JP7429458B2 - 抗シワ組成物、抗シワマイクロニードルパッチおよびその製造方法 - Google Patents

Description

１．発明の分野
本発明は組成物、マイクロニードルパッチおよびその製造方法、より具体的には抗シワ組成物、抗シワマイクロニードルパッチ、およびその製造方法に関する。

２．従来技術の説明
最近では、経皮薬物送達は、薬物またはワクチンなどの活性成分の効果を発揮する薬物投与の、皮膚吸収による高プロファイル、非侵襲的方式となっている。経皮薬物送達は、消化器系により引き起こされる薬物分解および経口投与の結果として生じる主要な肝臓代謝を回避することができ、また皮下注射から生じる不安および疼痛を排除することができるが、従来の経皮薬物送達は、皮膚角質層の疎水性および負に帯電した特性により、水溶性薬物または水溶性ワクチンに適したものではない。

上述の弱点に対して、従来の技術は複数のミクロンサイズのマイクロニードル構造をその基材上に有するマイクロニードルパッチを開発した。これらマイクロニードル構造は、皮膚の角質層を貫通し、薬物またはワクチンを表皮に送達および放出することができる。マイクロニードルパッチを用いた薬物投与は、経口投与または皮下注射により引き起こされる多くの問題を解決するばかりでなく、前述の異なる種類の薬物またはワクチンがいかなる疼痛を引き起こすことなく、マイクロニードルパッチのマイクロニードル構造により表皮または真皮へと直接送達および放出され得るように、送達される薬物またはワクチンの種類を脂溶性および水溶性へとさらに拡大させることもできる。

マイクロニードルパッチの利点に基づき、医薬品およびワクチン分野に加えて、マイクロニードルパッチはまた美容医療関連分野、例えば、スキンケア美容にも徐々に適用されている。

ヒアルロン酸（ＨＡ）は極めて親水性および保水性があり、ヒトの身体の軟骨組織、体液または表皮組織に広く存在して、弾性および潤滑性を提供する。したがって、ＨＡはスキンケア美容製品として公知であり、皮膚の保湿およびしわの減少などの効果を有する。現在では、ＨＡ含有スキンケア美容製品の大部分は、皮膚への直接的塗布、経口ドリンク剤および錠剤、または皮下注射によりＨＡを補充するという目的をさらに達成している。しかし、上述されているように、皮膚への直接塗布も経口投与も、良好な吸収効果を有することができず、皮下注射は、例えば、疼痛を引き起こすこと、および操作が困難であること、という制限を有する。加えて、ＨＡは投与のためにマイクロニードルパッチにすることができるが、そのニードルの強度は普通、ＨＡの特性により不十分であるため、皮膚を穿刺する場合、ニードルは簡単に曲がり、破壊され、表皮または真皮にＨＡを実際に送達および放出することができない。

前述の問題のため、ＣＮ１０７２０７７８４Ａは、ニードルの主要材料として架橋したＨＡを採用して、構造的強度を増強し、これによって、皮膚を穿刺する際にニードルの曲がりを減少させるＨＡ含有マイクロニードルパッチを開示している。しかし、マイクロニードルパッチが皮膚を穿刺した後、放出ＨＡの溶解速度は皮膚美容効果、例えば、皮膚の保湿およびしわの減少などと密接に関連しており、ＣＮ１０７２０７７８４Ａで開示されたＨＡ含有マイクロニードルパッチは放出ＨＡの溶解速度が高くない。

ＣＮ１０７２０７７８４Ａ

したがって、皮膚美容効果、例えば、皮膚の保湿およびしわの減少などが加速され得るように、ニードルが皮膚を穿刺するように良好な構造的強度を有し、同時に放出ＨＡの溶解速度が高いＨＡ含有マイクロニードルパッチの開発および研究に対するさらなる必要性が存在する。

従来の技術の上述された弱点に基づき、本発明の目的は抗シワ組成物を提供することにあり、抗シワ組成物は、抗シワマイクロニードルパッチをさらに生産するためのニードルの材料であることができ、そのニードルは、皮膚を穿刺することが可能な機械的強度を有し、同時に放出ＨＡの溶解速度が高く、よって皮膚の保湿、皮膚の厚さおよび強度の増加、しわ伸ばしおよびしわの減少などの効果を発揮する。

上述された目的を達成するため、本発明は、抗シワ組成物であって、低分子ＨＡ、修飾ＨＡおよび架橋ＨＡを含み、修飾ＨＡの低分子ＨＡに対する重量比が０．１以上、４以下であり、修飾ＨＡの架橋ＨＡに対する重量比が３０未満である抗シワ組成物を提供する。

特定の種類のＨＡを同時に取り入れ、互いに相対するこれらの含有量を制御することにより、本発明の抗シワ組成物は、マイクロニードルパッチのニードルの材料として使用され、この材料は皮膚の穿刺のために良好な機械的強度を有するニードルを生成し、またＨＡを急速に溶解し、放出して、皮膚の保湿ならびに皮膚の厚さおよび強度の増加などの効果を発揮し、しわ伸ばしおよびしわの減少という目的を達成する。

好ましくは、低分子ＨＡの平均分子量は１キロダルトン（ｋＤａ）以上、１０ｋＤａ以下である。低分子ＨＡが１重量パーセント（重量％）の含有量で水に溶解した後、ｐＨ値は５．０～７．０であり、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、粘度は２センチポアズ（ｃＰ）未満である。

好ましくは、修飾ＨＡは、ＨＡがヒスチジンで修飾されてもよいことを示唆している。具体的には、前記「ヒスチジンで修飾されたＨＡ」とは、ヒスチジンがＨＡのヒドロキシル基に結合していることを示している。より具体的には、修飾ＨＡは、ヒスチジンで修飾されたＨＡ、ＨＡおよびヒスチジンを含んでもよく、修飾後、前記ＨＡおよび前記ヒスチジンは未反応の物質である。

好ましくは、修飾ＨＡが１重量％の含有量で水に溶解した後、ｐＨ値は５．０～７．０であり、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、粘度は２ｃＰ～９ｃＰである。

本発明に従い、架橋ＨＡは、架橋反応のためにＨＡを架橋剤に供することにより製造される。具体的に、架橋剤は１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）、ジビニルスルホン（ＤＶＳ）、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）、１－エチル（ｅｈｔｙｌ）－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）またはメタクリル酸グリシジル（ｇｌｙｃｉｄｙｌ ｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ）（ＧＭＡ）である。

好ましくは、架橋ＨＡが１重量％～５重量％の含有量で水に溶解した後、ｐＨ値は５．０～７．５であり、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、粘度は４０００ｃＰ～８０００ｃＰである。

