KR20210151820A - 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법 - Google Patents
암을 치료하기 위한 조성물 및 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20210151820A KR20210151820A KR1020217032873A KR20217032873A KR20210151820A KR 20210151820 A KR20210151820 A KR 20210151820A KR 1020217032873 A KR1020217032873 A KR 1020217032873A KR 20217032873 A KR20217032873 A KR 20217032873A KR 20210151820 A KR20210151820 A KR 20210151820A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- compound
- cancer
- alkyl
- inhibitor
- hydrogen
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
- C07D239/70—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D239/72—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines
- C07D239/86—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines with hetero atoms directly attached in position 4
- C07D239/94—Nitrogen atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
- A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
- C07D239/70—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D239/72—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines
- C07D239/95—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines with hetero atoms directly attached in positions 2 and 4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
- C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
- C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D491/04—Ortho-condensed systems
- C07D491/056—Ortho-condensed systems with two or more oxygen atoms as ring hetero atoms in the oxygen-containing ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/05—Isotopically modified compounds, e.g. labelled
Abstract
본 개시내용은 EGFR 티로신 키나제의 활성을 조절하기 위해 혈액 뇌 장벽에 침투할 수 있는 화합물에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 교모세포종 및 다른 EGFR 매개된 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 억제제의 존재 하에 변경된 글루코스 대사를 갖는 것으로 결정된 교모세포종 및 다른 EGFR 매개된 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 대상체에게 글루코스 대사 억제제 및 세포질 p53 안정화제를 투여하는 방법을 제공한다.
Description
관련 출원
본 출원은 2019년 3월 15일에 출원된 미국 가출원 제62/819,332호 및 2019년 9월 23일에 출원된 제62/904,241를 우선권으로 주장하며, 이는 그 전문이 여기서 참조로 포함된다.
배경
교모세포종 (다형상 교모세포종; GBM)은 성인에서 주요 일차 악성 뇌종양을 차지한다. 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 유전자의 증폭 및 돌연변이는 GBM에서 마주치는 특징적인 유전적 비정상이다 (Sugawa, 등 (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. 87: 8602-8606; Ekstrand, 등 (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. 89: 4309-4313). 티로신 키나제 억제제 (TKI), 단클론성 항체, 백신, 및 RNA-기반 물질을 포함한, EGFR 또는 그것의 돌연변이체 구성적으로 활성 형태인, ΔEGFR을 표적화하는 광범위한 잠재적인 요법이 GBM의 치료를 위해 현재 개발 중이거나 또는 임상시험 중이다. 그러나, 현재까지 임상에서 그것의 효능은 선천적 및 후천적 약물 내성 둘 모두에 의해 제한되어 왔다 (Taylor, 등 (2012) Curr. Cancer Drug Targets. 12:197-209). 주요한 한계는 현행 요법 예컨대 에를로티닙, 라파티닙, 게피티닙 및 아파티닙이 불량한 뇌 침투성을 갖는 것이다 (Razier, 등 (2010) Neuro-Oncology 12:95-103; Reardon, 등 (2015) Neuro-Oncology 17:430-439; Thiessen, 등 (2010) Cancer Chemother. Pharmacol. 65:353-361).
분자 표적화된 요법은 암 치료에 혁신을 일으키고 현대 정밀 의약에 대한 길을 열었다. 그러나, 잘 정의된 실행가능한 유전적 변경에도 불구하고, 교모세포종 (GBM) 환자에서는 표적화된 약물이 실패했다. 이것은 대부분 종양을 사멸하는데 필요한 수준으로 대부분의 표적화된 물질의 불충분한 CNS 침투에 기인하고; 이는 잠재적으로 치료적 저항을 유도하는 강력한 적응성 기전을 유발한다. 원발 병변 및 보상 신호전달 경로(들)를 억제하는 약물 조합체가 매력적이지만, 이들 병용 요법 전략은 각각의 약물의 역치이하 투약으로 이어지는 증진된 독성에 의해 방해된다.
대안적인 치료적 접근법은 종양 생존을 위한 중요한 기능성 특성을 변형시키기 위해 종양원성 드라이버를 표적화하여, 세포를 직교 제2 히트에 취약하게 한다6. 이 "합성 치사 (synthetic lethal)" 전략은 종양유전자-조절된 기능성 네트워크(들)가 종양 세포사 경로와 교차하는 경우 특히 매력적일 수 있다. 특정 예에서, 종양원성 신호전달은 글루코스 대사를 유도하여 고유 세포자멸사를 억제하고 생존을 촉진시킨다. 표적화된 요법으로 종양원성 드라이버의 억제는 약화된 글루코스 소비의 직접적인 결과로서 고유 세포자멸적 조직을 유발할 수 있다. 이들 종양형성 경로의 뒤얽힌 성질은 합리적인 병용 치료를 위한 치료적 기회를 제공할 수 있지만, 그러나, 이것은 아직 조사되지 않았다.
전술한 관점에서, 교모세포종 및 다른 암의 치료를 위한 뇌 침투 화학치료제에 대한 임상적 요구가 남아 있다.
발명의 요약
한 양태에서, 본 개시내용은 식 I 또는 식 I*의 화합물:
(I)
(I*)
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 여기서:
Z는 아릴 또는 헤테로아릴;
R2a 및 R2b는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택되고;
R3는 수소, 알킬, 또는 아실;
R4는 알콕시;
R5는 알킬; R7 및 R8는, 각각 독립적으로, 수소, 알킬, 예컨대 알콕시알킬, 아르알킬, 또는 아릴아실로부터 선택되고;
R11는 수소, 알킬, 할로, CN, NO2, OR7, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴; 그리고
R12는 수소, 알킬, 할로, CN, NO2, OR8, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴;
또는 R11 및 R12 함께 결합하여 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 링을 완성한다.
특정 양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용은 EGFR 또는 ΔEGFR을 억제하는 방법을 제공하되, 상기 방법은 대상체에게 개시내용의 화합물의 일정 양을 투여하는 것을 포함한다.
특정 양태에서, 본 개시내용은 암을 치료하는 방법을 제공하되, 상기 방법은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 개시내용의 화합물의 일정 양을 투여하는 것을 포함한다 일부 구현예에서, 암은 다형상 교모세포종이다.
특정 양태에서, 본 개시내용은 글루코스 대사 억제제 및 세포질 p53 안정화제를 대상체에게 투여하는 것를 포함하는, 암을 치료하는 방법를 제공하고, 여기서 글루코스 대사 억제제는 개시내용의 화합물이다. 일부 구현예에서, 암은 다형상 교모세포종이다.
특정 양태에서, 본 개시내용은 식 I 또는 식 I*의 화합물의 제조방법를 제공한다.
도면의 간단한 설명
도 1은 JGK005 10 mg/kg에서 및 25 mg/kg에서 에를로티닙의 경구 약동학을 도시한다. JGK005는 에를로티닙에 비교하여 양호한 CNS 침투를 갖는다.
도 2는 각각 EGFR 돌연변이체 교모세포종 HK301 및 GBM39에 대한 에를로티닙 (좌측 칼럼) 및 JGK005 (우측 칼럼)의 활성을 도시한다. JGK005는 양 사례에서 에를로티닙보다 낮은 활성을 갖는다.
도 3은 에를로티닙 및 JGK010의 무세포 EGFR 키나제 활성을 도시한다. 양 화합물은 대략 8 nM의 IC50을 갖는다.
도 4는 HK301 및 GBM39 세포에 대한 에를로티닙 (좌측 칼럼), JGK005 (중심 칼럼), 및 JGK010 (우측 칼럼)의 효력을 도시한다.
도 5는 JGK005 10 mg/kg에서 및 JGK010 10 mg/kg에서의 경구 약동학을 도시한다.
도 6은 다중 일차 교모세포종 세포주에서 EGFR 억제제의 비교를 도시한다. 칼럼 1-4: GBM39 (EGFRvIII), 5-8: GS100 (EGFRwt/EGFRvIII), 9-12: GS017 (A289T), 13-16: GS024 (EGFR 뭇염색체).
도 7a는 EGFR 변경된 폐암에서 JGK010 활성을 도시한다. 도 7b는 EGFR Amp 표피모양 암종에서 JGK010 활성을 도시한다.
도 8a는 6 mg/kg에서 JGK010 경구 약동학을 도시한다. 도 8b는 10 mg/kg에서 JGK010 경구 약동학을 도시한다. 도 8c는 6 mg/kg에서 JGK010 IV 약동학을 도시한다. 도 8d는 6 mg/kg에서 JGK010 IP 약동학을 도시한다.
도 9는 EGFR Amp WT + vIII HK301에 대한 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 활성을 도시한다.
도 10은 EGFR vIII Amp GBM 39에 대한 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 활성을 도시한다.
도 11은 HK301 세포에 대한 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 활성을 도시한다.
도 12는 GBM 39 세포에 대한 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 활성을 도시한다.
도 13a는 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 포스포르-EGFR vIII 억제를 도시한다. 도 13b는 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 포스포르-EGFR vIII 억제를 도시한다.
도 14a는 JGK005의 약동학을 도시한다. 도 14b는 JGK005의 약동학을 도시한다.
도 15a는 JGK038의 약동학을 도시한다. 도 15b는 JGK038의 약동학을 도시한다.
도 16a는 JGK010의 약동학을 도시한다. 도 16b는 JGK010의 약동학을 도시한다.
도 17a는 JGK037의 약동학을 도시한다. 도 17b는 JGK037의 약동학을 도시한다.
도 18a는 에를로티닙과 JGK037간의 마우스 뇌/혈액 약동학의 비교를 도시한다. 도 18b는 에를로티닙과 JGK037간의 마우스 뇌/혈액 약동학의 비교를 도시한다.
도 19는 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 뇌 침투를 도시한다.
도 20은 RLU 변화에 대한 비히클 또는 JGK037 중 어느 하나로 치료의 효과를 도시한다.
도 21a-21f은 EGFR-유도된 글루코스 대사의 억제가 최소 세포사를 유도하지만 세포자멸사에 대해 GBM 세포를 프라임(prime)하는 것을 도시한다. 도 21a는 19명의 환자-유래된 GBM 신경아교종구에서 비히클에 비하여 에를로티닙 치료의 4시간 후 18F-FDG 흡수에서 변화 퍼센트를 도시한다. "대사 반응군" (청색)은 비히클에 비하여 18F-FDG 흡수에서 상당한 감소를 나타내는 샘플이고, 반면에 "비-반응군" (적색)은 상당한 감소를 나타내지 않는다. 도 21b는 비히클에 비하여 12 시간의 에를로티닙 치료로 글루코스 소비 및 락테이트 생산에서의 변화 퍼센트를 도시한다. 측정은 Nova Biomedical BioProfile 분석기를 사용하여 이루어졌다. 도 21c는 72 시간 동안 에를로티닙으로 치료 후 대사 반응군 (청색, n=10) 또는 비-반응군 (적색, n=9)의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 21d는 24시간 동안 에를로티닙으로 치료된 대사 반응군 또는 비-반응군에서 각각의 BH3 펩타이드 (BIM, BID, 또는 PUMA)에 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같이 프라이밍에서 비히클 대조군에 비하여 변화 퍼센트를 도시한다. 도 21e는 하기를 도시한다: 좌측: HK301 세포 과발현 GFP 대조군 또는 GLUT1 및 GLUT3 (GLUT1/3)의 전체 세포 용해물의 면역블롯. 우측: 12 시간의 에를로티닙 치료 후 HK301-GFP 또는 HK301-GLUT1/3의 글루코스 소비 또는 락테이트 생산에서의 변화. 값은 비히클 대조군에 대비한 것이다. 도 21f는 HK301-GFP 또는 HK301-GLUT1/3 세포를 사용하여 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 농도는 1 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.
도 22a-22h는 세포질 p53이 고유 세포자멸사에 EGFR을 연결시키는 것을 도시한다. 도 22a는 대조군 가이드 RNA (sgCtrl) 또는 p53 가이드 RNA (p53KO)로 2개 반응군 (HK301 및 HK336) 발현 CRISPR/CAS9 단백질에서 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 22b는 24시간 동안 에를로티닙으로 치료된 sgCtrl 및 p53KO 세포에서 BIM 펩타이드에 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같이 프라이밍에서 비히클 대조군에 비하여 변화 퍼센트를 도시한다. 도 22c는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 22d는 p53 단백질의 면역형광이 DAPI 염색과 조합하여 HK301 sgCtrl, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 단백질 편재화를 밝혔다는 것을 도시한다 (척도 막대 = 20 μm). 신경아교종구가 먼저 단일 세포로 해리되고 제조자 지침에 따라 Cell-Tak (Corning)을 사용하여 96-웰 플레이트에 부착되었다. 부착된 세포는 그 다음 10분 동안 빙냉 메탄올로 고정되고 그 다음 PBS로 3회 세정되었다. 세포는 그 다음 PBS에 10% FBS 및 3% BSA를 함유하는 차단 용액으로 1시간 동안 인큐베이션되고 후속으로 4°C에서 밤새 p53 (Santa Cruz, SC-126, 1:50의 희석) 항체로 인큐베이션되었다. 다음 날, 세포는 이차 항체 (Alexa Fluor 647, 희석 1:2000)로 1시간 동안 인큐베이션되고 10분 동안 DAPI 염색되고, 그 다음 캐스케이드 II 형광 카메라가 장착된 Nikon TI Eclipse 현미경 (Roper Scientific)을 사용하여 이미지화되었다. 세포는 461 nM 및 647 nM에서 방출로 이미지화되고 그 다음 NIS-Elements AR 분석 소프트웨어를 사용하여 가공되었다. 도 22e는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 24시간 동안 100 nM 독소루비신 치료 이후의 표지된 mRNA 수준에서의 변화를 도시한다. 수준은 각각의 DMSO 처리된 세포에 대해 정규화되었다. 도 22f는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서인 것을 제외하고 22b에 유사한 데이터를 도시한다. 도 22g는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53R175H, p53KO + p53R273H, 및 p53KO + p53NES에서인 것을 제외하고 22e에 유사한 데이터를 도시한다. 도 22h는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53R175H, p53KO + p53R273H, 및 p53KO + p53NES에서인 것을 제외하고 22b 및 22f에 유사한 데이터를 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 농도는 1 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.
도 23a-23f은 EGFRi-대사 반응군에서 세포질 p53에 결합 및 격리함에 의해 Bcl-xL이 GBM 세포사를 예방하는 것을 도시한다. 도 23a는 24시간의 에를로티닙 치료 이후의 2개 대사 반응군 (HK301 및 GBM39)에서 p53의 면역침강을 도시한다. 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 아래는 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입)이다. 도 23b는 2개의 비-반응군 (HK393 및 HK254)에서인 것을 제외하고 23a에 유사한 데이터를 도시한다. 도 23c는 HK301-GFP 및 HK301-GLUT1/3에서인 것을 제외하고 23a 및 23b에 유사한 데이터를 도시한다. 우측에는 표지된 유입에 대해 면역블롯이다. 도 23d는 HK301이 에를로티닙, WEHI-539, 또는 둘 모두로 24시간 동안 치료된 것을 도시하고, 면역침강 및 면역블로팅은 이전에 기재된 바와 같이 수행되었다. 도 23e는 에를로티닙, WEHI-539, 또는 둘 모두로 72시간의 치료 이후의 2개의 반응군 (GBM39 및 HK301) 및 비-반응군 (HK393)의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 23f는 에를로티닙, wehi-539, 또는 둘 모두로 72시간의 치료 이후의 HK301-GFP 및 HK301-GLUT1/3의 아넥신 V 염색을 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 및 WEHI-539 농도는 각각 1 μM 및 5 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01.
도 24a-24g는 EGFR 및 p53의 조합된 표적화의 상승작용적 치사를 도시한다. 도 24a는 273 GBM 샘플에 걸쳐 p53 조절에 관여된 유전자 및 EGFR에서 변경의 요약을 도시한다. EGFR에서 유전적 변이 (amp/돌연변이)는 p53에서의 것들에 상호 배타적이다. 나타낸 바와 같이, EGFR 변경은 표의 좌측 상에 있고 반면 p53에서의 대부분 변경은 우측 상에 있다. 도 24b는 p53 경로에 관여된 유전자와 EGFR에서의 변경 간에 유의한 연관성을 나타내는 표를 도시한다. 도 24c는 용량-적정 매트릭스로 제시된, 다양한 농도의 에를로티닙, 뉴틀린, 및 조합으로 치료된 대사 반응군 (좌측: HK301) 및 비-반응군 (우측: GS017)의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 24d는 10개 대사 반응군 및 6개 비-반응군에 걸쳐 수행된 24c에 기재된 바와 같은 에를로티닙 및 뉴틀린의 용량-적정을 도시하고 그리고 상승작용효과 점수가 계산되었다 (물질 및 방법 참고). 도 24e는 에를로티닙, 뉴틀린, 또는 둘 모두로 72시간의 치료 이후의 HK301-GFP 및 HK301 GLUT1/3의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 24f는 HK301-sgCtrl 및 HK301-p53KO에서인 것을 제외하고 24e와 동일한 것을 도시한다. 도 24g는 에를로티닙, 뉴틀린, 또는 조합으로 24시간 동안 치료된 HK301을 도시한다. 면역침강은 면역글로불린 G 대조군 항체 또는 항-p53 항체로 수행되었고, 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 아래는 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입)이다. 모든 데이터는 적어도 n=3 독립적인 실험, 평균±평균표준오차를 나타낸다. 달리 나타내지 않는 한, 모든 실험에 대한 에를로티닙 및 뉴틀린 농도는 각각 1 μM 및 2.5 μM이었다. ** p <0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001
도 25a-25f는 글루코스 대사의 조절이 p53-매개된 세포사에 대해 EGFRi 비-반응군을 수위로 하는 것을 도시한다. 도 25a는 HK393 및 HK254에서 비히클에 비하여 4시간의 에를로티닙, 2DG, 또는 픽틸리십 치료 후 18F-FDG 흡수에서 변화 백분율을 도시한다. 도 25b는 24시간 동안 에를로티닙, 2DG, 또는 픽틸리십에 이어 HK393 및 HK254에서 BIM 펩타이드에 대한 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같이 프라이밍에서 비히클 대조군에 비하여 변화 백분율을 도시한다. 도 25c는 HK393 sgCtrl 및 p53KO에서인 것을 제외하고 25b에 유사한 데이터를 도시한다. 도 25d는 24시간의 2DG 또는 픽틸리십 치료 이후의 HK393 및 HK254에서 p53의 면역침강을 도시한다. 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 아래는 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입)이다. 도 25e는 HK393 및 HK254에서 뉴틀린과 조합된 다양한 약물 (에를로티닙, 2DG, 및 픽틸리십)의 상승작용효과 점수를 도시한다. 도 25f는 2DG, 픽틸리십, 2DG + 뉴틀린, 또는 픽틸리십 + 뉴틀린으로 72 시간의 치료 이후의 HK393 sgCtrl 및 HK393 p53KO의 아넥신 V 염색을 도시한다. 달리 나타내지 않는 한, 모든 실험에 대한 에를로티닙, 2DG, 픽틸리십, 및 뉴틀린 농도는 각각 1 μM, 1 mM, 1 μM 및 2.5 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001.
도 26a-26h은 EGFR-유도된 글루코스 흡수 및 p53의 조합된 표적화가 생체내 종양 성장을 억제하는 것을 도시한다. 도 26a는 15시간 에를로티닙 치료 (75 mg/kg) 전후 GBM39 두개내 이종이식의 18F-FDG PET/CT 이미지형성을 도시한다. 도 26b는 매일 비히클 (n=5), 75 mg/kg 에를로티닙 (n=7), 50 mg/kg 이다사뉴틀린 (n=5), 또는 조합 (n=12)으로 치료된 GBM39 두개내 이종이식을 도시하고, 그리고 종양 부담은 분비된 가우스의 루시퍼라제를 사용하여 지시된 일자에 평가되었다 (물질 및 방법 참고). 도 26c는 HK393 두개내 이종이식에서인 것을 제외하고 26a에 유사한 데이터를 도시한다. 도 26d는 HK393 두개내 이종이식에서인 것을 제외하고 26b에 유사한 데이터를 도시한다 (모든 그룹에 대해 n=7). 도 25e는 26b의 생존 퍼센트를 도시한다. 도 26f는 26c의 생존 퍼센트를 도시한다. 도 26g는 25일 동안 지시된 치료 및 그 다음 방출된 약물 이후의 대사 반응군 HK336의 생존 퍼센트를 도시한다 (모든 그룹에 대해 n=7). 도 26h는 25일 동안 지시된 치료 및 그 다음 방출된 약물로부터 해제된 이후의 비-반응군 GS025의 생존 퍼센트를 도시한다 (모든 그룹에 대해 n=9). 26b 및 26d에 대한 비교는 마지막 측정으로부터의 데이터 세트를 사용하였고 2-테일드 언페어드 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. **p <0.01.
도 27a-27g은 EGFR 억제 이후의 GBM 세포주의 특성규명을 도시한다. 도 27a는 2개의 대사 반응군 (HK301 및 GBM39)에서 비히클에 비하여 에를로티닙 치료의 지시된 시간에서 18F-FDG 흡수에서의 변화 퍼센트를 도시한다. 도 27b는 siRNA로 EGFR의 유전적 녹다운 이후의 대사 반응군 (HK301) 및 비-반응군 (HK217)의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 27c는 EGFR의 유전적 녹다운 이후의 HK301 및 HK217에서 18F-FDG 흡수에서의 변화 퍼센트를 도시한다. 도 27d는 3개 대사 반응군 (HK301, GBM39, HK390) 및 3개 비-반응군 (HK393, HK217, HK254)에서 12시간의 에를로티닙 치료로 글루코스 소비에서의 변화를 도시한다. 측정은 Nova Biomedical BioProfile 분석기를 사용하여 이루어졌다. 도 27e는 3개 대사 반응군 (HK301, GBM39, HK390) 및 3개 비-반응군 (HK393, HK217, HK254)에서 12시간의 에를로티닙 치료로 락테이트 생산과 그의 변화를 도시한다. 측정은 Nova Biomedical BioProfile 분석기를 사용하여 이루어졌다. 도 27f는 12시간의 에를로티닙 치료 이후의 2개 반응군 (HK301 및 GBM39, 청색 내) 및 2개 비-반응군 (HK217 및 HK393, 적색 내)의 기저 ECAR 측정을 도시한다. 도 27g는 Nova Biomedical BioProfile 분석기에 의해 측정된 바와 같이, 12시간의 에를로티닙 치료 이후의 글루타민 소비에서의 변화를 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 농도는 1 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.
도 28a-28b은 EGFR 억제 이후의 다운스트림 신호전달에서의 변경이 대사 반응과 상호연관된다는 것을 도시한다. 도 28a는 대사 반응군에서 4시간의 에를로티닙 치료 이후의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 28b는 대사 비-반응군에서 4시간의 에를로티닙 치료 이후의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다.
도 29a-29b는 환자-유래된 GBM 세포주의 유전적 특성규명을 도시한다. 도 29a는 GBM 라인의 패널에 걸친 유전적 배경을 도시한다. 도 29b는 EGFR의 뭇염색체를 나타내는 HK390, HK336, HK254, 및 HK393의 형광 원위치 혼성화 (FISH)를 도시한다. 형광 원위치 혼성화 (FISH)는 상업적으로 이용가능한 형광으로 표지된 이중-색상 EGFR (적색)/CEP 7(녹색) 프로브 (Abbott-Molecular)를 사용하여 수행되었다. FISH 혼성화 및 분석은 제조자의 제안된 프로토콜에 따라 세포주 상에서 수행되었다. 세포는 DAPI로 대조염색되었고 형광 프로브 신호는 이중- 및 삼중-컬러 필터가 장착된 Zeiss (Axiophot) 형광 현미경하에서 이미지화되었다.
도 30a-30b은 EGFR 억제가 대사 반응군에서 세포자멸적 밸런스를 이동한다는 것을 도시한다. 도 30a는 대사 반응군 (GBM39, HK301, 및 HK336) 및 비-반응군 (HK217, HK393, 및 HK254)에서 24시간의 에를로티닙 치료 이후의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 30b는 대사 반응군 (HK301)에서 동적 BH3 프로파일링 분석의 예를 도시한다. 좌측: 사이토크롬 c 방출 퍼센트는 지시된 농도에서 다양한 펩타이드에 노출 후 측정된다. 우측: 비히클 처리된 세포와 에를로티닙 처리된 세포 간의 사이토크롬 c 방출에서의 차이가 계산되어 프라이밍 퍼센트를 얻는다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 농도는 1μM이었다.
도 31a-31c은 GLUT1/3 과발현이 EGFR 억제에 의해 야기된 약화된 글루코스 대사를 구제한다는 것을 도시한다. 도 31a는 HK301-GFP 및 HK301 GLUT1/3에서 12시간의 에를로티닙 치료로 글루코스 소비 및 락테이트 생산에서의 변화를 도시한다. 측정은 Nova Biomedical BioProfile 분석기를 사용하여 이루어졌다. 도 31b는 하기를 도시한다: 좌측: GBM39 세포 과발현 GFP 대조군 또는 GLUT1 및 GLUT3 (GLUT1/3)의 전체 세포 용해물의 면역블롯. 우측: 12시간의 에를로티닙 치료 후 GBM39-GFP 또는 GBM39-GLUT1/3의 글루코스 소비 또는 락테이트 생산에서의 변화. 값은 비히클 대조군에 대비한 것이다. 도 31c는 GBM39-GFP 및 GBM39-GLUT1/3에서인 것을 제외하고 35a에 유사한 데이터를 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 농도는 1 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.
도 32a-32i는 세포질 p53이 EGFRi-매개된 세포자멸적 프라이밍에 필요하다는 것을 도시한다. 도 32a는 HK301 sgCtrl 및 p53 KO 세포에서 4시간의 에를로티닙 치료 이후의 18F-FDG 흡수에서의 변화 퍼센트를 도시한다 (평균±s.d., n = 3). 도 32b는 HK301 (대사 반응군)에서 24 시간 1 μM 에를로티닙 치료 또는 100 nM 독소루비신 치료 이후의 p53-조절된 유전자의 상대적 mRNA 수준을 도시한다. 도 32c는 p53-루시퍼라제 리포터 시스템으로 감염된 HK301 세포를 도시하고, p53 활성은 24시간의 1 μM 에를로티닙 치료 후 측정되었다 (평균±s.d., n = 3). 결과는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. 도 32d는 HK336 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 32e는 HK336 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 단백질 편재화를 밝히기 위해 DAPI 염색과 조합된 p53 단백질의 면역형광을 도시한다 (척도 막대 = 20 μm). 면역형광은 이전에 기재된 바와 같이 수행되었다. 도 32f는 HK336 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 24시간 동안 100 nM 독소루비신 치료 이후의 표지된 mRNA 수준에서 변화를 도시한다 (평균±s.d., n = 3). 수준은 각각의 DMSO 처리된 세포에 대해 정규화되었다. 도 32g는 24시간 동안 에를로티닙으로 치료된 HK336 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, and p53KO + p53wt 세포에서 - BIM 펩타이드에 대한 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같이 - 세포자멸적 프라이밍에서 비히클 대조군에 비하여 변화 퍼센트를 도시한다. (평균±s.d., n = 2). 결과는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. 도 32h는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53R175H, p53KO + p53R273H, 및 p53KO + p53NES에서 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 32i는 PFTμ 전-처리 (2시간 동안 10μM)로 또는 없이 24시간의 에를로티닙 치료 이후의 HK301에서 프라이밍에서의 변화 퍼센트를 도시한다 (평균±s.d., n = 2). 결과는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다.
도 33a-33d은 EGFR-유도된 글루코스 대사의 억제는 세포질 p53 기능을 통한 Bcl-xL 의존성을 유도한다는 것을 도시한다. 도 33a는 에를로티닙으로 치료된 대사 반응군 (HK301 및 HK336) 또는 비-반응군 (HK229)에서 BAD 및 HRK 펩타이드에 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같이 프라이밍에서 비히클 대조군에 비하여 변화 퍼센트를 도시한다. 도 33b는 하기를 도시한다: 좌측: 24시간의 에를로티닙 치료 이후의 GBM39-GFP 및 GBM39-GLUT1/3에서 p53의 면역침강. 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 우측: 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입). 도 33c는 에를로티닙, WEHI-539, 또는 조합으로 72시간의 치료 이후의 HK301 (좌측) 및 HK336 (우측) sgCtrl, p53KO, p53 KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 33d는 GBM39-GFP 및 GBM39-GLUT1/3에서인 것을 제외하고 33c에 유사한 데이터를 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 및 WEHI-539 농도는 1 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001.
도 34a-34h는 EGFR-조절된 글루코스 대사 및 p53 활성화의 억제는 GBM에서 고유 세포자멸사를 촉진한다는 것을 도시한다. 도 34a는 2개 대사 반응군 (HK301 및 GBM39)에서 에를로티닙, 뉴틀린 또는 조합의 24시간 후의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 34b는 EGFR의 유전적 녹다운과 72시간 동안 후속적인 뉴틀린 치료 이후의 HK301 및 HK217에서 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 34c는 HK301-GFP 및 HK301-GLUT1/GLUT3에서 BAX 올리고머화의 검출을 도시한다. 24시간의 표지된 치료에 이어서, 세포가 수확되고 단백질 가교결합을 촉진시키기 위해 1mM BMH에서 인큐베이션되었고 표지된 항체로 면역블로팅되었다. 아래 BAX는 세포 분별화 이후의 세포질 사이토크롬 c에 대한 면역블롯이다. 도 34d는 하기를 도시한다: 상부: HK301-GFP 및 HK301-HA-BclxL에서 표지된 단백질의 면역블롯. 하부: 에를로티닙, 뉴틀린, 또는 조합으로 72시간의 치료 후 HK301-GFP 및 HK301-HA-BclxL에서 아넥신 V 염색. 도 34e는 72 시간의 에를로티닙, 뉴틀린 또는 조합 +/- PFTμ 사전 치료 (2시간 동안 10μM) 이후의 HK301의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 34f는 에를로티닙, 뉴틀린, 또는 조합으로 72시간의 치료 후 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53R175H, p53KO + p53R273H, 및 p53KO + p53NES의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 34g는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서인 것을 제외하고34f에 유사한 데이터를 도시한다. 모든 실험에 대한 약물 농도는 아래와 같다: 에를로티닙 (1 μM), 뉴틀린 (2.5 μM). 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001. 도 34h는 HK336 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서인 것을 제외하고34g에 유사한 데이터를 도시한다. 모든 실험에 대한 약물 농도는 아래와 같다: 에를로티닙 (1 μM), 뉴틀린 (2.5 μM). 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.
도 35a-35f는 대사 반응군 및 비-반응군에서 글루코스 대사의 억제가 고유 세포자멸사를 촉진한다는 것을 도시한다. 도 35a는 24시간의 에를로티닙 또는 2DG 치료 이후의 대사 반응군 HK301에서 BIM 펩타이드에 대한 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같은, 비히클 대조군에 상대적인, 프라이밍에 있어서의 변화 퍼센트를 도시한다. 도 35b는 하기를 도시한다: 좌측: 24시간의 2DG 치료 이후의 HK301에서 p53의 면역침강. 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 우측: 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입). 도 35c는 올리고마이신 및 로테논에 대한 노출 이후의 HK301 세포의 OCR 및 ECAR 측정을 도시한다. 도 35d는 단독 물질로서 뉴틀린, 에를로티닙, 2DG, 올리고마이신, 로테논, 또는 뉴틀린과의 조합으로 72 시간의 치료 이후의 HK301에서 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 35e는 2개의 비-반응군 (HK254 및 HK393)에서 4시간의 에를로티닙 또는 픽틸리십 치료 이후의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 35f는 픽틸리십 또는 2DG 치료 24시간 이후의 HK254에서 p53의 면역침강을 도시한다. 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 아래는 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입)이다. 모든 실험에 대한 약물 농도는 아래와 같다: 에를로티닙 (1 μM), 뉴틀린 (2.5 μM), 2DG (HK301에 대해 3 mM 및 HK254에 대해 1 mM), 올리고마이신 (1 μM), 로테논 (1 μM), 및 픽틸리십 (1 μM). 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. ****p<0.0001.
도 36a-36d은 EGFR 억제 및 p53 활성화의 생체내 효능을 도시한다. 도 36a는 비-종양 보유 마우스에서 표시된 시점 (n=2 마우스/시점)에서 이다사뉴틀린의 뇌 및 혈장 농도를 도시한다. 도 36b는 이다사뉴틀린 (50 mg/kg) 36시간 치료 이후의 두개내 종양 보유 이종이식에서 p53 발현의 면역조직화학 (IHC) 분석을 도시한다. 도 36c는 GBM39 (n=3) 및 HK393 (n=5) 두개내 이종이식에서 15시간의 에를로티닙 치료 이후의 18F-FDG 흡수에서 변화 퍼센트를 도시한다. 도 36d는 에를로티닙 (75 mg/kg) 또는 조합된 에를로티닙 (75 mg/kg)과 이다사뉴틀린 (50 mg/kg)으로 매일 치료 이후의 마우스 체중에서 변화를 도시한다. 모든 치료는 경구로 수행되었다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05.
도 37a는 2DG (헥소키나제 억제제) 또는 사이토칼라신 B (글루코스 수송체 억제제)로 당분해의 직접적인 억제는 예상외로 (뉴틀린으로) p53 활성화와 함께 상승작용을 한다는 것을 도시한다. 도 37b는 낮은 글루코스 (0.25mM)가 나비토클락스(ABT-263)를 사용한 BCL-xL 억제로 인한 상승작용적 세포 사멸을 유발시킨다는 것을 도시한다. 도 37c는 낮은 글루코스 (0.25mM)가 뉴틀린으로의 BCL-xL 억제로 상승작용적 세포 사멸을 유발시킨다는 것을 도시한다.
도 38은 EGFRi 억제제인 에를로티닙에 대한 대사 반응군, 및 대사 비-반응군 사이의 비교를 도시한다. 에를로티닙과 뉴틀린의 조합은 비-반응군에서가 아닌 대사 반응군에서 예기치 못한 상승작용적 합성 치사를 유발시킨다.
도 39a는 키랄 SFC (Chiralpak AD-3 칼럼, 40% MeOH)에 의해 결정된 합성 중간체 5의 거울상이성질체 순도를 나타낸다. 도 39b는 키랄 SFC (Chiralpak AD-3 칼럼, 40% MeOH)에 의해 결정된 합성 중간체 (S)-5의 거울상이성질체 순도를 나타낸다. 도 39c는 키랄 SFC (Chiralpak AD-3 칼럼, 40% MeOH)에 의해 결정된 합성 중간체 (R)-5의 거울상이성질체 순도를 나타낸다. 도 39d는 키랄 SFC (Chiralpak AD-3 칼럼, 40% MeOH)에 의해 결정된 모셔 에스테르 유도체 5의 거울상이성질체 순도를 나타낸다.
도 40는 U87 EGFRwt에 대한 에를로티닙, 라파티닙, 게피티닙, 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 41는 U87 EGFRviii에 대한 에를로티닙, 라파티닙, 게피티닙, 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 42는 HK301, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 에를로티닙, 라파티닙, 게피티닙, 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 43는 GBM39, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 에를로티닙, 라파티닙, 게피티닙, 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 44는 GBM39 EGFRvIII 돌연변이 마우스 모델에서 에를로티닙, 라파티닙, 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 45a는 HCC827 폐암 EGFR 돌연변이 세포주에서 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다. 도 45b는 PC9 폐암 EGFR 돌연변이 세포주에서 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다. 도 45c는 H838 폐암 돌연변이 세포주에서 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 46는 PC9 폐암 EGFR 돌연변이 마우스 모델에서 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 47는 본 개시내용의 예시적 화합물의 특정 대사체를 도시한다.
도 48a는 HK301에 대한 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 48b는 GBM39에 대한 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다. 도 48c는 NHA에 대한 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 49a는 PO 투여 이후의 래트에서 본 개시내용의 예시적 화합물의 ADME 특성을 도시한다.
도 49b는 PO 투여 이후의 래트에서 본 개시내용의 예시적 화합물의 ADME 특성을 도시한다.
도 50a는 HK301, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 현재의 표준 치료 (예를 들어, 랍파티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 및 AZD3759)와 비교한 본 개시내용의 특정 화합물의 활성을 도시한다.
도 50b는 HK301, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 현재의 표준 치료 (예를 들어, 랍파티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 및 AZD3759)와 비교한 본 개시내용의 특정 화합물의 활성을 도시한다.
도 51a는 GBM39, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 현재의 표준 치료 (예를 들어, 랍파티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 및 AZD3759)와 비교한 본 개시내용의 특정 화합물의 활성을 도시한다. 도 51b는 GBM39, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 현재의 표준 치료 (예를 들어, 랍파티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 및 AZD3759)와 비교한 본 개시내용의 특정 화합물의 활성을 도시한다.
도 52a는 pEGFRwt에 대한 오시머티닙 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 52B는 pEGFRvIII에 대한 오시머티닙 및 JGK068S의 활성을 도시한다.
도 53a는 HK301에 대한 오시머티닙 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 53B는 GBM39에 대한 오시머티닙 및 JGK068S의 활성을 도시한다.
도 54a는 특정 EGFR 돌연변이에 대한 AZD3759, AZD9291, 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 54b는 pEGFR A263P에 대한 AZD3759, AZD9291, 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 54c는 pEGFR A289V에 대한 AZD3759, AZD9291, 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 54d는 pEGFR A289D에 대한 AZD3759, AZD9291, 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 54e는 pEGFR G598V에 대한 AZD3759, AZD9291, 및 JGK068S의 활성을 도시한다
도 1은 JGK005 10 mg/kg에서 및 25 mg/kg에서 에를로티닙의 경구 약동학을 도시한다. JGK005는 에를로티닙에 비교하여 양호한 CNS 침투를 갖는다.
도 2는 각각 EGFR 돌연변이체 교모세포종 HK301 및 GBM39에 대한 에를로티닙 (좌측 칼럼) 및 JGK005 (우측 칼럼)의 활성을 도시한다. JGK005는 양 사례에서 에를로티닙보다 낮은 활성을 갖는다.
도 3은 에를로티닙 및 JGK010의 무세포 EGFR 키나제 활성을 도시한다. 양 화합물은 대략 8 nM의 IC50을 갖는다.
도 4는 HK301 및 GBM39 세포에 대한 에를로티닙 (좌측 칼럼), JGK005 (중심 칼럼), 및 JGK010 (우측 칼럼)의 효력을 도시한다.
도 5는 JGK005 10 mg/kg에서 및 JGK010 10 mg/kg에서의 경구 약동학을 도시한다.
도 6은 다중 일차 교모세포종 세포주에서 EGFR 억제제의 비교를 도시한다. 칼럼 1-4: GBM39 (EGFRvIII), 5-8: GS100 (EGFRwt/EGFRvIII), 9-12: GS017 (A289T), 13-16: GS024 (EGFR 뭇염색체).
도 7a는 EGFR 변경된 폐암에서 JGK010 활성을 도시한다. 도 7b는 EGFR Amp 표피모양 암종에서 JGK010 활성을 도시한다.
도 8a는 6 mg/kg에서 JGK010 경구 약동학을 도시한다. 도 8b는 10 mg/kg에서 JGK010 경구 약동학을 도시한다. 도 8c는 6 mg/kg에서 JGK010 IV 약동학을 도시한다. 도 8d는 6 mg/kg에서 JGK010 IP 약동학을 도시한다.
도 9는 EGFR Amp WT + vIII HK301에 대한 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 활성을 도시한다.
도 10은 EGFR vIII Amp GBM 39에 대한 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 활성을 도시한다.
도 11은 HK301 세포에 대한 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 활성을 도시한다.
도 12는 GBM 39 세포에 대한 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 활성을 도시한다.
도 13a는 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 포스포르-EGFR vIII 억제를 도시한다. 도 13b는 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 포스포르-EGFR vIII 억제를 도시한다.
도 14a는 JGK005의 약동학을 도시한다. 도 14b는 JGK005의 약동학을 도시한다.
도 15a는 JGK038의 약동학을 도시한다. 도 15b는 JGK038의 약동학을 도시한다.
도 16a는 JGK010의 약동학을 도시한다. 도 16b는 JGK010의 약동학을 도시한다.
도 17a는 JGK037의 약동학을 도시한다. 도 17b는 JGK037의 약동학을 도시한다.
도 18a는 에를로티닙과 JGK037간의 마우스 뇌/혈액 약동학의 비교를 도시한다. 도 18b는 에를로티닙과 JGK037간의 마우스 뇌/혈액 약동학의 비교를 도시한다.
도 19는 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적인 화합물의 뇌 침투를 도시한다.
도 20은 RLU 변화에 대한 비히클 또는 JGK037 중 어느 하나로 치료의 효과를 도시한다.
도 21a-21f은 EGFR-유도된 글루코스 대사의 억제가 최소 세포사를 유도하지만 세포자멸사에 대해 GBM 세포를 프라임(prime)하는 것을 도시한다. 도 21a는 19명의 환자-유래된 GBM 신경아교종구에서 비히클에 비하여 에를로티닙 치료의 4시간 후 18F-FDG 흡수에서 변화 퍼센트를 도시한다. "대사 반응군" (청색)은 비히클에 비하여 18F-FDG 흡수에서 상당한 감소를 나타내는 샘플이고, 반면에 "비-반응군" (적색)은 상당한 감소를 나타내지 않는다. 도 21b는 비히클에 비하여 12 시간의 에를로티닙 치료로 글루코스 소비 및 락테이트 생산에서의 변화 퍼센트를 도시한다. 측정은 Nova Biomedical BioProfile 분석기를 사용하여 이루어졌다. 도 21c는 72 시간 동안 에를로티닙으로 치료 후 대사 반응군 (청색, n=10) 또는 비-반응군 (적색, n=9)의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 21d는 24시간 동안 에를로티닙으로 치료된 대사 반응군 또는 비-반응군에서 각각의 BH3 펩타이드 (BIM, BID, 또는 PUMA)에 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같이 프라이밍에서 비히클 대조군에 비하여 변화 퍼센트를 도시한다. 도 21e는 하기를 도시한다: 좌측: HK301 세포 과발현 GFP 대조군 또는 GLUT1 및 GLUT3 (GLUT1/3)의 전체 세포 용해물의 면역블롯. 우측: 12 시간의 에를로티닙 치료 후 HK301-GFP 또는 HK301-GLUT1/3의 글루코스 소비 또는 락테이트 생산에서의 변화. 값은 비히클 대조군에 대비한 것이다. 도 21f는 HK301-GFP 또는 HK301-GLUT1/3 세포를 사용하여 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 농도는 1 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.
도 22a-22h는 세포질 p53이 고유 세포자멸사에 EGFR을 연결시키는 것을 도시한다. 도 22a는 대조군 가이드 RNA (sgCtrl) 또는 p53 가이드 RNA (p53KO)로 2개 반응군 (HK301 및 HK336) 발현 CRISPR/CAS9 단백질에서 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 22b는 24시간 동안 에를로티닙으로 치료된 sgCtrl 및 p53KO 세포에서 BIM 펩타이드에 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같이 프라이밍에서 비히클 대조군에 비하여 변화 퍼센트를 도시한다. 도 22c는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 22d는 p53 단백질의 면역형광이 DAPI 염색과 조합하여 HK301 sgCtrl, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 단백질 편재화를 밝혔다는 것을 도시한다 (척도 막대 = 20 μm). 신경아교종구가 먼저 단일 세포로 해리되고 제조자 지침에 따라 Cell-Tak (Corning)을 사용하여 96-웰 플레이트에 부착되었다. 부착된 세포는 그 다음 10분 동안 빙냉 메탄올로 고정되고 그 다음 PBS로 3회 세정되었다. 세포는 그 다음 PBS에 10% FBS 및 3% BSA를 함유하는 차단 용액으로 1시간 동안 인큐베이션되고 후속으로 4°C에서 밤새 p53 (Santa Cruz, SC-126, 1:50의 희석) 항체로 인큐베이션되었다. 다음 날, 세포는 이차 항체 (Alexa Fluor 647, 희석 1:2000)로 1시간 동안 인큐베이션되고 10분 동안 DAPI 염색되고, 그 다음 캐스케이드 II 형광 카메라가 장착된 Nikon TI Eclipse 현미경 (Roper Scientific)을 사용하여 이미지화되었다. 세포는 461 nM 및 647 nM에서 방출로 이미지화되고 그 다음 NIS-Elements AR 분석 소프트웨어를 사용하여 가공되었다. 도 22e는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 24시간 동안 100 nM 독소루비신 치료 이후의 표지된 mRNA 수준에서의 변화를 도시한다. 수준은 각각의 DMSO 처리된 세포에 대해 정규화되었다. 도 22f는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서인 것을 제외하고 22b에 유사한 데이터를 도시한다. 도 22g는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53R175H, p53KO + p53R273H, 및 p53KO + p53NES에서인 것을 제외하고 22e에 유사한 데이터를 도시한다. 도 22h는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53R175H, p53KO + p53R273H, 및 p53KO + p53NES에서인 것을 제외하고 22b 및 22f에 유사한 데이터를 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 농도는 1 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.
도 23a-23f은 EGFRi-대사 반응군에서 세포질 p53에 결합 및 격리함에 의해 Bcl-xL이 GBM 세포사를 예방하는 것을 도시한다. 도 23a는 24시간의 에를로티닙 치료 이후의 2개 대사 반응군 (HK301 및 GBM39)에서 p53의 면역침강을 도시한다. 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 아래는 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입)이다. 도 23b는 2개의 비-반응군 (HK393 및 HK254)에서인 것을 제외하고 23a에 유사한 데이터를 도시한다. 도 23c는 HK301-GFP 및 HK301-GLUT1/3에서인 것을 제외하고 23a 및 23b에 유사한 데이터를 도시한다. 우측에는 표지된 유입에 대해 면역블롯이다. 도 23d는 HK301이 에를로티닙, WEHI-539, 또는 둘 모두로 24시간 동안 치료된 것을 도시하고, 면역침강 및 면역블로팅은 이전에 기재된 바와 같이 수행되었다. 도 23e는 에를로티닙, WEHI-539, 또는 둘 모두로 72시간의 치료 이후의 2개의 반응군 (GBM39 및 HK301) 및 비-반응군 (HK393)의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 23f는 에를로티닙, wehi-539, 또는 둘 모두로 72시간의 치료 이후의 HK301-GFP 및 HK301-GLUT1/3의 아넥신 V 염색을 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 및 WEHI-539 농도는 각각 1 μM 및 5 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01.
도 24a-24g는 EGFR 및 p53의 조합된 표적화의 상승작용적 치사를 도시한다. 도 24a는 273 GBM 샘플에 걸쳐 p53 조절에 관여된 유전자 및 EGFR에서 변경의 요약을 도시한다. EGFR에서 유전적 변이 (amp/돌연변이)는 p53에서의 것들에 상호 배타적이다. 나타낸 바와 같이, EGFR 변경은 표의 좌측 상에 있고 반면 p53에서의 대부분 변경은 우측 상에 있다. 도 24b는 p53 경로에 관여된 유전자와 EGFR에서의 변경 간에 유의한 연관성을 나타내는 표를 도시한다. 도 24c는 용량-적정 매트릭스로 제시된, 다양한 농도의 에를로티닙, 뉴틀린, 및 조합으로 치료된 대사 반응군 (좌측: HK301) 및 비-반응군 (우측: GS017)의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 24d는 10개 대사 반응군 및 6개 비-반응군에 걸쳐 수행된 24c에 기재된 바와 같은 에를로티닙 및 뉴틀린의 용량-적정을 도시하고 그리고 상승작용효과 점수가 계산되었다 (물질 및 방법 참고). 도 24e는 에를로티닙, 뉴틀린, 또는 둘 모두로 72시간의 치료 이후의 HK301-GFP 및 HK301 GLUT1/3의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 24f는 HK301-sgCtrl 및 HK301-p53KO에서인 것을 제외하고 24e와 동일한 것을 도시한다. 도 24g는 에를로티닙, 뉴틀린, 또는 조합으로 24시간 동안 치료된 HK301을 도시한다. 면역침강은 면역글로불린 G 대조군 항체 또는 항-p53 항체로 수행되었고, 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 아래는 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입)이다. 모든 데이터는 적어도 n=3 독립적인 실험, 평균±평균표준오차를 나타낸다. 달리 나타내지 않는 한, 모든 실험에 대한 에를로티닙 및 뉴틀린 농도는 각각 1 μM 및 2.5 μM이었다. ** p <0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001
도 25a-25f는 글루코스 대사의 조절이 p53-매개된 세포사에 대해 EGFRi 비-반응군을 수위로 하는 것을 도시한다. 도 25a는 HK393 및 HK254에서 비히클에 비하여 4시간의 에를로티닙, 2DG, 또는 픽틸리십 치료 후 18F-FDG 흡수에서 변화 백분율을 도시한다. 도 25b는 24시간 동안 에를로티닙, 2DG, 또는 픽틸리십에 이어 HK393 및 HK254에서 BIM 펩타이드에 대한 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같이 프라이밍에서 비히클 대조군에 비하여 변화 백분율을 도시한다. 도 25c는 HK393 sgCtrl 및 p53KO에서인 것을 제외하고 25b에 유사한 데이터를 도시한다. 도 25d는 24시간의 2DG 또는 픽틸리십 치료 이후의 HK393 및 HK254에서 p53의 면역침강을 도시한다. 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 아래는 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입)이다. 도 25e는 HK393 및 HK254에서 뉴틀린과 조합된 다양한 약물 (에를로티닙, 2DG, 및 픽틸리십)의 상승작용효과 점수를 도시한다. 도 25f는 2DG, 픽틸리십, 2DG + 뉴틀린, 또는 픽틸리십 + 뉴틀린으로 72 시간의 치료 이후의 HK393 sgCtrl 및 HK393 p53KO의 아넥신 V 염색을 도시한다. 달리 나타내지 않는 한, 모든 실험에 대한 에를로티닙, 2DG, 픽틸리십, 및 뉴틀린 농도는 각각 1 μM, 1 mM, 1 μM 및 2.5 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001.
도 26a-26h은 EGFR-유도된 글루코스 흡수 및 p53의 조합된 표적화가 생체내 종양 성장을 억제하는 것을 도시한다. 도 26a는 15시간 에를로티닙 치료 (75 mg/kg) 전후 GBM39 두개내 이종이식의 18F-FDG PET/CT 이미지형성을 도시한다. 도 26b는 매일 비히클 (n=5), 75 mg/kg 에를로티닙 (n=7), 50 mg/kg 이다사뉴틀린 (n=5), 또는 조합 (n=12)으로 치료된 GBM39 두개내 이종이식을 도시하고, 그리고 종양 부담은 분비된 가우스의 루시퍼라제를 사용하여 지시된 일자에 평가되었다 (물질 및 방법 참고). 도 26c는 HK393 두개내 이종이식에서인 것을 제외하고 26a에 유사한 데이터를 도시한다. 도 26d는 HK393 두개내 이종이식에서인 것을 제외하고 26b에 유사한 데이터를 도시한다 (모든 그룹에 대해 n=7). 도 25e는 26b의 생존 퍼센트를 도시한다. 도 26f는 26c의 생존 퍼센트를 도시한다. 도 26g는 25일 동안 지시된 치료 및 그 다음 방출된 약물 이후의 대사 반응군 HK336의 생존 퍼센트를 도시한다 (모든 그룹에 대해 n=7). 도 26h는 25일 동안 지시된 치료 및 그 다음 방출된 약물로부터 해제된 이후의 비-반응군 GS025의 생존 퍼센트를 도시한다 (모든 그룹에 대해 n=9). 26b 및 26d에 대한 비교는 마지막 측정으로부터의 데이터 세트를 사용하였고 2-테일드 언페어드 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. **p <0.01.
