JP7416831B2

JP7416831B2 - 高エナンチオ選択性第２級アルコールを作製する方法

Info

Publication number: JP7416831B2
Application number: JP2021572259A
Authority: JP
Inventors: チェン－デアトニーユ; イー－ファンシェ; シュ－イリン; チン－シェンチャオ; イン－チェンシェ; ミン－テンライ
Original assignee: アセンタウィッツファーマシューティカルズリミテッド
Priority date: 2019-02-21
Filing date: 2020-02-21
Publication date: 2024-01-17
Anticipated expiration: 2040-02-21
Also published as: EP3921295A1; US20220106339A1; EP3921295A4; US11773118B2; WO2020172506A1; JP2022521106A; CN113474315B; AU2020225477A1; KR20210132092A; CN114941015A; CN114941015B; TW202045731A; TWI834819B; BR112021016472A2; IL285721A; CA3131116A1; CN113474315A; AU2020225477B2

Description

関連出願
本開示は、２０１９年２月２１日に出願された米国特許仮出願第６２／８０８，７１２号の優先権を主張し、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本開示は、抗がん小分子プロドラッグとして設計された化合物ＯＢＩ－３４２４原薬の合成および対応する識別データに関する。

がんは、ヒトの罹患率および死亡率の主要原因の一つである。正常細胞を損傷するかまたは死滅させることなく、がん細胞を死滅させることが難しいため、がん処置は困難である。がん処置中に正常細胞を損傷するかまたは死滅させることは、患者における有害な副作用の原因であり、がん患者に投与される抗がん薬の量を制限する場合がある。
アルド－ケト還元酵素ファミリー１メンバーＣ３（ＡＫＲ１Ｃ３）は、ヒトにおいて、ＡＫＲ１Ｃ３遺伝子によりコードされる酵素である。この遺伝子は、４０を超える公知の酵素およびタンパク質からなる、アルド－ケト還元酵素スーパーファミリーのメンバーをコードする。これらの酵素は、ＮＡＤＨおよび／またはＮＡＤＰＨを補酵素として利用することにより、アルデヒドおよびケトンを、それらの対応するアルコールに変換することを触媒する。
多くのがん細胞は、正常細胞と比較して、ＡＫＲ１Ｃ３還元酵素を過剰発現する（例えば、Cancer Res. 2010, 70: 1573-1584; Cancer Res. 2010, 66: 2815-2825）。がん患者を処置するための選択的ＡＫＲ１Ｃ３還元酵素活性化プロドラッグを含み、がん患者を処置するのに好適な化合物に対する必要性が依然として存在する。ＰＣＴ特許出願の国際公開公報第２０１７／０８７４２８号は、以下の式Ｉもしくは式ＩＩを有する化合物：

またはそのそれぞれの塩、同位変異体、薬学的に許容される溶媒和物、もしくは水和物を開示した。前記化合物は、８０％以上、９０％以上、または９５％以上のエナンチオマー過剰率を有する。
ＰＣＴ特許出願の国際公開公報第２０１９／０６２９１９号は、化合物（ＯＢＩ－３４２４）および白血病を処置する方法を開示した。化合物ＯＢＩ－３４２４の特性を表１に列記した。

本開示の目的は、抗がん小分子プロドラッグとして設計された、化合物ＯＢＩ－３４２４原薬の合成プロセスおよび対応する識別データを提供することである。
一態様では、本開示は、式１の化合物を調製する方法であって、

式1
ステップ（１）：式２の化合物を式３ａの化合物と、ＢＨ₃、Ｂ－クロロジイソピノカンフェイルボラン（ＤＩＰ塩化物）、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ₄の存在下で反応させるステップ；および

ステップ（２）：ステップ（１）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させ；ステップ（Ｂ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させる
ステップを含む、方法を提供する。
［式中、Ｒは、

、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、電子求引基、または電子供与基である］
別の態様では、本開示は、式１の化合物を調製する方法であって、

式1
ステップ（１ａ）：式２の化合物を式３ａの化合物と、ＢＨ₃、ＤＩＰ塩化物、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ₄の存在下で反応させるステップ；

ステップ（１ｂ）：ステップ（１ａ）の生成物を無水酢酸（Ａｃ₂Ｏ）と反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１ｂ）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、およびＮａ₂ＣＯ₃と反応させ；ステップ（Ａ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、およびＮａ₂ＣＯ₃と反応させる
ステップを含む、方法を提供する。
［式中、Ｒは、

、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、電子求引基、または電子供与基である］
さらに別の態様では、本開示は、式４の化合物を調製する方法であって、

式4
ステップ（１）：式２の化合物を式３ｂの化合物と、ＢＨ₃、ＤＩＰ塩化物、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ₄の存在下で反応させるステップ；および

ステップ（２）：ステップ（１）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させ；ステップ（Ａ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させる
ステップを含む、方法を提供する。
［式中、Ｒは、

、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、電子求引基、または電子供与基である］
また別の態様では、本開示は、式４の化合物

式4
ステップ（１ａ）：式２の化合物を式３ｂの化合物と、ＢＨ₃、ＤＩＰ塩化物、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ₄の存在下で反応させるステップ；

ステップ（１ｂ）：ステップ（１ａ）の生成物を無水酢酸（Ａｃ₂Ｏ）と反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１ｂ）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、およびＮａ₂ＣＯ₃と反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、およびＮａ₂ＣＯ₃と反応させ；ステップ（Ｂ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させる
ステップを含む、方法を提供する。
［式中、Ｒは、

、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、電子求引基、または電子供与基である］

化合物ＯＢＩ－３４２３（Ｒ体）および化合物ＯＢＩ－３４２４（Ｓ体）の調製を示す図式である。化合物ＯＢＩ－３４２４－６のキラルＨＰＬＣデータを示す図である：（ａ）ＣＢＳ還元後のＯＢＩ－３４２４－６Ｒ／Ｓ混合物、Ｒ／Ｓ＝８４．２５／１５．２２（６９．４％ｅｅ）、（ｂ）リパーゼ濃縮後の化合物ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＲ（９９．８％ｅｅ）。ＴＨＦ中で（Ｒ）－ＣＢＳおよびＢＨ₃を使用した不斉還元による、Ｓ体優勢の化合物ＯＢＩ－３４２４－６のキラルＨＰＬＣデータを示す図である。化合物ＯＢＩ－３４２４－６Ｒ／Ｓ混合物とのリパーゼ選択的エステル化後の、化合物ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＳの酵素反応のキラルＨＰＬＣ分析データを示す図である。