好ましくは、抗シワ組成物は、防腐剤をさらに含むことができる。具体的に、防腐剤は、これらに限定されないが、ｐ－ヒドロキシアセトフェノン、ペンチレングリコール、ヘキサンジオール、カプリリルグリコール、フェノキシエタノール、ベンジルアルコール、サリチル酸、安息香酸、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、プロピオン酸、デヒドロ酢酸、クロルフェネシン（ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｅｓｉｎ）、ベヘントリモニウムクロリド、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、安息香酸ブチル、ジメチルオキサゾリジン、ブロモクロロフェン、ジクロロベンジルアルコール、エチルラウロイルアルギン酸塩酸塩、７－エチルビシクロオキサゾリジン、ギ酸、グルタラール、ヘキサミジン、亜硫酸ナトリウム、ヨードプロピニルブチルカルバメート、メチルイソチアゾリノン、ブチルパラベン、メチルパラベン、フェノキシイソプロパノール、酢酸フェニル水銀、トリクロカルバン、ウンデシレン酸、亜鉛ピリチオン、５－ブロモ－５－ニトロ－１，３－ジオキサン、ベンジルヘミホルマール、１，３－ジメチロール－５，５－ジメチルヒダントイン（ＤＭＤＭヒダントイン）、ジアゾリジニルウレア、イミダゾリジニルウレア、メテナミン、クオタニウム－１５、ヒドロキシメチルグリシンナトリウム、リューコノストック属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）／ダイコン根発酵ろ液、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）発酵液、アメリカヤマナラシ（Ｐｏｐｕｌｕｓ Ｔｒｅｍｕｌｏｉｄｅｓ）樹皮抽出物、クロフサスグリ抽出物またはこれらの任意の組合せであってよい。より好ましくは、防腐剤はｐ－ヒドロキシアセトフェノン、ペンチレングリコール、ラクトバチルス属発酵液またはこれらの任意の組合せを含む。

本発明の一部の実施形態では、抗シワ組成物は界面活性剤をさらに含み得る。具体的に、界面活性剤は、これらに限定されないが、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ－２０）、アラキジルグルコシド、デシルグルコシド、ラウリルグルコシド、Ｃ１２～２０アルキルグルコシド、ＰＥＧ－６カプリル酸／カプリン酸グリセリズ、カプリン酸ポリグリセリル－３、ステアリン酸ポリグリセリル－４、ジステアリン酸ポリグリセリル－１０、ラウリン酸ポリグリセリル－１０、イソステアリン酸ポリグリセリル－１０、ヤシ油脂肪酸ＰＥＧ－７グリセリル、ポリエチレングリコール、オリーブ油脂肪酸ソルビタン、パルミチン酸ソルビタンまたはこれらの任意の組合せを含み得る。

本発明の一部の実施形態では、抗シワ組成物は、ｐ－ヒドロキシアセトフェノンおよびペンチレングリコールを含み、抗シワ組成物の総重量に対して、ｐ－ヒドロキシアセトフェノンの含有量は０．０５重量％以上、１重量％以下であり、ペンチレングリコールの含有量は０．０５体積重量パーセント（ｖ／ｗ％）以上、１ｖ／ｗ％以下である。好ましくは、抗シワ組成物の総重量に対して、ｐ－ヒドロキシアセトフェノンの含有量は、０．０５重量％以上、０．５重量％以下であり、ペンチレングリコールの含有量は０．０５ｖ／ｗ％以上、０．５ｖ／ｗ％以下である。

本発明の一部の実施形態では、本発明の抗シワ組成物の効果に影響を与えることなく、抗シワ組成物は、これらに限定されないが、ホワイトニング成分、保湿成分、抗酸化剤、抗シワ成分またはこれらの任意の組合せをさらに含むことができる。例えば、ホワイトニング成分は、これらに限定されないが、コウジ酸、アルブチン、ナトリウムアスコルビルリン酸塩、リン酸マグネシウムアスコルビル、アスコルビルグリコシド、エラグ酸、カモミールＥＴ、トラネキサム酸セチルＨＣｌ、４－メトキシサリチル酸カリウム塩、３－Ｏ－エチルアスコルビン酸またはノナペプチドであってよい。保湿成分は、これらに限定されないが、セラミド、レシチン、グリセロール、多糖、タンパク質、コラーゲン、エラスチン、ペプチド、アミノ酸、クエン酸塩、尿酸、ウレア、グルコース、スクロース、フルクトース、グリコーゲン、グルコサミン、ムコ多糖体、乳酸、リン酸塩またはエチル－ｄｌ－２－ピロリドン－５－カルボキシレートである。抗酸化剤は、これらに限定されないが、ブドウ抽出物、緑茶抽出物、イチョウ抽出物、ダイズ抽出物、ザクロ抽出物、ショウガ抽出物、酵母抽出物、コイックス抽出物、Ｒ－アルファ－リポ酸、グルカン、補酵素Ｑ１０、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、ビタミンＣおよびその誘導体またはビタミンＥおよびその誘導体であってよい。抗シワ成分は、これらに限定されないが、レチノールおよびその誘導体、銅ペプチド（ＧＨＫ－Ｃｕ）、ペンタペプチドまたはヘキサペプチドであってよい。

好ましくは、修飾ＨＡの低分子ＨＡに対する重量比は、０．１以上、３以下である。より好ましくは、修飾ＨＡの低分子ＨＡに対する重量比は０．１以上、２以下である。

好ましくは、修飾ＨＡの架橋ＨＡに対する重量比は２以上、２５以下である。より好ましくは、修飾ＨＡの架橋ＨＡに対する重量比は２以上、２３以下である。

加えて、上述された目的を達成するため、本発明は、ベースおよび複数のニードルを含む抗シワマイクロニードルパッチであって、ベースが上側の表面を有し、複数のニードルが上側の表面に形成され、各ニードルの材料が上述された抗シワ組成物を含む、抗シワマイクロニードルパッチをさらに提供する。

抗シワマイクロニードルパッチのニードルの材料として特定の組成を有する抗シワ組成物を導入することによって、ニードルは皮膚を穿刺するための良好な機械的強度を有し、さらにＨＡは急速に溶解され、放出されて、皮膚の保湿ならびに皮膚の厚さおよび強度の増加などの効果を発揮し、しわ伸ばしおよびしわの減少という目的を達成することができる。

本発明に従い、ベースの材料は溶解性または膨潤性のあるポリマー材料であってよい。具体的には、ポリマー材料は生体適合性材料または生分解性の材料であってよい。例えば、ベースの材料は、これらに限定されないが、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリビニルピロリドン／酢酸ビニル（ＰＶＰ／ＶＡ）またはこれらの組合せであってよい。

本発明の一部の実施形態では、ベースの材料は、ＨＰＭＣ、ＰＶＰ／ＶＡ、Ｔｗｅｅｎ－２０、ラクトバチルス属発酵液、ｐ－ヒドロキシアセトフェノンおよびペンチレングリコールを含有する防腐剤、ならびに有機シリコーン消泡剤を含む。

本発明に従い、抗シワマイクロニードルパッチのニードルの機械的強度は、本発明の抗シワマイクロニードルパッチは破損せずに角質層を貫通することができるよう、０．０５８Ｎ／ニードルを超える。好ましくは、抗シワマイクロニードルパッチのニードルの機械的強度は０．０８Ｎ／ニードルを超える。より好ましくは、抗シワマイクロニードルパッチのニードルの機械的強度は０．１Ｎ／ニードルを超える。

