対する、エルロチニブ及び本開示の例示化合物の活性を示す。 ＧＢＭ３９細胞に対する、エルロチニブ及び本開示の例示化合物の活性を示す。 Ａは、エルロチニブ及び本開示の例示化合物のリン酸－ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ阻害を示す。Ｂは、エルロチニブ及び本開示の例示化合物のリン酸－ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ阻害を示す。 ＡはＪＧＫ００５の薬物動態を示す。ＢはＪＧＫ００５の薬物動態を示す。 ＡはＪＧＫ０３８の薬物動態を示す。ＢはＪＧＫ０３８の薬物動態を示す。 ＡはＪＧＫ０１０の薬物動態を示す。ＢはＪＧＫ０１０の薬物動態を示す。 ＡはＪＧＫ０３７の薬物動態を示す。ＢはＪＧＫ０３７の薬物動態を示す。 Ａは、エルロチニブとＪＧＫ０３７の間のマウス脳／血液薬物動態の比較を示す。Ｂは、エルロチニブとＪＧＫ０３７の間のマウス脳／血液薬物動態の比較を示す。 エルロチニブ及び本開示の例示化合物の脳透過性を示す。 ＲＬＵ変化に対する、溶媒またはＪＧＫ０３７のいずれかによる治療の効果を示す。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース代謝の阻害により、極めてわずかな細胞死が誘導されるが、ＧＢＭ細胞がアポトーシスに向けて活性化されることを示す。エルロチニブ処理の４時間後における、溶媒と比較した、１９種の患者由来ＧＢＭ神経膠腫球における１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みの変化率を示す。「代謝レスポンダー」（青色）が、溶媒と比較した１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みの有意な低下を示す試料である一方で、「ノンレスポンダー」（赤色）は有意な低下を示していない。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース代謝の阻害により、極めてわずかな細胞死が誘導されるが、ＧＢＭ細胞がアポトーシスに向けて活性化されることを示す。１２時間のエルロチニブ処理による、溶媒と比較した、グルコース消費及び乳酸生成の変化率を示す。Ｎｏｖａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ＢｉｏＰｒｏｆｉｌｅ Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して、測定を実施した。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース代謝の阻害により、極めてわずかな細胞死が誘導されるが、ＧＢＭ細胞がアポトーシスに向けて活性化されることを示す。７２時間のエルロチニブによる処理後における、代謝レスポンダー（青色、ｎ＝１０）またはノンレスポンダー（赤色、ｎ＝９）のアネキシンＶ染色を示す。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース代謝の阻害により、極めてわずかな細胞死が誘導されるが、ＧＢＭ細胞がアポトーシスに向けて活性化されることを示す。溶媒対照と比較した、エルロチニブで２４時間処理した代謝レスポンダーまたはノンレスポンダーにおける、それぞれのＢＨ３ペプチド（ＢＩＭ、ＢＩＤ、またはＰＵＭＡ）への曝露後にシトクロムｃ放出により測定された活性化の変化率を示す。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース代謝の阻害により、極めてわずかな細胞死が誘導されるが、ＧＢＭ細胞がアポトーシスに向けて活性化されることを示す。左側：ＧＦＰ対照またはＧＬＵＴ１及びＧＬＵＴ３（ＧＬＵＴ１／３）を過剰発現するＨＫ３０１細胞の全細胞溶解物のイムノブロット、右側：エルロチニブ処理の１２時間後におけるＨＫ３０１－ＧＦＰまたはＨＫ３０１－ＧＬＵＴ１／３のグルコース消費または乳酸生成の変化を示す。値は溶媒対照に対するものである。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース代謝の阻害により、極めてわずかな細胞死が誘導されるが、ＧＢＭ細胞がアポトーシスに向けて活性化されることを示す。ＨＫ３０１－ＧＦＰ細胞またはＨＫ３０１－ＧＬＵＴ１／３細胞の使用を示す。全ての実験におけるエルロチニブ濃度は１μＭであった。両側の対応のないスチューデントｔ検定を使用して比較を実施した。データは、３回の独立した実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲに結合して内因性アポトーシスを生じさせることを示す。対照ガイドＲＮＡ（ｓｇ対照）またはｐ５３ガイドＲＮＡ（ｐ５３ＫＯ）と共にＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ９タンパク質を発現する２種のレスポンダー（ＨＫ３０１及びＨＫ３３６）における、指定タンパク質のイムノブロットを示す。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲに結合して内因性アポトーシスを生じさせることを示す。溶媒対照と比較した、エルロチニブで２４時間処理したｓｇ対照細胞及びｐ５３ＫＯ細胞における、ＢＩＭペプチドへの曝露後にシトクロムｃ放出により測定された活性化の変化率を示す。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲに結合して内因性アポトーシスを生じさせることを示す。ＨＫ３０１ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔにおける、指定タンパク質のイムノブロットを示す。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲに結合して内因性アポトーシスを生じさせることを示す。ＨＫ３０１ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔにおけるタンパク質局在化を明らかにするための、ＤＡＰＩ染色と組み合わせたｐ５３タンパク質の免疫蛍光を示す（スケールバー＝２０μｍ）。先ず、神経膠腫球を分離して単一細胞としてから、製造業者の取扱説明書に従いＣｅｌｌ－Ｔａｋ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を使用して、９６ウェルプレートに付着させた。次に、付着細胞を氷冷メタノールで１０分間固定し、その後、ＰＢＳで３回洗浄した。次に、ＰＢＳ中の１０％ＦＢＳ及び３％ＢＳＡを含有するブロッキング溶液で細胞を１時間培養し、その後、ｐ５３（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＳＣ－１２６、１：５０希釈）抗体と共に４℃で一晩培養した。翌日、細胞を二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、１：２０００希釈）と共に１時間培養し、ＤＡＰＩ染色を１０分間行い、その後、Ｃａｓｃａｄｅ ＩＩ蛍光カメラ（Ｒｏｐｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を装着したＮｉｋｏｎ ＴＩ Ｅｃｌｉｐｓｅ顕微鏡を使用してイメージングを行った。４６１ｎＭ及び６４７ｎＭの放出で細胞のイメージングを行ってから、ＮＩＳ－Ｅｌｅｍｅｎｔｓ ＡＲ解析ソフトウェアを使用して処理を行った。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲに結合して内因性アポトーシスを生じさせることを示す。ＨＫ３０１ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔにおける、２４時間の１００ｎＭドキソルビシン処理後の指定ｍＲＮＡのレベルの変化を示す。レベルを対応するＤＭＳＯ処理細胞に正規化した。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲに結合して内因性アポトーシスを生じさせることを示す。図２２Ｂに類似したデータであるが、ＨＫ３０１ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔにおけるものを示す。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲに結合して内因性アポトーシスを生じさせることを示す。図２２Ｅに類似したデータであるが、ＨＫ３０１ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３Ｒ２７３Ｈ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ＮＥＳにおけるものを示す。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲに結合して内因性アポトーシスを生じさせることを示す。図２２Ｂ及び図２２Ｆに類似したデータであるが、ＨＫ３０１ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３Ｒ２７３Ｈ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ＮＥＳにおけるものを示す。全ての実験におけるエルロチニブ濃度は１μＭであった。両側の対応のないスチューデントｔ検定を使用して比較を実施した。データは、３回の独立した実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 Ｂｃｌ－ｘＬが、ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダーにおける細胞質ｐ５３に結合してそれを隔離することによって、ＧＢＭ細胞死を防止することを示す。エルロチニブ処理の２４時間後における、２種の代謝レスポンダー（ＨＫ３０１及びＧＢＭ３９）におけるｐ５３の免疫沈降を示す。指定抗体で免疫沈降をプローブした。下部は対応する免疫沈降前の溶解物（インプット）である。 Ｂｃｌ－ｘＬが、ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダーにおける細胞質ｐ５３に結合してそれを隔離することによって、ＧＢＭ細胞死を防止することを示す。図２３Ａに類似したデータであるが、２種のノンレスポンダー（ＨＫ３９３及びＨＫ２５４）におけるものを示す。 Ｂｃｌ－ｘＬが、ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダーにおける細胞質ｐ５３に結合してそれを隔離することによって、ＧＢＭ細胞死を防止することを示す。図２３Ａ及び図２３Ｂに類似したデータであるが、ＨＫ３０１－ＧＦＰ及びＨＫ３０１－ＧＬＵＴ１／３におけるものを示す。右側は指定インプットのイムノブロットである。 Ｂｃｌ－ｘＬが、ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダーにおける細胞質ｐ５３に結合してそれを隔離することによって、ＧＢＭ細胞死を防止することを示す。ＨＫ３０１をエルロチニブ、ＷＥＨＩ－５３９、またはその両方で２４時間処理してから、上記のとおりに免疫沈降及びイムノブロットを実施したことを示す。 Ｂｃｌ－ｘＬが、ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダーにおける細胞質ｐ５３に結合してそれを隔離することによって、ＧＢＭ細胞死を防止することを示す。エルロチニブ、ＷＥＨＩ－５３９、またはその両方による処理の７２時間後における、２種のレスポンダー（ＧＢＭ３９及びＨＫ３０１）及びノンレスポンダー（ＨＫ３９３）のアネキシンＶ染色を示す。 Ｂｃｌ－ｘＬが、ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダーにおける細胞質ｐ５３に結合してそれを隔離することによって、ＧＢＭ細胞死を防止することを示す。エルロチニブ、ｗｅｈｉ－５３９、またはその両方による処理の７２時間後における、ＨＫ３０１－ＧＦＰ及びＨＫ３０１－ＧＬＵＴ１／３のアネキシンＶ染色を示す。全ての実験におけるエルロチニブ及びＷＥＨＩ－５３９の濃度はそれぞれ、１μＭ及び５μＭであった。両側の対応のないスチューデントｔ検定を使用して比較を実施した。データは、３回の独立した実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。 ＥＧＦＲ及びｐ５３の組み合わせ標的化の相乗的致死性を示す。２７３のＧＢＭ試料にわたる、ＥＧＦＲ、及びｐ５３の調節に関与する遺伝子における変異の一覧を示す。ＥＧＦＲにおける遺伝子変異（増幅／変異）は、ｐ５３における遺伝子変異と相互排他的である。示すとおり、ＥＧＦＲ変異が表の左側にある一方で、ｐ５３におけるほとんどの変異は右側にある。 ＥＧＦＲ及びｐ５３の組み合わせ標的化の相乗的致死性を示す。ＥＧＦＲにおける変異とｐ５３経路に関与する遺伝子における変異の間の有意な関連を示す表を示す。 ＥＧＦＲ及びｐ５３の組み合わせ標的化の相乗的致死性を示す。用量漸増マトリックスで表される様々な濃度のエルロチニブ、ヌトリン、及び組み合わせで処理した代謝レスポンダー（左側：ＨＫ３０１）及びノンレスポンダー（右側：ＧＳ０１７）のアネキシンＶ染色を示す。 ＥＧＦＲ及びｐ５３の組み合わせ標的化の相乗的致死性を示す。図２４Ｃに記載のエルロチニブ及びヌトリンの用量漸増を１０の代謝レスポンダー及び６のノンレスポンダーにわたって実施してから、相乗効果スコアを計算したことを示す（物質及び方法を参照のこと）。 ＥＧＦＲ及びｐ５３の組み合わせ標的化の相乗的致死性を示す。エルロチニブ、ヌトリン、またはその両方による処理の７２時間後における、ＨＫ３０１－ＧＦＰ及びＨＫ３０１ ＧＬＵＴ１／３のアネキシンＶ染色を示す。 ＥＧＦＲ及びｐ５３の組み合わせ標的化の相乗的致死性を示す。図２４Ｅと同一であるが、ＨＫ３０１－ｓｇ対照及びＨＫ３０１－ｐ５３ＫＯにおけるものを示す。 ＥＧＦＲ及びｐ５３の組み合わせ標的化の相乗的致死性を示す。エルロチニブ、ヌトリン、または組み合わせで２４時間処理したＨＫ３０１を示す。免疫グロブリンＧ対照抗体または抗ｐ５３抗体で免疫沈降を実施してから、指定抗体で免疫沈降をプローブした。下部は対応する免疫沈降前の溶解物（インプット）である。全てのデータは、少なくともｎ＝３の独立した実験の代表（平均±ＳＥＭ）である。明記しない限り、全ての実験におけるエルロチニブ及びヌトリンの濃度はそれぞれ、１μＭ及び２．５μＭであった。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 グルコース代謝の調節がＥＧＦＲｉノンレスポンダーをｐ５３介在性細胞死に向けて活性化させることを示す。エルロチニブ処理、２ＤＧ処理、またはピクチリシブ処理の４時間後における、溶媒と比較した、ＨＫ３９３及びＨＫ２５４における１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みの変化率を示す。 グルコース代謝の調節がＥＧＦＲｉノンレスポンダーをｐ５３介在性細胞死に向けて活性化させることを示す。溶媒対照と比較した、エルロチニブ、２ＤＧ、またはピクチリシブの２４時間後のＨＫ３９３及びＨＫ２５４における、ＢＩＭペプチドへの曝露後にシトクロムｃ放出により測定された活性化の変化率を示す。 グルコース代謝の調節がＥＧＦＲｉノンレスポンダーをｐ５３介在性細胞死に向けて活性化させることを示す。図２５Ｂに類似したデータであるが、ＨＫ３９３ ｓｇ対照及びｐ５３ＫＯにおけるものを示す。 グルコース代謝の調節がＥＧＦＲｉノンレスポンダーをｐ５３介在性細胞死に向けて活性化させることを示す。２ＤＧ処理またはピクチリシブ処理の２４時間後における、ＨＫ３９３及びＨＫ２５４におけるｐ５３の免疫沈降を示す。指定抗体で免疫沈降をプローブした。下部は対応する免疫沈降前の溶解物（インプット）である。 グルコース代謝の調節がＥＧＦＲｉノンレスポンダーをｐ５３介在性細胞死に向けて活性化させることを示す。ＨＫ３９３及びＨＫ２５４における、ヌトリンと組み合わせた様々な薬剤（エルロチニブ、２ＤＧ、及びピクチリシブ）の相乗効果スコアを示す。 グルコース代謝の調節がＥＧＦＲｉノンレスポンダーをｐ５３介在性細胞死に向けて活性化させることを示す。２ＤＧ、ピクチリシブ、２ＤＧ＋ヌトリン、またはピクチリシブ＋ヌトリンによる処理の７２時間後における、ＨＫ３９３ ｓｇ対照及びＨＫ３９３ ｐ５３ＫＯのアネキシンＶ染色を示す。明記しない限り、全ての実験におけるエルロチニブ、２ＤＧ、ピクチリシブ、及びヌトリンの濃度はそれぞれ、１μＭ、１ｍＭ、１μＭ、及び２．５μＭであった。両側の対応のないスチューデントｔ検定を使用して比較を実施した。データは、３回の独立した実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込み及びｐ５３の組み合わせ標的化がｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍増殖を抑制することを示す。エルロチニブ治療（７５ｍｇ／ｋｇ）の前及び１５時間後における、ＧＢＭ３９頭蓋内異種移植片の１８Ｆ－ＦＤＧ ＰＥＴ／ＣＴ画像を示す。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込み及びｐ５３の組み合わせ標的化がｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍増殖を抑制することを示す。毎日の、溶媒（ｎ＝５）、７５ｍｇ／ｋｇのエルロチニブ（ｎ＝７）、５０ｍｇ／ｋｇのイダサヌトリン（ｎ＝５）、または組み合わせ（ｎ＝１２）で、ＧＢＭ３９頭蓋内異種移植片を治療してから、分泌ガウシアルシフェラーゼを使用して、指定日に全身腫瘍組織量を評価したことを示す（物質及び方法を参照のこと）。図２６Ｂ及び図２６Ｄの比較では、最後の測定に由来するデータセットを使用し、両側の対応のないｔ検定を使用して比較を実施した。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込み及びｐ５３の組み合わせ標的化がｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍増殖を抑制することを示す。図２６Ａに類似したデータであるが、ＨＫ３９３頭蓋内異種移植片におけるものを示す。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込み及びｐ５３の組み合わせ標的化がｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍増殖を抑制することを示す。図２６Ｂに類似したデータであるが、ＨＫ３９３頭蓋内異種移植片におけるものを示す（全ての群においてｎ＝７）。図２６Ｂ及び図２６Ｄの比較では、最後の測定に由来するデータセットを使用し、両側の対応のないｔ検定を使用して比較を実施した。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込み及びｐ５３の組み合わせ標的化がｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍増殖を抑制することを示す。図２６Ｂの生存率を示す。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込み及びｐ５３の組み合わせ標的化がｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍増殖を抑制することを示す。図２６Ｃの生存率を示す。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込み及びｐ５３の組み合わせ標的化がｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍増殖を抑制することを示す。２５日間の指定治療に続いて休薬した後における、代謝レスポンダーＨＫ３３６の生存率を示す（全ての群においてｎ＝７）。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込み及びｐ５３の組み合わせ標的化がｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍増殖を抑制することを示す。２５日間の指定治療に続いて休薬した後における、ノンレスポンダーＧＳ０２５の生存率を示す（全ての群においてｎ＝９）。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊＊ｐ＜０．０１。 ＥＧＦＲ阻害後におけるＧＢＭ細胞株の特性解析を示す。指定時間のエルロチニブ処理における、溶媒と比較した、２種の代謝レスポンダー（ＨＫ３０１及びＧＢＭ３９）における１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みの変化率を示す。 ＥＧＦＲ阻害後におけるＧＢＭ細胞株の特性解析を示す。ｓｉＲＮＡによるＥＧＦＲの遺伝子ノックダウン後における、代謝レスポンダー（ＨＫ３０１）及びノンレスポンダー（ＨＫ２１７）の指定タンパク質のイムノブロットを示す。 ＥＧＦＲ阻害後におけるＧＢＭ細胞株の特性解析を示す。ＥＧＦＲの遺伝子ノックダウン後における、ＨＫ３０１及びＨＫ２１７における１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みの変化率を示す。 ＥＧＦＲ阻害後におけるＧＢＭ細胞株の特性解析を示す。１２時間のエルロチニブ処理による、３種の代謝レスポンダー（ＨＫ３０１、ＧＢＭ３９、ＨＫ３９０）及び３種のノンレスポンダー（ＨＫ３９３、ＨＫ２１７、ＨＫ２５４）におけるグルコース消費の変化を示す。Ｎｏｖａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ＢｉｏＰｒｏｆｉｌｅ Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して、測定を実施した。 ＥＧＦＲ阻害後におけるＧＢＭ細胞株の特性解析を示す。１２時間のエルロチニブ処理による、３種の代謝レスポンダー（ＨＫ３０１、ＧＢＭ３９、ＨＫ３９０）及び３種のノンレスポンダー（ＨＫ３９３、ＨＫ２１７、ＨＫ２５４）における乳酸生成の変化を示す。Ｎｏｖａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ＢｉｏＰｒｏｆｉｌｅ Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して、測定を実施した。 ＥＧＦＲ阻害後におけるＧＢＭ細胞株の特性解析を示す。エルロチニブ処理の１２時間後における、２種のレスポンダー（ＨＫ３０１及びＧＢＭ３９、青色）及び２種のノンレスポンダー（ＨＫ２１７及びＨＫ３９３、赤色）の基礎ＥＣＡＲ測定値を示す。 ＥＧＦＲ阻害後におけるＧＢＭ細胞株の特性解析を示す。エルロチニブ処理の１２時間後における、Ｎｏｖａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ＢｉｏＰｒｏｆｉｌｅ Ａｎａｌｙｚｅｒで測定したグルタミン消費の変化を示す。全ての実験におけるエルロチニブ濃度は１μＭであった。両側の対応のないスチューデントｔ検定を使用して比較を実施した。データは、３回の独立した実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 Ａは、ＥＧＦＲ阻害後の下流シグナル伝達の変化が代謝応答と相関していることを示す。エルロチニブ処理の４時間後における、代謝レスポンダーにおける指定タンパク質のイムノブロットを示す。Ｂは、ＥＧＦＲ阻害後の下流シグナル伝達の変化が代謝応答と相関していることを示す。エルロチニブ処理の４時間後における、代謝ノンレスポンダーにおける指定タンパク質のイムノブロットを示す。 Ａは、患者由来ＧＢＭ細胞株の遺伝子特性解析を示す。ＧＢＭ株のパネルにわたる遺伝的背景を示す。Ｂは、患者由来ＧＢＭ細胞株の遺伝子特性解析を示す。ＥＧＦＲの多染色体性を示す、ＨＫ３９０、ＨＫ３３６、ＨＫ２５４、及びＨＫ３９３の蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を示す。市販の蛍光標識デュアルカラーＥＧＦＲ（赤色）／ＣＥＰ ７（緑色）プローブ（Ａｂｂｏｔｔ－Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）を使用して、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を実施した。製造業者の推奨プロトコルに従い、細胞株に対するＦＩＳＨハイブリダイゼーション及び解析を実施した。細胞をＤＡＰＩで対比染色し、デュアルカラーフィルター及びトリプルカラーフィルターを備えたＺｅｉｓｓ（Ａｘｉｏｐｈｏｔ）蛍光顕微鏡下で、蛍光プローブシグナルのイメージングを行った。 ＥＧＦＲ阻害が代謝レスポンダーのアポトーシスバランスをシフトすることを示す。エルロチニブ処理の２４時間後における、代謝レスポンダー（ＧＢＭ３９、ＨＫ３０１、及びＨＫ３３６）及びノンレスポンダー（ＨＫ２１７、ＨＫ３９３、及びＨＫ２５４）における指定タンパク質のイムノブロットを示す。 ＥＧＦＲ阻害が代謝レスポンダーのアポトーシスバランスをシフトすることを示す。代謝レスポンダー（ＨＫ３０１）における動的ＢＨ３プロファイリング解析の例を示す。左側：指定濃度の様々なペプチドへの曝露後にシトクロムｃ放出を率測定する。右側：溶媒処理細胞とエルロチニブ処理細胞の間のシトクロムｃ放出の差異を計算して活性化率を得る。全ての実験におけるエルロチニブ濃度は１μＭであった。 Ａは、ＧＬＵＴ１／３過剰発現が、ＥＧＦＲ阻害により生じたグルコース代謝低下を救援することを示す。１２時間のエルロチニブ処理による、ＨＫ３０１－ＧＦＰ及びＨＫ３０１ ＧＬＵＴ１／３におけるグルコース消費及び乳酸生成の変化を示す。Ｎｏｖａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ＢｉｏＰｒｏｆｉｌｅ Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して、測定を実施した。Ｂは、ＧＬＵＴ１／３過剰発現が、ＥＧＦＲ阻害により生じたグルコース代謝低下を救援することを示す。左側：ＧＦＰ対照またはＧＬＵＴ１及びＧＬＵＴ３（ＧＬＵＴ１／３）を過剰発現するＧＢＭ３９細胞の全細胞溶解物のイムノブロット、右側：エルロチニブ処理の１２時間後におけるＧＢＭ３９－ＧＦＰまたはＧＢＭ３９－ＧＬＵＴ１／３のグルコース消費または乳酸生成の変化を示す。値は溶媒対照に対するものである。Ｃは、ＧＬＵＴ１／３過剰発現が、ＥＧＦＲ阻害により生じたグルコース代謝低下を救援することを示す。Ａに類似したデータであるが、ＧＢＭ３９－ＧＦＰ及びＧＢＭ３９－ＧＬＵＴ１／３におけるものを示す。全ての実験におけるエルロチニブ濃度は１μＭであった。両側の対応のないスチューデントｔ検定を使用して比較を実施した。データは、３回の独立した実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲｉ介在性アポトーシス活性化に必要であることを示す。エルロチニブ処理の４時間後における、ＨＫ３０１ ｓｇ対照細胞及びｐ５３ＫＯ細胞における１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みの変化率を示す（平均±ｓ．ｄ．、ｎ＝３）。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲｉ介在性アポトーシス活性化に必要であることを示す。１μＭエルロチニブ処理または１００ｎＭドキソルビシン処理の２４時間後における、ＨＫ３０１（代謝レスポンダー）におけるｐ５３調節遺伝子の相対ｍＲＮＡレベルを示す。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲｉ介在性アポトーシス活性化に必要であることを示す。ＨＫ３０１細胞をｐ５３－ルシフェラーゼレポーター系に感染させてから、１μＭエルロチニブ処理の２４時間後にｐ５３活性を測定したことを示す（平均±ｓ．ｄ．、ｎ＝３）。結果は２つの独立した実験の代表である。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲｉ介在性アポトーシス活性化に必要であることを示す。ＨＫ３３６ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔにおける、指定タンパク質のイムノブロットを示す。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲｉ介在性アポトーシス活性化に必要であることを示す。ＨＫ３３６ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔにおけるタンパク質局在化を明らかにするための、ＤＡＰＩ染色と組み合わせたｐ５３タンパク質の免疫蛍光を示す（スケールバー＝２０μｍ）。上記のとおりに免疫蛍光を実施した。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲｉ介在性アポトーシス活性化に必要であることを示す。ＨＫ３３６ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔにおける、２４時間の１００ｎＭドキソルビシン処理後の指定ｍＲＮＡのレベルの変化を示す（平均±ｓ．ｄ．、ｎ＝３）。レベルを対応するＤＭＳＯ処理細胞に正規化した。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲｉ介在性アポトーシス活性化に必要であることを示す。溶媒対照と比較した、エルロチニブで２４時間処理したＨＫ３３６ ｓｇ対照細胞、ｐ５３ＫＯ細胞、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ細胞、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔ細胞における、ＢＩＭペプチドへの曝露後にシトクロムｃ放出により測定されたアポトーシス活性化の変化率を示す（平均±ｓ．ｄ．、ｎ＝２）。結果は２つの独立した実験の代表である。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲｉ介在性アポトーシス活性化に必要であることを示す。ＨＫ３０１ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３Ｒ２７３Ｈ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ＮＥＳにおける、指定タンパク質のイムノブロットを示す。 細胞質ｐ５３がＥＧＦＲｉ介在性アポトーシス活性化に必要であることを示す。ＰＦＴμ前処理（１０μＭ、２時間）を伴うまたは伴わないエルロチニブ処理の２４時間後における、ＨＫ３０１における活性化の変化率を示す。結果は２つの独立した実験の代表である。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース代謝の阻害が、細胞質ｐ５３機能を介したＢｃｌ－ｘＬ依存を誘導することを示す。溶媒対照と比較した、エルロチニブで処理した代謝レスポンダー（ＨＫ３０１及びＨＫ３３６）またはノンレスポンダー（ＨＫ２２９）における、ＢＡＤペプチド及びＨＲＫペプチドへの曝露後にシトクロムｃ放出により測定された活性化の変化率を示す。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース代謝の阻害が、細胞質ｐ５３機能を介したＢｃｌ－ｘＬ依存を誘導することを示す。左側：エルロチニブ処理の２４時間後における、ＧＢＭ３９－ＧＦＰ及びＧＢＭ３９－ＧＬＵＴ１／３におけるｐ５３の免疫沈降（指定抗体で免疫沈降をプローブした。）、右側：対応する免疫沈降前の溶解物（インプット）を示す。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース代謝の阻害が、細胞質ｐ５３機能を介したＢｃｌ－ｘＬ依存を誘導することを示す。エルロチニブ、ＷＥＨＩ－５３９、または組み合わせによる処理の７２時間後における、ＨＫ３０１（左側）ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔ、及びＨＫ３３６（右側）ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔのアネキシンＶ染色を示す。 ＥＧＦＲ駆動性グルコース代謝の阻害が、細胞質ｐ５３機能を介したＢｃｌ－ｘＬ依存を誘導することを示す。図３３Ｃに類似したデータであるが、ＧＢＭ３９－ＧＦＰ及びＧＢＭ３９－ＧＬＵＴ１／３におけるものを示す。全ての実験におけるエルロチニブ及びＷＥＨＩ－５３９の濃度は１μＭであった。両側の対応のないスチューデントｔ検定を使用して比較を実施した。データは、３回の独立した実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。 ＥＧＦＲ調節グルコース代謝の阻害及びｐ５３活性化が、ＧＢＭにおける内因性アポトーシスを促進することを示す。エルロチニブ、ヌトリン、または組み合わせの２４時間後における、２種の代謝レスポンダー（ＨＫ３０１及びＧＢＭ３９）における指定タンパク質のイムノブロットを示す。 ＥＧＦＲ調節グルコース代謝の阻害及びｐ５３活性化が、ＧＢＭにおける内因性アポトーシスを促進することを示す。ＥＧＦＲの遺伝子ノックダウンに続く７２時間のヌトリン処理後における、ＨＫ３０１及びＨＫ２１７のアネキシンＶ染色を示す。 ＥＧＦＲ調節グルコース代謝の阻害及びｐ５３活性化が、ＧＢＭにおける内因性アポトーシスを促進することを示す。ＨＫ３０１－ＧＦＰ及びＨＫ３０１－ＧＬＵＴ１／ＧＬＵＴ３におけるＢＡＸオリゴマー化の検出を示す。指定処理の２４時間後、細胞を回収し、１ｍＭ ＢＭＨ中で培養してタンパク質の架橋を促進させ、指定抗体でイムノブロットを行った。下部のＢＡＸは、細胞分画後における細胞質基質シトクロムｃのイムノブロットである。 ＥＧＦＲ調節グルコース代謝の阻害及びｐ５３活性化が、ＧＢＭにおける内因性アポトーシスを促進することを示す。上部：ＨＫ３０１－ＧＦＰ及びＨＫ３０１－ＨＡ－ＢｃｌｘＬにおける指定タンパク質のイムノブロット、下部：エルロチニブ、ヌトリン、または組み合わせによる処理の７２時間後における、ＨＫ３０１－ＧＦＰ及びＨＫ３０１－ＨＡ－ＢｃｌｘＬのアネキシンＶ染色を示す。 ＥＧＦＲ調節グルコース代謝の阻害及びｐ５３活性化が、ＧＢＭにおける内因性アポトーシスを促進することを示す。エルロチニブ、ヌトリン、または組み合わせの７２時間±ＰＦＴμ前処理（１０μＭ、２時間）の後における、ＨＫ３０１のアネキシンＶ染色を示す。 ＥＧＦＲ調節グルコース代謝の阻害及びｐ５３活性化が、ＧＢＭにおける内因性アポトーシスを促進することを示す。エルロチニブ、ヌトリン、または組み合わせによる処理の７２時間後における、ＨＫ３０１ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３Ｒ１７５Ｈ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３Ｒ２７３Ｈ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ＮＥＳのアネキシンＶ染色を示す。 ＥＧＦＲ調節グルコース代謝の阻害及びｐ５３活性化が、ＧＢＭにおける内因性アポトーシスを促進することを示す。図３４Ｆに類似したデータであるが、ＨＫ３０１ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔにおけるものを示す。全ての実験における薬剤濃度は以下、エルロチニブ（１μＭ）、ヌトリン（２．５μＭ）のとおりである。両側の対応のないスチューデントｔ検定を使用して比較を実施した。データは、３回の独立した実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 ＥＧＦＲ調節グルコース代謝の阻害及びｐ５３活性化が、ＧＢＭにおける内因性アポトーシスを促進することを示す。図３４Ｇに類似したデータであるが、ＨＫ３３６ ｓｇ対照、ｐ５３ＫＯ、ｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｃｙｔｏ、及びｐ５３ＫＯ＋ｐ５３ｗｔにおけるものを示す。全ての実験における薬剤濃度は以下、エルロチニブ（１μＭ）、ヌトリン（２．５μＭ）のとおりである。両側の対応のないスチューデントｔ検定を使用して比較を実施した。データは、３回の独立した実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 代謝レスポンダー及びノンレスポンダーにおけるグルコース代謝の阻害が、内因性アポトーシスを促進することを示す。溶媒対照と比較した、エルロチニブ処理または２ＤＧ処理の２４時間後の代謝レスポンダーＨＫ３０１における、ＢＩＭペプチドへの曝露後にシトクロムｃ放出により測定された活性化の変化率を示す。 代謝レスポンダー及びノンレスポンダーにおけるグルコース代謝の阻害が、内因性アポトーシスを促進することを示す。左側：２ＤＧ処理の２４時間後における、ＨＫ３０１におけるｐ５３の免疫沈降（指定抗体で免疫沈降をプローブした。）、右側：対応する免疫沈降前の溶解物（インプット）を示す。 代謝レスポンダー及びノンレスポンダーにおけるグルコース代謝の阻害が、内因性アポトーシスを促進することを示す。オリゴマイシン及びロテノンへの曝露後における、ＨＫ３０１細胞のＯＣＲ測定値及びＥＣＡＲ測定値を示す。 代謝レスポンダー及びノンレスポンダーにおけるグルコース代謝の阻害が、内因性アポトーシスを促進することを示す。個々の薬剤としてのヌトリン、エルロチニブ、２ＤＧ、オリゴマイシン、ロテノン、またはヌトリンとの組み合わせによる処理の７２時間後における、ＨＫ３０１のアネキシンＶ染色を示す。 代謝レスポンダー及びノンレスポンダーにおけるグルコース代謝の阻害が、内因性アポトーシスを促進することを示す。エルロチニブ処理またはピクチリシブ処理の４時間後における、２種のノンレスポンダー（ＨＫ２５４及びＨＫ３９３）における指定タンパク質のイムノブロットを示す。 代謝レスポンダー及びノンレスポンダーにおけるグルコース代謝の阻害が、内因性アポトーシスを促進することを示す。ピクチリシブ処理または２ＤＧ処理の２４時間後における、ＨＫ２５４におけるｐ５３の免疫沈降を示す。指定抗体で免疫沈降をプローブした。下部は対応する免疫沈降前の溶解物（インプット）である。全ての実験における薬剤濃度は以下、エルロチニブ（１μＭ）、ヌトリン（２．５μＭ）、２ＤＧ（ＨＫ３０１用に３ｍＭ、ＨＫ２５４用に１ｍＭ）、オリゴマイシン（１μＭ）、ロテノン（１μＭ）、及びピクチリシブ（１μＭ）のとおりである。両側の対応のないスチューデントｔ検定を使用して比較を実施した。データは、３回の独立した実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 ＥＧＦＲ阻害及びｐ５３活性化のｉｎ ｖｉｖｏ効果を示す。非腫瘍保有マウスにおける指定時点（ｎ＝２匹のマウス／時点）におけるイダサヌトリンの脳内濃度及び血漿中濃度を示す。 ＥＧＦＲ阻害及びｐ５３活性化のｉｎ ｖｉｖｏ効果を示す。イダサヌトリン（５０ｍｇ／ｋｇ）処理の３６時間後における、頭蓋内腫瘍保有異種移植片におけるｐ５３発現の免疫組織化学（ＩＨＣ）解析を示す。 ＥＧＦＲ阻害及びｐ５３活性化のｉｎ ｖｉｖｏ効果を示す。エルロチニブ処理の１５時間後における、ＧＢＭ３９（ｎ＝３）頭蓋内異種移植片及びＨＫ３９３（ｎ＝５）頭蓋内異種移植片における１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みの変化率を示す。 ＥＧＦＲ阻害及びｐ５３活性化のｉｎ ｖｉｖｏ効果を示す。エルロチニブ（７５ｍｇ／ｋｇ）またはエルロチニブ（７５ｍｇ／ｋｇ）及びイダサヌトリン（５０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせによる毎日の治療後における、マウス体重の変化を示す。全ての治療は経口で行った。データは、３回の独立した実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。＊ｐ＜０．０５。 ２ＤＧ（ヘキソキナーゼ阻害剤）またはサイトカラシンＢ（グルコース輸送体阻害剤）による解糖の直接阻害が予想外に、ｐ５３活性化（ヌトリンによる）との相乗効果を示すことを示す。 低グルコース（０．２５ｍＭ）が、ナビトクラックス（ＡＢＴ－２６３）によるＢＣＬ－ｘＬ阻害による相乗的細胞殺傷をもたらすことを示す。 低グルコース（０．２５ｍＭ）が、ヌトリンによるＢＣＬ－ｘＬ阻害による相乗的細胞殺傷をもたらすことを示す。 ＥＧＦＲｉ阻害剤であるエルロチニブに対する代謝レスポンダーと代謝ノンレスポンダーの間の比較を示す。エルロチニブ及びヌトリンの組み合わせにより、ノンレスポンダーにおいてではなく代謝レスポンダーにおいて、予想外な相乗的な合成致死性がもたらされる。 キラルＳＦＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３カラム、４０％ＭｅＯＨ）を用いて測定した合成中間体５のエナンチオマー純度を示す。 キラルＳＦＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３カラム、４０％ＭｅＯＨ）を用いて測定した合成中間体（Ｓ）－５のエナンチオマー純度を示す。 キラルＳＦＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３カラム、４０％ＭｅＯＨ）を用いて測定した合成中間体（Ｒ）－５のエナンチオマー純度を示す。 キラルＳＦＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３カラム、４０％ＭｅＯＨ）を用いて測定したＭｏｓｈｅｒエステル誘導体５のエナンチオマー純度を示す。 Ｕ８７ ＥＧＦＲｗｔに対する、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、及び本開示の例示化合物の活性を示す。 Ｕ８７ ＥＧＦＲｖｉｉｉに対する、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、及び本開示の例示化合物の活性を示す。 ＨＫ３０１（患者由来のＥＧＦＲｖＩＩＩ変異ＧＢＭ神経膠腫球）に対する、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、及び本開示の例示化合物の活性を示す。 ＧＢＭ３９（患者由来のＥＧＦＲｖＩＩＩ変異ＧＢＭ神経膠腫球）に対する、エルロチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、及び本開示の例示化合物の活性を示す。 ＧＢＭ３９ ＥＧＦＲｖＩＩＩ変異マウスモデルにおける、エルロチニブ、ラパチニブ、及び本開示の例示化合物の活性を示す。 ＨＣＣ８２７肺癌ＥＧＦＲ変異細胞株における、エルロチニブ及び本開示の例示化合物の活性を示す。 ＰＣ９肺癌ＥＧＦＲ変異細胞株における、エルロチニブ及び本開示の例示化合物の活性を示す。 Ｈ８３８肺癌変異細胞株における、エルロチニブ及び本開示の例示化合物の活性を示す。 ＰＣ９肺癌ＥＧＦＲ変異マウスモデルにおける、エルロチニブ及び本開示の例示化合物の活性を示す。 本開示の例示化合物の特定の代謝産物を示す。 ＨＫ３０１に対する本開示の例示化合物の活性を示す。 ＧＢＭ３９に対する本開示の例示化合物の活性を示す。 ＮＨＡに対する本開示の例示化合物の活性を示す。 ＰＯ投与後のラットにおける、本開示の例示化合物のＡＤＭＥ特性を示す。 ＰＯ投与後のラットにおける、本開示の例示化合物のＡＤＭＥ特性を示す。 ＨＫ３０１（患者由来のＥＧＦＲｖＩＩＩ変異ＧＢＭ神経膠腫球）に対する、現行の標準治療薬（すなわち、ラパチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、及びＡＺＤ３７５９）と比較した、本開示の特定化合物の活性を示す。 ＨＫ３０１（患者由来のＥＧＦＲｖＩＩＩ変異ＧＢＭ神経膠腫球）に対する、現行の標準治療薬（すなわち、ラパチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、及びＡＺＤ３７５９）と比較した、本開示の特定化合物の活性を示す。 ＧＢＭ３９（患者由来のＥＧＦＲｖＩＩＩ変異ＧＢＭ神経膠腫球）に対する、現行の標準治療薬（すなわち、ラパチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、及びＡＺＤ３７５９）と比較した、本開示の特定化合物の活性を示す。 ＧＢＭ３９（患者由来のＥＧＦＲｖＩＩＩ変異ＧＢＭ神経膠腫球）に対する、現行の標準治療薬（すなわち、ラパチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、及びＡＺＤ３７５９）と比較した、本開示の特定化合物の活性を示す。 ｐＥＧＦＲｗｔに対するオシメルチニブ及びＪＧＫ０６８Ｓの活性を示す。 ｐＥＧＦＲｖＩＩＩに対するオシメルチニブ及びＪＧＫ０６８Ｓの活性を示す。 ＨＫ３０１に対するオシメルチニブ及びＪＧＫ０６８Ｓの活性を示す。 ＧＢＭ３９に対するオシメルチニブ及びＪＧＫ０６８Ｓの活性を示す。 特定のＥＧＦＲ変異に対する、ＡＺＤ３７５９、ＡＺＤ９２９１、及びＪＧＫ０６８Ｓの活性を示す。 ｐＥＧＦＲ Ａ２６３Ｐに対する、ＡＺＤ３７５９、ＡＺＤ９２９１、及びＪＧＫ０６８Ｓの活性を示す。 ｐＥＧＦＲ Ａ２８９Ｖに対する、ＡＺＤ３７５９、ＡＺＤ９２９１、及びＪＧＫ０６８Ｓの活性を示す。 ｐＥＧＦＲ Ａ２８９Ｄに対する、ＡＺＤ３７５９、ＡＺＤ９２９１、及びＪＧＫ０６８Ｓの活性を示す。 ｐＥＧＦＲ Ｇ５９８Ｖに対する、ＡＺＤ３７５９、ＡＺＤ９２９１、及びＪＧＫ０６８Ｓの活性を示す。
神経膠腫は最も一般的に生じている形態の脳腫瘍であり、多形膠芽腫（ＧＢＭ）は、全がん関連死のうちの３～４％を引き起こす最も悪性の形態である（Ｌｏｕｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ａｃｔａ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．１１４：９７－１０９．）。世界保健機構は、ＧＢＭを、悪性で有糸分裂的に活性で壊死し易いことを特徴とするグレードＩＶのがんと定義している。ＧＢＭの予後は極めて不良であり、５年生存率は４～５％であり、ＧＢＭの中央生存率は１２．６ヶ月間である（ＭｃＬｅｎｄｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ．９８：１７４５－１７４８．）。このことは、固有の治療的制約、例えば、高い発症平均年齢、腫瘍の位置、及び現在における腫瘍病態生理学の不十分な理解などに起因し得る（Ｌｏｕｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ａｃｔａ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．１１４：９７－１０９）。ＧＢＭの標準的な現行標準治療としては放射線療法及び化学療法を併用した腫瘍切除術が挙げられるが、近年において、生存率を向上させる著しい改善はほとんどなされていない（Ｓｔｅｗａｒｔ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｌａｎｃｅｔ．３５９：１０１１－１０１８．）。
ＧＢＭ化学療法薬の標準は、ＤＮＡ内のプリン（ＡまたはＧ）をメチル化してアポトーシスを誘導する脳透過性アルキル化剤であるテモゾロミド（ＴＭＺ）である（Ｓｔｕｐｐ，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５２：９８７－９９６）。しかしながら、ＴＭＺの使用には、健常細胞のＤＮＡ損傷から有意なリスクが生じ、ＧＢＭ細胞が薬物に対する耐性を速やかに発現し得るという欠点がある（Ｃａｒｌｓｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．（２０１４）ＥＭＢＯ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．６：１３５９－１３７０）。それゆえ、別の化学療法薬選択肢が差し迫って求められている。
ＥＧＦＲは、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、及びＥＲＢＢ４と共に、受容体チロシンキナーゼのＨＥＲスーパーファミリーのメンバーである。ＧＢＭ進行の一般的な要因は、全ＧＢＭ症例のうちのほぼ４０％に見つかっているＥＧＦＲ増幅である（Ｈｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ．５：３４１－３５４；Ｈａｔａｎｐａａ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎｅｏｐｌａｓｉａ．１２：６７５－６８４）。加えて、ＥＧＦＲ増幅はＥＧＦＲタンパク質バリアントの存在と関連しており、ＥＧＦＲ変異の６８％において、アミノ酸６から２７３の間のＮ末端リガンド結合領域に欠失が存在している。ＥＧＦＲのリガンド結合ドメインにおけるこれらの欠失により、リガンド非依存的活性化が引き起こされ得る（Ｙａｍａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．８１：７７３－７７９．）。
低分子チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）は最も臨床的に進んでいるＥＧＦＲ標的治療薬であり、可逆阻害剤と不可逆阻害剤の両方の臨床試験が行われている。可逆阻害剤及び不可逆阻害剤の例としては、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、ＰＫＩ１６６、カネルチニブ、及びペリチニブが挙げられる（Ｍｉｓｃｈｅｌ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．１３：５２－６１）。機構的に、これらのＴＫＩは、ＥＧＦＲのチロシンキナーゼドメインへの結合においてＡＴＰと競合するが、これらのＥＧＦＲ特異的チロシンキナーゼ阻害剤は比較的神経膠腫に対する効果がなく、エルロチニブの場合の奏効率は２５％ほどの高さに達するに過ぎない（Ｍｉｓｃｈｅｌ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．１３：５２－６１；Ｇａｎ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１６：７４８－５４）。ＴＫＩが、ＧＢＭ患者において、良好な忍容性を示し、ある程度の抗腫瘍活性を示しているとはいえ、受容体阻害に対する耐性の周期的に起こる問題がＴＫＩの効果を限定的なものとしている（Ｌｅａｒｎ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．１０：３２１６－３２２４；Ｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．３：４３０－４４６）。加えて、治療後におけるゲフィチニブ及びエルロチニブの脳の血漿中濃度が開始用量の６～１１％に過ぎないことを最近の研究が示しており、表１に示すとおり、これらの化合物が血液脳関門を通過できていない場合があることを示唆している（Ｋａｒｐｅｌ－Ｍａｓｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７：１０００－１０１２）。それゆえ、標的への不十分な送達が、期待はずれの臨床結果の別の原因であり得る。
Figure 0007474269000002
このエビデンスを考慮すると、血液脳関門を通過してＥＧＦＲ及びそのアイソフォームを治療して阻害する能力を有する強力なチロシンキナーゼ阻害剤に対する満たされていない臨床的ニーズが残されている。
更に、発がんシグナル伝達経路と代謝経路の間のクロストークが、ＧＢＭにおける新規組み合わせ療法の機会を生み出すことを本発明者らが示している。より具体的には、本発明者らは、ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込みの急性阻害により、極めてわずかな細胞死が誘導され、更に、患者由来ＧＢＭ細胞におけるアポトーシス閾値が低下し、細胞がアポトーシスに向けて「活性化する」ことを発見した。予想外なことに、本発明者らによる機構試験により、細胞質ｐ５３が内因性アポトーシスを誘発するのをＢｃｌ－ｘＬが阻害することにより腫瘍生存につながることが明らかとなった。ｐ５３の薬理学的安定化（例えば、脳透過性低分子イダサヌトリンなどによる）により、ｐ５３が内因性アポトーシス機構に関与することが可能となり、ＧＢＭ異種移植片における標的化ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込みとの相乗的な致死性が促進される。注目すべきことに、本発明者らはまた、例えば、非侵襲的な陽電子放射断層撮影を使用した１８Ｆ－フルオロデオキシグルコース（１８Ｆ－ＦＤＧ）取り込みの急速な変化により、ｉｎ ｖｉｖｏにおける組み合わせへの感受性を予測することが可能となることを発見した。
本発明者らは、とりわけ、ＧＢＭ及びその他の悪性腫瘍における組み合わせ療法に利用可能な、がん遺伝子シグナル伝達とグルコース代謝と細胞質ｐ５３の間の重要な因果関係を同定する。
本開示の化合物
一態様では、本開示は、式Ｉまたは式Ｉ＊の化合物、
Figure 0007474269000003
 またはその薬学的に許容される塩を提供し、
式中、
Ｚはアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ２ａ及びＲ２ｂはそれぞれ、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から独立して選択され、
Ｒ３は、水素、アルキル、またはアシルであり、
Ｒ４はアルコキシであり、
Ｒ５はアルキルであり、Ｒ７及びＲ８はそれぞれ、水素、アルキル、例えば、アルコキシアルキル、アラルキルなど、またはアリールアシルから独立して選択され、
Ｒ１１が、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲ７、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールであり、
Ｒ１２が、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲ８、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールであるか、または、Ｒ１１及びＲ１２が共に炭素環または複素環を完成させるかである。
式Ｉまたは式Ｉ＊の特定の好ましい実施形態では、Ｒ２ａ及びＲ２ｂのうちの少なくとも一方はＨではない。式Ｉまたは式Ｉ＊の特定のこのような実施形態では、Ｒ２ａが水素である場合、Ｒ２ｂは、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から選択される。式Ｉまたは式Ｉ＊のその他のこのような実施形態では、Ｒ２ｂが水素である場合、Ｒ２ａは、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から選択される。
式Ｉまたは式Ｉ＊の特定の実施形態では、化合物は、式（ＩＶａ）または式（ＩＶｂ）の化合物、
Figure 0007474269000004
 またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｒ６のそれぞれの例は、アルキル、アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、ハロ、アルケニル、アルキニル、アラルキルオキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールから独立して選択される。
式Ｉ、Ｉ＊、Ｉｖａ、及びＩＶｂの特定の実施形態では、Ｒ１１は水素である。その他の好ましい実施形態では、Ｒ１１はＯＲ７である。
式Ｉ、Ｉ＊、Ｉｖａ、及びＩＶｂの特定の実施形態では、Ｒ７は水素である。その他の実施形態では、Ｒ７はアルキルである。なおもその他の実施形態では、Ｒ７はアルコキシアルキルである。なおもその他の実施形態では、Ｒ７はアリールアシルである。
式Ｉ、Ｉ＊、Ｉｖａ、及びＩＶｂの特定の実施形態では、Ｒ１２は、ヘテロアリール、例えば、フラニルなどである。特定の実施形態では、ヘテロアリールは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、ハロ、
Figure 0007474269000005
 で置換されている。その他の好ましい実施形態では、Ｒ１２はＯＲ８である。
式Ｉ、Ｉ＊、Ｉｖａ、及びＩＶｂの特定の実施形態では、Ｒ８は水素である。その他の実施形態では、Ｒ８はアルキルである。なおもその他の実施形態では、Ｒ８はアルコキシアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ８は、
Figure 0007474269000006
 で置換されたアルキルである。
式Ｉ、Ｉ＊、Ｉｖａ、及びＩＶｂの特定の好ましい実施形態では、Ｒ１１及びＲ１２は結合して、炭素環または複素環、例えば、５員環、６員環、または７員環の炭素環または複素環などを形成する。特定の実施形態では、炭素環または複素環は、ヒドロキシル、アルキル（例えば、メチル）、またはアルケニル（例えば、ビニル）で置換されている。
式Ｉ、Ｉ＊、Ｉｖａ、及びＩＶｂの特定の実施形態では、化合物は、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、またはＩｄの化合物、
Figure 0007474269000007
 またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり、
Ｚはアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１は水素またはアルキルであり、
Ｒ２ａ及びＲ２ｂはそれぞれ、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から独立して選択され、
Ｒ３は、水素、アルキル、またはアシルであり、
Ｒ４はアルコキシであり、
Ｒ５はアルキルであり、
ｎは０～３である。
式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、またはＩｄの特定の実施形態では、Ｒ２ａまたはＲ２ｂのいずれかは、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から選択される。式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、またはＩｄの特定の好ましい実施形態では、Ｚはフェニルである。式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、またはＩｄの特定の好ましい実施形態では、ＸはＯである。式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、またはＩｄの特定の好ましい実施形態では、ｎは１である。
式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、またはＩｄの特定の実施形態では、化合物は、式（ＩＩａ）または式（ＩＩｂ）の化合物、
Figure 0007474269000008
 または薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｒ６のそれぞれの例は、アルキル、アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、ハロ、アルケニル、アルキニル、アラルキルオキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールから独立して選択される。
特定の実施形態では、式中、Ｒ１は、式Ａ、
Figure 0007474269000009
 で表され、
式中、
Ｒ７ａ及びＲ７ｂがそれぞれ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールから独立して選択されるか、または、Ｒ７ａ及びＲ７ｂが結合してヘテロシクリルを形成するかであり、
ｙは０～３である。
式ＩＩａまたはＩＩｂの特定の実施形態では、Ｒ１はアルキル（例えば、メチルまたはエチル）である。特定の実施形態では、Ｒ１は、ヘテロシクリル（例えば、モルホリニル、ピペリジニル、ピロロジニル、または、Ｎ－メチルピペラジニルなどのピペラジニルなど）で置換されている。その他の実施形態では、Ｒ１はアミノ（例えば、ジメチルアミノ）で置換されている。その他の実施形態では、Ｒ１は、ヒドロキシルで置換されたアルキルである。特定の好ましい実施形態では、Ｒ１はＳ配置である。その他の実施形態では、Ｒ１はＲ配置である。
式ＩＩａまたはＩＩｂの特定の好ましい実施形態では、Ｒ３は水素である。その他の実施形態では、Ｒ３はアシルである。特定の実施形態では、Ｒ３はアルキルアシルである。特定の実施形態では、Ｒ３はアルキルオキシアシルである。特定の実施形態では、Ｒ３はアシルオキシアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ３は
Figure 0007474269000010
 であり、Ｒ９はアルキルである。
式ＩＩａまたはＩＩｂの特定の実施形態では、Ｚは、１つまたは複数のＲ６で任意選択的に置換されたアリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ６のそれぞれの例は、アルキル、アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、ハロ、アルケニル、アルキニル、アラルキルオキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールから独立して選択される。特定の好ましい実施形態では、Ｚは、１、２、３、４、または５つのＲ６で置換されたフェニルである。特定の実施形態では、それぞれのＲ６は、ハロ、アルキル、アルキニル、またはアリールアルコキシから独立して選択される。更により好ましい実施形態では、Ｚは、２－フルオロ－３－クロロフェニル、２－フルオロフェニル、２，３－ジフルオロフェニル、２，４－ジフルオロフェニル、２，５－ジフルオロフェニル、２，６－ジフルオロフェニル、２，４，６－トリフルオロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２－フルオロ－３－ブロモフェニル、２－フルオロ－３－エチニルフェニル、及び２－フルオロ－３－（トリフルオロメチル）フェニルである。その他の更により好ましい実施形態では、Ｚは３－エチニルフェニルである。なおもその他の更により好ましい実施形態では、Ｚは３－クロロ－４－（（３－フルオロベンジル）オキシ）ベンゼンである。なおもその他の更により好ましい実施形態では、Ｚは３－クロロ－２－（トリフルオロメチル）フェニルである。なおもその他の更により好ましい実施形態では、Ｚは３－ブロモフェニルである。なおもその他の更により好ましい実施形態では、Ｚは２－フルオロ－５－ブロモフェニルである。なおもその他の更により好ましい実施形態では、Ｚは２，６－ジフルオロ－５－ブロモフェニルである。特定の実施形態では、Ｚは、
Figure 0007474269000011
 から選択される１つのＲ６で置換されており、Ｒ９及びＲ１０は、アルキルから独立して選択される。
式ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの特定の実施形態では、化合物は、式（ＩＩＩａ）の化合物、
Figure 0007474269000012
 であり、
それぞれのＲ６は、フルオロ、クロロ、またはブロモから独立して選択される。
式ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの特定の実施形態では、化合物は、式（ＩＩＩｂ）の化合物、
Figure 0007474269000013
 であり、
それぞれのＲ６は、フルオロ、クロロ、またはブロモから独立して選択される。
式ＩＩＩａまたはＩＩＩｂの特定の実施形態では、化合物は、式（ＩＩＩｃ）の化合物、
Figure 0007474269000014
 であり、
それぞれのＲ６は、フルオロ、クロロ、またはブロモから独立して選択される。
式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ、またはＩＩＩｃの特定の実施形態では、Ｒ２ａはハロ（例えば、フルオロ）である。その他の好ましい実施形態では、Ｒ２ａは水素である。
式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ、またはＩＩＩｃの特定の実施形態では、Ｒ２ｂはハロ（例えば、フルオロ）である。その他の好ましい実施形態では、Ｒ２ｂは水素である。
式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ、またはＩＩＩｃの特定の実施形態では、化合物は、
Figure 0007474269000015
 、またはその薬学的に許容される塩である。
式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ、またはＩＩＩｃの特定の実施形態では、化合物は、
Figure 0007474269000016
Figure 0007474269000017
、またはその薬学的に許容される塩である。
式Ｉの特定の実施形態では、化合物は、
Figure 0007474269000018
 またはその薬学的に許容される塩である。
式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩＩａ、ＩＩＩｂ、またはＩＩＩｃの特定の実施形態では、化合物は、
Figure 0007474269000019
 またはその薬学的に許容される塩である。
治療方法
特定の態様では、本開示は、ある量の本開示の化合物を対象に投与することを含む、ＥＧＦＲまたはΔＥＧＦＲを阻害するための方法を提供する。
特定の態様では、本開示は、がんの治療を必要とする対象にある量の本開示の化合物を投与することを含む、がんを治療するための方法を提供する。特定の実施形態では、がんは、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、心臓癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、線維肉腫、胃癌、胃腸癌、頭、脊椎、及び頸部の癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、肝臓癌、リンパ腫、黒色腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、陰茎癌、精巣胚細胞癌、胸腺腫癌、胸腺癌、肺癌、卵巣癌、または前立腺癌である。特定の実施形態では、がんは、神経膠腫、星状細胞腫、または膠芽腫である。特定の実施形態では、がんは膠芽腫である。特定の実施形態では、がんは多形膠芽腫である。特定の実施形態では、方法はがん細胞増殖を抑制する。
特定の態様では、本開示は、対象におけるがんを治療するための方法を提供し、方法は、グルコース代謝阻害剤及び追加の薬剤を対象に投与することを含み、グルコース代謝阻害剤は本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩であり、追加の薬剤は細胞質ｐ５３安定化剤である。特定の実施形態では、がんは、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、心臓癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、線維肉腫、胃癌、胃腸癌、頭、脊椎、及び頸部の癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、肝臓癌、リンパ腫、黒色腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、陰茎癌、精巣胚細胞癌、胸腺腫癌、胸腺癌、肺癌、卵巣癌、または前立腺癌である。特定の実施形態では、がんは、神経膠腫、星状細胞腫、または膠芽腫である。特定の実施形態では、がんは膠芽腫である。特定の実施形態では、がんは多形膠芽腫である。特定の実施形態では、方法はがん細胞増殖を抑制する。特定の実施形態では、がんは再発性または難治性である。その他の実施形態では、がんは未治療である。
特定の実施形態では、対象は、
ａ．対象から第１の血液試料を得ること、
ｂ．対象にケトン誘発食を実施すること、
ｃ．一定期間ケトン誘発食を実施した後に対象から第２の血液試料を得ること、
ｄ．第１の血液試料中及び第２の血液試料中におけるグルコースレベルを測定すること、
ｅ．第２の血液試料中におけるグルコースレベルを、第１の血液試料中におけるグルコースレベルと比較すること、及び
ｆ．第２の血液試料中におけるグルコースレベルが第１の血液試料中におけるグルコースレベルと比較して低下した場合に、対象が影響を受けやすいことを確認すること、
を含む方法により、グルコース代謝阻害剤の影響を受けやすいことが確認されている。
特定の実施形態では、第２の血液試料と対照血液試料の間のグルコースレベルの低下は、約０．１５ｍＭまたは０．１５ｍＭ超である。特定の実施形態では、第２の血液試料と対照血液試料の間のグルコースレベルの低下は、約０．２０ｍＭまたは０．２０ｍＭ超である。特定の実施形態では、第２の血液試料と対照血液試料の間のグルコースレベルの低下は、０．１５ｍＭ～２．０ｍＭの範囲である。特定の実施形態では、第２の血液試料と対照血液試料の間のグルコースレベルの低下は、０．２５ｍＭ～１．０ｍＭの範囲である。
特定の実施形態では、細胞質ｐ５３安定化剤はＭＤＭ２阻害剤である。特定の実施形態では、ＭＤＭ２阻害剤はヌトリンである。特定の実施形態では、ＭＤＭ２阻害剤はヌトリン－３またはイダサヌトリンである。特定の実施形態では、対象は、５０ｍｇ～１６００ｍｇのイダサヌトリンを投与される。特定の実施形態では、対象は、１００ｍｇのイダサヌトリンを投与される。特定の実施形態では、対象は、１５０ｍｇのイダサヌトリンを投与される。特定の実施形態では、対象は、３００ｍｇのイダサヌトリンを投与される。特定の実施形態では、対象は、４００ｍｇのイダサヌトリンを投与される。特定の実施形態では、対象は、６００ｍｇのイダサヌトリンを投与される。特定の実施形態では、対象は、１６００ｍｇのイダサヌトリンを投与される。その他の実施形態では、ＭＤＭ２阻害剤は、ＲＯ５０４５３３７、ＲＯ５５０３７８１、ＲＯ６８３９９２１、ＳＡＲ４０５８３８、ＤＳ－３０３２、ＤＳ－３０３２ｂ、またはＡＭＧ－２３２である。
特定の実施形態では、細胞質ｐ５３安定化剤はＢＣＬ－２阻害剤である。特定の実施形態では、ＢＣＬ－２阻害剤は、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドＧ３１３９、ｍＲＮＡアンタゴニストＳＰＣ２９９６、ベネトクラックス（ＡＢＴ－１９９）、ＧＤＣ－０１９９、オバトクラックス、パクリタキセル、ナビトクラックス（ＡＢＴ－２６３）、ＡＢＴ－７３７、ＮＵ－０１２９、Ｓ ０５５７４６、またはＡＰＧ－１２５２である。
特定の実施形態では、細胞質ｐ５３安定化剤はＢｃｌ－ｘＬ阻害剤である。特定の実施形態では、Ｂｃｌ－ｘＬ阻害剤は、ＷＥＨＩ ５３９、ＡＢＴ－２６３、ＡＢＴ－１９９、ＡＢＴ－７３７、サブトクラックス、ＡＴ１０１、ＴＷ－３７、ＡＰＧ－１２５２、またはガンボギン酸である。
特定の実施形態では、グルコース代謝阻害剤及び細胞質ｐ５３安定化剤は同一の組成物で投与される。その他の実施形態では、グルコース代謝阻害剤及び細胞質ｐ５３安定化剤は別々の組成物で投与される。
特定の実施形態では、方法は、別の治療薬の投与を更に含む。
神経膠腫のタイプ及びステージ
脳または脊椎で生じる腫瘍である原発性悪性脳腫瘍は、集合的に神経膠腫として知られている。神経膠腫は特定のタイプのがんではないが、グリア細胞で生じる腫瘍を表すのに使用される用語である。原発性悪性脳腫瘍の例としては、星状細胞腫、毛様性星状細胞腫、多形性黄色星状膠細胞腫、びまん性星状細胞腫、退形成星状細胞腫、ＧＢＭ、神経節膠腫、希突起膠腫、上衣腫が挙げられる。脳腫瘍のＷＨＯ分類によると、星状細胞腫は、基礎となる病理によって判定される４つのグレードに分類されている。神経膠腫を分類するのに使用される特性としては、有糸分裂、細胞または核の異型性、及び血管増殖、ならびに偽柵状配列特性を伴う壊死が挙げられる。悪性（または高悪性度）神経膠腫としては、未分化神経膠腫（ＷＨＯグレードＩＩＩ）に加えて多形膠芽腫（ＧＢＭ、ＷＨＯグレードＩＶ）が挙げられる。これらは、最も予後の悪い最も浸潤性の高い脳腫瘍である。