도 27a-27g은 EGFR 억제 이후의 GBM 세포주의 특성규명을 도시한다. 도 27a는 2개의 대사 반응군 (HK301 및 GBM39)에서 비히클에 비하여 에를로티닙 치료의 지시된 시간에서 18F-FDG 흡수에서의 변화 퍼센트를 도시한다. 도 27b는 siRNA로 EGFR의 유전적 녹다운 이후의 대사 반응군 (HK301) 및 비-반응군 (HK217)의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 27c는 EGFR의 유전적 녹다운 이후의 HK301 및 HK217에서 18F-FDG 흡수에서의 변화 퍼센트를 도시한다. 도 27d는 3개 대사 반응군 (HK301, GBM39, HK390) 및 3개 비-반응군 (HK393, HK217, HK254)에서 12시간의 에를로티닙 치료로 글루코스 소비에서의 변화를 도시한다. 측정은 Nova Biomedical BioProfile 분석기를 사용하여 이루어졌다. 도 27e는 3개 대사 반응군 (HK301, GBM39, HK390) 및 3개 비-반응군 (HK393, HK217, HK254)에서 12시간의 에를로티닙 치료로 락테이트 생산과 그의 변화를 도시한다. 측정은 Nova Biomedical BioProfile 분석기를 사용하여 이루어졌다. 도 27f는 12시간의 에를로티닙 치료 이후의 2개 반응군 (HK301 및 GBM39, 청색 내) 및 2개 비-반응군 (HK217 및 HK393, 적색 내)의 기저 ECAR 측정을 도시한다. 도 27g는 Nova Biomedical BioProfile 분석기에 의해 측정된 바와 같이, 12시간의 에를로티닙 치료 이후의 글루타민 소비에서의 변화를 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 농도는 1 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.
도 28a-28b은 EGFR 억제 이후의 다운스트림 신호전달에서의 변경이 대사 반응과 상호연관된다는 것을 도시한다. 도 28a는 대사 반응군에서 4시간의 에를로티닙 치료 이후의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 28b는 대사 비-반응군에서 4시간의 에를로티닙 치료 이후의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다.
도 29a-29b는 환자-유래된 GBM 세포주의 유전적 특성규명을 도시한다. 도 29a는 GBM 라인의 패널에 걸친 유전적 배경을 도시한다. 도 29b는 EGFR의 뭇염색체를 나타내는 HK390, HK336, HK254, 및 HK393의 형광 원위치 혼성화 (FISH)를 도시한다. 형광 원위치 혼성화 (FISH)는 상업적으로 이용가능한 형광으로 표지된 이중-색상 EGFR (적색)/CEP 7(녹색) 프로브 (Abbott-Molecular)를 사용하여 수행되었다. FISH 혼성화 및 분석은 제조자의 제안된 프로토콜에 따라 세포주 상에서 수행되었다. 세포는 DAPI로 대조염색되었고 형광 프로브 신호는 이중- 및 삼중-컬러 필터가 장착된 Zeiss (Axiophot) 형광 현미경하에서 이미지화되었다.
도 30a-30b은 EGFR 억제가 대사 반응군에서 세포자멸적 밸런스를 이동한다는 것을 도시한다. 도 30a는 대사 반응군 (GBM39, HK301, 및 HK336) 및 비-반응군 (HK217, HK393, 및 HK254)에서 24시간의 에를로티닙 치료 이후의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 30b는 대사 반응군 (HK301)에서 동적 BH3 프로파일링 분석의 예를 도시한다. 좌측: 사이토크롬 c 방출 퍼센트는 지시된 농도에서 다양한 펩타이드에 노출 후 측정된다. 우측: 비히클 처리된 세포와 에를로티닙 처리된 세포 간의 사이토크롬 c 방출에서의 차이가 계산되어 프라이밍 퍼센트를 얻는다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 농도는 1μM이었다.
도 31a-31c은 GLUT1/3 과발현이 EGFR 억제에 의해 야기된 약화된 글루코스 대사를 구제한다는 것을 도시한다. 도 31a는 HK301-GFP 및 HK301 GLUT1/3에서 12시간의 에를로티닙 치료로 글루코스 소비 및 락테이트 생산에서의 변화를 도시한다. 측정은 Nova Biomedical BioProfile 분석기를 사용하여 이루어졌다. 도 31b는 하기를 도시한다: 좌측: GBM39 세포 과발현 GFP 대조군 또는 GLUT1 및 GLUT3 (GLUT1/3)의 전체 세포 용해물의 면역블롯. 우측: 12시간의 에를로티닙 치료 후 GBM39-GFP 또는 GBM39-GLUT1/3의 글루코스 소비 또는 락테이트 생산에서의 변화. 값은 비히클 대조군에 대비한 것이다. 도 31c는 GBM39-GFP 및 GBM39-GLUT1/3에서인 것을 제외하고 35a에 유사한 데이터를 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 농도는 1 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.
도 32a-32i는 세포질 p53이 EGFRi-매개된 세포자멸적 프라이밍에 필요하다는 것을 도시한다. 도 32a는 HK301 sgCtrl 및 p53 KO 세포에서 4시간의 에를로티닙 치료 이후의 18F-FDG 흡수에서의 변화 퍼센트를 도시한다 (평균±s.d., n = 3). 도 32b는 HK301 (대사 반응군)에서 24 시간 1 μM 에를로티닙 치료 또는 100 nM 독소루비신 치료 이후의 p53-조절된 유전자의 상대적 mRNA 수준을 도시한다. 도 32c는 p53-루시퍼라제 리포터 시스템으로 감염된 HK301 세포를 도시하고, p53 활성은 24시간의 1 μM 에를로티닙 치료 후 측정되었다 (평균±s.d., n = 3). 결과는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. 도 32d는 HK336 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 32e는 HK336 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 단백질 편재화를 밝히기 위해 DAPI 염색과 조합된 p53 단백질의 면역형광을 도시한다 (척도 막대 = 20 μm). 면역형광은 이전에 기재된 바와 같이 수행되었다. 도 32f는 HK336 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서 24시간 동안 100 nM 독소루비신 치료 이후의 표지된 mRNA 수준에서 변화를 도시한다 (평균±s.d., n = 3). 수준은 각각의 DMSO 처리된 세포에 대해 정규화되었다. 도 32g는 24시간 동안 에를로티닙으로 치료된 HK336 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, and p53KO + p53wt 세포에서 - BIM 펩타이드에 대한 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같이 - 세포자멸적 프라이밍에서 비히클 대조군에 비하여 변화 퍼센트를 도시한다. (평균±s.d., n = 2). 결과는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다. 도 32h는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53R175H, p53KO + p53R273H, 및 p53KO + p53NES에서 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 32i는 PFTμ 전-처리 (2시간 동안 10μM)로 또는 없이 24시간의 에를로티닙 치료 이후의 HK301에서 프라이밍에서의 변화 퍼센트를 도시한다 (평균±s.d., n = 2). 결과는 2개의 독립적인 실험을 나타낸다.
도 33a-33d은 EGFR-유도된 글루코스 대사의 억제는 세포질 p53 기능을 통한 Bcl-xL 의존성을 유도한다는 것을 도시한다. 도 33a는 에를로티닙으로 치료된 대사 반응군 (HK301 및 HK336) 또는 비-반응군 (HK229)에서 BAD 및 HRK 펩타이드에 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같이 프라이밍에서 비히클 대조군에 비하여 변화 퍼센트를 도시한다. 도 33b는 하기를 도시한다: 좌측: 24시간의 에를로티닙 치료 이후의 GBM39-GFP 및 GBM39-GLUT1/3에서 p53의 면역침강. 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 우측: 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입). 도 33c는 에를로티닙, WEHI-539, 또는 조합으로 72시간의 치료 이후의 HK301 (좌측) 및 HK336 (우측) sgCtrl, p53KO, p53 KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 33d는 GBM39-GFP 및 GBM39-GLUT1/3에서인 것을 제외하고 33c에 유사한 데이터를 도시한다. 모든 실험에 대한 에를로티닙 및 WEHI-539 농도는 1 μM이었다. 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001.
도 34a-34h는 EGFR-조절된 글루코스 대사 및 p53 활성화의 억제는 GBM에서 고유 세포자멸사를 촉진한다는 것을 도시한다. 도 34a는 2개 대사 반응군 (HK301 및 GBM39)에서 에를로티닙, 뉴틀린 또는 조합의 24시간 후의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 34b는 EGFR의 유전적 녹다운과 72시간 동안 후속적인 뉴틀린 치료 이후의 HK301 및 HK217에서 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 34c는 HK301-GFP 및 HK301-GLUT1/GLUT3에서 BAX 올리고머화의 검출을 도시한다. 24시간의 표지된 치료에 이어서, 세포가 수확되고 단백질 가교결합을 촉진시키기 위해 1mM BMH에서 인큐베이션되었고 표지된 항체로 면역블로팅되었다. 아래 BAX는 세포 분별화 이후의 세포질 사이토크롬 c에 대한 면역블롯이다. 도 34d는 하기를 도시한다: 상부: HK301-GFP 및 HK301-HA-BclxL에서 표지된 단백질의 면역블롯. 하부: 에를로티닙, 뉴틀린, 또는 조합으로 72시간의 치료 후 HK301-GFP 및 HK301-HA-BclxL에서 아넥신 V 염색. 도 34e는 72 시간의 에를로티닙, 뉴틀린 또는 조합 +/- PFTμ 사전 치료 (2시간 동안 10μM) 이후의 HK301의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 34f는 에를로티닙, 뉴틀린, 또는 조합으로 72시간의 치료 후 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53R175H, p53KO + p53R273H, 및 p53KO + p53NES의 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 34g는 HK301 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서인 것을 제외하고34f에 유사한 데이터를 도시한다. 모든 실험에 대한 약물 농도는 아래와 같다: 에를로티닙 (1 μM), 뉴틀린 (2.5 μM). 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001. 도 34h는 HK336 sgCtrl, p53KO, p53KO + p53cyto, 및 p53KO + p53wt에서인 것을 제외하고34g에 유사한 데이터를 도시한다. 모든 실험에 대한 약물 농도는 아래와 같다: 에를로티닙 (1 μM), 뉴틀린 (2.5 μM). 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.
도 35a-35f는 대사 반응군 및 비-반응군에서 글루코스 대사의 억제가 고유 세포자멸사를 촉진한다는 것을 도시한다. 도 35a는 24시간의 에를로티닙 또는 2DG 치료 이후의 대사 반응군 HK301에서 BIM 펩타이드에 대한 노출 이후의 사이토크롬 c 방출에 의해 결정된 바와 같은, 비히클 대조군에 상대적인, 프라이밍에 있어서의 변화 퍼센트를 도시한다. 도 35b는 하기를 도시한다: 좌측: 24시간의 2DG 치료 이후의 HK301에서 p53의 면역침강. 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 우측: 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입). 도 35c는 올리고마이신 및 로테논에 대한 노출 이후의 HK301 세포의 OCR 및 ECAR 측정을 도시한다. 도 35d는 단독 물질로서 뉴틀린, 에를로티닙, 2DG, 올리고마이신, 로테논, 또는 뉴틀린과의 조합으로 72 시간의 치료 이후의 HK301에서 아넥신 V 염색을 도시한다. 도 35e는 2개의 비-반응군 (HK254 및 HK393)에서 4시간의 에를로티닙 또는 픽틸리십 치료 이후의 표지된 단백질의 면역블롯을 도시한다. 도 35f는 픽틸리십 또는 2DG 치료 24시간 이후의 HK254에서 p53의 면역침강을 도시한다. 면역침강물은 표지된 항체로 탐색되었다. 아래는 각각의 사전-면역침강 용해물 (유입)이다. 모든 실험에 대한 약물 농도는 아래와 같다: 에를로티닙 (1 μM), 뉴틀린 (2.5 μM), 2DG (HK301에 대해 3 mM 및 HK254에 대해 1 mM), 올리고마이신 (1 μM), 로테논 (1 μM), 및 픽틸리십 (1 μM). 비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. ****p<0.0001.
도 36a-36d은 EGFR 억제 및 p53 활성화의 생체내 효능을 도시한다. 도 36a는 비-종양 보유 마우스에서 표시된 시점 (n=2 마우스/시점)에서 이다사뉴틀린의 뇌 및 혈장 농도를 도시한다. 도 36b는 이다사뉴틀린 (50 mg/kg) 36시간 치료 이후의 두개내 종양 보유 이종이식에서 p53 발현의 면역조직화학 (IHC) 분석을 도시한다. 도 36c는 GBM39 (n=3) 및 HK393 (n=5) 두개내 이종이식에서 15시간의 에를로티닙 치료 이후의 18F-FDG 흡수에서 변화 퍼센트를 도시한다. 도 36d는 에를로티닙 (75 mg/kg) 또는 조합된 에를로티닙 (75 mg/kg)과 이다사뉴틀린 (50 mg/kg)으로 매일 치료 이후의 마우스 체중에서 변화를 도시한다. 모든 치료는 경구로 수행되었다. 데이터는 3개 독립적인 실험의 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. *p<0.05.
도 37a는 2DG (헥소키나제 억제제) 또는 사이토칼라신 B (글루코스 수송체 억제제)로 당분해의 직접적인 억제는 예상외로 (뉴틀린으로) p53 활성화와 함께 상승작용을 한다는 것을 도시한다. 도 37b는 낮은 글루코스 (0.25mM)가 나비토클락스(ABT-263)를 사용한 BCL-xL 억제로 인한 상승작용적 세포 사멸을 유발시킨다는 것을 도시한다. 도 37c는 낮은 글루코스 (0.25mM)가 뉴틀린으로의 BCL-xL 억제로 상승작용적 세포 사멸을 유발시킨다는 것을 도시한다.
도 38은 EGFRi 억제제인 에를로티닙에 대한 대사 반응군, 및 대사 비-반응군 사이의 비교를 도시한다. 에를로티닙과 뉴틀린의 조합은 비-반응군에서가 아닌 대사 반응군에서 예기치 못한 상승작용적 합성 치사를 유발시킨다.
도 39a는 키랄 SFC (Chiralpak AD-3 칼럼, 40% MeOH)에 의해 결정된 합성 중간체 5의 거울상이성질체 순도를 나타낸다. 도 39b는 키랄 SFC (Chiralpak AD-3 칼럼, 40% MeOH)에 의해 결정된 합성 중간체 (S)-5의 거울상이성질체 순도를 나타낸다. 도 39c는 키랄 SFC (Chiralpak AD-3 칼럼, 40% MeOH)에 의해 결정된 합성 중간체 (R)-5의 거울상이성질체 순도를 나타낸다. 도 39d는 키랄 SFC (Chiralpak AD-3 칼럼, 40% MeOH)에 의해 결정된 모셔 에스테르 유도체 5의 거울상이성질체 순도를 나타낸다.
도 40는 U87 EGFRwt에 대한 에를로티닙, 라파티닙, 게피티닙, 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 41는 U87 EGFRviii에 대한 에를로티닙, 라파티닙, 게피티닙, 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 42는 HK301, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 에를로티닙, 라파티닙, 게피티닙, 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 43는 GBM39, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 에를로티닙, 라파티닙, 게피티닙, 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 44는 GBM39 EGFRvIII 돌연변이 마우스 모델에서 에를로티닙, 라파티닙, 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 45a는 HCC827 폐암 EGFR 돌연변이 세포주에서 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다. 도 45b는 PC9 폐암 EGFR 돌연변이 세포주에서 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다. 도 45c는 H838 폐암 돌연변이 세포주에서 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 46는 PC9 폐암 EGFR 돌연변이 마우스 모델에서 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 47는 본 개시내용의 예시적 화합물의 특정 대사체를 도시한다.
도 48a는 HK301에 대한 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 48b는 GBM39에 대한 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다. 도 48c는 NHA에 대한 본 개시내용의 예시적 화합물의 활성을 도시한다.
도 49a는 PO 투여 이후의 래트에서 본 개시내용의 예시적 화합물의 ADME 특성을 도시한다.
도 49b는 PO 투여 이후의 래트에서 본 개시내용의 예시적 화합물의 ADME 특성을 도시한다.
도 50a는 HK301, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 현재의 표준 치료 (예를 들어, 랍파티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 및 AZD3759)와 비교한 본 개시내용의 특정 화합물의 활성을 도시한다.
도 50b는 HK301, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 현재의 표준 치료 (예를 들어, 랍파티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 및 AZD3759)와 비교한 본 개시내용의 특정 화합물의 활성을 도시한다.
도 51a는 GBM39, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 현재의 표준 치료 (예를 들어, 랍파티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 및 AZD3759)와 비교한 본 개시내용의 특정 화합물의 활성을 도시한다. 도 51b는 GBM39, 환자 유래, EGFRvIII 돌연변이 GBM 신경아교종구에 대한 현재의 표준 치료 (예를 들어, 랍파티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 및 AZD3759)와 비교한 본 개시내용의 특정 화합물의 활성을 도시한다.
도 52a는 pEGFRwt에 대한 오시머티닙 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 52B는 pEGFRvIII에 대한 오시머티닙 및 JGK068S의 활성을 도시한다.
도 53a는 HK301에 대한 오시머티닙 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 53B는 GBM39에 대한 오시머티닙 및 JGK068S의 활성을 도시한다.
도 54a는 특정 EGFR 돌연변이에 대한 AZD3759, AZD9291, 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 54b는 pEGFR A263P에 대한 AZD3759, AZD9291, 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 54c는 pEGFR A289V에 대한 AZD3759, AZD9291, 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 54d는 pEGFR A289D에 대한 AZD3759, AZD9291, 및 JGK068S의 활성을 도시한다. 도 54e는 pEGFR G598V에 대한 AZD3759, AZD9291, 및 JGK068S의 활성을 도시한다
신경아교종은, 가장 악성 형태이며 모든 암-관련된 사망의 3-4%를 야기하는 다형상 교모세포종 (GBM)으로, 가장 통상적으로 발생하는 형태의 뇌종양이다 (Louis 등 (2007) Acta. Neuropathol. 114: 97-109.). 세계보건기구는 GBM을 악성, 유사분열 활성 및 괴사에 취약한 것을 특징으로 하는 IV 등급 암으로 정의한다. GBM은 12.6 개월인 GBM의 평균 생존율과 함께 4-5%의 5-년 생존율로 매우 불량한 예후를 갖는다 (McLendon 등 (2003) Cancer. 98:1745-1748.). 이것은 독특한 치료 한계 예컨대 높은 평균 개시 연령, 종양 위치, 및 현재의 종양 병리생리학의 불량한 이해에 기인할 수 있다 (Louis 등 (2007) Acta. Neuropathol. 114: 97-109). GBM에 대한 표준 현행 관리 기준은 동시적 방사선요법 및 화학요법과 함께 종양 절제를 포함하고 최근에는 생존율을 증가시키는 뚜렷한 개선은 거의 없었다 (Stewart, 등 (2002) Lancet. 359:1011-1018.).
GBM 화학요법에 대한 표준은 테모졸로마이드 (TMZ)이며, 이것은 DNA에서 퓨린 (A 또는 G)을 메틸화하고 세포자멸사를 유도하는 뇌-침투성 알킬화제이다 (Stupp, 등 (2005) N. Engl. J. Med. 352:987-996). 그러나, TMZ 사용은 상당한 위험이 건강한 세포에서 DNA 손상으로부터 일어나고 GBM 세포가 약물에 대해 내성이 빠르게 발달할 수 있는 단점을 갖는다 (Carlsson, 등 (2014) EMBO. Mol. Med. 6: 1359-1370). 이와 같이, 추가의 화학요법 옵션이 긴급하게 필요하다.
EGFR은 ERBB2, ERBB3, 및 ERBB4와 함께 수용체 티로신 키나제의 HER 슈퍼 패밀리의 구성원이다. GBM 진행의 일반적인 동인은 EGFR 증폭인데, 이는 모든 GBM 사례 중 거의 40%에서 발견된다 (Hynes 등 (2005) Nat. Rev. Cancer. 5: 341-354; Hatanpaa 등 (2010) Neoplasia. 12:675-684). 추가로, EGFR 증폭은 EGFR 단백질 변이체의 존재와 연관된다: EGFR 돌연변이체의 68%에서; 아미노산 6과 273 사이의 N-말단 리간드-결합 영역에 결실이 있다. EGFR의 리간드-결합 도메인에서 이들 결실은 EGFR의 리간드-독립적인 활성화로 이어질 수 있다 (Yamazaki 등 (1990) Jpn. J. Cancer Res. 81: 773-779.).
소분자 티로신 키나제 억제제 (TKI)는 EGFR-표적화된 요법 중에서 가장 임상적으로 진전된 것이고, 가역 및 비가역 억제제 둘 모두는 임상시험 중에 있다. 가역 억제제 및 비가역 억제제의 예는 에를로티닙, 게피티닙, 라파티닙, PKI166, 카네르티닙 및 펠리티닙을 포함한다 (Mischel 등 (2003) Brain Pathol. 13: 52-61). 기계론적으로, 이들 TKI는 EGFR의 티로신 키나제 도메인에 결합에 대해 ATP와 경쟁하지만, 그러나, 이들 EGFR-특이적 티로신 키나제 억제제는 에를로티닙의 경우에 반응 속도가 단지 높게는 25%에 도달하는 것으로, 신경아교종에 대해 상대적으로 효과가 없다 (Mischel 등 (2003) Brain Pathol. 13: 52-61; Gan 등 (2009) J. Clin. Neurosci. 16: 748-54). 비록 TKI는 GBM 환자에서 잘 용인되고 일부 항종양 활성을 나타내지만, 수용체 억제에 대한 내성의 재발성 문제가 그것의 효능을 제한한다 ((Learn 등 (2004) Clin. Cancer. Res. 10: 3216-3224; Rich 등 (2004) Nat. Rev. Drug Discov. 3: 430-446). 추가로, 최근 연구는 요법에 따른 게피티닙 및 에를로티닙의 뇌 혈장 농도는 단지 개시 용량의 6-11%였다는 것을 나타내어, 이들 화합물은 표 1에서 설명된 바와 같이 혈액-뇌 장벽을 가로지르지 못할 것이다는 것을 시사한다 (Karpel-Massler 등 (2009) Mol. Cancer Res. 7:1000-1012). 따라서, 표적에 대한 불충분한 전달은 실망스러운 임상 결과의 또 다른 원인일 수 있다.
표 1: 현재의 표준 치료 약물의 뇌 투과 속도
이 증거에 비추어, 혈액 뇌 장벽을 가로지르는 능력을 가지고 EGFR 및 그것의 동형체를 억제 처리하는 강력한 티로신 키나제 억제제에 대한 미충족 임상적 요구가 남아있다.
게다가, 종양원성 신호전달과 대사 경로 간의 크로스톡 (cross-talk)이 본 발명자들에 의해 알려져서 GBM에서 신규한 병합 요법에 대한 기회를 창출한다. 더 구체적으로, 본 발명자들은 EGFR-유도된 글루코스 흡수의 급성 억제가 최소 세포사를 유도하지만, 환자-유래된 GBM 세포에서 세포자멸적 역치를 낮추고 세포자멸사에 대한 세포를 "프라이밍한다"는 것을 발견했다. 예상외로, 본 발명자들에 의한 기계론적인 연구는 Bcl-xL이 세포질 p53이 고유 세포자멸사를 촉발하는 것을 차단하여 종양 생존으로 이어진다는 것을 밝혀냈다. p53의 약리학적 안정화 (예컨대 예를 들어, 뇌-침투제 소분자인, 이다사뉴틀린으로)는 p53이 고유 세포자멸적 기구에 결합할 수 있게 하여, GBM 이종이식에서 EGFR-유도된 글루코스 흡수를 표적화하면서, 상승작용적 치사를 촉진한다. 특히, 본 발명자들은 또한, 예를 들어, 비-침습성 양전자 방출 단층촬영을 사용하여 18F-플루오로데옥시글루코스 (18F-FDG) 흡수에서 신속한 변화가 생체내 조합에 대한 민감도를 예측할 수 있다는 것을 발견했다.
특히, 본 발명자들은 GBM 및 다른 악성종양에서 병합 요법에 이용될 수 있는, 종양유전자 신호전달, 글루코스 대사, 및 세포질 p53 사이에 중요한 연계를 확인했다.
개시내용의 화합물
한 양태에서, 본 개시내용은 식 I 또는 식 I*의 화합물:
(I)
(I*)
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 여기서:
Z는 아릴 또는 헤테로아릴;
R2a 및 R2b는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택되고;
R3는 수소, 알킬, 또는 아실;
R4는 알콕시;
R5는 알킬; R7 및 R8는, 각각 독립적으로, 수소, 알킬, 예컨대 알콕시알킬, 아르알킬, 또는 아릴아실로부터 선택되고;
R11는 수소, 알킬, 할로, CN, NO2, OR7, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴; 그리고
R12는 수소, 알킬, 할로, CN, NO2, OR8, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴;
또는 R11 및 R12 함께 결합하여 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 링을 완성한다.
식 I 또는 식 I*의 특정 바람직한 구현예에서, R2a 및 R2b 중 적어도 하나는 H 가 아니다. 식 I 또는 식 I*의 특정 그러한 구현예에서, R2a는 수소이면, R2b는 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택된다. 식 I 또는 식 I*의 다른 그러한 구현예에서, R2b는 수소이면, R2a는 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택된다.
식 I 또는 식 I*의 특정 구현예에서, 화합물은 식 (IVa) 또는 식 (IVb)의 화합물:
(IVa)
(IVb)
또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
R6은 각각의 경우 알킬, 알콕시, OH, CN, NO2, 할로, 알케닐, 알키닐, 아르알킬옥시, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택된다.
식 I, I*, Iva, 및 IVb의 특정 구현예에서, R11는 수소이다. 다른 바람직한 구현예에서, R11는 OR7이다.
식 I, I*, Iva, 및 IVb의 특정 구현예에서, R7는 수소이다. 다른 구현예에서, R7는 알킬이다. 여전히 다른 구현예에서, R7는 알콕시알킬이다. 여전히 다른 구현예에서, R7는 아릴아실이다.
식 I, I*, Iva, 및 IVb의 특정 구현예에서, R12는 헤테로아릴, 예컨대 푸라닐이다. 특정 구현예에서, 헤테로아릴은 알킬, 알콕시, OH, CN, NO2, 할로, 
또는 
로 치환된다. 다른 바람직한 구현예에서, R12는 OR8이다.
식 I, I*, Iva, 및 IVb의 특정 구현예에서, R8는 수소이다. 다른 구현예에서, R8는 알킬이다. 여전히 다른 구현예에서, R8는 알콕시알킬이다. 특정 구현예에서, R8는 
, 
또는 
로 치환된 알킬이다.
식 I, I*, Iva, 및 IVb의 특정 바람직한 구현예에서, R11 및 R12는 결합하여 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 링, 예컨대 5-원, 6-원, 또는 7-원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 링을 형성한다. 특정 구현예에서, 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 링은 하이드록실, 알킬 (예를 들어, 메틸), 또는 알케닐 (예를 들어, 비닐)로 치환된다.
식 I, I*, Iva, 및 IVb의 특정 구현예에서, 화합물은 식 Ia, Ib, Ic, 또는 Id의 화합물:
(Ia)
(Ib)
(Ic)
(Id)
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서:
X는 O, S, 또는 NH;
Z는 아릴 또는 헤테로아릴;
R1는 수소 또는 알킬;
R2a 및 R2b는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택되고;
R3는 수소, 알킬, 또는 아실;
R4는 알콕시;
R5는 알킬; 그리고
n은 0-3이다.
식 Ia, Ib, Ic, 또는 Id의 특정 구현예에서, R2a 또는 R2b는 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택된다. 식 Ia, Ib, Ic, 또는 Id의 특정 바람직한 구현예에서, Z는 페닐이다. 식 Ia, Ib, Ic, 또는 Id의 특정 바람직한 구현예에서, X는 O이다. 식 Ia, Ib, Ic, 또는 Id의 특정 바람직한 구현예에서, n은 1이다.
식 Ia, Ib, Ic, 또는 Id의 특정 구현예에서, 화합물은 식 (IIa) 또는 식 (IIb)의 화합물:
(IIa)
(IIb)
또는 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
R6은 각각의 경우 알킬, 알콕시, OH, CN, NO2, 할로, 알케닐, 알키닐, 아르알킬옥시, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택된다.
특정 구현예에서, 여기서 R1는 식 A로 나타내어지고:
(A)
여기서,
R7a 및 R7b는 각각 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고; 또는 R7a 및 R7b는 결합하여 헤테로사이클릴을 형성하고; 그리고
y은 0-3이다
식 IIa 또는 IIb의 특정 구현예에서, R1는 알킬 (예를 들어, 메틸 또는 에틸)이다. 특정 구현예에서, R1은 헤테로사이클릴 (예를 들어, 모르폴린, 피페리디닐, 피롤로디닐, 또는 피페라지닐, 예컨대 N-메틸 피페라지닐)로 치환된다. 다른 구현예에서, R1은 아미노 (예를 들어, 디메틸 아미노)로 치환된다. 다른 구현예에서, R1는 하이드록실로 치환된 알킬이다. 특정 바람직한 구현예에서, R1은 S 배치형태이다. 다른 구현예에서, R1은 R 배치형태이다.
식 IIa 또는 IIb의 특정 바람직한 구현예에서, R3는 수소이다. 다른 구현예에서, R3는 아실이다. 특정 구현예에서, R3는 알킬아실이다. 특정 구현예에서, R3는 알킬옥시아실이다. 특정 구현예에서, R3는 아실옥시알킬이다. 특정 구현예에서, R3는 
; 그리고 R9는 알킬이다.
식 IIa 또는 IIb의 특정 구현예에서, Z는 하나 이상의 R6로 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴; R6은 각각의 경우 알킬, 알콕시, OH, CN, NO2, 할로, 알케닐, 알키닐, 아르알킬옥시, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택된다. 특정 바람직한 구현예에서, Z는 1, 2, 3, 4, 또는 5 R6로 치환된 페닐이다. 특정 구현예에서, 각각의 R6은 할로, 알킬, 알키닐, 또는 아릴알콕시로부터 독립적으로 선택된다. 더욱 바람직한 구현예에서, Z는 2-플루오로-3-클로로페닐, 2-플루오로페닐, 2,3-디플루오로페닐, 2,4-디플루오로페닐, 2,5-디플루오로페닐, 2,6-디플루오로페닐, 2,4,6-트리플루오로페닐, 펜타플루오로페닐, 2-플루오로-3-브로모페닐, 2-플루오로-3-에티닐페닐, 및 2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐이다. 다른 더욱 바람직한 구현예에서, Z는 3-에티닐페닐이다. 여전히 다른 더욱 바람직한 구현예에서, Z는 3-클로로-4-((3-플루오로벤질)옥시)벤젠이다. 여전히 다른 더욱 바람직한 구현예에서, Z는 3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐이다. 여전히 다른 더욱 바람직한 구현예에서, Z는 3-브로모페닐이다. 여전히 다른 더욱 바람직한 구현예에서, Z는 2-플루오로,5-브로모페닐이다. 여전히 다른 더욱 바람직한 구현예에서, Z는 2,6-디플루오로,5-브로모페닐이다. 특정 구현예에서, Z는 
또는 
로부터 선택된 하나의 R6로 치환되고; 그리고 R9 및 R10는 알킬로부터 독립적으로 선택된다.
식 IIIa 또는 IIIb의 특정 구현예에서, 화합물은 식 (IIIa)의 화합물이고:
각각의 R6은 플루오로, 클로로, 또는 브로모로부터 독립적으로 선택된다.
식 IIIa 또는 IIIb의 특정 구현예에서, 화합물은 식 (IIIb)의 화합물이고:
각각의 R6은 플루오로, 클로로, 또는 브로모로부터 독립적으로 선택된다.
식 IIIa 또는 IIIb의 특정 구현예에서, 화합물은 식 (IIIc)의 화합물이고:
각각의 R6은 플루오로, 클로로, 또는 브로모로부터 독립적으로 선택된다.
식 Ia, Ib, Ic, Id, IIa, IIb, IIIa, IIIb, 또는 IIIc의 특정 구현예에서, R2a는 할로 (예를 들어, 플루오로)이다. 다른 바람직한 구현예에서, R2a는 수소이다.
식 Ia, Ib, Ic, Id, IIa, IIb, IIIa, IIIb, 또는 IIIc의 특정 구현예에서, R2b는 할로 (예를 들어, 플루오로)이다. 다른 바람직한 구현예에서, R2b는 수소이다.
식 Ia, Ib, Ic, Id, IIa, IIb, IIIa, IIIb, 또는 IIIc의 특정 구현예에서, 화합물은 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 또는 
; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
식 Ia, Ib, Ic, Id, IIa, IIb, IIIa, IIIb, 또는 IIIc의 특정 구현예에서, 화합물은
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 및 
; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
식 I의 특정 구현예에서, 화합물은
또는 
; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
식 Ia, Ib, Ic, Id, IIa, IIb, IIIa, IIIb, 또는 IIIc의 특정 구현예에서, 화합물은 
또는 
; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
치료방법
특정 양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용은 EGFR 또는 ΔEGFR을 억제하는 방법을 제공하되, 상기 방법은 대상체에게 개시내용의 화합물의 일정 양을 투여하는 것을 포함한다.
특정 양태에서, 본 개시내용은 암을 치료하는 방법을 제공하되, 상기 방법은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 개시내용의 화합물의 일정 양을 투여하는 것을 포함한다 특정 구현예에서, 암은 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 결장암, 결장직장암, 식도암, 섬유육종, 위암, 위장암, 머리, 척추 및 목 암, 카포시 육종, 신장암, 백혈병, 간암, 림프종, 흑색종, 다발성 골수종, 췌장암, 음경암, 고환 생식세포 암, 흉선종 암종, 흉선 암종, 폐암, 난소암, 또는 전립선암이다. 특정 구현예에서, 암은 신경아교종, 별아교세포종 또는 교모세포종이다. 특정 구현예에서, 암은 교모세포종이다. 특정 구현예에서, 암은 다형상 교모세포종이다. 특정 구현예에서, 방법은 암 세포 증식을 감소시킨다.
특정 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 암을 치료하는 방법를 제공하고, 이 방법은 대상체에게 글루코스 대사 억제제 및 부가적 물질을 투여하는 것를 포함하고, 여기서 글루코스 대사는 개시내용의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이고 부가적 물질은 세포질 p53 안정화제이다. 특정 구현예에서, 암은 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 결장암, 결장직장암, 식도암, 섬유육종, 위암, 위장암, 머리, 척추 및 목 암, 카포시 육종, 신장암, 백혈병, 간암, 림프종, 흑색종, 다발성 골수종, 췌장암, 음경암, 고환 생식세포 암, 흉선종 암종, 흉선 암종, 폐암, 난소암, 또는 전립선암이다. 특정 구현예에서, 암은 신경아교종, 별아교세포종 또는 교모세포종이다. 특정 구현예에서, 암은 교모세포종이다. 특정 구현예에서, 암은 다형상 교모세포종이다. 특정 구현예에서, 방법은 암 세포 증식을 감소시킨다. 특정 구현예에서, 암은 재발성 또는 난치성이다. 다른 구현예에서, 암은 치료 경험이 없다.
특정 구현예에서, 대상체는 다음을 포함하는 방법에 의해 글루코스 대사 억제제에 감수성을 가진다고 결정되었다:
a.
대상체로부터 제1 혈액 샘플을 얻는 것;
b.
대상체를 케톤체생성성식사로 처리하는 것;
c.
일정 시간 동안 케톤체생성성식사로 처리 후 대상체로부터 제2 혈액 샘플을 얻는 것;
d.
제1 및 제2 혈액 샘플내 글루코스 수준을 측정하는 것;
e.
제2 혈액 샘플 내 글루코스 수준을 제1 혈액 샘플 내 글루코스 수준과 비교하는 것; 그리고
f.
제2 혈액 샘플 내 글루코스 수준이 제1 혈액 샘플 내 글루코스 수준과 비교하여 감소되면 대상체가 감수성이라고 결정하는 것.
특정 구현예에서, 제2 혈액 샘플 및 대조 혈액 샘플 사이의 글루코스 수준의 감소가 0.15 mM 또는 그 초과다. 특정 구현예에서, 제2 혈액 샘플 및 대조 혈액 샘플 사이의 글루코스 수준의 감소가 0.20 mM 또는 그 초과다. 특정 구현예에서, 제2 혈액 샘플 및 대조 혈액 샘플 사이의 글루코스 수준의 감소가 0.15 mM - 2.0 mM 범위이다. 특정 구현예에서, 제2 혈액 샘플 및 대조 혈액 샘플 사이의 글루코스 수준의 감소가 0.25 mM - 1.0 mM 범위이다.
특정 구현예에서, 세포질 p53 안정화제는 MDM2 억제제이다. 특정 구현예에서, MDM2 억제제는 뉴틀린이다. 특정 구현예에서, MDM2 억제제는 뉴틀린-3 또는 이다사뉴틀린이다. 특정 구현예에서, 대상체는 50 mg 내지 1600 mg의 이다사뉴틀린이 투여된다. 특정 구현예에서, 대상체는 100 mg의 이다사뉴틀린이 투여된다. 특정 구현예에서, 대상체는 150 mg의 이다사뉴틀린이 투여된다. 특정 구현예에서, 대상체는 300 mg의 이다사뉴틀린이 투여된다. 특정 구현예에서, 대상체는 400 mg의 이다사뉴틀린이 투여된다. 특정 구현예에서, 대상체는 600 mg의 이다사뉴틀린이 투여된다. 특정 구현예에서, 대상체는 1600 mg의 이다사뉴틀린이 투여된다. 다른 구현예에서, MDM2 억제제는 RO5045337, RO5503781, RO6839921, SAR405838, DS-3032, DS-3032b, 또는 AMG-232이다.
특정 구현예에서, 세포질 p53 안정화제는 BCL-2 억제제이다. 특정 구현예에서, BCL-2 억제제는 안티센스 올리고데옥시뉴클레오타이드 G3139, mRNA 길항제 SPC2996, 베네토클락스 (ABT-199), GDC-0199, 오바토클락스, 파클리탁셀, 나비토클락스 (ABT-263), ABT-737, NU-0129, S 055746, 또는 APG-1252이다.
특정 구현예에서, 세포질 p53 안정화제는 Bcl-xL 억제제이다. 특정 구현예에서, Bcl-xL 억제제는 WEHI 539, ABT-263, ABT-199, ABT-737, 사부토클락스, AT101, TW-37, APG-1252, 또는 감보그산이다.
특정 구현예에서, 글루코스 대사 억제제 및 세포질 p53 안정화제는 동일 조성물에서 투여된다. 특정 구현예에서, 글루코스 대사 억제제 및 세포질 p53 안정화제는 별도 조성물에서 투여된다.
특정 구현예에서, 방법은 부가적 요법의 투여를 추가로 포함한다.
신경아교종의 유형 및 단계
일차 악성 뇌종양은 집합적으로 신경아교종으로 알려진 뇌 또는 척추에서 시작하는 종양이다. 신경아교종은 특이적 유형의 암은 아니지만 신경교 세포에서 유래하는 종양을 기술하기 위해 사용된 용어이다. 일차 악성 뇌종양의 예는 별아교세포종, 모양세포성 별아교세포종, 다형성 황색별아교세포종, 확산성 별아교세포종, 역형성 별아교세포종, GBM, 신경절교종, 희소돌기아교세포종, 뇌실막세포종을 포함한다. 뇌종양의 WHO 분류에 따르면, 별아교세포종은 기저 병리학에 의해 결정된 4가지 등급으로 분류되었다. 신경아교종을 분류하기 위해 사용된 특성은 유사분열, 세포 또는 핵 이형성, 및 거짓울타리화 특징을 갖는 혈관 증식 및 괴사를 포함한다. 악성 (또는 고-등급) 신경아교종은 역형성 신경아교종 (WHO 등급 III) 뿐만 아니라 다형상 교모세포종 (GBM; WHO 등급 IV)을 포함한다. 이들은 가장 나쁜 예후를 갖는 가장 공격적인 뇌종양이다.
GBM은 매년 11,000명의 남성, 여성 및 어린이가 진단되는, 모든 뇌암의 45%를 차지하는, 가장 흔하고, 복잡하고, 치료 내성이고, 그리고 치명적인 유형의 뇌암이다. GBM (등급-4 별아교세포종 및 다형상 교모세포종으로도 알려져 있음)은 가장 보편적인 유형의 악성 (암성) 원발성 뇌 종양이다. 이들은 수많은 이유로 극도로 공격적이다. 첫째로, 교모세포종 세포는 이들이 풍부한 혈액 공급을 자극하는 물질을 분비하므로 빠르게 증식한다. 이들은 또한 정상 세포와 함께 종양의 현미경적 덩굴손을 보냄에 의해 정상 뇌로 긴거리로 침입하고 침윤하는 능력을 갖는다. 2가지 유형의 교모세포종이 공지되어 있다. 일차 GBM은 가장 통상적인 형태이다; 이들은 빠르게 성장하며 종종 증상을 조기에 유발한다. 이차 교모세포종은 덜 일반적으로, 모든 GBM의 약 10 퍼센트를 차지한다. 이들은 저-등급 확산성 별아교세포종 또는 역형성 별아교세포종으로부터 진행하고, 젊은 환자에서 더 자주 발견된다. 이차 GBM은 우선적으로 전두엽에 위치하고 더 나은 예후를 수반한다.
GBM은 일반적으로 종양의 외과적 제거, 방사선 및 화학요법을 포함한 조합된 다수 방식의 치료 계획에 의해 치료된다. 첫째, 수술 중에 가능한 많은 종양이 제거된다. 뇌에서 종양의 위치는 종종 그것이 얼마나 안전하게 제거될 수 있는지 여부를 결정한다. 수술 후, 방사선 및 화학요법은 나머지 종양 세포의 성장을 늦춘다. 경구 화학요법 약물인, 테모졸로마이드는 가장 흔히 6주 동안 사용되고, 그 다음 그 후에는 매월 사용된다. 또 다른 약물인, 베바시주맙 (Avastin®으로 알려짐)이 또한 치료 동안 사용된다. 이 약물은 혈액 공급을 조달하는 종양의 능력을 공격하여, 종종 종양 성장을 늦추거나 또는 심지어 중단시킨다.
신규한 조사적인 치료가 또한 사용되고 이들은 표준 요법에 대해 치료를 추가하거나 표준 요법의 일부를 더 잘 작용할 수 있는 상이한 치료로 대체하는 것을 포함할 수 있다. 이들 치료의 일부는 면역요법 예컨대 백신 면역요법, 또는 종양이 존재하는 뇌 영역에 대한 전기의 저-용량 펄스 및 구형 핵산 (SNA) 예컨대 NU-0129를 포함한 나노 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 방법은 상기 언급된 요법 중 하나 이상과 조합하여 사용된다.
본 명세서에서 논의된 방법 및 조성물의 구현예는 또한 비제한적으로 폐암, 비-CNS 암, CNS 암, 및 CNS 전이 예컨대 뇌 전이, 연수막성 전이, 맥락막 전이, 척수 전이, 및 기타를 포함한 다른 유형의 암에 적용가능한 것으로 고려된다.
세포질 p53 안정화제
발명자들은, 예컨대 CNS-침투제 소분자에 의한 것과 같은 약리학적 p53 안정화가, 예를 들어, 환자-유래된, 일차 GBM 모델에서 EGFR-유도된 글루코스 흡수의 억제와 함께 상승작용으로 치명적이었음을 실증했다. 본 발명자들은, p53의 비-전사 기능이 대사 반응군에서 고유 세포자멸사를 자극하는데 중용한 역할을 갖는다는 것을 처음으로 실증했다. 따라서, 본 명세서에 기재된 치료 방법은 글루코스 대사 억제제와 조합한 세포질 p53 안정화제(들)의 투여를 포함한다. 세포질 p53 안정화제(들) 및 글루코스 대사 억제제는 동시에 또는 순차적으로 동일 또는 상이한 조성물에서 투여될 수 있다. 일부 구현예에서 단일 p53 안정화제가 사용되고 다른 구현예에서 p53 안정화제에 대한 것보다 더 많이 사용됨이 고려된다. 예를 들어, 뉴틀린과 (BCL-2 및 BCL-XL에 결합하는) ABT 737과의 조합은 미토콘드리아 레벨에서 세포자멸유도 및 항-세포자멸적 단백질의 밸런스를 상승작으로 표적화함으로써, 세포사를 향상시키는 것으로 보고되어 있다. (Hoe 등 2014. Nature Reviews. Vol. 13. pp. 217). 본 명세서에서 의도된 대로, 세포질 p53 안정화제는 직접적으로 또는 간접적으로 p53를 약리적으로 안정화 또는 활성화할 수 있는 임의의 소분자, 항체, 펩타이드, 단백질, 핵산 또는 이의 유도체이다. 세포질 p53의 안정화는 세포자멸사를 위한 프라이밍 세포, 예컨대 암 세포로 이어진다.
MDM2
길항제
세포 내의 p53의 단백질 수준은 엄격하게 조절되고 그것의 음성 조절인자, E3 유비퀴틴 단백질 리가제 MDM2에 의해 낮게 유지된다. 본 개시내용의 방법 또는 조성물의 구현예에서, 세포질 p53 안정화제는 MDM2 길항제/억제제이다. 일부 구현예에서, MDM2 길항제는 뉴틀린이다. 추가 구현예에서, 뉴틀린은 뉴틀린-3 또는 이다사뉴틀린이다. 다른 구현예에서, MDM2 길항제는 RO5045337 (RG7112로도 알려져 있음), RO5503781, RO6839921, SAR405838 (MI-773로도 알려져 있음), DS-3032, DS-3032b, 또는 AMG-232 또는 임의의 다른 MDM2 억제제이다.
MDM-2에 결합하는 것으로 알려진 본 방법의 범위 내의 다른 화합물은 Ro2443, MI219, MI713, MI888, DS3032b, 벤조디아제핀디온 (예를 들어, TDP521252), 설폰아미드 (예를 들어, NSC279287), 크로메노트리아졸로피리미딘, 모폴리논 및 피페리디논 (AM8553), 테르페닐, 칼콘, 피라졸, 이미다졸, 이미다졸-인돌, 이소인돌리논, 피롤리디논 (예를 들어, PXN822), 파이락손, 피페리딘, 자연적으로 유래된 프레닐화 크산톤, SAH8 (스테이플드 펩타이드) sMTide02, sMTide02a (스테이플드 펩타이드), ATSP7041 (스테이플드 펩타이드), 스피롤리고머 (α-헬릭스 모방체)을 포함한다. MDM2의 단백질 폴딩을 야기하는 것으로 알려진 다른 화합물은 PRIMA1MET (APR246로도 알려져 있음) Aprea 102-105, PK083, PK5174, PK5196, PK7088, 벤조티아졸, 스틱트산 및 NSC319726을 포함한다.
BCL-2 억제제
본 방법 또는 조성물의 추가의 구현예에서, 세포질 p53 안정화제는 BCL-2 억제제이다. 일부 구현예에서, BCL-2 억제제는, 예를 들어, 안티센스 올리고데옥시뉴클레오타이드 G3139, mRNA 길항제 SPC2996, 베네토클락스 (ABT-199), GDC-0199, 오바토클락스, 파클리탁셀, 나비토클락스 (ABT-263), ABT-737, NU-0129, S 055746, APG-1252 또는 임의의 다른 BCL-2 억제제이다.
Bcl-xL 억제제
본 방법 또는 조성물의 또 추가의 구현예에서, 세포질 p53 안정화제는 Bcl-xL 억제제이다. 일부 구현예에서, Bcl-xL 억제제는, 예를 들어, WEHI 539, ABT-263, ABT-199, ABT-737, 사부토클락스, AT101, TW-37, APG-1252, 감보그산 또는 임의의 다른 Bcl-xL 억제제이다.
평가 방법
글루코스 흡수 테스트
본 개시내용의 방법 및 조성물의 구현예에서, GBM 또는 암을 갖는 대상체는 "대사 반응군" 또는 "대사 비-반응군" 중 어느 하나인 것으로 분류되고 즉 글루코스 대사 억제제에 감수성을 가짐으로 결정된다. 특정 구현예에서, 대상체의 분류는 글루코스 대사 억제제 및 세포질 p53 안정화제를 포함하는 치료를 상기 대상체에게 투여하기 전에 된다. 따라서, 본 개시내용은 암을 평가하고, 대상체를 분류하고, 글루코스 대사, 당분해 또는 글루코스 흡수의 분석을 포함한 치료에 대한 대상체의 민감도를 결정하는 방법을 제공한다. 대사 반응군으로 대상체를 분류하는 방법은 실시예 1의 세부사항에 기재되어 있다. 당분해 및 글루코스 흡수를 모니터하는 기술은, 본 명세서에 참고로 편입된 문헌: T. TeSlaa and M.A. Teitell. 2014. Methods in Enzymology, Volume 542, pp. 92-114에 제공되어 있다.
당분해는 ATP의 두 분자의 동반 생성을 갖는 피루베이트의 두 분자로 글루코스 한 분자의 세포내 생화학적 전환이다. 피루베이트는 NADH 및 FADH2를 생산하기 위해 미토콘드리아 내에서 트리카복실산 (TCA) 사이클 안으로의 도입을 포함한 몇 개의 잠재적인 운명을 갖는 대사 중간물이다. 대안적으로, 피루베이트는 NADH로부터 NAD+의 동반 재생으로 락테이트 탈수소효소에 의해 사이토졸에서 락테이트로 전환될 수 있다. 당분해를 통한 증가된 유입은, 예를 들어, ATP 형태로의 추가의 에너지뿐만 아니라 뉴클레오타이드, 지질, 및 단백질 생합성에 대한 글루코스-유래된 대사 중간체를 제공함에 의해 암 세포의 증식을 지지한다. Warburg (Oncologia. 1956;9(2):75-83)는 증식하는 종양 세포는, 산소가 이용가능할 때 주로 호흡하는 비악성 세포에 대조적으로, 산소의 존재에서 락테이트로 글루코스의 전환인, 호기성 당분해를 증강시킨다는 것을 최초로 발견했다. Warburg 효과로 불리는 이 미토콘드리아 바이패스는 암 세포, 활성화된 림프구, 및 만능 줄기 세포를 포함하여 빠르게 증식하는 세포에서 일어난다. Warburg 효과는 불소화된 글루코스 유사체 예컨대 18F-데옥시글루코스의 증가된 세포 흡수를 확인하기 위해 양전자 방출 단층촬영 (PET) 스캐닝을 사용하는 임상 진단 시험을 개척했다.
따라서, 당분해는 치료적 및 진단 방법에 대한 표적을 나타낸다. 본 방법의 맥락에서, 악성 세포에 의한 글루코스 흡수 및 락테이트 배출의 측정은 글루코스 이화에서의 전이 및/또는 글루코스 대사 억제제에 대한 민감도를 검출하는데 유용할 수 있다. 이와 같은 전이를 검출하는 것은 GBM을 치료하는 방법, 효과없는 요법의 위험을 감소시키는 방법, 종양 생존의 가능성을 감소시키는 방법에 중요하다. 본 개시내용의 목적을 위해, 18F-데옥시글루코스 PET는 특정 구현예에서 p53 활성화에 대한 민감도를 예측하기 위한 신속한 비-침습성 기능성 바이오마커로 작용한다. 이 비-침습성 분석은 약동학적/약력학 평가가 극도로 어렵고 비현실적인 악성 뇌종양에 대해 특히 가치있을 수 있다. 일부 경우에, MRI 융합을 갖는 지연된 이미지형성 프로토콜 (41) 및 매개변수 반응 맵 (PRM)이 종양 18F-FDG 흡수에서 변화를 정량화하는데 유용할 수 있이다 (42).
특정 양태에서, 본 방법은 글루코스 흡수 및 락테이트 생산을 측정하는 것에 관한 것일 수 있다. 배양중인 세포의 경우, 당분해 유입은 글루코스 흡수 및 락테이트 배출을 측정함에 의해 정량화될 수 있다. 세포 안으로 글루코스 흡수는 글루코스 수송체 (Glut1-Glut4)를 통해 이루어지고, 반면에 락테이트 배출은 세포막에서 모노카복실레이트 수송체 (MCT1-MCT4)를 통하여 이루어진다.
세포외 글루코스 및 락테이트
글루코스 흡수 및 락테이트 배출을 검출하는 방법은, 예를 들어, 세포외 글루코스 또는 락테이트 키트, 세포외 바이오분석기, ECAR 측정, [3H]-2-DG 또는 [14C]-2-DG 흡수 18FDG 흡수 또는 2-NBDG 흡수를 포함한다.
상업적으로 이용가능한 키트 및 기기는 세포 배양 배지 내에서 글루코스 및 락테이트 수준을 정량화하기 위해 이용가능하다. 키트 검출 방법은 일반적으로 비색계 또는 형광이고, 그리고 표준 랩(lab) 장비 예컨대 분광측정기와 양립가능하다. 바이오프로파일 분석기 (예컨대 Nova Biomedical) 또는 생화학 분석기 (예컨대 예를 들어 YSI Life Sciences)는 세포 배양 배지에서 글루코스 및 락테이트 둘 모두의 수준을 측정할 수 있다. GlucCell (Cesco BioProducts)은 세포 배양 배지에서 글루코스 수준만을 측정할 수 있다. 각각의 상업적 방법은 상이한 검출 프로토콜을 갖지만, 분석용 배양 배지의 수집은 동일하다.