本発明に従い、抗シワマイクロニードルパッチのニードルの水中での５分間の溶解速度は６０％を超える。好ましくは、抗シワマイクロニードルパッチのニードルの水中での５分間の溶解速度は、６５％以上、９０％以下である。より好ましくは、抗シワマイクロニードルパッチのニードルの水中での５分間の溶解速度は７５％以上、９０％以下である。さらにより好ましくは、抗シワマイクロニードルパッチのニードルの水中での５分間の溶解速度は８０％以上、９０％以下である。

本発明の一部の実施形態では、ニードルの厚さ、すなわち、ニードルのニードル長は、２７０マイクロメートル（μｍ）以上、３３０μｍ以下である。

本発明の一部の実施形態では、ベースの厚さは４０μｍ以上、９０μｍ以下である。

本発明に従い、各ニードルのニードル形状は、これらに限定されないが、円錐形、ピラミッド形状または尖塔形状であってよい。

本発明に従い、ニードルの密度は１ニードル／ｃｍ^２～１０００ニードル／ｃｍ^２の範囲、好ましくは、１ニードル／ｃｍ^２～５００ニードル／ｃｍ^２の範囲であってよい。

加えて、本発明は前述の抗シワマイクロニードルパッチの製造方法であって、以下のステップ：ステップ（ａ）：基準面および複数の穴を有するマスター型を準備するステップであって、複数の穴が基準面からの溝加工により形成されるステップ、ステップ（ｂ）：複数の穴にニードル溶液を充填して、ニードル溶液の表面を基準面のレベルにそろえるステップであって、ニードル溶液が低分子ＨＡ、修飾ＨＡおよび架橋ＨＡを含み、修飾ＨＡの低分子ＨＡに対する重量比が０．１以上、４以下であり、修飾ＨＡの架橋ＨＡに対する重量比が３０未満であるステップ、ステップ（ｃ）：ニードル溶液を乾燥させて、複数のニードルを形成するステップであって、各ニードルの表面が基準面より低いステップ、ステップ（ｄ）：複数の穴にベース溶液を充填するステップであって、ベース溶液がニードルおよび基準面の表面を覆うステップ、ステップ（ｅ）：ベース溶液を乾燥させて、ベースが複数のニードルと接着するようにベースを形成するステップ、ならびにステップ（ｆ）：互いに接着したニードルおよびベースをマスター型から離型して、抗シワマイクロニードルパッチを得るステップ、
を含む、方法。

本発明の製造方法に従い、この方法により作製された抗シワマイクロニードルパッチは皮膚を穿刺することが可能な良好な機械的強度を有し、またＨＡを急速に溶解および放出させて、皮膚の保湿ならびに皮膚の厚さおよび強度の増加などの効果を発揮し、しわ伸ばしおよびしわの減少という目的を達成する。

好ましくは、１０００グラム（ｇ）のニードル溶液中の低分子ＨＡの重量、修飾ＨＡの重量、および架橋ＨＡの重量の合計は、２０ｇ以上、７０ｇ以下である。より好ましくは、１０００ｇのニードル溶液中の低分子ＨＡの重量、修飾ＨＡの重量、および架橋ＨＡの重量の合計は２５ｇ以上、６０ｇ以下である。

好ましくは、ニードル溶液の粘度は、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定され、ニードル溶液の粘度は２ｃＰ以上、５０ｃＰ以下である。より好ましくは、ニードル溶液の粘度は、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定され、ニードル溶液の粘度は３ｃＰ以上、３０ｃＰ以下である。

本発明の一部の実施形態では、ニードル溶液は、前述の抗シワ組成物および水を均一に混合することにより製造される。

本発明の一部の実施形態では、ニードル溶液は、低分子ＨＡ、修飾ＨＡ、架橋ＨＡ水溶液および水を均一に混合することにより製造され、架橋ＨＡ水溶液の固形分は４．４重量％～４．６重量％であり、架橋ＨＡ水溶液の粘度は、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、４０００ｃＰ以上、８０００ｃＰ以下である。

本発明の一部の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ｂ１）：ニードル溶液をマスター型上に形成し、基準面および複数の穴を覆うように、ニードル溶液を複数の穴へと流れるようにするステップ；およびステップ（ｂ２）：基準面の上のニードル溶液を除去して、ニードル溶液の表面を基準面のレベルにそろえるステップをさらに含むこともできる。

好ましくは、ニードル溶液を複数の穴に充填する方式はステップ（ｂ）で真空排気および遠心分離を含むことができる。本発明の一部の実施形態では、ニードル溶液およびマスター型は、排気のためにオーブン内に配置して、ニードル溶液が基準面および複数の穴を覆うようにすることができる。本発明の別の実施形態では、ニードル溶液およびマスター型は一緒に遠心分離して、ニードル溶液が基準面および複数の穴を覆うようにすることもできる。ここで、オーブンの圧力は－７００ｍｍＨｇ～－７６０ｍｍＨｇであってよく、遠心分離の回転速度は２０ｘｇ～２００００ｘｇ、好ましくは、２０ｘｇ～１２０００ｘｇであってよい。より好ましくは、ニードル溶液を複数の穴に充填する方式はステップ（ｂ）の真空排気である。

好ましくは、ベース溶液を複数の穴に充填する方式はステップ（ｄ）で真空排気および遠心分離を含むことができる。本発明の一部の実施形態では、ベース溶液およびマスター型は、排気のためにオーブン内に配置して、ベース溶液が基準面および複数の穴を覆うようにすることができる。本発明の別の実施形態では、ベース溶液およびマスター型は一緒に遠心分離して、ベース溶液が基準面および複数の穴を覆うようにすることもできる。ここで、オーブンの圧力は－７００ｍｍＨｇ～－７６０ｍｍＨｇであってよく、遠心分離の回転速度は２０ｘｇ～２００００ｘｇ、好ましくは、２０ｘｇ～１２０００ｘｇであってよい。より好ましくは、ベース溶液を複数の穴に充填する方式はステップ（ｄ）の真空排気である。

本発明の一部の実施形態では、マスター型は硬質マスター型であってよく、硬質マスター型の材料は、これらに限定されないが、ガラス、石英、ケイ素ウエハー、金属、金属酸化物または金属合金であってよい。前記金属は、これらに限定されないが、アルミニウム、銅またはニッケルであってよい。本発明の別の実施形態では、マスター型は軟質マスター型であってよく、軟質マスター型の材料は、これらに限定されないが、ポリマー、金属ホイルまたはフレキシブルガラスである。前記ポリマーは、これらに限定されないが、ポリ（ジメチルシロキサン）（ＰＤＭＳ）、ポリ（メチルメタクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリカーボネート（ＰＣ）またはポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）であってよい。

好ましくは、ステップ（ｂ）およびステップ（ｄ）において、ニードル溶液およびベース溶液はそれぞれ、これらに限定されないが、スリットまたはスロットダイコーティング、ブレードコーティング、スライドコーティング、ディップコーティング、インクジェットプリンティング、ノズルプリンティング、ディスペンサーまたはこれらの任意の組合せにより、マスター型上に形成することができる。ステップ（ｂ）のニードル溶液およびステップ（ｄ）のベース溶液は、同じ方式または異なる方式でマスター型上に形成することができる。好ましくは、本発明の製造方法において、ニードル溶液およびベース溶液は、スリットまたはスロットダイコーティングによりマスター型上に逐次的に形成することができる。より好ましくは、本発明の製造方法において、ニードル溶液およびベース溶液は、ディスペンサーによりマスター型上に逐次的に形成することができる。