ＧＢＭは、最も一般的、複雑、治療耐性、及び致死的なタイプの脳癌であり、全脳癌のうちの４５％を占め、毎年１１，０００人近くの男性、女性、及び小児が診断されている。ＧＢＭ（グレード４星状細胞腫及び多形膠芽腫としても周知）は、最も一般的なタイプの悪性（がん性）原発性脳腫瘍である。ＧＢＭは、多くの理由から極めて浸潤性が高いものである。第１に、膠芽腫細胞は、それらが豊富な血液供給を促進する物質を分泌することから、急速に増殖する。膠芽腫細胞はまた、正常細胞と共に微細なつる状の腫瘍を送り込むことにより、遠く離れたところにある正常な脳に侵入して浸潤する能力を有している。２つのタイプの膠芽腫が知られている。第１のＧＢＭは最も一般的な形態であり、急速に増殖し、早期に症候を引き起こす場合もある。第２の膠芽腫はそれほど一般的ではなく、全ＧＢＭのうちの約１０パーセントを占めている。第２の膠芽腫は低悪性度のびまん性星状細胞腫または退形成星状細胞腫から進行するものであり、より若年の患者においてより頻繁に見つかっている。第２のＧＢＭは優先的に前頭葉に位置しており、より良好な予後を有している。
ＧＢＭは一般的に、腫瘍の外科的切除、放射線療法、及び化学療法を含む組み合わせマルチモーダル治療計画により治療される。先ず、外科手術中に可能な限り多くの腫瘍を除去する。脳内における腫瘍の位置は、どの程度その腫瘍を安全に除去することができるかを決定することが多い。外科手術後、放射線療法及び化学療法を用いて残った腫瘍細胞の増殖を遅らせる。経口化学療法剤であるテモゾロミドは、６週間にわたり最も頻繁に、その後、毎月使用される。追加の薬剤であるベバシズマブ（アバスチン（登録商標）として周知）はまた、治療中に使用される。この薬剤は、血液供給を補充する腫瘍の能力を攻撃し、多くの場合、腫瘍の増殖を遅らせる、または更に、腫瘍の増殖を停止させる。
新規の臨床試験中の治療法をまた使用するが、これらの治療法は、治療法を標準治療に追加すること、または標準治療の一部をより良好に作用し得る別の治療法に置き換えることを含んでいてもよい。これらの治療法の一部としては、ワクチン免疫療法などの免疫療法、または、腫瘍が存在する脳の領域への低用量電気パルス、及び、ＮＵ－０１２９などの球状核酸（ＳＮＡ）によるナノ療法が挙げられる。一部の実施形態では、本開示の方法は、上記の療法のうちの１つまたは複数と組み合わせて使用される。
本明細書で論述する方法及び組成物の実施形態はまた、肺癌、非ＣＮＳがん、ＣＮＳがん、及びＣＮＳ転移、例えば、脳転移、軟膜転移、脈絡膜転移、脊髄転移、及びその他の転移などを含むがこれらに限定されないその他のタイプのがんに応用可能であると考えられる。
細胞質ｐ５３安定化剤
本発明者らは、例えば、ＣＮＳ透過性低分子などによる薬理学的なｐ５３安定化が、患者由来原発性ＧＢＭモデルにおいて、ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込みの阻害と相乗的に致死性であることを実証した。本発明者らは、ｐ５３の非転写機能が、代謝レスポンダーにおける内因性アポトーシスの刺激において重要な役割を有し得ることを初めて実証した。それゆえ、本明細書に記載の治療方法は、グルコース代謝阻害剤と組み合わせた細胞質ｐ５３安定化剤（複数可）の投与を含む。細胞質ｐ５３安定化剤（複数可）及びグルコース代謝阻害剤は、同一の組成物、または同時または連続的の別々の組成物で投与することができる。一部の実施形態では単一のｐ５３安定化剤を使用し、その他の実施形態では２種以上のｐ５３安定化剤を使用することが考えられる。例えば、ヌトリンとＡＢＴ ７３７（ＢＣＬ－２及びＢＣＬ－ＸＬに結合する）の組み合わせが、プロアポトーシスタンパク質及び抗アポトーシスタンパク質のバランスをミトコンドリアレベルで相乗的に標的とすることにより細胞死を促進することが報告されている（Ｈｏｅ ｅｔ ａｌ．２０１４．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｖｏｌ．１３．ｐｐ．２１７）。本明細書で意図するとおり、細胞質ｐ５３安定化剤は、ｐ５３を直接または間接的に薬理学的に安定化または活性化させることができる任意の低分子、抗体、ペプチド、タンパク質、核酸、またはその誘導体である。細胞質ｐ５３の安定化により、アポトーシスに向けたがん細胞などの細胞の活性化がもたらされる。
ＭＤＭ２アンタゴニスト
細胞内におけるｐ５３のタンパク質レベルは、その負の調節因子、Ｅ３ユビキチンタンパク質リガーゼＭＤＭ２によって厳重に制御され低く維持されている。本開示の方法または組成物の実施形態では、細胞質ｐ５３安定化剤はＭＤＭ２アンタゴニスト／阻害剤である。一部の実施形態では、ＭＤＭ２アンタゴニストはヌトリンである。更なる実施形態では、ヌトリンはヌトリン－３またはイダサヌトリンである。その他の実施形態では、ＭＤＭ２アンタゴニストは、ＲＯ５０４５３３７（ＲＧ７１１２としても周知）、ＲＯ５５０３７８１、ＲＯ６８３９９２１、ＳＡＲ４０５８３８（ＭＩ－７７３としても周知）、ＤＳ－３０３２、ＤＳ－３０３２ｂ、もしくはＡＭＧ－２３２、または任意のその他のＭＤＭ２阻害剤である。
ＭＤＭ－２に結合することが知られている本方法の範囲内のその他の化合物としては、Ｒｏ－２４４３、ＭＩ－２１９、ＭＩ－７１３、ＭＩ－８８８、ＤＳ－３０３２ｂ、ベンゾジアゼピンジオン（例えば、ＴＤＰ５２１２５２）、スルホンアミド（例えば、ＮＳＣ２７９２８７）、クロメノトリアゾロピリミジン、モルホリノン及びピペリジノン（ＡＭ－８５５３）、テルフェニル、カルコン、ピラゾール、イミダゾール、イミダゾール－インドール、イソインドリノン、ピロリジノン（例えば、ＰＸＮ８２２）、プリアクソン、ピペリジン、天然に由来するプレニル化キサントン、ＳＡＨ－８（ステープルペプチド）ｓＭＴｉｄｅ－０２、ｓＭＴｉｄｅ－０２ａ（ステープルペプチド）、ＡＴＳＰ－７０４１（ステープルペプチド）、スピロリゴマー（α－ヘリックス模倣薬）が挙げられる。ＭＤＭ２のタンパク質フォールディングを引き起こすことが知られているその他の化合物としては、ＰＲＩＭＡ－１ＭＥＴ（ＡＰＲ－２４６としても周知）Ａｐｒｅａ １０２－１０５、ＰＫ０８３、ＰＫ５１７４、ＰＫ５１９６、ＰＫ７０８８、ベンゾチアゾール、スチクチン酸、及びＮＳＣ３１９７２６が挙げられる。
ＢＣＬ－２阻害剤
本方法及び組成物の更なる実施形態では、細胞質ｐ５３安定化剤はＢＣＬ－２阻害剤である。一部の実施形態では、ＢＣＬ－２阻害剤は、例えば、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドＧ３１３９、ｍＲＮＡアンタゴニストＳＰＣ２９９６、ベネトクラックス（ＡＢＴ－１９９）、ＧＤＣ－０１９９、オバトクラックス、パクリタキセル、ナビトクラックス（ＡＢＴ－２６３）、ＡＢＴ－７３７、ＮＵ－０１２９、Ｓ ０５５７４６、ＡＰＧ－１２５２、または任意のその他のＢＣＬ－２阻害剤である。
Ｂｃｌ－ｘＬ阻害剤
本方法及び組成物のなおも更なる実施形態では、細胞質ｐ５３安定化剤はＢｃｌ－ｘＬ阻害剤である。一部の実施形態では、Ｂｃｌ－ｘＬ阻害剤は、例えば、ＷＥＨＩ ５３９、ＡＢＴ－２６３、ＡＢＴ－１９９、ＡＢＴ－７３７、サブトクラックス、ＡＴ１０１、ＴＷ－３７、ＡＰＧ－１２５２、ガンボギン酸、または任意のその他のＢｃｌ－ｘＬ阻害剤である。
評価方法
グルコース取り込み試験
本開示の方法及び組成物の実施形態では、ＧＢＭまたはがんを有する対象は、「代謝レスポンダー」または「代謝ノンレスポンダー」（すなわち、グルコース代謝阻害剤の影響を受けやすいことが確認されている）のいずれかに分類される。特定の実施形態では、対象の分類を行ってから、グルコース代謝阻害剤及び細胞質ｐ５３安定化剤を含む治療薬を対象に投与する。それゆえ、本開示は、がんを評価する、対象を分類する、グルコース代謝、解糖、またはグルコース取り込みの解析を含む、治療薬への対象の感受性を確認するための方法を提供する。対象を代謝レスポンダーに分類するための方法については、実施例１に詳細に記載されている。解糖及びグルコース取り込みをモニターするための技術は、Ｔ．ＴｅＳｌａａ ａｎｄ Ｍ．Ａ．Ｔｅｉｔｅｌｌ．２０１４．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ ５４２，ｐｐ．９２－１１４（参照により本明細書に組み込まれる）により提供されている。
解糖は、２分子のＡＴＰが同時に生成される、１分子のグルコースの２分子のピルビン酸への細胞内生化学的変換である。ピルビン酸は、ミトコンドリア内のトリカルボン酸（ＴＣＡ）回路に入ってＮＡＤＨ及びＦＡＤＨ２を生成することを含む、いくつかの潜在的な運命を有する代謝中間体である。代替的に、ピルビン酸は、乳酸脱水素酵素によって、細胞質基質内において乳酸へと変換され得る（ＮＡＤＨからＮＡＤ＋が同時に再生される）。解糖によってフラックスが増加すると、例えば、ＡＴＰの形態の更なるエネルギーに加えて、ヌクレオチド、脂質、及びタンパク質を生合成するためのグルコース由来代謝中間体が供給されることによって、がん細胞の増殖が支援される。Ｗａｒｂｕｒｇ（Ｏｎｃｏｌｏｇｉａ．１９５６；９（２）：７５－８３）は、酸素が利用可能な場合に主に呼吸を行う非悪性細胞とは対照的に、増殖性腫瘍細胞が好気性解糖（酸素の存在下におけるグルコースの乳酸への変換）を増加させることを初めて観察した。ワールブルグ効果と呼ばれるこのミトコンドリアバイパスは、がん細胞、活性化リンパ球、及び多能性幹細胞を含む急速に増殖する細胞において生じる。ワールブルグ効果は、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）スキャンを使用して、フッ素化グルコースアナログ、例えば、１８Ｆ－デオキシグルコースなどの細胞取り込みの増加を確認する、臨床診断検査に利用されている。
それゆえ、解糖は、治療法及び診断法のための標的を表している。本方法の文脈において、悪性細胞によるグルコース取り込み及び乳酸排出の測定は、グルコース異化、及び／またはグルコース代謝阻害剤への感受性におけるシフトを検出するのに有用であり得る。このようなシフトを検出することは、ＧＢＭを治療するための方法、効果がない治療のリスクを低下させるための方法、腫瘍生存の可能性を低下させるための方法において重要である。本開示の目的において、１８Ｆ－デオキシグルコースＰＥＴは、特定の実施形態では、ｐ５３活性化への感受性を予測するための迅速な非侵襲的機能性バイオマーカーとして機能する。この非侵襲的解析は、薬物動態／薬力学評価が極めて困難で非現実的である悪性脳腫瘍においてとりわけ有用となり得る。一部の例では、遅延イメージングプロトコル（４１）、及びＭＲＩ融合を用いたパラメトリック応答マップ（ＰＲＭ）は、腫瘍１８Ｆ－ＦＤＧ取り込み（４２）の変化を定量するのに有用であり得る。
特定の態様では、方法は、グルコース取り込み及び乳酸生成を測定することに関連し得る。培地中の細胞については、解糖フラックスは、グルコース取り込み及び乳酸排出を測定することにより定量することができる。細胞へのグルコース取り込みはグルコース輸送体（Ｇｌｕｔ１～Ｇｌｕｔ４）によるものであり、それに対し、細胞膜における乳酸排出はモノカルボン酸輸送体（ＭＣＴ１～ＭＣＴ４）によるものである。
細胞外のグルコース及び乳酸
グルコース取り込み及び乳酸排出を検出するための方法としては、例えば、細胞外のグルコースまたは乳酸のキット、細胞外バイオアナライザー、ＥＣＡＲ測定、［３Ｈ］－２－ＤＧまたは［１４Ｃ］－２－ＤＧの取り込み、１８ＦＤＧの取り込み、または２－ＮＢＤＧの取り込みが挙げられる。
細胞培養培地中のグルコースレベル及び乳酸レベルを定量するのに、市販のキット及び機器が利用可能である。キット検出法は一般的に比色定量または蛍光定量であり、標準的なラボ用機器、例えば、分光光度計などとの相性が良い。ＢｉｏＰｒｏｆｉｌｅ Ａｎａｌｙｚｅｒｓ（例えば、Ｎｏｖａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌなど）またはＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎａｌｙｚｅｒｓ（例えば、ＹＳＩ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓなど）は、細胞培養培地中のグルコースと乳酸の両方のレベルを測定することができる。ＧｌｕｃＣｅｌｌ（Ｃｅｓｃｏ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔｓ）は、細胞培養培地中のグルコースレベルのみを測定することができる。それぞれの市販の方法に異なる検出プロトコルがあるとはいえ、解析用培地の採取は同一である。
細胞外酸性化速度
解糖はまた、周囲の培地の細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）の測定により測定することができるが、それは主に、ピルビン酸から乳酸への変換後における単位時間あたりの乳酸の排出によるものである。Ｓｅａｈｏｒｓｅ細胞外フラックス（ＸＦ）アナライザー（Ｓｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）は、同一細胞における解糖及び酸化的リン酸化（酸素消費による）を同時に測定するための装置である。
グルコースアナログの取り込み
本開示の方法の特定の実施形態は、グルコースアナログの使用を含む。当業者にはよく知られているが、細胞を用いてグルコース取り込み率を求めるには、グルコースの標識アイソフォームを細胞培養培地に加えてから、任意の一定期間後における細胞内を測定してもよい。これらの試験のための例示的なタイプのグルコースアナログとしては、放射性グルコースアナログ、例えば、２－デオキシ－Ｄ－［１，２－３Ｈ］－グルコース、２－デオキシ－Ｄ－［１－１４Ｃ］－グルコース、または２－デオキシ－２－（１８Ｆ）－フルオロ－Ｄ－グルコース（１８ＦＤＧ）など、または、蛍光性グルコースアナログ、例えば、２－［Ｎ－（７－ニトロベンズ－２－オキサ－１，３－ジアキソール－４－イル）アミノ］－２－デオキシグルコース（２－ＮＢＤＧ）などが挙げられるがこれらに限定されない。放射性グルコースアナログ取り込みの測定にはシンチレーションカウンターが必要である一方で、２－ＮＢＤＧ取り込みは一般的に、フローサイトメトリーまたは蛍光顕微鏡を用いて測定される。一部の実施形態では、グルコース取り込みは、放射能標識グルコースである２－デオキシ－２－［フッ素－１８］フルオロ－Ｄ－グルコース（１８Ｆ－ＦＤＧ）の取り込みにより測定される。更なる実施形態では、１８Ｆ－ＦＤＧの検出はポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）によるものである。一部の実施形態では、生検材料はＧＢＭ腫瘍から採取される。１８Ｆ－ＦＤＧの測定の例の詳細な記述については、以下の実施例において提供する。
特定の態様では、方法は、生体試料、例えば、腫瘍試料などのグルコース取り込みを対照と比較することに関連し得る。倍率増加または倍率減少は、少なくともまたは最大で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、もしくはそれ以上、またはそれらの中に導き出せる任意の範囲であり得る。代替的に、試料と参照の間の発現の差異は、少なくともまたは最大で、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％の差異、またはそれらの中に導き出せる任意の範囲などの減少率または増加率で表してもよい。
相対発現レベルを表すためのその他の方法では、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３． ０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７．３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、またはそれらの中に導き出せる任意の範囲などの正規化数または相対数を用いる。一部の実施形態では、レベルは対照と比較したものであってもよい。
アルゴリズム、例えば、荷重投票プログラムなどを使用して、バイオマーカーレベルの判定を容易としてもよい。加えて、その他の臨床エビデンスをバイオマーカーベース試験と組み合わせて、偽判定のリスクを低下させてもよい。一部の実施形態では、その他の細胞遺伝学評価が考えられ得る。
合成方法
別の態様では、本開示は、スキーム１またはスキーム２、
Figure 0007474269000020
Figure 0007474269000021
 による、式Ｉ、Ｉ＊の化合物、またはその薬学的に許容される塩を作製するための方法を提供し、
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり、
Ｚはアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１はアルキルであり、
Ｒ２ａ及びＲ２ｂはそれぞれ、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から独立して選択され、
Ｒ３は、水素、アルキル、またはアシルであり、
Ｒ４はアルコキシであり、
Ｒ５はアルキルであり、
Ｒ２１は、脱離基、例えば、ハロアルキルまたはスルホニルアルキルで置換されたアルキルであり、
Ｂは塩基であり、
Ｎｕは、窒素含有複素環（例えば、少なくとも１つのＮ－Ｈ結合を有する）、アミノアルキル、またはヒドロキシアルキルであり、
Ｓｖ１は溶媒であり、
ｎは０～３である。
特定の好ましい実施形態では、Ｒ２１はスルホニルアルキル（例えば、ＣＨ３Ｓ（Ｏ）２ＯＣＨ２－）である。
特定の実施形態では、Ｂは窒素塩基（例えば、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン）である。
特定の実施形態では、Ｎｕは、少なくとも１つのＮ－Ｈ結合を有する窒素含有複素環（例えば、モルホリン、Ｎ－メチルピペラジン、ピペリジン、またはピロリジン）である。その他の実施形態では、Ｎｕはアミノアルキル（例えば、ジメチルアミン）である。
特定の実施形態では、溶媒は非プロトン性溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド）である。
特定の好ましい実施形態では、方法は、スキーム３または４、
Figure 0007474269000022
Figure 0007474269000023
 による工程を更に含み、
式中、
Ｒ２２はアルキルまたはヒドロキシアルキルであり、
Ｒ２３ａ及びＲ２３ｂはそれぞれアルキルであり、
Ｒ２４はアミノアリールまたはアミノヘテロアリールであり、
Ｓｖ２は酸である。
特定の好ましい実施形態では、Ｒ２２はヒドロキシアルキルである。
特定の実施形態では、Ｒ２３ａ及びＲ２３ｂはそれぞれメチルである。
特定の実施形態では、Ｒ２４はアミノアリールである。その他の実施形態では、Ｒ２４はアミノヘテロアリールである。
特定の実施形態では、Ｓｖ２はアルキル酸（例えば、酢酸）である。
特定の好ましい実施形態では、スキーム３または４の工程は、１１５～１５０℃の範囲の温度で実施される。特定の実施形態では、工程は、１２５～１３０℃の範囲の温度で実施される。特定の実施形態では、工程は、塩基、例えば、水酸化アンモニウムなどを用いた処理を更に含む。
特定の実施形態では、方法は精製工程を更に含む。特定の実施形態では、精製工程は、カラムクロマトグラフィー、分取薄層クロマトグラフィー、または高速液体クロマトグラフィーを含む。
定義
本明細書において特に定義しない限り、本出願で用いる科学用語及び専門用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。一般的に、本明細書に記載する、化学、細胞及び組織培養、分子生物学、細胞及びがん生物学、神経生物学、神経化学、ウイルス学、免疫学、微生物学、薬理学、遺伝学、ならびにタンパク質及び核酸化学と関連させて用いる専門用語、及びそれらの技術は、当該技術分野において周知かつ一般的に使用されるものである。
本開示の方法及び技術は一般的に、特に明記しない限り、当該技術分野において周知の従来の方法に従い、本明細書の全体にわたり引用及び論述する様々な一般的な参照文献及びより具体的な参照文献に記載のとおりに実施される。例えば、“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｎｅｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ”，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２０００）；Ｍｏｔｕｌｓｋｙ，“Ｉｎｔｕｉｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ”，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９９５）；Ｌｏｄｉｓｈ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．”，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２０００）；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ，７ｔｈ ｅｄ．”，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．（１９９９）；及びＧｉｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．”，Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，ＭＡ（２０００）を参照されたい。
本明細書で用いる化学用語は、本明細書において特に定義しない限り、「Ｔｈｅ ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ」，Ｐａｒｋｅｒ Ｓ．，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃ．Ａ．（１９８５）によって例示されるように、当該技術分野における従来の用法に従い使用される。
上記の全て、ならびに、本出願において参照する任意のその他刊行物、特許、及び公開特許出願は明示的に、参照により本明細書に組み込まれる。矛盾が生じた場合には、本明細書（その具体的な定義を含む）が優先される。
用語「薬剤」は、本明細書において、化合物（例えば、有機化合物または無機化合物、化合物の混合物など）、生体高分子（例えば、核酸、抗体（その一部を含む）に加えて、ヒト化抗体、キメラ抗体、及びヒト抗体、ならびにモノクローナル抗体、タンパク質またはその一部、例えば、ペプチド、脂質、糖質など）、または、生体物質、例えば、細菌、植物、真菌、または動物（とりわけ哺乳動物）の細胞または組織などから得られた抽出物を表すために使用される。薬剤としては、例えば、その構造が既知である薬剤、及びその構造が未知である薬剤が挙げられる。このような薬剤のＡＲ阻害能またはＡＲ分解促進能により、このような薬剤は、本開示の方法及び構成における「治療薬」として好適になり得る。
「患者」、「対象」、または「個体」は同じ意味で用いられ、ヒトまたは非ヒト動物のいずれかのことを意味する。これらの用語は、哺乳動物、例えば、ヒト、霊長類、家畜動物（ウシ、ブタなどを含む）、伴侶動物（例えば、イヌ、ネコなど）、及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などを含む。
症状または患者を「治療すること」とは、臨床結果を含む有利または望ましい結果を得るための工程を行うことを意味する。本明細書で使用する場合、また当該技術分野において十分に理解されているとおり、「治療」は、臨床結果を含む有利または望ましい結果を得るためのアプローチである。有利または望ましい臨床結果としては、検出可能または検出不能を問わない、１種または複数種の症候または症状の緩和または改善、疾患の度合いの低下、疾患の安定（すなわち、悪化していない）状態、疾患の転移の予防、疾患進行の遅延または緩徐、病態の改善または一時的軽減、及び寛解（部分または完全を問わない）を挙げることができるがこれらに限定されない。「治療」はまた、治療を受けていない場合に予測される生存と比較して生存を延長することを意味し得る。
用語「予防すること」は、技術分野において認知されており、症状、例えば、局所再発（例えば、疼痛）など、疾患、例えば、がんなど、複合性症候群、例えば、心不全など、または任意のその他の医学的症状と関連させて使用する場合、当該技術分野において十分に理解されており、組成物の投与を受けていない対象と比較して、対象における医学的症状の症候の頻度を低下させるまたは対象における医学的症状の発症を遅延させる組成物の投与を含む。それゆえ、がんの予防は、例えば、例えば、統計的及び／または臨床的に有意な量だけ、未治療対照集団と比較して、予防療法を受けている患者の集団における検出可能ながん性増殖の数を減少させること、及び／または、未治療対照集団と比較して、治療集団における検出可能ながん性増殖の出現を遅延させること、を含む。
物質、化合物、または薬剤を対象に「投与すること」、または、物質、化合物、または薬剤の対象への「投与」は、当業者に周知の様々な方法のうちの１つを使用して実施することができる。例えば、化合物または薬剤は、静脈内、動脈、皮膚内、筋肉内、腹腔内、皮下、眼球、舌下、経口（摂取による）、経鼻（吸入による）、脊髄内、大脳内、及び経皮（吸収、例えば、皮膚の管を通したものによる）で投与することができる。化合物または薬剤はまた、化合物または薬剤の徐放、持続放出、または制御放出をもたらす、再充填性または生分解性のポリマーデバイス、またはその他のデバイス、例えば、パッチ及びポンプまたは製剤を用いて、適宜導入することができる。投与することはまた、例えば、長期間に、１回、複数回、及び／または１回または複数回を超えて実施することができる。
物質、化合物、または薬剤の対象への適切な投与方法はまた、例えば、対象の年齢及び／または身体的状態、ならびに化合物または薬剤の化学的特性及び生物学的特性（例えば、溶解性、消化性、バイオアベイラビリティ、安定性、及び毒性）によって決まる。一部の実施形態では、化合物または薬剤は、例えば、摂取により対象に経口投与される。一部の実施形態では、経口投与される化合物または薬剤は、徐放製剤または持続放出製剤である、または、このような持続放出または徐放のためのデバイスを用いて投与される。
本明細書で使用する場合、語句「共同投与」とは、予め投与した治療薬が体内においてなおも有効である間に第２の薬剤が投与されること（例えば、２種の薬剤が患者内において同時に有効となり、それは、２種の薬剤の相乗効果を含み得る）になるような、２種またはそれ以上の異なる治療薬の任意の投与形態のことを意味する。例えば、同一の製剤または、同時または連続的のいずれかの別々の製剤のいずれかで、異なる治療用化合物を投与することができる。それゆえ、このような治療を受ける個体は、異なる治療薬の複合効果から恩恵を受けることができる。
薬物または薬剤の「治療有効量」または「治療有効用量」は、対象に投与する際に目的の治療効果を示す薬物または薬剤の量である。完全な治療効果を１回用量の投与で生じさせる必要は必ずしもなく、連続的な用量の投与を行った後に初めて完全な治療効果が生じるようにしてもよい。それゆえ、治療有効量は、１回または複数回の投与で投与されてもよい。対象が必要とする正確な有効量は、例えば、対象のサイズ、健康状態、及び年齢、ならびに、治療する症状、例えば、がんまたはＭＤＳなどの内容及び度合いによって決まる。当業者は、通常の実験により、任意の状況における有効量を容易に決定することができる。
本明細書で使用する場合、用語「任意選択的な」または「任意選択的に」とは、その用語に続けて記載される事象または状況が発生し得るまたは発生し得ないこと、及び、その記載が、その事象または状況が発生する事例に加えてその事象または状況が発生しない事例を含むことを意味する。例えば、「任意選択的に置換されたアルキル」とは、置換されていてもよいアルキルに加えて、アルキルが置換されていないことを意味する。
当業者が本発明の化合物上の置換基及び置換パターンを選択して、容易に入手可能な出発物質から、当該技術分野において周知の技術に加えて以下に記載する方法を用いて容易に合成可能な化学的に安定な化合物をもたらすことができるということを理解されたい。置換基がそれ自体２つ以上の基で置換されている場合、これらの複数の基は、安定した構造体がもたらされる限りにおいて、同一の炭素上または異なる炭素上にあってもよいということを理解されたい。
本明細書で使用する場合、用語「任意選択的に置換された」とは、任意の構造体における１～６の水素ラジカルが、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ハロゲン、アルキル、ニトロ、シリル、アシル、アシルオキシ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アミノ、アミノアルキル、シアノ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、－ＯＣＯ－ＣＨ２－Ｏ－アルキル、－ＯＰ（Ｏ）（Ｏ－アルキル）２、または－ＣＨ２－ＯＰ（Ｏ）（Ｏ－アルキル）２を含むがこれらに限定されない特定の置換基のラジカルで置換されていることを意味する。好ましくは、「任意選択的に置換された」とは、任意の構造体における１～４の水素ラジカルが上記の置換基で置換されていることを意味する。より好ましくは、１～３の水素ラジカルは上記の置換基で置換されている。置換基は更に置換されていてもよいということを理解されたい。
本明細書で使用する場合、用語「アルキル」とは、Ｃ１－Ｃ１０直鎖アルキル基またはＣ１－Ｃ１０分枝鎖アルキル基を含むがこれらに限定されない飽和脂肪族基のことを意味する。好ましくは、「アルキル」基とは、Ｃ１－Ｃ６直鎖アルキル基またはＣ１－Ｃ６分枝鎖アルキル基のことを意味する。最も好ましくは、「アルキル」基とは、Ｃ１－Ｃ４直鎖アルキル基またはＣ１－Ｃ４分枝鎖アルキル基のことを意味する。「アルキル」の例としては、メチル、エチル、１－プロピル、２－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、１－ペンチル、２－ペンチル、３－ペンチル、ネオ－ペンチル、１－ヘキシル、２－ヘキシル、３－ヘキシル、１－ヘプチル、２－ヘプチル、３－ヘプチル、４－ヘプチル、１－オクチル、２－オクチル、３－オクチル、または４－オクチルなどが挙げられるがこれらに限定されない。「アルキル」基は任意選択的に置換されていてもよい。
用語「アシル」は、技術分野において認知されており、一般式ヒドロカルビルＣ（Ｏ）－、好ましくは、アルキルＣ（Ｏ）－で表される基のことを意味する。
用語「アシルアミノ」は、技術分野において認知されており、アシル基で置換されたアミノ基のことを意味し、例えば、式ヒドロカルビルＣ（Ｏ）ＮＨ－で表され得る。
用語「アシルオキシ」は、技術分野において認知されており、一般式ヒドロカルビルＣ（Ｏ）Ｏ－、好ましくは、アルキルＣ（Ｏ）Ｏ－で表される基のことを意味する。
用語「アルコキシ」とは、それに酸素が結合したアルキル基のことを意味する。代表的なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシなどが挙げられる。
用語「アルコキシアルキル」とは、アルコキシ基で置換されたアルキル基のことを意味し、一般式アルキル－Ｏ－アルキルで表され得る。
用語「アルキル」とは、直鎖アルキル基、分枝鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基、及びシクロアルキル置換アルキル基を含む飽和脂肪族基のことを意味する。好ましい実施形態では、直鎖アルキルまたは分枝鎖アルキルは、その主鎖に３０以下の炭素原子（例えば、直鎖におけるＣ１－３０、分枝鎖におけるＣ３－３０）、及びより好ましくは、２０以下の炭素原子を有している。
更に、本明細書、実施例、及び特許請求の範囲の全体にわたり使用される用語「アルキル」は、非置換アルキル基と置換アルキル基の両方を含むことを意図しており、その後者は、ハロアルキル基、例えば、トリフルオロメチル及び２，２，２－トリフルオロエチルなどを含む炭化水素主鎖の１つまたは複数の炭素上の水素を置換した置換基を有するアルキル部分のことを意味する。
化学部分、例えば、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシなどと共に使用する場合の用語「Ｃｘ－ｙ」または「Ｃｘ－Ｃｙ」とは、鎖中にｘ～ｙの炭素を含有する基を含むことを意味する。Ｃ０アルキルは、基が末端位置にある場合の水素、内部にある場合の結合を表す。Ｃ１－６アルキル基は、例えば、鎖中に１～６の炭素原子を含有している。
用語「アルキルアミノ」とは、本明細書で使用する場合、少なくとも１つのアルキル基で置換されたアミノ基のことを意味する。
用語「アルキルチオ」とは、本明細書で使用する場合、アルキル基で置換されたチオール基のことを意味し、一般式アルキルＳ－で表され得る。
用語「アミド」とは、本明細書で使用する場合、基、
Figure 0007474269000024
 、のことを意味し、
式中、Ｒ９及びＲ１０がそれぞれ独立して、水素またはヒドロカルビル基を表すか、または、Ｒ９及びＲ１０が、それらが結合しているＮ原子と共に、環構造中に４～８の原子を有する複素環を完成させるかである。
用語「アミン」及び「アミノ」は、技術分野において認知されており、非置換アミン及びその塩と置換アミン及びその塩の両方、例えば、
Figure 0007474269000025
 、で表され得る部分のことを意味し、
式中、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１０’がそれぞれ独立して、水素またはヒドロカルビル基を表すか、または、Ｒ９及びＲ１０が、それらが結合しているＮ原子と共に、環構造中に４～８の原子を有する複素環を完成させるかである。
用語「アミノアルキル」とは、本明細書で使用する場合、アミノ基で置換されたアルキル基のことを意味する。
用語「アラルキル」とは、本明細書で使用する場合、アリール基で置換されたアルキル基のことを意味する。
用語「アリール」は、本明細書で使用する場合、環のそれぞれの原子が炭素である置換または非置換の単環芳香族基を含む。好ましくは、環は、５～７員環、より好ましくは、６員環である。用語「アリール」としてはまた、２つまたはそれ以上の炭素が２つの隣接する環に共通している２つまたはそれ以上の環式環を有する多環式環系が挙げられ、環のうちの少なくとも一方は芳香族であり、例えば、もう一方の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／またはヘテロシクリルであり得る。アリール基としては、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、フェノール、アニリンなどが挙げられる。
用語「カルバメート」は、技術分野において認知されており、基、
Figure 0007474269000026
 、のことを意味し、
式中、Ｒ９及びＲ１０は独立して、水素またはヒドロカルビル基を表す。
用語「カルボシクリルアルキル」とは、本明細書で使用する場合、炭素環基で置換されたアルキル基のことを意味する。
用語「炭素環」としては、５～７員環の単環式の環及び８～１２員環の二環式の環が挙げられる。二環式炭素環のそれぞれの環は、飽和環、不飽和環、及び芳香族環から選択してもよい。炭素環としては、１、２、または３つの原子が２つの環の間で共有されている二環式の分子が挙げられる。用語「縮合炭素環」とは、環のそれぞれが２つの隣接原子をもう一方の環と共有している二環式炭素環のことを意味する。縮合炭素環のそれぞれの環は、飽和環、不飽和環、及び芳香族環から選択してもよい。例示的な実施形態では、芳香族環、例えば、フェニルは、飽和環または不飽和環、例えば、シクロヘキサン、シクロペンタン、またはシクロヘキセンに縮合していてもよい。価数が許す限り、飽和環、不飽和環、及び芳香族二環式環の任意の組み合わせは、炭素環式の定義に含まれる。例示的な「炭素環」としては、シクロペンタン、シクロヘキサン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，５－シクロオクタジエン、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクタ－３－エン、ナフタレン、及びアダマンタンが挙げられる。例示的な縮合炭素環としては、デカリン、ナフタレン、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクタン、４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－インデン、及びビシクロ［４．１．０］ヘプタ－３－エンが挙げられる。「炭素環」は、水素原子を有することができる任意の１つまたは複数の位置において置換されていてもよい。
用語「カルボシクリルアルキル」とは、本明細書で使用する場合、炭素環基で置換されたアルキル基のことを意味する。
用語「カーボネート」は、技術分野において認知されており、基－ＯＣＯ２－のことを意味する。
用語「カルボキシ」とは、本明細書で使用する場合、式－ＣＯ２Ｈで表される基のことを意味する。
用語「エステル」とは、本明細書で使用する場合、基－Ｃ（Ｏ）ＯＲ９のことを意味し、式中、Ｒ９はヒドロカルビル基を表す。
用語「エーテル」とは、本明細書で使用する場合、酸素を介して別のヒドロカルビル基に連結したヒドロカルビル基のことを意味する。それゆえ、ヒドロカルビル基のエーテル置換基はヒドロカルビル－Ｏ－であってもよい。エーテルは対称または非対称のいずれかであってもよい。エーテルの例としては、複素環－Ｏ－複素環及びアリール－Ｏ－複素環が挙げられるがこれらに限定されない。エーテルとしては、「アルコキシアルキル」基が挙げられ、アルコキシアルキル基は、一般式アルキル－Ｏ－アルキルで表され得る。
用語「ハロ」及び「ハロゲン」とは、本明細書で使用する場合、ハロゲンのことを意味し、クロロ、フルオロ、ブロモ、及びヨードが挙げられる。
用語「ヘタラルキル」及び「ヘテロアラルキル」とは、本明細書で使用する場合、ヘタリール基で置換されたアルキル基のことを意味する。
用語「ヘテロアリール」及び「ヘタリール」としては、その環構造が少なくとも１つのヘテロ原子、好ましくは、１～４つのヘテロ原子、より好ましくは、１つまたは２つのヘテロ原子を含む、置換または非置換の芳香族単環構造、好ましくは、５～７員環、より好ましくは、５～６員環が挙げられる。用語「ヘテロアリール」及び「ヘタリール」としてはまた、２つまたはそれ以上の炭素が２つの隣接する環に共通している２つまたはそれ以上の環式環を有する多環式環系が挙げられ、環のうちの少なくとも一方は複素環式芳香族であり、例えば、もう一方の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／またはヘテロシクリルであり得る。ヘテロアリール基としては、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、及びピリミジンなどが挙げられる。
用語「ヘテロ原子」とは、本明細書で使用する場合、炭素または水素以外の任意の元素の原子のことを意味する。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、及び硫黄である。
用語「ヘテロシクリルアルキル」とは、本明細書で使用する場合、複素環基で置換されたアルキル基のことを意味する。
用語「ヘテロシクリル」、「複素環」、及び「複素環式」とは、その環構造が少なくとも１つのヘテロ原子、好ましくは、１～４つのヘテロ原子、より好ましくは、１つまたは２つのヘテロ原子を含む、置換または非置換の非芳香族環構造、好ましくは、３～１０員環、より好ましくは、３～７員環のことを意味する。用語「ヘテロシクリル」及び「複素環式」としてはまた、２つまたはそれ以上の炭素が２つの隣接する環に共通している２つまたはそれ以上の環式環を有する多環式環系が挙げられ、環のうちの少なくとも一方は複素環式であり、例えば、もう一方の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／またはヘテロシクリルであり得る。ヘテロシクリル基としては、例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、ラクトン、ラクタムなどが挙げられる。
用語「ヒドロカルビル」とは、本明細書で使用する場合、＝Ｏまたは＝Ｓ置換基を有しておらず、通常は、少なくとも１つの炭素－水素結合及び第一級炭素主鎖を有しているが、ヘテロ原子を任意選択的に含んでいてもよい、炭素原子を介して結合している基のことを意味する。それゆえ、メチル、エトキシエチル、２－ピリジル、及び更にトリフルオロメチルのような基は、本出願の目的におけるヒドロカルビルとみなされるが、アセチル（連結炭素上に＝Ｏ置換基を有している）及びエトキシ（炭素ではなく酸素を介して連結している）などの置換基は、そうとはみなされない。ヒドロカルビル基としては、アリール、ヘテロアリール、炭素環、複素環、アルキル、アルケニル、アルキニル、及びこれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。
用語「ヒドロキシアルキル」とは、本明細書で使用する場合、ヒドロキシ基で置換されたアルキル基のことを意味する。
化学部分、例えば、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシなどと共に使用する場合の用語「低級」とは、置換基内に１０以下の原子、好ましくは、６つ以下の原子がある基を含むことを意味する。例えば、「低級アルキル」とは、１０以下の炭素原子、好ましくは、６つ以下の炭素原子を含有するアルキル基のことを意味する。特定の実施形態では、本明細書で定義するアシル置換基、アシルオキシ置換基、アルキル置換基、アルケニル置換基、アルキニル置換基、またはアルコキシ置換基はそれぞれ、それらが単独で存在しているか、または、ヒドロキシアルキル及びアラルキル（この場合、例えば、アルキル置換基内の炭素原子をカウントする際にはアリール基内の原子はカウントされない）の詳細説明におけるように、その他の置換基との組み合わせで存在しているかを問わず、低級アシル、低級アシルオキシ、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、または低級アルコキシである。
用語「ポリシクリル」、「多環」、及び「多環式」とは、２つまたはそれ以上の原子が２つの隣接する環に共通している２つまたはそれ以上の環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／またはヘテロシクリル）のことを意味し、例えば、環は「縮合環」である。多環の環のそれぞれは、置換または非置換されていてもよい。特定の実施形態では、多環のそれぞれの環は、環内に３～１０の原子、好ましくは、５～７つの原子を含有している。
用語「サルフェート」は、技術分野において認知されており、基－ＯＳＯ３Ｈまたはその薬学的に許容される塩のことを意味する。
用語「スルホンアミド」は、技術分野において認知されており、一般式、
Figure 0007474269000027
 、で表される基のことを意味し、
式中、Ｒ９及びＲ１０は独立して、水素またはヒドロカルビルを表す。
用語「スルホキシド」は、技術分野において認知されており、基－Ｓ（Ｏ）－のことを意味する。
用語「スルホネート」は、技術分野において認知されており、基ＳＯ３Ｈまたはその薬学的に許容される塩のことを意味する。
用語「スルホン」は、技術分野において認知されており、基－Ｓ（Ｏ）２－のことを意味する。
用語「置換された」とは、主鎖の１つまたは複数の炭素上の水素を置換した置換基を有する部分のことを意味する。「置換」または「で置換された」は、このような置換が置換原子及び置換基の許容される価数に従い、置換により、例えば、例えば、転位、環化、脱離などによる変換を自発的に受けない安定化合物がもたらされるという暗黙の条件を含むということを理解されたい。本明細書で使用する場合、用語「置換された」は、有機化合物の全ての許容される置換基を含むものと考えられる。広範な解釈において、許容される置換基としては、有機化合物の、非環式及び環式の置換基、分枝鎖及び非分枝鎖の置換基、炭素環式及び複素環式の置換基、芳香族及び非芳香族の置換基が挙げられる。許容される置換基は、適切な有機化合物において、１つまたは複数であってもよく、同一または異なっていてもよい。本発明の目的において、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の価数を満たす、水素置換基及び／または本明細書に記載の有機化合物の任意の許容される置換基を有していてもよい。置換基としては、本明細書に記載の任意の置換基、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、またはアシルなど）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメートなど）、アルコキシル、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、サルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族もしくは複素環式芳香族部分を挙げることができる。炭化水素鎖上において置換された部分が必要に応じてそれ自体置換され得るということを当業者は理解するであろう。
用語「チオアルキル」とは、本明細書で使用する場合、チオール基で置換されたアルキル基のことを意味する。
用語「チオエステル」とは、本明細書で使用する場合、基－Ｃ（Ｏ）ＳＲ９または－ＳＣ（Ｏ）Ｒ９のことを意味し、
式中、Ｒ９はヒドロカルビルを表す。
用語「チオエーテル」は、本明細書で使用する場合、エーテルと同等であり、式中、酸素は硫黄で置換されている。
用語「ウレア」は、技術分野において認知されており、一般式、
Figure 0007474269000028
 、で表され得、
式中、Ｒ９及びＲ１０は独立して、水素またはヒドロカルビルを表す。
用語「調節する」は、本明細書で使用する場合、機能または活性（例えば、細胞増殖など）の阻害または抑制に加えて、機能または活性の増強を含む。
語句「薬学的に許容される」は技術分野において認知されている。特定の実施形態では、この用語は、適切な医学的良識の範囲内において、過度の毒性、炎症、アレルギー反応、またはその他の問題もしくは合併症を伴わずに、妥当な利益／リスク比に見合った、ヒト及び動物の組織との接触に用いるのに好適な組成物、賦形剤、補助剤、ポリマー、及びその他の原料及び／または剤形を含む。
「薬学的に許容される塩」または「塩」は、本明細書において、患者の治療に好適または適合する酸付加塩または塩基付加塩を意味するために使用される。
用語「薬学的に許容される酸付加塩」とは、本明細書で使用する場合、式Ｉで表される任意のベース化合物の任意の非毒性の有機塩または無機塩のことを意味する。好適な塩を形成する例示的な無機酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、及びリン酸に加えて、金属塩、例えば、オルトリン酸水素二ナトリウム及び硫酸水素カリウムなどが挙げられる。好適な塩を形成する例示的な有機酸としては、モノ、ジ、トリカルボン酸、例えば、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、安息香酸、フェニル酢酸、ケイ皮酸、及びサリチル酸などに加えて、スルホン酸、例えば、ｐ－トルエンスルホン酸及びメタンスルホン酸などが挙げられる。一塩基酸塩または二塩基酸塩のいずれかを形成してもよく、このような塩は、水和形態、溶媒和形態、または実質的に無水形態のいずれかで存在していてもよい。一般的に、式Ｉの化合物の酸付加塩は、水及び様々な親水性有機溶媒により可溶性であり、一般的に、その遊離塩基形態と比較してより高い融点を示す。適切な塩の選択は当業者に周知である。その他の薬学的に許容されない塩、例えば、シュウ酸塩は、例えば、研究室で使用する式Ｉの化合物の単離、または薬学的に許容される酸付加塩へのその後の変換のために使用してもよい。
用語「薬学的に許容される塩基付加塩」とは、本明細書で使用する場合、式Ｉで表される任意の酸化合物またはその中間体のいずれかの任意の非毒性の有機塩基付加塩または無機塩基付加塩のことを意味する。好適な塩を形成する例示的な無機塩基としては、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、または水酸化バリウムが挙げられる。好適な塩を形成する例示的な有機塩基としては、脂肪族、脂環式、または芳香族の有機アミン、例えば、メチルアミン、トリメチルアミン、及びピコリン、またはアンモニアなどが挙げられる。適切な塩の選択は当業者に周知である。
本開示の方法及び組成物に有用な化合物の多くは、その構造内に少なくとも１つの不斉中心を有している。この不斉中心は、Ｒ配置またはＳ配置で存在していてもよく、上記ＲＳ表記は、Ｐｕｒｅ Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．（１９７６），４５，１１－３０に記載の法則に則して使用される。本開示では、化合物、塩、プロドラッグ、またはこれらの混合物の全ての立体異性形態、例えば、エナンチオマー形態及びジアステレオマー形態（全ての考えられる立体異性体の混合物を含む）などについての検討を行う。例えば、ＷＯ０１／０６２７２６を参照されたい。
更に、アルケニル基を含有する特定の化合物は、Ｚ（ｚｕｓａｍｍｅｎ）異性体またはＥ（ｅｎｔｇｅｇｅｎ）異性体として存在していてもよい。それぞれの事例において、本開示は、個々の異性体の混合物と独立した個々の異性体の両方を含む。
化合物の一部はまた、互変異性形態で存在していてもよい。このような形態（本明細書に記載の式で明確に示すことはしないが）は、本開示の範囲内に含まれることを意味する。
「プロドラッグ」または「薬学的に許容されるプロドラッグ」とは、投与後に宿主内において代謝、例えば、加水分解または酸化されて、本開示の化合物（例えば、式Ｉの化合物）を形成する化合物のことを意味する。プロドラッグの典型例としては、活性化合物の機能性部分上に生物学的に不安定または開裂性の（保護）基を有する化合物が挙げられる。プロドラッグとしては、酸化、還元、アミノ化、脱アミノ化、ヒドロキシル化、脱ヒドロキシル化、加水分解、脱加水分解、アルキル化、脱アルキル化、アシル化、脱アシル化、リン酸化、または脱リン酸化されて、活性化合物を生成することができる化合物が挙げられる。エステルまたはホスホラミデートを生物学的に不安定または開裂性の（保護）基として使用したプロドラッグの例については、米国特許６，８７５，７５１、７，５８５，８５１、及び７，９６４，５８０（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。本開示のプロドラッグは、代謝されて式Ｉの化合物を生成する。本開示は、その範囲内において、本明細書に記載の化合物のプロドラッグを含む。好適なプロドラッグを選択及び調製するための従来の手順については、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」Ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。
語句「薬学的に許容される担体」とは、本明細書で使用する場合、医薬品用途または治療用途用に薬物を配合するのに有用な薬学的に許容される物質、組成物、または媒体、例えば、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、または封入材などのことを意味する。
用語「溶解性のＬｏｇ」、「ＬｏｇＳ」、または「ｌｏｇＳ」は、本明細書で使用する場合、化合物の水溶解性を定量するために当該技術分野において使用される。化合物の水溶解性は、その吸収特性及び分散特性に有意に影響を及ぼす。溶解性が低いと、吸収が不十分となる場合が多い。ＬｏｇＳ値は、ｍｏｌ／リットルで測定した溶解性の無単位対数（ベース１０）である。
医薬組成物
治療を必要とする個体においてそれを実施するために、本発明の組成物及び方法を利用してもよい。特定の実施形態では、個体は、哺乳動物、例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物などである。動物、例えば、ヒトなどに投与する場合、組成物または化合物は、好ましくは、例えば、本発明の化合物及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与される。薬学的に許容される担体は、当該技術分野において周知であり、例えば、水性液剤、例えば、水または緩衝生理食塩水など、または、その他の溶媒または媒体、例えば、グリコール、グリセロール、オリーブ油などの油、または注射用有機エステルなどが挙げられる。好ましい実施形態では、このような医薬組成物が、ヒト投与用、とりわけ、侵襲的投与経路（すなわち、上皮バリアを通して迂回輸送または拡散させる、注射または植込みなどの経路）用である場合、水性液剤は発熱物質を含まないまたは実質的に発熱物質を含まない。賦形剤は、例えば、薬剤の遅延放出を達成するために、または、１種または複数種の細胞、組織、または器官を選択的に標的とするために、選択され得る。医薬組成物は、投与単位剤形、例えば、錠剤、カプセル剤（スプリンクルカプセル剤及びゼラチンカプセル剤を含む）、顆粒剤、復元用の凍結乾燥剤、散剤、液剤、シロップ剤、坐剤、注射剤などであってもよい。組成物はまた、経皮送達システム、例えば、皮膚パッチ剤中に含まれていてもよい。組成物はまた、局所投与に好適な液剤、例えば、ローション剤、クリーム剤、または軟膏剤などの中に含まれていてもよい。
薬学的に許容される担体は、例えば、化合物、例えば、本発明の化合物などを安定させる、その溶解性を向上させる、またはその吸収を向上させるように作用する生理学的に許容される薬剤を含有していてもよい。このような生理学的に許容される薬剤としては、例えば、糖質、例えば、グルコース、スクロース、またはデキストランなど、酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸またはグルタチオンなど、キレート化剤、低分子量タンパク質、またはその他の安定化剤もしくは賦形剤が挙げられる。生理学的に許容される薬剤を含む薬学的に許容される担体の選択は、例えば、組成物の投与経路によって決まる。製剤または医薬組成物は、自己乳化型薬物送達システムまたは自己微小乳化型薬物送達システムであってもよい。医薬組成物（製剤）はまた、リポソームまたはその他のポリマーマトリックスであってもよく、それらは、例えば、本発明の化合物をその内部に含有させていてもよい。例えば、リン脂質またはその他の脂質を含むリポソームは、比較的簡便に調製及び投与される、非毒性で、生理学的に許容され、代謝可能な担体である。
語句「薬学的に許容される」は、適切な医学的良識の範囲内において、過度の毒性、炎症、アレルギー反応、またはその他の問題もしくは合併症を伴わずに、妥当な利益／リスク比に見合った、ヒト及び動物の組織との接触に用いるのに好適な化合物、物質、組成物及び／または剤形のことを意味するために本明細書で使用される。
語句「薬学的に許容される担体」とは、本明細書で使用する場合、薬学的に許容される物質、組成物、または媒体、例えば、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、または封入材などのことを意味する。それぞれの担体は、患者に有害ではない製剤中のその他成分と相溶性があるという意味で「許容される」必要がある。薬学的に許容される担体として機能し得る物質の一部の例としては、（１）糖類、例えば、ラクトース、グルコース、及びスクロースなど、（２）デンプン類、例えば、コーンスターチ及びポテトスターチなど、（３）セルロース及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなど、（４）粉末状トラガカント、（５）麦芽、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）賦形剤、例えば、カカオバター及び座薬用ワックスなど、（９）油類、例えば、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油など、（１０）グリコール類、例えば、プロピレングリコールなど、（１１）ポリオール類、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコールなど、（１２）エステル類、例えば、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなど、（１３）寒天、（１４）緩衝剤類、例えば、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなど、（１５）アルギン酸、（１６）発熱物質を含まない水、（１７）等張生理食塩水、（１８）リンゲル液、（１９）エチルアルコール、（２０）リン酸緩衝液、ならびに、（２１）医薬品製剤に用いられるその他非毒性の相溶性物質が挙げられる。
医薬組成物（製剤）は、例えば、経口（例えば、水性液剤もしくは非水性液剤または懸濁剤のような水剤、錠剤、カプセル剤（スプリンクルカプセル剤及びゼラチンカプセル剤を含む）、巨丸剤、散剤、顆粒剤、舌に塗布するためのパスタ剤）、口腔粘膜を介した吸収（例えば、舌下）、皮下、経皮（例えば、皮膚に貼るパッチ剤として）、及び局所（例えば、皮膚に塗布するクリーム剤、軟膏剤、または噴霧剤として）を含む多くの投与経路のいずれかにより、対象に投与することができる。化合物はまた、吸入用に製剤化されていてもよい。特定の実施形態では、化合物を、簡便に、滅菌水中に溶解または懸濁させてもよい。適切な投与経路及びそれらの投与経路に好適な組成物の詳細については、例えば、米国特許第６，１１０，９７３号、第５，７６３，４９３号、第５，７３１，０００号、第５，５４１，２３１号、第５，４２７，７９８号、第５，３５８，９７０号、及び第４，１７２，８９６号に加えて、その中で引用されている特許に見出すことができる。
製剤は単位投与剤形で都合よく提供されてもよく、製薬技術分野において周知の任意の方法によって調製されてもよい。単一剤形を調製するために担体物質と配合され得る活性成分の量は、治療する宿主、特定の投与方法に応じて変化する。単一剤形を調製するために担体物質と配合され得る活性成分の量は一般的に、治療効果をもたらす化合物の量である。一般的に、この量は、１００パーセントのうちの、約１パーセント～約９９パーセント、好ましくは、約５パーセント～約７０パーセント、最も好ましくは、約１０パーセント～約３０パーセントの範囲の活性成分である。
これらの製剤または組成物を調製するための方法は、活性化合物、例えば、本発明の化合物などを、担体、及び任意選択的に１種または複数種の補助成分と会合させる工程を含む。一般的に、製剤は、本発明の化合物を、液体担体もしくは微粉化固体担体またはその両方と均一かつ密接に会合させてから、必要に応じ、製品を成形することによって調製される。
経口投与に好適な本発明の製剤は、それぞれが、所定量の本発明の化合物を活性成分として含有する、カプセル剤（スプリンクルカプセル剤及びゼラチンカプセル剤を含む）、カシェ剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ剤（フレーバーベースの、一般的には、スクロース及びアラビアゴムまたはトラガカントを使用した）、凍結乾燥剤、散剤、顆粒剤、または水性溶液または非水性溶液中の液剤または懸濁剤、または水中油型または油中水型の液体エマルション、またはエリキシル剤またはシロップ剤、またはパステル剤（不活性基剤、例えば、ゼラチン及びグリセリン、またはスクロース及びアラビアゴムなどを使用した）、及び／またはうがい薬などの形態であってもよい。組成物または化合物はまた、巨丸剤、舐剤、またはパスタ剤として投与されてもよい。
経口投与（カプセル剤（スプリンクルカプセル剤及びゼラチンカプセル剤を含む）、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤など）用の固体剤形を調製するために、活性成分を、１種または複数種の薬学的に許容される担体、例えば、クエン酸ナトリウム、またはリン酸ニカルシウム、及び／または、以下、（１）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及び／またはケイ酸など、（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及び／またはアラビアゴムなど、（３）保湿剤、例えば、グリセロールなど、（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウムなど、（５）溶解遅延剤、例えば、パラフィンなど、（６）吸収促進剤、例えば、第四級アンモニウム化合物など、（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロールなど、（８）吸収剤、例えば、カオリンクレイ及びベントナイトクレイなど、（９）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びこれらの混合物など、（１０）錯化剤、例えば、修飾シクロデキストリン及び未修飾シクロデキストリンなど、及び（１１）着色剤のいずれかなどと混合する。カプセル剤（スプリンクルカプセル剤及びゼラチンカプセル剤を含む）の場合、医薬組成物はまた、緩衝剤を含んでいてもよい。類似したタイプの固体組成物ではまた、ラクトースまたは乳糖に加えて、高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用した、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル内の充填剤を採用してもよい。
錠剤は、任意選択的に１種または複数種の補助成分を用いて、圧縮または成形によって調製してもよい。圧縮錠は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤、または分散剤を使用して調製してもよい。湿製錠は、好適な機械を用いて、不活性液体希釈剤で湿潤させた粉末状化合物の混合物を成形することによって調製してもよい。
錠剤、ならびに医薬組成物のその他の固体剤形、例えば、糖衣錠、カプセル剤（スプリンクルカプセル剤及びゼラチンカプセル剤を含む）、丸剤、及び顆粒剤などは、任意選択的に、コーティング剤及び外皮、例えば、腸溶性コーティング、及び医薬品製造技術分野において周知のその他のコーティング剤などを用いて取得または調製してもよい。それらはまた、例えば、所望の放出特性をもたらす様々な比率のヒドロキシプロピルメチルセルロース、その他のポリマーマトリックス、リポソーム、及び／または微小球を使用して、その内部の活性成分の持続放出または制御放出をもたらすように製剤化してもよい。それらは、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過により、または、使用直前に滅菌水または一部のその他の滅菌注射用媒体中に溶解させることができる滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を混合することにより、滅菌してもよい。これらの組成物はまた、任意選択的に乳白剤を含有していてもよく、任意選択的に遅延様式で、胃腸管の特定の部位においてのみまたは優先的に、活性成分（複数可）を放出する組成物であってもよい。使用可能な包埋組成物の例としては、高分子物質及びワックスが挙げられる。活性成分はまた、必要に応じて、上記の賦形剤のうちの１種または複数種を用いた、マイクロ封入形態であってもよい。
経口投与に有用な液体剤形としては、薬学的に許容されるエマルション剤、復元用の凍結乾燥剤、マイクロエマルション剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加えて、液体剤形は、当該技術分野において一般的に使用される不活性希釈剤、例えば、水またはその他の溶媒、シクロデキストリン及びその誘導体、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、油剤（とりわけ、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステルなど、ならびにこれらの混合物などを含有していてもよい。
不活性希釈剤の他に、経口組成物はまた、補助剤、例えば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味剤、香味剤、着色剤、着香剤、ならびに防腐剤などを含んでいてもよい。
懸濁剤は、活性化合物に加えて、懸濁剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、及びトラガカント、ならびにこれらの混合物などを含有していてもよい。
局所投与または経皮投与用の剤形としては、粉末剤、噴霧剤、軟膏剤、パスタ剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、液剤、パッチ剤、及び吸入剤が挙げられる。活性化合物を、滅菌条件下、薬学的に許容される担体と混合してもよく、必要となり得る任意の防腐剤、緩衝剤、または噴射剤と混合してもよい。
軟膏剤、パスタ剤、クリーム剤、及びゲル剤は、活性化合物に加えて、賦形剤、例えば、動物性脂肪及び植物性脂肪、油剤、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、及び酸化亜鉛、またはこれらの混合物などを含有していてもよい。
粉末剤及び噴霧剤は、活性化合物に加えて、賦形剤、例えば、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、及びポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物などを含有していてもよい。噴霧剤は更に、通常の噴射剤、例えば、クロロフルオロ炭化水素、及び揮発性非置換炭化水素、例えば、ブタン及びプロパンなどを含有していてもよい。
経皮パッチ剤は、本発明の化合物の体への制御送達をもたらす更なる利点を有している。このような剤形は、活性化合物を適切な媒体中に溶解または分散させることによって調製することができる。吸収促進剤はまた、皮膚全体における化合物のフラックスを増加させるために使用することができる。このようなフラックスの速度は、速度制御膜を提供することまたは化合物をポリマーマトリックスまたはゲル中に分散させることのいずれかによって制御することができる。
語句「非経口投与」及び「非経口投与する」とは、本明細書で使用する場合、一般的には注射による、経腸投与及び局所投与以外の投与方法のことを意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、硬膜内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮膚内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、及び胸骨内の注射及び注入が挙げられるがこれらに限定されない。非経口投与に好適な医薬組成物は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、目的のレシピエントの血液との等張性を製剤に付与する溶質、または懸濁剤もしくは増粘剤を含有していてもよい、１種または複数種の薬学的に許容される滅菌等張水性液剤もしくは非水性液剤、分散液剤、懸濁剤もしくはエマルション剤、または、使用直前に滅菌注射用液剤または分散液剤中に戻すことができる滅菌粉末と組み合わせた、１種または複数種の活性化合物を含む。
本発明の医薬組成物に採用してもよい好適な水性担体及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、及びこれらの好適な混合物、植物油、例えば、オリーブ油など、ならびに、注射用有機エステル、例えば、オレイン酸エチルなどが挙げられる。例えば、レシチンなどのコーティング剤を使用することにより、分散液剤の場合には所定の粒径を維持することにより、また界面活性剤を使用することにより、適度な流動性を維持してもよい。
これらの組成物はまた、補助剤、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などを含有していてもよい。様々な抗菌剤及び抗カビ剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを含有させることによって、微生物の作用の予防を確保してもよい。等張化剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを組成物中に含ませることもまた望ましい場合がある。加えて、注射用医薬品剤形の長期間にわたる吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどを含ませることによってもたらすことができる。
一部の例では、薬物の効果を延長させるためには、皮下注射または筋肉注射からの薬物の吸収を遅延させることが望ましい。このことは、水への溶解度が不十分な結晶質物質または非晶質物質の液体懸濁剤を使用することによって達成することができる。そのため、薬物の吸収速度は、その溶解速度によって決まり、ひいては、結晶のサイズ及び結晶の状態によって決まり得る。代替的に、非経口で投与された薬物剤形の遅延吸収は、薬物を油性媒体中に溶解または懸濁させることによって達成される。
注射用デポー剤形は、本化合物のマイクロカプセル化マトリックスをポリラクチド－ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に形成することによって調製される。薬物：ポリマーの比率、及び採用する特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出速度を制御することができる。その他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が挙げられる。デポー注射製剤はまた、体内組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロエマルション内に薬物を封入することによって調製される。
本発明の方法における使用では、活性化合物は、それ自体で、または、例えば、薬学的に許容される担体と組み合わせた０．１～９９．５％（より好ましくは、０．５～９０％）の活性成分を含有する医薬組成物として、投与してもよい。
導入方法はまた、再充填性または生分解性のデバイスによって提供されてもよい。近年、タンパク質バイオ医薬品を含む薬物の制御送達用に、様々な持続放出ポリマーデバイスがｉｎ ｖｉｖｏで開発及び試験されている。生分解性ポリマーと非分解性ポリマーの両方を含む様々な生体適合性ポリマー（ハイドロゲルを含む）を使用して、化合物を特定の標的部位へと持続放出させるためのインプラントを形成してもよい。
医薬組成物内における活性成分の実際の用量レベルは、患者に毒性とはならずに、個々の患者、組成物及び投与方法における所望の治療効果を得ることが可能な活性成分の量を得るために、様々であり得る。
選択用量レベルは、使用する個々の化合物もしくは化合物の組み合わせまたはそのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与経路、投与期間、使用する個々の化合物（複数可）の排出速度、治療期間、使用する個々の化合物（複数可）と組み合わせて使用するその他の薬物、化合物、及び／または物質、治療する患者の年齢、性別、体重、症状、全身健康及び既往歴、及び、医学技術分野において周知の類似の因子を含む様々な因子によって決まる。
通常の技能を有する医師または獣医は、必要とされる治療有効量の医薬組成物を容易に決定し処方することができる。例えば、医師または獣医は、所望の治療効果を得るために必要なレベル未満のレベルで、医薬組成物または化合物の用量を開始して、所望の効果が得られるまで用量を徐々に増加させることができる。「治療有効量」とは、所望の治療効果を誘導するのに十分な化合物の濃度のことを意味する。化合物の有効量が対象の体重、性別、年齢、及び病歴に応じて変化することは、一般的に理解されている。有効量に影響を及ぼすその他の因子としては、患者の症状の重症度、治療する障害、化合物の安定性、及び必要に応じ、本発明の化合物と共に投与される別のタイプの治療薬を挙げることができるがこれらに限定されない。薬剤の複数回投与により、より多くの総用量を送達してもよい。効果及び用量を確認するための方法は当業者に周知である（Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １３ ｅｄ．，１８１４－１８８２（参照により本明細書に組み込まれる））。