세포외 산성화 속도
당분해는 또한 피루베이트로부터의 전환 후 단위 시간 당 락트산의 배출로부터 우세하게 유래하는 주위 배지의 세포외 산성화 속도 (ECAR)의 측정을 통해 결정될 수 있다. 시쇼(Seahorse) 세포외 유동 (XF) 분석기 (Seahorse Bioscience)는 동일한 세포에서 (산소 소비를 통해)당분해 및 산화 인산화를 동시에 측정하기 위한 도구이다.
글루코스 유사체 흡수
본 개시내용의 방법의 특정 구현예는 글루코스 유사체의 사용을 포함한다. 당해 분야의 숙련가에게 친숙한 바와 같이, 세포에 의한 글루코스 흡수 속도를 결정하기 위해, 글루코스의 표지된 동형체는 세포 배양 배지에 첨가되고, 그 그 다음 주어진 기간 후에 세포 내에서 측정될 수 있다. 이들 연구에 대한 글루코스 유사체의 예시적인 유형은 비제한적으로 방사성 글루코스 유사체, 예컨대 2-데옥시-D-[1,2-3H]-글루코스, 2-데옥시-D-[1-14C]-글루코스, 또는 2-데옥시-2-(18F)-플루오로-D-글루코스 (18FDG), 또는 형광 글루코스 유사체, 예컨대 2-[N-(7-니트로벤즈-2-옥사-1,3-디악솔-4-일)아미노]-2-데옥시글루코스 (2-NBDG)를 포함한다. 방사성 글루코스 유사체 흡수의 측정은 섬광 계수기를 필요로 하지만, 2-NBDG 흡수는 일반적으로 유세포측정 또는 형광 현미경검사에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, 글루코스 흡수는 방사선-표지된 글루코스 2-데옥시-2-[불소-18]플루오로- D-글루코스 (18F-FDG)의 흡수에 의해 측정된다. 추가 구현예에서, 18F-FDG의 검출은 양전자 방출 단층촬영 (PET)에 의한 것이다. 일부 구현예에서, 생검은 GBM 종양으로부터 취한다. 18F-FDG를 측정하는 예의 상세한 설명은 아래의 실시예에서 제공된다.
특정 양태에서, 본 방법은 생물학적 샘플 예컨대 종양 샘플의 글루코스 흡수를 대조군과 비교하는 것에 관한 것일 수 있다. 배수 증가 또는 감소는 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, 12-, 13-, 14-, 15-, 16-, 17-, 18-, 19-, 20-, 25-, 30-, 35-, 40-, 45-, 50-, 55-, 60-, 65-, 70-, 75-, 80-, 85-, 90-, 95-, 100- 이상, 또는 그 안에서 도출가능한 임의의 범위일 수 있거나, 적어도 또는 최대 그것일 수 있다. 대안적으로, 샘플과 참조 사이의 발현의 차이는 퍼센트 감소 또는 증가로서 표현될 수 있고, 그 예는 적어도 또는 최대 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000% 차이, 또는 그 안에서 도출가능한 임의의 범위이다.
상대 발현 수준을 표현하기 위한 다른 방식은 정규화 또는 상대 숫자 예컨대 0.001, 0.002, 0.003, 0.004, 0.005, 0.006, 0.007, 0.008, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03. 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7. 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 또는 그 안에서 도출가능한 임의의 범위이다. 일부 구현예에서, 상기 수준은 대조군에 대한 것일 수 있다.
알링즘, 예컨대 가중 투표 프로그램은, 바이오마커 수준의 평가를 촉진하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 다른 임상 증거는 그릇된 평가의 위험을 감소시키기 위해 바이오마커-기반 테스트와 조합될 수 있다. 다른 세포유전적 평가는 일부 구현예에서 고려될 수 있다.
합성방법
또다른 양태에서, 본 개시내용은 반응식 1 또는 반응식 2에 따르는, 식 I, I*의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 제조 방법를 제공하고:
반응식 1
반응식 2
여기서:
X는 O, S, 또는 NH;
Z는 아릴 또는 헤테로아릴;
R1는 알킬;
R2a 및 R2b는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택되고;
R3는 수소, 알킬, 또는 아실;
R4는 알콕시;
R5는 알킬;
R21는 이탈기, 예를 들어, 할로알킬 또는 설포닐알킬로 치환된 알킬;
B는 염기;
Nu는 질소-함유 헤테로사이클 (예를 들어, 적어도 하나의 N-H 결합을 갖는), 아미노알킬, 또는 하이드록시알킬;
Sv1는 용매; 그리고
n은 0-3이다.
특정 바람직한 구현예에서, R21는 설포닐알킬 (예를 들어, CH3S(O)2OCH2-)이다.
특정 구현예에서, B는 질소성 염기 (예를 들어, 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민)이다.
특정 구현예에서, Nu는 적어도 하나의 N-H 결합을 갖는 질소-함유 헤테로사이클 (예를 들어, 모르폴린, N-메틸피페라진, 피페라딘, 또는 피롤리딘)이다. 다른 구현예에서, Nu는 아미노알킬 (예를 들어, 디메틸아민)이다.
특정 구현예에서, 용매는 아프로틱 용매 (예를 들어, 디메틸포름아미드)이다.
특정 바람직한 구현예에서, 방법은 반응식 3 또는 4에 따르는 단계를 추가로 포함하고:
반응식 3
반응식 4
여기서:
R22는 알킬 또는 하이드록시알킬;
R23a 및 R23b는 각각 알킬;
R24는 아미노아릴 또는 아미노헤테로아릴; 그리고
Sv2는 산이다.
특정 바람직한 구현예에서, R22는 하이드록시알킬이다.
특정 구현예에서, R23a 및 R23b는 각각 메틸이다.
특정 구현예에서, R24는 아미노아릴이다. 다른 구현예에서, R24는 아미노헤테로아릴이다.
특정 구현예에서, Sv2는 알킬산 (예를 들어, 아세트산)이다.
특정 바람직한 구현예에서, 반응식 3 또는 4에서의 단계는 범위 115-150°C 온도에서 수행된다. 특정 구현예에서, 단계는 범위 125-130°C 온도에서 수행된다. 특정 구현예에서, 단계는 염기, 예컨대 암모늄 하이드록사이드로 처리를 추가로 포함한다.
특정 구현예에서, 방법은 정제 단계를 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 정제 단계는 칼럼 크로마토그래피, 분취용 박층 크로마토그래피, 또는 고성능 액체 크로마토그래피를 포함한다.
정의
본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 과학적 및 기술적 용어들은 당해 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에 기재된 화학, 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 세포 및 암 생물학, 신경생물학, 신경화학, 바이러스학, 면역학, 미생물학, 약리학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학과 연계하여 사용된 명명법 및 이들의 기술은 당업계에서 잘 알려지고 통상적으로 사용되는 것들이다.
본 개시내용의 방법 및 기술은, 달리 나타내지 않는 한, 당해 분야에서 잘 알려지고 본 명세서 전반에 걸쳐 인용되고 논의된 다양한 일반적이고 보다 특이적인 참고문헌에 기재된 바와 같은 종래의 방법에 따라 일반적으로 수행된다. 예를 들어 "Principles of Neural Science", McGraw-Hill Medical, New York, N.Y. (2000); Motulsky, "Intuitive Biostatistics", Oxford University Press, Inc. (1995); Lodish 등, "Molecular Cell Biology, 4th ed.", W. H. Freeman & Co., New York (2000); Griffiths 등, "Introduction to Genetic Analysis, 7th ed.", W. H. Freeman & Co., N.Y. (1999); 그리고 Gilbert 등, "Developmental Biology, 6th ed.", Sinauer Associates, Inc., Sunderland, MA (2000)를 참고한다.
본 명세서에 사용된 화학 용어들은, 본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한, 문헌 "The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms", Parker S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco, C.A. (1985)에 의해 예시된 바와 같이, 당업계에서 통상적인 용법에 따라 사용된다.
본원에서 언급된 모든 상기, 및 임의의 다른 공보, 특허 및 공개된 특허 출원은 구체적으로 본 명세서에 참고로 편입된다. 상충하는 경우에, 그것의 특이적 정의를 포함한 본 명세서가 우선할 것이다.
용어 "물질(agent)"은 화합물 (예컨대 유기 또는 무기 화합물, 화합물의 혼합물), 생물학적 거대분자 (예컨대 그 일부를 포함한 핵산, 항체뿐만 아니라 인간화된, 키메라 및 인간 항체 및 단클론성 항체, 단백질 또는 이들의 일부분, 예를 들어, 펩타이드, 지질, 탄수화물), 또는 생물학적 물질 예컨대 박테리아, 식물, 진균, 또는 동물 (특히 포유동물) 세포 또는 조직으로부터 만들어진 추출물을 나타내기 위해 본 명세서에 사용된다. 물질은, 예를 들어, 그 구조가 알려진 물질, 및 그 구조가 알려지지 않은 물질을 포함한다. AR을 억제하거나 AR 분해를 촉진하는 그러한 물질의 능력은 본 개시내용의 방법 및 조성물에서 "치료제"로서 적합하도록 만들 수 있다.
"환자", "대상체", 또는 "개체"는 상호교환적으로 사용되고 인간 또는 비-인간 동물을 지칭한다. 이들 용어들은 포유동물, 예컨대 인간, 영장류, 가축 동물 (소과, 돼지, 등을 포함함), 반려 동물 (예를 들어, 갯과, 고양이, 등) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함한다.
병태 또는 환자를 "치료하는"은 임상 결과를 포함하여 유익하거나 원하는 결과를 얻기 위한 단계를 수행하는 것을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되고 당업계에서 잘 이해되는 바와 같이, "치료"는 임상 결과를 포함하여 유익한 또는 원하는 결과를 얻기 위한 접근법이다. 유익한 또는 원하는 임상 결과는, 비제한적으로, 하나 이상의 증상 또는 병태의 완화 또는 개선, 질환 정도의 약화, 질환의 안정화된 (즉 악화되지 않은) 상태, 질환의 확산 예방, 질환 진행의 지연 또는 늦춤, 질환 상태의 개선 또는 일시적 처방, 및 검출가능하든 또는 검출불가능하든 (부분적이든 또는 전체적이든) 차도를 포함할 수 있다. "치료"는 또한 치료를 받지 않는 경우 기대된 생존과 비교하여 생존을 연장하는 것을 의미할 수 있다.
용어 "예방하는"은 업계에서 이해되고, 그리고 병태, 예컨대 국소 재발 (예를 들어, 통증), 질환 예컨대 암, 증후군 복합체 예컨대 심부전 또는 임의의 다른 의료 병태와 연관하여 사용될 때, 당업계에서 잘 이해되고, 조성물을 투여하지 않은 대상체에 비하여 대상체에서 의료 병태의 증상의 빈도를 감소시키거나 그 개시를 지연시키는 조성물의 투여를 포함한다. 따라서, 암의 예방은, 예를 들어, 미처리된 대조군 모집단에 비하여 예방적 치료를 받은 환자의 모집단에서 검출가능한 암성 성장의 수를 감소시키는 것 및/또는 미처리된 대조군 모집단에 대비하여 치료된 모집단에서, 예를 들어, 통계적으로 및/또는 임상적으로 상당한 양으로 검출가능한 암성 성장의 출현을 지연시키는 것을 포함한다.
대상체에게 서브스턴스, 화합물 또는 물질을 "투여하는" 또는 "투여"는 당해 분야의 숙련가에게 알려진 다양한 방법 중 하나를 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 화합물 또는 물질은 정맥내로, 동맥내로, 진피안으로, 근육내로, 복강내로, 피하로, 안구로, 설하로, 경구로 (섭취에 의해), 비강내로 (흡입에 의해), 척수내로, 뇌내로, 및 경피로 (흡수에 의해, 예를 들어, 피부 덕트를 통해) 투여될 수 있다. 화합물 또는 물질은 또한, 화합물 또는 물질의 연장된, 느린 또는 조절된 방출을 제공하는 재충전가능 또는 생분해성 중합체 디바이스 또는 다른 디바이스, 예를 들어, 패치 및 펌프, 또는 제형에 의해 적절하게 도입될 수 있다. 투여는 또한, 예를 들어, 일회, 복수의 횟수, 및/또는 하나 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다.
대상체에게 서브스턴스, 화합물 또는 물질을 투여하는 적절한 방법은 또한, 예를 들어, 대상체의 나이 및/또는 신체 조건 및 화합물 또는 물질의 화학적 및 생물학적 특성 (예를 들어, 용해도, 소화성, 생체이용률, 안정성 및 독성)에 의존할 것이다. 일부 구현예에서, 화합물 또는 물질은 경구로, 예를 들어, 섭취에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 경구로 투여된 화합물 또는 물질은 연장 방출 또는 서방형 제형으로 되거나, 또는 그와 같은 서방출 또는 연장 방출을 위한 디바이스를 사용하여 투여된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 어구 "공동 투여"는 제2 물질이 이전에 투여된 치료제가 신체에서 여전히 효과적인 동안에 투여되도록 (예를 들어, 2 종의 물질은 환자에서 동시에 효과적이어서, 2 종의 물질의 상승작용 효과를 포함할 수 있음) 2 또는 그 초과의 상이한 치료제의 임의의 형태의 투여를 지칭한다. 예를 들어, 상이한 치료 화합물은 동일한 제형 또는 별도의 제형으로, 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 따라서, 그와 같은 치료를 받은 개체는 상이한 치료제의 조합된 효과로부터 이익을 얻을 수 있다.
약물 또는 물질의 "치료 유효량" 또는 "치료적으로 효과적인 용량"은 대상체에게 투여될 때 의도된 치료적 효과가 있는 약물 또는 물질의 양이다. 전체 치료 효과는 1회 용량의 투여에 의해 반드시 발생하지는 않고 일련의 용량의 투여 후에만 일어날 수 있다. 따라서, 치료 유효량은 하나 이상의 투여로 투여될 수 있다. 대상체에 대해 필요한 정확한 유효량은, 예를 들어, 대상체의 크기, 건강 및 연령, 및 치료되고 있는 병태, 예컨대 암 또는 MDS의 성질 및 정도에 의존할 것이다. 숙련된 작업자는 일상적인 실험과정에 의해 주어진 상황에 대한 유효량을 쉽게 결정할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "임의의" 또는 "임의로"라는 용어는 이후에 설명되는 사건 또는 상황이 발생할 수 있거나 발생하지 않을 수 있음을 의미하며, 설명은 사건 또는 상황이 발생하는 경우와 발생하지 않는 경우를 포함한다. 예를 들어, "임의로 치환된 알킬"은 알킬이 치환될 수 있을 뿐만 아니라 알킬이 치환되지 않은 경우를 지칭한다.
본 발명의 화합물에 대한 치환체 및 치환 패턴은 당업자에 의해 선택되어 당업계에 공지된 기술 및 설정된 방법에 의해 용이하게 합성될 수 있는 화학적으로 안정한 화합물을 생성할 수 있는 것으로 이해된다. 아래에서 쉽게 구할 수 있는 출발 물질에서. 치환기 자체가 하나 이상의 기로 치환되는 경우, 이들 다중 기는 안정한 구조가 생성되는 한 동일한 탄소 상에 또는 상이한 탄소 상에 있을 수 있는 것으로 이해된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "임의로 치환된"은 주어진 구조에서 1 내지 6개의 수소 라디칼을, 비제한적으로 다음을 포함하는 특정 치환기의 라디칼로 대체하는 것을 지칭한다: 히드록실, 히드록시알킬, 알콕시, 할로겐, 알킬, 니트로, 실릴, 아실, 아실옥시, 아릴, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아미노, 아미노알킬, 시아노, 할로알킬, 할로알콕시, -OCO-CH2-O-알킬, -OP(O)(O-알킬)2 또는 -CH2-OP(O)(O-알킬)2. 바람직하게는, "임의로 치환된"은 주어진 구조에서 1 내지 4개의 수소 라디칼을 상기 언급된 치환기의 라디칼로 대체하는 것을 지칭한다. 보다 바람직하게는, 1 내지 3개의 수소 라디칼이 상기 언급된 치환기로 대체된다. 치환기는 추가로 치환될 수 있는 것으로 이해된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "알킬"은 비제한적으로 C1-C10 직쇄 알킬 기 또는 C1-C10 분지쇄 알킬 기를 포함하는 포화 지방족 기를 지칭한다. 바람직하게는, "알킬" 기는 C1-C6 직쇄 알킬 기 또는 C1-C6 분지쇄 알킬 기를 지칭한다. 가장 바람직하게는, "알킬" 기는 C1-C4 직쇄 알킬 기 또는 C1-C4 분지쇄 알킬 기를 지칭한다. "알킬"의 예는, 비제한적으로, 메틸, 에틸, 1-프로필, 2-프로필, n-부틸, sec-부틸, tert-부틸, 1-펜틸, 2-펜틸, 3-펜틸, 네오-펜틸, 1-헥실, 2-헥실, 3-헥실, 1-헵틸, 2-헵틸, 3-헵틸, 4-헵틸, 1-옥틸, 2-옥틸, 3-옥틸 또는 4-옥틸 등을 포함한다. "알킬" 기는 임의로 치환될 수 있다.
용어 "아실"은 업계에서 이해되고 일반 식 하이드로카르빌C(O)-, 바람직하게는 알킬C(O)-에 의해 제시된 기를 지칭한다.
용어 "아실아미노"는 업계에서 이해되고 아실 기로 치환된 아미노 기를 지칭하고 예를 들어, 식 하이드로카르빌C(O)NH-에 의해 제시될 수 있다.
용어 "아실옥시"는 업계에서 이해되고 일반 식 하이드로카르빌C(O)O-, 바람직하게는 알킬C(O)O-에 의해 제시된 기를 지칭한다.
용어 "알콕시"는 산소가 부착된 알킬 기를 지칭한다. 대표적인 알콕시 기는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, tert-부톡시 및 기타 동종의 것을 포함한다.
용어 "알콕시알킬"은 알콕시 기로 치환된 알킬 기를 지칭하고 일반 식 알킬-O-알킬에 의해 제시될 수 있다.
용어 "알킬"은 직쇄 알킬 기, 분지쇄 알킬 기, 사이클로알킬 (지환족) 기, 알킬-치환된 사이클로알킬 기, 및 사이클로알킬-치환된 알킬 기를 포함하는 포화 지방족 기를 지칭한다. 바람직한 구현예에서, 직쇄 또는 분지쇄 알킬는 그것의 골격에서 30개 이하 (예를 들어, 직쇄에 대해 C1-30, 분지쇄에 대해 C3-30), 및 더 바람직하게는 20개 이하의 탄소 원자를 갖는다.
또한, 명세서, 실시예 및 청구범위 전체에 사용된 바와 같은 용어 "알킬"은 비치환된 및 치환된 알킬 기 둘 모두를 포함하는 것으로 의도되고, 그것의 후자는 탄화수소 골격의 1개 이상의 탄소 상의 수소를 대체하는 치환체를 갖는 알킬 모이어티를 지칭하되, 이 모이어티는 할로알킬 기 예컨대 트리플루오로메틸 및 2,2,2-트리플루오로에틸 등을 포함한다.
용어 "Cx-y" 또는 "Cx-Cy"는, 화학 모이어티, 예컨대, 아실, 아실옥시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 또는 알콕시와 함께 사용될 때, 사슬에서 x 내지 y개의 탄소를 함유하는 기를 포함하기 위한 것이다. C0알킬은, 기가 말단 위치에 있으면 수소를 나타내고, 내부에 있으면 결합을 나타낸다. C1-6알킬 기는, 예를 들어, 사슬에서 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "알킬아미노"는 적어도 하나의 알킬 기로 치환된 아미노 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "알킬티오"는 알킬 기로 치환된 티올 기를 지칭하고, 일반 식 알킬S-에 의해 제시될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "아미드"는 기
를 지칭하되, R9 및 R10 각각은 독립적으로 수소 또는 하이드로카르빌 기를 나타내거나, 또는 R9 및 R10은, 이들이 부착된 N 원자와 함께 합쳐져서, 링 구조에서 4 내지 8개의 원자를 갖는 헤테로사이클을 완성한다.
용어들 "아민" 및 "아미노"는 업계에서 이해되고 비치환된 및 치환된 아민 및 이의 염 둘 모두, 예를 들어, 다음에 의해 제시될 수 있는 모이어티를 지칭하되, R9, R10, 및 R10' 각각은 독립적으로 수소 또는 하이드로카르빌 기를 나타내거나, 또는 R9 및 R10은, 이들이 부착된 N 원자와 함께 합쳐져서, 링 구조에서 4 내지 8개의 원자를 갖는 헤테로사이클을 완성한다.
여기서 R9, R10, 및 R10' 각각은 독립적으로 수소 또는 하이드로카르빌 기를 나타내거나, 또는 R9 및 R10은, 이들이 부착된 N 원자와 함께 합쳐져서, 링 구조에서 4 내지 8개의 원자를 갖는 헤테로사이클을 완성한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "아미노알킬"은 아미노 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "아르알킬"은 아릴 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "아릴"은 치환된 또는 비치환된 단일-링 방향족기를 포함하되, 상기 링 중 각각의 원자는 탄소이다. 바람직하게는 상기 링은 5- 내지 7-원 링, 더 바람직하게는 6-원 링이다. 용어 "아릴"은 또한 2개 이상의 환형 링을 갖는 폴리사이클릭 링계를 포함하되, 2개 이상의 탄소는 내지 2개의 인접하는 링에 공통이되, 상기 링 중 적어도 하나는 방향족, 예를 들어, 다른 환형 링은 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 아릴 기는 벤젠, 나프탈렌, 펜안트렌, 페놀, 아닐린, 및 기타 동종의 것을 포함한다.
용어 "카바메이트"는 업계에서 이해되고 다음 기를 지칭하되,
여기서 R9 및 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카르빌 기를 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "카보사이클릴알킬"은 카보사이클 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "카보사이클"은 5-7 원 모노사이클릭 및 8-12 원 바이사이클릭 이을 포함한다. 바이사이클릭 카보사이클의 각각의 링은 포화, 불포화 및 방향족 링으로부터 선택될 수 있다. 카보사이클은 1개, 2개 또는 3개 이상의 원자가 두 링 사이에 공유되는 바이사이클릭 분자를 포함한다. 용어 "융합 카보사이클"은 각각의 링이 다른 링과 2개의 인접한 원자를 공유하는 바이사이클릭 카보사이클을 의미한다. 융합 카보사이클의 각각의 링은 포화, 불포화 및 방향족 링으로부터 선택될 수 있다. 예시적 구현예에서, 방향족 링, 예를 들어, 페닐은 포화 또는 불포화 링, 예를 들어, 사이클로헥산, 사이클로펜탄, 또는 사이클로헥센에 융합될 수 있다. 원자가가 허용하는 한 포화, 불포화 및 방향족 바이사이클릭 링의 모든 조합은 카보사이클릭의 정의에 포함된다. 예시적 "카보사이클"은 시클로펜탄, 시클로헥산, 비시클로[2.2.1]헵탄, 1,5-시클로옥타디엔, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌, 비시클로[4.2.0]옥트-3-엔, 나프탈렌 및 아다만탄을 포함한다. 예시적 융합 카보사이클은 데칼린, 나프탈렌, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌, 비시클로[4.2.0]옥탄, 4,5,6,7-테트라하이드로-1H-인덴 및 바이사이클로[4.1.0]헵트-3-엔을 포함한다. "카보사이클"은 수소 원자를 보유할 수 있는 임의의 하나 이상의 위치에서 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "카보사이클릴알킬"은 카보사이클 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "카보네이트"는 업계에서 이해되고 기 -OCO2-를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "카복시"는 식 -CO2H에 의해 제시된 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "에스테르"는 기 -C(O)OR9를 지칭하되, R9는 하이드로카르빌 기를 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "에테르"는 산소를 통해 또 다른 하이드로카르빌 기에 연결된 하이드로카르빌 기를 지칭한다. 따라서, 하이드로카르빌 기의 에테르 치환체는 하이드로카르빌-O-일 수 있다. 에테르는 대칭 또는 비대칭일 수 있다. 에테르의 예는, 비제한적으로, 헤테로사이클-O-헤테로사이클 및 아릴-O-헤테로사이클을 포함한다. 에테르는 "알콕시알킬" 기를 포함하되, 이 기는 일반 식 알킬-O-알킬에 의해 제시될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어들 "할로" 및 "할로겐"은 할로겐을 의미하고, 클로로, 플루오로, 브로모, 및 아이오도를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어들 "헤트아르알킬" 및 "헤테로아르알킬"은 헤트아릴 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
용어들 "헤테로아릴" 및 "헤트아릴"은 치환된 또는 비치환된 방향족 단일 링 구조, 바람직하게는 5- 내지 7-원 링, 더 바람직하게는 5- 내지 6-원 링을 포함하되, 그것의 링 구조는 적어도 하나의 헤테로원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로원자, 더 바람직하게는 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함한다. 용어들 "헤테로아릴" 및 "헤트아릴"은 또한 2개 이상의 환형 링을 갖는 폴리사이클릭 링계를 포함하되, 2개 이상의 탄소는 2개의 인접하는 링에 공통이되, 링 중 적어도 하나는 헤테로방향족이고, 예를 들어, 다른 환형 링은 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 헤테로아릴 기는, 예를 들어, 피롤, 푸란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 및 피리미딘, 및 기타 동종의 것을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "헤테로원자"는 탄소 또는 수소 이외의 임의의 원소의 원자를 의미한다. 바람직한 헤테로원자는 질소, 산소, 및 황이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "헤테로사이클릴알킬"은 헤테로사이클 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
용어들 "헤테로사이클릴", "헤테로사이클", 및 "헤테로사이클릭"은 치환된 또는 비치환된 비-방향족 링 구조, 바람직하게는 3- 내지 10-원 링, 더 바람직하게는 3- 내지 7-원 링을 지칭하되, 그것의 링 구조는 적어도 하나의 헤테로원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로원자, 더 바람직하게는 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함한다. 용어들 "헤테로사이클릴" 및 "헤테로사이클릭"은 또한 2개 이상의 환형 링을 갖는 폴리사이클릭 링계를 포함하되, 2개 이상의 탄소는 2개의 인접하는 링에 공통이되, 링 중 적어도 하나는 헤테로사이클릭이고, 예를 들어, 다른 환형 링은 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 헤테로사이클릴 기는, 예를 들어, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 모르폴린, 락톤, 락탐, 및 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "하이드로카르빌"은 =O 또는 =S 치환체를 갖지 않고, 전형적으로 적어도 하나의 탄소-수소 결합 및 주로 탄소 골격을 갖지만 선택적으로 헤테로원자를 포함할 수 있는 탄소 원자를 통해 결합될 기를 지칭한다. 따라서, 기들 예컨대 메틸, 에톡시에틸, 2-피리딜, 및 심지어 트리플루오로메틸은 본원의 목적상 하이드로카르빌인 것으로 간주되지만 치환체 예컨대 (연결 탄소 상에 =O 치환체를 갖는) 아세틸 및 (탄소가 아닌 산소를 통해 연결된) 에톡시는 아니다. 하이드로카르빌 기는, 비제한적으로 아릴, 헤테로아릴, 카보사이클, 헤테로사이클, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 이들의 조합을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "하이드록시알킬"은 하이드록시 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "저급"은, 화학 모이어티, 예컨대, 아실, 아실옥시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 또는 알콕시와 공조하여 사용될 때, 치환체에서 10개 이하, 바람직하게는 6개 이하의 원자가 있는 기를 포함하기 위한 것이다. "저급 알킬"은, 예를 들어, 10개 이하, 바람직하게는 6개 이하의 탄소 원자를 함유하는 알킬 기를 지칭한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 정의된 아실, 아실옥시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 또는 알콕시 치환체 각각은, 단독으로 또는 다른 치환체와 조합하여, 예컨대 인용 하이드록시알킬 및 아르알킬 (이 경우에, 예를 들어, 아릴 기 내의 원자는 알킬 치환체에서 탄소 원자를 계수할 때 카운트되지 않음)에서 나타나든지 저급 아실, 저급 아실옥시, 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 또는 저급 알콕시이다.
용어들 "폴리사이클릴", "폴리사이클", 및 "폴리사이클릭"은 2개 이상의 링 (예를 들어, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 및/또는 헤테로사이클릴)를 지칭하되, 2개 이상의 원자는 2개의 인접하는 링에 공통이고, 예를 들어, 링은 "융합 링"이다. 폴리사이클의 각각의 링은 치환되거나 비치환될 수 있다. 특정 구현예에서, 폴리사이클의 각각의 링은 링에서 3 내지 10개, 바람직하게는 5 내지 7개의 원자를 함유한다.
용어 "설페이트"는 업계에서 이해되고 기 -OSO3H, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 지칭한다.
용어 "설폰아미드"는 업계에서 이해되고 다음 일반식에 의해 제시된 기를 지칭하되,
여기서 R9 및 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카르빌을 나타낸다.
용어 "설폭사이드"는 업계에서 이해되고 기 -S(O)-를 지칭한다.
용어 "설포네이트"는 업계에서 이해되고 기 SO3H, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 지칭한다.
용어 "설폰"은 업계에서 이해되고 기 -S(O)2-를 지칭한다.
용어 "치환된"은 골격의 1개 이상의 탄소 상에서 수소를 대체하는 치환체를 갖는 모이어티를 지칭한다. ."치환" 또는 "로 치환된"은, 그와 같인 치환이 치환된 원자 및 치환체의 허용된 원자가를 따르고, 상기 치환이 예를 들어 재배열, 고리화, 제거 등과 같은 것에 의해 변환을 자발적으로 겪지 않는 안정한 화합물을 생성하도록 암시된 조건을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치환된"은 유기 화합물의 모든 허용되는 치환체를 포함하는 것으로 고려된다. 넓은 양태에서, 허용되는 치환체는 유기 화합물의 비환형 및 환형, 분지 및 비분지, 카보사이클릭 및 헤테로사이클릭, 방향족 및 비-방향족 치환체를 포함한다. 허용되는 치환체는 하나 이상일 수 있고, 적절한 유기 화합물과 동일 또는 상이할 수 있다. 본 발명을 위해, 헤테로원자 예컨대 질소는 헤테로원자의 원자가를 만족시키는 본 명세서에 기재된 유기 화합물의 수소 치환체 및/또는 임의의 허용되는 치환체를 가질 수 있다. 치환체는 본 명세서에 기재된 임의의 치환체, 예를 들어, 할로겐, 하이드록실, 카보닐 (예컨대 카복실, 알콕시카보닐, 포르밀, 또는 아실), 티오카보닐 (예컨대 티오에스테르, 티오아세테이트, 또는 티오포르메이트), 알콕실, 포스포릴, 포스페이트, 포스포네이트, 포스피네이트, 아미노, 아미도, 아미딘, 이민, 시아노, 니트로, 아지도, 설프하이드릴, 알킬티오, 설페이트, 설포네이트, 설파모일, 설폰아미도, 설포닐, 헤테로사이클릴, 아르알킬, 또는 방향족 또는 헤테로방향족 모이어티를 포함할 수 있다. 탄화수소 사슬 상에 치환된 모이어티는, 적절하다면 그 자체로 치환될 수 있음은 당해 분야의 숙련가에 의해 이해될 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "티오알킬"은 티올 기로 치환된 알킬 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "티오에스테르"는 기 -C(O)SR9 또는 -SC(O)R9를 지칭하되,
여기서 R9는 하이드로카르빌을 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "티오에테르"는 에테르와 동등하되, 상기 산소는 황으로 대체된다.
용어 "우레아"는 업계에서 이해되고 다음 일반 식에 의해 제시될 수 있되,
여기서 R9 및 R10은 독립적으로 수소 또는 하이드로카르빌을 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "조절한다"는 기능 또는 활성 (예컨대 세포 증식)의 억제 또는 저해 뿐만 아니라 기능 또는 활성의 향상을 포함한다.
어구 "약제학적으로 허용가능한"은 기술적으로 인식된다. 특정 구현예에서, 상기 용어는 조성물, 부형제, 아쥬반트, 폴리머 및 다른 물질 및/또는 투약 형태를 포함하는데, 이들은, 건전한 의료 판단의 범위 내에서, 합리적인 유익/유해 비율에 비례하는 과도한 독성, 자극, 알러지성 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉시에 사용하기에 적합하다.
본 명세서에서 사용된 "약제학적으로 허용가능한 염" 또는 "염"은 환자의 치료에 적합하거나 그것과 양립가능한 산 부가 염 또는 염기성 부가 염을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "약제학적으로 허용가능한 산 부가 염"은 식 I에 의해 제시된 임의의 기재 화합물의 임의의 무독성 유기 또는 무기 염을 의미한다. 적합한 염을 형성하는 예시적 무기 산은 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산, 뿐만 아니라 금속 염 예컨대 나트륨 모노하이드로젼 오르토포스페이트 및 칼륨 수소 설페이트를 포함한다. 적합한 염을 형성하는 예시적 유기 산은 모노-, 디-, 및 트리카복실산 예컨대 글라이콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 말레산, 벤조산, 페닐아세트산, 신남산 및 살리실산, 뿐만 아니라 설폰산 예컨대 p-톨루엔 설폰산 및 메탄설폰산을 포함한다. 일산 또는 이산 염이 형성될 수 있고, 그와 같은 염은 수화된, 용매화된 또는 실질적으로 무수 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 식 I의 화합물의 산 부가 염은 물 및 다양한 친수성 유기 용매에서 더 용해되고, 일반적으로 그것의 유리 염기성 형태와 비교하여 더 높은 용융점을 입증한다. 적절한 염의 선택은 당해 분야의 숙련가에게 알려질 것이다. 다른 비-약제학적으로 허용가능한 염, 예를 들어, 옥살레이트는, 예를 들어, 실험실 사용을 위해, 또는 약제학적으로 허용가능한 산 부가 염으로의 후속적인 전환을 위해 식 I의 화합물의 단리로 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "약제학적으로 허용가능한 염기성 부가 염"은 식 I으로 제시된 임의의 산 화합물 또는 그것의 중간체 중 임의의 것의 임의의 무독성 유기 또는 무기 염기 부가 염을 의미한다. 적합한 염을 형성하는 예시적 무기 염기는 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 또는 바륨 하이드록사이드를 포함한다. 적합한 염을 형성하는 예시적 유기 염기는 지방족, 지환족, 또는 방향족 유기 아민 예컨대 메틸아민, 트리메틸아민 및 피콜린 또는 암모니아를 포함한다. 적절한 염의 선택은 당해 분야의 숙련가에게 알려질 것이다.
본 개시내용의 방법 및 조성물에서 유용한 많은 화합물은 그것의 구조에서 적어도 하나의 입체 중심을 갖는다. 상기 입체 중심은 R 또는 S 배치형태로 존재할 수 있고, 상기 R 및 S 표기법은 순수한 Appl. Chem. (1976), 45, 11-30에 기재된 규칙과 관련하여 사용된다. 본 개시내용은 모든 입체이성질체 형태 예컨대 거울상이성질체 및 부분입체이성질체 형태의 화합물, 염, 전구약물 또는 이들의 혼합물 (모든 가능한 입체이성질체들의 혼합물 포함)을 고려한다. 예를 들어, WO 01/062726를 참고한다.
게다가, 알케닐 기를 함유하는 특정 화합물은 Z (주잠멘) 또는 E (엔트게겐) 이성질체로서 존재할 수 있다. 각 경우에, 본 개시내용은 혼합물 및 별도의 개별 이성질체 둘 모두를 포함한다.
화합물의 일부는 또한, 호변이성질체 형태로 존재할 수 있다. 그와 같은 형태는, 본 명세서에 기재된 식으로 명백하게 나타내지 않지만, 본 개시내용의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.
"전구약물" 또는 "약제학적으로 허용가능한 전구약물"은 본 개시내용의 화합물 (예를 들어, 식 I의 화합물)를 형성하기 위해 투여 후의 숙주에서 대사작용된, 예를 들어 가수분해된 또는 산화되는 화합물을 지칭한다. 전구약물의 전형적인 예는 활성 화합물의 작용성 모이어티 상에 생물학적으로 불안정한 또는 절단가능 (보호) 기를 갖는 화합물을 포함한다. 전구약물은 산화된, 환원된, 아민화된, 탈아민화된, 하이드록실화된, 탈하이드록실화된, 가수분해된, 탈가수분해된, 알킬화된, 탈알킬화된, 아실화된, 탈아실화된, 인산화된, 또는 탈인산화되어 활성 화합물을 생산할 수 있는 화합물을 포함한다. 생물학적 불안정한 또는 절단가능 (보호) 기로서 에스테르 또는 포스포르아미데이트를 사용하는 전구 약물의 예는 그것의 개시내용이 본 명세서에 참고로 편입되어 있는 U.S. 특허 6,875,751, 7,585,851, 및 7,964,580에 개시되어 있다. 본 개시내용의 전구약물은 대사작용되어 식 I의 화합물을 생산한다. 본 개시내용은 그것의 범위 내에, 본 명세서에 기재된 화합물의 전구약물을 포함한다. 적합한 전구약물의 선택 및 제조에 대한 종래의 절차는 예를 들어, "Design of Prodrugs" Ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985에 기재되어 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 어구 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 약제학적으로 허용가능한 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 약효 또는 치료 용도를 위한 약물을 제형하는데 유용한 액체 또는 고체 필터, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "용해도의 Log", "LogS" 또는 "logS"는 화합물의 수용해도를 당업계에서 정량화하기 위해 사용된다. 화합물의 수용해도는 그것의 흡수 및 분포 특성에 유의미하게 영향을 준다. 저 용해도는 종종 불량한 흡수와 함께 발생한다. LogS 값은 mol/리터로 측정된 용해도의 단위 제거 로그 (밑 10)이다.
약제학적 조성물
본 발명의 조성물 및 방법은 필요한 개체를 치료하기 위해 이용될 수 있다. 특정 구현예에서, 개체는 포유동물 예컨대 인간, 또는 비-인간 포유동물이다. 동물, 예컨대 인간에게 투여될 때, 본 조성물 또는 화합물은 바람직하게는, 예를 들어, 본 발명의 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물 로서 투여된다. 약제학적으로 허용가능한 담체는 당해 분야에서 잘 알려져 있고, 그리고, 예를 들어, 수용액 예컨대 물 또는 생리적으로 완충 식염수 또는 다른 용매 또는 비히클 예컨대 글리콜, 글리세롤, 오일 예컨대 올리브 오일, 또는 주입가능 유기 에스테르를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 그와 같은 약제학적 조성물이 인간 투여를 위한 것, 특히 침습성 투여 경로 (즉, 경로, 예컨대, 상피 장벽을 통한 수송 또는 확산을 회피하는 주입 또는 이식)를 위한 것일 때, 수용액은 무발열원, 또는 실질적으로 무발열원이다. 부형제는, 예를 들어, 물질의 지연 방출에 영향을 미치거나 하나 이상의 세포, 조직 또는 기관을 선택적으로 표적화하기 위해 선택될 수 있다. 약제학적 조성물는 투약량 단위 형태 예컨대 정제, (스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐을 포함하는) 캡슐, 과립, 재구성용 동결건조제, 분말, 용액, 시럽, 좌약, 주입 등일 수 있다. 조성물은 또한 경피 전달 시스템, 예를 들어, 피부 패치에 존재할 수 있다. 조성물은 또한 국소 투여에 적합한 용액, 예컨대 로션, 크림, 또는 연고에 존재할 수 있다.
약제학적으로 허용가능한 담체는, 예를 들어, 화합물 예컨대 본 발명의 화합물을 안정시키고, 용해도를 증가시키거나 또는 그 흡수를 증가시키기 위해 작용하는 생리적으로 허용가능한 물질을 함유할 수 있다. 그와 같은 생리적으로 허용가능한 물질은, 예를 들어, 탄수화물, 예컨대 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란, 산화방지제, 예컨대 아스코르브산 또는 글루타티온, 킬레이트제, 저분자량 단백질 또는 다른 안정화제 또는 부형제를 포함한다. 생리적으로 허용가능한 물질을 포함하는 약제학적으로 허용가능한 담체의 선택은, 예를 들어, 조성물의 투여 경로에 좌우된다. 물질 또는 약제학적 조성물은 자가에멀젼화 약물 전달 시스템 또는 자가미세에멀젼화 약물 전달 시스템일 수 있다. 약제학적 조성물 (제제)는 또한 본 명세서에 편입될 수 있는 리포좀 또는 다른 폴리머 매트릭스, 예를 들어, 본 발명의 화합물일 수 있다. 예를 들어, 인지질 또는 다른 지질을 포함하는 리포좀은 비독성이고, 생리적으로 허용가능하고, 그리고 제조 및 투여에 상대적으로 간단하다.
어구 "약제학적으로 허용가능한"은 건전한 의료 판단의 범위 내에서, 합리적인 유익/유해 비율에 비례하는 과도한 독성, 자극, 알러지성 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉시에 사용하기에 적합한 화합물들, 물질, 조성물, 및/또는 투약 형태를 지칭하도록 본 명세서에서 이용된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 어구 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 약제학적으로 허용가능한 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 각각의 담체는 제형의 다른 성분과 양립가능하고 환자에게 유해하지 않다는 의미에서 "허용가능한" 것이어야 한다. 약제학적으로 허용가능한 담체로서 쓰일 수 있는 물질의 일부 예는 하기를 포함한다: (1) 당, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; (2) 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로스, 및 그것의 유도체, 예컨대 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; (4) 분말화된 트라가칸쓰; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 탈크; (8) 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌약 왁스; (9) 오일, 예컨대 땅콩 오일, 목화씨 오일, 잇꽃 오일, 참께 오일, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 대두 오일; (10) 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; (11) 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; (12) 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; (13) 한천; (14) 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 알루미늄 하이드록사이드; (15) 알긴산; (16) 무발열원 물; (17) 등장성 염수; (18) 링거액; (19) 에틸 알코올; (20) 포스페이트 완충 용액; 그리고 (21) 약제학적 제형에서 이용되는 다른 무독성 양립가능한 서브스턴스(substance).
약제학적 조성물 (제제)은 예를 들어 하기를 포함하는 임의의 수의 투여 경로에 의해 대상체에게 투여될 수 있다: 경구로 (예를 들어, 수성 또는 비-수용액 또는 현탁액, 정제, (스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐을 포함하는) 캡슐, 볼러스, 분말, 과립, 혀에 적용하기 위한 페이스트에서와 같이 드렌치(drench)); 경구 점막을 통합 흡수 (예를 들어, 설하로); 피하로; 경피로 (예를 들어 피부에 도포되는 패치로서); 그리고 국소적으로 (예를 들어, 피부에 도포되는 크림, 연고 또는 분무으로서). 화합물은 또한, 흡입용으로 제형화될 수 있다. 특정 구현예에서, 화합물은 멸균수에 간단히 용해되거나 현탁될 수 있다. 적절한 투여 경로 및 이에 적합한 조성물의 세부사항은 예를 들어, U.S. 특허 번호 6,110,973, 5,763,493, 5,731,000, 5,541,231, 5,427,798, 5,358,970 및 4,172,896, 뿐만 아니라 본 명세서에 인용된 특허들에서 발견될 수 있다.
제형은 단위 투약 형태로 편리하게 제시될 수 있고 조제실의 분야에서 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일 투약 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되고 있는 호스트, 특정한 투여 방식에 따라 변할 수 있다. 단일 투약 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 물질의 양은 일반적으로 치료적 효과를 생성하는 화합물의 양일 것이다. 일반적으로, 100 퍼센트 중에서, 상기 양은 활성 성분의 약 1 퍼센트 내지 약 99 퍼센트, 바람직하게는 약 5 퍼센트 내지 약 70 퍼센트, 가장 바람직하게는 약 10 퍼센트 내지 약 30 퍼센트의 범위일 것이다.
이들 제형 또는 조성물을 제조하는 방법은 활성 화합물, 예컨대 본 발명의 화합물을, 담체 및, 선택적으로, 하나 이상의 부속 성분과 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 본 발명의 화합물을 액체 담체, 또는 미세하게 분쇄된 고체 담체, 또는 둘 모두와 균일하게 및 친밀하게 회합시키고, 그리고 그 다음, 필요하면, 생성물을 형상화함으로써 제조된다.
경구 투여에 적합한 본 발명의 제형은 (스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐을 포함하는) 캡슐, 카셰, 알약, 정제, (풍미 기재, 일반적으로 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸쓰를 사용하는) 로젠지, 동결건조제, 분말, 과립의 형태, 또는 수성 또는 비-수성 액체 중 용액 또는 현탁액으로서, 또는 수중유 또는 유중수 액체 에멀전으로서, 또는 엘릭시르 또는 시럽로서, 또는 (불활성 기재, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아를 사용하는) 사탕형 알약으로서 및/또는 구세액 및 동종의 것으로서 일 수 있고, 상기 각각은 활성 성분으로서, 사전결정된 양의 본 발명의 화합물을 함유한다. 조성물 또는 화합물은 또한, 볼러스, 연약 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.
경구 투여용 고형 투약 형태 ((스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐 포함하는) 캡슐, 정제, 알약, 당의정, 분말, 과립 및 기타 동종의 것)을 제조하기 위해, 활성 성분은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체, 예컨대 나트륨 시트레이트 또는 인산제이칼슘, 및/또는 하기 중 임의의 하나와 혼합된다: (1) 충전제 또는 증량제, 예컨대 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨, 및/또는 규산; (2) 결합제, 예컨대, 예를 들어, 카복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 수크로스 및/또는 아카시아; (3) 휴멕턴트, 예컨대 글리세롤; (4) 붕해제, 예컨대 한천, 탈산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트, 및 탄산나트륨; (5) 용액 지연제, 예컨대 파라핀; (6) 흡수 가속제, 예컨대 사차 암모늄 화합물; (7) 습윤제, 예컨대, 예를 들어, 세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트; (8) 흡수제, 예컨대 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예컨대 탈크, 칼슘 스테아레이트, 스테아르산마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트, 및 이들의 혼합물; (10) 착화제, 예컨대, 변형된 및 비변형된 사이클로덱스트린; 그리고 (11) 착색제. (스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐 포함하는) 캡슐, 정제 및 알약의 경우에, 약제학적 조성물은 또한, 완충제를 포함할 수 있다. 유사한 유형의 고체 조성물은 또한, 락토스 또는 유당, 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 및 기타 동종의 것과 같은 부형제를 사용하여 연질 및 경질-채워진 젤라틴 캡슐에서 충전제로서 시용될 수 있다.
정제는 선택적으로 하나 이상의 부속 성분과 함께 압축 또는 성형에 의해 제조될 수 있다. 압축 정제는 결합제 (예를 들어, 젤라틴 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스), 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 붕해제 (예를 들어, 나트륨 전분 글라이콜레이트 또는 가교결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로스), 표면-활성 또는 분산제를 사용하여 제조될 수 있다. 성형된 정제는 불활성 액체 희석제로 흡습된 분말화된 화합물의 혼합물을 적합한 기계에서 성형함에 의해 제조될 수 있다.
약제학적 조성물의 정제, 및 다른 고형 투약 형태, 예컨대 당의정, 캡슐 (스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐을 포함함), 알약 및 과립은 코팅물 및 쉘, 예컨대 장용 코팅 및 약학적-제형 기술에서 잘 알려진 다른 코팅물로 선택적으로 채점되거나 제조될 수 있다. 이들은 또한 원하는 방출 프로파일, 다른 폴리머 매트릭스, 리포좀 및/또는 마이크로구형체를 제공하기 위해 가변 비율로, 예를 들어, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스를 사용하여 그 안에 있는 활성 성분의 느린 또는 조절 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다. 이들은, 예를 들어, 박테리아-고정 필터를 통한 여과에 의해, 또는 사용 직전에 멸균수, 또는 일부 다른 멸균 주입가능 매체에 용해될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 살균제를 혼입함에 의해 멸균될 수 있다. 이들 조성물은 또한 선택적으로 불투명화제를 함유할 수 있고, 그리고 이들이 위장관의 특정 부분에서 선택적으로 지연된 방식으로 활성 성분(들) 만을 또는 우선적으로 방출하는 조성물의 것일 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물의 예는 중합체 서브스턴스 및 왁스를 포함할 수 있다. 활성 성분은 또한, 적절하다면 상기-기재된 부형제 중 하나 이상과 함께 마이크로-캡슐화된 형태일 수 있다.
경구 투여에 유용한 액체 투약 형태는 약제학적으로 허용가능한 에멀전, 재구성용 동결건조제, 마이크로에멀전, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 활성 성분 외에, 액체 투약 형태는 불활성 희석제 통상적으로 사용된 당업계에서, 예컨대, 예를 들어, 물 또는 다른 용매, 사이클로덱스트린 및 이의 유도체, 가용화제 및 유화제, 예컨대 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 세균, 올리브, 캐스터 및 참께 오일), 글리세롤, 테트라하이드로푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 이들의 혼합물을 함유할 수 있다.
불활성 희석제 외에, 경구 조성물은 또한 아쥬반트 예컨대 습윤제, 유화 및 현탁화제, 감미제, 풍미제, 착색제, 방향제 및 보존제를 포함할 수 있다.
현탁액은, 활성 화합물 외에, 현탁화제, 예를 들어, 에톡실화된 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미세결정성 셀룰로스, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 한천 및 트라가칸쓰, 및 이들의 혼합물을 함유할 수 있다.
국소 또는 경피 투여를 위한 투약 형태는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제를 함유한다. 활성 화합물은 멸균 조건 하에서 약제학적으로 허용가능한 담체와, 그리고 필요할 수 있는 임의의 보존제, 완충액, 또는 추진제와 혼합될 수 있다.
연고, 페이스트, 크림 및 겔은, 활성 화합물 외에, 부형제, 예컨대 동물 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸쓰, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 탈크 및 산화아연, 또는 이들의 혼합물을 함유할 수 있다.
분말 및 스프레이는, 활성 화합물 외에, 부형제 예컨대 락토스, 탈크, 규산, 알루미늄 하이드록사이드, 칼슘 실리케이트 및 폴리아미드 분말, 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다. 스프레이는 추가로 관례적 추진제, 예컨대 클로로플루오로탄화수소 및 휘발성 비치환된 탄화수소, 예컨대 부탄 및 프로판을 함유할 수 있다.
경피 패치는 본 발명의 화합물의 신체로의 조절된 전달을 제공하는 추가 이점을 갖는다. 그와 같은 투약 형태는 적절한 매질에서 활성 화합물을 용해 또는 분산시킴으로써 만들어질 수 있다. 흡수 향상제는 또한 피부를 가로질러 화합물의 유동을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 그와 같은 유동 속도는 속도 조절 막을 제공하거나 또는 폴리머 매트릭스 또는 겔에서 화합물을 분산시킴으로써 조절될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 어구 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여된"은 장관 및 국소 투여 이외의 투여 방식, 일반적으로 주입에 의한 투여를 의미하고, 비제한적으로, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 관절내, 안와내, 심장내, 진피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막밑, 지주막하, 척수내 및 흉골내 주입 및 주입을 포함한다. 비경구 투여에 적합한 약제학적 조성물은 하나 이상의 활성 화합물을, 사용 직전에 멸균 주입가능 용액 또는 분산물로 재구성될 수 있는 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 멸균 등장성 수성 또는 비수용액, 분산물, 현탁액 또는 에멀전, 또는 멸균 분말과 조합하여 포함하고, 상기 조성물은 산화방지제, 완충액, 정균제, 의도된 수령체의 혈액과 제형이 등장하도록 하는 용질 또는 현탁화제 또는 증점제를 함유할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물에서 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 및 기타 동종의 것), 및 적합한 이들의 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주입가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유체성은, 예를 들어, 코팅 재료, 예컨대 레시틴의 코팅물의 사용에 의해, 분산물의 경우에 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이들 조성물은 또한, 아쥬반트 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 미생물의 작용의 예방은 다양한 항균 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산, 및 기타 동종의 것의 봉입에 의해 보장될 수 있다. 또한, 등장제, 예컨대 당, 염화나트륨, 및 기타 동종의 것을 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 수 있다. 또한, 주입가능한 약제학적 형태의 장기적인 흡수는 흡수를 지연시키는 물질 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 봉입에 의해 초래될 수 있다.
일부 경우에, 약물의 효과를 연장하기 위해, 피하 또는 근육내 주입으로부터 약물의 흡수를 늦추는 것이 바람직하다. 이것은 불량한 수용성을 갖는 결정성 또는 비정질 물질의 액체 현탁액의 사용에 의해 달성될 수 있다. 약물의 흡수율은 그 다음 그것의 용해 속도에 의존하며, 차례로, 결정 크기 및 결정형에 의존할 수 있다. 대안적으로, 비경구로 투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 약물을 오일 비히클에 용해 또는 현탁함에 의해 달성된다.