定義
以下の定義は、読者の助けとなるように提供される。別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語、記号、および他の科学用語もしくは医学用語または専門用語は、化学および医学技術の熟練者により一般的に理解される意味を有することを意図する。場合によっては、一般的に理解される意味を有する用語は、明確および／または敏速な参照のために本明細書で定義され、本明細書にそのような定義を包含することは、当技術分野で一般に理解される用語の定義と実質的に異なることを表すと解釈されるべきではない。

全ての数字表示、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、および質量は、そのそれぞれの範囲を含み、典型的には、必要に応じて０．１、１．０、または１０．０の変化量で（＋）または（－）に変化し得る近似値である。全ての数字表示は、用語「約」が前に置かれていると理解され得る。本明細書に記載される試薬は例示的なものであり、そのようなものの等価物は当技術分野で公知であり得る。
「ａ」、「ａｎ」、および、「ｔｈｅ」は、文脈により明確に別段の指示がされない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば化合物（ａｃｏｍｐｏｕｎｄ）への言及は、１つもしくは複数の化合物または少なくとも１つの化合物を指す。したがって、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１つまたは複数の」および「少なくとも１つ」は、本明細書において互換的に使用される。

本明細書で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、組成物および方法が、記載された要素を含むが、他のものを除外しないことを意味することを意図する。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」とは、組成物および方法を定義するために使用される場合、組成物または方法に対して、あらゆる本質的に重要な他の要素を除外することを意味するものとする。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆ）」とは、特許請求された組成物および実質的な方法ステップに関して、他の原料の微量を超える要素を除外することを意味するものとする。これらの移行用語のそれぞれにより定義される実施形態は、本発明の範囲内である。したがって、方法および組成物は、付加的なステップおよび成分を含み得る（含む）か、あるいはまた、重要性がないステップおよび組成物を含んでいる（から本質的になる）か、あるいはまた、明示された方法ステップまたは組成物のみを意図している（からなる）ことが意図される。

用語「光学的に活性」および「エナンチオマー的に活性」は、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上、約９９．５％以上、約９９．８％以上、または約９９．９％以上のエナンチオマー過剰率（ｅｅ）を有する分子集合体を指す。特定の実施形態では、光学的またはエナンチオマー的に活性な化合物に関するエナンチオマー過剰率は、約９０％以上、約９５％以上、約９８％以上、または約９９％以上である。
光学活性な化合物の記載において、接頭辞ＲおよびＳは、そのキラル中心についての分子の絶対配置を示すために使用される。（＋）および（－）は、化合物の旋光性、すなわち、光学活性な化合物により偏光面が回転する方向を示すために使用される。（－）接頭辞は、化合物が左旋性、すなわち、化合物が偏光面を左または反時計回りに回転させることを示す。（＋）接頭辞は、化合物が右旋性、すなわち、化合物が偏光面を右または時計回りに回転させることを示す。しかしながら、旋光性の符号、（＋）および（－）は、分子の絶対配置、ＲおよびＳとは関連性がない。

用語「光学的に純粋」および「エナンチオマー的に純粋」は、約８０％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上、約９９．５％以上、約９９．８％以上、または約９９．９％以上のエナンチオマー過剰率（ｅｅ）を有する分子集合体を指す。特定の実施形態では、光学的またはエナンチオマー的に純粋な化合物に関するエナンチオマー過剰率は、約９０％以上、約９５％以上、約９８％以上、または約９９％以上である。化合物のエナンチオマー過剰率は、光学活性な固定相を使用するキラルクロマトグラフィー（ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、および薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ））、同位体希釈、電気泳動、熱量測定、偏光分析、キラル誘導体化を用いるＮＭＲ分析法、ならびにキラル溶媒和剤またはキラルシフト試薬を用いるＮＭＲ法を含むが、これらに限定されない、当業者により使用される任意の標準的な方法により決定することができる。

用語「実質的に純粋」および「実質的に均質」とは、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、ゲル電気泳動（ＧＥ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、および質量分析（ＭＳ）を含むが、これらに限定されない、当業者により使用される標準的な分析法により決定されるように、容易に検出できる不純物を含まないと思われるように十分に均質であること；またはさらなる精製により、物質の酵素活性および生物活性などの物理的、化学的、生物学的、および／または薬理学的な特性が検出可能な程度に変化することがないほど十分に純粋であることを意味する。特定の実施形態では、「実質的に純粋」または「実質的に均質」は、少なくとも約５０質量％、少なくとも約７０質量％、少なくとも約８０質量％、少なくとも約９０質量％、少なくとも約９５質量％、少なくとも約９８質量％、少なくとも約９９質量％、または少なくとも約９９．５質量％の分子が、標準的な分析法により決定されるように、化合物の単一の立体異性体である分子集合体を指す。