一般的に、本発明の組成物及び方法において使用する活性化合物の好適な１日用量は、治療効果をもたらすことができる最低用量である化合物の量である。このような有効用量は一般的に、上記の因子によって決まる。
必要に応じ、活性化合物の有効１日用量を、任意選択的に単位投与剤形で、１日を通して適切な間隔で別々に投与される１、２、３、４、５、６回、またはそれ以上の回数の分割用量で投与してもよい。本発明の特定の実施形態では、活性化合物は、１日２回または１日３回投与してもよい。好ましい実施形態では、活性化合物は１日１回投与される。
この治療を受ける患者は、一般的に、霊長類、とりわけ、ヒト、ならびに、その他の哺乳動物、例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ネコ、及びイヌなど、家禽、及びペットを含む、治療を必要とする任意の動物である。
特定の実施形態では、本発明の化合物は、単独で使用されてもよく、または、別のタイプの治療薬と共同で投与されてもよい。
本開示は、本発明の組成物及び方法における、本発明の化合物の薬学的に許容される塩の使用を含む。特定の実施形態では、本発明の検討される塩としては、アルキル、ジアルキル、トリアルキル、またはテトラアルキルのアンモニウム塩が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態では、本発明の検討される塩としては、Ｌ－アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、ベタイン、水酸化カルシウム、コリン、デアノール、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２－（ジエチルアミノ）エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ－イミダゾール、リチウム、Ｌ－リジン、マグネシウム、４－（２－ヒドロキシエチル）モルホリン、ピペラジン、カリウム、１－（２－ヒドロキシエチル）ピロリジン、ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミン、及び亜鉛の塩が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態では、本発明の検討される塩としては、Ｎａ、Ｃａ、Ｋ、Ｍｇ、Ｚｎ、またはその他の金属塩が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態では、本発明の検討される塩としては、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、２，２－ジクロロ酢酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、２－オキソグルタル酸、４－アセトアミド安息香酸、４－アミノサリチル酸、酢酸、アジピン酸、ｌ－アスコルビン酸、ｌ－アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、（＋）－樟脳酸、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸、カプリン酸（デカン酸）、カプロン酸（ヘキサン酸）、カプリル酸（オクタン酸）、炭酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン－１，２－ジスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、ｄ－グルコヘプトン酸、ｄ－グルコン酸、ｄ－グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、ｌ－リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、プロピオン酸、ｌ－ピログルタミン酸、サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、ｌ－酒石酸、チオシアン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、及びウンデシレン酸の酸性塩が挙げられるがこれらに限定されない。
薬学的に許容される酸付加塩はまた、様々な溶媒和物、例えば、水、メタノール、エタノール、ジメチルホルムアミドなどを含む溶媒和物などとして存在していてもよい。このような溶媒和物の混合物をまた調製してもよい。このような溶媒和物の供給源は、結晶化溶媒、調製溶媒または結晶化溶媒に固有のもの、またはこのような溶媒に付随するものに由来していてもよい。
湿潤剤、乳化剤、及び潤滑剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムなど、ならびに、着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤及び着香剤、防腐剤及び酸化防止剤はまた、組成物中に含まれていてもよい。
薬学的に許容される酸化防止剤の例としては、（１）水溶性酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど、（２）油溶性酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸パルミテート、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、αトコフェロールなど、及び（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などが挙げられる。
これから本発明を概略的に説明していくが、本発明は、単に本発明の特定の態様及び実施形態を例示する目的のために含まれ本発明を限定することを意図しない以下の実施例を参照することにより、より容易に理解されるであろう。
実施例１：ＪＧＫシリーズの例示化合物の調製
一般的な手順：ＪＧＫシリーズの化合物は、以下に記載する方法または任意のその他の好適な方法を用いて調製することができる。ＪＧＫシリーズの化合物は時として、ＪＣＮ接頭辞を用いて本明細書で参照される。全ての反応は、アルゴンの不活性雰囲気下で慣例的に実施した。特に明記しない限り、原料は市販の業者から入手して精製せずに使用した。全ての溶媒は、使用直前に標準的な技術を用いて精製及び乾燥させた。ＴＨＦ及びＥｔ２Ｏは、ナトリウム及びベンゾフェノンから新たに蒸留して得た。塩化メチレン、トルエン、及びベンゼンは、ＣａＨ２で還流させることによって精製した。反応は薄層クロマトグラフィー（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０ Ｆ２５４，Ｍｅｒｃｋ）で確認した。スポットは、ｐ－アニスアルデヒド溶液またはリンモリブデン酸溶液中に浸漬した後に、ＵＶ光下で目視しながら炭化で着色することによって検出した。水溶液の精密検査では、全ての有機溶液を無水硫酸マグネシウム上で乾燥させて、濾過してから、水圧ポンプで回転蒸発させた。シリカゲル（ＳｉｌｉｃａＦｌａｓｈ Ｐ６０，２３０～４００メッシュ，ＳｉｌｉＣｙｃｌｅ Ｉｎｃ）を用いたカラムクロマトグラフィーにより、粗化合物を精製した。Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ ４００（４００／１００ ＭＨｚ）またはＢｒｕｋｅｒ ＡＶ５００（５００／１２５ ＭＨｚ）スペクトロメーターを用いて、プロトン（１Ｈ）及び炭素（１３Ｃ）のＮＭＲスペクトルを得た。Ｍｅ４ＳｉまたはＣＨＣｌ３を内部標準物質として用い、化学シフトをｐｐｍ単位で記録する。分裂パターンは、ｓ、シングレット；ｄ、ダブレット；ｔ、トリプレット；ｍ、マルチプレット；ｂ、ブロードで示す。ＩｏｎＳｅｎｓｅ ＩＤ－ＣＵＢＥ ＤＡＲＴ ｓｏｕｒｃｅを備えたＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓを使用して、高解像度質量分析データを得た。
ＪＧＫ００１、ＪＧＫ００３の調製
Figure 0007474269000029
 ［ＪＧＫ００１］無水メタノール（５．０ｍＬ）中のエルロチニブ（１３４ｍｇ、０．３４０６ｍｍｏｌ）の溶液に、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２２８ｍｇ、１．７０２９ｍｍｏｌ）を一度に室温で加えた。同一温度で４８時間攪拌した後、減圧下で濃縮した。反応混合液をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈した。層を分離させてから、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、３／１）で残液を精製し、ＪＧＫ００１（１５６ｍｇ、７３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．８６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．２０－７．２３ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．１６ （ｔｄ， Ｊ ＝ １．２， ７．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．０９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．１６－４．２５ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．８０ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．７７ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．４５ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．４４ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．４４ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．０３ （ｓ， １ Ｈ）， １．５５ （ｓ， ９ Ｈ）， １．１１ （ｓ， ９ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １５２．１， １５１．５， １４９．２， １４８．８， １４５．７， １４２．７， １３０．６， １２８．９， １２７．４， １２５．３， １２２．６， １２１．５， １１４．７， １１１．４， １０８．０， ９０．７， ８３．７， ８３．３， ８２．９， ７６．８， ７０．９， ７０．７， ６８．８， ６８．７， ５９．２， ５９．１， ５５．０， ２８．２， ２７．３；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ６２６．３０６１ ［Ｃ３３Ｈ４３Ｎ３Ｏ９ に対する計算値 ６２５．２９９３］．
［ＪＧＫ００３］無水エタノール（２．６ｍＬ）中のエルロチニブ（１０１ｍｇ、０．２５６７ｍｍｏｌ）の溶液に、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１７２ｍｇ、１．２８３６ｍｍｏｌ）を一度に室温で加えた。同一温度で４８時間攪拌した後、減圧下で濃縮した。反応混合液をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈した。層を分離させてから、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、３／１）で残液を精製し、ＪＧＫ００３（１１７ｍｇ、７１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ７．８６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．２１－７．２４ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．１０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．１７－４．２５ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．６１－３．８２ （ｍ， ６ Ｈ）， ３．４６ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．４５ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．０２ （ｓ， １ Ｈ）， １．５５ （ｓ， ９ Ｈ）， １．２３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ３ Ｈ）， １．１２ （ｓ， ９ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １５２．０， １５１．４， １４９．２， １４８．９， １４５．５， １４３．０， １３０．８， １２８．８， １２７．３， １２５．３， １２２．５， １２１．７， １１４．７， １１１．３， １０７．９， ８９．３， ８３．７， ８３．２， ８２．８， ７６．７， ７０．９， ７０．７， ６８．８， ６８．６， ６３．０， ５９．２， ５９．１， ２８．２， ２７．４， １４．６；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ６４０．３２１１ ［Ｃ３４Ｈ４５Ｎ３Ｏ９ に対する計算値 ６３９．３１５０］．
ＪＧＫ００２の調製

固体のエルロチニブ（１６５ｍｇ、０．４１９４ｍｍｏｌ）に無水酢酸（５．０ｍＬ）を加えた。攪拌しながら９０℃（浴温度）で３日間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（２０ｍＬ）で中和し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈した。
Figure 0007474269000030
 層を分離させてから、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１／１～１／３）で残液を精製し、ＪＧＫ００２（１６１ｍｇ、８８％単離収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．０６ （ｓ， １ Ｈ，）， ７．４５ （ｔ， Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ， １ Ｈ，）， ７．３７－７．３９ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．３６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３０－７．３４ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１５ （ｓ， １ Ｈ）， ４．３２ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．１６ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．８６ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．７９ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．４６ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．４５ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．０６ （ｓ， １ Ｈ）， ２．１４ （ｓ， ３ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７０．５， １５８．８， １５６．１， １５３．５， １５１．１， １５０．８， １４１．０， １３０．９， １３０．３， １２９．３， １２７．５， １２３．４， １１７．２， １０７．９， １０３．１， ８２．４， ７８．４， ７０．６， ７０．３， ６８．９， ６８．７， ５９．３， ５９．３， ２３．７；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ４３６．１８１１ ［Ｃ２４Ｈ２５Ｎ３Ｏ５ に対する計算値 ４３５．１７８８］．
ＪＧＫ０１０、ＪＧＫ０３２の調製－アニリンアナログで置換するための一般的な手順
Figure 0007474269000031
 ［環化］ＤＭＦ（１３．５ｍＬ、０．２Ｍ）中のジオール２（５３０ｍｇ、２．６９５９ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（１４９０ｍｇ）を一度に加えてから、１－ブロモ－２－クロロエタン（１．３ｍＬ）をＡｒ下、室温で連続滴加した。攪拌しながら６０℃（浴温度）で２４時間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）で反応を停止させた。層を分離させてから、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、６／１～３／１）で残液を精製し、縮合－クロロキナゾリン３（４０４ｍｇ、６７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．８４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４７ （ｓ， １ Ｈ）， ４．４３－４．４５ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．３９－４．４２ （ｍ， ２ Ｈ）．［既知の化合物；Ｃｈｉｌｉｎ，Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１０，５３，１８６２－１８６６］
［ＪＧＫ０１０］ＤＭＦ（２．６ｍＬ）中の縮合－クロロキナゾリン３（１１４ｍｇ、０．５１２０ｍｍｏｌ）の溶液に、３－クロロ－２－フルオロアニリン（０．１０ｍＬ）を室温で滴加した。攪拌しながら６０℃（浴温度）で２４時間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、Ｅｔ２Ｏ（３０．０ｍＬ）で希釈し、白色懸濁液を得た。得られた白色固体をＥｔ２Ｏ（２×５０ｍＬ）で連続的に洗浄してから、回収し、ＪＧＫ０１０（１４０ｍｇ、８２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．６８ （ｓ， １ Ｈ）， ８．５９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ３．２， ６．８， ６．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．２９ （ｓ， １ Ｈ）， ７．１０－７．１８ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．３８－４．４３ （ｍ， ４ Ｈ）；１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．７８ （ｓ， １ Ｈ）， ８．７９ （ｓ， １ Ｈ）， ８．４５ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．５０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３４ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．４６－４．５３ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．４０－４．５２ （ｍ， ２ Ｈ） ；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １５９．８， １５４．０， １５２．２， １４９．９， １４５．７， １３５．２， １２９．９， １２８．１， １２６．４， １２５．８， １２０．９， １１１．３， １０８．１， １０５．８， ６５．５， ６４．６；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３３２．０５５１ ［Ｃ１６Ｈ１１ＣｌＦＮ３Ｏ２ に対する計算値 ３３１．０５１８］．
ＪＧＫ００５の調製
Figure 0007474269000032
 ＣＨ３ＣＮ（２．０ｍＬ）中の縮合－クロロキナゾリン３（１４ｍｇ、０．０６２８ｍｍｏｌ）の溶液に、３－エチニルアニリン（０．０５ｍＬ）を室温で滴加した。攪拌しながら８０℃（浴温度）で１２時間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、３／１）で残液を精製し、ＪＧＫ００５（１０ｍｇ、５２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ９．４５ （ｓ， １ Ｈ）， ８．４３ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０４－８．０５ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．８７－７．９０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．３４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．１４－７．１６ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．３５－４．３９ （ｍ， ４ Ｈ）， ４．１４ （ｓ， １ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １５６．８， １５３．３， １４９．５， １４６．５， １４４．１， １４０．２， １２９．３， １２６．７， １２４．９， １２２．７， １２２．１， １１３．０， １１０．４， １０８．８， ８４．０， ８０．９， ６４．９， ６４．６；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３０４．１０７９ ［Ｃ１８Ｈ１３Ｎ３Ｏ２ に対する計算値 ３０３．１００２］．
ＪＧＫ０２５
Figure 0007474269000033
 ＪＧＫ０２５の調製は一般的な手順に従った。ＪＧＫ０２５（２５％）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．３０ （ｓ， １ Ｈ）， ８．７３ （ｓ， １ Ｈ）， ８．２８ （ｓ， １ Ｈ）， ７．５１－７．５８ （ｍ， １ Ｈ）， ７．４１－７．４８ （ｍ， １ Ｈ）， ７．３５ （ｓ， １ Ｈ）， ７．１７－７．２３ （ｍ， １ Ｈ）， ４．４４－４．５０ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．３９－４．４４ （ｍ， ２ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ １６１．６ （Ｊ ＝ ２４５．９ Ｈｚ）， １６０．０， １５７．６ （Ｊ ＝ ２４９．６ Ｈｚ）， １５２．１， １５０．１， １４５．６， １３５．４， １３０．４， １２１．４， １１２．４， １１０．９， １０８．１， １０８．１， １０５．４， ６５．５， ６４．６；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３１６．０８９０ ［Ｃ１６Ｈ１１Ｆ２Ｎ３Ｏ２ に対する計算値 ３１５．０８１３］．
ＪＧＫ０２６
Figure 0007474269000034
 ＪＧＫ０２６の調製は一般的な手順に従った。ＪＧＫ０２６（２２％）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．０９ （ｓ， １ Ｈ）， ８．７４ （ｓ， １ Ｈ）， ８．１８ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３９－７．５１ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．３０ （ｓ， １ Ｈ）， ７．２３－７．２９ （ｍ， １ Ｈ）， ４．４５－４．４９ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．４０－４．４４ （ｍ， ２ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ １５９．８， １５８．１ （Ｊ ＝ ２３９．６ Ｈｚ）， １５３．７ （Ｊ ＝ ２４３．２ Ｈｚ）， １５２．１， １５０．１， １４５．７， １３５．７， １２６．０， １１７．９， １１７．８， １１６．０， １１０．９， １０８．２， １０６．２， ６５．５， ６４．６；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３１６．０８９３ ［Ｃ１６Ｈ１１Ｆ２Ｎ３Ｏ２ に対する計算値 ３１５．０８１３］．
ＪＧＫ０２７
Figure 0007474269000035
 ＪＧＫ０２７の調製は一般的な手順に従った。ＪＧＫ０２７（６％）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．２３ （ｂｓ， １ Ｈ）， ８．７５ （ｓ， １ Ｈ）， ８．２９ （ｓ， １ Ｈ）， ７．９１ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４６－７．５５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．２９ （ｔ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．４６－４．５０ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．４０－４．４６ （ｍ， ２ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ １６３．６， １６０．７， １６０．４， １５８．４， １５２．５， １５１．５， １４６．２， １３０．６， １１５．６， １１３．５， １１３．４， １１１．９， １０９．３， １０８．２， ６６．２， ６５．３；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３１６．０８８９ ［Ｃ１６Ｈ１１Ｆ２Ｎ３Ｏ２ に対する計算値 ３１５．０８１３］．
ＪＧＫ０２８
Figure 0007474269000036
 ＪＧＫ０２８の調製は一般的な手順に従った。ＪＧＫ０２８（４１％）。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ ８．６４ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３１－７．３８ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．２４－７．３１ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．５０－４．５５ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．４４－４．５０ （ｍ， ２ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ １６０．１， １５２．８， １５０．９ （Ｊ ＝ ２４５．６ Ｈｚ）， １４９．０， １４６．２， １４５．９ （Ｊ ＝ ２４９．７ Ｈｚ）， １３４．６， １２６．０， １２４．０， １２３．１， １１６．２， １０９．８， １０７．８， １０５．０， ６５．２， ６４．２；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３１６．０８８４ ［Ｃ１６Ｈ１１Ｆ２Ｎ３Ｏ２ に対する計算値 ３１５．０８１３］．
ＪＧＫ０２９
Figure 0007474269000037
 ＪＧＫ０２９の調製は一般的な手順に従った。ＪＧＫ０２９（５２％）。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ ８．６０ （ｓ， １ Ｈ）， ７．９８ （ｓ， １ Ｈ）， ７．２９ （ｓ， １ Ｈ）， ７．０７－７．１３ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．５０－４．５３ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．４４－４．４８ （ｍ， ２ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １６１．７， １６０．３， １５８．６， １５８．１， １５３．２， １５０．３， １４４．４， １４３．７， １１７．２， １１３．８， １１３．０， １１２．３， １０９．５， １０１．５， ６５．３， ６４．５；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３３４．０７９４ ［Ｃ１６Ｈ１０Ｆ３Ｎ３Ｏ２ に対する計算値 ３３３．０７１９］．
ＪＧＫ０１７
Figure 0007474269000038
 ＪＧＫ０１７の調製は一般的な手順に従った。ＪＧＫ０１７（５％）。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．５９ （ｓ， １ Ｈ）， ８．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４９ （ｔ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．３８ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．２１ （ｓ， １ Ｈ）， ４．４１－４．４２ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．３８－４．４０ （ｍ， ２ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １５６．４， １５３．２， １４９．７， １４６．７， １４４．５， １３８．４， １３３．５， １３２．２， １２８．２， １２５．４， １１９．９， １１９．７， １１４．３， １１０．４， １０５．７， ６４．５， ６４．３．
ＪＧＫ００４の調製
Figure 0007474269000039
 ［ベンゾイル化］無水ＣＨ２Ｃｌ２（５．２ｍＬ、０．２Ｍ）中のジオール２（２０５ｍｇ、１．０４２８ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液に、ピリジン（０．５ｍＬ）及び塩化ベンゾイル（０．７ｍＬ）をＡｒ下、連続的に滴加した。室温で１２時間攪拌した後、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（２０ｍＬ）で反応混合液の反応を停止させてから、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈した。層を分離させてから、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１０／１）で残液を精製し、ベンゾイルクロロキナゾリン２－（２）（２２０ｍｇ、５２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．０７ （ｓ， １ Ｈ）， ８．３１ （ｓ， １ Ｈ）， ８．１６ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０４－８．０７ （ｍ， ４ Ｈ）， ７．５３－７．５８ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．３４－７．３９ （ｍ， ４ Ｈ）．
［ＪＧＫ００４］ＣＨ３ＣＮ（３．０ｍＬ）中のベンゾイルクロロキナゾリン２－（２）（１８０ｍｇ、０．４４４ｍｍｏｌ）の溶液に、３－クロロ－２－フルオロアニリン（０．０６ｍＬ、０．５３３ｍｍｏｌ）を室温で滴加した。攪拌しながら８０℃（浴温度）で１５時間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、３／１）で残液を精製し、ＪＧＫ００４（１０９ｍｇ、４８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．８５ （ｓ， １ Ｈ）， ８．４８－８．５３ （ｍ， １ Ｈ）， ８．０８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ４ Ｈ）， ７．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ３．２ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．５１－７．５９ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．３９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， １６．０ Ｈｚ， ４ Ｈ）， ７．１６－７．２１ （ｍ， ２ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １６４．２， １６３．７， １５６．６， １５５．１， １５０．６， １４９．１， １４８．６， １４７．５， １４２．１， １３４．１， １３４．１， １３０．３， １３０．２， １２８．６， １２８．６， １２８．１， １２８．０， １２７．９， １２７．８， １２５．３， １２４．６， １２４．５， １２２．９， １２１．６， １２１．０， １２０．９， １１４．４， １１３．３；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ５１４．０９６３ ［Ｃ２８Ｈ１７ＣｌＦＮ３Ｏ４ に対する計算値 ５１３．０８８６］．
ＪＧＫ００６の調製
Figure 0007474269000040
 ＣＨ３ＣＮ（３．０ｍＬ）中のベンゾイルクロロキナゾリン２－（２）（１００ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ）の溶液に、３－エチニルアニリン（０．０５ｍＬ、０．４３０ｍｍｏｌ）を室温で滴加した。攪拌しながら５０℃（浴温度）で２４時間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、４／１）で残液を精製し、ＪＧＫ００６（４８ｍｇ、４０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．７１ （ｓ， １ Ｈ）， ８．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．９６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．９０－７．９５ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．７９ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６２－７．７５ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．５５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．３７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．２２－７．３１ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．０４ （ｓ， １ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １６４．８， １６３．９， １５６．７， １５５．３， １４８．９， １４６．９， １４１．３， １３８．１， １３４．１， １３４．０， １３０．３， １３０．１， １２８．９， １２８．６， １２８．５， １２８．１， １２８．０， １２７．９， １２４．８， １２２．７， １２２．４， １２２．１， １１５．１， １１３．１， ８３．３；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ４８６．１４４３ ［Ｃ３０Ｈ１９Ｎ３Ｏ４ に対する計算値 ４８５．１３７０］
ＪＧＫ０３２の調製
Figure 0007474269000041
 塩化水素溶液（０．１ｍＬ、ジオキサン中の４．０Ｍ、０．４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（０．３ｍＬ）に室温で加えることにより、１．０Ｍ塩化水素溶液を調製した。ＭｅＯＨ中のＪＧＫ０１０（６．１ｍｇ、０．０１８３９ｍｍｏｌ）の溶液に、上記で調製した塩化水素溶液（０．０３０ｍＬ、０．０３０ｍｍｏｌ）を室温で滴加した。同一温度で１０秒間攪拌した後、反応混合液を減圧下で濃縮し、ＪＧＫ０３２（６．７ｍｇ、９９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．６３ （ｓ， １ Ｈ）， ８．８１ （ｓ， １ Ｈ）， ８．３６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６３ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １．６， ６．９， ８．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １．１， ８．１， １６．２ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．４９－４．５１ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．４３－４．４５ （ｍ， ２ Ｈ）．
ＪＧＫ０１２の調製
Figure 0007474269000042
 固体のＪＧＫ０１０（３９ｍｇ、０．１１７６ｍｍｏｌ）に無水酢酸（５．０ｍＬ）を加えた。攪拌しながら８０℃（浴温度）で１２時間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（２０ｍＬ）で中和し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈した。層を分離させてから、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、２／１～１／１）で残液を精製し、ＪＧＫ０１２（３７ｍｇ、８４％単離収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．０１ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４９ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３１－７．４１ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．０９ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．４１－４．４３ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．３７－４．４０ （ｍ， ２ Ｈ）， ２．１５ （ｓ， ３ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７０．２， １５９．２， １５３．３， １５１．３， １４９．７， １４５．８， １３０．６， １２９．８， １２９．７， １２４．７， １２２．５， １２２．４， １１７．７， １１３．６， １０９．２， ６４．５， ６４．２， ２２．９；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３７４．０７０１ ［Ｃ１８Ｈ１３ＣｌＦＮ３Ｏ３ に対する計算値 ３７３．０６２３］．
ＪＧＫ０１５の調製
Figure 0007474269000043
 ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中のＬ－アミノ酸アナログＡ（２２７ｍｇ、０．７７１２ｍｍｏｌ）の溶液に、縮合－クロロキナゾリン３（１１７ｍｇ、０．５９３２ｍｍｏｌ）を一度に室温で加えた。攪拌しながら３５℃（浴温度）で１２時間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、飽和食塩水（３０．０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（３０．０ｍＬ）で希釈し、黄色懸濁液を得た。層を分離させてから、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層を減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、４０／１～１０／１）で残液を精製し、ＪＧＫ０１５（２６１ｍｇ、９２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．５７ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．３７ （ｓ， １ Ｈ）， ７．２７ （ｓ， １ Ｈ）， ７．０８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ５．０９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．５４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．０， １３．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．３１－４．３３ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．２７－４．２９ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．６８ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．０６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．６， １４．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．００ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．１， １３．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， １．３９ （ｓ， ９ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７２．４， １５６．５， １５５．２， １５３．６， １４９．１， １４６．３， １４３．８， １３７．６， １３１．６， １２９．７， １２１．７， １１３．８， １１０．３， １０６．６， ８０．０， ６４．４， ６４．２， ５４．４， ５２．２， ３７．６， ２８．３；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ４８１．２０８２ ［Ｃ２５Ｈ２８Ｎ４Ｏ６ に対する計算値 ４８０．２００３］．
ＪＧＫ０１６、ＪＧＫ０２３の調製
Figure 0007474269000044
 ［ＪＧＫ０１６（Ｂｏｃ脱保護）］無水ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ、０．０５Ｍ）中のＪＧＫ０１５（１２１ｍｇ、０．２５１ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１．０ｍＬ）を室温で滴加した。同一温度で５時間攪拌した後、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（２０ｍＬ）で反応混合液の反応を停止させてから、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈した。層を分離させてから、ＣＨ２Ｃｌ２（２×３０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、２０／１）で残液を精製し、ＪＧＫ０１６（７４ｍｇ、７７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．５ （ｓ， １ Ｈ）， ８．６８ （ｓ， １ Ｈ）， ８．４３ （ｓ， ２ Ｈ）， ８．２０ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．２６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．２３ （ｓ， １ Ｈ）， ４．４４－４．４６ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．３９－４．４１ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．６８ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．０３－３．１３ （ｍ， ２ Ｈ）；１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ ８．２６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．７３ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．１７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．０８ （ｓ， １ Ｈ）， ４．３１－４．３５ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．７２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．６８ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．２７－３．２９ （ｍ， １ Ｈ）， ３．０１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．９， １３．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ２．８９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．０， １３．５ Ｈｚ， １ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ １７４．４， １５７．４， １５２．６， １４９．７， １４５．０， １４４．２， １３７．５， １３２．８， １２９．２， １２２．８， １２２．３， １１１．５， １１０．１， １０７．９， ６４．５， ６４．１， ５５．２， ５１．０， ３９．５；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３８１．１５５３ ［Ｃ２０Ｈ２０Ｎ４Ｏ４ に対する計算値 ３８０．１４７９］．
［ＪＧＫ０２３（加水分解）］ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（３：１、合計４．０ｍＬ）中のＪＧＫ０１６（４２ｍｇ、０．１１０４ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液に、水酸化リチウム（１４ｍｇ）を一度に加えた。室温で２時間攪拌した後、反応混合液を１Ｎ ＨＣｌで中和してから、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈した。層を分離させてから、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ、３０／１～１５／１）で残液を精製し、ＪＧＫ０２３（２５ｍｇ、６２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．６２ （ｓ， １ Ｈ）， ８．１２ （ｓ， １ Ｈ）， ７．７１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．４０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．２４ （ｓ， １ Ｈ）， ４．４８－４．５０ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．４２－４．４４ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．３２－３．３７ （ｍ， １ Ｈ）， ３．２０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．６， １４．８ Ｈｚ， １ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １６９．７， １５９．１， １５２．４， １４８．８， １４６．０， １３６．１， １３４．１， １３３．１， １２９．７， １２９．７， １２４．８， １２４．８， １１０．０， １０８．１， １０４．９， ６５．２， ６４．２， ５３．６， ３５．４；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３６７．１３３４ ［Ｃ１９Ｈ１８Ｎ４Ｏ４ に対する計算値 ３６６．１３２２］．
ＪＧＫ０２０の調製
Figure 0007474269000045
 イソプロピルアルコール（５．３ｍＬ）中のクロロキナゾリン２（１０４ｍｇ、０．５２９４ｍｍｏｌ）の溶液に、アミノ酸（１８７ｍｇ）を室温で滴加した。攪拌しながら５０℃（浴温度）で１２時間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、５／１～３／１）で残液を精製し、ＪＧＫ０２０（１２８ｍｇ、５３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １０．６８ （ｓ， １ Ｈ）， １０．２２ （ｂｒ， １ Ｈ）， ８．６４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．９１ （ｓ， １ Ｈ）， ７．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．２６－７．３１ （ｍ， ４ Ｈ）， ４．１２－４．１８ （ｍ， １ Ｈ）， ３．５９ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．９８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．２， １４．０ Ｈｚ， １ Ｈ）， ２．８４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．０， １３．２ Ｈｚ， １ Ｈ）， １．３０ （ｓ， ９ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １７３．０， １５８．２， １５５．９， １５５．６， １４８．７， １４８．４， １３６．１， １３５．８， １２９．７， １２４．７， １０７．６， １０７．３， １０３．３， ７８．８， ５５．７， ５２．３， ３６．３， ２８．６；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ４５５．１９２０ ［Ｃ２３Ｈ２６Ｎ４Ｏ６ に対する計算値 ４５４．１８４６］．
ＪＧＫ０１４
Figure 0007474269000046
 ＪＧＫ０１４（２６％）。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．６２ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．３５ （ｓ， １ Ｈ）， ７．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ４．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．５６－４．６２ （ｍ， １ Ｈ）， ４．３６－４．４２ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．７３ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．０３－３．１５ （ｍ， ２ Ｈ）， １．４３ （ｓ， ９ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７２．４， １５６．５， １５５．２， １５３．６， １４９．１， １４６．３， １４３．８， １３７．６， １３１．６， １２９．７， １２１．７， １１３．８， １１０．３， １０６．６， ８０．０， ６４．４， ６４．２， ５４．４， ５２．２， ３７．６， ２８．３；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ４８１．２０８０ ［Ｃ２５Ｈ２８Ｎ４Ｏ６ に対する計算値 ４８０．２００３］．
ＪＧＫ０２１
Figure 0007474269000047
 ＪＧＫ０２１の調製はＪＧＫ０２３の合成方法に従った。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．６２ （ｓ， １ Ｈ）， ８．１２ （ｓ， １ Ｈ）， ７．７１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．４０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．２４ （ｓ， １ Ｈ）， ４．４８－４．５０ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．４２－４．４４ （ｍ， ２ Ｈ）， ４．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．３２－３．３７ （ｍ， １ Ｈ）， ３．２０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．６， １４．８ Ｈｚ， １ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １６９．７， １５９．１， １５２．４， １４８．８， １４６．０， １３６．１， １３４．１， １３３．１， １２９．７， １２９．７， １２４．８， １２４．８， １１０．０， １０８．１， １０４．９， ６５．２， ６４．２， ５３．６， ３５．４；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３６７．１３４７ ［Ｃ１９Ｈ１８Ｎ４Ｏ４ に対する計算値 ３６６．１３２２］．
ＪＧＫ０２２の調製
Figure 0007474269000048
 ＤＭＦ（３．０ｍＬ）中のジオールＸ（１２１ｍｇ、０．６１５５ｍｍｏｌ）の溶液に、３－クロロ－２－フルオロアニリン（０．１４ｍＬ）を室温で滴加した。攪拌しながら６０℃（浴温度）で３日間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、Ｅｔ２Ｏ（３０．０ｍＬ）で希釈し、白色懸濁液を得た。得られた白色固体をＥｔ２Ｏ（３×５０ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（２×３０ｍＬ）で連続的に洗浄してから、回収し、ＪＧＫ０２２（１３２ｍｇ、７０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．１６ （ｂｒ， １ Ｈ）， １０．４３ （ｂｒ， １ Ｈ）， ８．６８ （ｓ， １ Ｈ）， ７．９１ （ｓ， １ Ｈ）， ７．５８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．４０ （ｓ， １ Ｈ）， ７．３０ （ｔ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １５９．１， １５６．４， １５４．１， １５２．１， １４９．１， １４８．３， １３５．１， １２９．７， １２８．１， １２６．８， １２５．７， １２０．８， １０７．４， １０６．９， １０２．９；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ３０６．０４３７ ［Ｃ１４Ｈ９ＣｌＦＮ３Ｏ２ に対する計算値 ３０５．０３６１］．
ＪＧＫ０１８の調製
Figure 0007474269000049
 ［塩素化］塩化チオニル（７．５ｍＬ、０．２８Ｍ）中の１１（５００ｍｇ、２．１３４ｍｍｏｌ）の溶液に、ジメチルホルムアミド（０．１５ｍＬ）を滴加した。攪拌しながら８０℃（浴温度）で２時間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、減圧下で濃縮した。残分をＥｔ２Ｏ（２００ｍＬ）で連続的に洗浄し、すぐに次の工程に使用した。
［置換］無水ＤＭＦ（１１ｍＬ、０．２Ｍ）中の上記で調製したクロロキナゾリン１２の溶液に、３－クロロ－２－フルオロアニリン（０．５０ｍＬ、４．５４８ｍｍｏｌ）をＡｒ下、室温で滴加した。同一温度で１時間攪拌した後、反応混合液をＥｔ２Ｏ（１００．０ｍＬ）で希釈し、白色懸濁液を得た。得られた白色固体をＥｔ２Ｏ（２×５０ｍＬ）で連続的に洗浄してから、回収し、ＪＧＫ０１８（５２５ｍｇ、６８％）を得た。分光データはＺｈａｎｇ，Ｘ．ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１５，５８，８２００－８２１５と一致していた。
１３の調製
Figure 0007474269000050
 ［アセチル脱保護］ＪＧＫ０１８（５５０ｍｇ、１．５２０ｍｍｏｌ）にアンモニア溶液（８．０ｍＬ、メタノール中の７Ｎ）を滴加した。密閉チューブ内、攪拌しながら５０℃（浴温度）で２時間加熱した後、反応混合液を室温まで冷ましてから、減圧下で濃縮した。得られた白色固体をＥｔ２Ｏ（２×５０ｍＬ）で連続的に洗浄してから、回収し、１３（３９４ｍｇ、８１％）を得た。得られた分光データはＺｈａｎｇ，Ｘ．ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１５，５８，８２００－８２１５の分光データと一致していた。
１４の調製
Figure 0007474269000051
 無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中の１３（１１３ｍｇ、０．３５３ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液に、Ａｒ下、トリエチルアミン（０．２５ｍＬ、１．７６７ｍｍｏｌ）を滴加してから、無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中の二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（６２ｍｇ、０．４５９ｍｍｏｌ）を滴加した。室温で３日間攪拌した後、Ｈ２Ｏ飽和水溶液（１０ｍＬ）で反応混合液の反応を停止させてから、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈した。層を分離させてから、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、５／１～３／１）で残液を精製し、１４（４２ｍｇ、２８％単離収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．６９ （ｓ， １ Ｈ）， ８．３９－８．４５ （ｍ， １ Ｈ）， ７．６４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．１１－７．１６ （ｍ， ２ Ｈ）， ３．９０ （ｓ， ３ Ｈ）， １．５９ （ｓ， ９ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １５６．２ （Ｊ ＝ ３９．５ Ｈｚ）， １５４．９， １５１．３， １５０．３， １４９．５ （Ｊ ＝ ２２４．１ Ｈｚ）， １４０．４， １２８．１ （Ｊ ＝ ９．６ Ｈｚ）， １２４．８， １２４．４ （Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ）， １２１．５， １２０．８ （Ｊ ＝ ５１．２ Ｈｚ）， １１３．５， １０９．０， １０８．８， ８４．６， ５６．２， ２７．６；
Ｃの調製
Figure 0007474269000052
 無水ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中のＡ１（５６ｍｇ、０．１９０４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ａｒ下、室温で、トリエチルアミン（０．０８ｍＬ、０．５７１２ｍｍｏｌ）を滴加してから、クロロアセチルクロリド（０．０５ｍＬ、０．６２８６ｍｍｏｌ）を加えた。同一温度で１時間攪拌した後、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（２０ｍＬ）で反応混合液の反応を停止させてから、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で希釈した。層を分離させてから、ＣＨ２Ｃｌ２（２×３０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を更に精製することなく次の工程に使用した。
ＪＧＫ０３１の調製
Figure 0007474269000053
 ［アルキル化］ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の１４（４４ｍｇ、０．１０５８ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液に、室温で、炭酸カリウム（７３ｍｇ、０．５２８ｍｍｏｌ）を一度に加えてから、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の上記で調製したＣ（０．１９０４ｍｍｏｌ）を滴加した。攪拌しながら４０℃（浴温度）で３日間加熱した後、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で反応混合液の反応を停止させてから、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈した。層を分離させてから、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、１００／１～３０／１）で残液を精製し、アルキル化生成物１４－（２）（４３ｍｇ、５５％単離収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．１６ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．４４ （ｓ， １ Ｈ）， ６．９８－７．１３ （ｍ， ５ Ｈ）， ６．３４ （ｍ， １ Ｈ）， ４．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．５４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ４．４８ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．６９ （ｓ， ６ Ｈ）， ２．９５－３．１３ （ｍ， ２ Ｈ）， １．５３ （ｓ， ９ Ｈ）， １．４０ （ｓ， ９ Ｈ）．
［脱保護］無水ＭｅＯＨ（５．０ｍＬ）中のアルキル化生成物１４－（２）（２６ｍｇ、０．０３４８ｍｍｏｌ）の溶液に、０．５Ｎ塩酸塩溶液（０．５ｍＬ）を滴加した。同一温度で２４時間攪拌した後、反応混合液を減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（逆相シリカゲル、ＭｅＯＨまたはＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、１０／１）で残液を精製し、ＪＧＫ０３１（１２ｍｇ、６１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ ８．２０ （ｓ， １ Ｈ）， ７．６７ （ｓ， １ Ｈ）， ７．４９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ７．２４－７．３０ （ｍ， １ Ｈ）， ７．１１－７．２１ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３ Ｈ）， ３．５９ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．８３－３．０１ （ｍ， ２ Ｈ）；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ５５４．１６３１ ［Ｃ２７Ｈ２５ＣｌＦＮ５Ｏ５ に対する計算値 ５５３．１５２２］．
ＪＧＫ０３３の調製
Figure 0007474269000054
 無水ＴＨＦ（６ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中のＪＧＫ０３１（５ｍｇ、０．００９０２６ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム・Ｈ２Ｏ（３ｍｇ）を一度に加えた。室温で２時間攪拌した後、反応混合液を１Ｎ塩酸塩溶液で中和してから、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（逆相シリカゲル、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ、５／１）で残液を精製し、ＪＧＫ０３３（４．４ｍｇ、９０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ ７．１６ （ｓ， １ Ｈ）， ６．３２ （ｓ， １ Ｈ）， ６．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ５．８９－５．９８ （ｍ， ２ Ｈ）， ５．５９－５．７９ （ｍ， ４ Ｈ）， ４．００ （ｓ， ２ Ｈ）， ２．５１ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．４６ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ １６３．９， １５９．４， １５７．２， １５４．３， １５２．１， １４９．５， １３７．１， １３５．４， １２９．７， １２６．９， １２４．６， １２１．５， １２０．３， １０８．０， １０６．９， ９７．８， ５６．６， ５３．５， ３５．６；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ５４０．１４３５ ［Ｃ２６Ｈ２３ＣｌＦＮ５Ｏ５ に対する計算値 ５３９．１３６６］．
ＪＧＫ００８の調製
Figure 0007474269000055
 無水ＭｅＯＨ（５．６ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（５．６ｍＬ）中のラパチニブ（３２６ｍｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）の溶液に、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（３７８ｍｇ、２．８１９ｍｍｏｌ）をＡｒ下、一度に滴加した。室温で２日間攪拌した後、Ｈ２Ｏ飽和水溶液（１０ｍＬ）で反応混合液の反応を停止させてから、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）で希釈した。層を分離させてから、ＣＨ２Ｃｌ２（５×５０ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機層をＨ２Ｏ及び飽和食塩水で連続的に洗浄してから、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、３／１～１／１）で残液を精製し、ＪＧＫ００８（１１９ｍｇ、３１％単離収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ８．７１ （ｂｓ， １ Ｈ）， ８．６４ （ｓ， １ Ｈ）， ８．４４ （ｓ， １ Ｈ）， ７．８５－７．９５ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．３２－７．３７ （ｍ， １ Ｈ）， ７．２１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， １０．８ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ６．９８－７．０３ （ｍ， １ Ｈ）， ６．９６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ４７．１ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．１３ （ｓ， ２ Ｈ）， ４．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ３２．２ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．９９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ６６．１ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．８９ （ｓ， ３ Ｈ）， １．４９ （ｓ， ９ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １６３．９， １６２．０， １５８．０， １５４．２， １５２．７， １５１．７， １５１．０， １３９．１ （ｄ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ）， １３２．４， １３０．１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ）， １２９．１， １２８．６， １２８．２， １２５．１， １２３．１， １２２．４， １２２．３， １１５．４， １１４．９ （ｄ， Ｊ ＝ ２１．０ Ｈｚ）， １１４．１ （ｄ， Ｊ ＝ １３．９ Ｈｚ）， １１３．９， １１１．５， １１０．９， １０７．７， ８１．３， ７０．９， ４５．０， ４３．６， ４２．３， ４１．４， ４１．２， ２８．４；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ６８１．１９４６ ［Ｃ３４Ｈ３４ＣｌＦＮ４Ｏ６Ｓ に対する計算値 ６８０．１８６６］．