주입가능한 데포 형태는 생분해성 폴리머 예컨대 폴리락타이드-폴리글라이콜라이드에 당해 화합물의 마이크로캡슐화된 매트릭스를 형성함에 의해 제조된다. 약물 대 폴리머의 비, 및 이용된 특정한 폴리머의 성질에 따라, 약물 방출의 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 폴리머의 예는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)을 포함한다. 데포 주입가능 제형은 또한 신체 조직과 양립가능한 리포좀 또는 마이크로에멀전에 약물을 포획함에 의해 제조된다.
본 발명의 방법에 사용하기 위해, 활성 화합물은 자체로 또는 약제학적으로 허용가능한 담체와 조합하여, 예를 들어, 0.1 내지 99.5% (더 바람직하게는, 0.5 내지 90%)의 활성 성분을 함유하는 약제학적 조성물로 제공될 수 있다.
도입 방법은 또한 재충전가능하거나 또는 생분해성인 디바이스에 의해 제공될 수 있다. 다양한 서방형 중합체 디바이스가 개발되었고, 단백질성 생물약제를 포함한 약물의 조절된 전달을 위해 최근에 생체내 시험되었다. 생분해성 및 비-분해성 폴리머 둘 모두를 포함한, 다양한 생체적합성 폴리머 (하이드로겔을 포함함)가 특정 표적 부위에서 화합물의 지속 방출을 위한 임플란트를 형성하기 위해 사용될 수 있다.
약제학적 조성물에서 활성 성분의 실제의 투약량 수준은 특정 환자에 대한 원하는 치료적 반응을 달성하는데 효과적인 활성 성분의 양, 환자에 대해 독성이 없는 조성, 및 투여 방식을 얻기 위해 다변할 수 있다.
선택된 투약량 수준은 특정한 화합물의 활성 또는 이용된 화합물, 또는 이들의 에스테르, 염 또는 아미드의 조합, 투여 경로, 투여 시간, 이용된 특정한 화합물(들)의 배출 속도, 치료 기간, 이용된 특정한 화합물(들)과 조합하여 사용된 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 일반적인 건강 및 이전 병력, 및 의료 분야에서 잘 알려진 유사 인자를 포함한 다양한 인자에 의존할 것이다.
당업계에서 통상적인 기술을 갖는 의사 또는 수의사는 필요한 약제학적 조성물의 치료 유효량을 쉽게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 원하는 치료 효과를 달성하기 위해 필요한 것보다 낮은 수준에서 약제학적 조성물 또는 화합물의 용량을 개시할 수 있고, 원하는 효과가 달성될 때까지 투약량을 서서히 증가시킬 수 있다. "치료 유효량"은 원하는 치료적 효과를 유도하기에 충분한 화합물의 농도를 의미한다. 화합물의 유효량은 대상체의 체중, 성별, 연령, 및 병력에 따라 다양할 것이라는 것이 일반적으로 이해된다. 유효량에 영향을 미치는 다른 인자는, 비제한적으로, 환자의 상태, 치료되는 장애의 중증도, 화합물의 안정성, 및, 요망하는 경우, 본 발명의 화합물과 함께 투여되는 또 다른 유형의 치료제를 포함할 수 있다. 더 큰 총용량이 물질의 다중 투여에 의해 전달될 수 있다. 효능 및 투약량을 결정하는 방법은 당해 분야의 숙련가에게 알려져 있다 (본 명세서에 참고로 편입된, Isselbacher 등 (1996) Harrison's Principles of Internal Medicine 13 ed., 1814-1882).
일반적으로, 본 발명의 조성물 및 방법에서 사용된 활성 화합물의 적합한 일일 용량은 치료적 효과를 생산하는데 효과적인 최저 용량인 화합물의 양일 것이다. 그와 같은 효과적인 용량은 일반적으로 상기에 기재된 인자에 의존할 것이다.
요망하는 경우, 활성 화합물의 효과적인 일일 용량은, 선택적으로, 단위 투약 형태로 하루 종일 적절한 간격으로 별도로 투여된 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 초과 하위-용량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 특정 구현예에서, 활성 화합물은 매일 2 또는 3회 투여될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 활성 화합물은 매일 1회 투여될 수 있다.
이 치료를 투여받는 환자는 일반적으로 영장류, 특히 인간; 그리고 다른 포유동물 예컨대 말, 소, 돼지, 양, 고양이, 및 개; 가금; 그리고 애완동물을 포함한, 이를 필요로 하는 임의의 동물이다.
특정 구현예에서, 본 발명의 화합물은 단독으로 사용될 수 있거나 또는 또 다른 유형의 치료제와 공동으로 투여될 수 있다.
본 개시내용은 본 발명의 조성물 및 방법에서 본 발명의 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염의 사용을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 고려된 염은, 비제한적으로, 알킬, 디알킬, 트리알킬 또는 테트라-알킬 암모늄 염을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 고려된 염은, 비제한적으로, L-아르기닌, 베넨타민, 벤자틴, 베타인, 수산화칼슘, 콜린, 데아놀, 디에탄올아민, 디에틸아민, 2-(디에틸아미노)에탄올, 에탄올아민, 에틸렌디아민, N-메틸글루카민, 하이드라바민, 1H-이미다졸, 리튬, L-라이신, 마그네슘, 4-(2-하이드록시에틸)모폴린, 피페라진, 칼륨, 1-(2-하이드록시에틸)파이롤리딘, 나트륨, 트리에탄올아민, 트로메타민, 및 아연 염을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 고려된 염은, 비제한적으로, Na, Ca, K, Mg, Zn 또는 다른 금속 염을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 고려된 염은, 비제한적으로, 1-하이드록시-2-나프토산, 2,2-디클로로아세트산, 2-하이드록시에탄설폰산, 2-옥소글루타르 산, 4-아세트아미도벤조산, 4-아미노살리실 산, 아세트산, 아디프산, l-아스코르브산, l-아스파르트산, 벤젠설폰산, 벤조산, (+)-캄포르산, (+)-캄포르-10-설폰산, 카프르산 (데칸산), 카프로산 (헥산산), 카프릴산 (옥탄산), 카본산, 신남산, 시트르산, 사이클라민산, 도데실황산, 에탄-1,2-디설폰산, 에탄설폰산, 포름산, 푸마르산, 갈락타르산, 겐티식산, d-글루코헵톤산, d-글루콘산, d-글루쿠론산, 글루탐산, 글루타르산, 글리세로인산, 글라이콜산, 히푸르산, 브롬화수소산, 염산, 이소부티르산, 락트산, 락토바이온산, 라우르산, 말레산, l-말산, 말론산, 만델산, 메탄설폰산, 나프탈렌-1,5-디설폰산, 나프탈렌-2-설폰산, 니코틴산, 질산, 올레산, 옥살산, 팔미트산, 파모산, 인산, 프로프리오산, l-파이로글루탐산, 살리실산, 세박산, 스테아르산, 석신산, 황산, l-타르타르산, 티오시안산, p-톨루엔설폰산, 트리플루오로아세트산, 및 운데실렌산 산 염을 포함한다.
약제학적으로 허용가능한 산 부가 염은 또한 다양한 용매화물, 예컨대 물, 메탄올, 에탄올, 디메틸포름아미드, 및 기타 동종의 것으로서 존재할 수 있다. 그와 같은 용매화물의 혼합물이 또한 제조될 수 있다. 그와 같은 용매화물의 공급원은 결정화의 용매로부터 유래하거나, 제조 또는 결정화의 용매에 고유하거나, 또는 같은 용매에 우발적일 수 있다.
습윤제, 유화제 및 윤활제, 예컨대 나트륨 라우릴 설페이트 및 스테아르산마그네슘, 뿐만 아니라 착색제, 이형제, 코팅제, 감미제, 풍미제 및 방향제, 보존제 및 산화방지제는 또한 조성물에 존재할 수 있다.
약제학적으로 허용가능한 산화방지제의 예는 하기를 포함한다: (1) 수용성 산화방지제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 하이드로클로라이드, 중황산나트륨, 나트륨 메타바이설파이트, 아황산나트륨 및 기타 동종의 것; (2) 오일용해성 산화방지제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화된 하이드록시아니솔 (BHA), 부틸화된 하이드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤, 및 기타 동종의 것; 그리고 (3) 금속-킬레이트제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산, 및 기타 동종의 것을 포함한다.
실시예
본 발명은 이제 일반적으로 기재되지만, 본 발명의 특정 양태 및 구현예의 예시의 목적으로만 포함되고 본 발명을 한정하도록 의도되지 않은 하기 실시예를 참조하여 보다 쉽게 이해될 것이다.
실시예 1: JGK 시리즈의 예시적인 화합물의 제조
일반적인 절차: JGK 시리즈의 화합물은 아래에 기술된 방법 또는 다른 적합한 방법에 의해 제조할 수 있다. JGK 시리즈 화합물은 종종 JCN 접두어로 여기서 언급된다. 모든 반응은 아르곤의 불활성 분위기 하에서 일상적으로 수행되었다. 달리 지적되지 않는 한, 물질은 상업적 공급자로부터 수득되고 정제 없이 사용되었다. 모든 용매는 사용 직전 표준 기술에 의해 정제되고 건조되었다. THF 및 Et2O는 나트륨 및 벤조페논으로부터 새롭게 증류되었다. 메틸렌 클로라이드, 톨루엔, 및 벤젠은 CaH2로 환류함에 의해 정제되었다. 반응은 박층 크로마토그래피 (Kieselgel 60 F254, Merck)에 의해 검사되었다. 스팟은 UV 광 하에서 관찰에 의해, 및 p-아니스알데하이드 용액 또는 포스포몰리브덴 산 용액에서 침지 후 탄화로 컬러화에 의해 검출되었다. 수성 워크업에서, 모든 유기 용액은 무수 황산마그네슘 상에서 건조되고 물 펌프 압력에서 회전식 증발 전에 여과되었다. 조 화합물은 실리카겔 (SilicaFlash P60, 230-400 메쉬, SiliCycle Inc) 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제되었다. 양성자 (1H) 및 탄소 (13C) NMR 스펙트럼은 Bruker AV 400 (400/100 MHz) 또는 Bruker AV500 (500/125 MHz) 분광기 상에서 수득되었다. 화학적 이동은 내부 표준으로 Me4Si 또는 CHCl3으로 ppm 단위로 보고되었다. 분할 패턴은 하기에 의해 지정된다: s, 단일항; d, 이중항; t, 삼중항; m, 다중항; b, 넓음. 고해상도 질량 분광분석법 데이터는 IonSense ID-CUBE DART 공급원을 갖는 Thermo Fisher Scientific Exactive Plus를 사용하여 수득되었다.
JGK001, JGK003의 제조
[JGK001] 무수 메탄올 (5.0 mL) 내 에를로티닙 (134 mg, 0.3406 mmol)의 용액에 디-tert-부틸 디카보네이트(228 mg, 1.7029 mmol)을 한번에 실온에서 첨가했다. 동일한 온도에서 48시간 동안 교반한 후, 진공에서 농축시켰다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL) 및 EtOAc (30 mL)로 희석했다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc (2 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카겔, 헥산/EtOAc, 3/1)로 정제하여 JGK001(156 mg, 73%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.86 (s, 1 H), 7.43 (s, 1 H), 7.20-7.23 (m, 2 H), 7.16 (td, J = 1.2, 7.6 Hz, 1 H), 7.09 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 4.16-4.25 (m, 4 H), 3.80 (t, J = 5.2 Hz, 2 H), 3.77 (t, J = 5.2 Hz, 2 H), 3.45 (s, 3 H), 3.44 (s, 3 H), 3.44 (s, 3 H), 3.03 (s, 1 H), 1.55 (s, 9 H), 1.11 (s, 9 H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ152.1, 151.5, 149.2, 148.8, 145.7, 142.7, 130.6, 128.9, 127.4, 125.3, 122.6, 121.5, 114.7, 111.4, 108.0, 90.7, 83.7, 83.3, 82.9, 76.8, 70.9, 70.7, 68.8, 68.7, 59.2, 59.1, 55.0, 28.2, 27.3; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 626.3061 [다음에 대한 계산치: C33H43N3O9 625.2993].
[JGK003] 무수 에탄올 (2.6 mL) 내 에를로티닙 (101 mg, 0.2567 mmol)의 용액에 디-tert-부틸 디카보네이트 (172 mg, 1.2836 mmol)을 한번에 실온에서 첨가했다. 동일한 온도에서 48시간 동안 교반한 후, 진공에서 농축시켰다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL) 및 EtOAc (30 mL)로 희석했다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc (2 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(실리카겔, 헥산/EtOAc, 3/1)로 정제하여 JGK003 (117 mg, 71%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.86 (s, 1 H), 7.43 (s, 1 H), 7.34 (s, 1 H), 7.21-7.24 (m, 2 H), 7.16 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.10 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 4.17-4.25 (m, 4 H), 3.61-3.82 (m, 6 H), 3.46 (s, 3 H), 3.45 (s, 3 H), 3.02 (s, 1 H), 1.55 (s, 9 H), 1.23 (t, J = 6.8 Hz, 3 H), 1.12 (s, 9 H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ152.0, 151.4, 149.2, 148.9, 145.5, 143.0, 130.8, 128.8, 127.3, 125.3, 122.5, 121.7, 114.7, 111.3, 107.9, 89.3, 83.7, 83.2, 82.8, 76.7, 70.9, 70.7, 68.8, 68.6, 63.0, 59.2, 59.1, 28.2, 27.4, 14.6; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 640.3211 [다음에 대한 계산치: C34H45N3O9 639.3150].
JGK002의 제조
에를로티닙의 고체 (165 mg, 0.4194 mmol)에 아세트산 무수물 (5.0 mL)을 첨가했다. 3일 동안 교반하면서 90°C (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 포화 수성 NaHCO3 (20 mL)로 중화하고, EtOAc (20 mL)로 희석했다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc (2 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, 헥산/EtOAc, 1/1 내지 1/3) JGK002을 얻었다 (161 mg, 88% 단리 수율); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.06 (s, 1 H,), 7.45 (t, J = 1.6 Hz, 1 H,), 7.37-7.39 (m, 2 H), 7.36 (s, 1 H), 7.30-7.34 (m, 1 H), 7.15 (s, 1 H), 4.32 (t, J = 4.8 Hz, 2 H), 4.16 (t, J = 4.8 Hz, 2 H), 3.86 (t, J = 4.8 Hz, 2 H), 3.79 (t, J = 4.8 Hz, 2 H), 3.46 (s, 3 H), 3.45 (s, 3 H), 3.06 (s, 1 H), 2.14 (s, 3 H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ170.5, 158.8, 156.1, 153.5, 151.1, 150.8, 141.0, 130.9, 130.3, 129.3, 127.5, 123.4, 117.2, 107.9, 103.1, 82.4, 78.4, 70.6, 70.3, 68.9, 68.7, 59.3, 59.3, 23.7; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 436.1811 [다음에 대한 계산치: C24H25N3O5 435.1788].
JGK010, JGK032의 제조-
아닐린 유사체로 치환하기 위한 일반적인 절차
[고리화] DMF (13.5 mL, 0.2 M) 내 디올 2 (530 mg, 2.6959 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (1490 mg)을 한번에 첨가하고, 이어서 1-브로모-2-클로로에탄 (1.3 mL)을 실온에서 Ar 하에서 연속적으로 첨가했다. 24시간 동안 교반하면서 60°C (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H2O (50 mL)로 켄칭했다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc (50 mL)로 추출했다. 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, 헥산/EtOAc, 6/1 내지 3/1) 융합-클로로퀴나졸린 3을 얻었다 (404 mg, 67%); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.84 (s, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 7.47 (s, 1 H), 4.43-4.45 (m, 2 H), 4.39-4.42 (m, 2 H). [공지 화합물; Chilin, A. 등 J. Med. Chem. 2010, 53, 1862-1866]
[JGK010] DMF (2.6 mL) 내 융합-클로로퀴나졸린 3 (114 mg, 0.5120 mmol)의 용액에 3-클로로-2-플루오로아닐린 (0.10 mL)을 실온에서 적가했다. 24시간 동안 교반하면서 60°C (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 Et2O (30.0 mL)로 희석하고 백색 현탁액을 얻었다. 수득한 백색 고체를 Et2O (2 × 50 mL)로 연속으로 세정하고 수집하여 JGK010 (140 mg, 82%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.68 (s, 1 H), 8.59 (ddd, J = 3.2, 6.8, 6.8 Hz, 1 H), 7.39 (s, 1 H), 7.34 (s, 1 H), 7.29 (s, 1 H), 7.10-7.18 (m, 2 H), 4.38-4.43 (m, 4 H); 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) 11.78 (s, 1 H), 8.79 (s, 1 H), 8.45 (s, 1 H), 7.62 (t, J = 7.0 Hz, 1 H), 7.50 (t, J = 7.0 Hz, 1 H), 7.43 (s, 1 H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1 H), 4.46-4.53 (m, 2 H), 4.40-4.52 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) 159.8, 154.0, 152.2, 149.9, 145.7, 135.2, 129.9, 128.1, 126.4, 125.8, 120.9, 111.3, 108.1, 105.8, 65.5, 64.6; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 332.0551 [다음에 대한 계산치: C16H11ClFN3O2 331.0518].
JGK005의 제조
CH3CN (2.0 mL) 내 융합-클로로퀴나졸린 3 (14 mg, 0.0628 mmol)의 용액에 3-에티닐아닐린 (0.05 mL)을 실온에서 적가했다. 12 시간 동안 교반하면서 80 oC (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(실리카겔, 헥산/EtOAc, 3/1)로 정제하여 JGK005(10 mg, 52%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.45 (s, 1 H), 8.43 (s, 1 H), 8.04-8.05 (m, 2 H), 7.87-7.90 (m, 1 H), 7.34 (t, J = 7.9 Hz, 1 H), 7.14-7.16 (m, 2 H), 4.35-4.39 (m, 4 H), 4.14 (s, 1 H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 )δ156.8, 153.3, 149.5, 146.5, 144.1, 140.2, 129.3, 126.7, 124.9, 122.7, 122.1, 113.0, 110.4, 108.8, 84.0, 80.9, 64.9, 64.6; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 304.1079 [다음에 대한 계산치: C18H13N3O2 303.1002].
JGK025
JGK025의 제조는 일반 절차를 따랐다; JGK025 (25%); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.30 (s, 1 H), 8.73 (s, 1 H), 8.28 (s, 1 H), 7.51-7.58 (m, 1 H), 7.41-7.48 (m, 1 H), 7.35 (s, 1 H), 7.17-7.23 (m, 1 H), 4.44-4.50 (m, 2 H), 4.39-4.44 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, MeOD) δ 161.6 (J = 245.9 Hz), 160.0, 157.6 (J = 249.6 Hz), 152.1, 150.1, 145.6, 135.4, 130.4, 121.4, 112.4, 110.9, 108.1, 108.1, 105.4, 65.5, 64.6; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 316.0890 [다음에 대한 계산치: C16H11F2N3O2 315.0813].
JGK026
JGK026의 제조는 일반 절차를 따랐다; JGK026 (22%); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ11.09 (s, 1 H), 8.74 (s, 1 H), 8.18 (s, 1 H), 7.39-7.51 (m, 2 H), 7.30 (s, 1 H), 7.23-7.29 (m, 1 H), 4.45-4.49 (m, 2 H), 4.40-4.44 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, MeOD) δ 159.8, 158.1 (J = 239.6 Hz), 153.7 (J = 243.2 Hz), 152.1, 150.1, 145.7, 135.7, 126.0, 117.9, 117.8, 116.0, 110.9, 108.2, 106.2, 65.5, 64.6; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 316.0893 [다음에 대한 계산치: C16H11F2N3O2 315.0813].
JGK027
JGK027의 제조는 일반 절차를 따랐다; JGK027 (6%); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.23 (bs, 1 H), 8.75 (s, 1 H), 8.29 (s, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.46-7.55 (m, 1 H), 7.29 (t, J = 8.1 Hz, 2 H), 4.46-4.50 (m, 2 H), 4.40-4.46 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, MeOD) δ163.6, 160.7, 160.4, 158.4, 152.5, 151.5, 146.2, 130.6, 115.6, 113.5, 113.4, 111.9, 109.3, 108.2, 66.2, 65.3; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 316.0889 [다음에 대한 계산치: C16H11F2N3O2 315.0813].
JGK028
JGK028의 제조는 일반 절차를 따랐다; JGK028 (41%); 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.64 (s, 1 H), 8.03 (s, 1 H), 7.31-7.38 (m, 2 H), 7.24-7.31 (m, 2 H), 4.50-4.55 (m, 2 H), 4.44-4.50 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, MeOD) δ 160.1, 152.8, 150.9 (J = 245.6 Hz), 149.0, 146.2, 145.9 (J = 249.7 Hz), 134.6, 126.0, 124.0, 123.1, 116.2, 109.8, 107.8, 105.0, 65.2, 64.2; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 316.0884 [다음에 대한 계산치: C16H11F2N3O2 315.0813].
JGK029
JGK029의 제조는 일반 절차를 따랐다; JGK029 (52%); 1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.60 (s, 1 H), 7.98 (s, 1 H), 7.29 (s, 1 H), 7.07-7.13 (m, 2 H), 4.50-4.53 (m, 2 H), 4.44-4.48 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) 161.7, 160.3, 158.6, 158.1, 153.2, 150.3, 144.4, 143.7, 117.2, 113.8, 113.0, 112.3, 109.5, 101.5, 65.3, 64.5; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 334.0794 [다음에 대한 계산치: C16H10F3N3O2 333.0719].
JGK017
JGK017의 제조는 일반 절차를 따랐다; JGK017 (5%); 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ8.59 (s, 1 H), 8.15 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.49 (t, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 7.34 (d, J = 7.9 Hz, 1 H), 7.21 (s, 1 H), 4.41-4.42 (m, 2 H), 4.38-4.40 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 156.4, 153.2, 149.7, 146.7, 144.5, 138.4, 133.5, 132.2, 128.2, 125.4, 119.9, 119.7, 114.3, 110.4, 105.7, 64.5, 64.3.
JGK004의 제조
[벤조일화] 무수 CH2Cl2 (5.2 mL, 0.2 M) 내 디올 2 (205 mg, 1.0428 mmol)의 냉각된 (0°C) 용액에 피리딘 (0.5 mL) 및 벤조일 클로라이드 (0.7 mL)를 Ar 하에서 연속으로 적가했다. 실온에서 12 시간 동안 교반 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (20 mL)로 켄칭하고, CH2Cl2 (20 mL)로 희석했다. 층을 분리하고, 수성층을 CH2Cl2 (2 × 50 mL)로 추출했다. 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, 헥산/EtOAc, 10/1) 벤조일 클로로퀴나졸린 2-(2) (220 mg, 52%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.07 (s, 1 H), 8.31 (s, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 8.04-8.07 (m, 4 H), 7.53-7.58 (m, 2 H), 7.34-7.39 (m, 4 H).
[JGK004] CH3CN (3.0 mL) 내 벤조일 클로로퀴나졸린 2-(2) (180 mg, 0.444 mmol)의 용액에 3-클로로-2-플루오로아닐린 (0.06 mL, 0.533 mmol)을 실온에서 적가했다. 15 시간 동안 교반하면서 80 oC (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(실리카겔, 헥산/EtOAc, 3/1)로 정제하여 JGK004(109 mg, 48%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.85 (s, 1 H), 8.48-8.53 (m, 1 H), 8.08 (t, J = 7.2 Hz, 4 H), 7.99 (d, J = 3.2 Hz, 2 H), 7.51-7.59 (m, 3 H), 7.39 (dd, J = 8.4, 16.0 Hz, 4 H), 7.16-7.21 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ164.2, 163.7, 156.6, 155.1, 150.6, 149.1, 148.6, 147.5, 142.1, 134.1, 134.1, 130.3, 130.2, 128.6, 128.6, 128.1, 128.0, 127.9, 127.8, 125.3, 124.6, 124.5, 122.9, 121.6, 121.0, 120.9, 114.4, 113.3; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 514.0963 [다음에 대한 계산치: C28H17ClFN3O4 513.0886].
JGK006의 제조
CH3CN (3.0 mL) 내 벤조일 클로로퀴나졸린 2-(2) (100 mg, 0.247 mmol)의 용액에 3-에티닐아닐린 (0.05 mL, 0.430 mmol)을 실온에서 적가했다. 24 시간 동안 교반하면서 50 oC (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(실리카겔, 헥산/EtOAc, 4/1)로 정제하여 JGK006(48 mg, 40%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.71 (s, 1 H), 8.03 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 7.96 (s, 1 H), 7.90-7.95 (m, 2 H), 7.79 (s, 1 H), 7.62-7.75 (m, 3 H), 7.55 (t, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.48 (t, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.37 (t, J = 7.4 Hz, 2 H), 7.22-7.31 (m, 4 H), 3.04 (s, 1 H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 164.8, 163.9, 156.7, 155.3, 148.9, 146.9, 141.3, 138.1, 134.1, 134.0, 130.3, 130.1, 128.9, 128.6, 128.5, 128.1, 128.0, 127.9, 124.8, 122.7, 122.4, 122.1, 115.1, 113.1, 83.3; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 486.1443 [다음에 대한 계산치: C30H19N3O4 485.1370]
JGK032의 제조
염화수소 용액 (0.1 mL, 디옥산 중 4.0 M, 0.4 mmol)을 THF (0.3 mL)에 실온에서 첨가하여 1.0 M 염화수소 용액을 생성했다. MeOH 중 JGK010 (6.1 mg, 0.01839 mmol)의 용액에 상기-생성된 염화수소 용액 (0.030 mL, 0.030 mmol)을 실온에서 적가했다. 동일한 온도에서 10초 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜서 JGK032 (6.7 mg, 99%)을 얻었다; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ11.63 (s, 1 H), 8.81 (s, 1 H), 8.36 (s, 1 H), 7.63 (ddd, J = 1.6, 6.9, 8.3 Hz, 1 H), 7.39 (s, 1 H), 7.35 (ddd, J = 1.1, 8.1, 16.2 Hz, 1 H), 4.49-4.51 (m, 2 H), 4.43-4.45 (m, 2 H).
JGK012의 제조
JGK010 (39 mg, 0.1176 mmol)의 고체에 아세트산 무수물 (5.0 mL)을 첨가했다. 12 시간 동안 교반하면서 80 oC (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 포화 수성 NaHCO3 (20 mL)로 중화하고, EtOAc (20 mL)로 희석했다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc (2 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, 헥산/EtOAc, 2/1 내지 1/1) JGK012 (37 mg, 84% 단리 수율)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.01 (s, 1 H), 7.49 (s, 1 H), 7.44 (s, 1 H), 7.31-7.41 (m, 2 H), 7.09 (t, J = 8.0 Hz, 1 H), 4.41-4.43 (m, 2 H), 4.37-4.40 (m, 2 H), 2.15 (s, 3 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ170.2, 159.2, 153.3, 151.3, 149.7, 145.8, 130.6, 129.8, 129.7, 124.7, 122.5, 122.4, 117.7, 113.6, 109.2, 64.5, 64.2, 22.9; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 374.0701 [다음에 대한 계산치: C18H13ClFN3O3 373.0623].
JGK015의 제조
DMF (3.0 mL) 내 L-아미노산 유사체 A (227 mg, 0.7712 mmol)의 용액에, 융합된-클로로퀴나졸린 3 (117 mg, 0.5932 mmol)을 실온에서 한번에 첨가했다. 12시간 동안 교반하면서 35°C (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 포화 염수 (30.0 mL) 및 EtOAc (30.0 mL)로 희석하여 황색 현탁액을 얻었다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc로 추출했다 (2 × 50 mL). 유기층을 합하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, CH2Cl2/MeOH, 40/1 내지 10/1) JGK015 (261 mg, 92%)을 얻었다; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ8.57 (s, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 7.37 (s, 1 H), 7.27 (s, 1 H), 7.08 (d, J = 8.5 Hz, 2 H), 5.09 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 4.54 (dd, J = 6.0, 13.5 Hz, 1 H), 4.31-4.33 (m, 2 H), 4.27-4.29 (m, 2 H), 3.68 (s, 3 H), 3.06 (dd, J = 5.6, 14.0 Hz, 1 H), 3.00 (dd, J = 6.1, 13.8 Hz, 1 H), 1.39 (s, 9 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ172.4, 156.5, 155.2, 153.6, 149.1, 146.3, 143.8, 137.6, 131.6, 129.7, 121.7, 113.8, 110.3, 106.6, 80.0, 64.4, 64.2, 54.4, 52.2, 37.6, 28.3; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 481.2082 [다음에 대한 계산치: C25H28N4O6 480.2003].
JGK016, JGK023의 제조
[JGK016 (Boc 탈보호)] 무수 CH2Cl2 (5 mL, 0.05 M) 내 JGK015 (121 mg, 0.251 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (1.0 mL)을 실온에서 적가했다. 동일 온도에서 5 시간 동안 교반 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (20 mL)로 켄칭하고, CH2Cl2 (20 mL)로 희석했다. 층을 분리하고, 수성층을 CH2Cl2 (2 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, CH2Cl2/MeOH, 20/1) JGK016 (74 mg, 77%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.5 (s, 1 H), 8.68 (s, 1 H), 8.43 (s, 2 H), 8.20 (s, 1 H), 7.68 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.23 (s, 1 H), 4.44-4.46 (m, 2 H), 4.39-4.41 (m, 2 H), 3.68 (s, 3 H), 3.03-3.13 (m, 2 H); 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ8.26 (s, 1 H), 7.73 (s, 1 H), 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.17 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.08 (s, 1 H), 4.31-4.35 (m, 4 H), 3.72 (t, J = 6.6 Hz, 1 H), 3.68 (s, 3 H), 3.27-3.29 (m, 1 H), 3.01 (dd, J = 5.9, 13.6 Hz, 1 H), 2.89 (dd, J = 7.0, 13.5 Hz, 1 H); 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ174.4, 157.4, 152.6, 149.7, 145.0, 144.2, 137.5, 132.8, 129.2, 122.8, 122.3, 111.5, 110.1, 107.9, 64.5, 64.1, 55.2, 51.0, 39.5; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 381.1553 [다음에 대한 계산치: C20H20N4O4 380.1479].
[JGK023 (가수분해)] THF/H2O (3:1, 총 4.0 mL) 내 JGK016(42 mg, 0.1104 mmol)의 냉각된 (0°C) 용액에 수산화리튬 (14 mg)을 한번에 첨가했다. 2시간 동안 실온에서 교반한 후, 반응 혼합물을 1N HCl로 중화하고 EtOAc (20 mL)로 희석했다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc로 추출했다 (100 mL). 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, CH2Cl2/MeOH, 30/1 내지 15/1) JGK023(25 mg, 62%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.62 (s, 1 H), 8.12 (s, 1 H), 7.71 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.24 (s, 1 H), 4.48-4.50 (m, 2 H), 4.42-4.44 (m, 2 H), 4.28 (t, J = 6.8 Hz, 1 H), 3.32-3.37 (m, 1 H), 3.20 (dd, J = 7.6, 14.8 Hz, 1 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 169.7, 159.1, 152.4, 148.8, 146.0, 136.1, 134.1, 133.1, 129.7, 129.7, 124.8, 124.8, 110.0, 108.1, 104.9, 65.2, 64.2, 53.6, 35.4; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 367.1334 [다음에 대한 계산치: C19H18N4O4 366.1322].
JGK020의 제조
이소프로필 알콜 (5.3 mL) 내 클로로퀴나졸린 2 (104 mg, 0.5294 mmol)의 용액에 아미노 산 (187 mg)을 실온에서 적가했다. 12 시간 동안 교반하면서 50 oC (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, 헥산/EtOAc, 5/1 내지 3/1) JGK020(128 mg, 53%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ10.68 (s, 1 H), 10.22 (br, 1 H), 8.64 (s, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.53 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.26-7.31 (m, 4 H), 4.12-4.18 (m, 1 H), 3.59 (s, 3 H), 2.98 (dd, J = 5.2, 14.0 Hz, 1 H), 2.84 (dd, J = 10.0, 13.2 Hz, 1 H), 1.30 (s, 9 H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ173.0, 158.2, 155.9, 155.6, 148.7, 148.4, 136.1, 135.8, 129.7, 124.7, 107.6, 107.3, 103.3, 78.8, 55.7, 52.3, 36.3, 28.6; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 455.1920 [다음에 대한 계산치: C23H26N4O6 454.1846].
JGK014
JGK014 (26%); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.62 (s, 1 H), 7.66 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.35 (s, 1 H), 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 4.99 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 4.56-4.62 (m, 1 H), 4.36-4.42 (m, 4 H), 3.73 (s, 3 H), 3.03-3.15 (m, 2 H), 1.43 (s, 9 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ172.4, 156.5, 155.2, 153.6, 149.1, 146.3, 143.8, 137.6, 131.6, 129.7, 121.7, 113.8, 110.3, 106.6, 80.0, 64.4, 64.2, 54.4, 52.2, 37.6, 28.3; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 481.2080 [다음에 대한 계산치: C25H28N4O6 480.2003].
JGK021
JGK021의 제조는 JGK023의 합성 절차를 따랐다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.62 (s, 1 H), 8.12 (s, 1 H), 7.71 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.24 (s, 1 H), 4.48-4.50 (m, 2 H), 4.42-4.44 (m, 2 H), 4.28 (t, J = 6.8 Hz, 1 H), 3.32-3.37 (m, 1 H), 3.20 (dd, J = 7.6, 14.8 Hz, 1 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ169.7, 159.1, 152.4, 148.8, 146.0, 136.1, 134.1, 133.1, 129.7, 129.7, 124.8, 124.8, 110.0, 108.1, 104.9, 65.2, 64.2, 53.6, 35.4; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 367.1347 [다음에 대한 계산치: C19H18N4O4 366.1322].
JGK022의 제조
DMF (3.0 mL) 내 디올 X (121 mg, 0.6155 mmol)의 용액에 3-클로로-2-플루오로아닐린 (0.14 mL)을 실온에서 적가했다. 3일 동안 교반하면서 60°C (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 Et2O (30.0 mL)로 희석하여 백색 현탁액을 얻었다. 수득한 백색 고체를 Et2O (3 × 50 mL) 및 CH2Cl2 (2 × 30 mL)로 연속으로 세정하고 수집하여 JGK022 (132 mg, 70%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ11.16 (br, 1 H), 10.43 (br, 1 H), 8.68 (s, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.58 (t, J = 7.1 Hz, 1 H), 7.48 (t, J = 6.8 Hz, 1 H), 7.40 (s, 1 H), 7.30 (t, J = 8.1 Hz, 1 H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ159.1, 156.4, 154.1, 152.1, 149.1, 148.3, 135.1, 129.7, 128.1, 126.8, 125.7, 120.8, 107.4, 106.9, 102.9; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 306.0437 [다음에 대한 계산치: C14H9ClFN3O2 305.0361].
JGK018의 제조
[염소화] 티오닐 클로라이드 (7.5 mL, 0.28 M) 내 11 (500 mg, 2.134 mmol)의 용액에 디메틸포름아미드 (0.15 mL)을 적가했다. 2시간 동안 교반하면서 80°C (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 Et2O (200 mL)로 연속으로 세정하고, 다음 단계에서 즉시 사용했다.
[치환] 무수 DMF (11 mL, 0.2 M) 내 상기 생성된 클로로퀴나졸린 12의 용액에 3-클로로-2-플루오로아닐린 (0.50 mL, 4.548 mmol)을 실온에서 Ar 하에서 적가했다. 동일한 온도에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 Et2O (100.0 mL)로 희석하여 백색 현탁액을 얻었다. 수득한 백색 고체를 Et2O (2 × 50 mL)로 연속으로 세정하고 수집하여 JGK018 (525 mg, 68%)을 얻었다; 분광 데이터는 Zhang, X. 등 J. Med. Chem. 2015, 58, 8200-8215 와 일치했다.
13의 제조
[아세틸 탈보호] JGK018(550 mg, 1.520 mmol)에 암모니아 용액 (8.0 mL, 메탄올 중 7 N)을 적가했다. 2시간 동안 교반하면서 밀봉된 튜브에서 50°C (배쓰 온도)로 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 진공에서 농축시켰다. 수득한 백색 고체를 Et2O (2 × 50 mL)로 연속으로 세정하고 수집하여 13 (394 mg, 81%)을 얻었다; 수득한 분광 데이터는 Zhang, X. 등 J. Med. Chem. 2015, 58, 8200-8215의 것과 일치했다.
14의 제조
무수 DMF (2 mL) 내 13 (113 mg, 0.353 mmol)의 냉각된 (0°C) 용액에 트리에틸아민 (0.25 mL, 1.767 mmol)을 적가하고, 이어서 무수 DMF (2 mL) 내 디-tert-부틸 디카보네이트 (62 mg, 0.459 mmol)을 Ar 하에서 적가했다. 실온에서 3일 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 수성 H2O (10 mL)로 켄칭하고, EtOAc (10 mL)로 희석했다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc로 추출했다 (2 × 50 mL). 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, 헥산/EtOAc, 5/1 내지 3/1) 14 (42 mg, 28% 단리 수율)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.69 (s, 1 H), 8.39-8.45 (m, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 7.44 (s, 1 H), 7.11-7.16 (m, 2 H), 3.90 (s, 3 H), 1.59 (s, 9 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ156.2 (J = 39.5 Hz), 154.9, 151.3, 150.3, 149.5 (J = 224.1 Hz), 140.4, 128.1 (J = 9.6 Hz), 124.8, 124.4 (J = 4.8 Hz), 121.5, 120.8 (J = 51.2 Hz), 113.5, 109.0, 108.8, 84.6, 56.2, 27.6;
C의 제조
무수 CH2Cl2 (2 mL) 내 A 1 (56 mg, 0.1904 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (0.08 mL, 0.5712 mmol)을 적가하고, 이어서 클로로아세틸 클로라이드 (0.05 mL, 0.6286 mmol)를 실온에서 Ar 하에서 첨가했다. 동일 온도에서 1 시간 동안 교반 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (20 mL)로 켄칭하고, CH2Cl2 (20 mL)로 희석했다. 층을 분리하고, 수성층을 CH2Cl2 (2 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
JGK031의 제조
[알킬화] DMF (2.0 mL) 내 14 (44 mg, 0.1058 mmol)의 냉각된 (0°C) 용액에 탄산칼륨 (73 mg, 0.528 mmol)을 한번에 적가하고, 이어서 DMF (2.0 mL) 내 상기 생성된 C (0.1904 mmol)을 실온에서 적가했다. 3일 동안 교반하면서 40°C (배쓰 온도)에서 가열한 후, 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 켄칭하고, EtOAc (10 mL)로 희석했다. 층을 분리하고, 수성층을 EtOAc로 추출했다 (2 × 50 mL). 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, 헥산/EtOAc, 100/1 내지 30/1) 알킬화 생성물 14-(2) (43 mg, 55% 단리 수율)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.16 (s, 1 H), 7.48 (d, J = 8.4 Hz, 2 H), 7.44 (s, 1 H), 6.98-7.13 (m, 5 H), 6.34 (m, 1 H), 4.95 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 4.54 (d, J = 6.5 Hz, 1 H), 4.48 (s, 2 H), 3.69 (s, 6 H), 2.95-3.13 (m, 2 H), 1.53 (s, 9 H), 1.40 (s, 9 H).
[탈보호] 무수 MeOH (5.0 mL) 내 알킬화 생성물 14-(2) (26 mg, 0.0348 mmol)의 용액에 0.5 N 하이드로클로라이드 용액 (0.5 mL)을 적가했다. 동일 온도에서 24 시간 동안 교반 후, 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (역상 실리카겔, MeOH 또는 MeOH/H2O, 10/1) JGK031(12 mg, 61%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.20 (s, 1 H), 7.67 (s, 1 H), 7.49 (t, J = 7.9 Hz, 2 H), 7.24-7.30 (m, 1 H), 7.11-7.21 (m, 4 H), 3.94 (s, 3 H), 3.59 (s, 3 H), 2.83-3.01 (m, 2 H); HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 554.1631 [다음에 대한 계산치: C27H25ClFN5O5 553.1522].
JGK033의 제조
무수 THF (6 mL) 및 H2O (2 mL) 내 JGK031 (5 mg, 0.009026 mmol)의 용액에 수산화리튬 · H2O (3 mg)을 한번에 첨가했다. 실온에서 2 시간 동안 교반 후, 반응 혼합물을 1N 하이드로클로라이드 용액으로 중화하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 역상 칼럼 크로마토그래피 (역상 실리카겔, MeOH/H2O, 5/1)로 정제하여 JGK033(4.4 mg, 90%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.16 (s, 1 H), 6.32 (s, 1 H), 6.03 (d, J = 8.2 Hz, 2 H), 5.89-5.98 (m, 2 H), 5.59-5.79 (m, 4 H), 4.00 (s, 2 H), 2.51 (s, 3 H), 2.46 (t, J = 5.6 Hz, 1 H); 13C NMR (125 MHz, MeOD) δ 163.9, 159.4, 157.2, 154.3, 152.1, 149.5, 137.1, 135.4, 129.7, 126.9, 124.6, 121.5, 120.3, 108.0, 106.9, 97.8, 56.6, 53.5, 35.6; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 540.1435 [다음에 대한 계산치: C26H23ClFN5O5 539.1366].
JGK008의 제조
무수 MeOH (5.6 mL) 및 CH2Cl2 (5.6 mL) 내 라파티닙 (326 mg, 0.561 mmol)의 용액에 디-tert-부틸 디카보네이트 (378 mg, 2.819 mmol)을 한번에 Ar 하에서 적가했다. 실온에서 2 일 동안 교반 후, 반응 혼합물을 포화 수성 H2O (10 mL)로 켄칭하고, CH2Cl2 (10 mL)로 희석했다. 층을 분리하고, 수성층을 CH2Cl2 (5 × 50 mL)로 추출했다. 유기층을 합하고 H2O 및 포화 염수로 연속으로 세정하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, 헥산/EtOAc, 3/1 내지 1/1) JGK008 (119 mg, 31% 단리 수율)을 얻었다; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ8.71 (bs, 1 H), 8.64 (s, 1 H), 8.44 (s, 1 H), 7.85-7.95 (m, 3 H), 7.68 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.32-7.37 (m, 1 H), 7.21 (dd, J = 8.4, 10.8 Hz, 2 H), 6.98-7.03 (m, 1 H), 6.96 (d, J = 8.9 Hz, 1 H), 6.39 (d, J = 47.1 Hz, 1 H), 5.13 (s, 2 H), 4.53 (d, J = 32.2 Hz, 2 H), 3.99 (t, J = 7.3 Hz, 2 H), 3.39 (d, J = 66.1 Hz, 2 H), 2.89 (s, 3 H), 1.49 (s, 9 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ163.9, 162.0, 158.0, 154.2, 152.7, 151.7, 151.0, 139.1 (d, J = 7.3 Hz), 132.4, 130.1 (d, J = 8.1 Hz), 129.1, 128.6, 128.2, 125.1, 123.1, 122.4, 122.3, 115.4, 114.9 (d, J = 21.0 Hz), 114.1 (d, J = 13.9 Hz), 113.9, 111.5, 110.9, 107.7, 81.3, 70.9, 45.0, 43.6, 42.3, 41.4, 41.2, 28.4; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 681.1946 [다음에 대한 계산치: C34H34ClFN4O6S 680.1866].
JGK011의 제조
라파티닙 (68 mg, 0.353 mmol)의 고체에 아세트산 무수물 (5.0 mL)을 Ar 하에서 첨가했다. 실온에서 2 일 동안 교반 후, 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (실리카겔, 헥산/EtOAc, 3/1 내지 1/3) JGK002 (48 mg, 62% 단리 수율)을 얻었다; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ9.18 (s, 1 H), 8.10-8.17 (m, 3 H), 7.50 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 7.27-7.36 (m, 2 H), 7.18 (dd, J = 7.6, 13.8 Hz, 2 H), 6.97-7.03 (m, 2 H), 6.79 (d, J = 3.3 Hz, 1 H), 6.44 (d, J = 3.3 Hz, 1 H), 5.14 (s, 2 H), 4.66 (s, 2 H), 3.86 (t, J = 6.6 Hz, 2 H), 3.30 (t, J = 6.6 Hz, 2 H), 2.95 (s, 3 H), 2.33 (s, 3 H), 2.23 (s, 3 H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ171.4, 171.2, 163.9, 162.2, 162.0, 154.0, 153.7, 152.5, 151.0, 138.5 (J = 7.3 Hz), 134.2, 130.8, 130.3, 130.2, 129.9, 129.1, 127.4, 123.9, 122.4 (J = 2.9 Hz), 121.8, 118.0, 115.1, 115.0, 114.0 (J = 5.2 Hz), 113.8, 111.1, 108.9, 70.1 (J = 1.7 Hz), 52.3, 47.0, 41.4, 40.7, 23.7, 21.8; HRMS-ESI [M+H]+ 실측치 665.1628 [다음에 대한 계산치: C33H30ClFN4O6S 664.1553].
실시예 2: JGK 시리즈의 추가 예시적인 화합물의 제조
일반적인 화학 정보
모든 화학물질, 시약, 및 용매를 이용가능할 때 상업적 공급원으로 구매하고 받은 대로 사용했다. 필요할 때, 시약 및 용매를 정제하고 표준 방법으로 건조시켰다. 공기- 및 수분-민감한 반응을 아르곤의 불활성 분위기 하에서 오븐-건조된 유리그릇에서 수행했다. 마이크로파-조사된 반응을 단일 방식 반응기 CEM Discover 마이크로파 합성기에서 수행했다. 실온 반응을 주위 온도에서 (대략 23°C) 수행했다. 모든 반응을, UV 광 (λ = 254, 365 nm)에 의해 또는 알칼리성 KMnO4 용액을 사용하여 시각화된 스팟(spot)을 갖는 사전코팅된 Merck 60 F254 실리카겔 플레이트 상에서 박층 크로마토그래피 (TLC)으로 모니터링했다. 플래시 칼럼 크로마토그래피 (FC)를 SiO2 60 (입자 크기 0.040-0.063 mm, 230-400 메쉬) 상에서 수행했다. 감압 하에서 (진공에서) 25 내지 50 °C에서 회전식 증발로 농축을 수행했다. 정제된 화합물을 고진공 하에서 또는 데시케이터에서 추가로 건조시켰다. 수율은 정제된 화합물에 해당하고, 추가로 최적화되지 않았다. 양성자 핵자기 공명 (1H NMR) 스펙트럼을 (300, 400, 또는 500 MHz에서 작동하는) Bruker 분광기 상에서 기록했다. 탄소 NMR (13C NMR) 스펙트럼을 Bruker 분광기 (400 또는 500 MHz에서) 상에서 기록했다. NMR 화학적 이동 (δ ppm)은 잔류 용매 신호와 관련되었다. 1H NMR 데이터는 아래와 같이 보고된다: 화학적 이동(ppm); 다중도 (s = 단일항, d = 이중항, t = 삼중항, q = 사중항, quint = 오중항, m = 다중항/복합 패턴, td = 이중항의 삼중항, ddd = 이중항의 이중항의 이중항, br = 넓은 신호); 결합 상수 (J) (Hz), 적분. 13C NMR 스펙트럼에 대한 데이터는 화학적 이동, 및 적용가능하면 결합 상수의 관점에서 보고된다. 고해상도 질량 (HRMS) 스펙트럼을, ID-CUBE DART 공급원 질량 분광분석기를 가지고 있는 Thermo Fisher Scientific Exactive Plus 상에서 기록했다. 화합물 4-클로로-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린 (1), 4-클로로퀴나졸린-6,7-디올 (2), 및 JGK010을 이전에 보고된 바와 같이 제조했다.
4-아닐리노퀴나졸린 화합물 JGK035-JGK041, 및 JKG043의 합성에 대한 일반적인 절차.
iPrOH (0.1-0.3 M) 내 4-클로로퀴나졸린 (1 당량)의 혼합물을 아닐린 (1 당량)으로 처리하고, 혼합물을 마이크로파 조사 (60 W) 하에서 15 내지 20분 동안 80°C에서 가열했다. 혼합물을 23°C로 냉각시키고, 추가의 아닐린 (1 당량)으로 처리하고, 마이크로파 조사 (80°C, 60 W, 15-20 min)를 다시 거쳤다. 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 또는 침전된 4-아닐리노퀴나졸린 염산염을 여과로 단리시켰다 (차가운 iPrOH로 세정). 잔류물을 포화 수성 NaHCO3에 현탁시키고, CH2Cl2 (3x)로 추출했다. 유기 추출물을 합하고 물, 염수로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축했다. FC (CH2Cl2/EtOAc 또는 헥산/EtOAc의 구배에 의한 용출)로 정제하여 원하는 생성물을 전형적으로 백색 내지 황백색, 또는 옅은-황색 고체로서 얻었다.
N
-(2-플루오로페닐)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK035).
일반 절차 A에 따라서, 화합물 JGK035을 iPrOH (1.5 mL) 내 4-클로로퀴나졸린 1 (51 mg, 0.23 mmol) 및 2-플루오로아닐린 (40 μL, 0.48 mmol)으로부터 제조했다. FC (CH2Cl2/EtOAc 10:1 →10:4)에 의해 JGK035 (56 mg, 82%)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.68 (s, 1H), 8.64 (td, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.36 (br, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.22 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.17 (ddd, J = 11.2, 8.3, 1.5 Hz, 1H), 7.10 - 7.05 (m, 1H), 4.44 - 4.37 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 156.08, 153.60, 153.50 (d, J = 242.7 Hz), 149.52, 146.65, 144.34, 127.31 (d, J = 9.5 Hz), 124.66 (d, J = 3.7 Hz), 123.97 (d, J = 7.8 Hz), 122.89, 115.06 (d, J = 19.3 Hz), 114.46, 110.62, 106.10, 64.69, 64.51 ppm. HRMS (DART): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C16H11FN3O2 -, 296.0841; 실측치, 296.0841.
4-클로로(7,7,8,8-
2
H
4
)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린 (3).
건조 DMF (4.8 mL) 내 화합물 2 (193 mg, 0.98 mmol)의 용액을 Cs2CO3 (788 mg, 2.42 mmol)로 처리하고, 5 min 동안 교반하고, 1-브로모-2-클로로(2H4)에탄 (270 μL, 3.16 mmol)로 적가 처리했다. 혼합물을 23°C에서 1시간 동안, 그리고 그 다음 70°C에서 18시간 동안 교반했다. 혼합물을 23°C로 냉각시킨 후, 모든 휘발성 물질을 진공에서 제거했다. 잔류물을 CH2Cl2 (40 mL)에 용해시키고, 물 (2 x 13 mL), 염수 (13 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. FC (CH2Cl2/EtOAc 1:0 → 10:1.5)로 정제하여 표제 화합물 3 (109 mg, 49%)를 백색 솜털 같은 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.84 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.47 ppm (s, 1H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3): δ 160.19, 152.52, 151.54, 147.93, 146.06, 120.10, 113.72, 110.83 ppm (2개의 업필드 탄소는 관측되지 않았다). HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C10H4D4ClN2O2 +, 227.0520; 실측치, 227.0516.
N
-(3-클로로-2-플루오로페닐)(7,7,8,8-
2
H
4
)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK036).
일반 절차 A에 따라서, 화합물 JGK036을 iPrOH (1.2 mL) 내 4-클로로퀴나졸린 3 (55 mg, 0.24 mmol) 및 3-클로로-2-플루오로아닐린 (52 μL, 0.47 mmol)으로부터 제조했다. JGK036ㆍHCl을 조 반응 혼합물로부터 여과로 단리하고, 염기성화 및 추출 후에 순수한 JGK036 (67 mg, 82%)을 옅은-황색 고체로서 얻었다 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.62 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.53 - 7.43 (m, 2H), 7.27 (td, J = 8.1, 1.3 Hz, 1H), 7.19 ppm (s, 1H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.17, 153.10, 152.45 (d, J = 249.2 Hz), 149.28, 146.04, 143.68, 128.21 (d, J = 12.0 Hz), 127.27, 127.03, 124.87 (d, J = 4.7 Hz), 120.11 (d, J = 16.7 Hz), 112.48, 109.64, 108.35, 63.50 (m, 2C's). HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H8D4ClFN3O2 +, 336.0848; 실측치, 336.0841.
N
-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK037).