用語「同位変異体」は、そのような化合物を構成する１つまたは複数の原子において異常な割合の同位体を含有する化合物を指す。特定の実施形態では、化合物の「同位変異体」は、水素（¹Ｈ）、重水素（²Ｈ）、三重水素（³Ｈ）、炭素１１（¹¹Ｃ）、炭素１２（¹²Ｃ）、炭素１３（¹³Ｃ）、炭素１４（¹⁴Ｃ）、窒素１３（¹³Ｎ）、窒素１４（¹⁴Ｎ）、窒素１５（¹⁵Ｎ）、酸素１４（¹⁴Ｏ）、酸素１５（¹⁵Ｏ）、酸素１６（¹⁶Ｏ）、酸素１７（¹⁷Ｏ）、酸素１８（¹⁸Ｏ）、フッ素１７（¹⁷Ｆ）、フッ素１８（¹⁸Ｆ）、リン３１（³¹Ｐ）、リン３２（³²Ｐ）、リン３３（³³Ｐ）、イオウ３２（³²Ｓ）、イオウ３３（³³Ｓ）、イオウ３４（³⁴Ｓ）、イオウ３５（³⁵Ｓ）、イオウ３６（³⁶Ｓ）、塩素３５（³⁵Ｃｌ）、塩素３６（³⁶Ｃｌ）、塩素３７（³⁷Ｃｌ）、臭素７９（⁷⁹Ｂｒ）、臭素８１（⁸¹Ｂｒ）、ヨウ素１２３（¹²³Ｉ）、ヨウ素１２５（¹²⁵Ｉ）、ヨウ素１２７（¹²⁷Ｉ）、ヨウ素１２９（¹²⁹Ｉ）、およびヨウ素１３１（¹³¹Ｉ）を含むが、これらに限定されない、異常な割合の１つまたは複数の同位体を含む。特定の実施形態では、化合物の「同位変異体」は、安定な形態、すなわち、非放射性である。特定の実施形態では、化合物の「同位変異体」は、水素（¹Ｈ）、重水素（²Ｈ）、炭素１２（¹²Ｃ）、炭素１３（¹³Ｃ）、窒素１４（¹⁴Ｎ）、窒素１５（¹⁵Ｎ）、酸素１６（¹⁶Ｏ）、酸素１７（¹⁷Ｏ）、酸素１８（¹⁸Ｏ）、フッ素１７（¹⁷Ｆ）、リン３１（³¹Ｐ）、イオウ３２（³²Ｓ）、イオウ３３（³³Ｓ）、イオウ３４（³⁴Ｓ）、イオウ３６（³⁶Ｓ）、塩素３５（³⁵Ｃｌ）、塩素３７（³⁷Ｃｌ）、臭素７９（⁷⁹Ｂｒ）、臭素８１（⁸¹Ｂｒ）、およびヨウ素１２７（¹²⁷Ｉ）を含むが、これらに限定されない、異常な割合の１つまたは複数の同位体を含む。特定の実施形態では、化合物の「同位変異体」は不安定な形態、すなわち、放射性である。特定の実施形態では、化合物の「同位変異体」は、三重水素（³Ｈ）、炭素１１（¹¹Ｃ）、炭素１４（¹⁴Ｃ）、窒素１３（¹³Ｎ）、酸素１４（¹⁴Ｏ）、酸素１５（¹⁵Ｏ）、フッ素１８（¹⁸Ｆ）、リン３２（³²Ｐ）、リン３３（³³Ｐ）、イオウ３５（³⁵Ｓ）、塩素３６（³⁶Ｃｌ）、ヨウ素１２３（¹²³Ｉ）、ヨウ素１２５（¹²⁵Ｉ）、ヨウ素１２９（¹²⁹Ｉ）、およびヨウ素１３１（¹³¹Ｉ）を含むが、これらに限定されない、異常な割合の１つまたは複数の同位体を含む。本明細書で提供される化合物において、例として、任意の水素は²Ｈであり得て、または例として、任意の炭素は¹³Ｃであり得て、または、当業者の判断に基づいて可能な場合には、例として、任意の窒素は¹⁵Ｎであり得て、任意の酸素は¹⁸Ｏであり得ることが理解されよう。特定の実施形態では、化合物の「同位変異体」は、異常な割合の重水素を含む。

語句「その同位変異体；またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、またはプロドラッグ」は、語句「その中で参照される化合物の同位変異体；またはその中で参照される化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物、またはプロドラッグ」と同じ意味を有する。

患者に薬物「を投与すること」または薬物「の投与」（およびこの語句と文法的に同等のもの）は、医療専門家による患者への投与であり得るか、もしくは自己投与であり得る直接の投与、および／または薬物を処方する行為であり得る間接的な投与を指す。例えば、患者に薬物を自己投与するように指示をする医師および／または患者に薬物の処方箋を提供する医師は、患者に薬物を投与している。
「患者」、「対象」および「必要とする対象」は、がん、詳細には白血病、より詳細にはＴ細胞性急性リンパ性白血病の処置を必要とする哺乳動物を表すために互換的に使用される。一般に、患者はヒトである。一般に、患者はがんと診断されたヒトである。特定の実施形態では、「患者」、「対象」または「必要とする対象」は、薬物および治療法のスクリーニング、特徴付け、および評価に使用される、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、マウス、またはラットなどの、非ヒト哺乳動物を表し得る。

本明細書で使用される「有効量」は、対象に所望の効果をもたらすのに必要な、単独または１つもしくは複数の他の活性薬剤との組合せのいずれかの、それぞれの活性薬剤の量を表す。有効量は、当業者に認識されているように、処置される特定の状態、状態の重症度、年齢、身体的状態、大きさ、性別および体重を含む個々の患者のパラメータ、処置の持続期間、併用療法（ある場合は）の性質、特定の投与経路ならびに健康指導医の知識および専門的意見の範囲内の要因などに応じて変化する。これらの要因は当業者に周知であり、慣例的な実験を超えることなく対処され得る。使用される個々の成分またはそれらの組合せの最大用量は、健全な医学的判断に基づく最高安全用量であることが一般に好ましい。しかしながら、患者が、医学的理由、心理学的理由または事実上任意の他の理由から、より低い用量または忍容量を要求する場合があることが当業者には理解されよう。
状態または患者を「処置すること」、状態または患者の「処置」または「治療」は、臨床結果を含む、有益なまたは所望の結果を得るために措置を講じることを指す。本発明の目的上、有益なまたは所望の臨床結果には、がんの１つもしくは複数の症状の軽減もしくは改善；疾患の程度の縮小；疾患の進行の遅延もしくは減速；疾患状態の改善、緩和、もしくは安定化；または他の有益な結果が含まれるが、これらに限定されない。がんの処置は、場合によっては、部分奏効または安定疾患をもたらすことがある。