ＪＧＫ０１１の調製
Figure 0007474269000056
 固体のラパチニブ（６８ｍｇ、０．３５３ｍｍｏｌ）に無水酢酸（５．０ｍＬ）をＡｒ下で加えた。室温で２日間攪拌した後、反応混合液を減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、３／１～１／３）で残液を精製し、ＪＧＫ００２（４８ｍｇ、６２％単離収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ９．１８ （ｓ， １ Ｈ）， ８．１０－８．１７ （ｍ， ３ Ｈ）， ７．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ， １ Ｈ）， ７．２７－７．３６ （ｍ， ２ Ｈ）， ７．１８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．６， １３．８ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ６．９７－７．０３ （ｍ， ２ Ｈ）， ６．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ３．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ６．４４ （ｄ， Ｊ ＝ ３．３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．１４ （ｓ， ２ Ｈ）， ４．６６ （ｓ， ２ Ｈ）， ３．８６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ３．３０ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．９５ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．３３ （ｓ， ３ Ｈ）， ２．２３ （ｓ， ３ Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ １７１．４， １７１．２， １６３．９， １６２．２， １６２．０， １５４．０， １５３．７， １５２．５， １５１．０， １３８．５ （Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ）， １３４．２， １３０．８， １３０．３， １３０．２， １２９．９， １２９．１， １２７．４， １２３．９， １２２．４ （Ｊ ＝ ２．９ Ｈｚ）， １２１．８， １１８．０， １１５．１， １１５．０， １１４．０ （Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ）， １１３．８， １１１．１， １０８．９， ７０．１ （Ｊ ＝ １．７ Ｈｚ）， ５２．３， ４７．０， ４１．４， ４０．７， ２３．７， ２１．８；ＨＲＭＳ－ＥＳＩ ［Ｍ＋Ｈ］＋ 実測値 ６６５．１６２８ ［Ｃ３３Ｈ３０ＣｌＦＮ４Ｏ６Ｓ に対する計算値 ６６４．１５５３］．
実施例２：ＪＧＫシリーズの更なる例示化合物の調製
一般的な化学情報
全ての化学物質、試薬、及び溶媒については、入手可能な場合は市販の供給元から購入し、受け入れたままの状態で使用した。必要に応じ、標準的な方法で試薬及び溶媒を精製して乾燥させた。空気の影響を受けやすい反応及び湿度の影響を受けやすい反応は、オーブンで乾燥させたガラス器具内、アルゴンの不活性雰囲気下で実施した。マイクロ波照射反応は、シングルモード反応器ＣＥＭ Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロ波合成装置内で実施した。室温反応は周囲温度（約２３℃）で実施した。全ての反応は、ＵＶ光（λ＝２５４、３６５ｎｍ）またはアルカリＫＭｎＯ４溶液を使用することでスポットを可視化したプレコートＭｅｒｃｋ ６０ Ｆ２５４シリカゲルプレートを用いた薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でモニターした。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣ）は、ＳｉＯ２ ６０（粒径０．０４０～０．０６３ｍｍ、２３０～４００メッシュ）を用いて実施した。減圧下（真空下）における濃縮は、２５～５０℃の回転蒸発によって実施した。精製化合物は、高真空下またはデシケータ内で更に乾燥させた。収率は精製化合物に対応しており、更なる最適化は行わなかった。プロトン核磁気共鳴（１Ｈ ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒスペクトロメーター（３００、４００、または５００ＭＨｚで操作した）を用いて記録した。炭素ＮＭＲ（１３Ｃ ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒスペクトロメーター（４００または５００ＭＨｚのいずれか）を用いて記録した。ＮＭＲ化学シフト（δｐｐｍ）については、残存溶媒のシグナルを基準とした。１Ｈ ＮＭＲデータは、以下：化学シフト（ｐｐｍ）；多重度（ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｑｕｉｎｔ＝クインテット、ｍ＝マルチプレット／複合パターン、ｔｄ＝トリプルダブレット、ｄｄｄ＝ダブルダブルダブレット、ｂｒ＝ブロードシグナル）；結合定数（Ｊ）（Ｈｚ）、積分のとおりに記録する。１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのデータは、化学シフト、及び該当する場合、結合定数を基準として記録する。ＩｏｎＳｅｎｓｅ ＩＤ－ＣＵＢＥ ＤＡＲＴ ｓｏｕｒｃｅ質量分析計を備えたＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓを用いて、高解像度質量（ＨＲＭＳ）スペクトルを記録した。化合物４－クロロ－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン（１）、４－クロロキナゾリン－６，７－ジオール（２）、及びＪＧＫ０１０については、上記で報告したとおりに調製した。
４－アニリノキナゾリン化合物ＪＧＫ０３５～ＪＧＫ０４１及びＪＫＧ０４３を合成するための一般的な手順Ａ
ｉＰｒＯＨ（０．１～０．３Ｍ）中の４－クロロキナゾリンの混合液（１当量）をアニリン（１当量）で処理してから、混合液をマイクロ波照射下（６０Ｗ）、８０℃で１５～２０分間加熱した。混合液を２３℃まで冷ましてから、追加のアニリン（１当量）で処理し、再度マイクロ波照射（８０℃、６０Ｗ、１５～２０分間）に供した。混合液に対して、減圧下における濃縮または沈殿のいずれかを行ってから、濾過により４－アニリノキナゾリン塩酸塩を単離した（冷却ｉＰｒＯＨで洗浄した）。残分を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液中に懸濁させてから、ＣＨ２Ｃｌ２（３×）で抽出した。混合有機抽出液を水、食塩水で洗浄してから、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。ＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃまたはヘキサン／ＥｔＯＡｃのグラジエントによる溶出）を用いた精製により、典型的には白色からオフホワイト、または淡黄色の固体として所望の生成物を得た。
Ｎ－（２－フルオロフェニル）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０３５）。
Figure 0007474269000057
 一般的な手順Ａに従い、ｉＰｒＯＨ（１．５ｍＬ）中の４－クロロキナゾリン１（５１ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）及び２－フルオロアニリン（４０μＬ、０．４８ｍｍｏｌ）から化合物ＪＧＫ０３５を調製した。ＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ １０：１→１０：４）により、白色固体としてＪＧＫ０３５（５６ｍｇ、８２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６４ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３１ （ｓ， １Ｈ）， ７．２２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １１．２， ８．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１０ － ７．０５ （ｍ， １Ｈ）， ４．４４ － ４．３７ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １５６．０８， １５３．６０， １５３．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ２４２．７ Ｈｚ）， １４９．５２， １４６．６５， １４４．３４， １２７．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ９．５ Ｈｚ）， １２４．６６ （ｄ， Ｊ ＝ ３．７ Ｈｚ）， １２３．９７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ）， １２２．８９， １１５．０６ （ｄ， Ｊ ＝ １９．３ Ｈｚ）， １１４．４６， １１０．６２， １０６．１０， ６４．６９， ６４．５１ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ１６Ｈ１１ＦＮ３Ｏ２ －， に対する計算値 ２９６．０８４１；実測値， ２９６．０８４１．
４－クロロ（７，７，８，８－２Ｈ４）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン（３）。
Figure 0007474269000058
 乾燥ＤＭＦ（４．８ｍＬ）中の化合物２（１９３ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）の溶液をＣｓ２ＣＯ３（７８８ｍｇ、２．４２ｍｍｏｌ）で処理してから、５分間攪拌し、１－ブロモ－２－クロロ（２Ｈ４）エタン（２７０μＬ、３．１６ｍｍｏｌ）を滴加することで処理した。混合液を２３℃で１時間、その後、７０℃で１８時間攪拌した。混合液を２３℃まで冷ました後、全ての揮発性物質を減圧下で除去した。残分をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中に溶解させてから、水（２×１３ｍＬ）、食塩水（１３ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ １：０→１０：１．５）を用いた精製により、白色飛散性固体として表題化合物３（１０９ｍｇ、４９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．８４ （ｓ， １Ｈ）， ７．６４ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７ ｐｐｍ （ｓ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １６０．１９， １５２．５２， １５１．５４， １４７．９３， １４６．０６， １２０．１０， １１３．７２， １１０．８３ ｐｐｍ （２つの高磁場炭素は認められず）． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１０Ｈ４Ｄ４ＣｌＮ２Ｏ２ ＋に対する計算値， ２２７．０５２０；実測値， ２２７．０５１６．
Ｎ－（３－クロロ－２－フルオロフェニル）（７，７，８，８－２Ｈ４）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０３６）。
Figure 0007474269000059
 一般的な手順Ａに従い、ｉＰｒＯＨ（１．２ｍＬ）中の４－クロロキナゾリン３（５５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）及び３－クロロ－２－フルオロアニリン（５２μＬ、０．４７ｍｍｏｌ）から化合物ＪＧＫ０３６を調製した。濾過により粗反応混合液からＪＧＫ０３６・ＨＣｌを単離し、塩基化及び抽出の後に、淡黄色固体として純粋なＪＧＫ０３６（６７ｍｇ、８２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６２ （ｓ， １Ｈ）， ８．３４ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．５３ － ７．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２７ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９ ｐｐｍ （ｓ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．１７， １５３．１０， １５２．４５ （ｄ， Ｊ ＝ ２４９．２ Ｈｚ）， １４９．２８， １４６．０４， １４３．６８， １２８．２１ （ｄ， Ｊ ＝ １２．０ Ｈｚ）， １２７．２７， １２７．０３， １２４．８７ （ｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２０．１１ （ｄ， Ｊ ＝ １６．７ Ｈｚ）， １１２．４８， １０９．６４， １０８．３５， ６３．５０ （ｍ， ２Ｃ’ｓ）． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ８Ｄ４ＣｌＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３３６．０８４８；実測値， ３３６．０８４１．
Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０３７）。
Figure 0007474269000060
 一般的な手順Ａに従い、ｉＰｒＯＨ（１．５ｍＬ）中の４－クロロキナゾリン１（１００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及び３－ブロモ－２－フルオロアニリン（１００μＬ、０．８９ｍｍｏｌ）から化合物ＪＧＫ０３７を調製した。ＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ １０：０→１０：３）により、淡黄色固体としてＪＧＫ０３７（１５０ｍｇ、８９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， ７．４， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３５ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２９ （ｓ， １Ｈ）， ７．２９ － ７．２４ （ｍ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４４ － ４．３８ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １５５．８９， １５３．３７， １５０．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ２４２．２ Ｈｚ）， １４９．７０， １４６．７５， １４４．５３， １２８．６５ （ｄ， Ｊ ＝ １０．５ Ｈｚ）， １２７．２４， １２５．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．７９， １１４．５３， １１０．５９， １０８．５９ （ｄ， Ｊ ＝ １９．４ Ｈｚ）， １０５．９３， ６４．７０， ６４．５１ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ１６Ｈ１０ＢｒＦＮ３Ｏ２ －に対する計算値， ３７３．９９４６；実測値， ３７３．９９４６．
Ｎ－｛２－フルオロ－３－［（トリエチルシリル）エチニル］フェニル｝－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（４）。
Figure 0007474269000061
 １つのドラムバイアルにＪＧＫ０１０（７５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、ＸＰｈｏｓ（１９．７ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１９５ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、［ＰｄＣｌ２・（ＭｅＣＮ）２］（３．６ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）を充填した。バイアルを排気してからアルゴンを充填した（少なくとも２回繰り返した）。乾燥アセトニトリル（１ｍＬ）を加え、橙黄色懸濁液を２３℃で２５分間攪拌してから、エチニルトリエチルシラン（１５０μＬ、０．８４ｍｍｏｌ）を注入した。チューブを密閉してから、反応混合液を、予め加熱した油浴内、９５℃で３．５時間攪拌した。懸濁液を２３℃に到達させてから、ＥｔＯＡｃで希釈し、ＳｉＯ２充填剤に通して濾過し（ＥｔＯＡｃで洗浄した）、蒸発させた。ＦＣ（ＳｉＯ２、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ８：２→４：６）を用いた精製により、黄色泡状固体として表題化合物４（４８ｍｇ、４９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．６８１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．６７８ （ｓ， １Ｈ）， ７．３８２ （ｓ， １Ｈ）， ７．３７６ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２８ （ｓ， １Ｈ）， ７．２１ － ７．１２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４４ － ４．３８ （ｍ， ４Ｈ）， １．０７ （ｔ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， ９Ｈ）， ０．７１ ｐｐｍ （ｑ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， ６Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １５５．９５， １５３．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ２４８．０ Ｈｚ）， １５３．４４， １４９．６２， １４６．６６， １４４．４７， １２７．６８， １２７．６０， １２４．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ）， １２２．７９， １１４．４９， １１１．７７ （ｄ， Ｊ ＝ １４．６ Ｈｚ）， １１０．６１， １０５．９７， ９８．６５， ９８．４９ （ｄ， Ｊ ＝ ３．７ Ｈｚ）， ６４．７０， ６４．５１， ７．６３， ４．５０ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２４Ｈ２７Ｎ３Ｏ２Ｓｉ＋に対する計算値， ４３６．１８５１；実測値， ４３６．１８３１．
Ｎ－（３－エチニル－２－フルオロフェニル）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０３８）。
Figure 0007474269000062
 湿潤ＴＨＦ（０．９ｍＬ）中の化合物４（４０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の混合液を、ＴＨＦ（４５０μＬ、０．４５ｍｍｏｌ）中のＴＢＡＦの１Ｍ溶液を滴加することで処理してから、混合液を２３℃で１８時間攪拌した。水（１０ｍＬ）を加えてから、混合液をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。混合有機液を食塩水（２０ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ＳｉＯ２、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ７：３→３：７）に続く第２のＦＣ（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ １：０→６：４）を用いた精製により、オフホワイト固体としてＪＧＫ０３８（１９ｍｇ、６４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．６９ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．０， １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．６７ （ｓ， １Ｈ）， ７．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２９ （ｓ， １Ｈ）， ７．２４ － ７．１５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４３ － ４．３８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．３４ ｐｐｍ （ｓ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １５５．９４， １５４．０４ （ｄ， Ｊ ＝ ２４８．８ Ｈｚ）， １５３．３９， １４９．６５， １４６．７０， １４４．４７， １２７．８１， １２７．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ９．１ Ｈｚ）， １２４．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２３．４７， １１４．４９， １１０．５８， １１０．５０ （ｄ， Ｊ ＝ １４．３ Ｈｚ）， １０５．９９， ８２．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ３．５ Ｈｚ）， ７６．７０ （ｄ， Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ）， ６４．６９， ６４．５０ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１８Ｈ１３ＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３２２．０９８６；実測値， ３２２．０９８１．
Ｎ－［２－フルオロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０３９）。
Figure 0007474269000063
 一般的な手順Ａに従い、ｉＰｒＯＨ（１．５ｍＬ）中の４－クロロキナゾリン１（３７ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び２－フルオロ－３－（トリフルオロメチル）アニリン（４２μＬ、０．３３ｍｍｏｌ）から化合物ＪＧＫ０３９を調製した。ＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ １：０→１０：３）により、オフホワイト固体としてＪＧＫ０３９（３５ｍｇ、５８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ９．００ － ８．９２ （ｍ， １Ｈ）， ８．７０ （ｓ， １Ｈ）， ７．４２ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．４０ （ｓ， １Ｈ）， ７．３５ － ７．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３０ （ｓ， １Ｈ）， ４．４６ － ４．３８ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １５５．７７， １５３．２４， １５０．２７ （ｄ， Ｊ ＝ ２５２．０ Ｈｚ）， １４９．８１， １４６．８０， １４４．６６， １２８．６２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ）， １２６．３４， １２４．４４， １２４．４０， １２２．６６ （ｑ， Ｊ ＝ ２７２．４ Ｈｚ）， １２０．４１ （ｑ， Ｊ ＝ ４．６ Ｈｚ）， １１４．５８， １１０．５５， １０５．８６， ６４．７０， ６４．５１ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ１７Ｈ１０Ｆ４Ｎ３Ｏ２ －に対する計算値， ３６４．０７１５；実測値， ３６４．０７１２．
４－クロロ－８，９－ジヒドロ－７Ｈ－［１，４］ジオキセピノ［２，３－ｇ］キナゾリン（５）。
Figure 0007474269000064
 乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物２（１００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）の溶液をＣｓ２ＣＯ３（４６０ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）で処理してから、１５分間攪拌し、１，３－ジブロモプロパン（１３５μＬ、１．３３ｍｍｏｌ）を滴加することで処理した。混合液を２３℃で１時間、その後、６５℃で１８時間攪拌した。２３℃まで冷ました後、全ての揮発性物質を減圧下で除去した。残分をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中に懸濁させてから、水（２×５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ヘキサン／ＣＨ２Ｃｌ２ １：１０→０：１→ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ １０：１．５）に続く第２のＦＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ １０：１→１０：３）を用いた精製により、白色固体として表題化合物５（４１ｍｇ、３４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．８７ （ｓ， １Ｈ）， ７．７５ （ｓ， １Ｈ）， ７．５５ （ｓ， １Ｈ）， ４．４６ （ｔ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４０ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．３４ ｐｐｍ （ｑｕｉｎｔ， Ｊ ＝ ５．９ Ｈｚ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １６０．５７， １５８．８６， １５３．１０， １５３．０３， １４８．８８， １２０．８３， １１８．１９， １１５．６４， ７０．５１， ７０．３３， ３０．５１ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１１Ｈ１０ＣｌＮ２Ｏ２ ＋に対する計算値， ２３７．０４２５；実測値， ２３７．０４１６．
Ｎ－（３－クロロ－２－フルオロフェニル）－８，９－ジヒドロ－７Ｈ－［１，４］ジオキセピノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０４０）。
Figure 0007474269000065
 一般的な手順Ａに従い、ｉＰｒＯＨ（１．５ｍＬ）中の４－クロロキナゾリン５（３３ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及び３－クロロ－２－フルオロアニリン（３２μＬ、０．２９ｍｍｏｌ）から化合物ＪＧＫ０４０を調製した。ＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ １：０→１０：３．５）により、白色固体としてＪＧＫ０４０（３４ｍｇ、７０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．７２ （ｓ， １Ｈ）， ８．３９ （ｓ， １Ｈ）， ８．０８ （ｓ， １Ｈ）， ７．５３ － ７．４５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２９ （ｓ， １Ｈ）， ７．２７ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３２ （ｔ， Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．２９ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．２２ ｐｐｍ （ｑｕｉｎｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．４３， １５６．６７， １５３．８５， １５２．４８ （ｄ， Ｊ ＝ ２４９．３ Ｈｚ）， １５０．７４， １４７．２９， １２８．０５ （ｄ， Ｊ ＝ １２．０ Ｈｚ）， １２７．４１， １２７．０４， １２４．９１ （ｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２０．１３ （ｄ， Ｊ ＝ １６．５ Ｈｚ）， １１７．５２， １１３．８１， １１０．７７， ７０．７５， ７０．６２， ３０．８０ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１７Ｈ１４ＣｌＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３４６．０７５３；実測値， ３４６．０７４０．
８－クロロ－２Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｇ］キナゾリン（６）。
Figure 0007474269000066
 乾燥ＤＭＦ（３．４ｍＬ）中の化合物２（１００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）の溶液をＣｓ２ＣＯ３（３３５ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）で処理してから、２３℃で１５分間攪拌した。混合液を、クロロヨードメタン（１３０μＬ、１．７９ｍｍｏｌ）を滴加することで処理してから、１時間、その後、７０℃で１７時間攪拌した。混合液を２３℃まで冷ました後、全ての揮発性物質を減圧下で除去した。残分をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中に懸濁させてから、水（２×７ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ヘキサン／ＣＨ２Ｃｌ２ ３：１０→０：１→ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ １０：２）を用いた精製により、白色飛散性固体として表題化合物６（３８ｍｇ、３６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．８５ （ｓ， １Ｈ）， ７．４９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３２ （ｓ， １Ｈ）， ６．２１ ｐｐｍ （ｓ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １５９．８２， １５４．８９， １５２．７９， １５０．９４， １４９．７８， １２１．２３， １０５．２３， １０２．８９， １０１．１２ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ９Ｈ６ＣｌＮ２Ｏ２ ＋に対する計算値， ２０９．０１１２；実測値， ２０９．０１０４．
Ｎ－（３－クロロ－２－フルオロフェニル）－２Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｇ］キナゾリン－８－アミン（ＪＧＫ０４１）。
Figure 0007474269000067
 一般的な手順Ａに従い、ｉＰｒＯＨ（１．５ｍＬ）中の４－クロロキナゾリン６（３５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び３－クロロ－２－フルオロアニリン（３８μＬ、０．３５ｍｍｏｌ）から化合物ＪＧＫ０４１を調製した。ＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ １：０→１：１）により、淡黄色固体としてＪＧＫ０４１（３５ｍｇ、６６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．５３ （ｓ， １Ｈ）， ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．８４ （ｓ， １Ｈ）， ７．５３ － ７．４４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２７ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２０ （ｓ， １Ｈ）， ６．２５ ｐｐｍ （ｓ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．３７， １５３．１０， １５２．６０， １５２．４３ （ｄ， Ｊ ＝ ２４８．９ Ｈｚ）， １４８．５６， １４７．２８， １２８．３０ （ｄ， Ｊ ＝ １１．９ Ｈｚ）， １２７．１７， １２６．９０， １２４．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ）， １２０．１２ （ｄ， Ｊ ＝ １６．４ Ｈｚ）， １０９．８２， １０４．５９， １０２．３８， ９８．７７ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１５Ｈ１０ＣｌＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３１８．０４４０；実測値， ３１８．０４３５．
［（３－クロロ－２－フルオロフェニル）（７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－イル）アミノ］メチルアセテート（ＪＧＫ０４３）。
Figure 0007474269000068
 乾燥ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中のＪＧＫ０１０（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の混合液を、ＴＨＦ（１５０μＬ、０．１５ｍｍｏｌ）中のＬｉＨＭＤＳの１Ｍ溶液を０℃で滴加することで処理した。その温度で１５分間攪拌した後、混合液を、乾燥ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中の酢酸クロロメチル（５５μＬ、０．５７ｍｍｏｌ）の溶液に滴加した。当初ＪＧＫ０１０の溶液を含有していたフラスコを０．５ｍＬの乾燥ＴＨＦですすいでから、反応混合液に加えた。０℃で２時間攪拌した後、２３℃での攪拌を２２時間続けた。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）を加えてから、混合液をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。混合有機液を乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）から、濾過し、減圧下で蒸発させた。ＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ １：０－＞１：１）を用いた精製により、淡黄色固体としてＪＧＫ０４３（３０ｍｇ、４９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．８８ （ｓ， １Ｈ）， ７．０８ － ６．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ６．９４ （ｔｄ， Ｊ ＝ ７．２， ２．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８２ （ｓ， １Ｈ）， ５．７３ （ｓ， ２Ｈ）， ４．４０ － ４．２９ （ｍ， ４Ｈ）， ２．１２ ｐｐｍ （ｓ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １７０．３３， １５２．９６， １５０．１０ （ｄ， Ｊ ＝ ２４５．６ Ｈｚ）， １４９．３７， １４８．０５， １４３．２４， １４０．１７ （ｄ， Ｊ ＝ １３．１ Ｈｚ）， １３１．８９， １２４．１７， １２４．１２ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ）， １２２．５９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ）， １２１．３３ （ｄ， Ｊ ＝ １７．１ Ｈｚ）， １１５．４１， １１４．３１， １０２．２４， ７１．１９， ６５．０７， ６４．２３， ２０．８５ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１９Ｈ１６ＣｌＦＮ３Ｏ４＋に対する計算値， ４０４．０８０８；実測値， ４０４．０７９２．
実施例３：ＪＧＫシリーズの更なる例示化合物の調製
一般的な手順：全ての化学物質、試薬、及び溶媒については、入手可能な場合は市販の供給元から購入し、受け入れたままの状態で使用した。必要に応じ、標準的な方法で試薬及び溶媒を精製して乾燥させた。空気の影響を受けやすい反応及び湿度の影響を受けやすい反応は、オーブンで乾燥させたガラス器具内、アルゴンの不活性雰囲気下で実施した。マイクロ波照射反応は、シングルモード反応器ＣＥＭ Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロ波合成装置内で実施した。室温（ＲＴ）反応は周囲温度（約２３℃）で実施した。全ての反応は、ＵＶ光（λ＝２５４、３６５ｎｍ）またはアルカリＫＭｎＯ４溶液を使用することでスポットを可視化したプレコートＭｅｒｃｋ ６０ Ｆ２５４シリカゲルプレートを用いた薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でモニターした。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣ）は、ＳｉＯ２ ６０（粒径０．０４０～０．０６３ｍｍ、２３０～４００メッシュ）を用いて実施した。減圧下（真空下）における濃縮は、２５～５０℃の回転蒸発によって実施した。精製化合物は、高真空下またはデシケータ内で更に乾燥させた。収率は精製化合物に対応しており、更なる最適化は行わなかった。プロトン核磁気共鳴（１Ｈ ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒスペクトロメーター（３００、４００、または５００ＭＨｚで操作した）を用いて記録した。炭素ＮＭＲ（１３Ｃ ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒスペクトロメーター（４００または５００ＭＨｚのいずれか）を用いて記録した。ＮＭＲ化学シフト（δｐｐｍ）については、残存溶媒のシグナルを基準とした。１Ｈ ＮＭＲデータは、以下：化学シフト（ｐｐｍ）；多重度（ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｑｕｉｎｔ＝クインテット、ｍ＝マルチプレット／複合パターン、ｔｄ＝トリプルダブレット、ｄｄｄ＝ダブルダブルダブレット、ｂｒ＝ブロードシグナル）；結合定数（Ｊ）（Ｈｚ）、積分のとおりに記録する。１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのデータは、化学シフト、及び該当する場合、結合定数を基準として記録する。ＩｏｎＳｅｎｓｅ ＩＤ－ＣＵＢＥ ＤＡＲＴ ｓｏｕｒｃｅ質量分析計を備えたＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ、またはオートサンプラーを備えたＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣを備えたＷａｔｅｒｓ ＬＣＴ Ｐｒｅｍｉｅｒ質量分析計を用いて、高解像度質量（ＨＲＭＳ）スペクトルを記録した。
３－［（７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－イル）アミノ］－２－フルオロベンゾニトリル（ＪＧＫ０４４）。
Figure 0007474269000069
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ９．０６ － ８．９８ （ｍ， １Ｈ）， ８．６９ （ｓ， １Ｈ）， ７．４１ （ｓ， １Ｈ）， ７．３９ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３５ － ７．３１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３０ （ｓ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．３７ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．６３， １５３．６３ （ｄ， Ｊ ＝ ２５４．６ Ｈｚ）， １５３．０４， １４９．９４， １４６．８０， １４４．７６， １２８．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ）， １２７．４８， １２６．５８， １２５．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ）， １１４．５６， １１３．８０， １１０．４５， １０５．８３， １０１．３０ （ｄ， Ｊ ＝ １３．９ Ｈｚ）， ６４．７０， ６４．５１ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１７Ｈ１２ＦＮ４Ｏ２ ＋に対する計算値， ３２３．０９３９；実測値， ３２３．０９２７．
３－［（７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－イル）アミノ］ベンゾニトリル（ＪＧＫ０４５）。
Figure 0007474269000070
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ ９．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．５２ （ｓ， １Ｈ）， ８．４６ （ｔ， Ｊ ＝ １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１８ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．２， ２．３， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０８ （ｓ， １Ｈ）， ７．５８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｄｔ， Ｊ ＝ ７．６， １．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２２ （ｓ， １Ｈ）， ４．４９ － ４．３６ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５６．２４， １５２．６９， １４９．３１， １４６．１５， １４３．８０， １４０．５２， １２９．８７， １２６．３５， １２５．９６， １２４．１５， １１８．９３， １１２．６６， １１１．２３， １０９．９６， １０８．３０， ６４．５２， ６４．１９ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１７Ｈ１３Ｎ４Ｏ２ ＋に対する計算値， ３０５．１０３３；実測値， ３０５．１０１８．
エチル（３－クロロ－２－フルオロフェニル）７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－イルカルバメート（ＪＧＫ０４７）。
Figure 0007474269000071
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．９６ （ｓ， １Ｈ）， ７．４８３ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７７ （ｓ， １Ｈ）， ７．３７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ６．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．０８ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．３８ （ｍ， ４Ｈ）， ４．２７ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．２２ ｐｐｍ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： １５８．９８， １５４．４３ （ｄ， Ｊ ＝ ２５０．７ Ｈｚ）， １５３．９０， １５３．４１， １５１．１７， １４９．６８， １４５．６１， １３０．１２， １２９．８５ （ｄ， Ｊ ＝ １２．４ Ｈｚ）， １２８．２０， １２４．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ）， １２２．２２ （ｄ， Ｊ ＝ １６．８ Ｈｚ）， １１７．９６， １１３．５１， １０９．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ）， ６４．７３， ６４．３６， ６３．４４， １４．４３．ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１９Ｈ１６ＣｌＦＮ３Ｏ４ ＋に対する計算値， ４０４．０８０８；実測値， ４０４．０８００．
（±）－４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－７－オール（（±）－ＪＧＫ０５０）。
Figure 0007474269000072
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ ９．６１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３４ （ｓ， １Ｈ）， ７．９１ （ｓ， １Ｈ）， ７．７２ （ｄ， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９ （ｓ， １Ｈ）， ５．７０ － ５．５９ （ｍ， １Ｈ）， ４．２７ （ｄ， Ｊ ＝ １１．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１７ ｐｐｍ （ｄ， Ｊ ＝ １０．６ Ｈｚ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５７．１８， １５３．３８ （ｄ， Ｊ ＝ ２４７．４ Ｈｚ）， １５３．１３， １４８．７８， １４６．１４， １４１．９２， １３０．１２， １２８．０５ （ｄ， Ｊ ＝ １３．８ Ｈｚ）， １２７．７８， １２５．４５ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ）， １１１．９５， １０９．８７， １０８．７１， １０８．５５ （ｄ， Ｊ ＝ ２０．３ Ｈｚ）， ８８．６３， ６７．２３ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１２ＢｒＦＮ３Ｏ３ ＋に対する計算値， ３９２．００４１；実測値， ３９２．００３０．
（±）－シス－及び（±）－トランス－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７，８－ジメチル－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミンのジアステレオ異性体混合物（（±）－シス／トランス－ＪＧＫ０５１）。
Figure 0007474269000073
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３；（±）－シス／トランス ２：１）： δ ＝ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６８ － ８．６３ （ｍ， １Ｈ）， ７．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．３５ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２８ （ｓ， １Ｈ）， ７．２８ － ７．２４ （ｍ， １Ｈ）， ７．１０ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５２ － ４．３９ （ｍ， １．３Ｈ）， ４．０９ － ３．９８ （ｍ， ０．７Ｈ）， １．４５３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ， １．１Ｈ）， １．４５１ （ｄ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ， １．１Ｈ）， １．３６９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， １．９Ｈ）， １．３６８ ｐｐｍ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， １．９Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３；（±）－シス／トランス ２：１）： δ ＝ １５５．８７， １５５．８４， １５３．１９， １５０．１２ （ｄ， Ｊ ＝ ２４２．５ Ｈｚ）， １５０．０９ （ｄ， Ｊ ＝ ２４２．２ Ｈｚ）， １４９．８７， １４８．８９， １４６．７７， １４４．６４， １４３．６３， １２８．７３ （ｄ， Ｊ ＝ １０．０ Ｈｚ）， １２７．１５， １２７．１２， １２５．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．７１， １２１．７０， １１４．３０， １１３．９３， １１０．５４， １１０．４７， １０８．５７ （ｄ， Ｊ ＝ １９．４ Ｈｚ）， １０５．６６， １０５．２８ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１８Ｈ１６ＢｒＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ４０４．０４０４；実測値， ４０４．０３９３．
（±）－シス－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７，８－ジメチル－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（（±）－ＪＧＫ０５２）。
Figure 0007474269000074
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６６ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．６， ７．４， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．３５ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２８ （ｓ， １Ｈ）， ７．３０ － ７．２３ （ｍ， １Ｈ）， ７．１０ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５０ － ４．４１ （ｍ， ２Ｈ）， １．３６９ （ｄ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．３６８ ｐｐｍ （ｄ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．８５， １５３．１９， １５０．１１ （ｄ， Ｊ ＝ ２４２．１ Ｈｚ）， １４８．８９， １４６．７７， １４３．６３， １２８．７３ （ｄ， Ｊ ＝ １０．２ Ｈｚ）， １２７．１４， １２５．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．７１， １１４．３０， １１０．５４， １０８．５７ （ｄ， Ｊ ＝ １９．５ Ｈｚ）， １０５．６５， ７２．８５， ７２．５８， １４．７１， １４．５５ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１８Ｈ１６ＢｒＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ４０４．０４０４；実測値， ４０４．０４１６．
Ｎ－（３－ブロモ－４－クロロ－２－フルオロフェニル）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０５３）。
Figure 0007474269000075
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ ９．７０ （ｓ， １Ｈ）， ８．３５ （ｓ， １Ｈ）， ７．９４ （ｓ， １Ｈ）， ７．６１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８， ７．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２０ （ｓ， １Ｈ）， ４．４７ － ４．３５ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５７．０３， １５４．１４ （ｄ， Ｊ ＝ ２４９．５ Ｈｚ）， １５３．０１， １４９．３６， １４６．０８， １４３．７４， １３０．７５， １２７．７７ （ｄ， Ｊ ＝ ２．９ Ｈｚ）， １２６．８０ （ｄ， Ｊ ＝ １３．４ Ｈｚ）， １２５．３７ （ｄ， Ｊ ＝ ３．８ Ｈｚ）， １１２．５０， １１０．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ２２．５ Ｈｚ）， １０９．６６， １０８．３９， ６４．５１， ６４．１４ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１１ＢｒＣｌＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ４０９．９７０２；実測値， ４０９．９６９７．
Ｎ－（３，４－ジブロモ－２－フルオロフェニル）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０５４）。
Figure 0007474269000076
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ ９．６５ （ｓ， １Ｈ）， ８．３４ （ｓ， １Ｈ）， ７．９２ （ｓ， １Ｈ）， ７．６７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５５ （ｔ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２０ （ｓ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．３５ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５６．９５， １５３．９８ （ｄ， Ｊ ＝ ２４９．１ Ｈｚ）， １５２．９９， １４９．３５， １４６．０９， １４３．７４， １２８．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ３．７ Ｈｚ）， １２８．１４， １２７．２１ （ｄ， Ｊ ＝ １３．７ Ｈｚ）， １２０．９６， １１２．５１， １１２．３３， １０９．６８， １０８．３６， ６４．５１， ６４．１４ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１１Ｂｒ２ＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ４５３．９１９７；実測値， ４５３．９１９１．
Ｎ－（５－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０５５）。
Figure 0007474269000077
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．９９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ７．３， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．７２ （ｓ， １Ｈ）， ７．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２７ （ｓ， １Ｈ）， ７．１６ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ４．６， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．９， ８．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４４ － ４．３６ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．５９， １５３．３５， １５２．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ２４３．１ Ｈｚ）， １４９．６９， １４６．６７， １４４．５２， １２８．７５ （ｄ， Ｊ ＝ １０．５ Ｈｚ）， １２６．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ）， １２５．０６， １１７．１９ （ｄ， Ｊ ＝ ３．４ Ｈｚ）， １１６．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ２０．９ Ｈｚ）， １１４．５２， １１０．４８， １０５．８５， ６４．６８， ６４．５０ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１２ＢｒＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３７６．００９１；実測値， ３７６．００７７．
Ｎ－（３－ブロモ－２，６－ジフルオロフェニル）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０５６）。
Figure 0007474269000078
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ ９．６０ （ｓ， １Ｈ）， ８．３２ （ｓ， １Ｈ）， ７．９４ （ｓ， １Ｈ）， ７．７４ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， ５．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｓ， １Ｈ）， ４．４４ － ４．３８ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５７．７８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２４８．８， ３．３ Ｈｚ）， １５７．３７， １５５．０１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２４７．９， ４．９ Ｈｚ）， １５３．０８， １４９．４７， １４６．０４， １４３．８６， １３０．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ９．３ Ｈｚ）， １１７．３０ （ｔ， Ｊ ＝ １７．５ Ｈｚ）， １１３．３０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２１．８， ３．０ Ｈｚ）， １１２．５６， １０９．４５， １０８．２８， １０３．５５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２０．４， ３．６ Ｈｚ）， ６４．５２， ６４．１４ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１１ＢｒＦ２Ｎ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３９３．９９９７；実測値， ３９４．０００８．
Ｎ－（３－ブロモ－２，４－ジフルオロフェニル）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０５７）。
Figure 0007474269000079
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６４ （ｓ， １Ｈ）， ８．５１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ９．０， ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．２９ （ｓ， １Ｈ）， ７．２３ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．０４ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ９．２， ７．８， ２．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．３７ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５６．１０， １５５．８０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２４６．６， ３．５ Ｈｚ）， １５３．２８， １５１．２５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２４５．１， ４．０ Ｈｚ）， １４９．７４， １４６．５６， １４４．５３， １２４．３９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．８， ３．４ Ｈｚ）， １２２．７２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， １．８ Ｈｚ）， １１４．４２， １１１．４９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２２．５， ３．９ Ｈｚ）， １１０．３４， １０５．９８， ９７．８６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２５．７， ２２．９ Ｈｚ）， ６４．６９， ６４．５０ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１１ＢｒＦ２Ｎ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３９３．９９９７；実測値， ３９４．００１３．
Ｎ－（３－ブロモ－５－クロロ－２－フルオロフェニル）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０５８）。
Figure 0007474269000080
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．８８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．６， ２．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．７３ （ｓ， １Ｈ）， ７．４１ （ｓ， １Ｈ）， ７．３７ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２６ （ｓ， １Ｈ）， ７．２８ － ７．２３ （ｍ， １Ｈ）， ４．４４ － ４．３９ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．４５， １５３．１３， １４９．８８， １４８．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ２４１．７ Ｈｚ）， １４６．７６， １４４．７２， １３０．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ）， １２９．２６ （ｄ， Ｊ ＝ １０．８ Ｈｚ）， １２６．０８， １２１．２１， １１４．６０， １１０．４９， １０８．６８ （ｄ， Ｊ ＝ ２０．９ Ｈｚ）， １０５．７１， ６４．７０， ６４．５２ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１１ＢｒＣｌＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ４０９．９７０２；実測値， ４０９．９７１３．
（±）－トランス－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７，８－ジメチル－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（（±）－ＪＧＫ０５９）。
Figure 0007474269000081
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６６ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．６， ７．３， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３７６ （ｓ， １Ｈ）， ７．３７５ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２８ （ｓ， １Ｈ）， ７．２８ － ７．２４ （ｍ， １Ｈ）， ７．１０ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０８ － ３．９８ （ｍ， ２Ｈ）， １．４５１ （ｄ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．４４８ ｐｐｍ （ｄ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．９０， １５３．１２， １５０．１２ （ｄ， Ｊ ＝ ２４２．５ Ｈｚ）， １４９．９０， １４６．５９， １４４．６５， １２８．７０ （ｄ， Ｊ ＝ １０．２ Ｈｚ）， １２７．１８， １２５．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ）， １２１．７４， １１３．８４， １１０．４３， １０８．５７ （ｄ， Ｊ ＝ １９．２ Ｈｚ）， １０５．３１， ７５．３１， ７５．０５， １７．２３， １７．２０ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１８Ｈ１６ＢｒＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ４０４．０４０４；実測値， ４０４．０４０５．
Ｎ－（３，４－ジクロロ－２－フルオロフェニル）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０６０）。
Figure 0007474269000082
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６７ （ｓ， １Ｈ）， ８．５９ （ｔ， Ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４０ （ｓ， １Ｈ）， ７．３８ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．１， ２．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３１ （ｓ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．３８ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．８４， １５３．０８， １４９．９８ （ｄ， Ｊ ＝ ２４６．３ Ｈｚ）， １４９．８８， １４６．４２， １４４．６７， １２７．５５， １２７．１９ （ｄ， Ｊ ＝ １０．０ Ｈｚ）， １２５．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ４．１ Ｈｚ）， １２１．０５， １２０．４７ （ｄ， Ｊ ＝ １８．２ Ｈｚ）， １１４．３６， １１０．４３， １０５．９７， ６４．７１， ６４．５１ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１１Ｃｌ２ＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３６６．０２０７；実測値， ３６６．０２０７．
Ｎ－（３－ブロモ－２，５－ジフルオロフェニル）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０６１）。
Figure 0007474269000083
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ ９．６５ （ｓ， １Ｈ）， ８．４０ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．６３ － ７．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２１ （ｓ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．３７ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５７．２９ （ｄ， Ｊ ＝ ２４３．５ Ｈｚ）， １５６．８４， １５２．９３， １４９．９７ （ｄ， Ｊ ＝ ２４２．９ Ｈｚ）， １４９．４３， １４６．１６， １４３．８１， １２９．２２ － １２８．４４ （ｍ）， １１６．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ２６．７ Ｈｚ）， １１３．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ２５．７ Ｈｚ）， １１２．５３， １０９．７３， １０８．７６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２２．５， １２．５ Ｈｚ）， １０８．３３， ６４．５２， ６４．１５ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１１ＢｒＦ２Ｎ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３９３．９９９７；実測値， ３９３．９９８８．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－エテニル－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（（±）－ＪＧＫ０６２）。