本発明の一部の実施形態では、スリットまたはスロットダイコーティングがステップ（ｂ）においてニードル溶液のコーティングに採用された場合、コーティングギャップは１μｍ～５０００μｍであってよく、コーティングスピードは１メートル／分（ｍ／ｍｉｎ）～１００ｍ／ｍｉｎであってよい。このプロセスのパラメーターは、ニードル溶液の特性およびマイクロニードルパッチの仕様に応じて調節可能である。スリットまたはスロットダイコーティングがステップ（ｄ）においてベース溶液のコーティングに採用された場合、コーティングギャップは１μｍ～３０００μｍであってよく、コーティングスピードは１ｍ／ｍｉｎ～１００ｍ／ｍｉｎであってよい。このプロセスのパラメーターは、ベース溶液の特性およびマイクロニードルパッチの仕様に応じて調節可能である。

好ましくは、ステップ（ｂ）では、コーティングギャップは１００μｍ～５０００μｍであってよく、ステップ（ｄ）ではコーティングスピードは１ｍ／ｍｉｎ～１００ｍ／ｍｉｎであってよく、コーティングギャップは１００μｍ～３０００μｍであってよく、コーティングスピードは１ｍ／ｍｉｎ～１００ｍ／ｍｉｎであってよい。

好ましくは、ステップ（ｃ）は室温乾燥または加熱により達成することができる。より好ましくは、ステップ（ｃ）は室温乾燥で達成され、乾燥温度は２０℃～３５℃であり、周辺相対湿度（ＲＨ）は１０％～４０％であり、時間は０．５時間（ｈｒ）～３ｈｒである。

好ましくは、ステップ（ｅ）は室温乾燥または加熱で達成することができる。より好ましくは、ステップ（ｅ）は室温乾燥で達成され、乾燥温度は２０℃～３５℃であり、周辺ＲＨは５０％～８０％であり、時間は２０ｈｒ～７２ｈｒである。

本発明の一部の実施形態では、ステップ（ｅ）は２ステップ乾燥で達成される。具体的には、第１の乾燥ステップでは、乾燥温度は２０℃～３５℃であり、周辺ＲＨは３０％～５０％であり、時間は１０ｈｒ～２４ｈｒであり、第２の乾燥ステップでは、乾燥温度は２０℃～３５℃であり、周辺ＲＨは５０％～８０％であり、時間は１０ｈｒ～７２ｈｒである。

本発明に従い、マスター型の複数の穴の形状は、これらに限定されないが、円錐体、ピラミッド形状または尖塔形状であってよい。マスター型は基準面および複数の穴を有し、各穴は基準面から溝加工により形成される。各穴の深さは７５μｍ～１５００μｍ、好ましくは、１５０μｍ～１２００μｍ；より好ましくは、１７５μｍ～１０００μｍ；さらにより好ましくは、２００μｍ～１０００μｍ；さらにより好ましくは２７０μｍ～９００μｍの範囲である。各穴の最大幅は３８μｍ～８００μｍ；好ましくは、７５μｍ～６５０μｍ；より好ましくは、８５μｍ～５５０μｍの範囲である。

明細書では、前記「ヒアルロン酸」とは、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩またはその組合せを示し、前記「ヒアルロン酸塩」はヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸マグネシウムまたはヒアルロン酸カルシウムを含み得る。

明細書では、「下端点値から上端点値」で表される範囲は、特に特定されていない場合、この範囲が下端点値以上であり、上端点値以下であることを示す。例えば、「ニードルの密度は１ニードル／ｃｍ^２～１０００ニードル／ｃｍ^２の範囲であってもよい」とは、ニードルの密度が「１ニードル／ｃｍ^２以上、１０００ニードル／ｃｍ^２以下」であることを示す。

本発明の他の目的、利点および新規の特徴は以下の詳細な説明からより明らかとなる。

実施形態のいくつかの製造方法は、本発明の実施を例示するために以下に例示されている。当業者であれば、明細書に開示された含有量による、本発明の利点および効果を簡単に理解することができる。本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、本発明を実施または適用するために様々な修正および変化形が可能である。

試薬の説明
１．低分子ＨＡ：Ｋｅｗｐｉｅ ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入；平均分子量は約２ｋＤａである。１重量％で水に溶解後、ｐＨ値は５．０～７．０であり、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、粘度は２ｃＰ未満である。
２．ヒスチジン－修飾ＨＡ：Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから購入；１重量％で水に溶解後、ｐＨ値は５．０～７．０であり、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、粘度は約４ｃＰ～５ｃＰである。
３．架橋ＨＡ水溶液１：Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから購入；ＢＤＤＥは架橋剤として使用される。固形分は約４．５重量％であり、ｐＨ値は５．０～７．５であり、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、粘度は約５０００ｃＰ～８０００ｃＰである。
４．架橋ＨＡ水溶液２：Ｂｌｏｏｍａｇｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｌｉｍｉｔｅｄ．から購入；ＢＤＤＥは架橋剤として使用される。固形分は約５重量％であり、ｐＨ値は５．０～７．５であり、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、粘度は２５００００ｃＰ以上である。
５．ヒアルロン酸：Ｋｅｗｐｉｅ ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入；平均分子量は１０ｋＤａである。０．１重量％で水に溶解後、ｐＨ値は２．０～４．０であり、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、粘度は１．５ｃＰ未満である。
６．カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）：Ｓｈｉｎ－Ｅｔｓｕ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入；平均分子量は約９０ｋＤａである、４重量％で水に溶解後、ｐＨ値は６．５～８．５であり、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、粘度は５０ｃＰ以上２００ｃＰ以下である。
７．ｐ－ヒドロキシアセトフェノン：Ｓｙｍｒｉｓｅ ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入。
８．ペンチレングリコール：ＡＣＴＩＶＯＮ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入。
９．ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ－２０）：ＣＲＯＤＡ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入。
１０．第１のＨＰＭＣ：Ｓｈｉｎ－Ｅｔｓｕ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入；製品名称：６０ＳＨ－４０００；２重量％で水に溶解後、２０℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、粘度は約３０００ｃＰ～５０００ｃＰである。
１１．第２のＨＰＭＣ：Ｓｈｉｎ－Ｅｔｓｕ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入；製品名称：ＰＨＡＲＭＡＣＯＡＴ６４５；２重量％で水に溶解後、２０℃で、剪断速度１秒^－１で測定した場合、粘度は約３．６ｃＰ～５．１ｃＰである。
１２．ポリビニルピロリドン／酢酸ビニル（ＰＶＰ／ＶＡ）：ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入。
１３．ラクトバチルス属発酵液：ＡＣＴＩＶＥ ＭＩＣＲＯ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入；製品名称：Ｌｅｕｃｉｄａｌ（登録商標）ＳＦ ＭＡＸ。
１４．有機シリコーン消泡剤：Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入；製品名称：ＤＯＷＳＩＬ（商標）６２ Ａｄｄｉｔｉｖｅ。