「薬学的に許容される」成分（担体または賦形剤など）とは、化合物または組成物が、疾患の重症度および処置の必要性を考慮して、過度に有害な副作用を伴うことなく、本明細書に記載される処置を達成するために、対象への投与に好適であることを意味する。「担体」とは、生命体に著しい刺激を引き起こさず、所与の化合物の生物活性および特徴を消失させない材料を意味する。「賦形剤」とは、化合物の投与を容易にするために医薬組成物に加えられる不活性物質を意味する。
使用可能な薬学的に許容される担体、または賦形剤は、Raymond C Rowe, Paul J Sheskey, and Marian E Quinn編のHandbook of Pharmaceuticals Excipientsを含むさまざまな参考文献に公開されている。非制限的な実施形態では、前記薬学的に許容される担体、または賦形剤は、不活性な希釈剤、分散剤および／または造粒化剤、界面活性剤および／または乳化剤、崩壊作用剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、滑沢剤、および／または油脂からなる群から選択され得る。前記組成物は、少なくとも１種の付加的な生物活性な化合物または薬剤をさらに含んでもよい。

医薬組成物は、単回の単位用量の有効成分（例えば、本開示の化合物）を含み得るが、これに限定されない。処置目的のために、用量単位は、これらに限定されないが、錠剤またカプセル剤などの別々の物品の形態であり得るか、または単位用量の有効成分を含有する測定可能な容積の溶液、懸濁液などであり得る。本明細書における用語「単位用量」は、これらに限定されないが、アルコール依存、オピオイド依存、疼痛緩和、または他の疾患などの処置のために、対象に、単回の、これらに限定されないが、経口、静脈内、筋肉内、皮膚性、皮下、髄腔内、経皮、注入、舌下、バッカル、直腸内、腟内、眼内、耳内、経鼻、吸入、または噴霧の投与を意図する有効成分の量を指す。処置には、本開示の化合物の単位用量の定期的投与、例えば、１単位用量を１日２回以上、１単位用量を各食事と共に、１単位用量を４時間ごとにもしくは他の間隔で、または１日当たり１回のみの単位用量が必要とされ得る。

実施形態
一実施形態では、式１の化合物を調製する方法は、

ステップ（２）：ステップ（１）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させ；ステップ（Ｂ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させる
ステップを含む。
［式中、Ｒは、

、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、電子求引基、または電子供与基である］
一実施形態では、反応は、以下の図式のように示すことができる。

一実施形態では、式１の化合物を調製する方法は、

ステップ（１ｂ）：ステップ（１ａ）の生成物を無水酢酸（Ａｃ₂Ｏ）と反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１ｂ）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、Ｎａ₂ＣＯ₃と反応させ；ステップ（Ａ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、およびＮａ₂ＣＯ₃と反応させる
ステップを含む。
［式中、Ｒは、

一実施形態では、式４の化合物を調製する方法は、

ステップ（２）：ステップ（１）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させ；ステップ（Ａ）の生成物をナトリウムメトキシドとタノールの存在下で反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させる
ステップを含む。
［Ｒは、

一実施形態では、式４の化合物を調製する方法は、

ステップ（１ｂ）：ステップ（１ａ）の生成物を無水酢酸（Ａｃ₂Ｏ）と反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１ｂ）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、およびＮａ₂ＣＯ₃と反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、およびＮａ₂ＣＯ₃と反応させ；ステップ（Ｂ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させる
ステップを含む。
［式中、Ｒは、

一実施形態では、脂肪族鎖はＣ₆からＣ₂₀の数を有する。
一実施形態では、環状基は、芳香族基、環状飽和もしくは部分的不飽和基、または複素環基である。複素環基は、Ｎ、Ｏ、またはＳのヘテロ原子を含むことが好ましい。
一実施形態では、電子求引基は、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ニトロソ（－Ｎ＝Ｏ）、アミノカルボニル（－ＣＯＮＨ₂；－ＣＯＮＨＲ；－ＣＯＮＲ₂、式中、Ｒ＝アルキル）、カルボキシル（－ＣＯ₂Ｈ）、アルコキシカルボニル（－ＣＯ₂Ｒ、式中、Ｒ＝アルキル）、ホルミル（－ＣＨＯ）、アシル（－ＣＯＲ、式中、Ｒ＝アルキル）、ハロホルミル（－ＣＯＸ、式中、Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、トリハロメチル（－ＣＸ₃、式中、Ｘ＝Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、シアノ（－Ｃ≡Ｎ）、ニトロ（－ＮＯ₂）、アンモニウム基（－ＮＲ₃ ⁺、式中、Ｒ＝アルキルまたはＨ）、アジド（－Ｎ－₃）、またはスルホニル基（－ＳＯ₂Ｒ、式中、Ｒ＝Ｈ、ＣＦ₃、アルキル）である。アルキル基はＣ₁－Ｃ₅アルキル基であることが好ましい。

一実施形態では、電子供与基は、低級アルキル（例えば、－ＣＨ₃、－Ｃ₂Ｈ₅）、ビニル（－ＣＨ＝ＣＨ₂）、フェニル（－Ｃ₆Ｈ₅）、アシルオキシル（－ＯＣＯＲ、式中、Ｒ＝アルキル）、アシルアミド（－ＮＨＣＯＲ、式中、Ｒ＝アルキル）、アルキルチオ（－ＳＲ、式中、Ｒ＝アルキル）、スルフヒドリル（ｓｕｌｆｈｙｆｒｙｌ）（－ＳＨ）、ヒドロキシル（－ＯＨ）、アルコキシ（－ＯＲ、式中、Ｒ＝アルキル）、アミノ基（－ＮＨ₂；－ＮＨＲ；－ＮＲ₂、式中、Ｒ＝アルキル）である。アルキル基はＣ₁－Ｃ₅アルキル基であることが好ましい。
一実施形態では、化合物ＯＢＩ－３４２４（Ｓ体）を、Ｃｏｒｅｙ－Ｂａｋｓｈｉ－Ｓｈｉｂａｔａ（ＣＢＳ）不斉還元およびリパーゼエステル化の２ステップ組合せを介して、収率５４％（化合物ＯＢＩ－３４２４－５から）および光学純度９９％で首尾よく合成した。ＣＢＳ還元およびリパーゼの適用の２ステップ化学酵素組合せにより立体化学を確定し、少なくとも９９％の光学純度を得た（図１）。