Figure 0007474269000084
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．２， ７．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４０ （ｓ， １Ｈ）， ７．３７ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３５ （ｓ， １Ｈ）， ７．２７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．４， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１０ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．９５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １７．３， １０．７， ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．６０ （ｄｔ， Ｊ ＝ １７．３， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４８ （ｄｔ， Ｊ ＝ １０．７， １．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８２ － ４．７４ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０９ ｐｐｍ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．９０， １５３．３８， １５０．１４ （ｄ， Ｊ ＝ ２４２．４ Ｈｚ）， １４９．１２， １４６．７０， １４４．１２， １３１．４８， １２８．６４ （ｄ， Ｊ ＝ １０．３ Ｈｚ）， １２７．２４， １２５．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．７６， １２０．４３， １１４．２９， １１０．６９， １０８．５８ （ｄ， Ｊ ＝ １９．３ Ｈｚ）， １０６．０６， ７４．０３， ６７．８４ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１８Ｈ１４ＢｒＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ４０２．０２４８；実測値， ４０２．０２３３．
実施例４：例示化合物の生物活性及びアッセイプロトコル
ＥＧＦＲ Ｋｉｎａｓｅ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｖ３８３１）を使用して、無細胞ＥＧＦＲキナーゼアッセイを実施した。２５０ｎＭから０．０３０５２ｎＭまでの２倍希釈の１３種の濃度、薬物非含有対照、及び酵素非含有対照を、反応あたり２５ｎｇのＥＧＦＲ酵素に対して、２連で使用した。ＡＤＰ－Ｇｌｏ Ｋｉｎａｓｅ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｖ６９３０）を使用して、阻害剤の存在下におけるＥＧＦＲ活性を測定した。
患者由来膠芽腫細胞を使用して、ＧＩ５０アッセイを実施した。４０，０００ｎＭから９．７７ｎＭまで（ＧＢＭ株用）または４，０００ｎＭから０．９７７ｎＭまで（肺癌株（ＨＫ０３１）用）の２倍希釈の１３種の濃度を、ウェルあたり１５００の細胞と共に４連で３８４ウェルプレート上に播種した。細胞を３日間培養してから、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｇ７５７０）を用いて増殖を評価した。基準として、エルロチニブは６４２ｎＭ（ＨＫ３０１）及び２７８８ｎＭ（ＧＢＭ３９）のＧＩ５０を示した。
８～１０週齢の雄ＣＤ－１マウスに対して、薬物動態試験を実施した。記載のとおりマウスに２連で投与した。その時点において、眼窩後方採血で全血を得て、脳組織を採取した。血液試料を遠心分離にかけて血漿を得て、脳組織を洗浄してホモジナイズした。試料をアセトニトリルで抽出してから、ｓｐｅｅｄ－ｖａｃを使用して上清を乾燥させた。乾燥試料を５０：５０：０．１のアセトニトリル：水：ギ酸中に溶解させてから、Ａｇｉｌｅｎｔ ６４００シリーズＴｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ ＬＣ／ＭＳを用いて定量した。
Figure 0007474269000085
Figure 0007474269000086
Figure 0007474269000087
Figure 0007474269000088
Figure 0007474269000089
Figure 0007474269000090
Figure 0007474269000091
Figure 0007474269000092
Figure 0007474269000093
Figure 0007474269000094
Figure 0007474269000095
Figure 0007474269000096
Figure 0007474269000097
Figure 0007474269000098
実施例５：エルロチニブ及び本開示の例示化合物のタンパク質結合
エルロチニブ及びいくつかの本開示の例示化合物のタンパク質結合を以下の表４に示す。Ｆｕとは「未結合画分」のことを意味する。Ｋｐｕｕとは「平衡状態における脳及び血漿の非結合分配係数」のことを意味する。
Figure 0007474269000099
実施例６：ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダー及びＥＧＦＲｉ代謝ノンレスポンダーの分類
急性ＥＧＦＲ阻害による１９種の患者由来ＧＢＭ細胞株におけるグルコース消費の変化を特性決定した。患者腫瘍の分子的特徴の多くを保持している血清をベースとした培養条件とは対照的に、補足無血清培地中で細胞を神経膠腫球として培養した。ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＥＧＦＲｉ）エルロチニブを用いた処理により、ＥＧＦＲ阻害により放射能標識グルコース取り込み（１８Ｆ－ＦＤＧ）が有意に低下したＧＢＭのサブセットを同定したが、以後、「代謝レスポンダー」と呼ぶ（図２１Ａ及び図２７Ａ）。ｓｉＲＮＡを使用してＥＧＦＲをサイレンシングすることにより、グルコース取り込みの低下がエルロチニブのオフターゲット効果によるものではないことを確認した（図２７Ｂ、図２７Ｃ）。ＥＧＦＲｉ処理細胞における１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みの低下は、乳酸生成、グルコース消費、及び細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）の低下と関連しており、更に、グルタミンレベルは変化せずに維持された（図２１Ｂ及び図２７Ｄ～図２７Ｇ）。最後に、グルコース利用の低下は、ＲＡＳ－ＭＡＰＫシグナル伝達及びＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ－ｍＴＯＲシグナル伝達（そのそれぞれはＧＢＭ及びその他のがんにおけるグルコース代謝を調節し得る）の変動と相関してした（図２８Ａ）。
それに対し、全ての「ノンレスポンダー」ＧＢＭ（すなわち、ＥＧＦＲｉまたはｓｉＲＮＡによる１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みに変化がない）（図２１Ａ、及び図２７Ｂ、図２７Ｃ）では、強力なＥＧＦＲ阻害にもかかわらず、グルコース消費、乳酸生成、及びＥＣＡＲの変化は認められなかった（図２１Ｂ、図２７Ｄ～図２７Ｇ、及び図２８Ｂ）。更に、これらの細胞において、ＲＡＳ－ＭＡＰＫシグナル伝達及びＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ－ｍＴＯＲシグナル伝達は大きく影響を受けていなかった（図２８Ｂ）。注目すべきことに、全ての代謝レスポンダーがＥＧＦＲにおける変異（コピー数のゲイン、変異）を有していた一方で、代謝応答を示さない６種のＧＢＭ株もまた、ＥＧＦＲ変異及び／またはコピー数ゲインを含有していた（図２９Ａ、図２９Ｂ）。まとめると、これらのデータは２つのキーポイントを示している。第１に、ＥＧＦＲの急性阻害が原発性ＧＢＭ細胞のサブセットにおけるグルコース利用を急速に低下させるということ、第２に、ＥＧＦＲの遺伝子変異により、どのＧＢＭがＥＧＦＲｉに対する代謝応答を示すかということを単独で予測することはできないということ、である。
実施例７：ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダーをアポトーシスに向けて活性化させる
グルコース代謝が変動することにより、プロアポトーシス因子の発現が誘導されて内因性アポトーシスが促進され得るが、ＥＧＦＲｉに応じたグルコース取り込みの低下が内因性アポトーシス経路を刺激し得ることを示唆している。事実、急性エルロチニブ処理により、代謝レスポンダー培地においてのみ、プロアポトーシスＢＨ３－ｏｎｌｙタンパク質であるＢＩＭ及びＰＵＭＡの発現が促進された（図３０Ａ）。しかしながら、アネキシンＶ染色により、エルロチニブ曝露の７２時間後に、代謝レスポンダーが、ノンレスポンダー（約３％）と比較して、せいぜい適度（約１７％）（有意により高いが）なアポトーシスを示していることが明らかとなった（図２１Ｃ）。
プロアポトーシス因子の顕著な誘導にもかかわらずアポトーシスレベルが低いことから、本発明者らは、ＥＧＦＲｉを用いてグルコース取り込みを変動させることが、ＧＢＭ細胞をアポトーシスに向けて活性化させて、その結果、有意な細胞死を誘導することなくアポトーシス傾向を高めるかどうかを自問した。このことを試験するために、本発明者らは、代謝レスポンダーと代謝ノンレスポンダーの両方をエルロチニブで２４時間処理してから、動的ＢＨ３プロファイリングを実施して、アポトーシス活性化の変化を定量した（図３０Ｂ）。本発明者らは、複数種のＢＨ３ペプチド（例えば、ＢＩＭ、ＢＩＤ、及びＰＵＭＡ）を使用して、エルロチニブ処理を行った代謝レスポンダーにおけるアポトーシス活性化の有意な上昇（溶媒と比較したシトクロムｃ放出の変化により測定）を観察した（図２１Ｄ－暗灰色のバー）。重要なことに、代謝レスポンダーにおける活性化は、代謝ノンレスポンダーにおける活性化と比較して有意により高く（図２１Ｄ－淡灰色のバー）、ＥＧＦＲｉによるグルコース取り込み低下がＧＢＭにおけるアポトーシス活性化を誘発するという前提を裏付けるものであった。
本発明者らは、グルコース消費を救援することがこれらの効果を軽減するはずであるかどうかを確認することにより、グルコース取り込みの低下がＥＧＦＲｉによるアポトーシス活性化に必要かどうかを試験した。このことを試験するために、２種の代謝レスポンダー（ＨＫ３０１及びＧＢＭ３９）においてグルコース輸送体１（ＧＬＵＴ１）及び３（ＧＬＵＴ３）を異所的に発現させた。ＧＬＵＴ１及びＧＬＵＴ３（ＧＬＵＴ１／３）を強制的に発現させると、両方の細胞株におけるグルコース取り込み及び乳酸生成のＥＧＦＲｉ介在性低下が救援され（図２１Ｅ、及び図３１Ａ～図３１Ｃ）、重要なことに、ＥＧＦＲｉに応じたアポトーシス活性化が著しく抑制された（図２１Ｆ）。まとめると、これらのデータは、グルコース消費のＥＧＦＲｉ介在性阻害が、有意な細胞死を誘導するには不十分ではあるが、ＧＢＭ細胞にこの活性化状態を利用する薬剤の影響を潜在的に受けやすくさせるアポトーシス閾値を低下させることを示している。
実施例８：細胞質ｐ５３はＥＧＦＲｉによるアポトーシス活性化に必要である
ＧＢＭがＥＧＦＲｉによるアポトーシスに向けて活性化されるメカニズムを調査した。がん遺伝子駆動性グルコース代謝を阻害することにより、ＧＢＭ細胞が、細胞質ｐ５３依存性アポトーシスの影響を相乗的に受けやすくなるようにした。標的化発がんシグナル伝達（例えば、ＥＧＦＲｉ）による、ＧＢＭにおけるグルコース代謝フラックスの低下により、細胞質ｐ５３が内因性アポトーシス経路に関与する（「活性化」）ようになる。しかしながら、Ｂｃｌ－ｘＬは細胞質ｐ５３介在性細胞死を阻害する。薬理学的なｐ５３安定化によりこのアポトーシス阻害が克服され、ＧＢＭにおけるがん遺伝子駆動性グルコース代謝の組み合わせ標的化との相乗的な致死性がもたらされる。
活性化状態の細胞内において、抗アポトーシスＢｃｌ－２ファミリータンパク質（例えば、Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－ｘＬ、及びＭｃｌ－１）の大部分はプロアポトーシスＢＨ３タンパク質（例えば、ＢＩＭ、ＢＩＤ、ＰＵＭＡ、ＢＡＤ、ＮＯＸＡ、ＨＲＫ）と結合しており、その結果、細胞の生存はこれらの相互作用に依存している。腫瘍抑制タンパク質ｐ５３は、引き続き抗アポトーシスＢｃｌ－２タンパク質による結合を必要とするプロアポトーシスタンパク質を上方調節して、細胞死を防止することが知られている。ｐ５３がＥＧＦＲｉ誘導性活性化に必要であるかどうかを調査するために、本発明者らは、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ－９を用いて、２種の代謝レスポンダー（ＨＫ３０１及びＨＫ３３６、図２２Ａ）におけるｐ５３をサイレンシングした（以後、ｐ５３ＫＯと呼ぶ）。ＥＧＦＲｉによるグルコース消費の変化はｐ５３ＫＯ細胞において影響を受けなかったが（図３２Ａ）、ＢＨ３プロファイリングにより、ｐ５３ＫＯがＨＫ３０１細胞とＨＫ３３６細胞の両方におけるエルロチニブ誘導性アポトーシス活性化をほぼ無効化することが明らかとなった（図２２Ｂ）。
ｐ５３転写活性がグルコース制限下で向上することが示されていることから、本発明者らは、ｐ５３介在性転写がＥＧＦＲｉによって誘導されるかどうかを確認するために調査を行った。しかしながら、エルロチニブは、ｐ５３調節遺伝子（例えば、ｐ２１、ＭＤＭ２、ＰＩＧ３、ＴＩＧＡＲ）の発現を上昇させなかった（図３２Ｂ）、または、ＨＫ３０１代謝レスポンダー細胞においてｐ５３－ルシフェラーゼレポーター活性を誘導しなかった（図３２Ｃ）。これらのデータは、ｐ５３がＥＧＦＲｉによる活性化に必要である一方でその転写活性は必須ではない場合があることを示している。
ｐ５３の十分に説明された核機能に加えて、ｐ５３は、ｐ５３が内因性アポトーシス経路に直接関与することができる細胞質内に局在化し得る。細胞質ｐ５３がＥＧＦＲｉによるアポトーシス活性化にとって重要であるかどうかを評価するために、本発明者らは、不完全な核移行シグナルを有するｐ５３変異（ｐ５３ｃｙｔｏ）をＨＫ３０１ ｐ５３ＫＯ神経膠腫球及びＨＫ３３６ ｐ５３ＫＯ神経膠腫球に安定的に導入した。予測どおり、ｐ５３ｃｙｔｏは、発現し（図２２Ｃ及び図３２Ｄ）、細胞質に限定され（図２２Ｄ及び図３２Ｅ）、転写活性を有していなかった（図２２Ｅ及び図３２Ｆ）。逆に、ＨＫ３０１ ｐ５３ＫＯ細胞及びＨＫ３３６ ｐ５３ＫＯ細胞における野生型ｐ５３（ｐ５３ｗｔ）の再構成は、親細胞に類似した局在化を示し、ｐ５３調節遺伝子の転写を救援した（図２２Ｃ～図２２Ｅ、及び図３２Ｅ～図３２Ｇ）。注目すべきことに、ｐ５３ｃｙｔｏの安定した導入により、ＨＫ３０１ ｐ５３ＫＯ細胞とＨＫ３３６ ｐ５３ＫＯ細胞の両方におけるエルロチニブによる活性化が、ｐ５３ｗｔと同等のレベルにまで有意に再生し（図２２Ｆ及び図３２Ｇ）、ｐ５３の細胞質機能がＥＧＦＲｉ介在性活性化に必要であることが示された。このことを裏付けるものとして、転写的に活性（図２６２２Ｇ）であり更に核に限定されたｐ５３変異（ｐ５３ＮＥＳ）のＨＫ３０１ ｐ５３ＫＯ細胞への導入では、ＥＧＦＲｉ介在性アポトーシス活性化を誘導することができなかった（図２２Ｇ、図２２Ｈ、及び図３２Ｈ）。最後に、ピフィスリン－μ（ＰＦＴμ）による細胞質ｐ５３活性の薬理学的阻害は、エルロチニブによる活性化により著しく低下した（図３２Ｉ）。まとめると、これらの結果は、細胞質ｐ５３が、ＧＢＭにおけるＥＧＦＲｉの後において内因性アポトーシス機構に関与していることを示している。
ヒト腫瘍由来ｐ５３変異（とりわけ、ＤＮＡ結合ドメイン内のヒト腫瘍由来ｐ５３変異）がトランス活性化不全に加えて細胞質機能を低下させていることを従来の研究が示している。それゆえ、本発明者らは、これら「ホットスポット」ｐ５３変異のうちの２種であるＲ１７５ＨまたはＲ２７３ＨのＨＫ３０１ ｐ５３ＫＯにおける安定発現が、ＥＧＦＲｉ介在性活性化を低下させ得るかどうかを試験した（図３２Ｈ）。予測どおり、転写能力を欠損しており（図２２Ｇ）細胞質活性の低下と一致している両方の変異により、ＥＧＦＲｉによるアポトーシス活性化が不能となっていた（図２２Ｈ）。それゆえ、従来の知見と合致するが、ｐ５３のＤＮＡ結合ドメイン内の発がん変異は「ｄｕａｌ ｈｉｔｓ」をもたらしており、それにより、トランス活性化と細胞質機能の両方が阻害されている（後者はＥＧＦＲｉによるアポトーシス活性化の影響を受けている）。
実施例９：ＥＧＦＲ駆動性グルコース取り込みの阻害により利用可能なＢｃｌ－ｘＬ依存が生じる
Ｂｃｌ－ｘＬは細胞質ｐ５３を隔離してｐ５３介在性アポトーシスを防止することができ、その結果、活性化アポトーシス状態、及び生存におけるＢｃｌ－ｘＬに対する依存が生じる。事実、ＢＨ３プロファイリングにより、ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダーにおける、細胞生存におけるＢｃｌ－ｘＬに対する依存が明らかとなった（図３３Ａ）。それゆえ、本発明者らは、ＥＧＦＲｉによるグルコース消費低下が、Ｂｃｌ－ｘＬによる細胞質ｐ５３の隔離をもたらし得るという仮説を立てた。このことを調査するために、本発明者らは、共免疫沈降を実施して、レスポンダー（ｎ＝２）とノンレスポンダー（ｎ＝２）の両方における、ＥＧＦＲｉに応じたｐ５３－Ｂｃｌ－ｘＬ相互作用の動態を調査した。重要なことに、本発明者らは、代謝ノンレスポンダー（図２３Ｂ）においてではなく代謝レスポンダー（図２３Ａ）における、エルロチニブ処理後における、著しく高いＢｃｌ－ｘＬ及びｐ５３の相互作用を観察した。このことは、ＥＧＦＲ依存性グルコース消費の阻害がＢｃｌ－ｘＬによるｐ５３の隔離をもたらすことを示唆している。この解釈と一致するものであるが、グルコース取り込み及びアポトーシス活性化のＥＧＦＲｉ介在性低下を救援するＧＬＵＴ１／３の異所性発現は、ｐ５３のＢｃｌ－ｘＬとの結合を防止した（図２３Ｃ及び図３３Ｂ）。これらの発見は、グルコース取り込みのＥＧＦＲｉ介在性阻害が、細胞質ｐ５３とＢｃｌ－ｘＬの間の相互作用を促進することによって、ＧＢＭ細胞をアポトーシスに向けて活性化させることを強く示している。
Ｂｃｌ－ｘＬからのｐ５３の遊離により、ｐ５３が直接ＢＡＸを活性化させることが可能となり、シトクロムｃ放出及び細胞死がもたらされる。本発明者らが代謝レスポンダーにおけるＥＧＦＲｉに応じたＢｃｌ－ｘＬとｐ５３の間の高い結合を認識した後、本発明者らは、Ｂｃｌ－ｘＬからのｐ５３の移動がアポトーシスを誘導するかどうかを自問した。このことを試験するために、本発明者らは、代謝レスポンダー（ＨＫ３０１）をエルロチニブ及び特定のＢｃｌ－ｘＬ阻害剤ＷＥＨＩ－５３９で処理した。ＷＥＨＩ－５３９を加えると、エルロチニブ処理下におけるＢｃｌ－ｘＬのｐ５３との結合が阻害され（図２３Ｄ）、ＨＫ３０１細胞及びＧＢＭ３９細胞における相乗的な致死性がもたらされた（図２３Ｅ）。注目すべきことに、細胞質ｐ５３は、ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダー細胞における組み合わせ効果に十分であった（図３３Ｃ）。しかしながら、ＷＥＨＩ－５３９はエルロチニブで処理したノンレスポンダー（ＨＫ３９３）におけるアポトーシスを増強させることなく、このことは、ＥＧＦＲｉによるグルコース取り込み及びそれに続くｐ５３とＢｃｌ－ｘＬの間の結合の低下が、生存におけるＢｃｌ－ｘＬに対する依存を生じさせるのに必要であることを示唆した（図３３Ｅ）。このことを裏付けるものとして、ＧＬＵＴ１／３の強制発現により、薬剤組み合わせによる細胞死が有意に軽減された（図２３Ｆ及び図３３Ｄ）。まとめると、これらの所見は、細胞質ｐ５３を隔離することによって、Ｂｃｌ－ｘＬが、グルコース取り込みのＥＧＦＲｉ介在性阻害に応じたＧＢＭ細胞死を低下させることを示している（図３２Ｇ）。
実施例１０：ＥＧＦＲ及びｐ５３の組み合わせ標的化はＥＧＦＲｉ代謝レスポンダーにおいて相乗的である
機構試験により、機能性ｐ５３に依存するＥＧＦＲ駆動性ＧＢＭにおける潜在的な治療の可能性が明らかとなった。ｐ５３シグナル伝達軸はＧＢＭにおいて変化している３つの中心的な経路のうちの１つであるが、ＴＣＧＡ ＧＢＭデータセットの解析により、ｐ５３変異がＥＧＦＲの変異と相互排他的であることが示された（図２８Ａ及び図２８Ｂ）。逆に、ＥＧＦＲ変異またはゲインを有する患者では、ｐ５３経路は、ＭＤＭ２の増幅、及び／またはＭＤＭ２の負の調節因子であるＣＤＫＮ２Ａ遺伝子座におけるｐ１４ ＡＲＦの欠失によって抑制され得る。これらの関係、及びＥＧＦＲｉにより低下したグルコース取り込み下における活性化にｐ５３が必要であることを考慮して、本発明者らは、ＭＤＭ２阻害によるｐ５３の安定化が、Ｂｃｌ－ｘＬ拮抗作用と類似した治療効果を示し得るという仮説を立てた。本発明者らは、ヌトリン（広く特性決定されたＭＤＭ２の阻害剤）をエルロチニブとペアで使用すると、代謝レスポンダー神経膠腫球において、顕著で相乗的な致死性がもたらされることを発見した。ＨＫ３０１細胞の９０％超は、エルロチニブ及びヌトリンの組み合わせによりアポトーシスを生じた（図２４Ｃ）。注目すべきことに、本発明者らは、代謝ノンレスポンダー（ＧＳ０１７、図２４Ｃ）におけるこれらの薬剤間の相乗効果を観察しなかった。その後、本発明者らは、この組み合わせを本発明者らの原発性ＧＢＭ細胞パネル（全てｐ５３野生型）にわたって試験し、相乗的な致死性が、ＥＧＦＲｉに対する代謝応答を示すＧＢＭにおいてのみであることを発見した（図２４Ｄ及び図３４Ａ）。ＥＧＦＲの遺伝子ノックダウンにより、相乗効果が代謝レスポンダーにおいてのみであることを確認した（図３４Ｂ）。重要なことに、ＧＬＵＴ１／３の強制発現により、ＢＡＸオリゴマー化、シトクロムｃ放出、及びエルロチニブ及びヌトリンの組み合わせによるアポトーシスが有意に低下し（図２４Ｅ及び図３４Ｃ）、ＥＧＦＲｉによるグルコース代謝の阻害が、エルロチニブ及びヌトリンの組み合わせの相乗効果に必要であるというコンセプトが裏付けられた。
その後、エルロチニブ及びヌトリンと組み合わせて細胞死を誘導するｐ５３の役割を調査した。予測どおり、２種のＥＧＦＲｉ代謝レスポンダー（ＨＫ３０１及びＨＫ３３６）におけるｐ５３のＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ－９標的化により、薬剤組み合わせへの感受性が完全に軽減された（図２４Ｆ）。同様に、Ｂｃｌ－ｘＬの異所性発現により組み合わせ処理による細胞死が著しく抑制され、ｐ５３介在性アポトーシスを中和するＢｃｌ－ｘＬの重要な機能と一致していた（図３４Ｄ）。更に、Ｂｃｌ－ｘＬ阻害（例えば、ＷＥＨＩ－５３９）による結果と類似しているが、ヌトリンを加えると、エルロチニブ処理下において、Ｂｃｌ－ｘＬからｐ５３が遊離した（図２４Ｇ）。これらのデータは、ｐ５３の安定化が細胞質ｐ５３介在性アポトーシスを促進し得るという先の観察結果と一致している。細胞質ｐ５３活性が代謝レスポンダーにおけるＥＧＦＲｉ及びヌトリンが誘導するアポトーシスに必要であるという示唆を裏付けるものとして、細胞質ｐ５３活性をＰＦＴμで阻害することにより、組み合わせの相乗効果が有意に低下し（図３４Ｅ）、その一方で、核に限定されたｐ５３変異であるｐ５３ＮＥＳを含有するＨＫ３０１細胞では、エルロチニブ及びヌトリンによるアポトーシスを増強させることができなかった（図３４Ｆ）。最後に、がん「ホットスポット」変異であるＲ１７５Ｈ及びＲ２７３Ｈ（トランス活性化不全と細胞質不全の両方を有している）は、薬剤組み合わせの影響を完全に受けなかった（図３４Ｆ）。
薬剤組み合わせによる細胞死を促進するのに細胞質ｐ５３が望まれるが、本発明者らは、一部の例において、ｐ５３の転写依存性機能と転写非依存性機能の両方が、ヌトリンによる相乗的なアポトーシスの最適な実行に必要であることを観察した（図３４Ｆ）。これらの結果は、ｐ５３の転写非依存性機能が単独で内因性アポトーシスを実行し得る一方で、別の状況では、細胞質ｐ５３介在性細胞殺傷を促進させるのにその転写依存性機能が必要となり得るという報告と一致している。まとめると、本明細書に記載の結果は、ＥＧＦＲ駆動性グルコース代謝及びｐ５３の組み合わせ標的化により、原発性ＧＢＭにおける著しい相乗的細胞死が誘導され得ることを示しており、その組み合わせ標的化はｐ５３の細胞質機能に依存している。
実施例１１：グルコース代謝の調節はＥＧＦＲｉノンレスポンダーをｐ５３介在性細胞死に向けて活性化させる
本発明者らは、上記のデータを元に、グルコース代謝のＥＧＦＲｉ介在性低下によりアポトーシス機構が活性化されて、ｐ５３活性化などのプロアポトーシス刺激との相乗効果がもたらされるモデルを提唱した。相乗効果は、ＥＧＦＲ阻害剤による細胞性ストレスの誘導と、グルコース取り込みの低下と、アポトーシスに向けた細胞の活性化と、ＢＣＬ－２のアンタゴニストによるｐ５３の安定化の間に存在している。ＥＧＦＲ阻害は、細胞性ストレスにより解糖を急速に低下させ得る。このことにより、１）ｐ５３の活性化（例えば、ヌトリン、本明細書に記載のアナログまたはその他のものによるものなど）、及び２）ＢＣＬ－２の阻害（本明細書に記載の数種類の薬剤、例えば、ＡＢＴ－２６３（Ｎａｖｉｔｏｃｌａｘ）などのうちのいずれかによる）によって内因性アポトーシスが有意に増強し得る、腫瘍特異的脆弱性が生じる。
このモデルの論理的予測は、グルコース代謝の直接阻害によりＥＧＦＲｉの効果が表現型模写されるはずであるということである。このことと一致するものであるが、グルコース代謝阻害剤２－デオキシグルコース（２ＤＧ）を加えると、ＨＫ３０１細胞（ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダー）における、アポトーシス活性化、ｐ５３のＢｃｌ－ｘＬへの結合、及びヌトリンによる相乗効果が増強された（図４０Ａ、図４０Ｂ、及び図４０Ｄ）。興味深いことに、オリゴマイシン（複合体Ｖ／ＡＴＰ合成酵素）またはロテノン（複合体Ｉ）による酸化的リン酸化の阻害は、ＨＫ３０１神経膠腫球において、ヌトリン処理との相乗効果を示さなかった（図３５Ｃ及び図３５Ｄ）。それゆえ、ｐ５３活性化への相乗的感受性にとって、酸化的代謝ではなくグルコース代謝フラックスの低下単独で十分であると考えられる。
このことにより、本発明者らは、ＥＧＦＲｉノンレスポンダーにおけるグルコース消費を調節することにより類似したｐ５３依存性脆弱性がもたらされるかどうかについて検討することになった。このことを調査するために、本発明者らは、２ＤＧまたは標的化ＰＩ３Ｋ（十分に特性決定されたグルコース代謝のドライバー）によるグルコース取り込みの直接阻害により、２種のＥＧＦＲｉ代謝ノンレスポンダーにおいて、アポトーシス活性化が誘導されるかどうかについての試験を行った（図２５Ａ）。エルロチニブ処理とは対照的に、ピクチリシブによるＰＩ３Ｋの急性阻害によりＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ－ｍＴＯＲシグナル伝達が阻害され（図３５Ｅ）、ＨＫ３９３細胞及びＨＫ２５４細胞における１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みが有意に低下した（図２５Ｂ）。ピクチリシブによるグルコース消費の低下は、有意に高いアポトーシス活性化と関連しており、予測どおり、２ＤＧはこれらの効果を完全に反映していた（図２５Ｂ及び図２５Ｃ）。それゆえ、ＥＧＦＲｉ代謝ノンレスポンダーは、グルコース取り込みの阻害後にアポトーシスに向けて活性化され得る。重要なことに、ＨＫ３９３におけるｐ５３のＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ－９標的化により、２ＤＧまたはピクチリシブが介在する活性化が有意に抑制された（図２５Ｄ）。更に、ｐ５３依存性活性化は、Ｂｃｌ－ｘＬ及びｐ５３の高い結合と関連しており、Ｂｃｌ－ｘＬによるｐ５３の隔離によりアポトーシスが阻害されることを示していた（図２５Ｅ及び図３５Ｆ）。この解釈と一致するものであるが、２ＤＧまたはピクチリシブをヌトリンと組み合わせることにより、ＥＧＦＲｉノンレスポンダー細胞における有意なｐ５３依存性相乗的致死性がもたらされた（図２５Ｆ及び図２５Ｇ）。まとめると、これらのデータは、直接または標的化療法とのいずれかによるグルコース代謝の急性阻害が、ＧＢＭにおけるｐ５３依存性アポトーシス活性化を促進することを示しており、ｐ５３依存性アポトーシス活性化は、高い細胞殺傷の標的となり得る脆弱性を生じさせる。
実施例１２：組み合わせ治療戦略及びｉｎ ｖｉｖｏでＧＢＭを標的化するための非侵襲的バイオマーカー
細胞培養により得られた結果は、がん遺伝子駆動性グルコース代謝及びｐ５３の組み合わせ標的化が原発性ＧＢＭにおいて相乗的活性を示すことを示している。本発明者らは、このことを元に、このアプローチが同所性ＧＢＭ異種移植モデルにおいて有効となり得るかどうかを調査した。これらの試験では、本発明者らは、目下多くの悪性腫瘍について臨床試験中の、強力なＭＤＭ２阻害剤であるイダサヌトリンを採用した。イダサヌトリンのＣＮＳ透過性の不確実性を考慮して、本発明者らは先ず、イダサヌトリンが、インタクトな血液脳関門（脳：血漿、０．３５）を有するマウスの脳内に蓄積して、同所性腫瘍保有マウスにおけるｐ５３を安定させ得ることを実証した（図４１Ａ及び図４１Ｂ）。
次に、がん遺伝子阻害によるグルコース代謝の変動がｐ５３活性化への相乗的感受性に必要であることから、本発明者らは、ＥＧＦＲｉの投与後におけるｉｎ ｖｉｖｏグルコース取り込みの急速な低下（１８Ｆ－ＦＤＧ ＰＥＴで測定した）が、エルロチニブ＋イダサヌトリンの組み合わせ治療の治療効果に対する非侵襲的予測バイオマーカーとして機能し得ると推論した（図２６Ａ）。本発明者らは、ＥＧＦＲ代謝レスポンダー神経膠腫球（ＧＢＭ３９）の同所性異種移植片において、急性エルロチニブ治療薬（７５ｍｇ／ｋｇ）により、１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みが急速に低下すること（エルロチニブ投与の１５時間後）を観察した（図２６Ｂ及び図３６Ｃ）。本発明者らは、別々の群のマウスについて、毎日の治療の、個々の薬剤、及びエルロチニブ（７５ｍｇ／ｋｇ）及びイダサヌトリン（５０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせを試験した。単一薬剤対照と比較して、本発明者らは、ＧＢＭ３９頭蓋内腫瘍保有マウスにおける相乗的増殖阻害（分泌ガウシアルシフェラーゼで測定した）（毒性は最小限）を観察した（図２６Ｂ及び図３６Ｄ）。対照的に、代謝ノンレスポンダー（ＨＫ３９３）の同所性異種移植片では、急性ＥＧＦＲｉによる１８Ｆ－ＦＤＧ取り込みの変化は示されず（図２６Ｄ及び図３６Ｃ）、または、エルロチニブ及びイダサヌトリンの組み合わせによる相乗的活性は示されなかった（図２６Ｅ）。それゆえ、ＥＧＦＲｉによるグルコース取り込みの急速な変化を測定するのに使用する非侵襲的１８Ｆ－ＦＤＧ ＰＥＴは、エルロチニブ及びイダサヌトリンの組み合わせへのその後の相乗的感受性を予測するのに有効であった。
最後に、本発明者らは、２種のＥＧＦＲｉ代謝レスポンダー（ＧＢＭ３９及びＨＫ３３６）または２種のノンレスポンダー（ＨＫ３９３及びＧＳ０２５）のいずれかの同所性異種移植片における全生存期間に対する薬剤組み合わせの効果について評価した。全ての腫瘍はｐ５３野生型であった（図２９Ａ）。腫瘍増殖（ガウシアルシフェラーゼで測定した）のエビデンスに従い、溶媒、エルロチニブ、イダサヌトリン、または組み合わせでマウスを最長２５日間治療した。薬剤組み合わせにより、ＥＧＦＲｉ代謝レスポンダーＧＢＭ腫瘍においてのみ、生存の著しい延長がもたらされた（図３０Ｆ～図３０Ｉ）。まとめると、これらのデータは、ＥＧＦＲ及びｐ５３の組み合わせ標的化が、ｐ５３野生型ＧＢＭ同所性異種移植片のサブセットにおいて相乗的に、増殖を阻害して生存を延長することを示している。重要なことに、１８Ｆ－ＦＤＧ ＰＥＴは、この新しい組み合わせ治療戦略への感受性の非侵襲的予測バイオマーカーとして有用であった。
実施例１３：２ＤＧまたはサイトカラシンＢによる解糖の直接阻害
本発明者らは、ヘキソキナーゼ阻害剤（２ＤＧ）及びグルコース輸送体阻害剤（サイトカラシンＢ）による解糖の直接阻害が、ヌトリンによるｐ５３活性化にどのように影響を及ぼすかを試験した。図３７に示す結果は、低グルコース（０．２５ｍＭ）により、ナビトクラックスまたはヌトリンによるＢＣＬ－ｘＬ阻害による相乗的細胞殺傷がもたらされることを示している。単一の薬剤またはｐ５３活性剤であるヌトリンとの組み合わせとして、解糖阻害剤である２ＤＧまたはサイトカラシンＢで７２時間処理した神経膠腫球試料におけるアネキシンＶ染色を使用して、細胞死を測定した。神経膠腫球を低グルコース条件下（０．２５ｍＭ）で培養してヌトリンまたはナビトクラックス（ＡＢＴ－２６３）で７２時間処理することにより、同一の効果が再現された。
実施例１４：実験手順
マウス
雌ＮＯＤ ｓｃｉｄ ガンマ（ＮＳＧ）（６～８週齢）はｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ （ＵＣＬＡ） ｍｅｄｉｃａｌ ｃｅｎｔｅｒ ａｎｉｍａｌ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｆａｃｉｌｉｔｙから購入した。雄ＣＤ－１マウス（６～８週齢）はＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒから購入した。全てのマウスは、ＵＣＬＡのｔｈｅ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ（ＤＬＡＭ）のＡＡＡＬＡＣ承認動物施設において、所定の細菌叢病原体非含有条件下に維持した。全ての動物実験は、ｔｈｅ ＵＣＬＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｏｖｅｒｓｉｇｈｔ（ＯＡＲＯ）の承認を取得して実施した。
患者由来ＧＢＭ細胞
ＧＢＭ細胞培養物を得るための全ての患者組織は、ＵＣＬＡ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄ（ＩＲＢ）プロトコル：１０－０００６５を使用し、明確なインフォームドコンセントを介して得た。これまでに記載されているとおりに１２、原発性ＧＢＭ細胞を樹立してから、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、Ｂ２７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ならびに、ヘパリン（５μｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ）、ＥＧＦ（５０ｎｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ）、及びＦＧＦ（２０ｎｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ）を補足したＧｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からなる神経膠腫球条件下に維持した。全ての細胞は、３７℃、２０％Ｏ２、及び５％ＣＯ２で増殖させ、定期的なモニターを行い、市販のキット（ＭｙｃｏＡｌｅｒｔ，Ｌｏｎｚａ）を使用して、マイコプラズマの存在に対して陰性であることを試験した。実験時において、使用したほとんどのＨＫ株は２０～３０の継代（例外、ＨＫ３８５ ｐ８、ＨＫ３３６ ｐ１５）である一方で、ＧＳ株及びＧＢＭ３９株は１０未満の継代であった。全ての細胞はショートタンデムリピート（ＳＴＲ）解析により鑑定した。
試薬及び抗体
ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験用に、以下の供給元から得た化学阻害剤、エルロチニブ（Ｃｈｅｍｉｅｔｅｋ）、ヌトリン－３Ａ（Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、ＷＥＨＩ－５３９（ＡＰＥｘＢＩＯ）、ピクチリシブ（Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、オリゴマイシン（Ｓｉｇｍａ）、ロテノン（Ｓｉｇｍａ）を、ＤＭＳＯ中に溶解させた。２ＤＧ（Ｓｉｇｍａ）は、使用前に新たに培地中に溶解させた。イムノブロットに使用する抗体は、列挙する供給元：β－アクチン（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、３７００）、チューブリン（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、３８７３）、ｐ－ＥＧＦＲ Ｙ１０８６（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、３６－９７００）、ｔ－ＥＧＦＲ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、０６－８４７）、ｔ－ＡＫＴ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、４６８５）、ｐ－ＡＫＴ Ｔ３０８（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、１３０３８）、ｐ－ＡＫＴ Ｓ４７３（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、４０６０）、ｔ－ＥＲＫ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、４６９５）、ｐ－ＥＲＫ Ｔ２０２／Ｙ２０４（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、４３７０）、ｔ－Ｓ６（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、２２１７）、ｐ－Ｓ６ Ｓ２３５／２３６（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、４８５８）、ｔ－４ＥＢＰ１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、９６４４）、ｐ－４ＥＢＰ１ Ｓ６５（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ９４５１）、Ｇｌｕｔ３（Ａｂｃａｍ、ａｂ１５３１１）、Ｇｌｕｔ１（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、０７－１４０１）、ｐ５３（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＳＣ－１２６）、ＢＡＸ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、５０２３）、ＢＩＭ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、２９３３）、Ｂｃｌ－２（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、２８７０）、Ｂｃｌ－ｘＬ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、２７６４）、Ｍｃｌ－１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、５４５３）、シトクロムｃ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、４２７２）、及び開裂カスパーゼ３（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、９６６１）から入手した。免疫沈降に使用する抗体は、列挙する供給元：ｐ５３（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、１２４５０）及びＢｃｌ－ｘＬ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、２７６４）から入手した。二次抗体は、列挙する供給元：抗ウサギＩｇＧ ＨＲＰ結合（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、７０７４）及び抗マウスＩｇＧ ＨＲＰ結合（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、７０７６）から入手した。全てのイムノブロット抗体は、１：１０，０００で使用したβ－アクチン及びチューブリンを除き、１：１０００の希釈で使用した。免疫沈降抗体は、製造業者の取扱説明書に従い希釈した（ｐ５３は１：２００、Ｂｃｌ－ｘＬは１：１００）。二次抗体は１：５０００の希釈で使用した。
１８Ｆ－フルオロデオキシグルコース（１８Ｆ－ＦＤＧ）取り込みアッセイ。
細胞を５×１０４細胞／ｍｌで播種してから、指定時点に指定薬剤で処理した。適切な処理に続いて、細胞を回収し、１８Ｆ－ＦＤＧを含有するグルコースフリーＤＭＥＭ／Ｆ１２（ＵＳＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ）（放射活性１μＣｉ／ｍＬ）中に再懸濁させた。細胞を３７℃で１時間培養してから、氷冷ＰＢＳで３回洗浄した。次に、ガンマカウンターを使用して、それぞれの試料の放射活性を測定した。
グルコース、グルタミン、及び乳酸の測定
Ｎｏｖａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ＢｉｏＰｒｏｆｉｌｅ Ｂａｓｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒを使用して、細胞のグルコース消費及び乳酸生成を測定した。簡潔に説明すると、細胞を、２ｍＬの神経膠腫球条件及び適切な薬剤条件、１×１０５細胞／ｍｌで播種した（ｎ＝５）。薬剤処理の１２時間後、それぞれの試料から１ｍｌの培地を取り出してＮｏｖａ ＢｉｏＰｒｏｆｉｌｅ ａｎａｌｙｚｅｒで解析した。測定値を細胞数に正規化した。
アネキシンＶアポトーシスアッセイ
細胞を回収してから、製造業者のプロトコル（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に従いアネキシンＶ染色及びＰＩ染色で解析した。簡潔に説明すると、細胞を５×１０４細胞／ｍｌで播種してから、適切な薬剤で処理した。指定時点の後、細胞を回収し、トリプシン処理を行い、ＰＢＳで洗浄し、アネキシンＶ及びＰＩで１５分間染色した。次に、ＢＤ ＬＳＲＩＩフローサイトメーターを使用して、試料を解析した。
イムノブロット
細胞を回収してから、Ｈａｌｔ Ｐｒｏｔｅａｓｅ及びＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有するＲＩＰＡバッファー（Ｂｏｓｔｏｎ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔｓ）中に溶解させた。溶解液を１４，０００×ｇ、４℃、１５分間の遠心分離にかけた。次に、タンパク質試料をＮｕＰＡＧＥ ＬＤＳ Ｓａｍｐｌｅ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＮｕＰＡＧＥ Ｓａｍｐｌｅ Ｒｅｄｕｃｉｎｇ Ａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で煮沸してから、１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いたＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して分離を行い、ニトロセルロース膜（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に転写した。抗体製造業者の仕様書に従い、またこれまでに言及したとおりに、イムノブロットを実施した。ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌシステム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、膜を染色した。
免疫沈降
細胞を回収してから、ＰＢＳで１回洗浄し、ＩＰ溶解バッファー（２５ｍＭトリス－ＨＣＬ ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１％ＮＰ－４０、５％グリセロール）中、４℃で１５分間培養した。次に、３００～５００μｇのそれぞれの試料をＰｒｏｔｅｉｎ Ａ／Ｇ Ｐｌｕｓ Ａｇａｒｏｓｅ Ｂｅａｄｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で１時間予め透明にした。予め透明にした後、製造業者の仕様書に従い、またこれまでに言及したとおりに、試料を抗体－ビーズ複合体と共に一晩培養した。次に、試料を１０００ｇ、１分間の遠心分離にかけ、ビーズを５００μＬのＩＰ溶解バッファーで５回洗浄した。２×ＬＤＳ Ｓａｍｐｌｅ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中、９５℃で５分間煮沸することにより、ビーズからタンパク質を溶出させた。先に記載したとおりにイムノブロットで試料を解析した。免疫沈降抗体は、製造業者の取扱説明書に従い希釈した（ｐ５３は１：２００、Ｂｃｌ－ｘＬは１：１００）。
動的ＢＨ３プロファイリング
先ず、ＧＢＭ神経膠腫球を分離してＴｒｙｐＬＥ（Ｇｉｂｃｏ）を含む単一細胞懸濁液としてから、ＭＥＢバッファー（１５０ｍＭマンニトール、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＫＯＨ、５０ｍＭ ＫＣｌ、０．０２ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０２ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ＢＳＡ、５ｍＭ コハク酸塩）中に再懸濁させた。５０μｌの細胞懸濁液（３×１０４細胞／ウェル）を、０．００２％ジギトニン及び指定ペプチドを含有する５０μＬのＭＥＢバッファーを入れた９６ウェルプレートのウェルに播種した。次に、プレートを２５℃で５０分間培養した。次に、細胞を４％パラホルムアルデヒドで１０分間固定してから、Ｎ２バッファー（１．７Ｍ トリス、１．２５Ｍ グリシン ｐＨ９．１）で５分間中和した。ＤＡＰＩ及び抗シトクロムｃ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を含有する２０μＬの染色溶液（ＰＢＳ中の１０％ＢＳＡ、２％Ｔｗｅｅｎ ２０）で、試料を一晩染色した。翌日、ＢＤ ＬＳＲＩＩフローサイトメーターを使用して、シトクロムｃ放出を定量した。測定値は、シトクロムｃ放出を促進しない適切な対照（ＤＭＳＯ及び不活性ＰＵＭＡ２Ａペプチド）に正規化した。デルタ活性化とは、溶媒処理細胞と薬剤処理細胞の間のシトクロムｃ放出の量における差異のことを意味する。
ＢＡＸオリゴマー化
７．５×１０５細胞を指定薬剤で処理した。処理の２４時間後、細胞を回収し、氷冷ＰＢＳで１回洗浄し、ＰＢＳ中の１ｍＭビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）中に３０分間再懸濁させた。次に、細胞をペレット化し、上記のとおりにイムノブロット用に溶解した。
シトクロムｃの検出
５百万の細胞を１×１０５細胞／ｍＬの濃度で播種してから、指定薬剤で処理した。処理の２４時間後、細胞を回収し、氷冷ＰＢＳで１回洗浄した。次に、ミトコンドリア単離キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、８９８７４）を使用して、細胞成分分画を実施した。細胞質画分とミトコンドリア画分の両方をイムノブロットに供してから、１：１０００希釈のシトクロムｃ抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、４２７２）を使用して、シトクロムｃを検出した。
マウス異種移植試験
頭蓋内実験用に、ＧＢＭ３９細胞、ＨＫ３３６細胞、ＨＫ３９３細胞、及びＧＳ０２５細胞を、雌ＮＳＧマウス（６～８週齢）の脳の右線条体に注射した（注射あたり４×１０５細胞）。注射座標は、ブレグマに対して２ｍｍ側方及び１ｍｍ後方、２ｍｍの深度であった。分泌ガウシアルシフェラーゼにより全身腫瘍組織量をモニターしてから３回連続の増殖測定を行った後、マウスを、適切な溶媒、７５ｍｇ／ｋｇのエルロチニブ、５０ｍｇ／ｋｇのイダサヌトリン、または両方の薬剤の組み合わせからなる４つの治療群に無作為化した。水中の０．５％メチルセルロースで構成される溶媒をエルロチニブを溶解するのに使用し、Ｒｏｃｈｅから入手した特許製剤をイダサヌトリンを溶解するのに使用した。分泌ガウシアルシフェラーゼにより全身腫瘍組織量を週に２回評価した。可能な場合、マウスを２５日間治療してから、治療から外し、生存をモニターした。薬剤は経口摂食で投与した。試料数は、パイロット実験からの概算及び先行文献１２の結果に基づいて選択した。研究者には群割当てまたは結果評価をブラインドとしなかった。全ての試験はＵＣＬＡ ＯＡＲＯプロトコルガイドラインに従った。
頭蓋内遅延ＰＥＴ／ＣＴマウスイメージング
マウスを指定した用量及び回数のエルロチニブで治療してから、予め温め、２％イソフルランで麻酔をかけ、７０μＣｉの１８Ｆ－ＦＤＧを静脈内注射した。１時間の無意識摂取後、マウスを麻酔から外したが、更なる５時間の摂取用に温かい状態に維持した。１８Ｆ－ＦＤＧの最初の投与の６時間後、Ｇ８ ＰＥＴ／ＣＴスキャナー（Ｓｏｆｉｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、マウスのイメージングを行った。上記ごとに、ＡＭＩＤＥソフトウェアを使用して３Ｄ関心領域（ＲＯＩ）を抽出することにより、定量を実施した。
免疫組織化学
ＦＦＰＥ（ホルマリン固定パラフィン包埋）ブロックから切り出した４μｍ切片に対する免疫組織化学を実施した。次に、切片をキシレンで脱パラフィン処理してから、グレード付エタノールで再水和した。抗原賦活化は、賦活圧加熱装置内で、ｐＨ９．５のＮｕｃｌｅａｒ Ｄｅｃｌｏａｋｅｒ（Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）を９５℃で４０分間用いて達成した。次に、組織切片を３％過酸化水素（ロット１６１５０９；Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）及びＢａｃｋｇｒｏｕｎｄ Ｓｎｉｐｅｒ（Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｃｏｎｃｏｒｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）で処理して、非特異的なバックグラウンド染色を低減させた。ｐ５３（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、２５２７）用の一次抗体を１：１５０希釈で８０分間利用してから、ＭＡＣＨ ３ Ｒａｂｂｉｔ ＨＲＰ－Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎキット（Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）を用いて検出を行った。ＶＥＣＴＯＲ ＮｏｖａＲＥＤ（ＳＫ－４８００；Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を色原体として使用し、可視化を達成した。最後に、切片をＴａｃｈａ’ｓ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ（Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）で対比染色した。
定量ＲＴ－ＰＣＲ
Ｐｕｒｅｌｉｎｋ ＲＮＡキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、全ての細胞からＲＮＡを抽出した。製造業者の取扱説明書に従いｉＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を用いて、ｃＤＮＡを合成した。ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｋａｐａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、Ｒｏｃｈｅ ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０上で定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を実施した。相対発現値を対照遺伝子（ＧＡＰＤＨ）に正規化する。プライマー配列は、Ｐ２１（フォワードＧＡＣＴＴＴＧＴＣＡＣＣＧＡＧＡＣＡＣＣ、リバースＧＡＣＡＧＧＴＣＣＡＣＡＴＧＧＴＣＴＴＣ）、ＰＵＭＡ（フォワードＡＣＧＡＣＣＴＣＡＡＣＧＣＡＣＡＧＴＡＣＧ、リバースＧＴＡＡＧＧＧＣＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＴＧＡＴＧ）、ＧＡＰＤＨ（フォワードＴＧＣＣＡＴＧＴＡＧＡＣＣＣＣＴＴＧＡＡＧ、リバースＡＴＧＧＴＡＣＡＴＧＡＣＡＡＧＧＴＧＣＧＧ）、ＭＤＭ２（フォワードＣＴＧＴＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＧＡＴＴＧＧ、リバースＡＧＧＧＴＣＴＣＴＴＧＴＴＣＣＧＡＡＧＣ）、ＴＩＧＡＲ（フォワードＧＧＡＡＧＡＧＴＧＣＣＣＴＧＴＧＴＴＴＡＣ、リバースＧＡＣＴＣＡＡＧＡＣＴＴＣＧＧＧＡＡＡＧＧ）、ＰＩＧ３（フォワードＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＡＴＴＣＡＡＴＴＡ、リバースＴＣＣＣＡＧＴＡＧＧＡＴＣＣＧＣＣＴＡＴ）に列挙するとおりである（５’→３’）。
Ｐ５３レポーター活性
先ず、細胞を、ｐ５３応答性エレメント：ＴＡＣＡＧＡＡＣＡＴＧＴＣＴＡＡＧＣＡＴＧＣＴＧＴＧＣＣＴＴＧＣＣＴＧＧＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＣＣＴＴＧＣＣＴＴＧＧＧの制御下でルシフェラーゼをコードするｐ５３レポータープラスミドから合成したレンチウイルスに感染させた。次に、感染細胞を５，０００細胞／５０μＬで９６ウェルプレートに播種し、指定薬剤で２４時間処理し、その後、１ｍＭ Ｄ－ルシフェリンで２時間培養した。ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ ＩＩ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、生物発光を測定した。
遺伝子操作
一般的に、遺伝子操作に使用するレンチウイルスは、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して２９３－ＦＴ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ）にトランスフェクトすることにより作製した。トランスフェクションの４８時間後にウイルスを回収した。レンチウイルスｓｇｐ５３ベクター及びレンチウイルスｓｇ対照ベクターはそれぞれ、以下のガイドＲＮＡ、ＣＣＧＧＴＴＣＡＴＧＣＣＧＣＣＣＡＴＧＣ及びＧＴＡＡＴＣＣＴＡＧＣＡＣＴＴＴＴＡＧＧを含有していた。ＬｅｎｔｉＣＲＩＳＰＲ－ｖ２を骨格として使用した。Ｇｌｕｔ１ ｃＤＮＡ及びＧｌｕｔ３ ｃＤＮＡを市販のベクターからクローニングして、ＣＭＶプロモーターを含有するｐＬｅｎｔｉ－ＧＬｕｃ－ＩＲＥＳ－ＥＧＦＰレンチウイルス骨格に導入した（Ｇｌｕｔ１はＷｏｌｆ Ｆｒｏｍｍｅｒからの寄贈品（Ａｄｄｇｅｎｅ ＃１８０８５４４）であり、Ｇｌｕｔ３はＯｒｉＧｅｎｅから入手したもの（＃ＳＣ１１５７９１）であり、レンチウイルス骨格はＴａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓから入手したもの（＃ＧＬ－ＧＦＰ）であった）。ｐＭＩＧ Ｂｃｌ－ｘＬはＳｔａｎｌｅｙ Ｋｏｒｓｍｅｙｅｒからの寄贈品（Ａｄｄｇｅｎｅ ＃８７９０４５）であり、上記のレンチウイルス骨格（Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ）にクローニングした。細胞質ｐ５３構築物（Ｋ３０５Ａ及びＲ３０６Ａ）及び野生型ｐ５３構築物はＲ．Ａｇａｍｉ及びＧ．Ｌａｈａｖからの親切な寄贈品であった。ＰＧＫプロモーターを含有するレンチウイルスベクターに目的の遺伝子をクローニングした。野生型ｐ５３構築物に対する部位特異的変異誘発（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ ＃Ｅ０５５４Ｓ）を使用して、ｐ５３ＤＮＡ結合ドメイン変異（Ｒ１７５Ｈ）及び（Ｒ２７３Ｈ）ならびに核変異（Ｌ３４８Ａ及びＬ３５０Ａ）用の構築物を作製した。
ＥＧＦＲノックダウン実験用に、ＤｈａｒｍａＦＥＣＴ ４（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）を使用して、ＥＧＦＲに対するｓｉＲＮＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ｓ５６３）を細胞にトランスフェクションした。４８時間後、細胞を回収して指定実験に使用した。
免疫蛍光
免疫蛍光用に、先ず、神経膠腫球を分離して単一細胞としてから、製造業者の取扱説明書に従いＣｅｌｌ－Ｔａｋ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を使用して、９６ウェルプレートに付着させた。次に、付着細胞を氷冷メタノールで１０分間固定し、その後、ＰＢＳで３回洗浄した。次に、ＰＢＳ中の１０％ＦＢＳ及び３％ＢＳＡを含有するブロッキング溶液で細胞を１時間培養し、その後、ｐ５３（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、ＳＣ－１２６、１：５０希釈）抗体と共に４℃で一晩培養した。翌日、細胞を二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、１：２０００希釈）と共に１時間培養し、ＤＡＰＩ染色を１０分間行い、その後、Ｃａｓｃａｄｅ ＩＩ蛍光カメラ（Ｒｏｐｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を装着したＮｉｋｏｎ ＴＩ Ｅｃｌｉｐｓｅ顕微鏡を使用してイメージングを行った。４６１ｎＭ及び６４７ｎＭの放出で細胞のイメージングを行ってから、ＮＩＳ－Ｅｌｅｍｅｎｔｓ ＡＲ解析ソフトウェアを使用して処理を行った。
酸素消費速度（ＯＣＲ）測定及び細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）測定
ＯＣＲ及びＥＣＡＲを含む代謝測定用に、先ず、指定薬剤で処理した神経膠腫球を分離して単一細胞懸濁液としてから、製造業者の取扱説明書に従いＣｅｌｌ－Ｔａｋ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を使用して、ＸＦ２４プレート（Ｓｅａｈｏｒｓｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に付着させた。アッセイの前に、細胞に非緩衝ＤＭＥＭを補足し、３７℃で３０分間培養してから、ＯＣＲ測定及びＥＣＡＲ測定を開始した。対照とエルロチニブ処理細胞の間の基礎ＥＣＡＲ測定値を示す。
質量分析用試料の調製
雄ＣＤ－１マウス（６～８週齢）を、経口摂食による２連の５０ｍｇ／ｋｇイダサヌトリンで治療した。投与の０．５、１、２、４、６、８、１２、及び２４時間後に、マウスを屠殺し、眼窩後方採血で血液を採取し、脳組織を採取した。マウスの全血を遠心分離にかけて血漿を単離した。液液抽出（５０μＬの血漿を、２μＬの内部標準物質及び１００μＬのアセトニトリルに加えた）により血漿からイダサヌトリンを単離した。マウス脳組織を２ｍＬの冷却ＰＢＳで洗浄してから、新しい２ｍＬの冷却ＰＢＳを用いて、組織ホモジナイザーを使用してホモジナイズした。次に、液液抽出（１００μＬの脳ホモジネートを、２μＬの内部標準物質及び２００μＬのアセトニトリルに加えた）による類似の方法で、イダサヌトリンを単離して戻した。ボルテックス混合の後、試料を遠心分離にかけた。上清を除去してから、ロータリーエバポレーターで蒸発させ、１００μＬの５０：５０の水：アセトニトリル中に戻した。
質量分析によるイダサヌトリンの検出
１２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して、１００×２．１ｍｍ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８カラム（Ｋｉｎｅｔｅｘ）上でクロマトグラフ分離を実施した。移動相は、溶媒Ａ：ミリＱ水中の０．１％ギ酸及び溶媒Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ギ酸で構成されていた。５％Ｂ（０～４分間）、５～９９％Ｂ（４～３２分間）、９９％Ｂ（３２～３６分間）のグラジエントで検体を溶出してから、５％Ｂに１２分間戻して注入間の再平衡化を行った。０．１０ｍＬ／分の溶媒流速で、２０μＬを注入するクロマトグラフシステムを使用した。６４６０トリプル四重極ＬＣ／ＭＳシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ）上で質量分析を実施した。ポジティブモードのエレクトロスプレーを使用することによりイオン化を達成し、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）モードでデータ収集を行った。イダサヌトリン検出に使用したＭＲＭトランジションはｍ／ｚ ６１６．２→４２１．２であり、フラグメンター電圧は１１４Ｖであり、衝突エネルギーは２０ｅＶであった。検体シグナルを内部標準物質に正規化し、較正曲線（０．５、５、５０、２５０、５００、２０００ｎＭ）との比較により濃度を測定した。脳内イダサヌトリン濃度は、脳血管系中の残留血液に対するマウス脳重量の１．４％に調節した。
分泌ガウシアルシフェラーゼの測定
細胞を、分泌ガウシアルシフェラーゼ（ｓＧｌｕｃ）レポーター遺伝子を含有するレンチウイルスベクター（Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＃ＧＬ－ＧＦＰ）に感染させてから、マウスの右線条体に頭蓋内移植した（４×１０５細胞／マウス）。分泌ガウシアルシフェラーゼ（ｓＧｌｕｃ）のレベルを測定するために、マウスの尾静脈から６μＬの血液を採取し、凝固を防止するためすぐに５０ｍＭのＥＤＴＡと混合した。１００μＬの１００μＭセレンテラジン（Ｎａｎｏｌｉｇｈｔ）を９６ウェルプレートに注入した後に化学発光を測定することにより、Ｇｌｕｃ活性を得た。
相乗効果スコアの計算
１．０×１０５ＧＢＭ細胞を３連で播種し、それぞれの薬剤を６つの濃度（０～１０μＭ）で細胞に加えるマトリックスを使用して、複数の濃度のエルロチニブ、ヌトリン、または組み合わせで処理した。処理の７２時間後にアネキシンＶ染色を測定した。Ｃｈａｌｉｃｅソフトウェアを使用して、組み合わせの効果をその単一薬剤と比較した。相乗効果スコアを使用して、組み合わせ効果を計算した。
ＤＮＡシークエンシング
Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｍｉｓｅｑを使用して、以下の遺伝子ＢＣＬ１１Ａ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＲＡＦ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＨＥＫ２、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、ＩＤＨ１、ＩＤＨ２、ＭＳＨ６、ＮＦ１、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＴＥＮ、ＲＢ１、ＴＰ５３について、試料ＨＫ２０６、ＨＫ２１７、ＨＫ２５０、ＨＫ２９６の標的シークエンシングを実施した。試料あたり１～２百万のリードが存在しており、遺伝子あたりの平均カバレッジは２３０であった。全ゲノムＳＮＰアレイを使用して、これらの試料のコピー数変異を確認した。ＧＢＭ３９の遺伝子プロファイルについては、文献においてこれまでに報告されている。
試料ＨＫ１５７、ＨＫ２２９、ＨＫ２４８、ＨＫ２５０、ＨＫ２５４、ＨＫ２９６、ＨＫ３０１、ＨＫ３３６、ＨＫ３５０、ＨＫ３９０、ＨＫ３９３について全エキソームシークエンシングを実施したが、ＳｅｑＷｒｉｇｈｔにおいて実施した。別々の捕捉反応を有する２つのプールに試料をグループ分けした。Ｎｅｘｔｅｒａ Ｒａｐｉｄ ｃａｐｔｕｒｅ及びライブラリ調製を使用し、ＨｉＳｅｑ ２５００（１００×オンターゲットカバレッジを有する２×１００ｂｐ、２回の完全な迅速なラン、それぞれが１つの正常二倍体対照を有する）上でシークエンシングを実施した。ＥＸＣＡＶＡＴＯＲソフトウェアを使用して、これらの試料のコピー数解析を実施した。
ＴＣＧＡ試料のアノテーション
ＥＧＦＲ経路、ｐ５３経路、及びｐ５３調節経路における遺伝子変異について、ＴＣＧＡの２７３のＧＢＭ試料を解析した。変異の同時発生を調査し、有意な相互作用のみを表示させた。これまでに記載されているとおりにｃＢｉｏＰｏｒｔａｌを使用して、データを解析した。
蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）
市販の蛍光標識デュアルカラーＥＧＦＲ（赤色）／ＣＥＰ ７（緑色）プローブ（Ａｂｂｏｔｔ－Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）を使用して、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を実施した。製造業者の推奨プロトコルに従い、細胞株に対するＦＩＳＨハイブリダイゼーション及び解析を実施した。細胞をＤＡＰＩで対比染色し、デュアルカラーフィルター及びトリプルカラーフィルターを備えたＺｅｉｓｓ（Ａｘｉｏｐｈｏｔ）蛍光顕微鏡下で、蛍光プローブシグナルのイメージングを行った。
統計解析。
両側の対応のないスチューデントｔ検定を使用して比較を実施し、ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。複数の独立した実験に由来する全てのデータは正規分散していると考えられた。データは平均±ｓ．ｅ．ｍ．値を表している。Ｐｒｉｓｍ ６．０（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用して、全ての統計解析を計算した。全てのｉｎ ｖｉｔｒｏ実験及びｉｎ ｖｉｖｏ実験では、試料数を予め決定するのに統計学的手法を使用することはなく、試料を除外することはなかった。ｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍測定では、群間の比較を行うために最後のデータセットを使用した。上に記載したとおり、全てのマウスは試験前に無作為化した。
実施例１５：ＪＧＫシリーズの特定化合物のための例示的な設計合理性
スキーム１に従い本開示の特定化合物を設計した。
Figure 0007474269000100
実施例１６：ＪＧＫシリーズの更なる例示化合物の調製
以下の方法に従い本開示の例示化合物を調製した。
Figure 0007474269000101
 スキーム１．モノ保護キナゾリン中間体３の合成。
Figure 0007474269000102
 スキーム２．ＪＧＫ０６３～ＪＧＫ０７０の合成。
Figure 0007474269000103
 スキーム３．ＪＧＫ０６８Ｓ（（Ｓ）－ＪＧＫ０６８）の合成。ＪＧＫ０６８のラセミ試料（（±）－ＪＧＫ０６８）の場合と同一の方法ではあるがエナンチオマー的に純粋な（Ｓ）－（－）－グリシドールを用いて、合成を実施した。（Ｒ）－（＋）－グリシドール（図示せず）を使用して、もう一方のエナンチオマーＪＧＫ０６８Ｒ（（Ｒ）－ＪＧＫ０６８）を調製した。
Figure 0007474269000104
 スキーム４．キラルＳＦＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ－３カラム、４０％ ＭｅＯＨ）を用いることにより、また５のＭｏｓｈｅｒエステル誘導体（図３９）の１９Ｆ ＮＭＲスペクトルを比較することにより、合成中間体５のエナンチオマー純度を測定した。
Figure 0007474269000105
 スキーム５．ＪＧＫ０７１の合成。
Figure 0007474269000106
 スキーム６．ＪＧＫ０７２の合成。
Figure 0007474269000107
 スキーム７．ＪＧＫ０７６～ＪＧＫ０８０の合成。
Figure 0007474269000108
 スキーム８．ＪＧＫ０８６～ＪＧＫ０９０の合成。
一般的な化学情報
全ての化学物質、試薬、及び溶媒については、入手可能な場合は市販の供給元から購入し、受け入れたままの状態で使用した。必要に応じ、標準的な方法で試薬及び溶媒を精製して乾燥させた。空気の影響を受けやすい反応及び湿度の影響を受けやすい反応は、オーブンで乾燥させたガラス器具内、アルゴンの不活性雰囲気下で実施した。マイクロ波照射反応は、シングルモード反応器ＣＥＭ Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロ波合成装置内で実施した。室温（ＲＴ）反応は周囲温度（約２３℃）で実施した。全ての反応は、ＵＶ光（λ＝２５４、３６５ｎｍ）またはアルカリＫＭｎＯ４溶液を使用することでスポットを可視化したプレコートＭｅｒｃｋ ６０ Ｆ２５４シリカゲルプレートを用いた薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でモニターした。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣ）は、ＳｉＯ２ ６０（粒径０．０４０～０．０６３ｍｍ、２３０～４００メッシュ）を用いて実施した。分取薄層クロマトグラフィー（ＰＴＬＣ）は、Ｍｅｒｃｋ ６０ Ｆ２５４シリカゲルプレート（２０×２０ｃｍ、２１０～２７０ｍｍ）またはＡｎａｌｔｅｃｈシリカゲルＧＦ ＴＬＣプレート（２０×２０ｃｍ、１０００ｍｍ）を用いて実施した。減圧下（真空下）における濃縮は、２３～５０℃の回転蒸発によって実施した。精製化合物は、高真空下またはデシケータ内で更に乾燥させた。収率は精製化合物に対応しており、更なる最適化は行わなかった。プロトン核磁気共鳴（１Ｈ ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒスペクトロメーター（３００、４００、または５００ＭＨｚで操作した）を用いて記録した。炭素ＮＭＲ（１３Ｃ ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒスペクトロメーター（４００または５００ＭＨｚのいずれか）を用いて記録した。ＮＭＲ化学シフト（δｐｐｍ）については、残存溶媒のシグナルを基準とした。１Ｈ ＮＭＲデータは、以下：化学シフト（ｐｐｍ）；多重度（ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｑｕｉｎｔ＝クインテット、ｍ＝マルチプレット／複合パターン、ｔｄ＝トリプルダブレット、ｄｄｄ＝ダブルダブルダブレット、ｂｒ＝ブロードシグナル）；結合定数（Ｊ）（Ｈｚ）、積分のとおりに記録する。１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのデータは、化学シフト、及び該当する場合、結合定数を基準として記録する。ＩｏｎＳｅｎｓｅ ＩＤ－ＣＵＢＥ ＤＡＲＴ ｓｏｕｒｃｅ質量分析計を備えたＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ、またはオートサンプラーを備えたＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣを備えたＷａｔｅｒｓ ＬＣＴ Ｐｒｅｍｉｅｒ質量分析計を用いて、高解像度質量（ＨＲＭＳ）スペクトルを記録した。