実施例１～８：抗シワマイクロニードルパッチ
最初に、基準面および複数の穴を有するマスター型を採用した。複数の穴を基準面からの溝加工により形成し、マスター型上に整列配置した。マスター型の材料はポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）であり、複数の穴の密度は７５．０８穴／ｃｍ^２であり、複数の穴は辺長１ｃｍの正方配列で配置し、各穴はピラミッド形状であった。各穴の深さ、すなわち各穴の先端と基準面との間の垂直距離は約２７０μｍ～３３０μｍであり、各穴の最大幅、すなわち基準面に整列した各穴の断面の最大内径は約１３０μｍ～１７０μｍであった。

次に、以下の表１に列挙された組成に従い、適切な量の低分子ＨＡ、ヒスチジン－修飾ＨＡ、架橋ＨＡ水溶液１、ｐ－ヒドロキシアセトフェノンおよびペンチレングリコールを水に加え、均一に混合して、ニードル溶液を得た。その後、ディスペンサーにより、約５ｇ～７ｇのニードル溶液をマスター型に滴下し、その複数の穴を覆った。次いで、ニードル溶液を有するマスター型を排気のために真空オーブン内に配置して、圧力を－７００ｍｍＨｇ～－７６０ｍｍＨｇに減少させて、ニードル溶液が基準面から複数の穴へと下向きに流れ、基準面およびすべての穴を覆うようにした。次に、基準面の上のニードル溶液を完全に除去して、ニードル溶液の表面を基準面のレベルにそろえ、ニードル溶液を有するマスター型を３０℃およびＲＨ１０％～３０％の環境に１ｈｒ配置して、ニードル溶液を乾燥させて複数のニードルを作った。ニードルの表面はすべて基準面より低く、複数のニードルを有するマスター型を得た。実施例１～８のニードル溶液の粘度を粘度計（モデル：ＭＣＲ３０２；Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒから購入）により、２５℃で、剪断速度１秒^－１で測定し、結果を以下の表１に列挙した。加えて、実施例１～８の総重量１０００ｇのニードル溶液に対する、低分子ＨＡの重量、ヒスチジン修飾ＨＡの重量および架橋ＨＡの重量の合計（「ニードル溶液中の３種ＨＡの総量」と略記）もまた以下の表１に列挙し、単位はｇ／ｋｇであった。前記架橋ＨＡの重量は固体の重量を示し、これは架橋ＨＡ水溶液１の重量にその固形分（４．５重量％）を乗じることによって算出することができた。例えば、実施例１では、ニードル溶液は６．７２重量％の架橋ＨＡ水溶液１を含有し、これは、１０００ｇのニードル溶液が６７．２ｇの架橋ＨＡ水溶液１を含有することを示すものであった。次いで、架橋ＨＡ水溶液１の重量にその固形分４．５重量％を乗じることによって、架橋ＨＡの重量、すなわち、３．０２４ｇを得た。したがって、実施例１では、総重量１０００ｇのニードル溶液に対する、低分子ＨＡの重量、ヒスチジン修飾ＨＡの重量および架橋ＨＡの重量の合計は、１０００ｇ×４．０３重量％、１０００ｇ×１．３４重量％および３．０２４ｇの合計であり、５６．７２ｇに等しかった。加えて、ヒスチジン修飾ＨＡの低分子ＨＡに対する重量比およびヒスチジン修飾ＨＡの架橋ＨＡに対する重量比もまた以下の表１に列挙した。架橋ＨＡの重量は、架橋ＨＡ水溶液１の重量にその固形分（４．５重量％）を乗じることによって得られ、ヒスチジン修飾ＨＡの架橋ＨＡに対する重量比は、ヒスチジン修飾ＨＡの重量の架橋ＨＡの重量に対する比により算出することができることを理解されたい。例えば、実施例１では、ニードル溶液は６．７２重量％の架橋ＨＡ水溶液１を含有し、これは、ニードル溶液が０．３０２４重量％の架橋ＨＡを含有することを示すものであった。次いで、架橋ＨＡをさらにヒスチジン修飾ＨＡ（１．３４重量％）と比較してヒスチジン修飾ＨＡの架橋ＨＡに対する重量比を得、これは約４．４３であった。

次に、適切な量の第１のＨＰＭＣ、第２のＨＰＭＣ、ＰＶＰ／ＶＡ、ｐ－ヒドロキシアセトフェノン、ペンチレングリコール、Ｔｗｅｅｎ－２０、ラクトバチルス属発酵液および有機シリコーン消泡剤を水に加え、均一に混合して、ベース溶液を得た。ここで、ベース溶液の総重量に対して、第１のＨＰＭＣの含有量は約０．９６重量％であり、第２のＨＰＭＣの含有量は約０．４８重量％であり、ＰＶＰ／ＶＡの含有量は約１．９２重量％であり、Ｔｗｅｅｎ－２０の含有量は約０．０２ｖ／ｗ％であり、ラクトバチルス属発酵液の含有量は約０．８重量％であり、ｐ－ヒドロキシアセトフェノンの含有量は約０．２５重量％であり、ペンチレングリコールの含有量は約０．１６ｖ／ｗ％であり、有機シリコーン消泡剤の含有量は約０．０２重量％であった。その後、約７ｇ～８．５ｇのベース溶液を、複数のニードルを有するマスター型にディスペンサーで滴下し、その複数の穴を覆った。次いで、ベース溶液を有するマスター型を排気のために真空オーブン内に配置し、圧力を－７００ｍｍＨｇ～－７６０ｍｍＨｇに減少させて、ベース溶液が基準面から複数の穴へと下向きに流れ、基準面および穴の中のすべてのニードルを覆うようにした。次に、ベース溶液を有するマスター型を２３℃およびＲＨ３０％～５０％の環境に２４ｈｒ配置し、続いて２３℃およびＲＨ５５％～７５％の環境に６０ｈｒ配置して、ベース溶液を乾燥させてベースを作った。ベースをマスター型のニードルおよび基準面に接着し、複数のニードルおよびベースを有するマスター型を得た。

最後に、最終生成物を複数のニードルおよびベースを有するマスター型から離型して、実施例１～８の抗シワマイクロニードルパッチを得た。

比較例１～３：抗シワマイクロニードルパッチ
比較例１～３の抗シワマイクロニードルパッチを製造する方法は実施例のものと類似していた。主な違いは、ニードル溶液が以下の表１に列挙された比較例１～３の組成に従い製造されたことであり、残りの製造は実施例の記載に従うことで、比較例１～３の抗シワマイクロニードルパッチを得た。比較例１～３のニードル溶液の粘度を２５℃で、剪断速度１秒^－１で、粘度計により測定し、結果を以下の表１に列挙した。加えて、比較例１～３のニードル溶液中の３種ＨＡの総量の結果もまた以下の表１に列挙した。また、ヒスチジン修飾ＨＡの低分子ＨＡに対する重量比およびヒスチジン修飾ＨＡの架橋ＨＡに対する重量比も以下の表１に列挙した。