本開示のさまざま特色および実施形態を、以下の代表的な実施例において例示するが、これらは例示を意図するものであり、限定するものではない。当業者は、以下に続く特許請求の範囲においてより完全に記載されるように、特定の実施例が、本発明の単に例示的なものであることを容易に理解するであろう。本出願に記載されるあらゆる実施形態および特色は、そのうちに含まれるあらゆる実施形態と互換的かつ結合可能であることが理解されるべきである。

まず、化合物ＯＢＩ－３４２４の臨床治験バッチを、「アシムケム（Ａｓｙｍｃｈｅｍ）」により、３ステップにわたり収率１９％で合成した（以下の図式１を参照のこと）。収率を改善し、可能性のある不純物を低減するために、本発明者らは別の合成経路の設計を試み（図式２を参照のこと）、目標を達成するために２つの主要な手法を選択した。第１に、不安定なホスフェートモチーフを後期段階に、かつアジリジン形成を最終ステップに導入し、ｍ－安息香酸誘導体の求核的な破壊を回避する。まず、合成経路を、ＮａＢＨ₄を還元剤として使用することにより調製されるラセミ化合物ＯＢＩ－３４２４－６を通して最初に確認し、次に、さらなるステップにおいて、リン酸化およびアジリジン形成に進む。第２に、立体選択性の改善のために、立体中心を、ＣＢＳ不斉還元およびリパーゼ選択的保護濃縮の組合せにより確立されるように設計する（図式３を参照のこと）。これらの方法の組合せにより、高度に光学的に純粋な生成物を良好な収率で得ることが期待される。したがって、本発明は、化合物ＯＢＩ－３４２４を得るための代替の合成経路を開発した。ＣＢＳ試薬を、Ｓ体優勢の化合物ＯＢＩ－３４２４－６混合物の調製のために、そのエナンチオマーと置き換える。少量のＲ体化合物ＯＢＩ－３４２４－６を、リパーゼの処理により、選択的にアセチル化できる。次に、純粋なＳ体化合物ＯＢＩ－３４２４－６を、カラム精製を通して得ることができる。

図式１．化合物ＯＢＩ－３４２４のＧＭＰ合成プロセス（臨床）

図式２．化合物ＯＢＩ－３４２４合成の新経路設計

図式３．化合物ＯＢＩ－３４２４－６の立体化学の構成

材料および方法
装置を表２に列記する。

図式２および図式３の化学合成用の試薬を表３に列記する。

実験基質
基質１：１－（３－（３－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）エタノール
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.97 (d, J = 0.4 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26-7.19 (m, 2H), 7.11-7.09 (m, 2H), 7.03 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 4.88 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.08 (s, 3H), 2.97 (s, 3H), 1.44 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 170.5 (C), 156.2 (C), 154.0 (C), 150.0 (C), 140.2 (C), 138.0 (C), 130.2 (CH), 126.0 (CH), 122.6 (CH), 120.8 (CH), 119.9 (CH), 118.2 (CH), 117.1 (CH), 68.9 (CH), 39.5 (CH₃), 35.3 (CH₃), 25.2 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₁₇H1₈N₂O₅Naの計算値353.1108, 実測値353.1108.

基質1

基質２：１－（３－フルオロ－４－ニトロフェニル）エタン－１－オール
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.00 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 12.0, 1.6 Hz, 1H), 7.29-7.27 (m, 1H), 4.99 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.49 (s, 1H), 1.51 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 157.0 (C), 155.3 (C), 155.2 (C), 154.4 (C), 126.2 (CH), 121.2 (CH), 115.2 (CH), 114.9 (CH), 68.9 (CH), 25.3 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₈H₈FNO₃Naの計算値208.0380, 実測値208.0354.

基質2

基質３：１－（３－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシル）－４－ニトロフェニル）エタン－１－オール
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.01 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.31 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.95 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 2.02 (s, 1H), 1.48 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 159.2 (C), 153.7 (C), 149.0 (C), 140.7 (C), 127.43 (CH), 127.40 (CH), 126.3 (CH), 121.6 (CH), 119.1 (CH), 117.8 (CH), 69.1 (CH), 25.5 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₁₅H₁₂F₃NO₄Naの計算値350.0611, 実測値350.0607.

基質3

基質４：１－（３－（４－（２－メチルフェニル）フェノキシル）－４－ニトロフェニル）エタン－１－オール
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 6.4, 2.0 Hz, 2H), 7.27-7.20 (m, 5H), 7.16 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.07 (dd, J = 6.8, 2.0 Hz, 2H), 4.91 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 1.47 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 154.8 (C), 153.2 (C), 150.8 (C), 140.8 (C), 140.2 (C), 138.1 (C), 135.4 (C), 130.8 (CH), 130.4 (CH), 129.8 (CH), 127.4 (CH), 126.1 (CH), 125.8 (CH), 120.1 (CH), 118.4 (CH), 117.6 (CH), 69.3 (CH), 25.4 (CH₃), 20.5 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₂₁H₁₉NO₄Naの計算値372.1206, 実測値372.1204.

基質4

基質５：１－（２－クロロ－４－ニトロフェニル）エタン－１－オール
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.16 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.34 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 2.24 (s, 1H), 1.51 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 150.5 (C), 147.2 (C), 132.1 (C), 127.3 (CH), 124.6 (CH), 122.2 (CH), 66.8 (CH), 23.6 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₈H₈ClNO₃Naの計算値224.0085, 実測値224.0085.

基質5

基質６：１－（３－クロロ－４－ニトロフェニル）エタン－１－オール
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 4.97 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 2.40 (s, 1H), 1.51 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 152.1 (C), 146.5 (C), 128.7 (CH), 127.3 (C), 125.9 (CH), 124.4 (CH), 68.9 (CH), 25.4 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₈H₈ClNO₃Naの計算値224.0085, 実測値224.0065.