一般的な手順（ＧＰ）．ＧＰ－１：二級アミンを用いたキナゾリニルメシレートの求核置換。ＤＭＦ（０．０５Ｍ）中のキナゾリニルメシレートの混合液（１当量）を二級アミン（５当量）及びトリエチルアミン（２当量）で処理してから、混合液を８５℃で２４時間攪拌した。混合液を２３℃まで冷ましてから、蒸発させた。残分をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）中に溶解させてから、１０ｍＭのＮａＯＨ（４×５ｍＬ）、食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣまたはＰＴＬＣを用いた精製により、典型的にはオフホワイトの脆い発泡体として所望の生成物を得た。
ＧＰ－２：アニリンを用いた４－クロロキナゾリンの求核芳香族置換。アセトニトリル（０．１Ｍ）中の４－クロロキナゾリンの混合液（１当量）を、アニリン（２当量）、及びジオキサン中のＨＣｌの４Ｍ溶液（１当量）で処理した。混合液をマイクロ波照射下、８０℃で３０分間加熱した。混合液に対して、減圧下における濃縮または沈殿のいずれかを行ってから、濾過により４－アニリノキナゾリン塩酸塩を単離した（Ｅｔ２Ｏで洗浄した）。残分を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液中に懸濁させてから、ＣＨ２Ｃｌ２（３×）で抽出した。混合有機抽出液を水、食塩水で洗浄してから、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。ＦＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃまたはヘキサン／ＥｔＯＡｃのグラジエントによる溶出）を用いた精製により、典型的には白色からオフホワイト、または淡黄色の固体として所望の生成物を得た。
４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）キナゾリン－６，７－ジイル ビス（２，２－ジメチルプロピオン酸）（１）。
Figure 0007474269000109
 ｉＰｒＯＨ（４５０ｍＬ）中の４－クロロキナゾリン－６，７－ジイル ビス（２，２－ジメチルプロピオン酸）１（４１．０８ｇ、１１３ｍｍｏｌ）の混合液を３－ブロモ－２－フルオロアニリン（１７．０５ｍＬ、１５２ｍｍｏｌ）で処理してから、８０℃で３．５時間攪拌した。混合液を２３℃まで冷ましてから、蒸発させた。残分をヘキサン（５０ｍＬ）中に数回再懸濁させてから、濃縮し、その後、ＨＶ下で乾燥させた。残分をＥｔＯＨから再結晶させ、黄色固体を得て、その黄色固体を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１Ｌ）中に懸濁させ、ＤＣＭ（３×５５０ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（４００ｍＬ）、食塩水（４００ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、黄色の脆い発泡体として表題化合物１（３５．０５７ｇ、６０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．７６ （ｓ， １Ｈ）， ８．４６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７２ （ｓ， １Ｈ）， ７．６８ （ｓ， １Ｈ）， ７．５６ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３２ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．４， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， １．４０ （ｓ， ９Ｈ）， １．３９ ｐｐｍ （ｓ， ９Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １７６．１３， １７５．５５， １５６．７１， １５４．９６， １５０．６９ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４３．７ Ｈｚ）， １４８．７５， １４７．８３， １４２．４５， １２８．２７， １２７．８６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．８ Ｈｚ）， １２５．２９ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２２．７０， １２２．５１， １１４．４３， １１３．２１， １０８．８４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．４ Ｈｚ）， ３９．５４， ３９．５１， ２７．４０， ２７．３２ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２４Ｈ２６ＢｒＦＮ３Ｏ４ ＋に対する計算値， ５１８．１０８５；実測値， ５１８．１０７２．
４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）キナゾリン－６，７－ジオール（２）。
Figure 0007474269000110
 １（３４．９８８ｇ、６７．５ｍｍｏｌ）の攪拌スラリーをＭｅＯＨ（２４１ｍＬ、１．６９ｍｏｌ）中のＮＨ３の７Ｍ溶液で０℃で処理した。混合液を０℃で１５分間、その後、２３℃で４．５時間攪拌した。混合液を蒸発させてから、残分を水（４００ｍＬ）中に懸濁させ、一晩攪拌し、濾過した。残分を水（５００ｍＬ）、アセトニトリル（１００ｍＬ）、ＤＣＭ（４×１５０ｍＬ）、Ｅｔ２Ｏ（２×１５０ｍＬ）で洗浄してから、デシケータ内で乾燥させ、淡黄色粉体として表題化合物２（２３．６８ｇ、量）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ ８．１８ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ － ７．４７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５１ （ｓ， １Ｈ）， ７．１６ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８７ ｐｐｍ （ｓ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５６．４３， １５６．１２， １５３．０６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４６．７ Ｈｚ）， １５１．３４， １４８．３９， １４６．８０， １２９．２３， １２９．０１， １２７．１２， １２５．２３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．３ Ｈｚ）， １０８．４７， １０８．３２， １０７．０９， １０３．０４ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１４Ｈ１０ＢｒＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３４９．９９３５；実測値， ３４９．９９２３．
４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７－ヒドロキシキナゾリン－６－イル ２，２－ジメチルプロパノエート（３）。
Figure 0007474269000111
 ＤＭＦ（５２．６ｍＬ）中の２（３５００ｍｇ、１０．０ ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液をＥｔ３Ｎ（５．５７ｍＬ、４０．０ｍｍｏｌ）で処理してから、－４０℃まで冷却し、Ｐｉｖ２Ｏ（３．１４ｍＬ、１５．５ｍｍｏｌ）を滴加することで処理した。混合液を－４０℃で１時間攪拌し、その後、冷却浴から取り出して、攪拌を２．５時間続けた。反応混合液をＤＣＭ（５００ｍＬ）で希釈してから、１０％クエン酸（２×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ １：１→０：１）により、固体を得て、その固体をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）中に再溶解させ、ＮＨ４Ｃｌ半飽和水溶液（４×７５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、ベージュ色から黄色の固体として表題化合物３（２．８４４ｇ、６６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １１．００ （ｂｒ， １Ｈ）， ９．７０ （ｓ， １Ｈ）， ８．３９ （ｓ， １Ｈ）， ８．１４ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， ７．１， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１７ （ｓ， １Ｈ）， １．３６ ｐｐｍ （ｓ， ９Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １７５．９３， １５７．６８， １５４．６１， １５４．５３， １５３．３４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．３ Ｈｚ）， １４９．８０， １３９．６５， １３０．１４， １２７．９２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １２．９ Ｈｚ）， １２７．６２， １２５．４７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．４ Ｈｚ）， １１６．３６， １１１．００， １０８．５５ （ｄ， Ｊ ＝ ２０．０ Ｈｚ）， １０７．７７， ３８．６４， ２６．９３ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１９Ｈ１８ＢｒＦＮ３Ｏ３ ＋に対する計算値， ４３４．０５１０；実測値， ４３４．０４８９．
（±）－４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７－［（オキシラン－２－イル）メトキシ］キナゾリン－６－イル ２，２－ジメチルプロパノエート（（±）－４）。
Figure 0007474269000112
 ＴＨＦ（２１ｍＬ）中の３（１３５０ｍｇ、３．１１ｍｍｏｌ）及びＰＰｈ３（２０３８ｍｇ、７．７７ｍｍｏｌ）の混合液をグリシドール（４９５μＬ、７．４６ｍｍｏｌ）で処理してから、０℃まで冷却し、ＤＩＡＤ（１．４７ｍＬ、７．４６ｍｍｏｌ）で１０分間処理した。混合液を２３℃で２．５時間攪拌してから、濃縮した。ＦＣ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ ９：１→４：６）により、オフホワイト固体として表題化合物（±）－４（８４８ｍｇ、５６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．７３ （ｓ， １Ｈ）， ８．５４ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．６， ７．３， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｓ， １Ｈ）， ７．４５ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３０ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．２， ６．４， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２８ （ｓ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．８， ３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．８， ６．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．３５ （ｄｄｔ， Ｊ ＝ ６．２， ４．１， ２．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．９２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．８， ４．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．８， ２．６ Ｈｚ， １Ｈ）， １．４５ ｐｐｍ （ｓ， ９Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １７６．８７， １５６．４６， １５５．１０， １５４．９３， １５０．４１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４３．３ Ｈｚ）， １５０．２７， １４０．９９， １２８．２５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．５ Ｈｚ）， １２７．７５， １２５．２８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２２．２２， １１４．０２， １０９．７２， １０９．４９， １０８．７４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．１ Ｈｚ）， ７０．０５， ４９．５５， ４４．５６， ３９．４５， ２７．３８ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２２Ｈ２２ＢｒＦＮ３Ｏ４ ＋に対する計算値， ４９０．０７７２；実測値， ４９０．０７６４．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－エテニル－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン
（（±）－ＪＧＫ０６２）。
Figure 0007474269000113
 ＴＨＦ（２３ｍＬ）中のＰＰｈ３（８３２ｍｇ、３．１７ｍｍｏｌ）及びＤＩＡＤ（６２４μＬ、３．１７ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で１５分間攪拌してから、ＴＨＦ（２７ｍＬ）中の（±）－８（１１４９ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で１０分間滴加した。混合液を０℃で２時間攪拌してから、蒸発させた。ＦＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ９：１ →４：６）に続く別のＦＣ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ １：０→６：４）により、オフホワイトの脆い発泡体として表題化合物（±）－ＪＧＫ０６２（１１１５ｍｇ、量）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．２， ７．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４０ （ｓ， １Ｈ）， ７．３７ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３５ （ｓ， １Ｈ）， ７．２７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．４， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１０ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．９５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １７．３， １０．７， ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．６０ （ｄｔ， Ｊ ＝ １７．３， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４８ （ｄｔ， Ｊ ＝ １０．７， １．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８２ － ４．７４ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０９ ｐｐｍ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．９０， １５３．３８， １５０．１４ （ｄ， Ｊ ＝ ２４２．４ Ｈｚ）， １４９．１２， １４６．７０， １４４．１２， １３１．４８， １２８．６４ （ｄ， Ｊ ＝ １０．３ Ｈｚ）， １２７．２４， １２５．３０ （ｄ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．７６， １２０．４３， １１４．２９， １１０．６９， １０８．５８ （ｄ， Ｊ ＝ １９．３ Ｈｚ）， １０６．０６， ７４．０３， ６７．８４ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１８Ｈ１４ＢｒＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ４０２．０２４８；実測値， ４０２．０２３３．
（±）－［４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－７－イル］メタノール（（±）－５）。
Figure 0007474269000114
 ＭｅＯＨ（３１ｍＬ）中の（±）－４（８４２ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）の混合液をＫ２ＣＯ３（４８２ｍｇ、３．４９ｍｍｏｌ）で処理してから、２３℃で１０．５時間攪拌し、濃縮した。残分をＮＨ４Ｃｌ半飽和水溶液（１３０ｍＬ）中に懸濁させてから、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（２０ｍＬ）、食塩水（２０ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮し、黄色固体として表題化合物（±）－５（７２０ｍｇ、量）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ ９．５９ （ｓ， １Ｈ）， ８．３４ （ｓ， １Ｈ）， ７．９５ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ７．０， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２４ － ７．１８ （ｍ， １Ｈ）， ７．２１ （ｓ， １Ｈ）， ５．１６ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３４ （ｄｔｄ， Ｊ ＝ ７．６， ５．２， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７６ － ３．６４ ｐｐｍ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５７．２０， １５３．３５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．５ Ｈｚ）， １５３．１０， １４８．８８， １４５．９５， １４３．３９， １３０．１１， １２８．０５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．０ Ｈｚ）， １２７．７３， １２５．４４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．４ Ｈｚ）， １１２．３３， １０９．７９， １０８．５６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２０．０ Ｈｚ）， １０８．３７， ７３．７８， ６５．５０， ５９．７８ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１７Ｈ１４ＢｒＦＮ３Ｏ３ ＋に対する計算値， ４０６．０１９７；実測値， ４０６．０１８５．
（±）－［４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－７－イル］メチルメタンスルホネート（（±）－６）。
Figure 0007474269000115
 ＴＨＦ（１４ｍＬ）中の（±）－５（６８８ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）の溶液をＥｔ３Ｎ（３５７μＬ、２．５６ｍｍｏｌ）で処理してから、０℃まで冷却し、ＭｓＣｌ（１７４μＬ、２．２４ｍｍｏｌ）を滴加することで処理した。混合液を２３℃で１６時間攪拌してから、０℃まで冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１２０ｍＬ）で処理し、ＤＣＭ（３×１２０ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（１００ｍＬ）、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ ８：２→３：７）により、オフホワイト固体として表題化合物（±）－６（４９６ｍｇ、６１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６９ （ｓ， １Ｈ）， ８．６０ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．５， ７．２， １．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４３ （ｓ， １Ｈ）， ７．３９ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３７ （ｓ， １Ｈ）， ７．２９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ６．５， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６３ （ｄｔｄ， Ｊ ＝ ７．２， ４．９， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．９， ０．９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．４９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．８， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．８， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．１３ ｐｐｍ （ｓ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５６．０２， １５３．６６， １５０．２８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．９ Ｈｚ）， １４８．６５， １４６．８０， １４３．０９， １２８．４３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．４ Ｈｚ）， １２７．５４， １２５．３２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２２．０１， １１４．７７， １１０．９０， １０８．６６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．４ Ｈｚ）， １０６．４４， ７１．１０， ６６．４６， ６４．７７， ３８．０２ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１８Ｈ１５ＢｒＦＮ３Ｏ５Ｓ＋に対する計算値， ４８３．９９７３；実測値， ４８３．９９５０．
（±）－４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７－｛［２－（アセトキシ）ブタ－３－エン－１－イル］オキシ｝キナゾリン－６－イル ２，２－ジメチルプロパノエート（（±）－７）。
Figure 0007474269000116
 ＴＨＦ（４１ｍＬ）中の３（２６３９ｍｇ、６．０８ｍｍｏｌ）及びＰＰｈ３（３９８６ｍｇ、１５．２ｍｍｏｌ）の混合液をラセミ１－ヒドロキシブタ－３－エン－２－イル アセテート２（１．７ｍＬ、１３．７ｍｍｏｌ）で処理してから、０℃まで冷却し、ＤＩＡＤ（２．７ｍＬ、１３．７ｍｍｏｌ）を滴加することで処理した。混合液を２３℃で３時間攪拌してから、濃縮した。ＦＣ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ １：０→６：４）により、粗（±）－７（５．５０８ｇ、概算収率６０％）を得たが、その粗（±）－７は残存Ｐｈ３ＰＯで汚染されていた。その物質を更に精製することなく次の工程に使用した。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．７４ （ｓ， １Ｈ）， ８．５３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｓ， １Ｈ）， ７．４５ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．３０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．９０ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １７．０， １０．６， ６．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．６５ （ｑ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４９ － ５．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３１ － ４．０８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１１ （ｓ， ３Ｈ）， １．４１ ｐｐｍ （ｓ， ９Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １７６．５１， １７０．０８， １５６．４９， １５５．２４， １５４．８８， １５０．４６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４３．２ Ｈｚ）， １５０．１７， １４０．９０， １３２．１６， １２８．１８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １１．０ Ｈｚ）， １２７．８６， １２５．３１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．８ Ｈｚ）， １２２．２７， １１９．６４， １１４．００， １０９．５６， １０９．３９， １０８．７６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．４ Ｈｚ）， ７２．１８， ６９．８１， ３９．３４， ２７．３３， ２１．１９ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２５Ｈ２６ＢｒＦＮ３Ｏ５ ＋に対する計算値， ５４６．１０３４；実測値， ５４６．１０１８．
（±）－４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７－［（２－ヒドロキシブタ－３－エン－１－イル）オキシ］キナゾリン－６－オール（（±）－８）。
Figure 0007474269000117
 ＭｅＯＨ（６１ｍＬ）中の粗（±）－７（５５０８ｍｇ、直前の工程により残存Ｐｈ３ＰＯで汚染されている）の混合液をＫ２ＣＯ３（４１９８ｍｇ、３０．４ｍｍｏｌ）で処理してから、２３℃で１時間攪拌し、濃縮した。残分をＮＨ４Ｃｌ半飽和水溶液（１Ｌ）中に懸濁させてから、ＥｔＯＡｃ（３×６００ｍＬ）で抽出した。混合有機液を乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）から、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ １：１→０：１）により、オフホワイト固体として表題化合物（±）－８（２工程にわたる１１５４ｍｇ、４５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ ９．４６ （ｓ， １Ｈ）， ９．４０ （ｂｒ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．７１ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ － ７．５２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２０３ （ｓ）， ７．１９７ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．０１ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １７．４， １０．７， ４．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４２ （ｄｔ， Ｊ ＝ １７．３， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３６ （ｂｒ， １Ｈ）， ５．２０ （ｄｔ， Ｊ ＝ １０．６， １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４９ （ｂｒ， １Ｈ）， ４．２０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．８， ３．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９５ ｐｐｍ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．８， ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５６．７７， １５３．３０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４４．９ Ｈｚ）， １５２．７７， １５２．３１， １４６．６６， １４６．１１， １３７．６１， １２９．７５， １２８．４６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．０ Ｈｚ）， １２７．４９， １２５．３８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．３ Ｈｚ）， １１５．５８， １０９．４２， １０８．５０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．８ Ｈｚ）， １０７．６８， １０５．１４， ７２．５６， ６９．２６ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１８Ｈ１６ＢｒＦＮ３Ｏ３ ＋に対する計算値， ４２０．０３５４；実測値， ４２０．０３４０．
（±）－２－［４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－７－イル］エタン－１－オール（（±）－９）。
Figure 0007474269000118
 ＴＨＦ（４．８ｍＬ）中の（±）－ＪＧＫ０６２（４８０ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）の混合液を、ＴＨＦ（４．８ｍＬ、２．３９ｍｍｏｌ）中の９－ＢＢＮの０．５Ｍ溶液で処理してから、混合液を６８℃で１６時間攪拌した。混合液を０℃まで冷却してから、ＴＨＦ（２．４ｍＬ）で希釈し、３Ｎ ＮａＯＨ（３ｍＬ、８．９５ｍｍｏｌ）及び３０％Ｈ２Ｏ２（４７４μＬ、８．９５ｍｍｏｌ）で処理し、２３℃で６時間攪拌した。混合液を当初のＴＨＦ容量の約半分に濃縮してから、水（１００ｍＬ）及び食塩水（４０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（７０ｍＬ）、食塩水（７０ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、黄色発泡体として表題化合物（±）－９（９１２ｍｇ）を得て、その表題化合物（±）－９を更に精製することなく次の工程に直接使用した。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６６ （ｓ， １Ｈ）， ８．６２ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．８， ７．４， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３５ （ｓ， １Ｈ）， ７．３３ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．５， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１６ （ｓ， １Ｈ）， ７．０９ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５０ （ｄｔｄ， Ｊ ＝ ８．４， ６．４， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ８．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０１ － ３．９１ （ｍ， ２Ｈ）， １．９５ ｐｐｍ （ｔｄ， Ｊ ＝ ６．５， ５．３ Ｈｚ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．８４， １５３．２８， １５０．０８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．６ Ｈｚ）， １４９．４２， １４６．４７， １４４．２０， １２８．５１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．２ Ｈｚ）， １２７．３１， １２５．３０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．６９， １１３．９５， １１０．５０， １０８．５８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．２ Ｈｚ）， １０５．８３， ７１．３３， ６８．４９， ５８．２３， ３３．６１ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１８Ｈ１６ＢｒＦＮ３Ｏ３ ＋に対する計算値， ４２０．０３５４；実測値， ４２０．０３７０．
（±）－２－［４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－７－イル］エチルメタンスルホネート（（±）－１０）。
Figure 0007474269000119
 ＴＨＦ（１１．９ｍＬ）中の（±）－９（９１２ｍｇ）の溶液をＥｔ３Ｎ（９３１ｍＬ、６．６８ｍｍｏｌ）で処理してから、０℃まで冷却し、ＭｓＣｌ（４６２μＬ、５．９７ｍｍｏｌ）を滴加することで処理した。混合液を０℃で１５分間、その後、２３℃で２１時間攪拌した。混合液を０℃まで冷却してから、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１２０ｍＬ）を滴加することで処理し、ＤＣＭ（３×１２０ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（１００ｍＬ）、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ ９：１→４：６）により、オフホワイトの脆い発泡体として表題化合物（±）－１０（２工程にわたる１１２ｍｇ、１９％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６０ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．６， ７．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４４ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．４２ （ｓ， １Ｈ）， ７．３５ （ｓ， １Ｈ）， ７．２９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ６．５， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６０ － ４．４８ （ｍ， ３Ｈ）， ４．４４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．０８ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２４ － ２．１０ ｐｐｍ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５６．０３， １５３．３９， １５０．３１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．９ Ｈｚ）， １４９．１１， １４６．５４， １４３．６０， １２８．４７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．５ Ｈｚ）， １２７．５２， １２５．３２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．６ Ｈｚ）， １２２．０２， １１４．３０， １１０．６８， １０８．６６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．２ Ｈｚ）， １０６．３２， ６９．７８， ６７．８２， ６５．０５， ３７．７５， ３０．９０ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１９Ｈ１８ＢｒＦＮ３Ｏ５Ｓ＋に対する計算値， ４９８．０１２９；実測値， ４９８．０１４４．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［（モルホリン－４－イル）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（（±）－ＪＧＫ０６３）。
Figure 0007474269000120
 一般的な手順ＧＰ－１に従い、ＤＭＦ（８２６μＬ）中の（±）－６（２０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及びモルホリン（１８μＬ、０．２１ｍｍｏｌ）から化合物（±）－ＪＧＫ０６３を調製した。ＰＴＬＣ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ １：９）により、オフホワイトの脆い発泡体として（±）－ＪＧＫ０６３（１５ｍｇ、７６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６７ （ｓ， １Ｈ）， ８．６３ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．６， ７．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．３７ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３１ （ｓ， １Ｈ）， ７．２７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１０ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５０ － ４．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２１ － ４．１２ （ｍ， １Ｈ）， ３．７５ （ｔ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．７７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ５．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６９ － ２．５４ ｐｐｍ （ｍ， ５Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．８９， １５３．３６， １５０．１５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．５ Ｈｚ）， １４９．３５， １４６．６６， １４４．０２， １２８．６０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．４ Ｈｚ）， １２７．２７， １２５．３０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．６ Ｈｚ）， １２１．８０， １１４．２９， １１０．６３， １０８．５８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．５ Ｈｚ）， １０６．０６， ７１．６１， ６７．１８， ６７．０１， ５８．９４， ５４．５６ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ２１Ｈ１９ＢｒＦＮ４Ｏ３ －に対する計算値， ４７３．０６３０；実測値， ４７３．０６３０．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［２－（モルホリン－４－イル）エチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（（±）－ＪＧＫ０６４）。
Figure 0007474269000121
 一般的な手順ＧＰ－１に従い、ＤＭＦ（１．４ｍＬ）中の（±）－１０（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及びモルホリン（３１μＬ、０．３５ｍｍｏｌ）から化合物（±）－ＪＧＫ０６４を調製した。ＰＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ、０．５％アセトニトリル、１．５％ＮＨ４ＯＨ水溶液）に続く別のＰＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）により、オフホワイトの脆い発泡体として（±）－ＪＧＫ０６４（２５ｍｇ、７３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， ７．４， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２８ （ｓ， １Ｈ）， ７．３０ － ７．２５ （ｍ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．３， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４３ － ４．３７ （ｍ， １Ｈ）， ４．１０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．３， ７．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７３ （ｔ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．６２ （ｄｄｔ， Ｊ ＝ １２．５， ８．４， ３．９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．５７ － ２．４２ （ｍ， ４Ｈ）， ２．００ － １．８２ ｐｐｍ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．８６， １５３．３１， １５０．１３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．３ Ｈｚ）， １４９．４０， １４６．６７， １４４．３３， １２８．６６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．４ Ｈｚ）， １２７．２２， １２５．３３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．６ Ｈｚ）， １２１．７５， １１４．２１， １１０．６３， １０８．５８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．２ Ｈｚ）， １０５．８７， ７２．２０， ６８．３３， ６７．０６， ５４．２３， ５３．８６， ２８．１５ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２２Ｈ２３ＢｒＦＮ４Ｏ３ ＋に対する計算値， ４８９．０９３２；実測値， ４８９．０９３５．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［（ピペリジン－１－イル）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（（±）－ＪＧＫ０６５）。
Figure 0007474269000122
 一般的な手順ＧＰ－１に従い、ＤＭＦ（１．６５ｍＬ）中の（±）－６（４０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）及びピペリジン（４１μＬ、０．４１ｍｍｏｌ）から化合物（±）－ＪＧＫ０６５を調製した。ＰＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）により、オフホワイトの脆い発泡体として（±）－ＪＧＫ０６５（２４ｍｇ、６１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６６ （ｓ， １Ｈ）， ８．６３ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ７．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３６９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６８ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３０ （ｓ， １Ｈ）， ７．２６ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ６．５， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０９ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．３， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４３ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， ５．８， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．２， ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．３， ５．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ６．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５９ － ２．４２ （ｍ， ４Ｈ）， １．６５ － １．５７ （ｍ， ４Ｈ）， １．４９ － １．４１ ｐｐｍ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．８６， １５３．２６， １５０．１２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．６ Ｈｚ）， １４９．４９， １４６．６２， １４４．２３， １２８．６５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．３ Ｈｚ）， １２７．１８， １２５．２７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．５ Ｈｚ）， １２１．７６， １１４．１６， １１０．５７， １０８．５６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．４ Ｈｚ）， １０６．００， ７１．８７， ６７．４６， ５９．３４， ５５．５９， ２６．０７， ２４．２０ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２２Ｈ２３ＢｒＦＮ４Ｏ２ ＋に対する計算値， ４７３．０９８３；実測値， ４７３．０９９１．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［（ジメチルアミノ）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（（±）－ＪＧＫ０６６）。
Figure 0007474269000123
 一般的な手順ＧＰ－１に従い、ＤＭＦ（１．８５ｍＬ）中の、（±）－６（４５ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（２３２μＬ、０．４６ｍｍｏｌ）中のＭｅ２ＮＨの２Ｍ溶液から、化合物（±）－ＪＧＫ０６６を調製した。ＰＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ、０．５％アセトニトリル、１．５％ＮＨ４ＯＨ水溶液）により、オフホワイトの脆い発泡体として（±）－ＪＧＫ０６６（３９ｍｇ、９７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６８０ （ｓ， １Ｈ）， ８．６７５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．２， ７．５， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．３７ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．４， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１０ （ｄ， Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４６ － ４．４１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４５ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．８， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．９， ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．２， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５５ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．１， ５．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．３８ ｐｐｍ （ｓ， ６Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．８９， １５３．３４， １５０．０７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．３ Ｈｚ）， １４９．３８， １４６．６７， １４４．０６， １２８．７０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．４ Ｈｚ）， １２７．１６， １２５．２９ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．６５， １１４．２７， １１０．６７， １０８．５６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．４ Ｈｚ）， １０６．１５， ７１．７０， ６７．２０， ５９．７８， ４６．４１ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１９Ｈ１９ＢｒＦＮ４Ｏ２ ＋に対する計算値， ４３３．０６７０；実測値， ４３３．０６７７．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［（ピロリジン－１－イル）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（（±）－ＪＧＫ０６７）。
Figure 0007474269000124
 一般的な手順ＧＰ－１に従い、ＤＭＦ（１．４５ｍＬ）中の（±）－６（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及びピロリジン（３０μＬ、０．３６ｍｍｏｌ）から化合物（±）－ＪＧＫ０６７を調製した。ＰＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ、１．５％ｉＰｒＯＨ、１．５％ＮＨ４ＯＨ水溶液）により、オフホワイトの脆い発泡体として（±）－ＪＧＫ０６７（３１ｍｇ、９３％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ７．５， １．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３５ （ｓ， １Ｈ）， ７．２７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．４， １．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．１０ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４９ － ４．４２ （ｍ， １Ｈ）， ４．４８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１５ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．７， ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．８８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．９， ６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．８０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．６， ５．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７２ － ２．６０ （ｍ， ４Ｈ）， １．９０ － １．７９ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．８７， １５３．３２， １５０．０９ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．６ Ｈｚ）， １４９．４５， １４６．６８， １４４．１８， １２８．７１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．３ Ｈｚ）， １２７．１５， １２５．３０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．６７， １１４．２６， １１０．６５， １０８．５６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．４ Ｈｚ）， １０６．０６， ７２．７３， ６７．３５， ５６．５７， ５５．１５， ２３．７５ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２１Ｈ２１ＢｒＦＮ４Ｏ２ ＋に対する計算値， ４５９．０８２６；実測値， ４５９．０８４５．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［（４－メチルピペラジン－１－イル）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（（±）－ＪＧＫ０６８）。
Figure 0007474269000125
 一般的な手順ＧＰ－１に従い、ＤＭＦ（１．４５ｍＬ）中の（±）－６（３５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び１－メチルピペラジン（４０μＬ、０．３６ｍｍｏｌ）から化合物（±）－ＪＧＫ０６８を調製した。ＰＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ｉＰｒＯＨ ８５：１５、１．５％ＮＨ４ＯＨ水溶液）により、オフホワイトの脆い発泡体として（±）－ＪＧＫ０６８（２９ｍｇ、８２％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６４ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， ７．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ３．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３２ （ｓ， １Ｈ）， ７．２７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．５， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１０ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４８ － ４．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１５ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ８．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６６１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６５６ （ｂｒ， ４Ｈ）， ２．５１ （ｂｒ， ４Ｈ）， ２．３２ ｐｐｍ （ｓ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．８９， １５３．３５， １５０．１５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．６ Ｈｚ）， １４９．４０， １４６．６９， １４４．１１， １２８．６４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．３ Ｈｚ）， １２７．２４， １２５．３０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．７８， １１４．２７， １１０．６３， １０８．５９ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．２ Ｈｚ）， １０６．０７， ７１．８０， ６７．２７， ５８．４３， ５５．１０， ５３．９６， ４６．０６ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２２Ｈ２４ＢｒＦＮ５Ｏ２ ＋に対する計算値， ４８８．１０９２；実測値， ４８８．１１０９．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［２－（ジメチルアミノ）エチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（（±）－ＪＧＫ０６９）。
Figure 0007474269000126
 一般的な手順ＧＰ－１に従い、ＤＭＦ（１．３ｍＬ）中の、（±）－１０（３２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（１６１μＬ、０．３２ｍｍｏｌ）中のＭｅ２ＮＨの２Ｍ溶液から、化合物（±）－ＪＧＫ０６９を調製した。ＰＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ、５％ｉＰｒＯＨ、１．５％ＮＨ４ＯＨ水溶液）により、オフホワイトの脆い発泡体として（±）－ＪＧＫ０６９（１９ｍｇ、６６％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６７ （ｓ， １Ｈ）， ８．６３ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ７．４， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３７３ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３７１ （ｓ， １Ｈ）， ７．２８ （ｓ， １Ｈ）， ７．２８ － ７．２４ （ｍ， １Ｈ）， ７．１０ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．４， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３８ （ｔｄｄ， Ｊ ＝ ７．７， ５．１， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．３， ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．２９ （ｓ， ６Ｈ）， １．９３ （ｄｑ， Ｊ ＝ １４．２， ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８４ ｐｐｍ （ｄｔｄ， Ｊ ＝ １４．２， ７．５， ５．１ Ｈｚ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．８６， １５３．２６， １５０．１４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．４ Ｈｚ）， １４９．４２， １４６．６５， １４４．３６， １２８．６７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．５ Ｈｚ）， １２７．１８， １２５．３０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．７７， １１４．１４， １１０．６０， １０８．５６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．２ Ｈｚ）， １０５．８８， ７２．１９， ６８．３４， ５５．０６， ４５．５８， ２９．１６ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２０Ｈ２１ＢｒＦＮ４Ｏ２ ＋に対する計算値， ４４７．０８２６；実測値， ４４７．０８２０．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（（±）－ＪＧＫ０７０）。
Figure 0007474269000127
 一般的な手順ＧＰ－１に従い、ＤＭＦ（１．３ｍＬ）中の（±）－１０（３２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及び１－メチルピペラジン（３６μＬ、０．３２ｍｍｏｌ）から化合物（±）－ＪＧＫ０７０を調製した。ＰＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ｉＰｒＯＨ ８：２、１．５％ＮＨ４ＯＨ水溶液）により、オフホワイトの脆い発泡体として（±）－ＪＧＫ０７０（２１ｍｇ、６５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６６ （ｓ， １Ｈ）， ８．６２ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．５， ７．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３７３ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３６７ （ｓ， １Ｈ）， ７．２９ － ７．２４ （ｍ， １Ｈ）， ７．２８ （ｓ， １Ｈ）， ７．０９ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．４， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３７ （ｔｄｄ， Ｊ ＝ ７．７， ５．４， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．４， ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６８ － ２．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５０ （ｂｒ， ８Ｈ）， ２．３０ （ｓ， ３Ｈ）， １．９４ （ｄｔｄ， Ｊ ＝ １３．６， ７．５， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， １．８６ ｐｐｍ （ｄｔｄ， Ｊ ＝ １４．２， ７．３， ５．３ Ｈｚ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．８６， １５３．２７， １５０．１６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．５ Ｈｚ）， １４９．４１， １４６．６４， １４４．３７， １２８．６４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．３ Ｈｚ）， １２７．２２， １２５．２８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．６ Ｈｚ）， １２１．８１， １１４．１３， １１０．６０， １０８．５７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．４ Ｈｚ）， １０５．８８， ７２．３８， ６８．３６， ５５．２０， ５３．７７， ５３．２５， ４６．１１， ２８．５０ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２３Ｈ２６ＢｒＦＮ５Ｏ２ ＋に対する計算値， ５０２．１２４８；実測値， ５０２．１２６１．
５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン（１１）。
Figure 0007474269000128
 ＤＭＦ（１１３ｍＬ）中の３－フルオロベンゼン－１，２－ジオール（７２３３ｍｇ、５６．５ｍｍｏｌ）の混合液をＫ２ＣＯ３（１９５１４ｍｇ、１４１ｍｍｏｌ）で処理してから、２３℃で１０分間攪拌し、１－ブロモ－２－クロロエタン（９．４ｍＬ、１１３ｍｍｏｌ）で処理した。混合液を２３℃で１時間、その後、９５℃で１６時間攪拌した。混合液を２３℃まで冷却してから、水（１５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（９０ｍＬ）、食塩水（９０ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ３０：１→１０：１）により、透明無色油状物として表題化合物１１（７９７３ｍｇ、９２％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ６．７８ － ６．６３ （ｍ， ３Ｈ）， ４．３４ － ４．２６ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５２．０５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４４．３ Ｈｚ）， １４５．２７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．８ Ｈｚ）， １３２．７８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．９ Ｈｚ）， １２０．０２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ８．９ Ｈｚ）， １１２．７４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．１ Ｈｚ）， １０８．５２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １８．１ Ｈｚ）， ６４．５０， ６４．４５ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ］・＋ Ｃ８Ｈ７ＦＯ２ ・＋に対する計算値， １５４．０４２５；実測値， １５４．０４２０．
６－ブロモ－５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン（１２）。
Figure 0007474269000129