比較例４～７：抗シワマイクロニードルパッチ
比較例４～７の抗シワマイクロニードルパッチの製造方法は実施例のものと類似していた。主な違いは、ニードル溶液が以下の表２に列挙された比較例４～７の組成に従い製造されたことであり、残りの製造は実施例の記載に従うことで、比較例４～７の抗シワマイクロニードルパッチを得た。ニードル溶液の固形分、および２５℃で、剪断速度１秒^－１で、粘度計により測定した比較例４～７のニードル溶液の粘度も以下の表２に列挙した。

試験例１：ニードル長の評価
実施例１～８および比較例１～７の抗シワマイクロニードルパッチをこの試験例に採用した。具体的には、ニードルが形成されたベースから、ニードル先端までの垂直距離を、顕微鏡で観察することにより直接測定した。各グループの５本のニードルをランダムに拾って測定し、結果を平均して、実施例１～８および比較例１～７の抗シワマイクロニードルパッチのニードル長を得た。これを以下の表３に列挙した。

試験例２：機械的強度の評価
実施例１～８および比較例１～７の抗シワマイクロニードルパッチをこの試験例に採用した。具体的には、実施例１～８および比較例１～７の抗シワマイクロニードルパッチを万能試験機器（モデル：３３４３、ＩＮＳＴＲＯＮから購入）内に配置し、次いで各マイクロニードルパッチのニードルの機械的強度を測定した。この試験例では、１０ミリメートル（ｍｍ）に設定した変位および６６ｍｍ／分に設定した速度で圧縮試験を行い、５００圧縮応力値を毎秒同時に受け取った。実施例１～８および比較例１～７のマイクロニードルパッチのニードルの機械的強度を以下の表３に列挙した。

表３の結果によると、抗シワ実施例１～８および比較例１～７のマイクロニードルパッチのニードル長はすべて約３００μｍであり、本発明の方法で製造したマイクロニードルパッチのニードル長が一貫性を有し、品質が安定しているという利点を有することが示された。さらにニードルの機械的強度の結果を参照すると、実施例１～８の抗シワマイクロニードルパッチのニードルの機械的強度はすべて０．０５８Ｎ／ニードルより高く、よって破損せずに角質層を貫通することができた。したがって、本発明の抗シワマイクロニードルパッチは、曲がりまたは破損なしに角質層を貫通し、これによって、皮膚下へのニードルの穿刺が確実となり、所望の効果を発揮した。

試験例３：溶解速度の評価
実施例１～８および比較例１～７の抗シワマイクロニードルパッチのニードルと同じ組成を有する試料を、溶解速度評価のため、上述の製造方法に従い製造した。次に、実施例１～８および比較例１～７の試料を、これら試料が同じ重量を有するように同じサイズに切断し、秤量した。次いで、試料を水に５分間浸漬した後、試料を取り出し、再度秤量した。浸漬前の試料の重量に対する、浸漬前の試料と浸漬後の試料との間の重量の差異をパーセンテージで水中での５分間の溶解速度として設定した。ここでは、水中での５分間の溶解速度が高いほど、ＨＡがより急速に溶解し、放出されたことを示した。実施例１～８および比較例１～７の水中での５分間の溶解速度を以下の表４に列挙した。

表４の結果によると、実施例１～８の水中での５分間の溶解速度はすべて６０％より高かった。この結果の中で、実施例２および８の水中での５分間の溶解速度は７０％より高く、実施例３および６の水中での５分間の溶解速度は７５％より高く、実施例４、５および７の水中での５分間の溶解速度は８０％より高かった。対照的に、比較例１～７の水中での５分間の溶解速度はすべて６０％より低く、比較例５（５６．２５％、比較例で最も高い）と実施例１（６９．３％、実施例で最も低い）の間の溶解速度の差異は２０％までにもなった。したがって、本発明の抗シワマイクロニードルパッチは特定の組成を有するニードルを採用したので、ＨＡは実際に急速に溶解し、放出することができ、よって、皮膚の保湿ならびに皮膚の厚さおよび強度の増加などの効果を発揮し、しわ伸ばしおよびしわの減少という目的を達成した。

試験例４：抗シワ評価
実施例７の抗シワマイクロニードルパッチをこの試験例に対して採用した。具体的には、眼窩周囲にしわがある２０人の対象（男性６人；女性１４人；年齢：３１～５７才）を集めた。対象に実施例７の抗シワマイクロニードルパッチを適用した後、抗シワ効果を完全に評価するために、皮膚刺激、皮膚の保湿、皮膚の厚さ、皮膚の強度およびしわの数について試験を行った。

（１）皮膚刺激試験
この試験では、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチを試験群として２．５ｃｍ^２のサイズに切断し、次いで対象の前腕の内側に平らに貼り付けた。加えて、０．９重量％の塩化ナトリウム溶液（ＴＵＮＧＨＳＩＮ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ ＣＯ．、ＬＴＤ．から購入）を対照群として設定し、次いで０．２ｍｌの塩化ナトリウム溶液を２．５ｃｍ^２のサイズの滅菌ガーゼに吸着させた。滅菌ガーゼもまた対象の前腕の内側に平らに貼り付け、耐水性および通気性のあるテープで固定した。皮膚刺激の評価は、対象に試験群および対照群を連続的に２４時間適用した後、試験群が適用された領域に皮膚刺激の症状が出現するかどうかを観察することによって達成した。ＩＳＯ １０９９３－１０：２０１０により示された皮膚刺激のスコア基準によると、スコア０は刺激反応なしを示した；スコア１は弱い陽性反応を示した（軽度の紅斑および／または皮膚の乾燥）；スコア２は中程度の陽性反応物を示した（明らかな紅斑および／または皮膚の乾燥、および適用された領域を超えて広がる可能性あり）；ならびにスコア３は強い反応を示した（浮腫および／または痂皮形成を伴う強い、びまん性紅斑）。次いで、各対象により提供された皮膚刺激のスコアを加算し、次いで対象の数で割って、試験群の皮膚刺激指数を得た。５より低い皮膚刺激指数は安全なレベルと考えられた。５～１５の間の皮膚刺激指数は許容レベルと考えられ、１５より高い皮膚刺激指数は軽度の刺激レベルと考えられた。

前述の２４ｈｒの皮膚刺激試験の後、２０人の対象から取得した、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチの皮膚刺激のスコアはすべて０、すなわち、いかなる刺激反応もなかった。したがって、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチの皮膚刺激指数もまた０であり、これは皮膚刺激なしの安全なレベルに相当した。

（２）皮膚の保湿試験
この試験例では、前述の皮膚刺激試験を完了した対象を、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチの皮膚の保湿効果についてさらに試験した。具体的には、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチを試験群と設定し、右目の下の領域から右目の目尻まで貼り付け、実施例７のニードル溶液を対照群と設定し、左目の下の領域から左目の目尻まで直接塗布した。各グループの塗布頻度は１週当たり２時間を４週間、これらの群を塗布する時間は毎回約６ｈｒであった。これらが群が未だ塗布されていない時点、すなわち、０週において、これらの群を連続的に２週間塗布した時点、およびこれらの群を連続的に４週間適用した時点で、眼窩周囲の表面皮膚における含水量および保湿能力を、生体電気に基づきＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標）（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ ＧｍｂＨから購入）で測定した。実施例７の抗シワマイクロニードルパッチおよび実施例７のニードル溶液を異なる期間塗布した後、眼窩周囲の皮膚における含水量の結果を測定し、以下の表５に列挙した。表では、値が高いほど、保湿能力が良いことを示し、単位はＡ．Ｃ．Ｕ（任意のキャパシタンス単位）で表した。表５では、「０週に対する差異」は、特定の週の含水量から０週の含水量を差し引き、次いで０週の含水量で割ったものを示し、パーセンテージで提示し、含水量の上昇度を表した。