基質6

基質７：１－（３－メトキシ－４－ニトロフェニル）エタン－１－オール
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 4.96 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.42 (s, 1H), 1.50 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 153.3 (C), 138.1 (C), 126.0 (CH), 117.0 (CH), 110.1 (CH), 69.5 (CH), 56.4 (CH₃), 25.4 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₉H₁₁NO₄Naの計算値220.0580, 実測値220.0555.

基質7

基質８：１－（２－メトキシ－４－ニトロフェニル）エタン－１－オール
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.86 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.18 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.43 (s, 1H), 1.49 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 156.4 (C), 147.9 (C), 141.3 (C), 126.3 (CH), 116.2 (CH), 105.3 (CH), 65.5 (CH), 55.9 (CH₃), 23.1 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₉H₁₁NO₄Naの計算値220.0580, 実測値220.0557.

基質8

基質９：１－フェニルエタノール
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.35-7.30 (m, 4H), 7.27-7.24 (m, 1H), 4.84 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 2.31 (s, 1H), 1.46 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 145.7 (C), 128.4 (CH), 127.4 (CH), 125.3 (CH), 70.3 (CH), 25.0 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₈H₁₀ONaの計算値145.0624, 実測値145.0621.

基質9

基質１０：２－オクタノール
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 3.83-3.75 (m, 1H), 1.76 (s, 1H), 1.46-1.26 (m, 10H), 1.18 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 68.1 (CH), 39.3 (CH₂), 31.8 (CH₂), 29.3 (CH₂), 25.7 (CH₂), 23.4 (CH₃), 22.6 (CH₂), 14.0 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₈H₁₈ONaの計算値153.1250, 実測値153.1237.

基質10

基質１１：Ｎ－［４－（１－ヒドロキシエチル）フェニル］アセトアミド
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.79 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.42 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 171.8 (C), 143.5 (C), 138.9 (C), 127.1 (CH), 121.2 (CH), 70.6 (CH), 25.6 (CH₃), 23.9 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₁₀H₁₃NO₂Naの計算値202.0838, 実測値202.0809.

基質11

基質１２：１－Ｏ－アセチル－１－（３－（３－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）エタン
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.96 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.42 (td, J = 7.6, 2.4 Hz, 1H), 7.24-7.20 (m, 2H), 7.09-7.04 (m, 3H), 5.78 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.98 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.48 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 170.3 (C), 169.9 (C), 155.9 (C), 150.0 (C), 149.4 (C), 140.6 (C), 138.4 (C), 130.2 (CH), 126.2 (CH), 122.8 (CH), 121.2 (CH), 119.6 (CH), 118.7 (CH), 117.1 (CH), 70.9 (CH), 39.5 (CH₃), 35.3 (CH₃), 22.1 (CH₃), 21.2 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₁₉H₂₀N₂O₆Naの計算値395.1214, 実測値395.1146.

基質12

基質１３：１－Ｏ－アセチル－１－（３－フルオロ－４－ニトロフェニル）エタン
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.06 (dd, J = 8.4, 7.2 Hz, 1H), 7.30-7.25 (m, 2H), 5.87 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.55 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm; ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ 169.9 (C), 157.0 (C), 154.3 (C), 150.9 (C), 150.8 (C), 126.5 (CH), 121.82 (CH), 121.79 (CH), 115.8 (CH), 115.6 (CH), 70.6 (CH), 22.1 (CH₃), 21.0 (CH₃) ppm; HRMS (ESI, M+Na⁺) C₁₀H₁₀FNO₄Naの計算値250.0486, 実測値250.0445.

基質13

（実施例１）
化合物ＯＢＩ－３４２４中間体の合成（化合物ＯＢＩ－３４２４－３から化合物ＯＢＩ－３４２４－５へ）
ＯＢＩ－３４２４－３の合成

丸底フラスコ中で、化合物ＯＢＩ－３４２４－１（９ｇ、４８．６ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（０．１ｇ、ｍｍｏｌ）および塩化チオニル（ＳＯＣｌ₂、３０ｍＬ、ｍｍｏｌ）の混合物を、７５℃で３時間還流した。還流中に、無水ＭｇＣｌ₂（２．７９ｇ、ｍｍｏｌ）、マロン酸ジメチル（５．７ｍＬ、ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１４．１ｍＬ、ｍｍｏｌ）を、別の丸底フラスコ中で、室温で（約２５℃）混合した。得られた白色懸濁液を１．５時間撹拌して、白色泥状物とした。３時間の還流後、化合物ＯＢＩ－３４２４－１およびＳＯＣｌ₂の反応混合物を、次に、およそ４０℃まで冷却した。反応混合物を、次に、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、過剰の溶媒を除去した。得られたシロップを、次に、１５ｍＬのトルエンで希釈した。得られたトルエン溶液を、あらかじめ調製した白色泥状混合物に滴下添加した。１．５時間混合した後、反応をＴＬＣにより確認した（体積比ＥｔＯＡｃ／ｎ－ヘキサン＝１：４）。得られた混合物を、３０ｍＬの６ＮのＨＣｌで処理し、次に、６０ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。水性層を、６０ｍＬのＥｔＯＡｃで再度抽出した。合わせた有機層を、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、次にロータリーエバポレーターにより濃縮して（水浴の温度＝約３５℃、圧力＝約１３０ｍｂａｒ）、赤みがかったシロップを得た。得られたシロップを、３０ｍＬの６ＮのＨＣｌと混合し、次に、１００℃で約１７時間還流した。その後、得られた反応粗製物を、室温まで冷却し、６０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈して、抽出した。水性層を、６０ｍＬのＥｔＯＡｃで再度抽出した。有機層を収集し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、次にロータリーエバポレーターにより濃縮して（水浴の温度＝約３５℃、圧力＝約１３０ｍｂａｒ）、赤みがかったシロップを得た。得られたシロップを、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッドを通して精製した（１０ｇの化合物ＯＢＩ－３４２４－１に対して２００ｇのゲル粉末）。カラムを体積比ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＣＨ₂Ｃｌ₂＝１２／１／０．５混合シリカゲルで充填し；溶離液系は、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ／ＣＨ₂Ｃｌ₂＝１２／１／０．５（１カラム体積）、１０／１／１（２～３カラム体積）が提案された。収集した生成物を、ロータリーエバポレーター（水浴の温度＝約３５℃、圧力＝約１３０ｍｂａｒ）および高真空（約２５℃、約１７時間）により濃縮して、期待された生成化合物ＯＢＩ－３４２４－３を、黄色固体として得た（５．４ｇ、単離収率５５％）。