일반 절차 A에 따라서, 화합물 JGK037을 iPrOH (1.5 mL) 내 4-클로로퀴나졸린 1 (100 mg, 0.45 mmol) 및 3-브로모-2-플루오로아닐린 (100 μL, 0.89 mmol)으로부터 제조했다. FC (CH2Cl2/EtOAc 10:0 → 10:3)에 의해 JGK037 (150 mg, 89%)를 옅은-황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.68 (s, 1H), 8.65 (ddd, J = 8.3, 7.4, 1.5 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (br, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.29 - 7.24 (m, 1H), 7.11 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 4.44 - 4.38 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 155.89, 153.37, 150.15 (d, J = 242.2 Hz), 149.70, 146.75, 144.53, 128.65 (d, J = 10.5 Hz), 127.24, 125.31 (d, J = 4.7 Hz), 121.79, 114.53, 110.59, 108.59 (d, J = 19.4 Hz), 105.93, 64.70, 64.51 ppm. HRMS (DART): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C16H10BrFN3O2 -, 373.9946; 실측치, 373.9946.
N
-{2-플루오로-3-[(트리에틸실릴)에티닐]페닐}-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (4).
1 드램 바이알에 JGK010 (75 mg, 0.23 mmol), XPhos (19.7 mg, 0.041 mmol), Cs2CO3 (195 mg, 0.60 mmol), [PdCl2ㆍ(MeCN)2] (3.6 mg, 0.014 mmol)을 채웠다. 바이알을 진공처리하고 아르곤을 다시 채웠다 (적어도 2회 반복). 건조 아세토니트릴 (1 mL)을 첨가하고, 오렌지 현탁액을 23°C에서 25분 동안 교반하고, 그 다음 에티닐트리에틸실란 (150 μL, 0.84 mmol)을 주입했다. 튜브를 밀봉하고, 반응 혼합물을 95°C에서, 예열된 오일욕에서 3.5시간 동안 교반했다. 현탁액을 23°C에 도달되도록 하고, EtOAc로 희석하고, SiO2의 플러그를 통해 여과하고 (EtOAc로 세정하고), 그리고 증발시켰다. FC (SiO2; 헥산/EtOAc 8:2 → 4:6)로 정제하여 표제 화합물 4 (48 mg, 49%)를 황색 발포성 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.681 (td, J = 8.1, 1.9 Hz, 1H), 8.678 (s, 1H), 7.382 (s, 1H), 7.376 (br, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.21 - 7.12 (m, 2H), 4.44 - 4.38 (m, 4H), 1.07 (t, J = 7.9 Hz, 9H), 0.71 ppm (q, J = 7.9 Hz, 6H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 155.95, 153.81 (d, J = 248.0 Hz), 153.44, 149.62, 146.66, 144.47, 127.68, 127.60, 124.15 (d, J = 4.5 Hz), 122.79, 114.49, 111.77 (d, J = 14.6 Hz), 110.61, 105.97, 98.65, 98.49 (d, J = 3.7 Hz), 64.70, 64.51, 7.63, 4.50 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C24H27N3O2Si+, 436.1851; 실측치, 436.1831.
N
-(3-에티닐-2-플루오로페닐)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK038).
습성 THF (0.9 mL) 내 화합물 4 (40 mg, 0.09 mmol)의 혼합물을 THF 중 TBAF의 1 M 용액 (450 μL, 0.45 mmol)으로 적가 처리하고, 혼합물을 23°C에서 18시간 동안 교반했다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 추출했다 (3 x 15 mL). 유기물을 합하고 염수 (20 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. FC (SiO2; 헥산/EtOAc 7:3 → 3:7)이어서 제2 FC (SiO2; CH2Cl2/EtOAc 1:0 → 6:4)로 정제하여 JGK038 (19 mg, 64%)를 회백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.69 (td, J = 8.0, 1.8 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.36 (br, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.24 - 7.15 (m, 2H), 4.43 - 4.38 (m, 4H), 3.34 ppm (s, 1H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 155.94, 154.04 (d, J = 248.8 Hz), 153.39, 149.65, 146.70, 144.47, 127.81, 127.68 (d, J = 9.1 Hz), 124.30 (d, J = 4.7 Hz), 123.47, 114.49, 110.58, 110.50 (d, J = 14.3 Hz), 105.99, 82.95 (d, J = 3.5 Hz), 76.70 (d, J = 1.6 Hz), 64.69, 64.50 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C18H13FN3O2 +, 322.0986; 실측치, 322.0981.
N
-[2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK039).
일반 절차 A에 따라서, 화합물 JGK039을 iPrOH (1.5 mL) 내 4-클로로퀴나졸린 1 (37 mg, 0.17 mmol) 및 2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)아닐린 (42 μL, 0.33 mmol)으로부터 제조했다. FC (CH2Cl2/EtOAc 1:0 → 10:3)에 의해 JGK039 (35 mg, 58%)를 회백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 9.00 - 8.92 (m, 1H), 8.70 (s, 1H), 7.42 (br, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.35 - 7.28 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 4.46 - 4.38 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 155.77, 153.24, 150.27 (d, J = 252.0 Hz), 149.81, 146.80, 144.66, 128.62 (d, J = 8.5 Hz), 126.34, 124.44, 124.40, 122.66 (q, J = 272.4 Hz), 120.41 (q, J = 4.6 Hz), 114.58, 110.55, 105.86, 64.70, 64.51 ppm. HRMS (DART): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C17H10F4N3O2 -, 364.0715; 실측치, 364.0712.
4-클로로-8,9-디하이드로-7
H
-[1,4]디옥세피노[2,3-
g
]퀴나졸린 (5).
건조 DMF (10 mL) 내 화합물 2 (100 mg, 0.51 mmol)의 용액을 Cs2CO3 (460 mg, 1.41 mmol)로 처리하고, 15 분 동안 교반하고, 1,3-디브로모프로판 (135 μL, 1.33 mmol)로 적가 처리했다. 혼합물을 23°C에서 1시간 동안, 그리고 그 다음 65°C에서 18시간 동안 교반했다. 23°C로 냉각시킨 후, 모든 휘발성 물질을 진공에서 제거했다. 잔류물을 CH2Cl2 (20 mL)에 현탁시키고, 물 (2 x 5 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. FC (헥산/CH2Cl2 1:10 → 0:1 → CH2Cl2/EtOAc 10:1.5), 이어서 제2 FC (헥산/EtOAc 10:1 → 10:3)로 정제하여 표제 화합물 5 (41 mg, 34%)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.87 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 4.46 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.40 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.34 ppm (quint, J = 5.9 Hz, 2H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 160.57, 158.86, 153.10, 153.03, 148.88, 120.83, 118.19, 115.64, 70.51, 70.33, 30.51 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C11H10ClN2O2 +, 237.0425; 실측치, 237.0416.
N
-(3-클로로-2-플루오로페닐)-8,9-디하이드로-7
H
-[1,4]디옥세피노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK040).
일반 절차 A에 따라서, 화합물 JGK040을 iPrOH (1.5 mL) 내 4-클로로퀴나졸린 5 (33 mg, 0.14 mmol) 및 3-클로로-2-플루오로아닐린 (32 μL, 0.29 mmol)으로부터 제조했다. FC (CH2Cl2/EtOAc 1:0 → 10:3.5)에 의해 JGK040 (34 mg, 70%)를 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.72 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.53 - 7.45 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.27 (td, J = 8.1, 1.3 Hz, 1H), 4.32 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 4.29 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.22 ppm (quint, J = 5.6 Hz, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.43, 156.67, 153.85, 152.48 (d, J = 249.3 Hz), 150.74, 147.29, 128.05 (d, J = 12.0 Hz), 127.41, 127.04, 124.91 (d, J = 4.7 Hz), 120.13 (d, J = 16.5 Hz), 117.52, 113.81, 110.77, 70.75, 70.62, 30.80 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C17H14ClFN3O2 +, 346.0753; 실측치, 346.0740.
8-클로로-2
H
-[1,3]디옥솔로[4,5-
g
]퀴나졸린 (6).
무수 DMF (3.4 mL) 내 화합물 2 (100 mg, 0.51 mmol)의 용액을 Cs2CO3 (335 mg, 1.03 mmol)으로 처리하고, 23°C에서 15분 동안 교반했다. 혼합물을 클로로아이오도메탄 (130 μL, 1.79 mmol)으로 적가 처리하고, 1시간 동안, 그리고 그 다음 70°C에서 17시간 동안 교반했다. 혼합물을 23°C로 냉각시킨 후, 모든 휘발성 물질을 진공에서 제거했다. 잔류물을 CH2Cl2 (30 mL)에 현탁시키고, 물 (2 x 7 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. FC (헥산/CH2Cl2 3:10 → 0:1 → CH2Cl2/EtOAc 10:2)로 정제하여 표제 화합물 6 (38 mg, 36%)를 백색, 솜털 같은 고체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.85 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.21 ppm (s, 2H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 159.82, 154.89, 152.79, 150.94, 149.78, 121.23, 105.23, 102.89, 101.12 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C9H6ClN2O2 +, 209.0112; 실측치, 209.0104.
N
-(3-클로로-2-플루오로페닐)-2
H
-[1,3]디옥솔로[4,5-
g
]퀴나졸린-8-아민 (JGK041).
일반 절차 A에 따라서, 화합물 JGK041을 iPrOH (1.5 mL) 내 4-클로로퀴나졸린 6 (35 mg, 0.17 mmol) 및 3-클로로-2-플루오로아닐린 (38 μL, 0.35 mmol)으로부터 제조했다. FC (CH2Cl2/EtOAc 1:0 → 1:1)에 의해 JGK041 (35 mg, 66%)를 옅은-황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.53 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.53 - 7.44 (m, 2H), 7.27 (td, J = 8.1, 1.3 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.25 ppm (s, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.37, 153.10, 152.60, 152.43 (d, J = 248.9 Hz), 148.56, 147.28, 128.30 (d, J = 11.9 Hz), 127.17, 126.90, 124.88 (d, J = 4.8 Hz), 120.12 (d, J = 16.4 Hz), 109.82, 104.59, 102.38, 98.77 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C15H10ClFN3O2 +, 318.0440; 실측치, 318.0435.
[(3-클로로-2-플루오로페닐)(7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-일)아미노]메틸 아세테이트 (JGK043).
무수 THF (0.5 mL) 내 JGK010 (50 mg, 0.15 mmol)의 혼합물을 THF 중 LiHMDS의1 M 용액 (150 μL, 0.15 mmol)으로 0°C에서 적가 처리했다. 15분 동안 그 온도에서 교반한 후, 혼합물을 무수 THF (0.5 mL) 내 클로로메틸 아세테이트 (55 μL, 0.57 mmol)의 용액에 적가했다. JGK010의 용액을 초기에 수용하고 있는 플라스크를 0.5 mL의 무수 THF로 린스하고 반응 혼합물에 첨가했다. 0°C에서 2시간 동안 교반한 후, 교반을 23°C에서 22시간 동안 계속했다. 포화 수성 NaHCO3 (10 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 진공에서 증발시켰다. FC (CH2Cl2/EtOAc 1:0 -> 1:1)로 정제하여 표제 화합물 JGK043 (30 mg, 49%)를 옅은-황색 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.93 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.08 - 6.97 (m, 2H), 6.94 (td, J = 7.2, 2.1 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 5.73 (s, 2H), 4.40 - 4.29 (m, 4H), 2.12 ppm (s, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 170.33, 152.96, 150.10 (d, J = 245.6 Hz), 149.37, 148.05, 143.24, 140.17 (d, J = 13.1 Hz), 131.89, 124.17, 124.12 (d, J = 4.8 Hz), 122.59 (d, J = 2.4 Hz), 121.33 (d, J = 17.1 Hz), 115.41, 114.31, 102.24, 71.19, 65.07, 64.23, 20.85 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C19H16ClFN3O4 +, 404.0808; 실측치, 404.0792.
실시예 3: JGK 시리즈의 추가 예시적인 화합물의 제조
일반 절차: 모든 화학물질, 시약, 및 용매를 이용가능할 때 상업적 공급원으로 구매하고 받은 대로 사용했다. 필요할 때, 시약 및 용매를 정제하고 표준 방법으로 건조시켰다. 공기- 및 수분-민감한 반응을 아르곤의 불활성 분위기 하에서 오븐-건조된 유리그릇에서 수행했다. 마이크로파-조사된 반응을 단일 방식 반응기 CEM Discover 마이크로파 합성기에서 수행했다. 실온 (RT) 반응을 주위 온도에서 (대략 23°C) 수행했다. 모든 반응을, UV 광 (λ = 254, 365 nm)에 의해 또는 알칼리성 KMnO4 용액을 사용하여 시각화된 스팟(spot)을 갖는 사전코팅된 Merck 60 F254 실리카겔 플레이트 상에서 박층 크로마토그래피 (TLC)으로 모니터링했다. 플래시 칼럼 크로마토그래피 (FC)를 SiO2 60 (입자 크기 0.040-0.063 mm, 230-400 메쉬) 상에서 수행했다. 감압 하에서 (진공에서) 25 내지 50 °C에서 회전식 증발로 농축을 수행했다. 정제된 화합물을 고진공 하에서 또는 데시케이터에서 추가로 건조시켰다. 수율은 정제된 화합물에 해당하고, 추가로 최적화되지 않았다. 양성자 핵자기 공명 (1H NMR) 스펙트럼을 (300, 400, 또는 500 MHz에서 작동하는) Bruker 분광기 상에서 기록했다. 탄소 NMR (13C NMR) 스펙트럼을 Bruker 분광기 (400 또는 500 MHz에서) 상에서 기록했다. NMR 화학적 이동 (δ ppm)은 잔류 용매 신호와 관련되었다. 1H NMR 데이터는 아래와 같이 보고된다: 화학적 이동(ppm); 다중도 (s = 단일항, d = 이중항, t = 삼중항, q = 사중항, quint = 오중항, m = 다중항/복합 패턴, td = 이중항의 삼중항, ddd = 이중항의 이중항의 이중항, br = 넓은 신호); 결합 상수 (J) (Hz), 적분. 13C NMR 스펙트럼에 대한 데이터는 화학적 이동, 및 적용가능하면 결합 상수의 관점에서 보고된다. 고해상도 질량 (HRMS) 스펙트럼을, IonSense ID-CUBE DART 공급원 질량 분광분석기를 가지고 있는 Thermo Fisher Scientific Exactive Plus, 또는 자동시료주입기를 가지고 있는 ACQUITY UPLC를 가지고 있는 Waters LCT Premier 질량 분광분석기 상에서 기록했다.
3-[(7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-일)아미노]-2-플루오로벤조니트릴 (JGK044).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ= 9.06 - 8.98 (m, 1H), 8.69 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.39 (br, 1H), 7.35 - 7.31 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 4.45 - 4.37 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ= 155.63, 153.63 (d, J = 254.6 Hz), 153.04, 149.94, 146.80, 144.76, 128.60 (d, J = 7.8 Hz), 127.48, 126.58, 125.31 (d, J = 4.5 Hz), 114.56, 113.80, 110.45, 105.83, 101.30 (d, J = 13.9 Hz), 64.70, 64.51 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C17H12FN4O2 +, 323.0939; 실측치, 323.0927.
3-[(7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-일)아미노]벤조니트릴 (JGK045).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ= 9.68 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.46 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 8.18 (ddd, J = 8.2, 2.3, 1.2 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.58 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.53 (dt, J = 7.6, 1.4 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.49 - 4.36 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ= 156.24, 152.69, 149.31, 146.15, 143.80, 140.52, 129.87, 126.35, 125.96, 124.15, 118.93, 112.66, 111.23, 109.96, 108.30, 64.52, 64.19 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C17H13N4O2 +, 305.1033; 실측치, 305.1018.
에틸 (3-클로로-2-플루오로페닐)7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-일카바메이트 (JGK047).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ= 8.96 (s, 1H), 7.483 (s, 1H), 7.477 (s, 1H), 7.37 (dd, J = 8.1, 6.7 Hz, 2H), 7.08 (td, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 4.45 - 4.38 (m, 4H), 4.27 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.22 ppm (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): 158.98, 154.43 (d, J = 250.7 Hz), 153.90, 153.41, 151.17, 149.68, 145.61, 130.12, 129.85 (d, J = 12.4 Hz), 128.20, 124.50 (d, J = 5.1 Hz), 122.22 (d, J = 16.8 Hz), 117.96, 113.51, 109.68 (d, J = 2.0 Hz), 64.73, 64.36, 63.44, 14.43.ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C19H16ClFN3O4 +, 404.0808; 실측치, 404.0800.
(±)-4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-7-올 ((±)-JGK050).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ= 9.61 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.72 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.55 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 5.70 - 5.59 (m, 1H), 4.27 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 4.17 ppm (d, J = 10.6 Hz, 1H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ= 157.18, 153.38 (d, J = 247.4 Hz), 153.13, 148.78, 146.14, 141.92, 130.12, 128.05 (d, J = 13.8 Hz), 127.78, 125.45 (d, J = 4.4 Hz), 111.95, 109.87, 108.71, 108.55 (d, J = 20.3 Hz), 88.63, 67.23 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H12BrFN3O3 +, 392.0041; 실측치, 392.0030.
(±)-
cis
- 및 (±)-
trans
-
N
-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7,8-디메틸-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 ((±)-
cis
/
trans
-JGK051)의 부분입체이성질체 혼합물.
1H NMR (500 MHz, CDCl3; (±)-cis/trans 2:1): δ= 8.68 (s, 1H), 8.68 - 8.63 (m, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.35 (br, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.28 - 7.24 (m, 1H), 7.10 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 4.52 - 4.39 (m, 1.3H), 4.09 - 3.98 (m, 0.7H), 1.453 (d, J = 6.1 Hz, 1.1H), 1.451 (d, J = 6.1 Hz, 1.1H), 1.369 (d, J = 6.6 Hz, 1.9H), 1.368 ppm (d, J = 6.6 Hz, 1.9H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3; (±)-cis/trans 2:1): δ= 155.87, 155.84, 153.19, 150.12 (d, J = 242.5 Hz), 150.09 (d, J = 242.2 Hz), 149.87, 148.89, 146.77, 144.64, 143.63, 128.73 (d, J = 10.0 Hz), 127.15, 127.12, 125.31 (d, J = 4.7 Hz), 121.71, 121.70, 114.30, 113.93, 110.54, 110.47, 108.57 (d, J = 19.4 Hz), 105.66, 105.28 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C18H16BrFN3O2 +, 404.0404; 실측치, 404.0393.
(±)-
cis
-
N
-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7,8-디메틸-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 ((±)-JGK052).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ= 8.68 (s, 1H), 8.66 (ddd, J = 8.6, 7.4, 1.6 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.35 (br, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 1H), 7.10 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.50 - 4.41 (m, 2H), 1.369 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.368 ppm (d, J = 6.5 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ= 155.85, 153.19, 150.11 (d, J = 242.1 Hz), 148.89, 146.77, 143.63, 128.73 (d, J = 10.2 Hz), 127.14, 125.31 (d, J = 4.7 Hz), 121.71, 114.30, 110.54, 108.57 (d, J = 19.5 Hz), 105.65, 72.85, 72.58, 14.71, 14.55 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C18H16BrFN3O2 +, 404.0404; 실측치, 404.0416.
N
-(3-브로모-4-클로로-2-플루오로페닐)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK053).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ= 9.70 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.61 (dd, J = 8.8, 7.7 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 8.7, 1.5 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.47 - 4.35 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ= 157.03, 154.14 (d, J = 249.5 Hz), 153.01, 149.36, 146.08, 143.74, 130.75, 127.77 (d, J = 2.9 Hz), 126.80 (d, J = 13.4 Hz), 125.37 (d, J = 3.8 Hz), 112.50, 110.15 (d, J = 22.5 Hz), 109.66, 108.39, 64.51, 64.14 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H11BrClFN3O2 +, 409.9702; 실측치, 409.9697.
N
-(3,4-디브로모-2-플루오로페닐)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK054).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ= 9.65 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.67 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.55 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.45 - 4.35 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ= 156.95, 153.98 (d, J = 249.1 Hz), 152.99, 149.35, 146.09, 143.74, 128.50 (d, J = 3.7 Hz), 128.14, 127.21 (d, J = 13.7 Hz), 120.96, 112.51, 112.33, 109.68, 108.36, 64.51, 64.14 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H11Br2FN3O2 +, 453.9197; 실측치, 453.9191.
N
-(5-브로모-2-플루오로페닐)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK055).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ= 8.99 (dd, J = 7.3, 2.5 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.36 (br, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.16 (ddd, J = 8.7, 4.6, 2.5 Hz, 1H), 7.04 (dd, J = 10.9, 8.7 Hz, 1H), 4.44 - 4.36 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ= 155.59, 153.35, 152.16 (d, J = 243.1 Hz), 149.69, 146.67, 144.52, 128.75 (d, J = 10.5 Hz), 126.16 (d, J = 7.6 Hz), 125.06, 117.19 (d, J = 3.4 Hz), 116.20 (d, J = 20.9 Hz), 114.52, 110.48, 105.85, 64.68, 64.50 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H12BrFN3O2 +, 376.0091; 실측치, 376.0077.
N
-(3-브로모-2,6-디플루오로페닐)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK056).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ= 9.60 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.74 (td, J = 8.1, 5.5 Hz, 1H), 7.28 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 4.44 - 4.38 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ= 157.78 (dd, J = 248.8, 3.3 Hz), 157.37, 155.01 (dd, J = 247.9, 4.9 Hz), 153.08, 149.47, 146.04, 143.86, 130.76 (d, J = 9.3 Hz), 117.30 (t, J = 17.5 Hz), 113.30 (dd, J = 21.8, 3.0 Hz), 112.56, 109.45, 108.28, 103.55 (dd, J = 20.4, 3.6 Hz), 64.52, 64.14 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H11BrF2N3O2 +, 393.9997; 실측치, 394.0008.
N
-(3-브로모-2,4-디플루오로페닐)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK057).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ= 8.64 (s, 1H), 8.51 (td, J = 9.0, 5.6 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.23 (br, 1H), 7.04 (ddd, J = 9.2, 7.8, 2.1 Hz, 1H), 4.45 - 4.37 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ= 156.10, 155.80 (dd, J = 246.6, 3.5 Hz), 153.28, 151.25 (dd, J = 245.1, 4.0 Hz), 149.74, 146.56, 144.53, 124.39 (dd, J = 10.8, 3.4 Hz), 122.72 (dd, J = 8.3, 1.8 Hz), 114.42, 111.49 (dd, J = 22.5, 3.9 Hz), 110.34, 105.98, 97.86 (dd, J = 25.7, 22.9 Hz), 64.69, 64.50 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H11BrF2N3O2 +, 393.9997; 실측치, 394.0013.
N
-(3-브로모-5-클로로-2-플루오로페닐)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK058).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ= 8.88 (dd, J = 6.6, 2.6 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.37 (br, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.28 - 7.23 (m, 1H), 4.44 - 4.39 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ= 155.45, 153.13, 149.88, 148.60 (d, J = 241.7 Hz), 146.76, 144.72, 130.30 (d, J = 4.4 Hz), 129.26 (d, J = 10.8 Hz), 126.08, 121.21, 114.60, 110.49, 108.68 (d, J = 20.9 Hz), 105.71, 64.70, 64.52 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H11BrClFN3O2 +, 409.9702; 실측치, 409.9713.
(±)-
trans
-
N
-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7,8-디메틸-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 ((±)-JGK059).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ= 8.68 (s, 1H), 8.66 (ddd, J = 8.6, 7.3, 1.6 Hz, 1H), 7.376 (s, 1H), 7.375 (br, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.28 - 7.24 (m, 1H), 7.10 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 4.08 - 3.98 (m, 2H), 1.451 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 1.448 ppm (d, J = 6.1 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ= 155.90, 153.12, 150.12 (d, J = 242.5 Hz), 149.90, 146.59, 144.65, 128.70 (d, J = 10.2 Hz), 127.18, 125.30 (d, J = 4.5 Hz), 121.74, 113.84, 110.43, 108.57 (d, J = 19.2 Hz), 105.31, 75.31, 75.05, 17.23, 17.20 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C18H16BrFN3O2 +, 404.0404; 실측치, 404.0405.
N
-(3,4-디클로로-2-플루오로페닐)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK060).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ= 8.67 (s, 1H), 8.59 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.38 (br, 1H), 7.33 (dd, J = 9.1, 2.1 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 4.45 - 4.38 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ= 155.84, 153.08, 149.98 (d, J = 246.3 Hz), 149.88, 146.42, 144.67, 127.55, 127.19 (d, J = 10.0 Hz), 125.30 (d, J = 4.1 Hz), 121.05, 120.47 (d, J = 18.2 Hz), 114.36, 110.43, 105.97, 64.71, 64.51 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H11Cl2FN3O2 +, 366.0207; 실측치, 366.0207.
N
-(3-브로모-2,5-디플루오로페닐)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 (JGK061).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ= 9.65 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.63 - 7.54 (m, 2H), 7.21 (s, 1H), 4.45 - 4.37 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ= 157.29 (d, J = 243.5 Hz), 156.84, 152.93, 149.97 (d, J = 242.9 Hz), 149.43, 146.16, 143.81, 129.22 - 128.44 (m), 116.30 (d, J = 26.7 Hz), 113.99 (d, J = 25.7 Hz), 112.53, 109.73, 108.76 (dd, J = 22.5, 12.5 Hz), 108.33, 64.52, 64.15 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H11BrF2N3O2 +, 393.9997; 실측치, 393.9988.
(±)-
N
-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-에테닐-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-
g
]퀴나졸린-4-아민 ((±)-JGK062).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ= 8.68 (s, 1H), 8.65 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.5 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.37 (br, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.27 (ddd, J = 8.0, 6.4, 1.5 Hz, 1H), 7.10 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 5.95 (ddd, J = 17.3, 10.7, 5.8 Hz, 1H), 5.60 (dt, J = 17.3, 1.2 Hz, 1H), 5.48 (dt, J = 10.7, 1.1 Hz, 1H), 4.82 - 4.74 (m, 1H), 4.42 (dd, J = 11.5, 2.5 Hz, 1H), 4.09 ppm (dd, J = 11.6, 8.1 Hz, 1H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ= 155.90, 153.38, 150.14 (d, J = 242.4 Hz), 149.12, 146.70, 144.12, 131.48, 128.64 (d, J = 10.3 Hz), 127.24, 125.30 (d, J = 4.7 Hz), 121.76, 120.43, 114.29, 110.69, 108.58 (d, J = 19.3 Hz), 106.06, 74.03, 67.84 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C18H14BrFN3O2 +, 402.0248; 실측치, 402.0233.
실시예 4: 예시적인 화합물의 생물활성 및 검정 프로토콜
무세포 EGFR 키나제 검정은 EGFR 키나제 시스템 (Promega #V3831)을 사용하여 수행되었다. 250nM 내지 0.03052nM의 2-배 희석에서 13개 농도, 무 약물 대조군, 및 무 효소 대조군이 반응당 25ng의 EGFR 효소에 대해 반복하여 사용되었다. 억제제의 존재에서 EGFR 활성을 측정하기 위해 ADP-Glo 키나제 검정 (Promega #V6930)이 사용되었다.
GI50 검정은 환자-유래된 교모세포종 세포를 사용하여 수행되었다. 40,000nM 내지 9.77nM (GBM 주 경우) 또는 4,000nM 내지 0.977nM (폐암 주 (HK031) 경우)의 2-배 희석에서 13개 농도가 1500 세포/웰로 4배로 384-웰 플레이트 상에 도말되었다. 세포는 3일 동안 인큐베이션되었고 그 다음 Cell Titer Glo (Promega #G7570)에 의해 증식이 평가되었다. 참고로, 에를로티닙은 642 nM (HK301) 및 2788 nM (GBM39)의 GI50을 나타냈다.
약동학적 연구는 8-10 주령의 수컷 CD-1 마우스에 대해 수행되었다. 마우스에는 표지된 바와 같이 반복하여 투약되었다. 시점에서, 안와후 출혈에 의해 전혈이 수득되었고 뇌 조직이 수확되었다. 혈장을 얻기 위해 혈액 샘플이 원심분리되고 뇌 조직은 세정되고 균질화되었다. 샘플은 아세토니트릴로 추출되고 상청액은 스피드-백을 사용하여 건조되었다. 건조된 샘플은 50:50:0.1 아세토니트릴:물:포름산에 용해되고 Agilent 6400 시리즈 삼중 사중극자 LC/MS 상에서 정량화되었다.
표 3: 예시적 화합물의 활성
실시예 5: 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 단백질 결합
에를로티닙 및 몇 개의 본 개시내용의 예시적인 화합물의 단백질 결합이 아래의 표 4에서 예시되어 있다. Fu는 "미결합된 분획"을 지칭한다. Kpuu는 "평형에서의 뇌 및 혈장의 미결합 분배 계수"를 지칭한다.
표 4: 에를로티닙 및 본 개시내용의 예시적 화합물의 단백질 결합
실시예 6: EGFRi 대사 반응군 및 비-반응군의 분류
19개 환자-유래된 GBM 세포주에 걸친 급성 EGFR 억제로 글루코스 소비에서의 변화가 특성규명되었다. 세포는 혈청-기반 배양 조건에 대조적으로 환자 종양의 많은 분자 특징을 보전하는 신경아교종구로 보충된 무혈청에서 배양되었다. EGFR 티로신 키나제 억제제 (EGFRi) 에를로티닙으로 치료는 그 방사선-표지된 글루코스 흡수 (18F-FDG)가 EGFR 억제로 상당히 약화된 GBM의 서브셋을 확인했다; 이후에 일명 "대사 반응군" (도 21a 및 도 27a). siRNA를 사용한 EGFR의 침묵화는 글루코스 흡수의 감소가 에를로티닙의 부정확한 효과에 기인하지 않는다는 것을 확인했다 (도 27b, 27c). EGFRi 처리된 세포에서 감소된 18F-FDG 흡수는 줄어든 락테이트 생산, 글루코스 소비, 및 세포외 산성화 속도 (ECAR)와 연관되었으나, 글루타민 수준은 여전히 변함없었다 (도 21b 및 도 27d-g). 마지막으로, 줄어든 글루코스 이용은 RAS-MAPK 및 PI3K-AKT-mTOR 신호전달에서 작은 변화와 상관되었고 - 이들 각각은 GBM 및 다른 암에서 글루코스 대사를 조절할 수 있다 (도 28a).
그에 반해서, 모든 "비-반응군" GBM (즉 EGFRi 또는 siRNA로 18F-FDG 흡수에서의 무 변화)에서 (도 21a 및 도 27b, 27c), 글루코스 소비, 락테이트 생산, 및 ECAR에서 무 변화가 EGFR의 강력한 억제에도 불구하고 관측되었다 (도 21b, 도 27d-g, 및 도 28b). 또한, RAS-MAPK 및 PI3K-AKT-mTOR 신호전달은 이들 세포에서 크게 영향을 받지 않았다 (도 28b). 특히, 모든 대사 반응군은 EGFR에서 변경 (복제수 이득, 돌연변이)이 있는 반면, 대사 반응이 없는 6개 GBM 주는 또한 EGFR 돌연변이 및/또는 복제수 이득을 함유했다 (도 29a, 29b). 종합해 보면, 이들 데이터는 2가지 핵심을 설명한다. 첫째, EGFR의 급성 억제는 일차 GBM 세포의 서브셋에서 글루코스 이용을 빠르게 약화시키고, 둘째로, EGFR에서 유전적 변이는 GBM이 EGFRi에 대사 반응을 하는 것을 단독 예측할 수 없었다.
실시예 7: EGFRi 대사 반응군은 세포자멸사에 대해 프라이밍된다
글루코스 대사에서 작은 변화는 세포자멸유도 인자의 발현을 유도하고 고유 세포자멸사를 자극할 수 있어, EGFRi에 대한 반응에서 감소된 글루코스 흡수가 고유 세포자멸적 경로를 자극할 수 있다는 것을 시사한다. 사실상, 급성 에를로티닙 치료는 단지 대사 반응군 배양에서 세포자멸유도 BH3-유일 단백질, BIM 및 PUMA의 발현을 촉진시켰다 (도 30a). 그러나, 아넥신 V 염색은 대사 반응군이 72 시간의 에를로티닙 노출에 이어, 비-반응군 (~3%)에 비교하여 단지 보통의 (~17%), 그럼에도 불구하고 상당히 더 높은, 세포자멸사를 갖는다는 것을 드러냈다 (도 21c).
세포자멸유도 인자의 확연한 유도에도 불구하고, 저수준의 세포자멸사는 본 발명자들이 EGFRi로 글루코스 흡수를 방해하는 것이 세포자멸사에 대해 GBM 세포를 "프라이밍"하고; 따라서 상당한 세포사를 유도함이 없이 세포자멸사에 대한 성향을 증가시키는지를 알아보게 했다. 이를 시험하기 위해, 에를로티닙으로 24시간 동안 처리하고 동적 BH3 프로파일링을 수행하여 세포자멸적 프라이밍에서의 변화를 정량하였다 (도 30b). 본 발명자들 대사 반응군 및 비-반응군 둘 모두를 다중 BH3 펩타이드 (예를 들어, BIM, BID, 및 PUMA)를 사용하여, 본 발명자들은 에를로티닙 치료를 한 대사 반응군에서 - 비히클에 비하여 사이토크롬 c 방출에서 변화에 의해 결정된 바와 같이 - 세포자멸적 프라이밍에서 유의미한 증가를 관측했다 (도 21d - 어두운 회색 막대). 중요하게는, 대사 반응군에서 프라이밍은 비-반응군에서의 프라이밍보다 상당히 더 높아 (도 21d - 밝은 회색 막대), EGFRi로 약화된 글루코스 흡수가 GBM에서 세포자멸적 프라이밍을 촉발한다는 전제를 지지했다.
본 발명자들은 감소된 글루코스 흡수가 EGFRi로 세포자멸적 프라이밍에 대해 필요한지 여부를 글루코스 소비를 구하는 것이 이들 효과를 완화시켜야하는지 여부를 확인함에 의해 시험했다. 이를 시험하기 위해, 글루코스 수송체 1 (GLUT1) 및 3 (GLUT3)을 2개의 대사 반응군 (HK301 및 GBM39)에서 이소성으로 발현시켰다. GLUT1 및 GLUT3 (GLUT1/3)의 강제 발현이 양 세포주에서 글루코스 흡수 및 락테이트 생산의 EGFRi-매개된 약화를 구조했고 (도 21e 및 도 31a-c), 중요하게는, EGFRi에 대한 반응에서 세포자멸적 프라이밍을 현저하게 억제했다 (도 21f). 집합적으로, 이들 데이터는 비록 상당한 세포사를 유도하는데 불충분하지만, 글루코스 소비의 EGFRi-매개된 억제는 세포자멸적 역치를 잠재적으로 낮추어 이 프라이밍된 상태를 활용하는 물질에 대해 GBM 세포를 취약하게 한다는 것을 입증한다.
실시예 8: 세포질 p53이 EGFRi로 세포자멸적 프라이밍을 위해 필요하다
GBM이 EGFRi로 세포자멸사에 대해 프라이밍되는 기전을 조사했다. 종양유전자-유도된 글루코스 대사의 억제는 GBM 세포를 세포질 p53 의존적 세포자멸사에 대해 상승작용으로 영향을 받기 쉽게한다. 종양원성 신호전달 (예를 들어, EGFRi)을 표적화함을 통해, GBM에서 약화된 글루코스 대사 유동은 고유 세포자멸적 경로 ("프라이밍")를 계합하는 세포질 p53을 초래한다. 그러나, Bcl-xL은 세포질 p53-매개된 세포사를 차단한다. 약리학적 p53 안정화는 이 세포자멸적 차단을 극복하며, 이는 GBM에서 종양유전자-유도된 글루코스 대사의 조합된 표적화로 상승작용적 치사로 이어진다.
프라이밍된 상태인 세포에서, 항-세포자멸적 Bcl-2 계열 단백질 (예를 들어 Bcl-2, Bcl-xL, Mcl-1)에는 세포자멸유도 BH3 단백질 (예를 들어, BIM, BID, PUMA, BAD, NOXA, HRK)이 주로 로딩되어; 결과적으로, 세포는 생존에 대해 이들 상호작용에 의존적이다. 종양 억제인자 단백질인, p53은 세포사를 방지하기 위해 항-세포자멸적 Bcl-2 단백질에 의해 후속으로 결합될 필요가 있는 세포자멸유도 단백질을 상향조절하는 것으로 알려져 있다. p53이 EGFRi-유도된 프라이밍에 대해 필요한지 여부를 조사하기 위해, 본 발명자들은 2개 대사 반응군 (HK301 및 HK336, 도 22a)에서 CRISPR/CAS-9로 p53을 침묵화시켰다 (이후에 p53KO로 칭함). EGFRi로 글루코스 소비에서의 변화는 p53KO 세포에서 영향을 받지 않았지만 (도 32a), BH3 프로파일링으로, HK301 및 HK336 세포 둘 모두에서 p53KO가 에를로티닙-유도된 세포자멸적 프라이밍을 거의 제거했다는 것이 밝혀졌다 (도 22b).
p53 전사 활성은 글루코스 제한 하에서 향상되는 것으로 밝혀졌기 때문에, 본 발명자들은 p53-매개된 전사가 EGFRi에 의해 유도되는지 여부를 결정하기 위해 조사했다. 그러나, 에를로티닙은 p53-조절된 유전자 (예를 들어, p21, MDM2, PIG3, TIGAR)의 발현을 증가시키지 않았을 뿐아니라 (도 32b), HK301 대사 반응군 세포에서 p53-루시퍼라제 리포터 활성을 유도하지 않았다 (도 32c). 이들 데이터는 p53이 EGFRi로 프라이밍을 위해 필요하지만, 그것의 전사 활성은 필요하지 않을 수 있음을 나타낸다.
p53의 널리-기술된 핵 기능에 부가하여, p53은 고유 세포자멸적 경로를 직접적으로 계합할 수 있는 세포질에 위치될 수 있다. 세포질 p53이 EGFRi로 세포자멸적 프라이밍에 대해 중요한지 여부를 평가하기 위해, 본 발명자들은 결함있는 핵 편재화 신호가 있는 p53 돌연변이체 (p53cyto)를 HK301 및 HK336 p53KO 신경아교종구 안으로 안정적으로 도입했다. 기대된 바와 같이, p53cyto가 발현되었고 (도 22c 및 도 32d), 세포질에 제한되고 (도 22d 및 도 32e) 그리고 전사 활성이 없었다 (도 22e 및 도 32f). 반대로, HK301 및 HK336 p53KO 세포에서 야생형 p53 (p53wt)의 재구성은 p53-조절된 유전자의 친계 세포 및 구조된 전사와 유사한 편재화를 표시했다 (도 22c-e 및 도 32e-g). 현저하게, p53cyto의 안정한 도입은 p53wt에 비교할만한 수준으로 HK301 및 HK336 p53KO 세포 둘 모두에서 에를로티닙으로 프라이밍을 상당히 회복하여 (도 22f 및 도 32g), p53의 세포질 기능이 EGFRi-매개된 프라이밍에 대해 필요하다는 것을 나타낸다. 이를 뒷받침하면서, HK301 p53KO 세포 안으로, 여전히 핵-국한된 p53 돌연변이체 (p53NES)인, 전사적 활성의 도입 (도 2622g)은 EGFRi-매개된 세포자멸적 프라이밍을 유도하는데 실패했다 (도 22g, 22h 및 도 32h). 마지막으로, 피피트린-μ (PFTμ)로 세포질 p53 활성의 약리학적 억제는 에를로티닙으로 프라이밍을 현저하게 감소시켰다 (도 32i). 종합적으로, 이들 결과는 세포질 p53이 GBM에서 EGFRi에 이어 고유 세포자멸적 기구를 결합함을 나타낸다.
이전 연구는 인간 종양-유래된 p53 돌연변이체 - 구체적으로 DNA 결합 도메인 내의 것들 -가 상호활성화 결핍에 부가하여 세포질 기능을 감소시켰다는 것을 실증했다. 따라서, 발명자들은 HK301 p53KO에서 2개의 이들 "핫스팟" p53 돌연변이체인, R175H 또는 R273H의 안정한 발현이 EGFRi-매개된 프라이밍을 감소시킬 수 있는지 여부를 시험했다 (도 32h). 기대된 바와 같이, 양 돌연변이체는 전사 능력을 결여하고 (도 22g), 감소된 세포질 활성과 일치하고, EGFRi로 세포자멸적 프라이밍을 할 수 없었다 (도 22h). 따라서, 이전의 발견과 나란히, p53의 DNA 결합 도메인에서 종양원성 돌연변이는 "이중 히트"를 초래하며, 그것에 의하여 상호활성화 및 세포질 기능 둘 모두가 폐기된다 - 후자는 EGFRi로 세포자멸적 프라이밍에 대한 연루가 있음.
실시예 9: EGFR-유도된 글루코스 흡수의 억제는 활용가능한 Bcl-xL 의존성을 만든다
Bcl-xL은 세포질 p53을 격리하고 p53-매개된 세포자멸사를 방지할 수 있다; 따라서 생존을 위한 Bcl-xL에 대한 의존성과 프라이밍된 세포자멸적 상태를 만든다. 사실상, BH3 프로파일링은 EGFRi 대사 반응군에서 세포 생존에 대해 Bcl-xL에 대한 의존을 밝혔다 (도 33a). 따라서, 본 발명자들은 EGFRi로 약화된 글루코스 소비가 세포질 p53 by Bcl-xL의 격리를 초래할 수 있다는 것을 가정했다. 이를 조사하기 위해, 본 발명자들은 공동-면역침강을 수행하여 반응군 (n=2) 및 비-반응군 (n=2) 둘 모두에서 EGFRi에 대한 반응에서의 p53-Bcl-xL 상호작용의 동력학을 조사했다. 중요하게는, 본 발명자들은 비-반응군 (도 23b)에서가 아닌 대사 반응군 (도 23a)에서 에를로티닙 치료에 이어서 현저하게 고조된 Bcl-xL과 p53 상호작용을 관측했다. 이것은 EGFR-의존적 글루코스 소비의 억제가 p53 by Bcl-xL의 격리를 초래한다는 것을 시사한다. 이 해석과 일치하여, 글루코스 흡수 및 세포자멸적 프라이밍에서 EGFRi-매개된 감소를 구제하는 GLUT1/3의 이소성 발현은 Bcl-xL과 p53의 회합을 방지했다 (도 23c 및 도 33b). 이들 발견은 글루코스 흡수의 EGFRi-매개된 억제가 세포질 p53과 Bcl-xL 사이의 상호작용을 촉진함에 의해 세포자멸사를 위해 GBM 세포를 프라이밍한다는 것을 강하게 나타낸다.
Bcl-xL로부터 p53의 해리는 p53이 직접적으로 BAX를 활성화하는 것을 가능하게 하여, 사이토크롬 c 방출 및 세포사를 초래한다. 일단 본 발명자들은 EGFRi에 대한 반응에서 대사 반응군에서의 Bcl-xL과 p53 사이 증가된 결합을 인식하여, 본 발명자들은 Bcl-xL로부터 p53의 이동이 세포자멸사를 이끌어내는지 여부를 조사했다. 이를 시험하기 위해, 본 발명자들은 대사 반응군 (HK301)을 에를로티닙 및 특이적 Bcl-xL 억제제인, WEHI-539로 처리했다. WEHI-539의 첨가는 에를로티닙 치료 하에서 p53과 Bcl-xL의 회합을 파괴하였고 (도 23d), 이는 HK301 및 GBM39 세포 (대사 반응군)에서 상승작용적 치사로 이어졌다 (도 23e). 특히, 세포질 p53은 EGFRi 대사 반응군 세포에서 조합 효과에 충분하였다 (도 33c). 그러나, WEHI-539는 에를로티닙으로 치료된 비-반응군 (HK393)에서 세포자멸사를 증진하지 않았으며, 이는 EGFRi로 글루코스 흡수의 약화, 및 p53과 Bcl-xL 사이의 후속적인 회합이 생존을 위한 Bcl-xL에 대한 의존을 생성하는데 필요하다는 것을 시사한다 (도 33e). 이를 뒷받침하면서, GLUT1/3의 강제 발현은 상기 약물 병용으로 세포사를 상당히 완화시켰다 (도 23f 및 도 33d). 이와 함께, 이들 관찰은 Bcl-xL이 세포질 p53을 격리함에 의해 글루코스 흡수의 EGFRi-매개된 억제에 반응하여 GBM 세포사를 약화시킨다는 것을 나타낸다 (도 32g).
실시예 10: EGFR 및 p53의 조합된 표적화는 EGFRi 대사 반응군에서 상승작용적이다
기계론적인 연구는 기능성 p53에 대해 의존적일 EGFR-유도된 GBM에서 잠재적인 치료적 기회를 밝혔다. p53 신호전달 축은 GBM에서 변경된 3가지 코어 경로 중 하나인 반면, TCGA GBM 데이터세트의 분석은 p53 돌연변이가 EGFR에서의 변경과 상호 배타적이다는 것을 실증했다 (도 28a 및 28b). 반대로, EGFR 돌연변이 또는 이득이 있는 환자에서, p53 경로는 CDKN2A 유전자좌에서MDM2의 증폭 및/또는 MDM2의 음성 조절인자인, p14 ARF에서 결실을 통해 억제될 수 있다. 이들 관계, 및 EGFRi-약화된 글루코스 흡수 하에서 프라이밍을 위한 p53의 요건을 고려하여, 본 발명자들은 MDM2 억제를 통한 p53의 안정화가 Bcl-xL 길항작용에 대해 유사한 치료적 효과를 가질 수 있다는 것을 가정했다. 뉴틀린 - MDM2의 광범위하게 특성규명된 억제제 -을 사용하여, 본 발명자들은 대사 반응군 신경교구에서 에를로티닙과 쌍으로 될 때 현저한 상승작용적 치사를 발견했다. HK301 세포의 90% 초과가 조합된 에를로티닙 및 뉴틀린으로 세포자멸사를 당했다 (도 24c). 특히, 본 발명자들은 대사 비-반응군 (GS017, 도 24c)에서 이들 약물 간에 상승작용효과가 없다는 것을 관측했다. 본 발명자들은 그 다음 본 발명자들의 일차 GBM 세포의 패널 (모든 p53 야생형)에 걸쳐 이 조합을 시험했고 EGFRi에 대한 대사 반응을 갖는 GBM에서만 상승작용적 치사를 발견했다 (도 24d 및 도 34a). EGFR의 유전적 녹다운은 대사 반응군에서만 상승작용효과를 확인시켜줬다 (도 34b). 중요하게는, GLUT1/3의 강제 발현은 조합된 에를로티닙 및 뉴틀린으로 BAX 올리고머화, 사이토크롬 c 방출 및 세포자멸사를 상당히 감소시켜 (도 24e 및 도 34c), EGFRi로 글루코스 대사의 억제가 에를로티닙과 뉴틀린 조합의 상승작용 효과에 필요하다는 개념을 지지했다.
조합된 에를로티닙과 뉴틀린에 대하여 세포사를 이끌어내는데 있어 p53의 역할이 그 다음 조사되었다. 기대된 바와 같이, 2개의 EGFRi 대사 반응군 (HK301 및 HK336)에서 p53의 CRISPR/CAS-9 표적화는 약물 조합체에 대한 민감도를 완전히 완화시켰다 (도 24f). 마찬가지로, Bcl-xL의 이소성 발현은, p53-매개된 세포자멸사를 길항하는데 있어 Bcl-xL에 대한 중요한 기능과 일치하는, 병용 치료로 세포사를 현저하게 억제했다 (도 34d). 또한, Bcl-xL 억제 (예를 들어, WEHI-539)로의 결과에 유사하게, 뉴틀린의 첨가는 에를로티닙 치료 하에서 Bcl-xL로부터 p53을 해리했다 (도 24g). 이들 데이터는 p53 안정화가 세포질 p53-매개된 세포자멸사를 자극할 수 있다는 이전의 관찰과 일치한다. 세포질 p53 활성이 대사 반응군에서 EGFRi 및 뉴틀린 유도된 세포자멸사에 필요하다는 암시를 지지하면서, PFTμ로 세포질 p53 활성을 차단하는 것은 조합의 상승작용 효과를 상당히 감소시켰고 (도 34e), 반면에 핵-국한된 p53 돌연변이체인, p53NES를 함유하는 HK301 세포는 에를로티닙 및 뉴틀린으로 세포자멸사를 향상시킬 수 없었다 (도 34f). 마지막으로, 상호활성화 및 세포질 결핍 둘 모두를 갖는 암 "핫스팟" 돌연변이체인, R175H 및 R273H는 약물 조합체에 대해 완전히 비민감성이었다 (도 34f).
세포질 p53이 약물 조합체로 세포사를 증진시키기 위해 요구되는 반면, 본 발명자들은 p53의 전사-의존적 및 독립적인 기능이 뉴틀린으로 상승작용적 세포자멸사의 최적의 실행을 위해 필요하다는 것을 일부 사례에서 관측했다 (도 34f). 이들 결과는 p53의 전사-독립적인 기능이 고유 세포자멸사를 단독으로 수행할 수 있고, 반면에, 다른 맥락에서 세포질 p53 매개된 세포 사멸을 자극하기 위해 그것의 전사-의존적 기능을 요구할 수 있다는 보고와 일치한다. 집합적으로, 본 명세서에 기재된 결과는 EGFR-유도된 글루코스 대사 및 p53의 조합된 표적화가 일차 GBM에서 현저한 상승작용적 세포사를 유도할 수 있고; 이는 p53의 세포질 기능에 의존적이다는 것을 나타낸다.
실시예 11: 글루코스 대사의 조절은 p53-매개된세포사에 대해 EGFRi 비-반응군을 프라이밍한다
상기 언급된 데이터는 발명자들이 글루코스 대사의 EGFRi-매개된 약화가 세포자멸적 기구를 프라이밍하여, 세포자멸유도 자극 예컨대 p53 활성화로 상승작용효과를 초래한다는 모델을 제안하도록 이끌었다. 상승작용효과는 EGFR 억제제에 의한 세포 스트레스의 유도, 세포자멸사에 대한 세포의 글루코스 흡수 및 프라이밍의 감소 및 BCL-2의 길항제에 의한 p53의 안정화 사이에 있다. EGFR 억제는 세포 스트레스에서 당분해를 빠르게 약화시킬 수 있다. 이것은 고유 세포자멸사가: 1) p53의 활성화 (예컨대, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 뉴틀린, 유사체 또는 기타를 통함) 및 2) BCL-2의 억제 (본 명세서에서 기재된 바와 같은 임의의 몇 개의 물질 예컨대 예를 들어, ABT-263 (나비토클락스)에 의함)에 의해 상당히 향상될 수 있는 종양 특이적 취약성을 생성한다.
이 모델의 논리적 예측은 글루코스 대사의 직접적인 억제는 EGFRi의 효과를 표현형복사해야한다는 것이다. 이와 일치하여, 글루코스 대사 억제제 2-데옥시글루코스 (2DG)의 첨가는 세포자멸적 프라이밍, Bcl-xL에 대한 p53의 결합, 및 HK301 세포 (EGFRi 대사 반응군)에서 뉴틀린과 상승작용효과를 자극했다 (도 40a, 40b, 및 40d). 흥미롭게도, 올리고마이신 (복합체 V/ATP 합성효소) 또는 로테논 (복합체 I)으로 산화 인산화의 억제는 HK301 신경아교종구에서 뉴틀린 치료와 상승작용하지 않았다 (도 35c 및 35d). 따라서, 산화 대사가 아닌, 감소된 글루코스 대사 유동 단독은 p53 활성화에 대해 상승작용적 민감도에 충분한 것으로 보인다.