 ＭｅＯＨ（１０１ｍＬ）中の１１（７８１２ｍｇ、５０．７ｍｍｏｌ）の溶液をＮＢＳ（９０２２ｍｇ、５０．７ｍｍｏｌ）で処理してから、７０℃で３０分間加熱した。混合液を２３℃まで冷ましてから、濃縮した。残分をＤＣＭ（７００ｍＬ）中に溶解させてから、水（３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ３０：１→２０：１）に続くＨＶ下、１００℃の乾燥により、全ての残存出発物質を除去し、透明無色油状物として表題化合物１２（約１５％の位置異性体を含有する８８０７ｍｇ、７５％）を得て、その表題化合物１２をフリーザー内で固化させて、オフホワイト固体を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ６．９６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．０， ７．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．５９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．０， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３５ － ４．２４ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １４８．８７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４５．１ Ｈｚ）， １４４．５３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．５ Ｈｚ）， １３３．８１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １４．６ Ｈｚ）， １２３．３１， １１３．３９ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．６ Ｈｚ）， １０９．１７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．３ Ｈｚ）， ６４．５１， ６４．３４ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ］・＋ Ｃ８Ｈ６ＢｒＦＯ２ ・＋に対する計算値， ２３１．９５３０；実測値， ２３１．９５２５．
５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン－６－カルボン酸（１３）。
Figure 0007474269000130
 ＴＨＦ（１０８ｍＬ）中の１２（７．０ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）の混合液を－７８℃まで冷却してから、ヘキサン（１２．０２ｍＬ、３０．０ｍｍｏｌ）中のｎＢｕＬｉの２．５Ｍ溶液を１０分間滴加することで処理した。混合液を－７８℃で３０分間攪拌してから、管を介して粉砕したドライアイス上に移した（１０ｍＬのＴＨＦで管をすすいだ）。混合液を２３℃まで温めてから、濃縮した。水（２００ｍＬ）及び１ＭのＮａＯＨ（５０ｍＬ）を残分に加えてから、水相をＥｔ２Ｏ（３×６０ｍＬ）で抽出した。水相を６ＭのＨＣｌ（１５ｍＬ）で酸性化させてから、ＤＣＭ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。混合有機液を食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させて（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ７：３→３：７）により、白色固体として表題化合物１３（３５９１ｍｇ、６０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １２．９０ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．９， ７．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．９， １．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３９ － ４．２９ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １６４．６５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．０ Ｈｚ）， １５１．２１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２５７．５ Ｈｚ）， １４８．５０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．４ Ｈｚ）， １３２．６８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．６ Ｈｚ）， １２２．４４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １．４ Ｈｚ）， １１２．１２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．４ Ｈｚ）， １１１．９７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ７．３ Ｈｚ）， ６４．４２， ６３．９１ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ９Ｈ６ＦＯ４ －に対する計算値， １９７．０２５６；実測値， １９７．０２５０．
エチル （５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン－６－イル）カルバメート（１４）。
Figure 0007474269000131
 トルエン（１３．１ｍＬ）中の１３（６５０ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ）の混合液を、Ｅｔ３Ｎ（１．４ｍＬ、９．８４ｍｍｏｌ）、及び１０℃のＤＰＰＡ（７８０μＬ、３．６２ｍｍｏｌ）で処理した。混合液を２３℃で３０分間、その後、８５℃で１．５時間攪拌した。混合液を２３℃まで冷ましてから、ＥｔＯＨ（５ｍＬ）で処理し、２３℃で１．５時間攪拌し、濃縮した。残分をＥｔ２Ｏ（１５０ｍＬ）中に溶解させてから、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４０ｍＬ）、水（４０ｍＬ）、食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＦＣ（ヘキサン／ＤＣＭ ７：３→１：９）により、白色固体として表題化合物１４（５１２ｍｇ、６５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ７．４２ （ｂｒ， １Ｈ）， ６．６４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ９．２， ２．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．５６ （ｂｒ， １Ｈ）， ４．３２ － ４．２４ （ｍ， ４Ｈ）， ４．２２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．３１ ｐｐｍ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５３．８０， １４２．６１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４６．０ Ｈｚ）， １４０．８２， １３２．６６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １２．４ Ｈｚ）， １２０．３６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ６．９ Ｈｚ）， １１２．３６， １１１．８１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．７ Ｈｚ）， ６４．７２， ６４．２９， ６１．６１， １４．６６ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１１Ｈ１３ＦＮＯ４ ＋に対する計算値， ２４２．０８２３；実測値， ２４２．０８１６．
１０－フルオロ－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン（１５）。
Figure 0007474269000132
 ＴＦＡ（５．７ｍＬ）中の１４（４５０ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）及びＨＭＴＡ（２６３ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）の混合液を、１１０℃、マイクロ波で１０分間照射した。混合液を２３℃まで冷ましてから、水（６０ｍＬ）で希釈し、６ＭのＮａＯＨ（１２ｍＬ）で処理し、ＤＣＭ（３×６０ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（５０ｍＬ）、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、泡状の黄色油状物を得た。
ジオキサン／水１：１（１５．５ｍＬ）中の１０％ＫＯＨ中の油の混合液を［Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６］（６１４ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）で処理してから、１００℃、マイクロ波で１０分間照射した。この手順を合計４回繰り返した（１当量のフェリシアン化カリウムの添加に続くマイクロ波照射を４サイクル）。得られた混合液を水（１６０ｍＬ）で希釈してから、ＤＣＭ（３×１２０ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（１００ｍＬ）、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、黄色固体として表題化合物１５（３３０ｍｇ、８６％）を得て、その表題化合物１５を更なる精製を何ら行うことなく次の工程に使用した。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ９．２１ （ｂｒ， １Ｈ）， ９．１９ （ｓ， １Ｈ）， ７．１８ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５３ － ４．４１ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５８．０６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２．９ Ｈｚ）， １５３．８１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １．８ Ｈｚ）， １４５．７６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２．９ Ｈｚ）， １４４．４０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２５６．１ Ｈｚ）， １３８．５６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １１．０ Ｈｚ）， １３６．７３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．１ Ｈｚ）， １１９．８１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２．７ Ｈｚ）， １０６．５５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．３ Ｈｚ）， ６４．７８， ６４．３４ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１０Ｈ８ＦＮ２Ｏ２ ＋に対する計算値， ２０７．０５６４；実測値， ２０７．０５６３．
１０－フルオロ－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４（３Ｈ）－オン（１６）。
Figure 0007474269000133
 ＡｃＯＨ（１ｍＬ）中の１５（３０６ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）の溶液を、水（７．１２ｍＬ、５．９４ｍｍｏｌ）中のＣＡＮの０．８３３Ｍ溶液を滴加することで処理してから、２３℃で１５分間攪拌した。白色沈殿物を濾過で回収してから、水（２×２ｍＬ）、アセトニトリル（２×２ｍＬ）、ＤＣＭ（２ｍＬ）、及びＥｔ２Ｏ（２ｍＬ）で洗浄し、表題化合物のファーストバッチを得た。１ＭのＮａＯＨで濾液をｐＨ約７に中和してから、前述のとおりに濾過で白色沈殿物を回収し、その後、洗浄し、白色固体として表題化合物１６のセカンドバッチ（８１ｍｇ、２５％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １２．１９ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．９８ （ｄ， Ｊ ＝ ３．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３２ （ｓ， １Ｈ）， ４．５２ － ４．２８ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５９．３１， １４４．５８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２５１．８ Ｈｚ）， １４４．２８， １４３．８０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．４ Ｈｚ）， １３７．８６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １１．１ Ｈｚ）， １３２．９４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ８．９ Ｈｚ）， １１５．７５， １０６．６２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．７ Ｈｚ）， ６４．５７， ６４．０２ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１０Ｈ８ＦＮ２Ｏ３ ＋に対する計算値， ２２３．０５１３；実測値， ２２３．０５０３．
４－クロロ－１０－フルオロ－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン（１７）。
Figure 0007474269000134
 トルエン（１．２ｍＬ）中の１６（９２ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液をＤＩＰＥＡ（２２０μＬ、１．２６ｍｍｏｌ）で処理してから、ＰＯＣｌ３（１０３μＬ、１．１２ｍｍｏｌ）を１０℃で滴加した。混合液を２３℃で１時間、その後、９０℃で５時間攪拌してから、濃縮した。残分を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で０℃で５分間処理してから、水（５ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３×７ｍＬ）で抽出した。混合有機液を半飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（７ｍＬ）、食塩水（７ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、淡茶色固体として表題化合物１７（５１ｍｇ、５１％）を得て、その表題化合物１７を更なる精製を何ら行うことなく次の工程に使用した。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．９０ （ｓ， １Ｈ）， ７．５１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５５ － ４．４３ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １６０．４８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．３ Ｈｚ）， １５２．３１， １４６．２９ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．３ Ｈｚ）， １４４．６３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２５６．２ Ｈｚ）， １３８．９５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １１．３ Ｈｚ）， １３７．６８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．２ Ｈｚ）， １１８．５６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２．４ Ｈｚ）， １０５．８２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．２ Ｈｚ）， ６４．８１， ６４．４１ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１０Ｈ７ＣｌＦＮ２Ｏ２ ＋に対する計算値， ２４１．０１７５；実測値， ２４１．０１７４．
５－フルオロ－７－ニトロ－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン－６－カルボン酸（１８）。
Figure 0007474269000135
 ＡｃＯＨ（７．５ｍＬ）中の１３（１５００ｍｇ、７．５７ｍｍｏｌ）の混合液を、Ｈ２ＳＯ４（２．０２ｍＬ）を１０℃で滴加することで処理した。強く攪拌した混合液を、６５％ＨＮＯ３（２．６ｍＬ）を０℃で１０分間滴加することで処理した。得られた混合液を０℃で３０分間、その後、２３℃で１６時間攪拌した。混合液を氷水（４０ｍＬ）へと注いでから、白色沈殿物を濾過で回収し（冷水４０ｍＬで洗浄した）、デシケータ内で乾燥させ、白色固体として表題化合物１８（１２８０ｍｇ、７０％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １４．０９ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．６２ （ｄ， Ｊ ＝ １．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５２ － ４．４０ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １６２．７１， １４７．１６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４８．７ Ｈｚ）， １４４．７２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ５．１ Ｈｚ）， １３８．１５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．７ Ｈｚ）， １３７．１０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ６．６ Ｈｚ）， １１３．４４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２０．３ Ｈｚ）， １０９．５２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２．３ Ｈｚ）， ６４．９７， ６４．４８ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ９Ｈ５ＦＮＯ６ －に対する計算値， ２４２．０１０６；実測値， ２４２．０１２４．
７－アミノ－５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン－６－カルボン酸（１９）。
Figure 0007474269000136
 ＭｅＯＨ（２１ｍＬ）中の１８（５００ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）及び５％Ｐｄ／Ｃ（２２３ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の混合液をＨ２の雰囲気下、２３℃で１３．５時間攪拌した。混合液をセライトに通して濾過してから（ＥｔＯＨで洗浄した）、蒸発させ、灰色固体として表題化合物１９（４１８ｍｇ、９５％）を得たが、その表題化合物１９は非常に安定しているようには見えなかった。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ ８．３５ （ｂｒ， ２Ｈ）， ６．０４ （ｄ， Ｊ ＝ １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２９ － ４．２４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１９ － ４．１４ ｐｐｍ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １６７．３６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２．９ Ｈｚ）， １５１．３６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２５２．０ Ｈｚ）， １４８．８６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ７．０ Ｈｚ）， １４５．８１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ５．７ Ｈｚ）， １２２．８８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １５．４ Ｈｚ）， ９７．１９ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２．９ Ｈｚ）， ９５．３７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．９ Ｈｚ）， ６４．９５， ６３．５８ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ９Ｈ９ＦＮＯ４ ＋に対する計算値， ２１４．０５１０；実測値， ２１４．０５０８．
５－フルオロ－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４（３Ｈ）－オン（２０）。
Figure 0007474269000137
 ホルムアミド（２．３ｍＬ、５８．７ｍｍｏｌ）中の１９（４１７ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）の混合液を１２０～１２５℃で１６時間攪拌した。混合液を０℃まで冷却してから、水（４ｍＬ）で処理し、３０分間攪拌し、水（４ｍＬ）で希釈し、濾過した。残分を冷水（３×５ｍＬ）で洗浄してから、ＨＶ下、ドライエライト上で乾燥させ、オフホワイト固体として表題化合物２０（２４９ｍｇ、５７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １２．００ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９３ （ｄ， Ｊ ＝ １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．３５ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５７．６４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．０ Ｈｚ）， １４９．７０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ６．０ Ｈｚ）， １４８．４５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２６１．３ Ｈｚ）， １４４．６０， １４２．９９， １３１．４７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １２．７ Ｈｚ）， １０８．７６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．５ Ｈｚ）， １０６．３８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．８ Ｈｚ）， ６４．６９， ６３．９８ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１０Ｈ８ＦＮ２Ｏ３ ＋に対する計算値， ２２３．０５１３；実測値， ２２３．０５１０．
４－クロロ－５－フルオロ－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン（２１）。
Figure 0007474269000138
 トルエン（１．２ｍＬ）中の２０（９０ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液をＤＩＰＥＡ（２１５μＬ、１．２４ｍｍｏｌ）で処理してから、ＰＯＣｌ３（１００μＬ、１．０９ｍｍｏｌ）を１０℃で滴加した。混合液を２３℃で１時間、その後、８８℃で５時間攪拌してから、濃縮した。残分を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）で０℃で処理してから、水（５ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３×７ｍＬ）で抽出した。混合有機液を半飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（７ｍＬ）、食塩水（７ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、淡橙黄色固体として表題化合物２１（９６ｍｇ、９９％）を得て、その表題化合物２１を更なる精製を何ら行うことなく次の工程に使用した。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．８３ （ｓ， １Ｈ）， ７．３５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５１ － ４．４５ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５６．７６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．５ Ｈｚ）， １５２．７０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２．３ Ｈｚ）， １５１．６６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．９ Ｈｚ）， １４６．０８， １４４．５１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２６１．８ Ｈｚ）， １３４．０４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １４．０ Ｈｚ）， １１０．８５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ７．７ Ｈｚ）， １０９．４３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．０ Ｈｚ）， ６４．８９， ６４．３７ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１０Ｈ７ＣｌＦＮ２Ｏ２ ＋に対する計算値， ２４１．０１７５；実測値， ２４１．０１７６．
Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－１０－フルオロ－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０７１）。
Figure 0007474269000139
 一般的な手順ＧＰ－２に従い、クロロキナゾリン１７（３５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及び３－ブロモ－２－フルオロアニリンから化合物ＪＧＫ０７１を調製した。ＦＣ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ １：０→８：２）により、白色固体としてＪＧＫ０７１（４４ｍｇ、７７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ ９．７６ （ｓ， １Ｈ）， ８．３８ （ｓ， １Ｈ）， ７．８０ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６２ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．３， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．５， ７．１， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２２ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．０， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５３ － ４．４０ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ＝ １５６．９３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．７ Ｈｚ）， １５３．４４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．５ Ｈｚ）， １５３．１２， １４４．０４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２５０．０ Ｈｚ）， １４３．９７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．２ Ｈｚ）， １３７．０４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．９ Ｈｚ）， １３５．６２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ９．９ Ｈｚ）， １３０．４８， １２７．８９， １２７．６２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．１ Ｈｚ）， １２５．５１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．５ Ｈｚ）， １０８．５８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２３．４ Ｈｚ）， １０８．５１， １０３．２５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．９ Ｈｚ）， ６４．６３， ６４．２１ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１１ＢｒＦ２Ｎ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３９３．９９９７；実測値， ３９３．９９９９．
Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－５－フルオロ－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０７２）。
Figure 0007474269000140
 一般的な手順ＧＰ－２に従い、クロロキナゾリン２１（３５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及び３－ブロモ－２－フルオロアニリンから化合物ＪＧＫ０７２を調製した。ＦＣ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ １：０→８：２）により、白色固体としてＪＧＫ０７２（４７ｍｇ、８２％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ８．６７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．６， ７．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．６２ （ｓ， １Ｈ）， ８．５２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １９．６， ２．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ６．４， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２３ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１０ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４８ － ４．４２ ｐｐｍ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ １５５．２７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ５．２ Ｈｚ）， １５３．９０， １５０．３４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４３．９ Ｈｚ）， １４９．９３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ６．２ Ｈｚ）， １４５．７５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２５０．３ Ｈｚ）， １４４．７８， １３１．９６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １５．６ Ｈｚ）， １２８．４３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．４ Ｈｚ）， １２７．７１， １２５．２０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２２．４８， １０９．６９ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ３．３ Ｈｚ）， １０８．６３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．２ Ｈｚ）， １０１．４２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ７．２ Ｈｚ）， ６４．８４， ６４．４８ ｐｐｍ． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ１１ＢｒＦ２Ｎ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３９３．９９９７；実測値， ３９３．９９９６．
実施例１７：本開示の例示化合物の脳透過性
表５に開示しているのは、脳：血漿のパーセンテージ、及び非腫瘍保有マウスにおける指定薬剤の脳：血漿における薬剤の非結合比率である
Figure 0007474269000141
実施例１８：ＪＧＫシリーズの例示化合物の調製
Figure 0007474269000142
 スキーム１．ＪＧＫ０６８Ｓの合成。
Figure 0007474269000143
 スキーム２．（Ｒ）－エナンチオマーＪＧＫ０６８Ｒまたはラセミ混合物（ＪＧＫ０６８）の調製では、スキーム１に示すのと同一の経路に従っているが、それぞれ（Ｒ）－グリシドールまたはラセミグリシドールを採用している。
Figure 0007474269000144
 スキーム３．キラルトルエンスルホン酸グリシジルを用いたベンズアルデヒド１からのベンゾジオキサンカルバルデヒド（Ｒ）－１０の一工程合成この経路では、スキーム１における光延反応（１からの２の調製）を回避している。化合物（Ｒ）－１０は、ＪＧＫ０６８Ｓを調製するために、スキーム１に示す経路に使用することができる。
一般的な化学情報
全ての化学物質、試薬、及び溶媒については、入手可能な場合は市販の供給元から購入し、受け入れたままの状態で使用した。必要に応じ、標準的な方法で試薬及び溶媒を精製して乾燥させた。空気の影響を受けやすい反応及び湿度の影響を受けやすい反応は、オーブンで乾燥させたガラス器具内、アルゴンの不活性雰囲気下で実施した。マイクロ波照射反応は、シングルモード反応器ＣＥＭ Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロ波合成装置内で実施した。室温（ＲＴ）反応は周囲温度（約２３℃）で実施した。全ての反応は、ＵＶ光（λ＝２５４、３６５ｎｍ）またはアルカリＫＭｎＯ４溶液を使用することでスポットを可視化したプレコートＭｅｒｃｋ ６０ Ｆ２５４シリカゲルプレートを用いた薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でモニターした。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣ）は、ＳｉＯ２ ６０（粒径０．０４０～０．０６３ｍｍ、２３０～４００メッシュ）を用いて実施した。分取薄層クロマトグラフィー（ＰＴＬＣ）は、Ｍｅｒｃｋ ６０ Ｆ２５４シリカゲルプレート（２０×２０ｃｍ、２１０～２７０ｍｍ）またはＡｎａｌｔｅｃｈシリカゲルＧＦ ＴＬＣプレート（２０×２０ｃｍ、１０００ｍｍ）を用いて実施した。減圧下（真空下）における濃縮は、２５～５０℃の回転蒸発によって実施した。精製化合物は、高真空下またはデシケータ内で更に乾燥させた。収率は精製化合物に対応しており、更なる最適化は行わなかった。プロトン核磁気共鳴（１Ｈ ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒスペクトロメーター（３００、４００、または５００ＭＨｚで操作した）を用いて記録した。炭素ＮＭＲ（１３Ｃ ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒスペクトロメーター（４００または５００ＭＨｚのいずれか）を用いて記録した。ＮＭＲ化学シフト（δｐｐｍ）については、残存溶媒のシグナルを基準とした。１Ｈ ＮＭＲデータは、以下：化学シフト（ｐｐｍ）；多重度（ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｑｕｉｎｔ＝クインテット、ｍ＝マルチプレット／複合パターン、ｔｄ＝トリプルダブレット、ｄｄｄ＝ダブルダブルダブレット、ｂｒ＝ブロードシグナル）；結合定数（Ｊ）（Ｈｚ）、積分のとおりに記録する。１３Ｃ ＮＭＲスペクトルのデータは、化学シフト、及び該当する場合、結合定数を基準として記録する。ＩｏｎＳｅｎｓｅ ＩＤ－ＣＵＢＥ ＤＡＲＴ ｓｏｕｒｃｅ質量分析計を備えたＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ、またはオートサンプラーを備えたＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣを備えたＷａｔｅｒｓ ＬＣＴ Ｐｒｅｍｉｅｒ質量分析計を用いて、高解像度質量（ＨＲＭＳ）スペクトルを記録した。
５－ホルミル－２－ヒドロキシフェニルアセテート（１）。
Figure 0007474269000145
 ＴＨＦ（９６５ｍＬ）中の３，４－ジヒドロキシベンズアルデヒド（１００ｇ、０．７２４ｍｏｌ）の混合液を０℃まで冷却してから、１０％ＮａＯＨ水溶液（７２４ｍＬ、１．８１ｍｏｌ）で４～５分間超処理した。反応混合液を０℃で１５分間攪拌した後、無水酢酸（Ａｃ２Ｏ、８２．１ｍＬ、０．８６９ｍｏｌ）を２０分間超滴加した。混合液を同一温度で３０分間攪拌してから、ＥｔＯＡｃ（１．２５Ｌ）及び２ＭのＨＣｌ（１．１３Ｌ）の混合液へと０℃で注いだ。相を分離させてから、ＥｔＯＡｃ（４×２５０ｍＬ）で水相を抽出した。混合有機液を水（２×５００ｍＬ）、食塩水（５００ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。残分を少量のｎ－ヘプタンで処理してから、蒸発させた（３×）。ＥｔＯＡｃ（２７５ｍＬ、Ｅｔ２Ｏで結晶を洗浄した）から再結晶させ、淡茶色結晶として表題化合物１のファーストクロップ（６６．９６ｇ、５１％）を得た。母液をＥｔＯＡｃから再結晶させ、淡茶色固体として表題化合物１のセカンドクロップ（２９．４３６ｇ、２３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ９．８５ （ｓ， １Ｈ）， ７．７３ － ７．６５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．１１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３４ （ｂｒ， １Ｈ）， ２．３９ （ｓ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １９０．４０， １６８．９９， １５２．９６， １３８．８１， １３０．２４， １２９．７２， １２４．１３， １１７．８７， ２１．０９． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ９Ｈ９Ｏ４ ＋に対する計算値， １８１．０４９５；実測値， １８１．０４８８．
５－ホルミル－２－｛［（２Ｒ）－オキシラン－２－イル］メトキシ｝フェニルアセテート（（Ｒ）－２）。
Figure 0007474269000146
 ＴＨＦ（９０５ｍＬ）中の１（３２．５ｇ、０．１８ｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ３、７０．９７６ｇ、０．２７ｍｏｌ）の混合液を（Ｓ）－グリシドール（１７．９５ｍＬ、０．２７ｍｏｌ）で処理してから、０℃まで冷却し、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ、５６．８ｍＬ、０．２８９ｍｍｏｌ）を３０分間超滴加することで処理した。混合液を０℃で更に１０分間攪拌し、その後、冷却浴から取り出して、攪拌を２３℃で１５．５時間続けた。全ての揮発性物質を蒸発させ、茶色油状物として粗（Ｒ）－２を得て、その粗（Ｒ）－２を更なる精製を何ら行うことなく次の工程に使用した。
（３Ｓ）－３－（ヒドロキシメチル）－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン－６－カルバルデヒド（（Ｓ）－３）。
Figure 0007474269000147
 ＭｅＯＨ（１．５６４Ｌ）中の粗（Ｒ）－２の混合液をＫ２ＣＯ３（４９．８７ｇ、０．３６ｍｏｌ）で処理してから、２３℃で１８．５時間攪拌し、その後、溶媒を蒸発させた。残分を半飽和ＮＨ４Ｃｌ（７５０ｍＬ）中に懸濁させてから、ＥｔＯＡｃ（３×５００ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（２５０ｍＬ）、食塩水（２５０ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。数ラウンドのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ９：１→１：１）に加えてヘキサン／Ｅｔ２Ｏ １：１からの沈殿（酸化トリフェニルホスフィンＰｈ３ＰＯを除去するため）により、粗生成物を精製することにより、白色固体として表題化合物（Ｓ）－３（２工程にわたる１７．３２２ｇ、４９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ９．８１ （ｓ， １Ｈ）， ７．４３ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．００ （ｄ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．４， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３１ － ４．２５ （ｍ， １Ｈ）， ４．２０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．３， ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９５ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．１， ４．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．１， ４．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．１８ （ｂｒ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １９０．７９， １４８．７６， １４３．４６， １３０．７９， １２４．４６， １１８．３３， １１７．７０， ７３．３１， ６５．６１， ６１．５４． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１０Ｈ１１Ｏ４ ＋に対する計算値， １９５．０６５２；実測値， １９５．０６５０．
［（２Ｒ）－７－シアノ－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン－２－イル］メチルアセテート（（Ｒ）－４）。
Figure 0007474269000148
 ＡｃＯＨ（１８９ｍＬ）中の（Ｓ）－３（１７．３２２ｇ、０．０８９ｍｏｌ）の混合液をＫＯＡｃ（２２．９４４ｇ、０．２３４ｍｏｌ）で処理してから、２３℃で１０分間攪拌し、その後、ＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ（１６．２３３ｇ、０．２３４ｍｏｌ）で処理した。得られた混合液を１２０～１２５℃で１８．５時間攪拌した。混合液を２３℃まで冷ましてから、水（１Ｌ）へと注ぎ、ＥｔＯＡｃ（４×２５０ｍＬ）で抽出した。混合有機液を３．５ＭのＮａＯＨ（４００ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）で処理して約８の最終ｐＨを得てから、エマルションを２３℃で１時間攪拌した。有機層を分離させてから、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３００ｍＬ）、水（３００ｍＬ）、食塩水（３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ １０：１ →６：４）を用いた精製により、透明無色油状物として表題化合物（Ｒ）－４（１３．５１３ｇ、６５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．２０ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４３ － ４．３８ （ｍ， １Ｈ）， ４．３６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．１， ４．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ４．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．１２ （ｓ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １７０．６４， １４７．１３， １４３．１１， １２６．２８， １２１．５６， １１８．８５， １１８．３２， １０５．１３， ７１．１１， ６５．４５， ６２．２４， ２０．８３． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１２Ｈ１２ＮＯ４ ＋に対する計算値， ２３４．０７６１；実測値， ２３４．０７５９．
［（２Ｒ）－７－シアノ－６－ニトロ－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン－２－イル］メチルアセテート（（Ｒ）－５）。
Figure 0007474269000149
 Ａｃ２Ｏ（７４．３ｍＬ）中の（Ｒ）－４（１３．３４５ｇ、５７．２ｍｍｏｌ）の混合液をＨ２ＳＯ４（３．０５ｍＬ、５７．２ｍｍｏｌ）で処理してから、０℃まで冷却し、７０％ＨＮＯ３（１９．６３ｍＬ、２８６ｍｍｏｌ）を０℃で３５分間超滴加することで処理した。混合液を０℃で更に２時間、その後、２３℃で３．５時間攪拌した。混合液を氷水（８５０ｍＬ）に注いでから、６ＭのＮａＯＨ（３２０ｍＬ）でｐＨを約７に調節した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）を加えてから、混合液をＣＨ２Ｃｌ２（３×５００ｍＬ）で抽出した。混合有機液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４００ｍＬ）、水（４００ｍＬ）、食塩水（４００ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、黄色油状物として表題化合物（Ｒ）－５（１５．６９６ｇ、９９％）を得て、その表題化合物（Ｒ）－５を更なる精製を何ら行うことなく次の工程に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ７．９６ （ｓ， １Ｈ）， ７．８０ （ｓ， １Ｈ）， ４．７３ － ４．６７ （ｍ， １Ｈ）， ４．５８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．８， ２．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．５， ３．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．５， ５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．８， ７．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．０５ （ｓ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １７０．１１， １４７．７５， １４６．２６， １４２．２３， １２３．７７， １１５．２１， １１５．１７， １００．０６， ７２．００， ６４．９８， ６１．７２， ２０．５２． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１２Ｈ１１Ｎ２Ｏ６ ＋に対する計算値， ２７９．０６１２；実測値， ２７９．０６０１．
（３Ｓ）－７－アミノ－３－（ヒドロキシメチル）－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン－６－カルボニトリル（（Ｓ）－６）。
Figure 0007474269000150
 水／エタノール １：１（２５０ｍＬ）中の（Ｒ）－５（１５．５９１ｇ、５６ｍｍｏｌ）の懸濁液をＮａ２Ｓ２Ｏ４（３９．２６６ｇ、１８５ｍｍｏｌ）で処理してから、混合液を５０℃で１０５分間攪拌し、その後、７０℃で２時間加熱した（その期間中、少量ずつの濃ＨＣｌ（７３．６ｍＬ、０．８９７ｍｏｌ）で処理しつつ）。混合液を２３℃まで冷ましてから、氷上に注ぎ、６ＭのＮａＯＨ（２００ｍＬ）及び半飽和ＮａＨＣＯ３（５００ｍＬ）でｐＨを約１０に調節した。混合液をＥｔＯＡｃ（３×５００ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（５００ｍＬ）、食塩水（５００ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、橙黄色から黄色の固体として粗（Ｓ）－６（９．４８３ｇ、８２％）を得て、その粗（Ｓ）－６を更なる精製を何ら行うことなく次の工程に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ６．９２ （ｓ， １Ｈ）， ６．２９ （ｓ， １Ｈ）， ５．５０ （ｂｒ， ２Ｈ）， ５．０４ （ｔ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．７， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０７ － ３．９９ （ｍ， １Ｈ）， ４．００ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．２， ８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６４ － ３．５１ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １４８．５０， １４７．２９， １３４．３９， １１９．０４， １１８．０４， １０２．４５， ８６．７２， ７３．２５， ６５．９２， ５９．７７． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１０Ｈ１０Ｎ２Ｏ３ ・＋に対する計算値， ２０６．０６８６；実測値， ２０６．０６８５．
Ｎ’－［（２Ｓ）－７－シアノ－２－（ヒドロキシメチル）－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン－６－イル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルメタン－イミドアミド（（Ｓ）－７）。
Figure 0007474269000151
 トルエン（１１７ｍＬ）中の（Ｓ）－６（９．３８ｇ、４５．５ｍｍｏｌ）の混合液をＡｃＯＨ（１４３μＬ、２．５ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ－ＤＭＡ（１３．１ｍＬ、９８．９ｍｍｏｌ）で処理してから、混合液を１０５℃で３時間攪拌した。蒸発させたＭｅＯＨ（約４～５ｍＬ）をディーンスタークトラップ内に回収して、反応の進行をモニターした。混合液を２３℃まで冷ましてから、蒸発させ、粘稠な茶色油状物として粗（Ｓ）－７（１４．２４３ｇ、量）を得て、その粗（Ｓ）－７を更なる精製を何ら行うことなく次の工程に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ７．５１ （ｓ， １Ｈ）， ７．０５ （ｓ， １Ｈ）， ６．４８ （ｓ， １Ｈ）， ４．３３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．２， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２３ － ４．１７ （ｍ， １Ｈ）， ４．１３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．２， ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．１， ４．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．１， ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．０７ （ｓ， ３Ｈ）， ３．０５ （ｓ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １６０．４０， １５３．７８， １４７．６８， １３８．６３， １２１．０８， １１８．６４， １０８．１６， ９９．３１， ７３．３４， ６５．８３， ６１．６７， ４０．５１， ３４．８２． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１３Ｈ１６Ｎ３Ｏ３ ＋に対する計算値， ２６２．１１８６；実測値， ２６２．１１８３．
［（７Ｓ）－４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－７－イル］メタノール（（Ｓ）－８）。
Figure 0007474269000152
 ＡｃＯＨ（１５２ｍＬ）中の（Ｓ）－７の混合液を３－ブロモ－２－フルオロアニリン（６．６３ｍＬ、５９．１ｍｍｏｌ）で処理してから、混合液を１２５～１３０℃で３時間攪拌した。混合液を２３℃まで冷ましてから、氷水（５００ｍＬ）に注ぎ、飽和ＮＨ４ＯＨ水溶液（１８５ｍＬ）及び半飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）でｐＨを約９に調節した。混合液をＥｔＯＡｃ（３×４００ｍＬ）で抽出してから、混合有機液を半飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４００ｍＬ）、水（４００ｍＬ）、食塩水（４００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。残分をＭｅＯＨ（２７２ｍＬ）中に溶解させてから、Ｋ２ＣＯ３（１２．５７９ｇ、９１ｍｍｏｌ）で処理し、２３℃で１時間攪拌し、蒸発させた。残分をＮＨ４Ｃｌ半飽和水溶液（７００ｍＬ）中に懸濁させてから、ＥｔＯＡｃ（３×４００ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（４００ｍＬ）、食塩水（４００ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。橙黄色から黄色の残分をＥｔＯＡｃ中に懸濁させてから、６５℃まで温めて、その後、２３℃まで一晩ゆっくりと冷ました。濾過し、残分を冷却したヘキサン（２×１５ｍＬ）及びＥｔ２Ｏ（２×１５ｍＬ）で洗浄し、高真空下で乾燥させ、微粒子状の黄色粉体として表題化合物（Ｓ）－８（２工程にわたる９．４０７ｇ、５０．９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６９ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９９ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ７．０， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２４ － ７．１７ （ｍ， １Ｈ）， ７．２０ （ｓ， １Ｈ）， ５．２０ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３７ － ４．２９ （ｍ， １Ｈ）， ４．２１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７６ － ３．６４ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２２， １５３．３８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．０ Ｈｚ）， １５３．０９， １４８．８７， １４５．９４，
１４３．３７， １３０．０８， １２８．０９ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １２．９ Ｈｚ）， １２７．７５， １２５．４３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．５ Ｈｚ）， １１２．２９， １０９．８１， １０８．５４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２０．０ Ｈｚ）， １０８．４９， ７３．７７， ６５．５２， ５９．７６． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１７Ｈ１４ＢｒＦＮ３Ｏ３ ＋に対する計算値， ４０６．０１９７；実測値， ４０６．０１８５．
［（７Ｒ）－４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－７－イル］メチルメタンスルホネート（（Ｒ）－９）。
Figure 0007474269000153
 アセトニトリル（１４８ｍＬ）中の（Ｓ）－８（９．０１ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）及びＭｅ３Ｎ・ＨＣｌ（２３４ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）の混合液をＥｔ３Ｎ（６．１８ｍＬ、４４．４ｍｍｏｌ）で処理してから、０～５℃まで冷却し、アセトニトリル（１７ｍＬ、３ｍＬですすいだ）中のＭｓＣｌ（２．５７ｍＬ、３３．２ｍｍｏｌ）の溶液を１０分間超滴加することで処理した。混合液を０℃で１時間攪拌した。水（１００ｍＬ）を加えてから、アセトニトリルの大部分を減圧下で蒸発させた。更なる水（７００ｍＬ）を加え、混合液をＥｔＯＡｃ（３×４００ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（４００ｍＬ）、食塩水（４００ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、黄色の脆い発泡体として表題化合物（Ｒ）－９（１０．３３ｇ、９６％）を得て、その表題化合物（Ｒ）－９を更なる精製を何ら行うことなく次の工程に使用した。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．７０ （ｓ， １Ｈ）， ８．６２ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ７．３， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４４ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６２ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６０ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ６．５， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．６７ － ４．６１ （ｍ， １Ｈ）， ４．５４ － ４．５１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．７， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．８， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．１３ （ｓ， ３Ｈ）．
（７Ｓ）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［（４－メチルピペラジン－１－イル）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０６８Ｓ）。
Figure 0007474269000154
 ＤＭＦ（４２７ｍＬ）中の（Ｒ）－９の混合液を１－メチルピペラジン（１１．８３ｍＬ、１０７ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（５．９５ｍＬ、４２．７ｍｍｏｌ）で処理してから、混合液を８５℃で２４時間攪拌した。混合液を２３℃まで冷ましてから、蒸発させた。残分をＥｔＯＡｃ（１．２Ｌ）中に溶解させてから、０．５ＭのＮａＯＨ（４×２５０ｍＬ）、食塩水（２５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ １：０→８：２）を用いた精製により、オフホワイトの脆い発泡体として表題化合物ＪＧＫ０６８Ｓ（２工程にわたる６．０１３ｇ、５８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．６７ （ｓ， １Ｈ）， ８．６３ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．７， ７．３， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３７４ （ｓ， １Ｈ）， ７．３７２ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３２ （ｓ， １Ｈ）， ７．２６ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ６．５， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０９ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４８ － ４．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．８， ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６５３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６４８ （ｂｒ， ４Ｈ）， ２．５１ （ｂｒ， ４Ｈ）， ２．３２ （ｓ， ３Ｈ）．
Figure 0007474269000155
 スキーム４．ＪＧＫ０８３Ｓの合成。
ｔｅｒｔ－ブチル｛［（７Ｓ）－４－（３－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－７－イル］メチル｝ピペラジン－１－カルボキシレート（（Ｓ）－１０）。
Figure 0007474269000156
 実施例１６の一般的な手順ＧＰ－１に従い、ＤＭＦ（３．８ｍＬ）中のＲ－９（９１ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）及びピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１７５ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）から化合物（Ｓ）－１０を調製し、８５℃で１５時間攪拌した。ＰＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ ４：６）により、オフホワイトの脆い発泡体として（Ｓ）－１０（５０ｍｇ、４６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， ７．４， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３６ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．３１ （ｓ， １Ｈ）， ７．２７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．５， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５０ － ４．４２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．１， ８．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．４７ （ｔ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．７８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ５．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．５， ５．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６２ － ２．４７ （ｍ， ４Ｈ）， １．４７ （ｓ， ９Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １５５．８９， １５４．８３， １５３．３９， １５０．１５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．４ Ｈｚ）， １４９．３６， １４６．７２， １４４．０２， １２８．６３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．３ Ｈｚ）， １２７．２７， １２５．３４， １２１．７８， １１４．３４， １１０．６６， １０８．６０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．５ Ｈｚ）， １０６．０６， ７９．９７， ７１．７６， ６７．１８， ５８．５６， ５３．９６， ２８．５７， １つの炭素シグナルが欠損 （おそらく重複ピークに起因している）． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２６Ｈ３０ＢｒＦＮ５Ｏ４ ＋に対する計算値， ５７４．１４６０；実測値， ５７４．１４３２．
（７Ｓ）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［（ピペラジン－１－イル）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０８３Ｓ）。
Figure 0007474269000157
 ＣＨ２Ｃｌ２（５００μＬ）及びＴＦＡ（２５０μＬ）中の（Ｓ）－１０（４２ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）の混合液を２３℃で１２時間攪拌した。混合液を１ＭのＨＣｌ（２０ｍＬ）で希釈してから、ＣＨ２Ｃｌ２（３×７ｍＬ）で洗浄した。水相を６ＭのＮａＯＨ（４ｍＬ）でｐＨ＞１２に希釈してから、ＥｔＯＡｃ（３×８ｍＬ）で抽出した。混合有機液を食塩水（８ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。ＰＴＬＣ（ＣＨ２ＣＬ２／ＭｅＯＨ ８：２）を用いた精製により、白色の脆い発泡体として表題化合物ＪＧＫ０８３Ｓ（１８ｍｇ、５２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６６ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．２， ７．３， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３５ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ４．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３２ （ｓ， １Ｈ）， ７．２７ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ６．５， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５０ － ４．４２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１９ － ４．１３ （ｍ， １Ｈ）， ２．９３ （ｔ， Ｊ ＝ ４．９ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．７６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ５．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６３ － ２．５０ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １５５．８８， １５３．３５， １５０．１２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．３ Ｈｚ）， １４９．４５， １４６．７１， １４４．１７， １２８．６７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．４ Ｈｚ）， １２７．２１， １２５．３２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．７４， １１４．３０， １１０．６４， １０８．５８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．３ Ｈｚ）， １０６．０２， ７１．７０， ６７．３２， ５９．１９， ５５．５４， ４６．２３． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ２１Ｈ２０ＢｒＦＮ５Ｏ２ －に対する計算値， ４７２．０７９０；実測値， ４７２．０７７３．