化合物ＯＢＩ－３４２４－４の合成

ｍ－ヒドロキシ安息香酸（１５ｇ）をＴＨＦ（無水、３００ｍＬ）に溶解し、次に、反応物を窒素保護下で－３０℃まで冷却した。２０分の撹拌後、トリエチルアミン（６７ｍＬ）を、冷やした反応物に１５分にわたり添加した。１５分の撹拌後、反応物は、白色懸濁液になった。クロロギ酸イソブチル（３１ｍＬ）を、得られた懸濁液に１５分にわたり添加した。２時間の撹拌後、ＴＬＣで確認した（体積比ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＥｔＯＡｃ＝２／１）。ｍ－ヒドロキシ安息香酸がなくなったときに、ジメチルアミン（ＴＨＦ中の２Ｍ、２７０ｍＬ）を、反応物に３０分にわたり添加した。添加後、反応物をさらに３０分間撹拌し、次に、室温（約２５^oＣ）まで加温し、連続して１８時間撹拌した。反応が完了したときに、水（９０ｍＬ）を反応物に添加し、次に、ＴＨＦをロータリーエバポレーターにより除去した（水浴の温度＝３５^oＣ、約１００ｍｂａｒ）。その後、反応粗製物を、冷やした１ＮＨＣｌ（３０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）を使用して抽出した。水性層を、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で２回抽出した。有機抽出物を合わせて、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、次に、約３０％の体積までロータリーエバポレーターにより濃縮して、いくらかの結晶を沈殿させた（水浴の温度＝３５℃、約１２０ｍｂａｒ）。得られた粗製試料を、次に、撹拌しながら（３６０ｒｐｍ）、ヘキサン（２００ｍＬ）で処理して、白色懸濁液を形成させた。得られた固体を濾過し、冷やした体積比ヘキサン／ＥｔＯＡｃ混合物＝２０／１で洗浄し、高真空系により約１６時間（２５^oＣ）乾燥して、期待された化合物ＯＢＩ－３４２４－４を白色固体として得た（１２．７ｇ、単離収率７１％）。

化合物ＯＢＩ－３４２４－５の合成

化合物ＯＢＩ－３４２４－３（０．３５ｇ）を、適切な２口丸底ビン中の化合物ＯＢＩ－３４２４－４（０．２５ｇ）の無水ＴＨＦ溶液（４ｍＬ）に、室温で（＝約２３℃）、窒素保護下で添加した。反応混合物を、０℃まで１５分間冷やした。Ｃｓ₂ＣＯ₃（０．８４ｇ）を、冷やした反応物に添加した。添加の１時間後、ＴＬＣを確認した（体積比ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＥｔＯＡｃ＝２／１、化合物ＯＢＩ－３４２４－５のＲｆ値＝０．３）。化合物ＯＢＩ－３４２４－４がなくなったときに、反応物を８ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、４ｍＬの飽和ＮＨ₄Ｃで抽出した。水性層を、８ｍＬのＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層を合わせて、４ｍＬのブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、次に、ロータリーエバポレーターにより濃縮して（水浴＝約３５℃、約１３０ｍｂａｒ）、黄色シロップを得た。シロップを、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルパッドを通して精製した。溶離液系は、以下の記載のように提案された：（体積比パッキング＝ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝５／１）ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝４／１（１カラム体積）、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１／１（１カラム体積）、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１／２（３カラム体積）、期待された生成物が収集されるまで。画分を、ロータリーエバポレーター（水浴＝約３５℃、約１４０ｍｂａｒ）および高真空（約２５℃、１６時間）により濃縮して、化合物ＯＢＩ－３４２４－５を淡黄色固体として得た（０．４６ｇ、単離収率９３％）。

本発明者らは、最初に、化合物ＯＢＩ－３４２４－３および化合物ＯＢＩ－３４２４－４を、文献に記録された方法から（ＰＣＴ国際特許出願公開第２０１６／１４５０９２号）、許容される収率で首尾よく合成した。その後、化合物ＯＢＩ－３４２４－５を、化合物ＯＢＩ－３４２４－３および化合物ＯＢＩ－３４２４－４のカップリングから、収率約８０％で、塩基条件の処理下で調製した。操作上の利便性および収率の改善のために、本発明者らは、次に、いくつかの条件の試験を行った。いくつかの試験後、無水ＴＨＦおよびＣｓ₂ＣＯ₃が最高収率をもたらした（表４）。ＴＨＦを反応溶媒として、かつＣｓ₂ＣＯ₃を塩基として使用する条件が、最良の単離収率をもたらす。さらに、Ｃｓ₂ＣＯ₃は、一般に、操作上の利便性がある穏やかな塩基と考えられ、大量生産において操作上の利益をもたらし得る。

（実施例２）
化合物ＯＢＩ－３４２４－５からの化合物ＯＢＩ－３４２４－６（ラセミ体）の合成

図式４．化合物ＯＢＩ－３４２４－５からの化合物ＯＢＩ－３４２４－６（ラセミ体）の合成

設計された経路が機能するかどうかを証明するために（図式２を参照のこと）、化合物ＯＢＩ－３４２４－５をＮａＢＨ₄によりすぐに還元して、化合物ＯＢＩ－３４２４－６（ラセミ体）を単離収率８５％で得た（図式４を参照のこと）。反応は、氷浴下で順調に進んだ。ＮａＢＨ₄の添加後に、水素ガスが放出されることに留意されたい。化合物ＯＢＩ－３４２４の合成を精査するために、得られた化合物ＯＢＩ－３４２４－６（ラセミ体）を次のステップで使用した。