이것은 발명자들이 EGFRi 비-반응군에서 글루코스 소비를 조절하는 것이 유사한 p53-의존적 취약성을 초래하는지 여부를 고려하도록 촉발했다. 이를 조사하기 위해, 그들은 2DG로, 또는 PI3K - 글루코스 대사의 잘 특성규명된 드라이버 -를 표적화함을 통해 글루코스 흡수의 직접적인 억제가 2개의 EGFRi 대사 비-반응군에서 세포자멸적 프라이밍을 이끌어내는지 여부를 시험하였다 (도 25a). 에를로티닙 치료에 대조적으로, 픽틸리십으로 PI3K의 급성 억제는 PI3K-AKT-mTOR 신호전달을 폐지하였고 (도 35e), HK393 및 HK254 세포에서 18F-FDG 흡수를 상당히 감소시켰다 (도 25b). 픽틸리십으로 글루코스 소비에서 감소는 상당히 더 높은 세포자멸적 프라이밍과 연관되었고, 기대된 바와 같이, 2DG는 이들 효과를 완전히 반영했다 (도 25b 및 c). 따라서, EGFRi 대사 비-반응군은 글루코스 흡수의 억제에 이어서 세포자멸사에 대해 프라이밍될 수 있다. 중요하게는, HK393에서 p53의 CRISPR/CAS-9 표적화는 2DG 또는 픽틸리십에 의해 매개된 프라이밍을 상당히 억제했다. (도 25d). 또한, p53-의존적 프라이밍은 고조된 Bcl-xL 및 p53 결합과 연관되어, 세포자멸사를 차단하도록 Bcl-xL에 의한 p53의 격리를 나타낸다 (도 25e 및 도 35f). 이 해석과 일치하여, 뉴틀린과 2DG 또는 픽틸리십을 조합시키는 것은 EGFRi 비-반응군 세포에서 상당한 p53-의존적 상승작용적 치사를 야기했다 (도 25f & 25g). 종합해 보면, 이들 데이터는 글루코스 대사의 급성 억제는 직접적으로 또는 표적 요법으로 GBM에서 p53-의존적 세포자멸적 프라이밍을 촉진하며; 이것은 향상된 세포 사멸에 대한 표적화가능 취약성을 생성한다는 것을 입증한다.
실시예 12: 생체내 GBM을 표적화하기 위한 병용 치료적 전략 및 비-침습성 바이오마커
세포 배양에서 수득된 결과는 종양유전자-유도된 글루코스 대사와 p53의 조합된 표적화가 일차 GBM에서 상승작용적 활성을 갖는다는 것을 나타낸다. 이것은 본 발명자를 이 접근법이 동소성 GBM 이종이식 모델에서 효과적일 수 있는지 여부를 조사하도록 한다. 이들 연구를 위해, 본 발명자들은 현재 많은 악성종양에 대해 임상시험 중에 있는 강력한 MDM2 억제제인, 이다사뉴틀린을 이용했다. 이다사뉴틀린에 대한 CNS 침투의 불확실성을 고려하여, 본 발명자들은 먼저 이다사뉴틀린이 온전한 혈액-뇌-장벽 (뇌:혈장, 0.35)을 갖는 마우스의 뇌에 축적될 수 있고 동소성 종양 보유 마우스에서 p53을 안정화시킬 수 있다는 것을 실증했다 (도 41a & 41b).
다음으로, 종양유전자 억제로 글루코스 대사에서 작은 변화가 p53 활성화에 대한 상승작용적 민감도에 필요하기 때문에, 본 발명자들은 EGFRi 투여 후 생체내 글루코스 흡수에서 신속한 약화가 - 18F-FDG PET에 의해 측정된 바와 같이 - 조합된 에를로티닙 + 이다사뉴틀린 치료의 치료적 효능에 대한 비-침습성 예측의 바이오마커로 작용할 수 있었다고 추론했다 (도 26a). 본 발명자들은 EGFR-대사 반응군 신경교구 (GBM39)의 동소성 이종이식에서 급성 에를로티닙 치료 (75 mg/kg)가 18F-FDG 흡수를 빠르게 감소시켰다 (에를로티닙 투여 15시간 후)는 것을 관측했다 (도 26b 및 도 36c). 별도 군의 마우스에서, 그들은 매일 에를로티닙 (75 mg/kg) 치료 및 이다사뉴틀린 (50 mg/kg)의 개별 약물 및 조합을 시험했다. 단일 물질 대조군에 비하여, 본 발명자들은 상승작용적 성장 억제를 - 분비된 가우스의 루시퍼라제에 의해 결정된 바와 같이 - GBM39 두개내 종양 보유 마우스에서 최소 독성으로 관측했다 (도 26b 및 도 36d). 그에 반해서, 비-대사 반응군 (HK393)의 동소성 이종이식은 급성 EGFRi로 18F-FDG 흡수에서 무 변화를 나타냈고 (도 26d 및 도 36c), 에를로티닙 및 이다사뉴틀린 조합으로 상승작용적 활성도 나타내지 않았다 (도 26e). 따라서, EGFRi로 글루코스 흡수에서 신속한 변화를 측정하기 위해 사용된, 비-침습성 18F-FDG PET는 조합된 에를로티닙 및 이다사뉴틀린에 대한 후속적인 상승작용적 민감도를 예측하는데 효과적이었다.
마지막으로, 본 발명자들은 2개 EGFRi 대사 반응군 (GBM39 및 HK336) 또는 2개 비-반응군 (HK393 및 GS025)의 동소성 이종이식에서 전체 생존에 대한 약물 조합체의 효과를 평가했다. 모든 종양은 p53 야생형이었다 (도 29a). (가우스의 루시퍼라제에 의해 결정된 바와 같이) 종양 성장의 증거에 따라, 마우스는 최대 25일 동안 비히클, 에를로티닙, 이다사뉴틀린, 또는 조합으로 치료되었다. 약물 조합체는 EGFRi 대사 반응군 GBM 종양에서만 생존에서 확연한 증가를 초래했다 (도 30f-i). 종합해 보면, 이들 데이터는 EGFR 및 p53의 조합된 표적화는 상승작용으로 성장을 억제하고 p53 야생형 GBM 동소성 이종이식의 서브셋에서 생존을 연장한다는 것을 보여준다. 중요하게는, 18F-FDG PET는 이 신규한 조합 치료적 전략에 대한 민감도의 비-침습성 예측의 바이오마커로 귀중하다.
실시예 13: 2DG 또는 사이토카할신 B로 당분해의 직접적인 억제
본 발명자들은 헥소키나제 억제제 (2DG) 및 글루코스 수송체 억제제 (사이토칼라신 B)으로 당분해의 직접적인 억제가 어떻게 뉴틀린에 의한 p53 활성화에 영향을 주는지를 시험했다. 도 37에 도시된 결과는 낮은 글루코스 (0.25 mM)가 나비토클락스 또는 뉴틀린으로의 BCL-xL 억제로 상승작용적 세포 사멸을 유발시킨다는 것을 입증한다. 세포사는 단일 물질로 또는 p53 활성제인, 뉴틀린과 조합으로 당분해 억제제 2DG 또는 사이토칼라신 B로 72시간 동안 처리된 신경교구 샘플에서 아넥신 V 염색을 사용하여 측정되었다. 낮은 글루코스 조건 (0.25mM)에서 신경아교종구를 배양하고 72시간 동안 뉴틀린 또는 나비토클락스 (ABT-263)로 이들을 처리함에 의해 동일한 효과가 재현되었다.
실시예 14: 실험 절차
마우스
6-8 주령인 암컷 NOD scid감마 (NSG)를 University of California Los Angeles (UCLA) 의료 센타 동물 교배 설비로부터 구매했다. 6-8 주령인 수컷 CD-1 마우스는 Charles Rive로부터 구매했다. 모든 마우스는 정의된 균무리 무병원체 조건 하에서 UCLA에서 실험실 동물 부서 (DLAM)의 AAALAC-승인된 동물 설비에서 유지되었다. 모든 동물 실험은 UCLA 동물 자원 관리국 (OARO)의 승인으로 수행되었다.
환자-유래 GBM 세포
GBM 세포 배양을 유도하기 위해 모든 환자 조직을 UCLA 기관 검토 보드 (IRB) 프로토콜: 10-00065을 사용하여 명백한 고지에 의한 동의를 통하여 수득했다. 이전에 기재된 바와 같이12, 일차 GBM 세포는 헤파린 (5 μg/mL, Sigma), EGF (50 ng/mL, Sigma), 및 FGF (20 ng/mL, Sigma)가 보충된 DMEM/F12 (Gibco), B27 (Invitrogen), 페니실린-스트렙토마이신 (Invitrogen), 및 글루타맥스 (Invitrogen)로 구성되는 신경교구 조건에서 확립되고 유지되었다. 모든 세포는 37°C, 20% O2, 및 5% CO2에서 성장되었고 일상적으로 모니터링되고 상업적으로 이용가능한 키트 (MycoAlert, Lonza)를 사용하여 마이코플라스마의 존재에 대해 음성 시험되었다. 실험 당시에, 사용된 대부분의 HK 주는 20-30 사이의 계대였고 (예외 HK385 p8, HK336 p15), 반면에 GS 및 GBM39 주는 10 미만의 계대였다. 모든 세포는 단-연쇄 반복 (STR) 분석에 의해 인증되었다
시약 및 항체
하기 공급원으로부터 화학 억제제가 시험관내 연구를 위해 DMSO에 용해되었다: 에를로티닙 (Chemietek), 뉴틀린-3A (Selleck Chemicals), WEHI-539 (APExBIO), 픽틸리십 (Selleck Chemicals), 올리고마이신 (Sigma), 로테논 (Sigma). 2DG (Sigma)가 사용 전에 배지에 신선하게 용해되었다. 면역블로팅을 위해 사용된 항체는 다음 열거된 공급원으로부터 수득되었다: β-액틴 (Cell Signaling, 3700), 튜불린 (Cell Signaling, 3873), p-EGFR Y1086 (Thermo Fischer Scientific, 36-9700), t-EGFR (Millipore, 06-847), t-AKT (Cell Signaling, 4685), p-AKT T308 (Cell Signaling, 13038), p-AKT S473 (Cell Signaling, 4060), t-ERK (Cell Signaling, 4695), p-ERK T202/Y204 (Cell Signaling, 4370), t-S6 (Cell Signaling, 2217), p-S6 S235/236 (Cell Signaling, 4858), t-4EBP1 (Cell Signaling, 9644), p-4EBP1 S65 (Cell Signaling 9451), Glut3 (Abcam, ab15311), Glut1 (Millipore, 07-1401), p53 (Santa Cruz Biotechnology, SC-126), BAX (Cell Signaling, 5023), BIM (Cell Signaling, 2933), Bcl-2 (Cell Signaling, 2870), Bcl-xL (Cell Signaling, 2764), Mcl-1 (Cell Signaling, 5453), 사이토크롬 c (Cell Signaling, 4272), 및 절단된 카스파제-3 (Cell Signaling, 9661). 면역침강을 위해 사용된 항체는 다음 열거된 공급원으로부터 수득되었다: p53 (Cell Signaling, 12450) 및 Bcl-xL (Cell Signaling, 2764). 이차 항체는 다음 열거된 공급원으로부터 수득되었다: 항-토끼 IgG HRP-연결 (Cell Signaling, 7074) 및 항-마우스 IgG HRP-연결 (Cell Signaling, 7076). 모든 면역블로팅 항체는 1:10,000에서 사용된 β-액틴 및 튜불린을 제외하고 1:1000의 희석에서 사용되었다. 면역침강 항체는 제조자의 지침에 따라 희석되었다 (p53에 대해 1:200 및 Bcl-xL에 대해 1:100). 이차 항체는 1:5000의 희석에서 사용되었다.
18
F-플루오로데옥시글루코스 (18F-FDG) 흡수 검정.
세포는 5×104 세포/ml로 분주되고 표지된 시점에서 지정된 약물로 처리되었다. 적절한 처리에 이어서, 세포가 수집되고 18F-FDG (방사능 1 μCi/mL)를 함유하는 글루코스-없는 DMEM/F12 (USBiological)에서 재현탁되었다. 세포는 37°C에서 1시간 동안 인큐베이션되고 그 다음 빙냉된 PBS로 3회 세정되었다. 각각의 샘플의 방사능이 그 다음 감마 계수기를 사용하여 측정되었다.
글루코스, 글루타민, 및 락테이트 측정
세포 글루코스 소비 및 락테이트 생산은 Nova Biomedical BioProfile Basic Analyzer를 사용하여 측정되었다. 간단히, 세포는 2 mL의 신경교구 조건 및 적절한 약물 조건 (n=5)에 1 x 105 세포/ml로 분주되었다. 약물 처리 12시간 후, 1 mL의 배지가 각각의 샘플로부터 제거되고 Nova BioProfile 분석기에서 분석되었다. 측정은 세포 수에 대해 정규화되었다.
아넥신 V 세포자멸사 검정
세포는 수집되고 제조자의 프로토콜 (BD Biosciences)에 따라 아넥신 V 및 PI 염색에 대해 분석되었다. 간단히, 세포는 5 x 104 세포/ml로 분주되고 적절한 약물로 처리되었다. 표지된 시점에 따라, 세포가 수집되고, 트립신화되고, PBS로 세정되고, 그리고 15분 동안 아넥신 V 및 PI로 염색되었다. 샘플은 그 다음 BD LSRII 흐름 세포측정기를 사용하여 분석되었다.
면역블로팅
세포는 수집되고 중단 프로테아제 및 포스파타제 억제제 (Thermo Fischer Scientific)를 함유하는 RIPA 완충액 (Boston BioProducts)에 용해된다. 용해물은 14,000xg에서 15분 동안 4°C에서 원심분리되었다. 단백질 샘플은 그 다음 NuPAGE LDS 샘플 완충액 (Invitrogen) 및 NuPAGE 샘플 환원제 (Invitrogen)에서 비등되고 12% 비스-트리스 겔 (Invitrogen) 상에서 SDS-PAGE를 사용하여 분리되고 니트로셀룰로스 막 (GE Healthcare)으로 이전되었다. 면역블로팅은 항체의 제조자의 사양에 따라 이전에 언급된 바와 같이 수행되었다. 막은 SuperSignal 시스템 (Thermo Fischer Scientific)을 사용하여 현상되었다.
면역침강
세포는 수집되고, PBS로 1회 세정되고, IP 세포용해 버퍼 (25 mM 트리스-HCL pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% NP-40, 5% 글리세롤)에서 4°C에서 15분 동안 인큐베이션되었다. 300-500 μg의 각각의 샘플은 그 다음 프로테인 A/G 플러스 아가로스 비드 (Thermo Fischer Scientific)에서 1시간 동안 사전-세정되었다. 사전-세정에 이어, 샘플은 그 다음 제조자의 사양에 따라 이전에 언급된 바와 같이 밤새 항체-비드 콘주게이트로 인큐베이션되었다. 샘플은 그 다음 1000g에서 1분 동안 원심분리되고, 비드는 500 μl의 IP 세포용해 버퍼로 5회 세정되었다. 단백질은 95°C에서 5분 동안 2x LDS 샘플 완충액 (Invitrogen)에서 비등함에 의해 비드로부터 용출되었다. 샘플은 이전에 기재된 바와 같이 면역블로팅에 의해 분석했다. 면역침강 항체는 제조자의 지침에 따라 희석되었다 (p53에 대해 1:200 및 Bcl-xL에 대해 1:100).
동적 BH3 프로파일링
GBM 신경아교종구는 먼저 TrypLE (Gibco)로 단일-세포 현탁액에 대해 해리되고 MEB 완충액 (150 mM 만니톨 10 mM HEPES-KOH, 50 mM KCl, 0.02 mM EGTA, 0.02 mM EDTA, 0.1 % BSA, 5 mM 석시네이트)에서 재현탁되었다. 50μl의 세포 현탁액 (3×104 세포/웰)이 96-웰 플레이트에 0.002% 디기토닌 및 표지된 펩타이드를 함유하는 50 μL MEB 완충액을 보유하는 웰들에 플레이팅되었다. 플레이트는 그 다음 25°C에서 50분 동안 인큐베이션되었다. 세포는 그 다음 4% 파라포름알데하이드로 10분 동안 고정되고, 이어서 N2 완충액 (1.7M 트리스, 1.25M 글리신 pH 9.1)으로 5분 동안 중화되었다. 샘플은 DAPI 및 항-사이토크롬 c (BioLegend)를 함유하는 염색 용액 (10% BSA, PBS 내 2% Tween 20) 20 μL로 밤새 염색되었다. 다음 날, 사이토크롬 c 방출은 BD LSRII 흐름 세포측정기를 사용하여 정량화되었다. 측정은 사이토크롬 c 방출을 촉진하지 않는 적절한 대조군 (DMSO 및 불활성 PUMA2A 펩타이드)에 대해 정규화되었다. 델타 프라이밍은 비히클 처리된 세포와 약물 처리된 세포 사이의 사이토크롬 c 방출의 양에서의 차이를 지칭한다.
BAX 올리고머화
7.5 x 105 세포가 표지된 약물로 처리되었다. 치료의 24시간 후, 세포는 수집되고 빙냉된 PBS로 1회 세정되고 30분 동안 PBS 내 1 mM 비스말레이미도헥산 (BMH)에 재현탁되었다. 세포는 그 다음 상기에 기재된 바와 같이 면역블로팅을 위해 펠릿화되고 용해되었다.
사이토크롬 c 검출
5 백만개 세포가 1x105 세포/mL의 농도로 분주되고 표지된 약물로 처리되었다. 치료의 24시간 후, 세포는 수집되고 빙냉된 PBS로 1회 세정되었다. 그 다음 미토콘드리아 단리 키트 (Thermo Fischer Scientific, 89874)를 사용하여 세포하 분별화가 수행되었다. 세포질 및 미토콘드리아 분획 둘 모두는 면역블로팅을 거치고 사이토크롬 c가 1:1000의 희석에서 사이토크롬 c 항체 (Cell Signaling, 4272)를 사용하여 검출되었다.
마우스 이종이식 연구
두개내 실험을 위해, GBM39, HK336, HK393, 및 GS025 세포가 암컷 NSG 마우스 (6-8 주령)의 뇌의 우측 선조체 안으로 주입되었다 (주입 당 4×105 세포). 주입 좌표는 정수리점에 대해 2 mm 측면 및 1 mm 후측, 2 mm의 깊이였다. 종양 부담은 분비된 가우스의 루시퍼라제로 모니터링되고 3개의 연속적인 성장 측정에 이어, 마우스는 적절한 비히클, 75 mg/kg 에를로티닙, 50 mg/kg 이다사뉴틀린, 또는 두 약물의 조합으로 구성되는 4개의 처리 아암으로 무작위 추출되었다. 비히클은 하기 중에 0.5% 메틸셀룰로스로 구성되었다: 에를로티닙을 용해하기 위해 사용된 물, 및 이다사뉴틀린을 용해하기 위해 사용된, Roche로부터 수득된 전매 제형. 종양 부담은 분비된 가우스의 루시퍼라제에 의해 매주 2회 평가되었다. 가능한 경우, 마우스는 25일 동안 치료되고 나서 치료가 중단되고 생존에 대해 모니터링되었다. 약물은 경구 위관영양법을 통해 투여되었다. 샘플 크기는 파일럿 실험 및 이전의 문헌으로부터의 결과로부터의 추정에 기초하여 선택되었다12. 조사자는 그룹 할당 또는 평가의 결과에 대해 블라인딩되지 않았다. 모든 연구는 UCLA OARO 프로토콜 지침을 준수했다.
두개내 지연된 PET/CT 마우스 이미지형성
마우스는 표지된 용량 및 에를로티닙의 시간으로 치료되었고 그 다음 사전-가온되고, 2% 이소플루란으로 마취되고, 70 μCi의 18F-FDG가 정맥내로 주입되었다. 1시간의 의식불명에 있는 흡수 후, 마우스는 마취에서 제거되었지만 또 다른 5시간의 흡수를 위하여 가온 유지되었다. 18F-FDG의 초기 투여 6시간 후, 마우스는 G8 PET/CT 스캐너 (Sofie Biosciences)를 사용하여 이미지화되었다. 상기에 따라, 정량화는 아미드(AMIDE) 소프트웨어를 사용하여 관심 있는 3D 영역 (ROI)을 그려 수행되었다.
면역조직화학
면역조직화학은 FFPE (포르말린-고정된, 파라핀-포매된) 블록으로부터 절단된 4 μm 섹션 상에서 수행되었다. 섹션은 그 다음 자일렌으로 파라핀이 제거되고 단계적인 에탄올을 통해 재수화되었다. 항원 회수는 95°C에서 40분 동안 Decloaking 압력 쿠커에서 pH 9.5 Nu투명 Decloaker (Biocare Medical)로 달성되었다. 조직 절편은 그 다음 3% 과산화수소 (LOT 161509; Fisher Chemical) 및 백그라운드 스나이퍼 (Biocare Medical, 미국 캘리포니아주 콩코드 소재)로 처리되어 비특이적 배경 염색을 감소시켰다. p53에 대한 일차 항체 (Cell Signaling, 2527)는 80분 동안 1:150 희석으로 적용되었고 MACH 3 토끼 HRP- 폴리머 검출 키트 (Biocare Medical)로 검출이 이어졌다. 가시화는 색원체로서 VECTOR NovaRED (SK-4800; Vector Laboratories, Inc.)를 사용하여 달성되었다. 마지막으로, 섹션은 Tacha의 자동화 헤마톡실린 (Biocare Medical)으로 대조염색되었다.
정량적 RT-PCR
Purelink RNA 키트 (Invitrogen)를 사용하여 모든 세포로부터 RNA가 추출되었다. cDNA는 제조자의 지침에 따라 iScript cDNA 합성 키트 (Bio-Rad)로 합성되었다. 정량적 PCR (qPCR)은 SYBRGreen Master Mix (Kapa Biosciences)를 사용하여 Roche LightCycler 480 상에서 수행되었다. 상대 발현 값은 대조군 유전자 (GAPDH)에 대해 정규화되었다. 프라이머 서열은 다음과 같이 열거된다 (5'에서 3'): P21 (정방향 GACTTTGTCACCGAGACACC, 역방향 GACAGGTCCACATGGTCTTC), PUMA (정방향 ACGACCTCAACGCACAGTACG, 역방향 GTAAGGGCAGGAGTCCCATGATG), GAPDH (정방향 TGCCATGTAGACCCCTTGAAG, 역방향 ATGGTACATGACAAGGTGCGG), MDM2 (정방향 CTGTGTTCAGTGGCGATTGG, 역방향 AGGGTCTCTTGTTCCGAAGC), TIGAR (정방향 GGAAGAGTGCCCTGTGTTTAC, 역방향 GACTCAAGACTTCGGGAAAGG), PIG3 (정방향 GCAGCTGCTGGATTCAATTA, 역방향 TCCCAGTAGGATCCGCCTAT).
P53 리포터 활성
세포는 먼저 p53 반응 요소의 제어하에서 루시퍼라제에 대해 코딩하는 p53 리포터 플라스미드로부터 합성된 렌티바이러스로 감염되었다: TACAGAACATGTCTAAGCATGCTGTGCCTTGCCTGGACTTGCCTGGCCTTGCCTTGGG. 감염된 세포는 그 다음 5,000 세포/50 μL에서 96-웰 플레이트 안으로 플레이팅되고 표지된 약물로 24시간 동안 처리되고 그 다음 1 mM D-루시페린으로 2시간 동안 인큐베이션되었다. 생물발광은 IVIS Lumina II (Perkin Elmer)를 사용하여 측정되었다.
유전자 조작
일반적으로, 유전자 조작을 위하여 사용된 렌티바이러스는 리포펙타민 2000 (Invitrogen)을 사용하여 293-FT 세포 (Thermo)를 형질감염시킴에 의해 생산되었다. 바이러스는 형질감염 48시간 후 수집되었다. 렌티바이러스 sgp53 벡터 및 sgControl 벡터는 하기 가이드 RNA를 각각 함유했다: CCGGTTCATGCCGCCCATGC 및 GTAATCCTAGCACTTTTAGG. LentiCRISPR-v2는 골격으로 사용되었다. Glut1 및 Glut3 cDNA는 상업적으로 이용가능한 벡터로부터 클로닝되고 CMV 프로모터 (Glut1은 Wolf Frommer (Addgene #1808544)로부터의 증여이고, Glut3은 OriGene #SC115791로부터 수득되었고, 렌티바이러스 골격은 Targeting Systems #GL-GFP로부터 수득됨)를 함유하는 pLenti-GLuc-IRES-EGFP 렌티바이러스 골격 안으로 편입되었다. pMIG Bcl-xL은 Stanley Korsmeyer (Addgene #879045)로부터의 증여이고 상기 언급된 렌티바이러스 골격 (Targeting Systems) 안으로 클로닝되었다. 세포질 (K305A 및 R306A) 및 야생형 p53 작제물은 R. Agami 및 G. Lahav로부터의 친절한 증여였다. 관심 있는 유전자가 PGK 프로모터를 함유하는 렌티바이러스 벡터 안으로 클로닝되었다. p53 DNA 결합 도메인 돌연변이체 (R175H) 및 (R273H) 뿐만 아니라 핵 돌연변이체 (L348A 및 L350A)에 대한 작제물은 야생형 p53 작제물 상에 부위 지향적 돌연변이유발 (New England Biolabs #E0554S)을 사용하여 생성되었다.
EGFR 녹다운 실험을 위해, EGFR (Thermo Fischer Scientific, s563)에 대한 siRNA가 DharmaFECT 4 (Dharmacon)를 사용하여 세포 안으로 형질감염되었다. 48시간 후, 세포가 수확되고 표지된 실험에 사용되었다.
면역형광
면역형광을 위해, 신경아교종구을 먼저 단일 세포로 해리하고 제조자 지침에 따라 Cell-Tak (Corning)을 사용하여 96-웰 플레이트에 부착했다. 부착된 세포를 그 다음 10분 동안 빙냉 메탄올로 고정하고 그 다음 PBS로 3회 세정했다. 세포를 그 다음 PBS 내 10% FBS 및 3% BSA를 함유하는 차단 용액으로 1시간 동안 인큐베이션하고 후속으로 p53 (Santa Cruz, SC-126, 1:50의 희석) 항체로 밤새 4°C에서 인큐베이션했다. 다음 날, 세포를 이차 항체 (Alexa Fluor 647, 희석 1:2000)로 1시간 동안 인큐베이션하고 10분 동안 DAPI 염색하고, 그 다음 캐스케이드 II 형광 카메라가 장착된 Nikon TI Eclipse 현미경 (Roper Scientific)을 사용하여 이미지화했다. 세포를 461 nM 및 647 nM에서 방출로 이미지화하고 그 다음 NIS-Elements AR 분석 소프트웨어를 사용하여 가공했다.
산소 소비 속도 (OCR) 및 세포외 산성화 속도 (ECAR) 측정
OCR 및 ECAR을 포함하는 대사 측정을 위해, 표지된 약물로 처리된 신경아교종구를 먼저 단일 세포 현탁액으로 해리하고 제조자 지침에 따라 Cell-Tak (Corning)을 사용하여 XF24 플레이트 (Seahorse Bioscience)에 부착했다. 검정 이전에, 세포를 미완충된 DMEM으로 보충하고, OCR 및 ECAR 측정을 시작하기 전에 37°C에서 30분 동안 인큐베이션했다. 대조군과 에를로티닙 처리된 세포 사이의 기저 ECAR 측정이 도시되어 있다.
질량-분광법 샘플 제조
수컷 CD-1 마우스 (6-8 주령)를 경구 위관영양법을 통해 50 mg/kg 이다사뉴틀린으로 반복하여 처리했다. 투여 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 및 24시간 후, 마우스를 희생시키고, 혈액을 안와후 출혈에 의해 수확하고, 뇌 조직을 수집했다. 마우스로부터의 전혈을 원심분리하여 혈장을 분리했다. 이다사뉴틀린을 혈장로부터 액체-액체 추출에 의해 단리했다: 50 μL 혈장을 2 μL 내부 표준 및 100 μL 아세토니트릴에 첨가했다. 마우스 뇌 조직을 2 mL 차가운 PBS로 세정하고 그리고 신선한 2 mL 차가운 PBS로 조직 균질기를 사용하여 균질화했다. 이다사뉴틀린을 그 다음 단리하고 액체-액체 추출에 의해 유사한 방식으로 재구성했다: 100 μL 뇌 균질물을 2 μL 내부 표준 및 200 μL 아세토니트릴에 첨가했다. 와류 혼합 후, 샘플을 원심분리했다. 상청액을 제거하고 회전식 증발기에 의해 증발하고 100 μL 50:50 물: 아세토니트릴에서 재구성했다.
질량-분광분석법에 의한 이다사뉴틀린 검출
크로마토그래피 분리를 1290 Infinity LC 시스템 (Agilent)을 사용하여 100 x 2.1 mm Phenomenex Kinetex C18 칼럼 (Kinetex) 상에서 수행했다. 이동상은 용매 A: Milli-Q 물 내 0.1% 포름산, 및 B: 아세토니트릴 내 0.1% 포름산으로 구성되었다. 피분석물을 5% B (0-4분), 5-99% B (4-32분), 99% B (32-36분)의 구배로 용출시키고, 그리고 그 다음 주입 간에 재-평형화를 위해 12분 동안 5% B로 복귀시켰다. 크로마토그래피 시스템 안으로 20 μL의 주입은 0.10 mL/분의 용매 유량으로 사용되었다. 질량 분광분석법을 6460 삼중 사중극자 LC/MS 시스템 (Agilent) 상에서 수행했다. 이온화는 양성 방식으로 전기분무를 사용함에 의해 달성되었고 데이터 수집은 다중 반응 모니터링 (MRM) 방식으로 이루어졌다. 이다사뉴틀린 검출을 위해 사용된 MRM 전이는 114V의 단편화기 전압, 및 20 eV의 충돌 에너지로 m/z 616.2 → 421.2 였다. 피분석물 신호를 내부 표준에 대해 정규화시키고 농도를 보정 곡선 (0.5, 5, 50, 250, 500, 2000 nM)에 대한 비교에 의해 결정했다. 이다사뉴틀린 뇌 농도를 뇌 맥관구조에서 잔류 혈액에 대해 1.4%의 마우스 뇌 중량에 의해 조정했다.
분비된 가우스의 루시퍼라제 측정
세포를 분비된 가우스의 루시퍼라제 (sGluc) 리포터 유전자 (Targeting Systems # GL-GFP)를 함유하는 렌티바이러스 벡터로 감염시키고 마우스의 우측 선조체 안으로 두개내로 이식시켰다 (4 x 105 세포/마우스). 분비된 가우스의 루시퍼라제 (sGluc)의 수준을 측정하기 위해, 6 μL의 혈액을 마우스의 꼬리 정맥으로부터 수집하고 응고를 방지하기 위해 50 mM EDTA와 즉시 혼합했다. Gluc 활성은 96 웰 플레이트에서 100 μL의 100 μM 코엘렌타라진 (Nano옅은)의 주입에 이어서 화학발광을 측정함에 의해 수득되었다.
상승작용효과 점수 계산
1.0 x 105 GBM 세포를 3중으로 분주하고 에를로티닙, 뉴틀린, 또는 조합으로 각각의 약물이 6가지 농도 (0-10 μM)로 세포에 첨가된 매트릭스를 사용하여 다중 농도에서 처리했다. 아넥신 V 염색을 72시간의 치료 후 측정했다. Chalice 소프트웨어를 사용하여, 조합의 반응을 그것의 단일 물질에 비교했다. 병용 효과를 상승작용효과 점수를 사용하여 계산했다.
DNA 서열분석
Illumina Miseq를 사용하여 하기 유전자 BCL11A, BCL11B, BRAF, CDKN2A, CHEK2, EGFR, ERBB2, IDH1, IDH2, MSH6, NF1, PIK3CA, PIK3R1, PTEN, RB1, TP53에 대하여 샘플 HK206, HK217, HK250, HK296에 대해 표적화된 서열분석을 수행했다. 유전자 당 230의 평균 적용범위로 샘플 당 1 내지 2백만 판독이 있었다. 복제수 변이체를 전체의 게놈 SNP 어레이를 사용하여 이들 샘플에 대해 결정했다. GBM39의 유전적 프로파일은 문헌에 이전에 보고되었다.
전체의 엑솜 서열분석은 샘플 HK157, HK229, HK248, HK250, HK254, HK296, HK301, HK336, HK350, HK390, HK393에 대해 수행했고 SeqWright에서 수행했다. 샘플은 별도 캡쳐 반응으로 2개 풀로 그룹화했다. Nextera Rapid 캡쳐 및 라이브러리 제조물을 사용하여 100x 온-타겟 적용범위, 2 전체 신속한 실행으로, 각각 1개의 정상 이배체 대조군으로 HiSeq 2500, 2x100 bp 상에서 서열분석을 수행했다. 이들 샘플에 대한 복제수 분석은 EXCAVATOR 소프트웨어를 사용하여 수행했다.
TCGA 샘플의 주석
TCGA로부터 273개 GBM 샘플을 EGFR, p53 및 p53-조절된 경로에서 유전적 변이에 대해 분석했다. 돌연변이의 공동-발생을 검사하고 상당한 상호작용만을 표시했다. 데이터는 이전에 기재된 바와 같이 cBioPortal을 사용하여 분석했다.
형광 원위치 혼성화 (FISH)
형광 원위치 혼성화 (FISH)는 상업적으로 이용가능한 형광으로 표지된 이중-색상 EGFR (적색)/CEP 7(녹색) 프로브 (Abbott-Molecular)를 사용하여 수행했다. FISH 혼성화 및 분석은 제조자의 제안된 프로토콜에 따라 세포주 상에서 수행했다. 세포를 DAPI로 대조염색했고 형광 프로브 신호는 이중- 및 삼중-컬러 필터가 장착된 Zeiss (Axiophot) 형광 현미경 하에서 이미지화시켰다.
통계적인 분석.
비교는 2-테일드 언페어드 스튜던트 t-시험을 사용하여 이루어졌고 p 값 <0.05는 통계적으로 상당한 것으로 간주되었다. 다중 독립적인 실험으로부터의 모든 데이터는 정규 변동인 것으로 추정되었다. 데이터는 평균±s.e.m. 값을 나타낸다. 모든 통계적인 분석은 Prism 6.0 (GraphPad)을 사용하여 계산되었다. 모든 시험관내및 생체내 실험에 대해, 샘플 크기를 미리 결정하기 위해 통계적인 방법은 사용되지 않았고 샘플은 배제되지 않았다. 생체내 종양 측정을 위해, 마지막 데이터 세트가 그룹 간의 비교에 사용되었다. 상기에 기재된 바와 같이, 모든 마우스는 연구 전에 무작위 추출되었다.
실시예 15: JGK 시리즈의 특정 화합물에 대한 예시적 설계 이론
본 개시내용의 특정 화합물을 반응식 1에 따라서 설계했다.
반응식 1.
실시예 16: JGK 시리즈의 추가 예시적 화합물의 제조
본 개시내용의 예시적 화합물을 다음 방법에 따라서 제조했다.
반응식 1. 모노보호된 퀴나졸린 중간체 3의 합성.
반응식 2. JGK063 - JGK070의 합성.
반응식 3. JGK068S ((S)-JGK068)의 합성. 거울상이성질체적으로 순수한 (S)-(-)-글리시돌을 사용하여 JGK068 ((±)-JGK068)의 라세미 샘플과 동일한 방식으로, 합성을 수행했다. (R)-(+)-글리시돌 (미도시)를 사용하여 다른 거울상이성질체 JGK068R ((R)-JGK068)을 제조했다.
반응식 4. 합성 중간체 5의 거울상이성질체 순도를 키랄 SFC (Chiralpak AD-3 칼럼, 40% MeOH)에 의해 및 5의 모셔 에스테르 유도체의 19F NMR 스펙트럼 비교(도 39)에 의해 결정했다.
반응식 5. JGK071의 합성.
반응식 6. JGK072의 합성.
반응식 7. JGK076 - JGK080의 합성.
반응식 8. JGK086-JGK090의 합성.
일반적인 화학 정보
모든 화학물질, 시약, 및 용매를 이용가능할 때 상업적 공급원으로 구매하고 받은 대로 사용했다. 필요할 때, 시약 및 용매를 정제하고 표준 방법으로 건조시켰다. 공기- 및 수분-민감한 반응을 아르곤의 불활성 분위기 하에서 오븐-건조된 유리그릇에서 수행했다. 마이크로파-조사된 반응을 단일 방식 반응기 CEM Discover 마이크로파 합성기에서 수행했다. 실온 (RT) 반응을 주위 온도에서 (대략 23°C) 수행했다. 모든 반응을, UV 광 (λ = 254, 365 nm)에 의해 또는 알칼리성 KMnO4 용액을 사용하여 시각화된 스팟(spot)을 갖는 사전코팅된 Merck 60 F254 실리카겔 플레이트 상에서 박층 크로마토그래피 (TLC)으로 모니터링했다. 플래시 칼럼 크로마토그래피 (FC)를 SiO2 60 (입자 크기 0.040-0.063 mm, 230-400 메쉬) 상에서 수행했다. 분취용 박층 크로마토그래피 (PTLC)을 Merck 60 F254 실리카겔 플레이트 (20 x 20 cm, 210-270 mm) 또는 Analtech 실리카겔 GF TLC 플레이트 (20 x 20 cm, 1000 mm)로 수행했다. 감압 하에서 (진공에서) 23 내지 50 °C에서 회전식 증발로 농축을 수행했다. 정제된 화합물을 고진공 하에서 또는 데시케이터에서 추가로 건조시켰다. 수율은 정제된 화합물에 해당하고, 추가로 최적화되지 않았다. 양성자 핵자기 공명 (1H NMR) 스펙트럼을 (300, 400, 또는 500 MHz에서 작동하는) Bruker 분광기 상에서 기록했다. 탄소 NMR (13C NMR) 스펙트럼을 Bruker 분광기 (400 또는 500 MHz에서) 상에서 기록했다. NMR 화학적 이동 (δ ppm)은 잔류 용매 신호와 관련되었다. 1H NMR 데이터는 아래와 같이 보고된다: 화학적 이동(ppm); 다중도 (s = 단일항, d = 이중항, t = 삼중항, q = 사중항, quint = 오중항, m = 다중항/복합 패턴, td = 이중항의 삼중항, ddd = 이중항의 이중항의 이중항, br = 넓은 신호); 결합 상수 (J) (Hz), 적분. 13C NMR 스펙트럼에 대한 데이터는 화학적 이동, 및 적용가능하면 결합 상수의 관점에서 보고된다. 고해상도 질량 (HRMS) 스펙트럼을, IonSense ID-CUBE DART 공급원 질량 분광분석기를 가지고 있는 Thermo Fisher Scientific Exactive Plus, 또는 자동시료주입기를 가지고 있는 ACQUITY UPLC를 가지고 있는 Waters LCT Premier 질량 분광분석기 상에서 기록했다.
일반 절차 (GP). GP-1: 제2 아민을 사용한 퀴나졸리닐 메실레이트의 친핵 치환. DMF (0.05 m) 내 퀴나졸리닐 메실레이트 (1 당량)의 혼합물을 제2 아민 (5 당량) 및 트리에틸아민 (2 당량)로 처리하고, 혼합물을 85 °C에서 24 시간 동안 교반했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고, 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc (20 mL)에 용해시키고, 10 mm NaOH (4 x 5 mL), 염수 (5 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. FC 또는 PTLC로 정제하여 대표적으로 회백색, 잘 부서지는 발포물로서 소정의 생성물을 얻었다.
GP-2: 아닐린을 사용한 4-클로로퀴나졸린의 친핵 방향족 치환. 아세토니트릴 (0.1 m) 내 4-클로로퀴나졸린 (1 당량)의 혼합물을 아닐린 (2 당량)으로, 및 디옥산 (1 당량) 내 HCl의 4 M 용액으로 처리했다. 혼합물을 80 °C에서 마이크로파 조사 하에서 30 min 동안 가열했다. 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 또는 침전된 4-아닐리노퀴나졸린 염산염을 여과로 단리시켰다 (Et2O로 세정). 잔류물을 포화 수성 NaHCO3에 현탁시키고, CH2Cl2 (3x)로 추출했다. 유기 추출물을 합하고 물, 염수로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축했다. FC (CH2Cl2/EtOAc 또는 헥산/EtOAc의 구배에 의한 용출)로 정제하여 원하는 생성물을 전형적으로 백색 내지 황백색, 또는 옅은-황색 고체로서 얻었다.
4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)퀴나졸린-6,7-디일 비스(2,2-디메틸프로파노에이트) (
1
).
iPrOH (450 mL) 내 4-클로로퀴나졸린-6,7-디일 비스(2,2-디메틸프로파노에이트)1 (41.08 g, 113 mmol)의 혼합물을 3-브로모-2-플루오로아닐린 (17.05 mL, 152 mmol) 및 80 °C에서 3.5 시간 동안 교반했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고 증발시켰다. 잔류물을 몇 번 헥산 (50 mL)에 재현탁시키고 농축시키고, 이후 HV 하에서 건조시키고. 잔류물을 EtOH 로부터 재결정화시켜 황색 고체를 얻었고, 이를 sat. aq. NaHCO3 (1 L)에 현탁시키고, DCM (3 x 550 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 물 (400 mL), 염수 (400 mL)로 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 증발시켜 표제 화합물 1 (35.057 g, 60%)를 황색 잘 부서지는 발포물로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.76 (s, 1H), 8.46 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.56 (br, 1H), 7.32 (ddd, J = 8.0, 6.4, 1.5 Hz, 1H), 7.11 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 1.40 (s, 9H), 1.39 ppm (s, 9H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 176.13, 175.55, 156.71, 154.96, 150.69 (d, J CF = 243.7 Hz), 148.75, 147.83, 142.45, 128.27, 127.86 (d, J CF = 10.8 Hz), 125.29 (d, J CF = 4.7 Hz), 122.70, 122.51, 114.43, 113.21, 108.84 (d, J CF = 19.4 Hz), 39.54, 39.51, 27.40, 27.32 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C24H26BrFN3O4 +, 518.1085; 실측치, 518.1072.
4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)퀴나졸린-6,7-디올 (
2
).
1 (34.988 g, 67.5 mmol)의 교반 슬러리를 0 °C에서 7 M MeOH 내 NH3의 용액(241 mL, 1.69 mol)으로 처리했다. 혼합물을 0 °C에서 15 분 동안, 및 이후 23 °C에서 4.5 시간 동안 교반했다. 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 물 (400 mL)에 현탁시키고 밤새 교반, 및 여과했다. 잔류물을 물 (500 mL), 아세토니트릴 (100 mL), DCM (4 x 150 mL), Et2O (2 x 150 mL)로 세정하고, 데시케이터에서 건조시키고 표제 화합물 2 (23.68 g, quant.)를 옅은-황색 분말로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ = 8.18 (s, 1H), 7.59 - 7.47 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.16 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.87 ppm (s, 1H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ = 156.43, 156.12, 153.06 (d, J CF = 246.7 Hz), 151.34, 148.39, 146.80, 129.23, 129.01, 127.12, 125.23 (d, J CF = 4.3 Hz), 108.47, 108.32, 107.09, 103.04 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C14H10BrFN3O2 +, 349.9935; 실측치, 349.9923.
4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7-하이드록시퀴나졸린-6-일 2,2-디메틸프로파노에이트 (
3
).
DMF (52.6 mL) 내 2 (3500 mg, 10.0 mmol)의 교반 현탁액을 Et3N (5.57 mL, 40.0 mmol)로 처리하고, -40 °C로 냉각시키고, Piv2O (3.14 mL, 15.5 mmol)로 적가 처리했다. 혼합물을 -40 °C에서 1 시간 동안 교반하고, 이후 냉각 배쓰를 제거하고, 교반을 2.5 시간 동안 계속했다. 반응 혼합물을 DCM (500 mL)로 희석하고, 10% 시트르산 (2 x 50 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. FC (DCM/EtOAc 1:1 → 0:1)로 고체를 얻었고, 이를 EtOAc (750 mL)에 재용해시키고, 절반-sat. aq. NH4Cl (4 x 75 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켜 표제 화합물 3 (2.844 g, 66%)를 베이지색-황색 고체로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ = 11.00 (br, 1H), 9.70 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.59 (ddd, J = 8.0, 6.2, 1.6 Hz, 1H), 7.53 (ddd, J = 8.3, 7.1, 1.6 Hz, 1H), 7.21 (td, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 1.36 ppm (s, 9H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ = 175.93, 157.68, 154.61, 154.53, 153.34 (d, J CF = 247.3 Hz), 149.80, 139.65, 130.14, 127.92 (d, J CF = 12.9 Hz), 127.62, 125.47 (d, J CF = 4.4 Hz), 116.36, 111.00, 108.55 (d, J = 20.0 Hz), 107.77, 38.64, 26.93 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C19H18BrFN3O3 +, 434.0510; 실측치, 434.0489.
(±)-4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7-[(옥시란-2-일)메톡시]퀴나졸린-6-일 2,2-디메틸프로파노에이트 ((±)-
4
).
THF (21 mL) 내 3 (1350 mg, 3.11 mmol) 및 PPh3 (2038 mg, 7.77 mmol)의 혼합물을 글리시돌 (495 μL, 7.46 mmol)로 처리하고, 0 °C로 냉각시키고, DIAD (1.47 mL, 7.46 mmol)로 10 분 동안 처리했다. 혼합물을 23 °C에서 2.5 시간 동안 교반하고, 농축시켰다. FC (DCM/EtOAc 9:1 → 4:6)로 표제 화합물 (±)-4 (848 mg, 56%)를 회백색 고체로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.73 (s, 1H), 8.54 (ddd, J = 8.6, 7.3, 1.6 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.45 (br, 1H), 7.30 (ddd, J = 8.2, 6.4, 1.5 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.11 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 4.34 (dd, J = 10.8, 3.0 Hz, 1H), 3.99 (dd, J = 10.8, 6.2 Hz, 1H), 3.35 (ddt, J = 6.2, 4.1, 2.8 Hz, 1H), 2.92 (dd, J = 4.8, 4.1 Hz, 1H), 2.74 (dd, J = 4.8, 2.6 Hz, 1H), 1.45 ppm (s, 9H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 176.87, 156.46, 155.10, 154.93, 150.41 (d, J CF = 243.3 Hz), 150.27, 140.99, 128.25 (d, J CF = 10.5 Hz), 127.75, 125.28 (d, J CF = 4.7 Hz), 122.22, 114.02, 109.72, 109.49, 108.74 (d, J CF = 19.1 Hz), 70.05, 49.55, 44.56, 39.45, 27.38 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C22H22BrFN3O4 +, 490.0772; 실측치, 490.0764.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-에테닐-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민
((±)-
JGK062
).
THF (23 mL) 내 PPh3 (832 mg, 3.17 mmol) 및 DIAD (624 μL, 3.17 mmol)의 용액을 0 °C에서 15 분 동안 교반하고, 이후 THF (27 mL) 내 (±)-8 (1149 mg, 2.73 mmol)의 용액에 10 분 동안 0 °C에서 적가 첨가했다. 혼합물을 0 °에서 2 시간 동안 교반하고, 증발시켰다. FC (헥산/EtOAc 9:1 → 4:6), 이어서 다시 FC (DCM/EtOAc 1:0 → 6:4)로 표제 화합물 (±)-JGK062 (1115 mg, quant.)를 회백색 잘 부서지는 발포물로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ= 8.68 (s, 1H), 8.65 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.5 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.37 (br, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.27 (ddd, J = 8.0, 6.4, 1.5 Hz, 1H), 7.10 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 5.95 (ddd, J = 17.3, 10.7, 5.8 Hz, 1H), 5.60 (dt, J = 17.3, 1.2 Hz, 1H), 5.48 (dt, J = 10.7, 1.1 Hz, 1H), 4.82 - 4.74 (m, 1H), 4.42 (dd, J = 11.5, 2.5 Hz, 1H), 4.09 ppm (dd, J = 11.6, 8.1 Hz, 1H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ= 155.90, 153.38, 150.14 (d, J = 242.4 Hz), 149.12, 146.70, 144.12, 131.48, 128.64 (d, J = 10.3 Hz), 127.24, 125.30 (d, J = 4.7 Hz), 121.76, 120.43, 114.29, 110.69, 108.58 (d, J = 19.3 Hz), 106.06, 74.03, 67.84 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C18H14BrFN3O2 +, 402.0248; 실측치, 402.0233.
(±)-[4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]메탄올 ((±)-
5
).
MeOH (31 mL) 내 (±)-4 (842 mg, 1.72 mmol)의 혼합물을 K2CO3 (482 mg, 3.49 mmol)로 처리하고, 23 °C에서 10.5 시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 절반-sat. aq. NH4Cl (130 mL)에 현탁시키고, EtOAc로 추출했다 (3 x 20 mL). 조합된 유기물을 물 (20 mL), 염수 (20 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (±)-5 (720 mg, quant.)를 황색 고체로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ = 9.59 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.59 (ddd, J = 8.0, 6.2, 1.6 Hz, 1H), 7.55 (ddd, J = 8.4, 7.0, 1.6 Hz, 1H), 7.24 - 7.18 (m, 1H), 7.21 (s, 1H), 5.16 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.49 (dd, J = 11.5, 2.4 Hz, 1H), 4.34 (dtd, J = 7.6, 5.2, 2.3 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 11.5, 7.4 Hz, 1H), 3.76 - 3.64 ppm (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ = 157.20, 153.35 (d, J CF = 247.5 Hz), 153.10, 148.88, 145.95, 143.39, 130.11, 128.05 (d, J CF = 13.0 Hz), 127.73, 125.44 (d, J CF = 4.4 Hz), 112.33, 109.79, 108.56 (d, J CF = 20.0 Hz), 108.37, 73.78, 65.50, 59.78 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C17H14BrFN3O3 +, 406.0197; 실측치, 406.0185.
(±)-[4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]메틸 메탄설포네이트 ((±)-
6
).
THF (14 mL) 내 (±)-5 (688 mg, 1.69 mmol)의 용액을 Et3N (357 μL, 2.56 mmol)로 처리하고, 0 °C로 냉각시키고, MsCl (174 μL, 2.24 mmol)로 적가 처리했다. 혼합물을 23 °C에서 16 시간 동안 교반하고, 0 °C로 냉각시키고, sat. aq. NaHCO3 (120 mL)로 처리하고, DCM로 추출했다 (3 x 120 mL). 조합된 유기물을 물 (100 mL), 염수 (100 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 증발시켰다. FC (DCM/EtOAc 8:2 → 3:7)로 표제 화합물 (±)-6 (496 mg, 61%)를 회백색 고체로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.69 (s, 1H), 8.60 (ddd, J = 8.5, 7.2, 1.4 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.39 (br, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.29 (ddd, J = 8.1, 6.5, 1.5 Hz, 1H), 7.11 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.63 (dtd, J = 7.2, 4.9, 2.5 Hz, 1H), 4.52 (dd, J = 4.9, 0.9 Hz, 2H), 4.49 (dd, J = 11.8, 2.5 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.8, 7.1 Hz, 1H), 3.13 ppm (s, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 156.02, 153.66, 150.28 (d, J CF = 242.9 Hz), 148.65, 146.80, 143.09, 128.43 (d, J CF = 10.4 Hz), 127.54, 125.32 (d, J CF = 4.7 Hz), 122.01, 114.77, 110.90, 108.66 (d, J CF = 19.4 Hz), 106.44, 71.10, 66.46, 64.77, 38.02 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C18H15BrFN3O5S+, 483.9973; 실측치, 483.9950.
(±)-4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7-{[2-(아세톡시)부트-3-엔-1-일]옥시}퀴나졸린-6-일 2,2-디메틸프로파노에이트 ((±)-
7
).
THF (41 mL) 내 3 (2639 mg, 6.08 mmol) 및 PPh3 (3986 mg, 15.2 mmol)의 혼합물을 라세미 1-하이드록시부트-3-엔-2-일 아세테이트2 (1.7 mL, 13.7 mmol)로 처리하고, 0 °C로 냉각시키고, DIAD (2.7 mL, 13.7 mmol)로 적가 처리했다. 혼합물을 23 °C에서 3 시간 동안 교반하고, 농축시켰다. FC (DCM/EtOAc 1:0 → 6:4)로 조 (±)-7 (5.508 g, 추정수율 60%)를 회백색 고체로서 얻었고, 이는 남은 Ph3PO로 오염되었다. 상기 물질을 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 8.74 (s, 1H), 8.53 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.45 (br, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.90 (ddd, J = 17.0, 10.6, 6.2 Hz, 1H), 5.65 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 5.49 - 5.29 (m, 2H), 4.31 - 4.08 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.41 ppm (s, 9H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 176.51, 170.08, 156.49, 155.24, 154.88, 150.46 (d, J CF = 243.2 Hz), 150.17, 140.90, 132.16, 128.18 (d, J CF = 11.0 Hz), 127.86, 125.31 (d, J CF = 4.8 Hz), 122.27, 119.64, 114.00, 109.56, 109.39, 108.76 (d, J CF = 19.4 Hz), 72.18, 69.81, 39.34, 27.33, 21.19 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C25H26BrFN3O5 +, 546.1034; 실측치, 546.1018.
(±)-4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7-[(2-하이드록시부트-3-엔-1-일)옥시]퀴나졸린-6-올 ((±)-
8
).