表５の結果によると、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチを塗布した４週間の間、眼窩周囲の皮膚において測定された含水量は徐々に上昇した。２週の測定された含水量は０週と比較して３．３％上昇し、４週の測定された含水量は０週と比較してさらに５．８％上昇した。実施例７のニードル溶液の結果に関しては、２週の測定された含水量は０週と比較して１．８％上昇したが、４週の測定された含水量は０週と比較して上昇しなかった。さらに２週または４週に関わらず、眼窩周囲の皮膚において含水量を上昇させる効果は、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチよりも明らかに悪かった。したがって、実施例７のニードル溶液をマイクロニードルパッチへとさらに作り替えることは、眼窩周囲の皮膚における含水量の上昇というより良い効果を実際にもたらすことができ、より良い保湿能力を有した。

（３）皮膚の厚さおよび強度試験
この試験および前述の（２）皮膚の保湿試験は同時に行った。実施例７の抗シワマイクロニードルパッチおよび実施例７のニードル溶液が未だ対象に塗布されていない時点、すなわち、０週において、これらの群を２週間連続的に塗布し、これらの群を４週間連続的に塗布し、ＤｅｒｍａＬａｂ（登録商標）（Ｃｏｒｔｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入）により、目の下および目尻の皮膚の超音波画像の記録に基づき、眼窩周囲の真皮における構造的変化を評価した。前記ＤｅｒｍａＬａｂ（登録商標^）は真皮の超音波画像のプローブであり、超音波画像では、超音波エコーの強度を表すために色が使用された。濃い色は低い強度を示し、白色／黄色は高い強度を示した。一般的に、表皮は高い強度（白色および黄色）を有した。真皮は異なる色の組合せ、例えば、緑色、赤色および黄色（コラーゲンおよびエラスチンの構造を含む色領域）を有した。真皮の下の脂肪、筋肉および血管は低い強度（濃い緑色および黒色）を有した。実施例７の抗シワマイクロニードルパッチおよび実施例７のニードル溶液を異なる期間塗布した後の目の下および目尻の皮膚の厚さの測定結果を以下の表６に列挙した。値が高いほど、厚さが厚いことを示し、単位はμｍで表された。目の下および目尻の皮膚の強度の測定結果を以下の表７に列挙した。値が高いほど強度がより高いことを示し、単位は強度スコアで表された。表６および表７では、「０週に対する差異」は、特定の週の結果から０週の結果を差し引き、次いで０週の結果で割ったものを示し、パーセンテージで提示し、結果の上昇度を表した。

表６の結果によると、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチを塗布した４週間の間、目の下および目尻の皮膚の厚さは両方とも鮮明な上向き傾向にあった。この結果の中で、目の下の皮膚の厚さに対して、２週の結果は、０週と比較して１８．７％上昇し、４週の結果はさらに３３．１％上昇した。目尻の皮膚の厚さに対して、２週の結果は、０週と比較して１１．９％上昇し、４週の結果は、０週と比較してさらに３０．０％上昇した。実施例７のニードル溶液の結果に関しては、目の下の皮膚の厚さに対して、２週および４週の結果は、０週と比較して７．０％および２２．４％それぞれ上昇した。目尻の皮膚の厚さに対して、２週および４週の結果は、０週と比較して５．０％および１７．１％それぞれ上昇した。したがって、目の下および目尻の皮膚の厚さを上昇させるための実施例７のニードル溶液の効果は、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチより明らかに悪かった。すなわち、実施例７のニードル溶液をマイクロニードルパッチへとさらに作り替えることは、眼窩周囲の皮膚の厚さの上昇というより良い効果を実際にもたらすことができた。

表７の結果によると、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチを塗布した４週間の間、目の下および目尻の皮膚の強度は両方とも鮮明な上向き傾向にあった。この結果の中で、目の下の皮膚の強度に対して、２週の結果は、０週と比較して１５．５％上昇し、４週の結果はさらに３４．８％上昇し、目尻の皮膚の強度に対して、２週の結果は、０週と比較して１０．３％上昇し、４週の結果は、０週と比較してさらに１８．０％上昇した。実施例７のニードル溶液の結果に関しては、目の下の皮膚の強度に対して、２週および４週の結果は、０週と比較して１３．０％および１２．３％それぞれ上昇し、目尻の皮膚の強度に対して、２週および４週の結果は、０週と比較して１０．２％および１４．８％それぞれ上昇した。したがって、目の下および目尻の皮膚の強度を上昇させるための実施例７のニードル溶液の効果は、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチより明らかに悪かった。すなわち、実施例７のニードル溶液をマイクロニードルパッチへとさらに作り替えることは、眼窩周囲の皮膚の強度の上昇というより良い効果を実際にもたらすことができた。

（４）しわの減少試験
この試験および前述の（２）皮膚の保湿試験は同時に行った。実施例７の抗シワマイクロニードルパッチおよび実施例７のニードル溶液が未だ対象に塗布されていない時点、すなわち、０週において、これらの群を２週連続的に塗布し、およびこれらの群を４週間連続的に塗布し、目尻の皮膚の高分解能（１，２００万ピクセル）画像に基づき、目尻のしわの数をＶＩＳＩＡ（登録商標）Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｖｅｒ．７．０．１（Ｃａｎｆｉｅｌｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｉｎｃ．から購入）で分析した。実施例７の抗シワマイクロニードルパッチおよび実施例７のニードル溶液を異なる期間塗布した後、目尻のしわの数を以下の表８に列挙した。値が低いほど、しわの数が少ないことを示し、単位はカウント数で表された。表８では、「０週に対する差異」は、特定の週のしわの数から０週のしわの数を差し引き、次いで０週のしわの数で分ったものを示し、パーセンテージで提示し、しわの減少の度合を表した。

表８の結果によると、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチを塗布した４週間の間、目尻に測定されたしわの数は徐々に低減した。この結果の中で、２週の測定されたしわの数は、０週と比較して１．４％低減し、４週の測定されたしわの数は、０週と比較してさらに４．４％低減した。実施例７のニードル溶液の結果に関して、２週および４週のしわの数は、０週と比較して１．０％および２．０％それぞれ低減し、これは明確に実施例７のニードル溶液が２週間または４週間塗布されていたかに関わらず、目尻のしわの数の減少効果は、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチよりも明らかに悪いことを示した。したがって、実施例７のニードル溶液をマイクロニードルパッチへとさらに作り替えることは、より良いしわ伸ばし効果を実際にもたらすことができ、しわの減少のより良い能力を有した。