［（２Ｒ）－７－ホルミル－２，３－ジヒドロ－１，４－ベンゾジオキシン－２－イル］メチルアセテート（（Ｒ）－１０）。
Figure 0007474269000158
 ＤＭＦ（２ｍＬ）中の１（１５０ｍｇ、０．８３３ｍｍｏｌ）及びトルエンスルホン酸（２Ｒ）－グリシジル（２０３ｍｇ、０．８９１ｍｍｏｌ）の混合液をＫ２ＣＯ３（１８１ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）で処理してから、混合液を６０℃で１５時間攪拌した。混合液を２３℃まで冷ましてから、水（３０ｍＬ）を加え、混合液をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。混合有機液を水（１５ｍＬ）、食塩水（１５ｍＬ）で洗浄してから、乾燥させて（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。分取薄層クロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ７：３）を用いた精製により、透明無色油状物として表題化合物（Ｒ）－１０（１１１ｍｇ、５６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ＝ ９．８２ （ｓ， １Ｈ）， ７．４４ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．００ （ｄ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４６ － ４．３９ （ｍ， １Ｈ）， ４．３７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３５ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．７， ４．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．９， ５．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．１１ （ｓ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １９０．７２， １７０．６７， １４８．５７， １４３．２２， １３１．１５， １２４．３８， １１８．７６， １１７．８５， ７０．９４， ６５．５４， ６２．３６， ２０．８３． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１２Ｈ１３Ｏ５ ＋に対する計算値， ２３７．０７５７；実測値， ２３７．０７４５．
（±）－Ｎ－（３－クロロ－２－フルオロフェニル）－７－［（４－メチルピペラジン－１－イル）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０７５）。
Figure 0007474269000159
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．６８ （ｓ， １Ｈ）， ８．６１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ７．３， ２．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ７．３５ （ｂｒ ｄ， Ｊ ＝ ３．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３２ （ｓ， １Ｈ）， ７．１６ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１３ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４９ － ４．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１５ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．８， ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７８ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ５．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．４， ５．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６４ （ｂｒ， ４Ｈ）， ２．４８ （ｂｒ， ４Ｈ）， ２．３１ （ｓ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １５５．８９， １５３．３５， １４９．４４， １４９．３０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４４．２ Ｈｚ）， １４６．７２， １４４．１５， １２８．７６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ９．３ Ｈｚ）， １２４．７１ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２４．４５， １２１．０１， １２０．８５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １６．１ Ｈｚ）， １１４．３０， １１０．６３， １０６．０５， ７１．８１， ６７．３１， ５８．５０， ５５．１７， ５４．１５， ４６．１９． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２２Ｈ２４ＣｌＦＮ５Ｏ２ ＋に対する計算値， ４４４．１５９７；実測値， ４４４．１５８２．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－８－［（モルホリン－４－イル）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０７６）。
Figure 0007474269000160
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６２ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９４ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．５， ７．１， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９ （ｓ， １Ｈ）， ４．６３ － ４．５６ （ｍ， １Ｈ）， ４．４６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５９ （ｔ， Ｊ ＝ ４．６ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．７１ － ２．５９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５７ － ２．４４ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２２， １５３．３７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．３ Ｈｚ）， １５３．１３， １４８．７５， １４６．１６， １４３．２８， １３０．１４， １２８．０２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．０ Ｈｚ）， １２７．７４， １２５．４５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １１２．５７， １０９．６１， １０８．５５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．９ Ｈｚ）， １０８．２３， ７１．４１， ６６．２９， ６６．１８， ５７．９７， ５３．８９． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ２１Ｈ１９ＢｒＦＮ４Ｏ３ －に対する計算値， ４７３．０６３０；実測値， ４７３．０６０８．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－８－［（ジメチルアミノ）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０７７）。
Figure 0007474269000161
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６２ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９４ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．５， ７．１， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１７ （ｓ， １Ｈ）， ４．５７ － ４．５１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．７， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５８ （ｓ， １Ｈ）， ２．５７ （ｓ， １Ｈ）， ２．２５ （ｓ， ６Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２２， １５３．３８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．４ Ｈｚ）， １５３．１２， １４８．７８， １４６．１６， １４３．２９， １３０．１４， １２８．０２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．１ Ｈｚ）， １２７．７５， １２５．４５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．４ Ｈｚ）， １１２．５４， １０９．５９， １０８．５５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．８ Ｈｚ）， １０８．２０， ７１．７６， ６６．３１， ５８．７３， ４５．９２． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ１９Ｈ１７ＢｒＦＮ４Ｏ２ －に対する計算値， ４３１．０５２４；実測値， ４３１．０５０３．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－８－［（４－メチルピペラジン－１－イル）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０７８）。
Figure 0007474269000162
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９４ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．５， ７．１， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９ （ｓ， １Ｈ）， ４．６０ － ４．５３ （ｍ， １Ｈ）， ４．４４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．７， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６８ － ２．５９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５３ （ｂｒ， ４Ｈ）， ２．３４ （ｂｒ， ４Ｈ）， ２．１６ （ｓ， ３Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２２， １５３．３８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．４ Ｈｚ）， １５３．１２， １４８．７８， １４６．１５， １４３．２９， １３０．１３， １２８．０２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．１ Ｈｚ）， １２７．７４， １２５．４５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．５ Ｈｚ）， １１２．５５， １０９．６０， １０８．５５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．８ Ｈｚ）， １０８．２２， ７１．５７， ６６．３４， ５７．５２， ５４．６８， ５３．２９， ４５．７２． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ２２Ｈ２２ＢｒＦＮ５Ｏ２ －に対する計算値， ４８６．０９４６；実測値， ４８６．０９２８．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－８－［（ピロリジン－１－イル）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０７９）。
Figure 0007474269000163
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９４ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．３， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．５， ７．１， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．０， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９ （ｓ， １Ｈ）， ４．５７ － ４．４９ （ｍ， １Ｈ）， ４．４６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１６ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．８０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．８， ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．８， ６．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６２ － ２．４８ （ｍ， ４Ｈ）， １．７４ － １．６６ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２２， １５３．３７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．５ Ｈｚ）， １５３．１２， １４８．７９， １４６．１７， １４３．２９， １３０．１３， １２８．０２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １２．９ Ｈｚ）， １２７．７４， １２５．４５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．５ Ｈｚ）， １１２．５４， １０９．５８， １０８．５５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２０．０ Ｈｚ）， １０８．１９， ７２．６５， ６６．３２， ５５．４２， ５４．３１， ２３．２３． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ２１Ｈ１９ＢｒＦＮ４Ｏ２ －に対する計算値， ４５７．０６８１；実測値， ４５７．０６６０．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－８－［（ピペリジン－１－イル）メチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０８０）。
Figure 0007474269000164
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９４ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．３， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ７．０， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１８ （ｓ， １Ｈ）， ４．５９ － ４．５２ （ｍ， １Ｈ）， ４．４４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１４ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．７， ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６５ － ２．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５３ － ２．３７ （ｍ， ４Ｈ）， １．５５ － １．４７ （ｍ， ４Ｈ）， １．４３ － １．３４ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２１， １５３．３７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．１ Ｈｚ）， １５３．１１， １４８．８３， １４６．１５， １４３．３２， １３０．１２， １２８．０３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．１ Ｈｚ）， １２７．７３， １２５．４５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．５ Ｈｚ）， １１２．５３， １０９．５７， １０８．５５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．８ Ｈｚ）， １０８．１９， ７１．６３， ６６．４２， ５８．３５， ５４．７４， ２５．６１， ２３．８３． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ － Ｈ］－ Ｃ２２Ｈ２１ＢｒＦＮ４Ｏ２ －に対する計算値， ４７１．０８３７；実測値， ４７１．０８１４．
Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）（７，７，８，８－２Ｈ４）－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０８１）。
Figure 0007474269000165
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ７．９， ６．３， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ７．１， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９ （ｓ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．１９， １５３．３７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．２ Ｈｚ）， １５３．１０， １４９．２７， １４６．０３， １４３．６７， １３０．１２， １２８．０３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．０ Ｈｚ）， １２７．７４， １２５．４４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．２ Ｈｚ）， １１２．４７， １０９．６３， １０８．５５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．９ Ｈｚ）， １０８．３５． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１６Ｈ８Ｄ４ＢｒＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３８０．０３４２；実測値， ３８０．０３２７．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［２－（ピロリジン－１－イル）エチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０８４）。
Figure 0007474269000166
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６０ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９５ （ｓ， １Ｈ）， ７．５８ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ７．０， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．２０ （ｓ， １Ｈ）， ４．５０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４２ － ４．３６ （ｍ， １Ｈ）， ４．１２ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ７．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．７０ － ２．５６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４９ － ２．４０ （ｍ， ４Ｈ）， １．８９ － １．７８ （ｍ， ２Ｈ）， １．７３ － １．６４ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２１， １５３．３３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．５ Ｈｚ）， １５３．１３， １４８．９５， １４６．０２， １４３．３７， １３０．０８， １２８．０７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．１ Ｈｚ）， １２７．６４， １２５．４８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．６ Ｈｚ）， １１２．２６， １０９．７８， １０８．５８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．８ Ｈｚ）， １０８．４４， ７１．７６， ６７．７８， ５３．６３， ５１．０３， ２９．５３， ２３．１６． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２２Ｈ２３ＢｒＦＮ４Ｏ２ ＋に対する計算値， ４７３．０９８３；実測値， ４７３．０９７６．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－７－［２－（ピペリジン－１－イル）エチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０８５）。
Figure 0007474269000167
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６０ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９４ （ｓ， １Ｈ）， ７．５８ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．４， ７．１， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２０４ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１９８ （ｓ， １Ｈ）， ４．５１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３９ － ４．３３ （ｍ， １Ｈ）， ４．１１ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５０ － ２．４４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４２ － ２．２７ （ｍ， ４Ｈ）， １．９０ － １．７６ （ｍ， ２Ｈ）， １．５５ － １．４５ （ｍ， ４Ｈ）， １．４２ － １．３４ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２０， １５３．３３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．４ Ｈｚ）， １５３．１２， １４８．９５， １４６．０２， １４３．３９， １３０．０８， １２８．０７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １３．１ Ｈｚ）， １２７．６４， １２５．４８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．５ Ｈｚ）， １１２．２５， １０９．７７， １０８．５８ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２０．０ Ｈｚ）， １０８．４３， ７１．９７， ６７．８０， ５４．０８， ５３．９６， ２７．６９， ２５．６１， ２４．１２． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２３Ｈ２５ＢｒＦＮ４Ｏ２ ＋に対する計算値， ４８７．１１３９；実測値， ４８７．１１３７．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－８－［２－（モルホリン－４－イル）エチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０８６）。
Figure 0007474269000168
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６３ （ｓ， １Ｈ）， ８．３２ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．５８ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， ６．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．１， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４７ － ４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．１０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５８ （ｔ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ， ４Ｈ）， ２．５５ － ２．４６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４５ － ２．３３ （ｍ， ４Ｈ）， １．９２ － １．７９ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２０， １５３．３３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４８．３ Ｈｚ）， １５３．０６， １４８．９４， １４６．０６， １４３．２６， １３０．０３， １２８．１２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ９．８ Ｈｚ）， １２７．６９， １２５．４４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．４ Ｈｚ）， １１２．４７， １０９．６４， １０８．５５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．９ Ｈｚ）， １０８．１８， ７２．３０， ６７．３５， ６６．２２， ５３．５３， ５３．２８， ２７．２５． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２２Ｈ２３ＢｒＦＮ４Ｏ３ ＋に対する計算値， ４８９．０９３２；実測値， ４８９．０９２６．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－８－［２－（ジメチルアミノ）エチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０８７）。
Figure 0007474269000169
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｔ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１８ （ｓ， １Ｈ）， ４．４９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ２．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．３８ （ｍ， １Ｈ）， ４．０９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．４７ － ２．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１７ （ｓ， ６Ｈ）， １．８６ － １．７８ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２０， １５３．３７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４７．６ Ｈｚ）， １５３．０８， １４８．９９， １４６．１４， １４３．２９， １３０．１０， １２８．０７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １５．６ Ｈｚ）， １２７．７２， １２５．４４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．４ Ｈｚ）， １１２．５０， １０９．５８， １０８．５４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．７ Ｈｚ）， １０８．１３， ７２．３０， ６７．３６， ５４．４３， ４５．１７， ２８．２７． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２０Ｈ２１ＢｒＦＮ４Ｏ２ ＋に対する計算値，４４７．０８２６；実測値， ４４７．０８１８．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－８－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０８８）。
Figure 0007474269000170
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６２ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１７ （ｓ， １Ｈ）， ４．４９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４５ － ４．３８ （ｍ， １Ｈ）， ４．１０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．４８ － ２．２１ （ｍ， １０Ｈ）， ２．１４ （ｓ， ３Ｈ）， １．９１ － １．７６ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２０， １５３．３６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４６．９ Ｈｚ）， １５３．０８， １４８．９８， １４６．１３， １４３．２８， １３０．０９， １２８．０５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １１．７ Ｈｚ）， １２７．７２， １２５．４４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．３ Ｈｚ）， １１２．５０， １０９．５８， １０８．５５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．８ Ｈｚ）， １０８．１３， ７２．４０， ６７．３７， ５４．７８， ５３．１１， ５２．６５， ４５．７６， ２７．６１． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２３Ｈ２６ＢｒＦＮ５Ｏ２ ＋に対する計算値， ５０２．１２４８；実測値， ５０２．１２４０．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－８－［２－（ピロリジン－１－イル）エチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０８９）。
Figure 0007474269000171
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６２ （ｓ， １Ｈ）， ８．３３ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１７ （ｓ， １Ｈ）， ４．４９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４７ － ４．４１ （ｍ， １Ｈ）， ４．１０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６８ － ２．５３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５０ － ２．４０ （ｍ， ４Ｈ）， １．８９ － １．８１ （ｍ， ２Ｈ）， １．７３ － １．６５ （ｍ， ４Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．２０， １５３．３６ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４６．９ Ｈｚ）， １５３．０７， １４８．９８， １４６．１３， １４３．２８， １３０．０７， １２８．１０， １２７．７１， １２５．４４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．６ Ｈｚ）， １１２．４８， １０９．６０， １０８．５５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．８ Ｈｚ）， １０８．１５， ７２．３１， ６７．３７， ５３．５７， ５０．９７， ２９．５８， ２３．１４． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２２Ｈ２３ＢｒＦＮ４Ｏ２ ＋に対する計算値， ４７３．０９８３；実測値， ４７３．０９７６．
（±）－Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－８－［２－（ピペリジン－１－イル）エチル］－７，８－ジヒドロ［１，４］ジオキシノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０９０）。
Figure 0007474269000172
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．６２ （ｓ， １Ｈ）， ８．３２ （ｓ， １Ｈ）， ７．９３ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．０， １．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１７ （ｓ， １Ｈ）， ４．４９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．５， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４４ － ４．３７ （ｍ， １Ｈ）， ４．１０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １１．６， ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．４８ － ２．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４１ － ２．２７ （ｍ， ４Ｈ）， １．９０ － １．７７ （ｍ， ２Ｈ）， １．５４ － １．４５ （ｍ， ４Ｈ）， １．４２ － １．３４ （ｍ， ２Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ １５７．１９， １５３．３４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４６．７ Ｈｚ）， １５３．０７， １４９．００， １４６．１１， １４３．２９， １３０．０７， １２８．１０， １２７．７１， １２５．４４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．３ Ｈｚ）， １１２．４８， １０９．６０， １０８．５５ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．９ Ｈｚ）， １０８．１４， ７２．５０， ６７．４０， ５４．０２， ５３．８７， ２７．７０， ２５．６３， ２４．１３． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ２３Ｈ２５ＢｒＦＮ４Ｏ２ ＋に対する計算値， ４８７．１１３９；実測値， ４８７．１１３３．
Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－８，９－ジヒドロ－７Ｈ－［１，４］ジオキセピノ［２，３－ｇ］キナゾリン－４－アミン（ＪＧＫ０９１）。
Figure 0007474269000173
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．７１ （ｓ， １Ｈ）， ８．６５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， ７．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４８ （ｓ， １Ｈ）， ７．４３ （ｓ， １Ｈ）， ７．３９ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．２８ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ６．５， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．４１ （ｔ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３８ （ｔ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ２．３２ （ｐ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， １Ｈ）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １５７．０６， １５６．０８， １５３．９３， １５１．６２， １５０．１９ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．７ Ｈｚ）， １４７．８３， １２８．５３ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．４ Ｈｚ）， １２７．３９， １２５．３２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．８４， １１９．１５， １１１．４７， １１０．８５， １０８．６２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．３ Ｈｚ）， ７０．８６， ７０．５１， ３１．０３． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１７Ｈ１４ＢｒＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３９０．０２４８；実測値， ３９０．０２３６．
Ｎ－（３－ブロモ－２－フルオロフェニル）－２Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｇ］キナゾリン－８－アミン（ＪＧＫ０９２）。
Figure 0007474269000174
 １Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．６９ （ｓ， １Ｈ）， ８．５８ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， ７．３， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２８ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ８．１， ６．５， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２５ （ｂｒ， １Ｈ）， ７．１４ （ｓ， １Ｈ）， ７．１１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ８．２， １．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．１７ （ｓ， ２Ｈ）， １つのプロトンのシグナルが欠損 （おそらくクロロホルムシグナルによって隠れている）． １３Ｃ ＮＭＲ （１２６ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １５６．１０， １５３．３７， １５３．２２， １５０．２２ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ２４２．３ Ｈｚ）， １４９．３７， １４８．４３， １２８．６７ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １０．４ Ｈｚ）， １２７．２８， １２５．３０ （ｄ， ＪＣＦ ＝ ４．７ Ｈｚ）， １２１．８４， １１０．７５， １０８．６４ （ｄ， ＪＣＦ ＝ １９．４ Ｈｚ）， １０６．２９， １０２．４８， ９６．４９． ＨＲＭＳ （ＤＡＲＴ）： ｍ／ｚ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ Ｃ１５Ｈ１０ＢｒＦＮ３Ｏ２ ＋に対する計算値， ３６１．９９３５；実測値， ３６１．９９２５．
実施例１９：ＪＧＫシリーズの例示化合物の代謝試験
例示化合物（１０ｍＭ）を、ヒト、イヌ、マウス、またはラットの肝臓ミクロソーム（１ｍｇ／ｍＬ）中、３７℃で最長９０分間培養した。アセトニトリルを加えることにより反応を停止させた。対照（化合物を含まない）ミクロソーム試験を並行して実施した。Ｌｕｎａ Ｏｍｅｇａ Ｐｏｌａｒ Ｃ１８、１．６ ｍ、２．１×３０ｍｍカラムを装着したＷａｔｅｒｓ Ｘｅｖｏ Ｇ２ ＱＴ上でＬＣＭＳ試験を実施した。例示代謝産物の化学構造を図４７に示す。
Figure 0007474269000175
参照による組み込み
本明細書で言及する全ての刊行物及び特許の全体は、それぞれの個々の刊行物または特許が参照により組み込まれることが明示的及び個別に示されるかのように、参照により本明細書に組み込まれる。矛盾が生じた場合には、本明細書における任意の定義を含む本出願が優先される。
等価物
本発明の特定の実施形態について論述してきたが、上記の詳述内容は例示であり限定するものではない。本発明の多くの変化形態は、本明細書及び以下の特許請求の範囲を精査することにより当業者に明らかとなるであろう。本発明の全範囲は、その等価物の全範囲を加えた特許請求の範囲、及びこのような変形形態を加えた本明細書を参照することによって明らかとなるはずである。

本発明は例えば以下の態様を含む。
［項１]
式Ｉもしくは式Ｉ＊の化合物、
Figure 0007474269000176
 またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｚはアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ２ａ及びＲ２ｂはそれぞれ、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から独立して選択され、
Ｒ３は、水素、アルキル、またはアシルであり、
Ｒ４はアルコキシであり、
Ｒ５はアルキルであり、Ｒ７及びＲ８はそれぞれ、水素、アルキル、例えば、アルコキシアルキル、アラルキルなど、またはアリールアシルから独立して選択され、
Ｒ１１が、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲ７、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールであり、
Ｒ１２が、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＲ８、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールであるか、または、Ｒ１１及びＲ１２が共に炭素環または複素環を完成させるかである、
前記化合物またはその薬学的に許容される塩。
［項２］
式中、Ｒ２ａが水素である場合、Ｒ２ｂは、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から選択される、項１に記載の化合物。
［項３］
式中、Ｒ２ｂが水素である場合、Ｒ２ａは、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から選択される、項１に記載の化合物。
［項４］
式（ＩＶａ）もしくは式（ＩＶｂ）の化合物、
Figure 0007474269000177
 である先行項のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｒ６のそれぞれの例は、アルキル、アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、ハロ、アルケニル、アルキニル、アラルキルオキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールから独立して選択される、
前記化合物またはその薬学的に許容される塩。
［項５］
式中、Ｒ１１は水素である、項１から項４のいずれか１項に記載の化合物。
［項６］
式中、Ｒ１１はＯＲ７である、項１から項４のいずれか１項に記載の化合物。
［項７］
式中、Ｒ７は水素である、項６に記載の化合物。
［項８］
式中、Ｒ７はアルキルである、項６に記載の化合物。
［項９］
式中、Ｒ７はアルコキシアルキルである、項６に記載の化合物。
［項１０］
式中、Ｒ７はアリールアシルである、項６に記載の化合物。
［項１１］
式中、Ｒ１２は、ヘテロアリール、例えば、フラニルなどである、項１から項１０のいずれか１項に記載の化合物。
［項１２］
式中、前記ヘテロアリールは、アルキル、アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、ハロ、
Figure 0007474269000178
 で置換されている、項１１に記載の化合物。
［項１３］
式中、Ｒ１２はＯＲ８である、項１から項１０のいずれか１項に記載の化合物。
［項１４］
式中、Ｒ８は水素である、項１３に記載の化合物。
［項１５］
式中、Ｒ８はアルコキシアルキルである、項１３に記載の化合物。
［項１６］
式中、Ｒ８は、
Figure 0007474269000179
 で置換されたアルキルである、項１５に記載の化合物。
［項１７］
式中、Ｒ８はアシルである、項１５に記載の化合物。
［項１８］
式中、Ｒ１１及びＲ１２は結合して、炭素環または複素環、例えば、５員環、６員環、または７員環の炭素環または複素環などを形成する、項１から項４のいずれか１項に記載の化合物。
［項１９］
式中、前記炭素環または前記複素環は、ヒドロキシル、アルキル（例えば、メチル）、またはアルケニル（例えば、ビニル）で置換されている、項１８に記載の化合物。
［項２０］
式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、もしくはＩｄの化合物、
Figure 0007474269000180
 である項１から項３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり、
Ｚはアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１は水素またはアルキルであり、
Ｒ２ａ及びＲ２ｂはそれぞれ、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から独立して選択され、
Ｒ３は、水素、アルキル、またはアシルであり、
Ｒ４はアルコキシであり、
Ｒ５はアルキルであり、
ｎは０～３である、
前記化合物またはその薬学的に許容される塩。
［項２１］
式中、Ｒ２ａまたはＲ２ｂのいずれかは、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から選択される、項１から項２０のいずれか１項に記載の化合物。
［項２２］
式（ＩＩａ）もしくは式（ＩＩｂ）の化合物、
Figure 0007474269000181
 である項２０または項２１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｒ６のそれぞれの例は、アルキル、アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、ハロ、アルケニル、アルキニル、アラルキルオキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールから独立して選択される、
前記化合物またはその薬学的に許容される塩。
［項２３］
式中、Ｒ１は、ヘテロシクリル（例えば、窒素含有ヘテロシクリル、例えば、モルホリニル、ピペリジニル、ピロロジニル、または、Ｎ－メチルピペラジニルなどのピペラジニルなど）で置換されたアルキル（例えば、メチルまたはエチル）である、項２２に記載の化合物。
［項２４］
式中、Ｒ１は、アミノ（例えば、ジメチルアミノ）で置換されたアルキル（例えば、メチルまたはエチル）である、項２２に記載の化合物。
［項２５］
式中、Ｒ１は、式Ａ、
Figure 0007474269000182
 で表され、
式中、
Ｒ１３ａ及びＲ１３ｂがそれぞれ、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールから独立して選択されるか、または、Ｒ１３ａ及びＲ１３ｂが結合してヘテロシクリルを形成するかであり、
ｙは０～３である、
項２０から項２４のいずれか１項に記載の化合物。
［項２６］
式中、Ｒ１は、ヒドロキシルで置換されたアルキル（例えば、メチルまたはエチル）である、項２２に記載の化合物。
［項２７］
式中、Ｒ１はＳ配置である、項２０から項２６のいずれか１項に記載の化合物。
［項２８］
式中、Ｒ１はＲ配置である、項２０から項２６のいずれか１項に記載の化合物。
［項２９］
式中、Ｒ３は水素である、項１から項２８のいずれか１項に記載の化合物。
［項３０］
式中、Ｒ３はアシルである、項１から項２８のいずれか１項に記載の化合物。
［項３１］
式中、Ｒ３はアルキルアシルである、項３０に記載の化合物。
［項３２］
式中、Ｒ３はアルキルオキシアシルである、項３０に記載の化合物。
［項３３］
式中、Ｒ３はアシルオキシアルキルである、項３０に記載の化合物。
［項３４］
式中、Ｒ３は
Figure 0007474269000183
 であり、
Ｒ９はアルキルである、
項３０に記載の化合物。
［項３５］
式中、Ｚは、２－フルオロ－３－クロロフェニル、２－フルオロフェニル、２，３－ジフルオロフェニル、２，４－ジフルオロフェニル、２，５－ジフルオロフェニル、２，６－ジフルオロフェニル、２，４，６－トリフルオロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２－フルオロ－３－ブロモフェニル、２－フルオロ－３－エチニルフェニル、及び２－フルオロ－３－（トリフルオロメチル）フェニルである、項１から項３４のいずれか１項に記載の化合物。
［項３６］
式中、Ｚは３－エチニルフェニルである、項１から項３４のいずれか１項に記載の化合物。
［項３７］
式中、Ｚは３－クロロ－４－（（３－フルオロベンジル）オキシ）ベンゼンである、項１から項３４のいずれか１項に記載の化合物。
［項３８］
式中、Ｚは３－クロロ－２－（トリフルオロメチル）フェニルである、項１から項３４のいずれか１項に記載の化合物。
［項３９］
式中、Ｚは２－フルオロ－３－ブロモフェニルである、項１から項３４のいずれか１項に記載の化合物。
［項４０］
式中、Ｚは２－フルオロ－５－ブロモフェニルである、項１から項３４のいずれか１項に記載の化合物。
［項４１］
式中、Ｚは２，６－ジフルオロ－５－ブロモフェニルである、項１から項３４のいずれか１項に記載の化合物。
［項４２］
式中、
Ｚは、
Figure 0007474269000184
 から選択される１つのＲ６で置換されており、
Ｒ９及びＲ１０は、アルキルから独立して選択される、
項１から項３４のいずれか１項に記載の化合物。
［項４３］
式（ＩＩＩａ）の化合物、
Figure 0007474269000185
 である項１から項３４のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
それぞれのＲ６は、フルオロ、クロロ、またはブロモから独立して選択される、
前記化合物またはその薬学的に許容される塩。
［項４４］
式（ＩＩＩｂ）の化合物、
Figure 0007474269000186
 である項１から項３４のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
それぞれのＲ６は、フルオロ、クロロ、またはブロモから独立して選択される、
前記化合物またはその薬学的に許容される塩。
［項４５］
式（ＩＩＩｃ）の化合物、
Figure 0007474269000187
 、である項１から項３４のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
それぞれのＲ６は、フルオロ、クロロ、またはブロモから独立して選択される、
前記化合物またはその薬学的に許容される塩。
［項４６］
式中、Ｒ２ａは水素である、項１から項４５のいずれか１項に記載の化合物。
［項４７］
式中、Ｒ２ａはハロ（例えば、フルオロ）である、項１から項４５のいずれか１項に記載の化合物。
［項４８］
式中、Ｒ２ｂは水素である、項１から項４７のいずれか１項に記載の化合物。
［項４９］
式中、Ｒ２ｂはハロ（例えば、フルオロ）である、項１から項４７のいずれか１項に記載の化合物。
［項５０］
Figure 0007474269000188
 、である、項１から項４９のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［項５１］
Figure 0007474269000189
Figure 0007474269000190
、である、項１から項４９のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［項５２］
Figure 0007474269000191
 、である、項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［項５３］
Figure 0007474269000192
 、である、項１から項４９のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
［項５４］
先行項のいずれか１項に記載の化合物及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
［項５５］
項１から項５４のいずれか１項に記載の化合物または組成物を対象に投与することを含む、ＥＧＦＲまたはそのバリアント、例えば、ΔＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ細胞外変異体、ＥＧＦＲ Ａ２８９、ＥＧＦＲ Ｔ２６３、及び／またはＥＧＦＲ活性化変異体、例えば、ｅｘ１９欠失などを阻害するための方法。
［項５６］
項１から項５４のいずれか１項に記載の化合物または組成物をがんの治療を必要とする対象に投与することを含む、がんを治療するための方法。
［項５７］
前記がんは、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、心臓癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、線維肉腫、胃癌、胃腸癌、頭、脊椎、及び頸部の癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、肝臓癌、リンパ腫、黒色腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、陰茎癌、精巣胚細胞癌、胸腺腫癌、胸腺癌、肺癌、卵巣癌、または前立腺癌である、項５６に記載の方法。
［項５８］
前記がんは、神経膠腫、星状細胞腫、または膠芽腫である、項５７に記載の方法。
［項５９］
対象におけるがんを治療するための方法であって、グルコース代謝阻害剤及び追加の薬剤を前記対象に投与することを含み、前記グルコース代謝阻害剤は項１から項５３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩であり、前記追加の薬剤は細胞質ｐ５３安定化剤である、前記方法。
［項６０］
前記がんは、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、心臓癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、線維肉腫、胃癌、胃腸癌、頭、脊椎、及び頸部の癌、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、肝臓癌、リンパ腫、黒色腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、陰茎癌、精巣胚細胞癌、胸腺腫癌、胸腺癌、肺癌、卵巣癌、または前立腺癌である、項５９に記載の方法。
［項６１］
前記がんは、多形膠芽腫、神経膠腫、低悪性度星状細胞腫、混合乏突起星状細胞腫、毛様性星状細胞腫、多形性黄色星状膠細胞腫、上衣下巨細胞性星状細胞腫、退形成星状細胞腫、ＣＮＳがん、非ＣＮＳがん、もしくはＣＮＳ転移、または肺癌である、項５９に記載の方法。
［項６２］
前記がんは、神経膠腫、星状細胞腫、または膠芽腫である、項５９に記載の方法。
［項６３］
がん細胞増殖を抑制する、項５５から項６２のいずれか１項に記載の方法。
［項６４］
前記対象は、グルコース代謝阻害剤の影響を受けやすいがんを有することが確認されている、項５９から項６３のいずれか１項に記載の方法。
［項６５］
前記対象は、
ａ．前記対象から第１の血液試料を得ること、
ｂ．前記対象にケトン誘発食を実施すること、
ｃ．一定期間ケトン誘発食を実施した後に前記対象から第２の血液試料を得ること、
ｄ．前記第１の血液試料中及び前記第２の血液試料中におけるグルコースレベルを測定すること、
ｅ．前記第２の血液試料中における前記グルコースレベルを、前記第１の血液試料中における前記グルコースレベルと比較すること、及び
ｆ．前記第２の血液試料中における前記グルコースレベルが前記第１の血液試料中におけるグルコースレベルと比較して低下した場合に、前記対象が影響を受けやすいことを確認すること、
を含む方法により、前記グルコース代謝阻害剤の影響を受けやすいことが確認されている、項６４に記載の方法。
［項６６］
前記第２の血液試料と対照血液試料の間の前記グルコースレベルの低下は、約０．１５ｍＭまたは０．１５ｍＭ超である、項６５に記載の方法。
［項６７］
前記第２の血液試料と対照血液試料の間の前記グルコースレベルの低下は、約０．２０ｍＭまたは０．２０ｍＭ超である、項６５に記載の方法。
［項６８］
前記第２の血液試料と対照血液試料の間の前記グルコースレベルの低下は、０．１５ｍＭ～２．０ｍＭの範囲である、項６５に記載の方法。
［項６９］
前記第２の血液試料と対照血液試料の間の前記グルコースレベルの低下は、０．２５ｍＭ～１．０ｍＭの範囲である、項６５に記載の方法。
［項７０］
前記細胞質ｐ５３安定化剤はＭＤＭ２阻害剤である、項５９から項６９のいずれか１項に記載の方法。
［項７１］
前記ＭＤＭ２阻害剤はヌトリンである、項７０に記載の方法。
［項７２］
前記ＭＤＭ２阻害剤はヌトリン－３またはイダサヌトリンである、項７０に記載の方法。
［項７３］
前記対象は、５０ｍｇ～１６００ｍｇのイダサヌトリンを投与される、項７２に記載の方法。
［項７４］
前記対象は、１００ｍｇのイダサヌトリンを投与される、項７２または項７３に記載の方法。
［項７５］
前記対象は、１５０ｍｇのイダサヌトリンを投与される、項７２または項７３に記載の方法。
［項７６］
前記対象は、３００ｍｇのイダサヌトリンを投与される、項７２または項７３に記載の方法。
［項７７］
前記対象は、４００ｍｇのイダサヌトリンを投与される、項７２または項７３に記載の方法。
［項７８］
前記対象は、６００ｍｇのイダサヌトリンを投与される、項７２または項７３に記載の方法。
［項７９］
前記対象は、１６００ｍｇのイダサヌトリンを投与される、項７２または項７３に記載の方法。
［項８０］
前記ＭＤＭ２阻害剤は、ＲＯ５０４５３３７、ＲＯ５５０３７８１、ＲＯ６８３９９２１、ＳＡＲ４０５８３８、ＤＳ－３０３２、ＤＳ－３０３２ｂ、またはＡＭＧ－２３２である、項７０に記載の方法。
［項８１］
前記細胞質ｐ５３安定化剤はＢＣＬ－２阻害剤である、項５９から項７０のいずれか１項に記載の方法。
［項８２］
前記ＢＣＬ－２阻害剤は、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドＧ３１３９、ｍＲＮＡアンタゴニストＳＰＣ２９９６、ベネトクラックス（ＡＢＴ－１９９）、ＧＤＣ－０１９９、オバトクラックス、パクリタキセル、ナビトクラックス（ＡＢＴ－２６３）、ＡＢＴ－７３７、ＮＵ－０１２９、Ｓ ０５５７４６、またはＡＰＧ－１２５２である、項８１に記載の方法。
［項８３］
前記細胞質ｐ５３安定化剤はＢｃｌ－ｘＬ阻害剤である、項５９から項７０のいずれか１項に記載の方法。
［項８４］
前記Ｂｃｌ－ｘＬ阻害剤は、ＷＥＨＩ ５３９、ＡＢＴ－２６３、ＡＢＴ－１９９、ＡＢＴ－７３７、サブトクラックス、ＡＴ１０１、ＴＷ－３７、ＡＰＧ－１２５２、またはガンボギン酸である、項８３に記載の方法。
［項８５］
前記グルコース代謝阻害剤及び前記細胞質ｐ５３安定化剤は同一の組成物で投与される、項５９から項８４のいずれか１項に記載の方法。
［項８６］
前記グルコース代謝阻害剤及び前記細胞質ｐ５３安定化剤は別々の組成物で投与される、項５９から項８４のいずれか１項に記載の方法。
［項８７］
前記がんは再発性または難治性である、項５５から項８６のいずれか１項に記載の方法。
［項８８］
前記がんは未治療である、項５５から項８７のいずれか１項に記載の方法。
［項８９］
別の治療薬の投与を更に含む、項５９から項８８のいずれか１項に記載の方法。
［項９０］
グルコース代謝阻害剤及び細胞質ｐ５３安定化剤を含む医薬組成物であって、前記グルコース代謝阻害剤は項１から項５３のいずれか１項に記載の化合物である、前記医薬組成物。
［項９１］
前記細胞質ｐ５３安定化剤はＭＤＭ２阻害剤である、項９０に記載の医薬組成物。
［項９２］
前記ＭＤＭ２阻害剤はヌトリンである、項９１に記載の医薬組成物。
［項９３］
前記ＭＤＭ２阻害剤はヌトリン－３またはイダサヌトリンである、項９１または項９２に記載の医薬組成物。
［項９４］
前記ＭＤＭ２阻害剤は、ＲＯ５０４５３３７、ＲＯ５５０３７８１、ＲＯ６８３９９２１、ＳＡＲ４０５８３８、ＤＳ－３０３２、ＤＳ－３０３２ｂ、またはＡＭＧ－２３２である、項９１に記載の医薬組成物。
［項９５］
前記細胞質ｐ５３安定化剤はＢＣＬ－２阻害剤である、項９０に記載の医薬組成物。
［項９６］
前記ＢＣＬ－２阻害剤は、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドＧ３１３９、ｍＲＮＡアンタゴニストＳＰＣ２９９６、ベネトクラックス（ＡＢＴ－１９９）、ＧＤＣ－０１９９、オバトクラックス、パクリタキセル、ナビトクラックス（ＡＢＴ－２６３）、ＡＢＴ－７３７、ＮＵ－０１２９、Ｓ ０５５７４６、またはＡＰＧ－１２５２である、項９５に記載の医薬組成物。
［項９７］
前記細胞質ｐ５３安定化剤はＢｃｌ－ｘＬ阻害剤である、項９０に記載の医薬組成物。
［項９８］
前記Ｂｃｌ－ｘＬ阻害剤は、ＷＥＨＩ ５３９、ＡＢＴ－２６３、ＡＢＴ－１９９、ＡＢＴ－７３７、サブトクラックス、ＡＴ１０１、ＴＷ－３７、ＡＰＧ－１２５２、またはガンボギン酸である、項９７に記載の医薬組成物。
［項９９］
スキーム１またはスキーム２、
Figure 0007474269000193
Figure 0007474269000194
 により、項１から項５２のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を作製するための方法であって、
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり、
Ｚはアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１はアルキルであり、
Ｒ２ａ及びＲ２ｂはそれぞれ、水素、アルキル、ハロ、ＣＮ、及びＮＯ２から独立して選択され、
Ｒ３は、水素、アルキル、またはアシルであり、
Ｒ４はアルコキシであり、
Ｒ５はアルキルであり、
Ｒ２１は、脱離基、例えば、ハロアルキルまたはスルホニルアルキルで置換されたアルキルであり、
Ｂは塩基であり、
Ｎｕは、窒素含有複素環（例えば、少なくとも１つのＮ－Ｈ結合を有する）、アミノアルキル、またはヒドロキシアルキルであり、
Ｓｖ１は溶媒であり、
ｎは０～３である、
前記方法。
［項１００］
式中、Ｒ２１はスルホニルアルキル（例えば、ＣＨ３Ｓ（Ｏ）２ＯＣＨ２－）である、項９９に記載の方法。
［項１０１］
式中、Ｂは窒素塩基（例えば、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン）である、項９９または項１００に記載の方法。
［項１０２］
式中、Ｎｕは、少なくとも１つのＮ－Ｈ結合を有する複素環（例えば、モルホリン、Ｎ－メチルピペラジン、ピペリジン、またはピロリジン）である、項９９から項１０１のいずれか１項に記載の方法。
［項１０３］
式中、Ｎｕはアミノアルキル（例えば、ジメチルアミン）である、項９９から項１０２のいずれか１項に記載の方法。
［項１０４］
式中、溶媒は非プロトン性溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド）である、項９９から項１０３のいずれか１項に記載の方法。
［項１０５］
スキーム３またはスキーム４、
Figure 0007474269000195
Figure 0007474269000196
 による工程を更に含む項９９から項１０４のいずれか１項に記載の方法であって、
式中、
Ｒ２２はアルキルまたはヒドロキシアルキルであり、
Ｒ２３ａ及びＲ２３ｂはそれぞれアルキルであり、
Ｒ２４はアミノアリールまたはアミノヘテロアリールであり、
Ｓｖ２は酸である、
前記方法。
［項１０６］
式中、Ｒ２２はヒドロキシアルキルである、項１０５に記載の方法。
［項１０７］
式中、Ｒ２３ａ及びＲ２３ｂはそれぞれメチルである、項１０５または項１０６に記載の方法。
［項１０８］
式中、Ｒ２４はアミノアリールである、項１０５から項１０７のいずれか１項に記載の方法。
［項１０９］
式中、Ｒ２４はアミノヘテロアリールである、項１０５から項１０７のいずれか１項に記載の方法。
［項１１０］
式中、Ｓｖ２はアルキル酸（例えば、酢酸）である、項１０５から項１０９のいずれか１項に記載の方法。
［項１１１］
前記工程は、１１５～１５０℃の範囲の温度で実施される、項１０５から項１１０のいずれか１項に記載の方法。
［項１１２］
前記工程は、１２５～１３０℃の範囲の温度で実施される、項１１１に記載の方法。
［項１１３］
前記工程は、塩基、例えば、水酸化アンモニウムなどを用いた処理を更に含む、項１０５から項１１２のいずれか１項に記載の方法。
［項１１４］
精製工程を更に含む、項９９から項１１３のいずれか１項に記載の方法。
［項１１５］
前記精製工程は、カラムクロマトグラフィー、分取薄層クロマトグラフィー、または高速液体クロマトグラフィーを含む、項１１４に記載の方法。

Claims (15)

  1. 下記：
    からなる群から選択される化合物またはその薬学的に許容される塩。
  2. 化合物が、
    である、請求項１に記載の化合物。
  3. 化合物が、
    である、請求項１に記載の化合物。
  4. 化合物が、
    である、請求項１に記載の化合物。
  5. 化合物が、
    である、請求項１に記載の化合物。
  6. 化合物が、
    である、請求項１に記載の化合物。
  7. 化合物が、
    である、請求項１に記載の化合物。
  8. 化合物が、
    である、請求項１に記載の化合物。
  9. 化合物が、
    である、請求項１に記載の化合物。
  10. 化合物が、
    である、請求項１に記載の化合物。
  11. 化合物が、
    である、請求項１に記載の化合物。
  12. 請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
  13. 請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含むがんを治療するための医薬であって、前記がんが、脳癌、肺癌、ならびに頭、脊椎、及び頸部の癌から選択される、前記医薬。
  14. 前記がんが、神経膠腫、星状細胞腫、または膠芽腫である、請求項１３に記載の医薬。
  15. がんを治療するための医薬の製造のための、請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
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