MeOH (61 mL) 내 조 (±)-7 (5508 mg, 마지막 단계로부터 남은 Ph3PO로 오염됨)의 혼합물을 K2CO3 (4198 mg, 30.4 mmol)로 처리하고, 23 °C에서 1 시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 절반-sat. aq. NH4Cl (1 L)에 현탁시키고, EtOAc로 추출했다 (3 x 600 mL). 조합된 유기물을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. FC (DCM/EtOAc 1:1 → 0:1)로 표제 화합물 (±)-8 (1154 mg, 2 단계에 걸쳐 45%)를 회백색 고체로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ = 9.46 (s, 1H), 9.40 (br, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.59 - 7.52 (m, 2H), 7.203 (s), 7.197 (td, J = 8.1, 1.1 Hz, 1H), 6.01 (ddd, J = 17.4, 10.7, 4.9 Hz, 1H), 5.42 (dt, J = 17.3, 1.9 Hz, 1H), 5.36 (br, 1H), 5.20 (dt, J = 10.6, 1.8 Hz, 1H), 4.49 (br, 1H), 4.20 (dd, J = 9.8, 3.8 Hz, 1H), 3.95 ppm (dd, J = 9.8, 7.5 Hz, 1H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ = 156.77, 153.30 (d, J CF = 244.9 Hz), 152.77, 152.31, 146.66, 146.11, 137.61, 129.75, 128.46 (d, J CF = 13.0 Hz), 127.49, 125.38 (d, J CF = 4.3 Hz), 115.58, 109.42, 108.50 (d, J CF = 19.8 Hz), 107.68, 105.14, 72.56, 69.26 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C18H16BrFN3O3 +, 420.0354; 실측치, 420.0340.
(±)-2-[4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]에탄-1-올 ((±)-
9
).
THF (4.8 mL) 내 (±)-JGK062 (480 mg, 1.19 mmol)의 혼합물을 0.5 M THF (4.8 mL, 2.39 mmol) 내 9-BBN의 용액으로 처리하고, 혼합물을 68 °C에서 16 시간 동안 교반했다. 혼합물을 0 °C로 냉각시키고, THF (2.4 mL)로 희석하고, 3 n NaOH (3 mL, 8.95 mmol), 및 30% H2O2 (474 μL, 8.95 mmol)로 처리하고, 23 °C에서 6 시간 동안 교반했다. 혼합물을 THF의 원래 부피의 약 절반으로 농축시키고, 물 (100 mL) 및 염수 (40 mL)로 희석하고, EtOAc로 추출했다 (3 x 100 mL). 조합된 유기물을 물 (70 mL), 염수 (70 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켜 표제 화합물 (±)-9 (912 mg)를 황색 발포물로서 얻었고, 이를 바로 다음 단계에서 추가 정제없이 사용했다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.66 (s, 1H), 8.62 (ddd, J = 8.8, 7.4, 1.6 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.33 (br, 1H), 7.2 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1.6 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.09 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 4.50 (dtd, J = 8.4, 6.4, 2.3 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 11.5, 2.3 Hz, 1H), 4.09 (dd, J = 11.5, 8.2 Hz, 1H), 4.01 - 3.91 (m, 2H), 1.95 ppm (td, J = 6.5, 5.3 Hz, 2H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 155.84, 153.28, 150.08 (d, J CF = 242.6 Hz), 149.42, 146.47, 144.20, 128.51 (d, J CF = 10.2 Hz), 127.31, 125.30 (d, J CF = 4.7 Hz), 121.69, 113.95, 110.50, 108.58 (d, J CF = 19.2 Hz), 105.83, 71.33, 68.49, 58.23, 33.61 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C18H16BrFN3O3 +, 420.0354; 실측치, 420.0370.
(±)-2-[4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]에틸 메탄설포네이트 ((±)-
10
).
THF (11.9 mL) 내 조 (±)-9 (912 mg)의 용액을 Et3N (931 mL, 6.68 mmol)로 처리하고, 0 °C로 냉각시키고, MsCl (462 μL, 5.97 mmol)로 적가 처리했다. 혼합물을 0 °C에서 15 분 동안, 및 이후 23 °C에서 21 시간 동안 교반했다. 혼합물을 0 °C로 냉각시키고, sat. aq. NaHCO3 (120 mL)로 적가 처리하고, DCM (3 x 120 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 물 (100 mL), 염수 (100 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. FC (DCM/EtOAc 9:1 → 4:6)로 표제 화합물 (±)-10 (112 mg, 2 단계에 걸쳐 19%)를 회백색, 잘 부서지는 발포물로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.68 (s, 1H), 8.60 (ddd, J = 8.6, 7.3, 1.5 Hz, 1H), 7.44 (br, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.29 (ddd, J = 8.1, 6.5, 1.6 Hz, 1H), 7.11 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.60 - 4.48 (m, 3H), 4.44 (dd, J = 11.6, 2.4 Hz, 1H), 4.12 (dd, J = 11.6, 7.6 Hz, 1H), 3.08 (s, 3H), 2.24 - 2.10 ppm (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 156.03, 153.39, 150.31 (d, J CF = 242.9 Hz), 149.11, 146.54, 143.60, 128.47 (d, J CF = 10.5 Hz), 127.52, 125.32 (d, J CF = 4.6 Hz), 122.02, 114.30, 110.68, 108.66 (d, J CF = 19.2 Hz), 106.32, 69.78, 67.82, 65.05, 37.75, 30.90 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C19H18BrFN3O5S+, 498.0129; 실측치, 498.0144.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[(모르폴린-4-일)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 ((±)-
JGK063
).
일반 절차 GP-1에 따라, 화합물 (±)-JGK063을 DMF (826 μL) 내 (±)-6 (20 mg, 0.04 mmol) 및 모르폴린 (18 μL, 0.21 mmol)으로부터 제조했다. PTLC (DCM/EtOAc 1:9)로 (±)-JGK063 (15 mg, 76%)를 회백색, 잘 부서지는 발포물로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.67 (s, 1H), 8.63 (ddd, J = 8.6, 7.3, 1.5 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.37 (br, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.27 (ddd, J = 8.0, 6.3, 1.5 Hz, 1H), 7.10 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.50 - 4.41 (m, 2H), 4.21 - 4.12 (m, 1H), 3.75 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 2.77 (dd, J = 13.4, 5.9 Hz, 1H), 2.69 - 2.54 ppm (m, 5H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 155.89, 153.36, 150.15 (d, J CF = 242.5 Hz), 149.35, 146.66, 144.02, 128.60 (d, J CF = 10.4 Hz), 127.27, 125.30 (d, J CF = 4.6 Hz), 121.80, 114.29, 110.63, 108.58 (d, J CF = 19.5 Hz), 106.06, 71.61, 67.18, 67.01, 58.94, 54.56 ppm. HRMS (ESI): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C21H19BrFN4O3 -, 473.0630; 실측치, 473.0630.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[2-(모르폴린-4-일)에틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 ((±)-
JGK064
).
일반 절차 GP-1에 따라, 화합물 (±)-JGK064을 DMF (1.4 mL) 내 (±)-10 (35 mg, 0.07 mmol) 및 모르폴린 (31 μL, 0.35 mmol)으로부터 제조했다. PTLC (EtOAc, 0.5% 아세토니트릴, 1.5% aq. NH4OH), 이어서 다시 PTLC (EtOAc)로 (±)-JGK064 (25 mg, 73%)를 회백색, 잘 부서지는 발포물로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.68 (s, 1H), 8.65 (ddd, J = 8.3, 7.4, 1.5 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.36 (br, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.30 - 7.25 (m, 1H), 7.11 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 11.3, 2.3 Hz, 1H), 4.43 - 4.37 (m, 1H), 4.10 (dd, J = 11.3, 7.7 Hz, 1H), 3.73 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 2.62 (ddt, J = 12.5, 8.4, 3.9 Hz, 2H), 2.57 - 2.42 (m, 4H), 2.00 - 1.82 ppm (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 155.86, 153.31, 150.13 (d, J CF = 242.3 Hz), 149.40, 146.67, 144.33, 128.66 (d, J CF = 10.4 Hz), 127.22, 125.33 (d, J CF = 4.6 Hz), 121.75, 114.21, 110.63, 108.58 (d, J CF = 19.2 Hz), 105.87, 72.20, 68.33, 67.06, 54.23, 53.86, 28.15 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C22H23BrFN4O3 +, 489.0932; 실측치, 489.0935.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[(피페리딘-1-일)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 ((±)-
JGK065
).
일반 절차 GP-1에 따라, 화합물 (±)-JGK065을 DMF (1.65 mL) 내 (±)-6 (40 mg, 0.08 mmol) 및 피페라딘 (41 μL, 0.41 mmol)으로부터 제조했다. PTLC (EtOAc)로 (±)-JGK065 (24 mg, 61%)를 회백색, 잘 부서지는 발포물로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.66 (s, 1H), 8.63 (ddd, J = 8.7, 7.3, 1.5 Hz, 1H), 7.369 (s, 1H), 7.368 (br, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.26 (ddd, J = 8.1, 6.5, 1.5 Hz, 1H), 7.09 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.46 (dd, J = 11.3, 2.3 Hz, 1H), 4.43 (ddd, J = 8.3, 5.8, 2.0 Hz, 1H), 4.12 (dd, J = 11.2, 7.5 Hz, 1H), 2.71 (dd, J = 13.3, 5.9 Hz, 1H), 2.58 (dd, J = 13.4, 6.2 Hz, 1H), 2.59 - 2.42 (m, 4H), 1.65 - 1.57 (m, 4H), 1.49 - 1.41 ppm (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 155.86, 153.26, 150.12 (d, J CF = 242.6 Hz), 149.49, 146.62, 144.23, 128.65 (d, J CF = 10.3 Hz), 127.18, 125.27 (d, J CF = 4.5 Hz), 121.76, 114.16, 110.57, 108.56 (d, J CF = 19.4 Hz), 106.00, 71.87, 67.46, 59.34, 55.59, 26.07, 24.20 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C22H23BrFN4O2 +, 473.0983; 실측치, 473.0991.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[(디메틸아미노)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 ((±)-
JGK066
).
일반 절차 GP-1에 따라, 화합물 (±)-JGK066을 DMF (1.85 mL) 내 (±)-6 (45 mg, 0.09 mmol) 및 2 M THF 내 Me2NH의 용액 (232 μL, 0.46 mmol)으로부터 제조했다. PTLC (EtOAc, 0.5% 아세토니트릴, 1.5% aq. NH4OH)로 (±)-JGK066 (39 mg, 97%)를 회백색, 잘 부서지는 발포물로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.680 (s, 1H), 8.675 (ddd, J = 8.2, 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.37 (br, 1H), 7.27 (ddd, J = 8.0, 6.4, 1.5 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.46 - 4.41 (m, 1H), 4.45 (dd, J = 11.8, 2.3 Hz, 1H), 4.12 (dd, J = 11.9, 8.1 Hz, 1H), 2.73 (dd, J = 13.2, 7.1 Hz, 1H), 2.55 (dd, J = 13.1, 5.0 Hz, 1H), 2.38 ppm (s, 6H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 155.89, 153.34, 150.07 (d, J CF = 242.3 Hz), 149.38, 146.67, 144.06, 128.70 (d, J CF = 10.4 Hz), 127.16, 125.29 (d, J CF = 4.7 Hz), 121.65, 114.27, 110.67, 108.56 (d, J CF = 19.4 Hz), 106.15, 71.70, 67.20, 59.78, 46.41 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C19H19BrFN4O2 +, 433.0670; 실측치, 433.0677.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[(피롤리딘-1-일)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 ((±)-
JGK067
).
일반 절차 GP-1에 따라, 화합물 (±)-JGK067을 DMF (1.45 mL) 내 (±)-6 (35 mg, 0.07 mmol) 및 피롤리딘 (30 μL, 0.36 mmol)으로부터 제조했다. PTLC (EtOAc, 1.5% iPrOH, 1.5% aq. NH4OH)로 (±)-JGK067 (31 mg, 93%)를 회백색, 잘 부서지는 발포물로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.68 (s, 1H), 8.67 (ddd, J = 8.7, 7.5, 1.6 Hz, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.36 (br, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.27 (ddd, J = 8.0, 6.4, 1.5 Hz, 2H), 7.10 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.49 - 4.42 (m, 1H), 4.48 (dd, J = 11.6, 2.0 Hz, 1H), 4.15 (dd, J = 11.7, 8.0 Hz, 1H), 2.88 (dd, J = 12.9, 6.5 Hz, 1H), 2.80 (dd, J = 12.6, 5.5 Hz, 1H), 2.72 - 2.60 (m, 4H), 1.90 - 1.79 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 155.87, 153.32, 150.09 (d, J CF = 242.6 Hz), 149.45, 146.68, 144.18, 128.71 (d, J CF = 10.3 Hz), 127.15, 125.30 (d, J CF = 4.7 Hz), 121.67, 114.26, 110.65, 108.56 (d, J CF = 19.4 Hz), 106.06, 72.73, 67.35, 56.57, 55.15, 23.75 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C21H21BrFN4O2 +, 459.0826; 실측치, 459.0845.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 ((±)-
JGK068
).
일반 절차 GP-1에 따라, 화합물 (±)-JGK068을 DMF (1.45 mL) 내 (±)-6 (35 mg, 0.07 mmol) 및 1-메틸피페라진 (40 μL, 0.36 mmol)으로부터 제조했다. PTLC (EtOAc/iPrOH 85:15, 1.5% aq. NH4OH)로 (±)-JGK068 (29 mg, 82%)를 회백색, 잘 부서지는 발포물로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.68 (s, 1H), 8.64 (ddd, J = 8.3, 7.3, 1.5 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.36 (br d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.27 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1.6 Hz, 1H), 7.10 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.48 - 4.41 (m, 2H), 4.15 (dd, J = 11.5, 8.6 Hz, 1H), 2.78 (dd, J = 13.4, 6.0 Hz, 1H), 2.661 (dd, J = 13.4, 5.8 Hz, 1H), 2.656 (br, 4H), 2.51 (br, 4H), 2.32 ppm (s, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 155.89, 153.35, 150.15 (d, J CF = 242.6 Hz), 149.40, 146.69, 144.11, 128.64 (d, J CF = 10.3 Hz), 127.24, 125.30 (d, J CF = 4.7 Hz), 121.78, 114.27, 110.63, 108.59 (d, J CF = 19.2 Hz), 106.07, 71.80, 67.27, 58.43, 55.10, 53.96, 46.06 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C22H24BrFN5O2 +, 488.1092; 실측치, 488.1109.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[2-(디메틸아미노)에틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 ((±)-
JGK069
).
일반 절차 GP-1에 따라, 화합물 (±)-JGK069을 DMF (1.3 mL) 내 (±)-10 (32 mg, 0.06 mmol) 및 2 M THF 내 Me2NH의 용액 (161 μL, 0.32 mmol)으로부터 제조했다. PTLC (EtOAc, 5% iPrOH, 1.5% aq. NH4OH)로 (±)-JGK069 (19 mg, 66%)를 회백색 잘 부서지는 발포물로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.67 (s, 1H), 8.63 (ddd, J = 8.7, 7.4, 1.6 Hz, 1H), 7.373 (br, 1H), 7.371 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.28 - 7.24 (m, 1H), 7.10 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.42 (dd, J = 11.4, 2.3 Hz, 1H), 4.38 (tdd, J = 7.7, 5.1, 2.3 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 11.3, 7.8 Hz, 1H), 2.56 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.29 (s, 6H), 1.93 (dq, J = 14.2, 7.4 Hz, 1H), 1.84 ppm (dtd, J = 14.2, 7.5, 5.1 Hz, 1H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 155.86, 153.26, 150.14 (d, J CF = 242.4 Hz), 149.42, 146.65, 144.36, 128.67 (d, J CF = 10.5 Hz), 127.18, 125.30 (d, J CF = 4.7 Hz), 121.77, 114.14, 110.60, 108.56 (d, J CF = 19.2 Hz), 105.88, 72.19, 68.34, 55.06, 45.58, 29.16 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C20H21BrFN4O2 +, 447.0826; 실측치, 447.0820.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 ((±)-
JGK070
).
일반 절차 GP-1에 따라, 화합물 (±)-JGK070을 DMF (1.3 mL) 내 (±)-10 (32 mg, 0.06 mmol) 및 1-메틸피페라진 (36 μL, 0.32 mmol)으로부터 제조했다. PTLC (EtOAc/iPrOH 8:2, 1.5% aq. NH4OH)로 (±)-JGK070 (21 mg, 65%)를 회백색 잘 부서지는 발포물로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.66 (s, 1H), 8.62 (ddd, J = 8.5, 7.3, 1.5 Hz, 1H), 7.373 (br, 1H), 7.367 (s, 1H), 7.29 - 7.24 (m, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.09 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 11.4, 2.3 Hz, 1H), 4.37 (tdd, J = 7.7, 5.4, 2.3 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 11.4, 7.9 Hz, 1H), 2.68 - 2.54 (m, 2H), 2.50 (br, 8H), 2.30 (s, 3H), 1.94 (dtd, J = 13.6, 7.5, 6.0 Hz, 1H), 1.86 ppm (dtd, J = 14.2, 7.3, 5.3 Hz, 1H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 155.86, 153.27, 150.16 (d, J CF = 242.5 Hz), 149.41, 146.64, 144.37, 128.64 (d, J CF = 10.3 Hz), 127.22, 125.28 (d, J CF = 4.6 Hz), 121.81, 114.13, 110.60, 108.57 (d, J CF = 19.4 Hz), 105.88, 72.38, 68.36, 55.20, 53.77, 53.25, 46.11, 28.50 ppm. HRMS (ESI): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C23H26BrFN5O2 +, 502.1248; 실측치, 502.1261.
5-플루오로-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신 (
11
).
DMF (113 mL) 내 3-플루오로벤젠-1,2-디올 (7233 mg, 56.5 mmol)의 혼합물을 K2CO3 (19514 mg, 141 mmol)로 처리하고, 10 분 동안 23 °C에서 교반하고, 1-브로모-2-클로로에탄 (9.4 mL, 113 mmol)로 처리했다. 혼합물을 23 °C에서 1 시간 동안, 및 이후 95 °C에서 16 시간 동안 교반했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고, 물 (150 mL)로 희석하고, EtOAc로 추출했다 (3 x 150 mL). 조합된 유기물을 물 (90 mL), 염수 (90 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. FC (헥산/EtOAc 30:1 → 10:1)로 표제 화합물 11 (7973 mg, 92%)를 투명, 무색 오일로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 6.78 - 6.63 (m, 3H), 4.34 - 4.26 ppm (m, 4H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3): δ = 152.05 (d, J CF = 244.3 Hz), 145.27 (d, J CF = 3.8 Hz), 132.78 (d, J CF = 13.9 Hz), 120.02 (d, J CF = 8.9 Hz), 112.74 (d, J CF = 3.1 Hz), 108.52 (d, J CF = 18.1 Hz), 64.50, 64.45 ppm. HRMS (DART): m/z [M]*+ 다음에 대한 계산치: C8H7FO2 *+, 154.0425; 실측치, 154.0420.
6-브로모-5-플루오로-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신 (
12
).
MeOH (101 mL) 내 11 (7812 mg, 50.7 mmol)의 용액을 NBS (9022 mg, 50.7 mmol) 로 처리하고, 70 °C에서 30 분 동안 가열했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 DCM (700 mL)에 용해시키고, 물 (300 mL)로 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 증발시켰다. FC (헥산/EtOAc 30:1 → 20:1)이어서 100 °C에서 HV 하에서 건조하여 남은 출발 물질을 제거하여, 표제 화합물 12 (8807 mg, 75%, 약 15%의 위치 이성질체 함유)를 투명, 무색 오일로서 얻었고, 이를 냉동고에서 고체화시켜 회백색 고체를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 6.96 (dd, J = 9.0, 7.0 Hz, 1H), 6.59 (dd, J = 9.0, 2.0 Hz, 1H), 4.35 - 4.24 ppm (m, 4H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3): δ = 148.87 (d, J CF = 245.1 Hz), 144.53 (d, J CF = 3.5 Hz), 133.81 (d, J CF = 14.6 Hz), 123.31, 113.39 (d, J CF = 3.6 Hz), 109.17 (d, J CF = 19.3 Hz), 64.51, 64.34 ppm. HRMS (DART): m/z [M]ㆍ+ 다음에 대한 계산치: C8H6BrFO2 *+, 231.9530; 실측치, 231.9525.
5-플루오로-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-6-카복실산 (
13
).
THF (108 mL) 내 12 (7.0 g, 30.0 mmol)의 혼합물을 -78 °C로 냉각시키고, 10 min 동안 2.5 M 헥산 (12.02 mL, 30.0 mmol) 내 nBuLi의 용액으로 적가 처리했다. 혼합물을 -78 °C에서 30 분 동안 교반하고, 이후 분쇄 건조 얼음 내로 캐눌라를 통해 옮겼다(10 mL의 THF로 캐눌라를 헹굼). 혼합물을 23 °C까지 데워지도록 방치하고, 농축시켰다. 물 (200 mL) 및 1 M NaOH (50 mL)를 잔류물에 첨가하고, aq. 상을 Et2O (3 x 60 mL)로 추출했다. Aq. 상을 6 M HCl (15 mL)로 산성화시키고 DCM (3 x 150 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (150 mL)로 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 증발시켰다. FC (헥산/EtOAc 7:3 → 3:7)로 표제 화합물 13 (3591 mg, 60%)를 백색 고체로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ = 12.90 (br, 1H), 7.33 (dd, J = 8.9, 7.7 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 8.9, 1.7 Hz, 1H), 4.39 - 4.29 ppm (m, 4H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d 6): δ = 164.65 (d, J CF = 3.0 Hz), 151.21 (d, J CF = 257.5 Hz), 148.50 (d, J CF = 4.4 Hz), 132.68 (d, J CF = 13.6 Hz), 122.44 (d, J CF = 1.4 Hz), 112.12 (d, J CF = 3.4 Hz), 111.97 (d, J CF = 7.3 Hz), 64.42, 63.91 ppm. HRMS (DART): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C9H6FO4 -, 197.0256; 실측치, 197.0250.
에틸 (5-플루오로-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-6-일)카바메이트 (
14
).
톨루엔 (13.1 mL) 내 13 (650 mg, 3.28 mmol)의 혼합물을 Et3N (1.4 mL, 9.84 mmol)로, 및 10 °C에서 DPPA (780 μL, 3.62 mmol)로 처리했다. 혼합물을 23 °C에서 30 분 동안, 이후 85 °C에서 1.5 시간 동안 교반했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고, EtOH (5 mL)로 처리하고, 1.5 시간 동안 23 °C에서 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 Et2O (150 mL)에 용해시키고, sat. aq. NaHCO3 (40 mL), 물 (40 mL), 염수 (40 mL)로 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 증발시켰다. FC (헥산/DCM 7:3 →1:9)로 표제 화합물 14 (512 mg, 65%)를 백색 고체로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 7.42 (br, 1H), 6.64 (dd, J = 9.2, 2.2 Hz, 1H), 6.56 (br, 1H), 4.32 - 4.24 (m, 4H), 4.22 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.31 ppm (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 153.80, 142.61 (d, J CF = 246.0 Hz), 140.82, 132.66 (d, J CF = 12.4 Hz), 120.36 (d, J CF = 6.9 Hz), 112.36, 111.81 (d, J CF = 3.7 Hz), 64.72, 64.29, 61.61, 14.66 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C11H13FNO4 +, 242.0823; 실측치, 242.0816.
10-플루오로-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린 (
15
).
TFA (5.7 mL) 내 14 (450 mg, 1.87 mmol) 및 HMTA (263 mg, 1.87 mmol)의 혼합물을 마이크로파에서 110 °C에서 10 분 동안 조사했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고, 물 (60 mL)로 희석하고, 6 M NaOH (12 mL)로 처리하고, DCM (3 x 60 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 물 (50 mL), 염수 (50 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켜 발포성, 황색 오일을 얻었다.
디옥산/물 1:1 내 10% KOH 내 오일의 혼합물(15.5 mL)을 [K3Fe(CN)6] (614 mg, 1.87 mmol)로 처리하고, 마이크로파에서 100 °C에서 10 분 동안 조사하고및 조사했다. 이 절차을 총 4회 반복했다 (1 당량의 포타슘 페리시아나이드 첨가, 이어서 마이크로파 조사의 4 사이클). 수득한 혼합물을 물 (160 mL)로 희석하고, DCM (3 x 120 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 물 (100 mL), 염수 (100 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켜 표제 화합물 15 (330 mg, 86%)를 황색 고체로서 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 9.21 (br, 1H), 9.19 (s, 1H), 7.18 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.53 - 4.41 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 158.06 (d, J CF = 2.9 Hz), 153.81 (d, J CF = 1.8 Hz), 145.76 (d, J CF = 2.9 Hz), 144.40 (d, J CF = 256.1 Hz), 138.56 (d, J CF = 11.0 Hz), 136.73 (d, J CF = 10.1 Hz), 119.81 (d, J CF = 2.7 Hz), 106.55 (d, J CF = 4.3 Hz), 64.78, 64.34 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C10H8FN2O2 +, 207.0564; 실측치, 207.0563.
10-플루오로-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4(3H)-온 (
16
).
AcOH (1 mL) 내 15 (306 mg, 1.48 mmol)의 용액을 0.833 M 물 내 CAN의 용액 (7.12 mL, 5.94 mmol)로 적가 처리하고, 23 °C에서 15 분 동안 교반했다. 백색 침전물을 여과로 수집하고, 물 (2 x 2 mL), 아세토니트릴 (2 x 2 mL), DCM (2 mL), 및 Et2O (2 mL)로 세정하고 제1 배치의 표제 화합물을 얻었다. Aq. 여액을 1 M NaOH로 pH ~7로 중화시키고 백색 침전물을 이전처럼 여과로 수집하고, 이어서 세정하여 제2 배치의 표제 화합물 16 (81 mg, 25%)를 백색 고체로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ = 12.19 (br, 1H), 7.98 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 4.52 - 4.28 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ = 159.31, 144.58 (d, J CF = 251.8 Hz), 144.28, 143.80 (d, J CF = 3.4 Hz), 137.86 (d, J CF = 11.1 Hz), 132.94 (d, J CF = 8.9 Hz), 115.75, 106.62 (d, J CF = 3.7 Hz), 64.57, 64.02 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C10H8FN2O3 +, 223.0513; 실측치, 223.0503.
4-클로로-10-플루오로-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린 (
17
).
톨루엔 (1.2 mL) 내 16 (92 mg, 0.41 mmol)의 교반 현탁액을 DIPEA (220 μL, 1.26 mmol)로 처리하고, 이어서 10 °C에서 POCl3 (103 μL, 1.12 mmol)를 적가 첨가했다. 혼합물을 23 °C에서 1 시간 동안, 이후 90 °C에서 5 시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 0 °C에서 5 min 동안 sat. aq. NaHCO3 (10 mL)로 처리하고, 물 (5 mL)로 희석하고, DCM (3 x 7 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 절반-sat. aq. NaHCO3 (7 mL), 염수 (7 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켜 표제 화합물 17 (51 mg, 51%)를 옅은-갈색 고체로서 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.90 (s, 1H), 7.51 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.55 - 4.43 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 160.48 (d, J CF = 4.3 Hz), 152.31, 146.29 (d, J CF = 3.3 Hz), 144.63 (d, J CF = 256.2 Hz), 138.95 (d, J CF = 11.3 Hz), 137.68 (d, J CF = 10.2 Hz), 118.56 (d, J CF = 2.4 Hz), 105.82 (d, J CF = 4.2 Hz), 64.81, 64.41 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C10H7ClFN2O2 +, 241.0175; 실측치, 241.0174.
5-플루오로-7-니트로-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-6-카복실산 (
18
).
AcOH (7.5 mL) 내 13 (1500 mg, 7.57 mmol)의 혼합물을 H2SO4 (2.02 mL)로 10 °C에서 적가 처리했다. 강하게 교반한 혼합물을 65% HNO3 (2.6 mL)로 0 °C에서 10 분 동안 적가 처리했다. 수득한 혼합물을 0 °C에서 30 분 동안, 및 이후 23 °C에서 16 시간 동안 교반했다. 혼합물을 얼음-물 (40 mL) 내로 붓고 백색 침전물을 여과로 수집하고 (냉수, 40 mL로 세척), 및 데시케이터에서 건조시켜 표제 화합물 18 (1280 mg, 70%)를 백색 고체로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ = 14.09 (br, 1H), 7.62 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 4.52 - 4.40 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ = 162.71, 147.16 (d, J CF = 248.7 Hz), 144.72 (d, J CF = 5.1 Hz), 138.15 (d, J CF = 13.7 Hz), 137.10 (d, J CF = 6.6 Hz), 113.44 (d, J CF = 20.3 Hz), 109.52 (d, J CF = 2.3 Hz), 64.97, 64.48 ppm. HRMS (DART): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C9H5FNO6 -, 242.0106; 실측치, 242.0124.
7-아미노-5-플루오로-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-6-카복실산 (
19
).
MeOH (21 mL) 내 18 (500 mg, 2.06 mmol) 및 5% Pd/C (223 mg, 0.10 mmol)의 혼합물을 H2 분위기 하에서 23 °C에서 13.5 시간 동안 교반했다. 혼합물을 Celite를 통해 여과하고 (EtOH로 세척), 증발시켜 표제 화합물 19 (418 mg, 95%)을 회색 고체로서 얻었고, 이는 매우 안정적으로 보이지는 않았다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ = 8.35 (br, 2H), 6.04 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.29 - 4.24 (m, 2H), 4.19 - 4.14 ppm (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ = 167.36 (d, J CF = 2.9 Hz), 151.36 (d, J CF = 252.0 Hz), 148.86 (d, J CF = 7.0 Hz), 145.81 (d, J CF = 5.7 Hz), 122.88 (d, J CF = 15.4 Hz), 97.19 (d, J CF = 2.9 Hz), 95.37 (d, J CF = 10.9 Hz), 64.95, 63.58 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C9H9FNO4 +, 214.0510; 실측치, 214.0508.
5-플루오로-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4(3H)-온 (
20
).
포름아미드 (2.3 mL, 58.7 mmol) 내 19 (417 mg, 1.96 mmol)의 혼합물을 120-125 °C에서 16 시간 동안 교반했다. 30 min혼합물을 로0 °C 냉각시키고, 물 (4 mL)로 처리하고, 동안 교반하고, 물 (4 mL)로 희석하고, 여과했다. 잔류물을 냉수 (3 x 5 mL)로 세정하고, HV 하에서 Drierite 상에서 건조시키고 표제 화합물 20 (249 mg, 57%)를 회백색 고체로서 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ = 12.00 (br, 1H), 7.90 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.45 - 4.35 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ = 157.64 (d, J CF = 3.0 Hz), 149.70 (d, J CF = 6.0 Hz), 148.45 (d, J CF = 261.3 Hz), 144.60, 142.99, 131.47 (d, J CF = 12.7 Hz), 108.76 (d, J CF = 3.5 Hz), 106.38 (d, J CF = 3.8 Hz), 64.69, 63.98 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C10H8FN2O3 +, 223.0513; 실측치, 223.0510.
4-클로로-5-플루오로-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린 (
21
).
톨루엔 (1.2 mL) 내 20의 교반현탁액 (90 mg, 0.41 mmol)을 DIPEA (215 μL, 1.24 mmol)로 처리하고, 이어서 POCl3 (100 μL, 1.09 mmol)를 10 °C에서 적가 첨가했다. 혼합물을 23 °C에서 1 시간 동안, 이후 88 °C에서 5 시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 잔류물을 0 °C에서 sat. aq. NaHCO3 (10 mL)로 처리하고, 물 (5 mL)로 희석하고, DCM (3 x 7 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 절반-sat. aq. NaHCO3 (7 mL), 염수 (7 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켜 표제 화합물 21 (96 mg, 99%)를 옅은-오렌지색 고체로서 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.83 (s, 1H), 7.35 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.51 - 4.45 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 156.76 (d, J CF = 4.5 Hz), 152.70 (d, J CF = 2.3 Hz), 151.66 (d, J CF = 4.9 Hz), 146.08, 144.51 (d, J CF = 261.8 Hz), 134.04 (d, J CF = 14.0 Hz), 110.85 (d, J CF = 7.7 Hz), 109.43 (d, J CF = 4.0 Hz), 64.89, 64.37 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C10H7ClFN2O2 +, 241.0175; 실측치, 241.0176.
N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-10-플루오로-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK071
).
일반 절차 GP-2에 따라, 화합물 JGK071을 클로로퀴나졸린 17 (35 mg, 0.15 mmol) 및 3-브로모-2-플루오로아닐린으로부터 제조했다. FC (DCM/EtOAc 1:0 → 8:2)로 JGK071 (44 mg, 77%)를 백색 고체로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ = 9.76 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.80 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.62 (ddd, J = 8.0, 6.3, 1.6 Hz, 1H), 7.54 (ddd, J = 8.5, 7.1, 1.6 Hz, 1H), 7.22 (td, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 4.53 - 4.40 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ = 156.93 (d, J CF = 3.7 Hz), 153.44 (d, J CF = 247.5 Hz), 153.12, 144.04 (d, J CF = 250.0 Hz), 143.97 (d, J CF = 3.2 Hz), 137.04 (d, J CF = 10.9 Hz), 135.62 (d, J CF = 9.9 Hz), 130.48, 127.89, 127.62 (d, J CF = 13.1 Hz), 125.51 (d, J CF = 4.5 Hz), 108.58 (d, J CF = 23.4 Hz), 108.51, 103.25 (d, J CF = 3.9 Hz), 64.63, 64.21 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H11BrF2N3O2 +, 393.9997; 실측치, 393.9999.
N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-5-플루오로-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK072
).
일반 절차 GP-2에 따라, 화합물 JGK072을 클로로퀴나졸린 21 (35 mg, 0.15 mmol) 및 3-브로모-2-플루오로아닐린으로부터 제조했다. FC (DCM/EtOAc 1:0 → 8:2)로 JGK072 (47 mg, 82%)를 백색 고체로서 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ = 8.67 (ddd, J = 8.6, 7.2, 1.5 Hz, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.52 (dd, J = 19.6, 2.2 Hz, 1H), 7.29 (ddd, J = 8.1, 6.4, 1.5 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.10 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 4.48 - 4.42 ppm (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ = 155.27 (d, J CF = 5.2 Hz), 153.90, 150.34 (d, J CF = 243.9 Hz), 149.93 (d, J CF = 6.2 Hz), 145.75 (d, J CF = 250.3 Hz), 144.78, 131.96 (d, J CF = 15.6 Hz), 128.43 (d, J CF = 10.4 Hz), 127.71, 125.20 (d, J CF = 4.7 Hz), 122.48, 109.69 (d, J CF = 3.3 Hz), 108.63 (d, J CF = 19.2 Hz), 101.42 (d, J CF = 7.2 Hz), 64.84, 64.48 ppm. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H11BrF2N3O2 +, 393.9997; 실측치, 393.9996.
실시예 17: 본 개시내용의 예시적 화합물의 뇌 투과
표 5에 개시됨 비-종양 보유 마우스에서 표시된 약물의 뇌 대 혈장 백분율 및 뇌내 약물 대 혈장내 약물의 비결합 비율
표 5: 본 개시내용의 예시적 화합물의 뇌 투과
실시예 18: JGK 시리즈의 예시적인 화합물의 제조
반응식 1. JGK068S의 합성.
반응식 2. (R)-거울상이성질체 JGK068R 또는 라세미 혼합물 (JGK068)의 제조는 각각 (R)- 또는 라세미 글리시돌을 사용하여 반응식 1에 나타낸 것과 동일 경로를 따른다.
반응식 3. 1단계로 벤즈알데히드 1 로부터 키랄 글리시딜 토실레이트로 벤조디옥산 카브알데히드 (R)-10의 합성. 이 경로는 반응식 1에서 미츠노부 반응(1로부터 2의 제조)을 회피한다. 화합물 (R)-10는 JGK068S의 제조를 위해 반응식 1에 나타낸 경로에서 사용될 수 있다.
일반적인 화학 정보
모든 화학물질, 시약, 및 용매를 이용가능할 때 상업적 공급원으로 구매하고 받은 대로 사용했다. 필요할 때, 시약 및 용매를 정제하고 표준 방법으로 건조시켰다. 공기- 및 수분-민감한 반응을 아르곤의 불활성 분위기 하에서 오븐-건조된 유리그릇에서 수행했다. 마이크로파-조사된 반응을 단일 방식 반응기 CEM Discover 마이크로파 합성기에서 수행했다. 실온 (RT) 반응을 주위 온도에서 (대략 23°C) 수행했다. 모든 반응을, UV 광 (λ = 254, 365 nm)에 의해 또는 알칼리성 KMnO4 용액을 사용하여 시각화된 스팟(spot)을 갖는 사전코팅된 Merck 60 F254 실리카겔 플레이트 상에서 박층 크로마토그래피 (TLC)으로 모니터링했다. 플래시 칼럼 크로마토그래피 (FC)를 SiO2 60 (입자 크기 0.040-0.063 mm, 230-400 메쉬) 상에서 수행했다. 분취용 박층 크로마토그래피 (PTLC)을 Merck 60 F254 실리카겔 플레이트 (20 x 20 cm, 210-270 mm) 또는 Analtech 실리카겔 GF TLC 플레이트 (20 x 20 cm, 1000 mm)로 수행했다. 감압 하에서 (진공에서) 23 내지 50 °C에서 회전식 증발로 농축을 수행했다. 정제된 화합물을 고진공 하에서 또는 데시케이터에서 추가로 건조시켰다. 수율은 정제된 화합물에 해당하고, 추가로 최적화되지 않았다. 양성자 핵자기 공명 (1H NMR) 스펙트럼을 (300, 400, 또는 500 MHz에서 작동하는) Bruker 분광기 상에서 기록했다. 탄소 NMR (13C NMR) 스펙트럼을 Bruker 분광기 (400 또는 500 MHz에서) 상에서 기록했다. NMR 화학적 이동 (δ ppm)은 잔류 용매 신호와 관련되었다. 1H NMR 데이터는 아래와 같이 보고된다: 화학적 이동(ppm); 다중도 (s = 단일항, d = 이중항, t = 삼중항, q = 사중항, quint = 오중항, m = 다중항/복합 패턴, td = 이중항의 삼중항, ddd = 이중항의 이중항의 이중항, br = 넓은 신호); 결합 상수 (J) (Hz), 적분. 13C NMR 스펙트럼에 대한 데이터는 화학적 이동, 및 적용가능하면 결합 상수의 관점에서 보고된다. 고해상도 질량 (HRMS) 스펙트럼을, IonSense ID-CUBE DART 공급원 질량 분광분석기를 가지고 있는 Thermo Fisher Scientific Exactive Plus, 또는 자동시료주입기를 가지고 있는 ACQUITY UPLC를 가지고 있는 Waters LCT Premier 질량 분광분석기 상에서 기록했다.
5-포르밀-2-하이드록시페닐 아세테이트 (
1
).
THF (965 mL) 내 3,4-디하이드록시벤즈알데히드 (100 g, 0.724 mol)의 혼합물을 0 °C로 냉각시키고, 10% aq. NaOH (724 mL, 1.81 mol)로 4-5 분에 걸쳐 처리했다. 반응 혼합물을 0 °C에서 15 분 동안 교반 후, 아세트산 무수물 (Ac2O, 82.1 mL, 0.869 mol)을 20 분에 걸쳐 적가 첨가했다. 혼합물을 30 분 동안 동일 온도에서 교반하고, 이후 0 °C에서 EtOAc (1.25 L) 및 2 M HCl (1.13 L)의 혼합물 내로 부었다. 상을 분리하고, aq. 상을 EtOAc로 추출했다 (4 x 250 mL). 조합된 유기물을 물 (2 x 500 mL), 염수 (500 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 소량의 n-헵탄으로 처리하고 증발시켰다 (3x). EtOAc로부터의 재결정화 (275 mL; 결정을 Et2O로 세정)에 의해 제1 수확인 표제 화합물 1 (66.96 g, 51%)을 옅은-갈색 결정으로서 얻었다. EtOAc로부터 모액의 재결정화에 의해 제2 수확인 표제 화합물 1 (29.436 g, 23%)을 옅은-갈색 고체로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 9.85 (s, 1H), 7.73 - 7.65 (m, 2H), 7.11 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.34 (br, 1H), 2.39 (s, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 190.40, 168.99, 152.96, 138.81, 130.24, 129.72, 124.13, 117.87, 21.09. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C9H9O4 +, 181.0495; 실측치, 181.0488.
5-포르밀-2-{[(2R)-옥시란-2-일]메톡시}페닐 아세테이트 ((R)-
2
).
THF (905 mL) 내 1 (32.5 g, 0.18 mol) 및 트리페닐포스핀 (PPh3, 70.976g, 0.27 mol)의 혼합물을 (S)-글리시돌 (17.95 mL, 0.27 mol)로 처리하고, 0 °C로 냉각시키고, 디이소프로필 아조디카복실레이트 (DIAD, 56.8 mL, 0.289 mmol)로 30 분에 걸쳐 적가 처리했다. 혼합물을 부가적 10 분 동안 0 °C에서 교반하고, 이후 냉각 배쓰를 제거하고, 23 °C에서 15.5 시간 동안 교반을 계속했다. 모든 휘발물을 증발시키고, 갈색 오일로서 얻어진 조 (R)-2을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용했다.
(3S)-3-(하이드록시메틸)-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-6-카브알데히드 ((S)-
3
).
MeOH (1.564 L) 내 조 (R)-2의 혼합물을 K2CO3 (49.87 g, 0.36 mol)로 처리하고 23 °C에서 18.5 시간 동안 교반하고, 이후 용매를 증발시켰다. 잔류물을 절반-sat. NH4Cl (750 mL)에 현탁시키고, EtOAc로 추출했다 (3 x 500 mL). 조합된 유기물을 물 (250 mL), 염수 (250 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. 조 물질을 몇 회의 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 9:1 → 1:1)로 정제하고 또한 헥산/Et2O 1:1로부터 침전 (트리페닐포스핀 옥사이드 Ph3PO 제거)시켜, 표제 화합물 (S)-3 (17.322 g, 2 단계에 걸쳐49%)를 백색 고체로서얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 9.81 (s, 1H), 7.43 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 8.1, 1.9 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.39 (dd, J = 11.4, 2.3 Hz, 1H), 4.31 - 4.25 (m, 1H), 4.20 (dd, J = 11.3, 7.9 Hz, 1H), 3.95 (dd, J = 12.1, 4.3 Hz, 1H), 3.87 (dd, J = 12.1, 4.9 Hz, 1H), 2.18 (br, 1H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 190.79, 148.76, 143.46, 130.79, 124.46, 118.33, 117.70, 73.31, 65.61, 61.54. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C10H11O4 +, 195.0652; 실측치, 195.0650.
[(2R)-7-시아노-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-2-일]메틸 아세테이트 ((R)-
4
).
AcOH (189 mL) 내 (S)-3 (17.322 g, 0.089 mol)의 혼합물을 KOAc (22.944 g, 0.234 mol)로 처리하고, 23 °C에서 10 분 동안 교반하고, 이후 NH2OHㆍHCl (16.233 g, 0.234 mol)로 처리했다. 수득한 혼합물을 120 - 125 °C에서 18.5 시간 동안 교반했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고, 물 (1 L) 내로 붓고, EtOAc로 추출했다 (4 x 250 mL). 조합된 유기물을 3.5 M NaOH (400 mL) 및 sat. aq. NaHCO3 (100 mL)로 처리하고 최종 pH ~8를 얻고 에멀전을 23 °C에서 1 시간 동안 교반했다. 유기층을 분리하고, sat. aq. NaHCO3 (300 mL), 물 (300 mL), 염수 (300 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 10:1 → 6:4)로 정제하여 표제 화합물 (R)-4 (13.513 g, 65%)를 투명, 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.20 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.43 - 4.38 (m, 1H), 4.36 (dd, J = 11.6, 2.4 Hz, 1H), 4.34 (dd, J = 11.1, 4.5 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 11.6, 4.6 Hz, 1H), 4.11 (dd, J = 11.5, 7.2 Hz, 1H), 2.12 (s, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 170.64, 147.13, 143.11, 126.28, 121.56, 118.85, 118.32, 105.13, 71.11, 65.45, 62.24, 20.83. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C12H12NO4 +, 234.0761; 실측치, 234.0759.
[(2R)-7-시아노-6-니트로-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-2-일]메틸 아세테이트 ((R)-
5
).
Ac2O (74.3 mL) 내 (R)-4 (13.345 g, 57.2 mmol)의 혼합물을 H2SO4 (3.05 mL, 57.2 mmol)로 처리하고, 0 °C로 냉각시키고, 70% HNO3 (19.63 mL, 286 mmol)로 0 °C에서 35 분에 걸쳐 적가 처리했다. 혼합물을 다시 2 시간 동안 0 °C에서, 및 이후 23 °C에서 3.5 시간 동안 교반했다. 혼합물을 얼음-물 (850 mL) 내로 붓고, pH을 6 M NaOH (320 mL)로 ~7로 조정했다. Sat. aq. NaHCO3 (200 mL)을 첨가하고, 혼합물을 CH2Cl2 (3 x 500 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 sat. aq. NaHCO3 (400 mL), 물 (400 mL), 염수 (400 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켜 표제 화합물 (R)-5 (15.696 g, 99%)를 황색 오일로서 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 7.96 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 4.73 - 4.67 (m, 1H), 4.58 (dd, J = 11.8, 2.6 Hz, 1H), 4.36 (dd, J = 12.5, 3.7 Hz, 1H), 4.31 (dd, J = 12.5, 5.7 Hz, 1H), 4.27 (dd, J = 11.8, 7.0 Hz, 1H), 2.05 (s, 3H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 170.11, 147.75, 146.26, 142.23, 123.77, 115.21, 115.17, 100.06, 72.00, 64.98, 61.72, 20.52. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C12H11N2O6 +, 279.0612; 실측치, 279.0601.
(3S)-7-아미노-3-(하이드록시메틸)-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-6-카보니트릴 ((S)-
6
).
물/에탄올 1:1 (250 mL) 내 (R)-5 (15.591 g, 56 mmol)의 현탁액을 Na2S2O4 (39.266 g, 185 mmol)로 처리하고, 혼합물을 50 °C에서 105 분 동안 교반하고, 이후 조금씩 진한 HCl (73.6 mL, 0.897 mol)로 그 동안 처리하면서 70 °C로 2 시간 동안 가열했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고, 얼음에 붓고, pH을 6 M NaOH (200 mL) 및 절반-sat. NaHCO3 (500 mL)로 ~10로 조정했다. 혼합물을 EtOAc로 추출했다 (3 x 500 mL). 조합된 유기물을 물 (500 mL), 염수 (500 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켜 조 (S)-6 (9.483 g, 82%)를 오렌지색-황색 고체로서 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 6.92 (s, 1H), 6.29 (s, 1H), 5.50 (br, 2H), 5.04 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.32 (dd, J = 10.7, 1.6 Hz, 1H), 4.07 - 3.99 (m, 1H), 4.00 (dd, J = 11.2, 8.3 Hz, 1H), 3.64 - 3.51 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 148.50, 147.29, 134.39, 119.04, 118.04, 102.45, 86.72, 73.25, 65.92, 59.77. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C10H10N2O3 ㆍ+, 206.0686; 실측치, 206.0685.
N'-[(2S)-7-시아노-2-(하이드록시메틸)-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-6-일]-N,N-디메틸메탄-이미드아미드 ((S)-
7
).
톨루엔 (117 mL) 내 (S)-6 (9.38 g, 45.5 mmol)의 혼합물을 AcOH (143 μL, 2.5 mmol) 및 DMF-DMA (13.1 mL, 98.9 mmol)로 처리하고, 혼합물을 105 °C에서 3 시간 동안 교반했다. 반응의 진행을 모니터링하기 위해 딘-스타크 트랩 내에서 증발된 MeOH (~4 - 5 mL)을 수집했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고 증발시켜 조 (S)-7 (14.243 g, quant.)를 점성, 갈색 오일로서 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.51 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 4.33 (dd, J = 11.2, 2.0 Hz, 1H), 4.23 - 4.17 (m, 1H), 4.13 (dd, J = 11.2, 8.1 Hz, 1H), 3.90 (dd, J = 12.1, 4.2 Hz, 1H), 3.83 (dd, J = 12.1, 4.8 Hz, 1H), 3.07 (s, 3H), 3.05 (s, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 160.40, 153.78, 147.68, 138.63, 121.08, 118.64, 108.16, 99.31, 73.34, 65.83, 61.67, 40.51, 34.82. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C13H16N3O3 +, 262.1186; 실측치, 262.1183.
[(7S)-4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]메탄올 ((S)-
8
).
AcOH (152 mL) 내 (S)-7의 혼합물을 3-브로모-2-플루오로아닐린 (6.63 mL, 59.1 mmol)로 처리하고, 혼합물을 125 - 130 °C에서 3 시간 동안 교반했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고, 얼음-물 (500 mL) 내로 붓고, pH을 sat. aq. NH4OH (185 mL) 및 절반-sat. aq. NaHCO3 (200 mL)로 ~9로 조정했다. 혼합물을 EtOAc (3 x 400 mL)로 추출하고, 조합된 유기물을 절반-sat. aq. NaHCO3 (400 mL), 물 (400 mL), 염수 (400 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 MeOH (272 mL)에 용해시키고, K2CO3 (12.579 g, 91 mmol)로 처리하고, 23 °C에서 1 시간 동안 교반하고, 증발시켰다. 잔류물을에 현탁시키고 절반-sat. aq. NH4Cl (700 mL), 및 EtOAc로 추출했다 (3 x 400 mL). 조합된 유기물을 물 (400 mL), 염수 (400 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. 오렌지색-황색 잔류물을 EtOAc에 현탁시키고, 65 °C까지 데우고, 이후 밤새 23 °C까지 서서히 냉각시켰다. 여과, 및 냉 헥산 (2 x 15 mL) 및 Et2O (2 x 15 mL)로 잔류물 세정, 및 고진공 하에서 건조로 표제 화합물 (S)-8 (9.407 g, 2 단계에 걸쳐 50.9%)를 미세, 황색 분말로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.69 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.59 (ddd, J = 8.0, 6.2, 1.6 Hz, 1H), 7.54 (ddd, J = 8.4, 7.0, 1.6 Hz, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 1H), 7.20 (s, 1H), 5.20 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.49 (dd, J = 11.5, 2.4 Hz, 1H), 4.37 - 4.29 (m, 1H), 4.21 (dd, J = 11.6, 7.4 Hz, 1H), 3.76 - 3.64 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.22, 153.38 (d, J CF = 247.0 Hz), 153.09, 148.87, 145.94, 143.37, 130.08, 128.09 (d, J CF = 12.9 Hz), 127.75, 125.43 (d, J CF = 4.5 Hz), 112.29, 109.81, 108.54 (d, J CF = 20.0 Hz), 108.49, 73.77, 65.52, 59.76. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C17H14BrFN3O3 +, 406.0197; 실측치, 406.0185.
[(7R)-4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]메틸 메탄설포네이트 ((R)-
9
).
아세토니트릴 (148 mL) 내 (S)-8 (9.01 g, 22.2 mmol) 및 Me3NㆍHCl (234 mg, 2.45 mmol)의 혼합물을 Et3N (6.18 mL, 44.4 mmol)로 처리하고, 0 - 5 °C로 냉각시키고, 아세토니트릴 (17 mL; 3 mL로 헹굼) 내 MsCl (2.57 mL, 33.2 mmol)의 용액으로 10 분에 걸쳐 적가 처리했다. 혼합물을 0 °C에서 1 시간 동안 교반했다. 물 (100 mL)을 첨가하고, 대부분의 아세토니트릴을 진공에서 증발시켰다. 부가적 물 (700 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 추출했다 (3 x 400 mL). 조합된 유기물을 물 (400 mL), 염수 (400 mL) 로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켜 표제 화합물 (R)-9 (10.33 g, 96%)를 황색, 잘 부서지는 발포물로서 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용했다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.70 (s, 1H), 8.62 (ddd, J = 8.7, 7.3, 1.6 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.362 (s, 1H), 7.360 (br, 1H), 7.29 (ddd, J = 8.1, 6.5, 1.5 Hz, 1H), 7.11 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 4.67 - 4.61 (m, 1H), 4.54 - 4.51 (m, 2H), 4.50 (dd, J = 11.7, 2.4 Hz, 1H), 4.29 (dd, J = 11.8, 7.1 Hz, 1H), 3.13 (s, 3H).
(7S)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노 [2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK068S
).