試験例５
抗シワマイクロニードルパッチと公知の抗シワ材料との間の比較
この試験例は、試験例４に示された、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチの眼窩周囲の皮膚の保湿の上昇、目の下の皮膚の厚さおよび強度の上昇ならびに目尻のしわの数の減少効果を採用し、さらに市販の抗シワ製品：Ｌａ Ｍｅｒ（登録商標）クリーム（本明細書でこれより以下対照群１と呼ぶ）および公知の抗シワ物質：レチノイン酸レチニル（本明細書でこれより以下対照群２と呼ぶ）と比較した。具体的には、０週と比較して、皮膚の保湿およびしわの数に対する影響を示すために、対照群１を１日１回４週間塗布し、０週と比較して、厚さおよび強度に対する影響を示すために、対照群２を１日２回、１２週間塗布した。異なる群の間で効果の差異を比較するため、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチ、対照群１および対照群２の皮膚の保湿、皮膚の厚さおよび強度ならびにしわの数の測定結果を以下の表９に列挙した。

表９の結果によると、対照群１と比較して、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチは皮膚の保湿の上昇効果は同等であり、同時にしわの数の減少効果はより良かった。特に、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチの塗布頻度が対照群１より明らかに低い状況において、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチは、対照群１よりも、皮膚の保湿の上昇およびしわの数の減少効果が実質的に優れているはずである。さらに、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチは、対照群２と比較して、皮膚の厚さおよび強度の上昇効果が同時により良かった。加えて、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチの塗布頻度は、対照群２の塗布頻度より明らかに低かった。すなわち、実施例７の抗シワマイクロニードルパッチはまた、対照群２と比較して、皮膚の厚さおよび強度の上昇効果が実質的に優れているはずである。したがって、公知の抗シワ材料と比較して、本発明の抗シワマイクロニードルパッチは皮膚の保湿の上昇、皮膚の厚さおよび強度の上昇、ならびにしわの数の減少というより良い効果を実際に有した。

結論として、本発明の抗シワ組成物の各成分の組成および比率を制御することにより、さらにこの抗シワ組成物をマイクロニードルパッチのニードルの材料として取り込むことにより、製造した抗シワマイクロニードルパッチは、マイクロニードルパッチを適用することによる良好な機械的強度を有するばかりでなく、ＨＡを急速に溶解および放出させて、皮膚の保湿ならびに皮膚の厚さおよび強度の増加効果も発揮し、しわ伸ばしおよびしわの減少という目的も達成し、よって重大な商業的価値を有する。

本発明の多くの特徴および利点が、本発明の構造および特徴の詳細と一緒に前述の説明に記載されてきたが、本開示は単なる例示にすぎない。本発明の原理内で、添付の特許請求の範囲に表現されている用語の広範な一般的意味により示される全範囲内で、細部、特に部材の形状、サイズ、および配置の点で変更が可能である。

Claims (5)

1. ベースおよび複数のニードルを含み、前記ベースが上側の表面を有し、前記複数のニードルが前記上側の表面に形成され、各ニードルの材料が抗シワ組成物を含み、
   前記抗シワ組成物が、低分子ヒアルロン酸、修飾ヒアルロン酸および架橋ヒアルロン酸を含む抗シワ組成物であって、修飾ヒアルロン酸の低分子ヒアルロン酸に対する重量比が０．１以上、４以下であり、修飾ヒアルロン酸の架橋ヒアルロン酸に対する重量比が３０未満である、抗シワ組成物であり、
   前記低分子ヒアルロン酸の平均分子量が１ｋＤａ以上、１０ｋＤａ未満であり、
   前記修飾ヒアルロン酸がヒスチジン修飾ヒアルロン酸である、
   抗シワマイクロニードルパッチ。
2. 前記抗シワ組成物が、ｐ－ヒドロキシアセトフェノン、ペンチレングリコール、ヘキサンジオール、カプリリルグリコール、フェノキシエタノール、ベンジルアルコール、サリチル酸、安息香酸、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、プロピオン酸、デヒドロ酢酸、クロルフェネシン、ベヘントリモニウムクロリド、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、安息香酸ブチル、ジメチルオキサゾリジン、ブロモクロロフェン、ジクロロベンジルアルコール、エチルラウロイルアルギン酸塩酸塩、７－エチルビシクロオキサゾリジン、ギ酸、グルタラール、ヘキサミジン、亜硫酸ナトリウム、ヨードプロピニルブチルカルバメート、メチルイソチアゾリノン、ブチルパラベン、メチルパラベン、フェノキシイソプロパノール、酢酸フェニル水銀、トリクロカルバン、ウンデシレン酸、亜鉛ピリチオン、５－ブロモ－５－ニトロ－１，３－ジオキサン、ベンジルヘミホルマール、１，３－ジメチロール－５，５－ジメチルヒダントイン、ジアゾリジニルウレア、イミダゾリジニルウレア、メテナミン、クオタニウム－１５、ヒドロキシメチルグリシンナトリウム、リューコノストック属／ダイコン根発酵ろ液、ラクトバチルス属発酵液、アメリカヤマナラシ樹皮抽出物、クロフサスグリ抽出物またはこれらの任意の組合せをさらに含む、請求項１に記載の抗シワマイクロニードルパッチ。
3. 請求項１に記載の抗シワマイクロニードルパッチの製造方法であって、以下のステップ：
   ステップ（ａ）：基準面および複数の穴を有するマスター型を準備するステップであって、前記複数の穴が前記基準面からの溝加工により形成されるステップ、
   ステップ（ｂ）：前記複数の穴にニードル溶液を充填して、前記ニードル溶液の表面を基準面のレベルにそろえるステップであって、前記ニードル溶液が低分子ヒアルロン酸、修飾ヒアルロン酸および架橋ヒアルロン酸を含み、前記修飾ヒアルロン酸の前記低分子ヒアルロン酸に対する重量比が０．１以上、４以下であり、前記修飾ヒアルロン酸の前記架橋ヒアルロン酸に対する重量比が３０未満であり、前記低分子ヒアルロン酸の平均分子量が１ｋＤａ以上、１０ｋＤａ未満であり、前記修飾ヒアルロン酸がヒスチジン修飾ヒアルロン酸である、ステップ、
   ステップ（ｃ）：ニードル溶液を乾燥させて、複数のニードルを形成するステップであって、各ニードルの表面が前記基準面より低いステップ、
   ステップ（ｄ）：前記複数の穴にベース溶液を充填するステップであって、前記ベース溶液が前記ニードルおよび前記基準面の表面を覆うステップ、
   ステップ（ｅ）：前記ベース溶液を乾燥させて、前記ベースが前記複数のニードルと接着するようにベースを形成するステップ、ならびに
   ステップ（ｆ）：互いに接着した前記ニードルおよび前記ベースを前記マスター型から離型して、前記抗シワマイクロニードルパッチを得るステップ、
   を含む、方法。
4. １０００ｇの前記ニードル溶液中の前記低分子ヒアルロン酸の重量、前記修飾ヒアルロン酸の重量、および前記架橋ヒアルロン酸の重量の合計が２０ｇ以上、７０ｇ以下である、請求項３に記載の製造方法。
5. ニードル溶液の粘度が２ｃＰ以上、５０ｃＰ以下である、請求項３に記載の製造方法。