DMF (427 mL) 내 (R)-9의 혼합물을 1-메틸피페라진 (11.83 mL, 107 mmol) 및 Et3N (5.95 mL, 42.7 mmol)로 처리하고, 혼합물을 85 °C에서 24 시간 동안 교반했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고, 증발시켰다. 잔류물을 고 EtOAc (1.2 L)에 용해시키고, 0.5 M NaOH (4 x 250 mL), 염수 (250 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2/MeOH 1:0 → 8:2)로 정제하여 표제 화합물 JGK068S (6.013 g, 2 단계에 걸쳐 58%)를 회백색, 잘 부서지는 발포물로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.67 (s, 1H), 8.63 (ddd, J = 8.7, 7.3, 1.6 Hz, 1H), 7.374 (s, 1H), 7.372 (br, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.26 (ddd, J = 8.1, 6.5, 1.5 Hz, 1H), 7.09 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 4.48 - 4.40 (m, 2H), 4.14 (dd, J = 11.8, 8.0 Hz, 1H), 2.77 (dd, J = 13.4, 6.0 Hz, 1H), 2.653 (dd, J = 13.4, 5.8 Hz, 1H), 2.648 (br, 4H), 2.51 (br, 4H), 2.32 (s, 3H).
반응식 4. JGK083S의 합성.
tert-부틸 {[(7S)-4-(3-브로모-2-플루오로아닐리노)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-7-일]메틸}피페라진-1-카복실레이트 ((S)-
10
).
실시예 16의 일반 절차 GP-1에 따라, 화합물 (S)-10을 DMF (3.8 mL) 내 R-9 (91 mg, 0.188 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (175 mg, 0.94 mmol)으로부터 제조하고, 85 °C에서 15 시간 동안 교반했다. PTLC (CH2Cl2/EtOAc 4:6)로 (S)-10 (50 mg, 46%)를 회백색, 잘 부서지는 발포물로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.68 (s, 1H), 8.65 (ddd, J = 8.3, 7.4, 1.5 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.36 (br, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.27 (ddd, J = 8.0, 6.5, 1.5 Hz, 1H), 7.11 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.50 - 4.42 (m, 2H), 4.17 (dd, J = 12.1, 8.2 Hz, 1H), 3.47 (t, J = 5.1 Hz, 4H), 2.78 (dd, J = 13.4, 5.9 Hz, 1H), 2.67 (dd, J = 13.5, 5.9 Hz, 1H), 2.62 - 2.47 (m, 4H), 1.47 (s, 9H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 155.89, 154.83, 153.39, 150.15 (d, J CF = 242.4 Hz), 149.36, 146.72, 144.02, 128.63 (d, J CF = 10.3 Hz), 127.27, 125.34, 121.78, 114.34, 110.66, 108.60 (d, J CF = 19.5 Hz), 106.06, 79.97, 71.76, 67.18, 58.56, 53.96, 28.57, 하나의 탄소 신호 실종 (아마도 중복 피크로 인해). HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C26H30BrFN5O4 +, 574.1460; 실측치, 574.1432.
(7S)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[(피페라진-1-일)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노 [2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK083S
).
CH2Cl2 (500 μL) 및 TFA (250 μL) 내 (S)-10 (42 mg, 0.073 mmol)의 혼합물을 23 °C에서 12 시간 동안 교반했다. 혼합물을 1 M HCl (20 mL)로 희석하고, CH2Cl2 (3 x 7 mL)로 세정했다. 수상을 6 M NaOH (4 mL)로 pH >12로 희석하고, EtOAc로 추출했다 (3 x 8 mL). 조합된 유기물을 염수 (8 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. PTLC (CH2CL2/MeOH 8:2)로 정제하여 표제 화합물 JGK083S (18 mg, 52%)를 백색, 잘 부서지는 발포물로서 얻었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.68 (s, 1H), 8.66 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.6 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (br d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.27 (ddd, J = 8.1, 6.5, 1.6 Hz, 1H), 7.11 (td, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 4.50 - 4.42 (m, 2H), 4.19 - 4.13 (m, 1H), 2.93 (t, J = 4.9 Hz, 4H), 2.76 (dd, J = 13.4, 5.9 Hz, 1H), 2.63 (dd, J = 13.4, 6.0 Hz, 1H), 2.63 - 2.50 (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 155.88, 153.35, 150.12 (d, J CF = 242.3 Hz), 149.45, 146.71, 144.17, 128.67 (d, J CF = 10.4 Hz), 127.21, 125.32 (d, J CF = 4.7 Hz), 121.74, 114.30, 110.64, 108.58 (d, J CF = 19.3 Hz), 106.02, 71.70, 67.32, 59.19, 55.54, 46.23. HRMS (DART): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C21H20BrFN5O2 -, 472.0790; 실측치, 472.0773.
[(2R)-7-포르밀-2,3-디하이드로-1,4-벤조디옥신-2-일]메틸 아세테이트 ((R)-
10
).
DMF (2 mL) 내 1 (150 mg, 0.833 mmol) 및 (2R)-글리시딜 토실레이트 (203 mg, 0.891 mmol)의 혼합물을 K2CO3 (181 mg, 1.31 mmol)로 처리하고, 혼합물을 60 °C에서 15 시간 동안 교반했다. 혼합물을 23 °C로 냉각시키고, 물 (30 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 추출했다 (3 x 15 mL). 조합된 유기물을 물 (15 mL), 염수 (15 mL)로 세정하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 증발시켰다. 분취용 박층 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 7:3)로 정제하여 표제 화합물 (R)-10 (111 mg, 56%)를 투명, 무색 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ = 9.82 (s, 1H), 7.44 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 8.2, 1.9 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.46 - 4.39 (m, 1H), 4.37 (dd, J = 11.5, 2.4 Hz, 1H), 4.35 (dd, J = 11.7, 4.9 Hz, 1H), 4.31 (dd, J = 11.9, 5.1 Hz, 1H), 4.13 (dd, J = 11.5, 7.1 Hz, 1H), 2.11 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3): δ 190.72, 170.67, 148.57, 143.22, 131.15, 124.38, 118.76, 117.85, 70.94, 65.54, 62.36, 20.83. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C12H13O5 +, 237.0757; 실측치, 237.0745.
(±)-N-(3-클로로-2-플루오로페닐)-7-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노 [2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK075
).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.68 (s, 1H), 8.61 (td, J = 7.3, 2.2 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (br d, J = 3.4 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.16 (td, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H), 7.13 (td, J = 8.2, 1.9 Hz, 1H), 4.49 - 4.41 (m, 2H), 4.15 (dd, J = 11.8, 8.1 Hz, 1H), 2.78 (dd, J = 13.4, 5.9 Hz, 1H), 2.66 (dd, J = 13.4, 5.9 Hz, 1H), 2.64 (br, 4H), 2.48 (br, 4H), 2.31 (s, 3H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 155.89, 153.35, 149.44, 149.30 (d, J CF = 244.2 Hz), 146.72, 144.15, 128.76 (d, J CF = 9.3 Hz), 124.71 (d, J CF = 4.7 Hz), 124.45, 121.01, 120.85 (d, J CF = 16.1 Hz), 114.30, 110.63, 106.05, 71.81, 67.31, 58.50, 55.17, 54.15, 46.19. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C22H24ClFN5O2 +, 444.1597; 실측치, 444.1582.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-8-[(모르폴린-4-일)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK076
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.62 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.59 (ddd, J = 8.0, 6.2, 1.6 Hz, 1H), 7.54 (ddd, J = 8.5, 7.1, 1.6 Hz, 1H), 7.21 (td, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 4.63 - 4.56 (m, 1H), 4.46 (dd, J = 11.6, 2.5 Hz, 1H), 4.17 (dd, J = 11.6, 7.1 Hz, 1H), 3.59 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 2.71 - 2.59 (m, 2H), 2.57 - 2.44 (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.22, 153.37 (d, J CF = 247.3 Hz), 153.13, 148.75, 146.16, 143.28, 130.14, 128.02 (d, J CF = 13.0 Hz), 127.74, 125.45 (d, J CF = 4.7 Hz), 112.57, 109.61, 108.55 (d, J CF = 19.9 Hz), 108.23, 71.41, 66.29, 66.18, 57.97, 53.89. HRMS (DART): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C21H19BrFN4O3 -, 473.0630; 실측치, 473.0608.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-8-[(디메틸아미노)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK077
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.62 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.59 (ddd, J = 8.0, 6.2, 1.6 Hz, 1H), 7.54 (ddd, J = 8.5, 7.1, 1.6 Hz, 1H), 7.21 (td, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 4.57 - 4.51 (m, 1H), 4.44 (dd, J = 11.6, 2.5 Hz, 1H), 4.14 (dd, J = 11.7, 7.1 Hz, 1H), 2.58 (s, 1H), 2.57 (s, 1H), 2.25 (s, 6H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.22, 153.38 (d, J CF = 247.4 Hz), 153.12, 148.78, 146.16, 143.29, 130.14, 128.02 (d, J CF = 13.1 Hz), 127.75, 125.45 (d, J CF = 4.4 Hz), 112.54, 109.59, 108.55 (d, J CF = 19.8 Hz), 108.20, 71.76, 66.31, 58.73, 45.92. HRMS (DART): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C19H17BrFN4O2 -, 431.0524; 실측치, 431.0503.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-8-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK078
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.61 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.59 (ddd, J = 8.0, 6.2, 1.6 Hz, 1H), 7.54 (ddd, J = 8.5, 7.1, 1.6 Hz, 1H), 7.21 (td, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 4.60 - 4.53 (m, 1H), 4.44 (dd, J = 11.6, 2.5 Hz, 1H), 4.14 (dd, J = 11.7, 7.1 Hz, 1H), 2.68 - 2.59 (m, 2H), 2.53 (br, 4H), 2.34 (br, 4H), 2.16 (s, 3H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.22, 153.38 (d, J CF = 247.4 Hz), 153.12, 148.78, 146.15, 143.29, 130.13, 128.02 (d, J CF = 13.1 Hz), 127.74, 125.45 (d, J CF = 4.5 Hz), 112.55, 109.60, 108.55 (d, J CF = 19.8 Hz), 108.22, 71.57, 66.34, 57.52, 54.68, 53.29, 45.72. HRMS (DART): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C22H22BrFN5O2 -, 486.0946; 실측치, 486.0928.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-8-[(피롤리딘-1-일)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK079
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.61 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.59 (ddd, J = 8.0, 6.3, 1.6 Hz, 1H), 7.54 (ddd, J = 8.5, 7.1, 1.6 Hz, 1H), 7.21 (td, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 4.57 - 4.49 (m, 1H), 4.46 (dd, J = 11.6, 2.5 Hz, 1H), 4.16 (dd, J = 11.6, 7.1 Hz, 1H), 2.80 (dd, J = 12.8, 6.0 Hz, 1H), 2.73 (dd, J = 12.8, 6.2 Hz, 1H), 2.62 - 2.48 (m, 4H), 1.74 - 1.66 (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.22, 153.37 (d, J CF = 247.5 Hz), 153.12, 148.79, 146.17, 143.29, 130.13, 128.02 (d, J CF = 12.9 Hz), 127.74, 125.45 (d, J CF = 4.5 Hz), 112.54, 109.58, 108.55 (d, J CF = 20.0 Hz), 108.19, 72.65, 66.32, 55.42, 54.31, 23.23. HRMS (DART): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C21H19BrFN4O2 -, 457.0681; 실측치, 457.0660.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-8-[(피페리딘-1-일)메틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK080
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.61 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.59 (ddd, J = 8.0, 6.3, 1.6 Hz, 1H), 7.54 (ddd, J = 8.4, 7.0, 1.6 Hz, 1H), 7.21 (td, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 4.59 - 4.52 (m, 1H), 4.44 (dd, J = 11.6, 2.5 Hz, 1H), 4.14 (dd, J = 11.7, 7.1 Hz, 1H), 2.65 - 2.54 (m, 2H), 2.53 - 2.37 (m, 4H), 1.55 - 1.47 (m, 4H), 1.43 - 1.34 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.21, 153.37 (d, J CF = 247.1 Hz), 153.11, 148.83, 146.15, 143.32, 130.12, 128.03 (d, J CF = 13.1 Hz), 127.73, 125.45 (d, J CF = 4.5 Hz), 112.53, 109.57, 108.55 (d, J CF = 19.8 Hz), 108.19, 71.63, 66.42, 58.35, 54.74, 25.61, 23.83. HRMS (DART): m/z [M - H]- 다음에 대한 계산치: C22H21BrFN4O2 -, 471.0837; 실측치, 471.0814.
N-(3-브로모-2-플루오로페닐)(7,7,8,8-
2
H
4
)-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK081
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.61 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.59 (ddd, J = 7.9, 6.3, 1.6 Hz, 1H), 7.54 (ddd, J = 8.4, 7.1, 1.6 Hz, 1H), 7.21 (td, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.19, 153.37 (d, J CF = 247.2 Hz), 153.10, 149.27, 146.03, 143.67, 130.12, 128.03 (d, J CF = 13.0 Hz), 127.74, 125.44 (d, J CF = 4.2 Hz), 112.47, 109.63, 108.55 (d, J CF = 19.9 Hz), 108.35. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C16H8D4BrFN3O2 +, 380.0342; 실측치, 380.0327.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[2-(피롤리딘-1-일)에틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK084
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.60 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.58 (ddd, J = 8.0, 6.2, 1.6 Hz, 1H), 7.53 (ddd, J = 8.4, 7.0, 1.6 Hz, 1H), 7.21 (td, J = 8.1, 1.1 Hz, 2H), 7.20 (s, 1H), 4.50 (dd, J = 11.5, 2.3 Hz, 1H), 4.42 - 4.36 (m, 1H), 4.12 (dd, J = 11.5, 7.7 Hz, 1H), 2.70 - 2.56 (m, 2H), 2.49 - 2.40 (m, 4H), 1.89 - 1.78 (m, 2H), 1.73 - 1.64 (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.21, 153.33 (d, J CF = 247.5 Hz), 153.13, 148.95, 146.02, 143.37, 130.08, 128.07 (d, J CF = 13.1 Hz), 127.64, 125.48 (d, J CF = 4.6 Hz), 112.26, 109.78, 108.58 (d, J CF = 19.8 Hz), 108.44, 71.76, 67.78, 53.63, 51.03, 29.53, 23.16. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C22H23BrFN4O2 +, 473.0983; 실측치, 473.0976.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-7-[2-(피페리딘-1-일)에틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK085
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.60 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.58 (ddd, J = 8.0, 6.2, 1.6 Hz, 1H), 7.53 (ddd, J = 8.4, 7.1, 1.6 Hz, 1H), 7.204 (td, J = 8.2, 1.3 Hz, 1H), 7.198 (s, 1H), 4.51 (dd, J = 11.5, 2.4 Hz, 1H), 4.39 - 4.33 (m, 1H), 4.11 (dd, J = 11.6, 7.8 Hz, 1H), 2.50 - 2.44 (m, 2H), 2.42 - 2.27 (m, 4H), 1.90 - 1.76 (m, 2H), 1.55 - 1.45 (m, 4H), 1.42 - 1.34 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.20, 153.33 (d, J CF = 247.4 Hz), 153.12, 148.95, 146.02, 143.39, 130.08, 128.07 (d, J CF = 13.1 Hz), 127.64, 125.48 (d, J CF = 4.5 Hz), 112.25, 109.77, 108.58 (d, J CF = 20.0 Hz), 108.43, 71.97, 67.80, 54.08, 53.96, 27.69, 25.61, 24.12. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C23H25BrFN4O2 +, 487.1139; 실측치, 487.1137.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-8-[2-(모르폴린-4-일)에틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK086
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.63 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.58 (ddd, J = 8.0, 6.3, 1.5 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.21 (td, J = 8.1, 1.2 Hz, 1H), 4.50 (dd, J = 11.5, 2.4 Hz, 1H), 4.47 - 4.40 (m, 1H), 4.10 (dd, J = 11.6, 7.4 Hz, 1H), 3.58 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 2.55 - 2.46 (m, 2H), 2.45 - 2.33 (m, 4H), 1.92 - 1.79 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.20, 153.33 (d, J CF = 248.3 Hz), 153.06, 148.94, 146.06, 143.26, 130.03, 128.12 (d, J CF = 9.8 Hz), 127.69, 125.44 (d, J CF = 4.4 Hz), 112.47, 109.64, 108.55 (d, J CF = 19.9 Hz), 108.18, 72.30, 67.35, 66.22, 53.53, 53.28, 27.25. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C22H23BrFN4O3 +, 489.0932; 실측치, 489.0926.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-8-[2-(디메틸아미노)에틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK087
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.61 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.59 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 4.49 (dd, J = 11.6, 2.3 Hz, 1H), 4.45 - 4.38 (m, 1H), 4.09 (dd, J = 11.6, 7.5 Hz, 1H), 2.47 - 2.38 (m, 2H), 2.17 (s, 6H), 1.86 - 1.78 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.20, 153.37 (d, J CF = 247.6 Hz), 153.08, 148.99, 146.14, 143.29, 130.10, 128.07 (d, J CF = 15.6 Hz), 127.72, 125.44 (d, J CF = 4.4 Hz), 112.50, 109.58, 108.54 (d, J CF = 19.7 Hz), 108.13, 72.30, 67.36, 54.43, 45.17, 28.27. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C20H21BrFN4O2 +,447.0826; 실측치, 447.0818.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-8-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK088
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.62 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.59 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 4.49 (dd, J = 11.5, 2.4 Hz, 1H), 4.45 - 4.38 (m, 1H), 4.10 (dd, J = 11.6, 7.4 Hz, 1H), 2.48 - 2.21 (m, 10H), 2.14 (s, 3H), 1.91 - 1.76 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.20, 153.36 (d, J CF = 246.9 Hz), 153.08, 148.98, 146.13, 143.28, 130.09, 128.05 (d, J CF = 11.7 Hz), 127.72, 125.44 (d, J CF = 4.3 Hz), 112.50, 109.58, 108.55 (d, J CF = 19.8 Hz), 108.13, 72.40, 67.37, 54.78, 53.11, 52.65, 45.76, 27.61. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C23H26BrFN5O2 +, 502.1248; 실측치, 502.1240.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-8-[2-(피롤리딘-1-일)에틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (JGK089).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.62 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.59 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 4.49 (dd, J = 11.5, 2.4 Hz, 1H), 4.47 - 4.41 (m, 1H), 4.10 (dd, J = 11.5, 7.4 Hz, 1H), 2.68 - 2.53 (m, 2H), 2.50 - 2.40 (m, 4H), 1.89 - 1.81 (m, 2H), 1.73 - 1.65 (m, 4H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.20, 153.36 (d, J CF = 246.9 Hz), 153.07, 148.98, 146.13, 143.28, 130.07, 128.10, 127.71, 125.44 (d, J CF = 4.6 Hz), 112.48, 109.60, 108.55 (d, J CF = 19.8 Hz), 108.15, 72.31, 67.37, 53.57, 50.97, 29.58, 23.14. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C22H23BrFN4O2 +, 473.0983; 실측치, 473.0976.
(±)-N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-8-[2-(피페리딘-1-일)에틸]-7,8-디하이드로[1,4]디옥시노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK090
).
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ 9.62 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.59 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.21 (td, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 4.49 (dd, J = 11.5, 2.4 Hz, 1H), 4.44 - 4.37 (m, 1H), 4.10 (dd, J = 11.6, 7.4 Hz, 1H), 2.48 - 2.43 (m, 2H), 2.41 - 2.27 (m, 4H), 1.90 - 1.77 (m, 2H), 1.54 - 1.45 (m, 4H), 1.42 - 1.34 (m, 2H). 13C NMR (126 MHz, DMSO-d 6): δ 157.19, 153.34 (d, J CF = 246.7 Hz), 153.07, 149.00, 146.11, 143.29, 130.07, 128.10, 127.71, 125.44 (d, J CF = 4.3 Hz), 112.48, 109.60, 108.55 (d, J CF = 19.9 Hz), 108.14, 72.50, 67.40, 54.02, 53.87, 27.70, 25.63, 24.13. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C23H25BrFN4O2 +, 487.1139; 실측치, 487.1133.
N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-8,9-디하이드로-7H-[1,4]디옥세피노[2,3-g]퀴나졸린-4-아민 (
JGK091
).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.71 (s, 1H), 8.65 (ddd, J = 8.3, 7.3, 1.5 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.39 (br, 1H), 7.28 (ddd, J = 8.1, 6.5, 1.5 Hz, 1H), 7.11 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 4.41 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.38 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 2.32 (p, J = 5.8 Hz, 1H). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 157.06, 156.08, 153.93, 151.62, 150.19 (d, J CF = 242.7 Hz), 147.83, 128.53 (d, J CF = 10.4 Hz), 127.39, 125.32 (d, J CF = 4.7 Hz), 121.84, 119.15, 111.47, 110.85, 108.62 (d, J CF = 19.3 Hz), 70.86, 70.51, 31.03. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C17H14BrFN3O2 +, 390.0248; 실측치, 390.0236.
N-(3-브로모-2-플루오로페닐)-2H-[1,3]디옥솔로[4,5-g]퀴나졸린-8-아민 (
JGK092
).
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.69 (s, 1H), 8.58 (ddd, J = 8.3, 7.3, 1.5 Hz, 1H), 7.28 (ddd, J = 8.1, 6.5, 1.6 Hz, 1H), 7.25 (br, 1H), 7.14 (s, 1H), 7.11 (td, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 6.17 (s, 2H), 하나의 양성자 신호 실종(아마도 클로로포름 신호에 의해 은폐됨). 13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ 156.10, 153.37, 153.22, 150.22 (d, J CF = 242.3 Hz), 149.37, 148.43, 128.67 (d, J CF = 10.4 Hz), 127.28, 125.30 (d, J CF = 4.7 Hz), 121.84, 110.75, 108.64 (d, J CF = 19.4 Hz), 106.29, 102.48, 96.49. HRMS (DART): m/z [M + H]+ 다음에 대한 계산치: C15H10BrFN3O2 +, 361.9935; 실측치, 361.9925.
실시예 19: JGK 시리즈의 예시적인 화합물의 대사 연구
예시적 화합물(10 mM)을 37°C에서 최대 90분 동안 인간, 개, 마우스 또는 래트 간 마이크로솜(1 mg/mL)에서 인큐베이션했다. 아세토니트릴을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 대조군(무화합물) 마이크로솜 연구를 병렬로 실행했다. Luna Omega Polar C18, 1.6m, 2.1 x 30mm 컬럼이 장착된 Waters Xevo G2 QTof에서 LCMS 연구를 수행했다. 예시적 대사체의 구조가 도 47에 도시된다.
참고에 의한 편입
본 명세서에 언급된 모든 공보 및 특허는 각각의 개별 공보 또는 특허가 구체적으로 그리고 개별적으로 참고로 편입되도록 표지된 것처럼 이로써 참고로 전체적으로 편입된다. 상충하는 경우에, 본 명세서에서의 임의의 정의를 포함하여 본원이 제어할 것이다.
등가물
본 발명의 특정 구현예가 논의되었지만, 상기 설명은 예시적이고 제한적이지 않다. 본 발명의 많은 변형은 본 명세서 및 하기 청구항의 검토에 의해 당해 분야의 숙련가에게 명백하게 될 것이다. 본 발명의 전체 범위는 그것의 동등한 전체 범위 및 명세서와 함께, 이러한 변형과 함께 청구항을 참고하여 결정되어야 한다.
Claims (115)
- 식 I 또는 식 I*의 화합물:
(I) (I*)
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공하고, 여기서:
Z는 아릴 또는 헤테로아릴;
R2a 및 R2b는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택되고;
R3는 수소, 알킬, 또는 아실;
R4는 알콕시;
R5는 알킬; R7 및 R8는, 각각 독립적으로, 수소, 알킬, 예컨대 알콕시알킬, 아르알킬, 또는 아릴아실로부터 선택되고;
R11는 수소, 알킬, 할로, CN, NO2, OR7, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴; 그리고
R12는 수소, 알킬, 할로, CN, NO2, OR8, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴; 또는 R11 및 R12 함께 결합하여 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 링을 완성됨. - 제 1항에 있어서, R2a는 수소이면, R2b는 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택되는 화합물.
- 제 1항에 있어서, R2b는 수소이면, R2a는 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택되는 화합물.
- 선행하는 항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물은 식 (IVa) 또는 식 (IVb)의 화합물:
(IVa) (IVb)
또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
R6은 각각의 경우 알킬, 알콕시, OH, CN, NO2, 할로, 알케닐, 알키닐, 아르알킬옥시, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되는 화합물. - 제 1-4항 중 어느 한 항에 있어서, R11는 수소인 화합물.
- 제 1-4항 중 어느 한 항에 있어서, R11는 OR7인 화합물.
- 제 6항에 있어서, R7는 수소인 화합물.
- 제 6항에 있어서, R7는 알킬인 화합물.
- 제 6항에 있어서, R7는 알콕시알킬인 화합물.
- 제 6항에 있어서, R7는 아릴아실인 화합물.
- 제 1-10항 중 어느 한 항에 있어서, R12는 헤테로아릴, 예컨대 푸라닐인 화합물.
- 제 11항에 있어서, 헤테로아릴은 알킬, 알콕시, OH, CN, NO2, 할로,, 또는
로 치환되는 화합물.
- 제 1-10항 중 어느 한 항에 있어서, R12는 OR8인 화합물.
- 제 13항에 있어서, R8는 수소인 화합물.
- 제 13항에 있어서, R8는 알콕시알킬인 화합물.
- 제 15항에 있어서, R8는,
, 또는
로 치환된 알킬인 화합물.
- 제 15항에 있어서, R8는 아실인 화합물.
- 제 1-4항 중 어느 한 항에 있어서, R11 및 R12는 결합하여 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 링, 예컨대 5-원, 6-원, 또는 7-원 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 링을 형성하는 화합물.
- 제 18항에 있어서, 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭 링은 하이드록실, 알킬 (예를 들어, 메틸), 또는 알케닐 (예를 들어, 비닐)로 치환되는 화합물.
- 제 1-3항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물은 식 Ia, Ib, Ic, 또는 Id의 화합물:
(Ia) (Ib)
(Ic) (Id)
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서:
X는 O, S, 또는 NH;
Z는 아릴 또는 헤테로아릴;
R1는 수소 또는 알킬;
R2a 및 R2b는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택되고;
R3는 수소, 알킬, 또는 아실;
R4는 알콕시;
R5는 알킬; 그리고
n은 0-3인 화합물. - 제 1-20항 중 어느 한 항에 있어서, R2a 또는 R2b는 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택되는 화합물.
- 제 20 또는 21항에 있어서, 화합물은 식 (IIa) 또는 식 (IIb)의 화합물:
(IIa) (IIb)
또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
R6은 각각의 경우 알킬, 알콕시, OH, CN, NO2, 할로, 알케닐, 알키닐, 아르알킬옥시, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되는 화합물. - 제 22항에 있어서, R1는 헤테로사이클릴 (예를 들어, 질소-함유 헤테로사이클릴, 예컨대 모르폴린, 피페리디닐, 피롤로디닐, 또는 피페라지닐, 예컨대 N-메틸 피페라지닐)로 치환된 알킬 (예를 들어, 메틸 또는 에틸)인 화합물.
- 제 22항에 있어서, R1는 아미노 (예를 들어, 디메틸 아미노)로 치환된 알킬 (예를 들어, 메틸 또는 에틸)인 화합물.
- 제 20-24항 중 어느 한 항에 있어서, R1는 식 A로 나타내어지고:
(A)
여기서,
R13a 및 R13b는 각각 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고; 또는 R13a 및 R13b는 결합하여 헤테로사이클릴을 형성하고; 그리고
y은 0-3인 화합물. - 제 22항에 있어서, R1는 하이드록실로 치환된 알킬 (예를 들어, 메틸 또는 에틸)인 화합물.
- 제 20-26항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 S 배치형태인 화합물.
- 제 20-26항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 R 배치형태인 화합물.
- 제 1-28항 중 어느 한 항에 있어서, R3는 수소인 화합물.
- 제 1-28항 중 어느 한 항에 있어서, R3는 아실인 화합물.
- 제 30항에 있어서, R3는 알킬아실인 화합물.
- 제 30항에 있어서, R3는 알킬옥시아실인 화합물.
- 제 30항에 있어서, R3는 아실옥시알킬인 화합물.
- 제 30항에 있어서, R3는
; 그리고
R9는 알킬인 화합물. - 제 1-34항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 2-플루오로-3-클로로페닐, 2-플루오로페닐, 2,3-디플루오로페닐, 2,4-디플루오로페닐, 2,5-디플루오로페닐, 2,6-디플루오로페닐, 2,4,6-트리플루오로페닐, 펜타플루오로페닐, 2-플루오로-3-브로모페닐, 2-플루오로-3-에티닐페닐, 및 2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐인 화합물.
- 제 1-34항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 3-에티닐페닐인 화합물.
- 제 1-34항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 3-클로로-4-((3-플루오로벤질)옥시)벤젠인 화합물.
- 제 1-34항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐인 화합물.
- 제 1-34항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 2-플루오로-3-브로모페닐인 화합물.
- 제 1-34항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 2-플루오로-5-브로모페닐인 화합물.
- 제 1-34항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 2,6-디플루오로-5-브로모페닐인 화합물.
- 제 1-34항 중 어느 한 항에 있어서:
Z는 다음으로부터 선택되는 하나의 R6로 치환되고
또는
; 그리고
R9 및 R10는 알킬로부터 독립적으로 선택되는 화합물. - 제 1-34항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물은 식 (IIIa)의 화합물:
(IIIa)
또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
각각의 R6은 플루오로, 클로로, 또는 브로모로부터 독립적으로 선택되는 화합물. - 제 1-34항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물은 식 (IIIb)의 화합물:
(IIIb)
또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
각각의 R6은 플루오로, 클로로, 또는 브로모로부터 독립적으로 선택되는 화합물. - 제 1-34항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물은 식 (IIIc)의 화합물:
(IIIc);
또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이고, 여기서
각각의 R6은 플루오로, 클로로, 또는 브로모로부터 독립적으로 선택되는 화합물. - 제 1-45항 중 어느 한 항에 있어서, R2a는 수소인 화합물.
- 제 1-45항 중 어느 한 항에 있어서, R2a는 할로 (예를 들어, 플루오로)인 화합물.
- 제 1-47항 중 어느 한 항에 있어서, R2b는 수소인 화합물.
- 제 1-47항 중 어느 한 항에 있어서, R2b는 할로 (예를 들어, 플루오로)인 화합물.
- 제 1-49항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물은:
,
,
,
,
,
,
,
,
,
, 또는
; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인 화합물.
- 제 1-49항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물은:
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
, 및
; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인 화합물.
- 제 1항에 있어서, 화합물은:
또는
; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인 화합물.
- 제 1-49항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물은:
또는
; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인 화합물.
- 선행하는 항 중 어느 한 항의 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
- EGFR 또는 그것의 변이체, 예컨대 ΔEGFR, EGFR 세포외 돌연변이체, EGFR A289, EGFR T263, 및/또는 EGFR 활성화 돌연변이체 예를 들어 ex19 결실을 억제하는 방법으로서, 대상체에게 청구항 1 내지 54 중 어느 한 항의 화합물 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
- 암을 치료하는 방법으로서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 청구항 1 내지 54 중 어느 한 항의 화합물 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
- 제 56항에 있어서, 암은 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 결장암, 결장직장암, 식도암, 섬유육종, 위암, 위장암, 머리, 척추 및 목 암, 카포시 육종, 신장암, 백혈병, 간암, 림프종, 흑색종, 다발성 골수종, 췌장암, 음경암, 고환 생식세포 암, 흉선종 암종, 흉선 암종, 폐암, 난소암, 또는 전립선암인 방법.
- 제 57항에 있어서, 암은 신경아교종, 별아교세포종 또는 교모세포종인 방법.
- 대상체에게 글루코스 대사 억제제 및 부가적 물질을 투여하는 포함하고, 여기서 글루코스 대사 억제제는 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이고 부가적 물질는 세포질 p53 안정화제인, 대상체에서 암을 치료하는 방법.
- 제 59항에 있어서, 암은 방광암, 골암, 뇌암, 유방암, 심장암, 자궁경부암, 결장암, 결장직장암, 식도암, 섬유육종, 위암, 위장암, 머리, 척추 및 목 암, 카포시 육종, 신장암, 백혈병, 간암, 림프종, 흑색종, 다발성 골수종, 췌장암, 음경암, 고환 생식세포 암, 흉선종 암종, 흉선 암종, 폐암, 난소암, 또는 전립선암인 방법.
- 제 59항에 있어서, 암은 다형상 교모세포종, 신경아교종, 저급 별아교세포종, 혼합 올리고별아교세포종, 털모양별아교세포종, 다형 황색별아교세포종, 뇌실막밑거대 세포 별아교세포종, 역형성별아교세포종, CNS 암, 비-CNS 암, 또는 CNS 전이 또는 폐암인 방법.
- 제59 항에 있어서, 암은 신경아교종, 별아교세포종 또는 교모세포종인 방법.
- 제 55-62항 중 어느 한 항에 있어서, 방법은 암 세포 증식을 감소시키는 방법.
- 제 59-63항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 글루코스 대사 억제제에 감수성을 가진다고 결정된 방법.
- 제 64항에 있어서, 대상체는 다음을 포함하는 방법에 의해 글루코스 대사 억제제에 감수성을 가진다고 결정된 방법:
a. 대상체로부터 제1 혈액 샘플을 얻는 것;
b. 대상체를 케톤체생성성식사로 처리하는 것;
c. 일정 시간 동안 케톤체생성성식사로 처리 후 대상체로부터 제2 혈액 샘플을 얻는 것;
d. 제1 및 제2 혈액 샘플내 글루코스 수준을 측정하는 것;
e. 제2 혈액 샘플 내 글루코스 수준을 제1 혈액 샘플 내 글루코스 수준과 비교하는 것; 그리고
f. 제2 혈액 샘플 내 글루코스 수준이 제1 혈액 샘플 내 글루코스 수준과 비교하여 감소되면 대상체가 감수성이라고 결정하는 것. - 제 65항에 있어서, 제2 혈액 샘플 및 대조 혈액 샘플 사이의 글루코스 수준의 감소가 0.15 mM 또는 그 초과인 방법.
- 제 65항에 있어서, 제2 혈액 샘플 및 대조 혈액 샘플 사이의 글루코스 수준의 감소가 0.20 mM 또는 그 초과인 방법.
- 제 65항에 있어서, 제2 혈액 샘플 및 대조 혈액 샘플 사이의 글루코스 수준의 감소가 0.15 mM - 2.0 mM 범위인 방법.
- 제 65항에 있어서, 제2 혈액 샘플 및 대조 혈액 샘플 사이의 글루코스 수준의 감소가 0.25 mM - 1.0 mM 범위인 방법.
- 제 59-69항 중 어느 한 항에 있어서, 세포질 p53 안정화제는 MDM2 억제제인 방법.
- 제 70항에 있어서, MDM2 억제제는 뉴틀린인 방법.
- 제 70항에 있어서, MDM2 억제제는 뉴틀린-3 또는 이다사뉴틀린인 방법.
- 제 72항에 있어서, 대상체는 50 mg 내지 1600 mg의 이다사뉴틀린가 투여되는 방법.
- 제 72 또는 73항에 있어서, 대상체는 100 mg의 이다사뉴틀린가 투여되는 방법.
- 제 72 또는 73항에 있어서, 대상체는 150 mg의 이다사뉴틀린가 투여되는 방법.
- 제 72 또는 73항에 있어서, 대상체는 300 mg의 이다사뉴틀린가 투여되는 방법.
- 제 72 또는 73항에 있어서, 대상체는 400 mg의 이다사뉴틀린가 투여되는 방법.
- 제 72 또는 73항에 있어서, 대상체는 600 mg의 이다사뉴틀린가 투여되는 방법.
- 제 72 또는 73항에 있어서, 대상체는 1600 mg의 이다사뉴틀린가 투여되는 방법.
- 제 70항에 있어서, MDM2 억제제는 RO5045337, RO5503781, RO6839921, SAR405838, DS-3032, DS-3032b, 또는 AMG-232인 방법.
- 제 59-70항 중 어느 한 항에 있어서, 세포질 p53 안정화제는 BCL-2 억제제인 방법.
- 제 81항에 있어서, BCL-2 억제제는 안티센스 올리고데옥시뉴클레오타이드 G3139, mRNA 길항제 SPC2996, 베네토클락스 (ABT-199), GDC-0199, 오바토클락스, 파클리탁셀, 나비토클락스 (ABT-263), ABT-737, NU-0129, S 055746, 또는 APG-1252인 방법.
- 제 59-70항 중 어느 한 항에 있어서, 세포질 p53 안정화제는 Bcl-xL 억제제인 방법.
- 제 83항에 있어서, Bcl-xL 억제제는 WEHI 539, ABT-263, ABT-199, ABT-737, 사부토클락스, AT101, TW-37, APG-1252, 또는 감보그산인 방법.
- 제 59-84항 중 어느 한 항에 있어서, 글루코스 대사 억제제 및 세포질 p53 안정화제는 동일 조성물에서 투여되는 방법.
- 제 59-84항 중 어느 한 항에 있어서, 글루코스 대사 억제제 및 세포질 p53 안정화제는 별도 조성물에서 투여되는 방법.
- 제 55-86항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 재발성 또는 난치성인 방법.
- 제 55-87항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 치료 경험이 없는 방법.
- 제 59-88항 중 어느 한 항에 있어서, 방법은 부가적 요법의 투여를 추가로 포함하는 방법.
- 글루코스 대사 억제제 및 세포질 p53 안정화제를 포함하고, 여기서 글루코스 대사 억제제는 제1-53항 중 어느 한 항의 화합물인 약제학적 조성물.
- 제 90항에 있어서, 세포질 p53 안정화제는 MDM2 억제제인 약제학적 조성물.
- 제 91항에 있어서, MDM2 억제제는 뉴틀린인 약제학적 조성물.
- 제 91 또는 92항에 있어서, MDM2 억제제는 뉴틀린-3 또는 이다사뉴틀린인 약제학적 조성물.
- 제 91항에 있어서, MDM2 억제제는 RO5045337, RO5503781, RO6839921, SAR405838, DS-3032, DS-3032b, 또는 AMG-232인 약제학적 조성물.
- 제 90항에 있어서, 세포질 p53 안정화제는 BCL-2 억제제인 약제학적 조성물.
- 제 95항에 있어서, BCL-2 억제제는 안티센스 올리고데옥시뉴클레오타이드 G3139, mRNA 길항제 SPC2996, 베네토클락스 (ABT-199), GDC-0199, 오바토클락스, 파클리탁셀, 나비토클락스 (ABT-263), ABT-737, NU-0129, S 055746, 또는 APG-1252인 약제학적 조성물.
- 제 90항에 있어서, 세포질 p53 안정화제는 Bcl-xL 억제제인 약제학적 조성물.
- 제 97항에 있어서, Bcl-xL 억제제는 WEHI 539, ABT-263, ABT-199, ABT-737, 사부토클락스, AT101, TW-37, APG-1252, 또는 감보그산인 약제학적 조성물.
- 반응식 1 또는 반응식 2에 따르는, 제1-52항 중 어느 한 항의 화합물의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 제조방법:
반응식 1
반응식 2
여기서:
X는 O, S, 또는 NH;
Z는 아릴 또는 헤테로아릴;
R1는 알킬;
R2a 및 R2b는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 할로, CN, 및 NO2로부터 선택되고;
R3는 수소, 알킬, 또는 아실;
R4는 알콕시;
R5는 알킬;
R21는 이탈기, 예를 들어, 할로알킬 또는 설포닐알킬로 치환된 알킬;
B는 염기;
Nu는 질소-함유 헤테로사이클 (예를 들어, 적어도 하나의 N-H 결합을 갖는), 아미노알킬, 또는 하이드록시알킬;
Sv1는 용매; 그리고
n은 0-3임. - 제 99항에 있어서, R21는 설포닐알킬 (예를 들어, CH3S(O)2OCH2-)인 방법.
- 제 99 또는 100항에 있어서, B는 질소성 염기 (예를 들어, 트리에틸아민 또는 디이소프로필에틸아민)인 방법.
- 제 99-101항 중 어느 한 항에 있어서, Nu는 적어도 하나의 N-H 결합을 갖는 헤테로사이클 (예를 들어, 모르폴린, N-메틸피페라진, 피페라딘, 또는 피롤리딘)인 방법.
- 제 99-102항 중 어느 한 항에 있어서, Nu는 아미노알킬 (예를 들어, 디메틸아민)인 방법.
- 제 99-103항 중 어느 한 항에 있어서, 용매는 아프로틱 용매 (예를 들어, 디메틸포름아미드)인 방법.
- 제 99-104항 중 어느 한 항에 있어서, 방법은 반응식 3 또는 반응식 4에 따르는 단계를 추가로 포함하는 방법:
반응식 3
반응식 4
여기서:
R22는 알킬 또는 하이드록시알킬;
R23a 및 R23b는 각각 알킬;
R24는 아미노아릴 또는 아미노헤테로아릴; 그리고
Sv2는 산임. - 제 105항에 있어서, R22는 하이드록시알킬인 방법.
- 제 105 또는 106항에 있어서, R23a 및 R23b는 각각 메틸인 방법.
- 제 105-107항 중 어느 한 항에 있어서, R24는 아미노아릴인 방법.
- 제 105-107항 중 어느 한 항에 있어서, R24는 아미노헤테로아릴인 방법.
- 제 105-109항 중 어느 한 항에 있어서, Sv2는 알킬산 (예를 들어, 아세트산)인 방법.
- 제 105-110항 중 어느 한 항에 있어서, 단계는 범위 115-150°C 온도에서 수행되는 방법.
- 제 111항에 있어서, 단계는 범위 125-130°C 온도에서 수행되는 방법.
- 제 105-112항 중 어느 한 항에 있어서, 단계는 염기, 예컨대 암모늄 하이드록사이드로 처리를 추가로 포함하는 방법.
- 제 99-113항 중 어느 한 항에 있어서, 방법은 정제 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제 114항에 있어서, 정제 단계은 칼럼 크로마토그래피, 분취용 박층 크로마토그래피, 또는 고성능 액체 크로마토그래피를 포함하는 방법.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201962819322P | 2019-03-15 | 2019-03-15 | |
| US62/819,322 | 2019-03-15 | ||
| US201962904241P | 2019-09-23 | 2019-09-23 | |
| US62/904,241 | 2019-09-23 | ||
| PCT/US2020/022743 WO2020190765A2 (en) | 2019-03-15 | 2020-03-13 | Compositions and methods for treating cancer |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20210151820A true KR20210151820A (ko) | 2021-12-14 |
Family
ID=72521289
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020217032873A KR20210151820A (ko) | 2019-03-15 | 2020-03-13 | 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법 |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11377451B2 (ko) |
| EP (1) | EP3938354A4 (ko) |
| JP (1) | JP7474269B2 (ko) |
| KR (1) | KR20210151820A (ko) |
| CN (2) | CN113811528A (ko) |
| AU (1) | AU2020241703A1 (ko) |
| BR (1) | BR112021018295A2 (ko) |
| CA (1) | CA3133688A1 (ko) |
| CL (1) | CL2021002409A1 (ko) |
| CO (1) | CO2021013496A2 (ko) |
| CR (1) | CR20210498A (ko) |
| IL (1) | IL286350A (ko) |
| MX (1) | MX2021011272A (ko) |
| SG (1) | SG11202109662YA (ko) |
| WO (1) | WO2020190765A2 (ko) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20200290978A1 (en) * | 2017-09-26 | 2020-09-17 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for treating cancer |
| CN113811528A (zh) | 2019-03-15 | 2021-12-17 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于治疗癌症的组合物和方法 |
| WO2022061202A1 (en) * | 2020-09-21 | 2022-03-24 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for treating cancer |
| US20230364091A1 (en) * | 2020-09-21 | 2023-11-16 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for treating cancer |
| WO2022155311A1 (en) * | 2021-01-14 | 2022-07-21 | The Regents Of The University Of California | Methods and systems for analysis of drug target engagement and treatment of cancer |
| WO2022240583A1 (en) * | 2021-05-12 | 2022-11-17 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods and materials for treating cancer |
| CN113307799B (zh) * | 2021-05-21 | 2022-07-19 | 大连医科大学 | 一种检测葡萄糖醛酸转移酶1a1荧光探针及其应用 |
| CA3233057A1 (en) * | 2021-09-23 | 2023-03-30 | Erasca, Inc. | Egfr inhibitor polymorph forms |
| WO2023244639A1 (en) * | 2022-06-14 | 2023-12-21 | The Regents Of The University Of California | Methods of predicting cns cancer response to treatment with egfr inhibitors |
| WO2024081447A1 (en) * | 2022-10-14 | 2024-04-18 | The Regents Of The University Of California | Egfr inhibitors for treating lung cancer |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5538325A (en) * | 1978-09-11 | 1980-03-17 | Sankyo Co Ltd | 4-anilinoquinazoline derivative and its preparation |
| US5747498A (en) | 1996-05-28 | 1998-05-05 | Pfizer Inc. | Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines |
| US6706721B1 (en) | 1998-04-29 | 2004-03-16 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | N-(3-ethynylphenylamino)-6,7-bis(2-methoxyethoxy)-4-quinazolinamine mesylate anhydrate and monohydrate |
| KR100397792B1 (ko) * | 2001-06-28 | 2003-09-13 | 한국과학기술연구원 | 4-(페닐아미노)-[1,4]디옥사노[2,3-ｇ]퀴나졸린 유도체 및그의 제조방법 |
| CN1854130B (zh) | 2005-04-15 | 2011-04-20 | 中国医学科学院药物研究所 | 喹唑啉衍生物、及其制法和药物组合物与用途 |
| WO2008046242A1 (fr) | 2006-10-16 | 2008-04-24 | Institute Of Mataria Medica, Chinese Academy Of Medical Sciences | Nouveaux dérivés quinazolines, leurs procédés de préparation et leurs utilisations |
| ES2535176T3 (es) | 2009-09-28 | 2015-05-06 | Qilu Pharmaceutical Co., Ltd | Derivados de 4-(anilino sustituido)quinazolina como inhibidores de la tirosina quinasa |
| ITPD20110091A1 (it) | 2011-03-24 | 2012-09-25 | Univ Padova | Inibitori multitirosinchinasi utili per le patologie correlate: modelli farmacoforici, composti identificati tramite questi modelli, metodi per la loro preparazione, la loro formulazione e il loro impiego terapeutico. |
| CA2969974C (en) * | 2014-12-15 | 2020-08-04 | The Regents Of The University Of Michigan | Small molecule inhibitors of egfr and pi3k |
| CN105017163A (zh) | 2015-08-25 | 2015-11-04 | 佛山市赛维斯医药科技有限公司 | 双乙氧基苯并喹唑啉类酪氨酸激酶抑制剂、制备方法及其用途 |
| US10473255B2 (en) | 2015-12-29 | 2019-11-12 | Ge-Hitachi Nuclear Energy Americas Llc | Reactor pressure vessel including pipe restraint device, and/or a pipe restraint device |
| US20190016689A1 (en) | 2016-01-06 | 2019-01-17 | Trillium Therapeutics Inc. | Novel fluorinated quinazoline derivatives as egfr inhibitors |
| CN106432202B (zh) | 2016-09-22 | 2019-04-02 | 郑州大学第一附属医院 | 喹唑啉类衍生物及其应用 |
| US20200290978A1 (en) | 2017-09-26 | 2020-09-17 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for treating cancer |
| CN113811528A (zh) | 2019-03-15 | 2021-12-17 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于治疗癌症的组合物和方法 |
| US20230364091A1 (en) | 2020-09-21 | 2023-11-16 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for treating cancer |
| WO2022061299A1 (en) | 2020-09-21 | 2022-03-24 | The Regents Of The University Of California | Non-invasive functional companion assays for oncogene targeted therapy for brain cancer |
| WO2022061202A1 (en) | 2020-09-21 | 2022-03-24 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for treating cancer |
| CA3233057A1 (en) | 2021-09-23 | 2023-03-30 | Erasca, Inc. | Egfr inhibitor polymorph forms |
| WO2023244639A1 (en) | 2022-06-14 | 2023-12-21 | The Regents Of The University Of California | Methods of predicting cns cancer response to treatment with egfr inhibitors |
-
2020
- 2020-03-13 CN CN202080034742.XA patent/CN113811528A/zh active Pending
- 2020-03-13 SG SG11202109662Y patent/SG11202109662YA/en unknown
- 2020-03-13 EP EP20773177.9A patent/EP3938354A4/en active Pending
- 2020-03-13 JP JP2021555445A patent/JP7474269B2/ja active Active
- 2020-03-13 AU AU2020241703A patent/AU2020241703A1/en active Pending
- 2020-03-13 CN CN202210268803.XA patent/CN115215808A/zh active Pending
- 2020-03-13 CR CR20210498A patent/CR20210498A/es unknown
- 2020-03-13 CA CA3133688A patent/CA3133688A1/en active Pending
- 2020-03-13 BR BR112021018295A patent/BR112021018295A2/pt unknown
- 2020-03-13 KR KR1020217032873A patent/KR20210151820A/ko unknown
- 2020-03-13 MX MX2021011272A patent/MX2021011272A/es unknown
- 2020-03-13 WO PCT/US2020/022743 patent/WO2020190765A2/en active Application Filing
-
2021
- 2021-09-13 IL IL286350A patent/IL286350A/en unknown
- 2021-09-14 US US17/475,144 patent/US11377451B2/en active Active
- 2021-09-15 CL CL2021002409A patent/CL2021002409A1/es unknown
- 2021-10-11 CO CONC2021/0013496A patent/CO2021013496A2/es unknown
-
2022
- 2022-06-29 US US17/853,573 patent/US20230115366A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP7474269B2 (ja) | 2024-04-24 |
| CL2021002409A1 (es) | 2022-06-17 |
| BR112021018295A2 (pt) | 2021-11-23 |
| MX2021011272A (es) | 2021-10-01 |
| EP3938354A2 (en) | 2022-01-19 |
| JP2022526266A (ja) | 2022-05-24 |
| WO2020190765A3 (en) | 2020-11-26 |
| CR20210498A (es) | 2022-01-11 |
| US20220064177A1 (en) | 2022-03-03 |
| CA3133688A1 (en) | 2020-09-24 |
| US11377451B2 (en) | 2022-07-05 |
| WO2020190765A2 (en) | 2020-09-24 |
| AU2020241703A1 (en) | 2021-10-14 |
| SG11202109662YA (en) | 2021-10-28 |
| IL286350A (en) | 2021-10-31 |
| EP3938354A4 (en) | 2022-12-28 |
| CO2021013496A2 (es) | 2022-01-17 |
| CN113811528A (zh) | 2021-12-17 |
| US20230115366A1 (en) | 2023-04-13 |
| CN115215808A (zh) | 2022-10-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7474269B2 (ja) | がんを治療するための組成物及び方法 | |
| AU2018341454B2 (en) | Compositions and methods for treating cancer | |
| ES2598118T3 (es) | Compuestos de oxazolidin-2-ona y usos de los mismos como inhibidores de PI3Ks | |
| US20120077811A1 (en) | Prodrug forms of kinase inhibitors and their use in therapy | |
| CN115003307A (zh) | 用于预防或治疗与kras突变相关的癌症的药物组合物 | |
| WO2016168704A1 (en) | Ksr antagonists | |
| Dokla et al. | 1, 2, 4-Oxadiazole derivatives targeting EGFR and c-Met degradation in TKI resistant NSCLC | |
| WO2020027083A1 (ja) | キナゾリン化合物を有効成分とする医薬組成物 | |
| US20240058340A1 (en) | Compositions and methods for treating cancer | |
| TW202140485A (zh) | 化合物及其用途 | |
| CA3205008A1 (en) | Pharmaceutical combinations comprising a kras g12c inhibitor and uses of a kras g12c inhibitor for the treatment of cancers | |
| KR20210110664A (ko) | Tam 및 met 키나제의 억제제로서의 퀴놀린 화합물 | |
| EP3125901B1 (en) | Derivatives of cephalosporin for treating cancer | |
| WO2022262797A1 (en) | Combination of an erk inhibitor and a kras inhibitor and uses thereof | |
| US20230364091A1 (en) | Compositions and methods for treating cancer | |
| EA044668B1 (ru) | Композиции и способы для лечения рака | |
| KR20220042136A (ko) | 복소 고리 화합물 | |
| Chang | HI-511 inhibits both BRAF and AURKB to overcome malignant melanoma drug resistance and metastasis |