化合物ＯＢＩ－３４２４－５（５００ｍｇ）をメタノールに溶解し、次に、０℃まで冷やした。水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ₄、５８ｍｇ）を、この溶液に添加した（注意：反応中に気体が放出される）。３０分間撹拌した後、ＴＬＣを確認する。（体積比ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＥｔＯＡｃ＝２／１、化合物ＯＢＩ－３４２４－５のＲｆ値＝０．３、化合物ＯＢＩ－３４２４－６のＲｆ値＝０．２）。反応が完了したときに、反応物を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および１ＮのＨＣｌ（５ｍＬ）で希釈した。得られた粗製物を分離した。水性層を、ＥｔＯＡｃで再度抽出した。有機層を収集し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、次にロータリーエバポレーターにより濃縮して、シロップを得た（水浴の温度＝３５℃、約７０ｍｂａｒ）。得られたシロップを、次に、カラムクロマトグラフィーを通して、シリカゲルパッドを介して（シリカゲル＝２０ｇ）精製した。溶離液系は、以下の記載のように提案された：（体積比パッキング＝ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝３／１）、溶離液：ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１／１（１カラム体積）、ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＥｔＯＡｃ＝２／１（１カラム体積）、ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＥｔＯＡｃ＝１／１（３カラム体積）、期待された生成物が収集されるまで。収集した生成物を、ロータリーエバポレーター（水浴＝約３５℃、約１２０ｍｂａｒ）および高真空（約２５℃、１６時間）により濃縮して、化合物ＯＢＩ－３４２４－６（ラセミ体）を黄色シロップとして得た（４２８ｍｇ、単離収率８５％）。

（実施例３）
化合物ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＲの合成
１９８１年に、Ｓ．Ｉｔｓｕｎｏがこの方法を最初に報告した。数年後、Ｅ．Ｊ．Ｃｏｒｅｙは、変性触媒により、ＢＨ₃／ＴＨＦの存在下で、アキラルなケトンの迅速かつ高いエナンチオ選択的還元が見出されることを示した。触媒オキサザボロリジンは、Ｃｏｒｅｙ－Ｂａｋｓｈｉ－Ｓｈｉｂａｔａ（ＣＢＳ）還元と呼ばれる。この触媒は多くの基質に適用され、良好なエナンチオ選択性を有する（J. Mol. Catal. B Enz. 1997, 3: 65-72）。公表された結果に基づき、同様の基質は、Ｓ－ＣＢＳ触媒を使用することによりＲ体生成物を形成することを選ぶ。したがって、本発明者らは、基質（化合物ＯＢＩ－３４２４－５）においてＳ－ＣＢＳを試みて、選択性がおよそ体積比３：１～６：１のＲ／Ｓ比であることを見出した。Ｒ体生成物のエナンチオマー過剰率、ｅｅ％を向上させるために、本発明者らは、次に、リパーゼ選択的アセチル化を組み合わせて、Ｒ／Ｓ比を改善した（図式２を参照のこと）。アキラルなアルコールのリパーゼ選択的アセチル化は、十分に発達した技術である。公表された結果に基づき、リパーゼは、Ｒ体基質と反応することを選ぶ。２種の異なるリパーゼ、ＣＡＬ－ＢおよびＰＡＬの試験が行われ、ＣＡＬ－Ｂがより良好な結果を示した。化合物ＯＢＩ－３４２４－６の最終生成物のｅｅ％は、Ｓ－ＣＢＳ還元およびリパーゼアセチル化の組合せ後に、ＨＰＬＣにおいて９７％以上に改善され得る。

ステップ１．Ｓ－ＣＢＳ不斉還元（Ｒ体優勢）
その後、不斉還元および光学純度の改善に注目した。市販のＣＢＳ試薬（（Ｓ）－５，５－ジフェニル－２－メチル－３，４－プロパノ－１，３，２－オキサザボロリジン、ＣＡＳ＝［１１２０２２－８１－８］）は、E. J. Corey教授から開発された(J. Am. Chem. Soc. 1987, 109: 7925-7926)ことが知られている。この試薬は、ケトンでキラル還元を行い、ＴＨＦ中でＢＨ₃を用いて、良好な収率のＲ体アルコールおよび高立体選択性をもたらすことができる。化合物ＯＢＩ－３４３５－５を、０．２モル当量のＣＢＳ試薬および１．０５モル当量のボラン（ＴＨＦ中の１Ｍ）で処理して、還元生成物（化合物ＯＢＩ－３４２４－６エナンチオマー混合物）を、窒素保護下で数時間で、収率８０％で得た。光学分割は、キラルＨＰＬＣ分析により４８％と判断された（図２）。光学純度は、ＣＢＳの量を０．５モル当量まで増加し、かつ反応温度を－２０℃まで下げることにより、７０％ｅｅまで改善することができた。しかし、収率は６５％まで低下し、反応時間は２２時間に増加した（表５）。

ステップ２．リパーゼ選択的アシル保護
高いＲ体選択性を有するリパーゼは、化合物ＯＢＩ－３４２４－６Ｒ／Ｓ混合物の分離に対して優れた酵素であり、アセチル基をＲ体化合物ＯＢＩ－３４２４－６に積極的に付加し、かつ非アセチル化Ｓ体化合物ＯＢＩ－３４２４－６を消極的に残す（図式５を参照のこと）。そこで、このエナンチオマー混合物をリパーゼで処理して、Ｒ体エナンチオマーのヒドロキシル基を選択的にエステル化する。得られたアセチル化生成物「化合物ＯＢＩ－３４２４－６－Ａｃ」の光学純度は、９９％ｅｅ値まで高めることができた。次に、化合物ＯＢＩ－３４２４－６－Ａｃのアセチル基を、穏やかな塩基条件下で除去して、自家作製した化合物ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＲを得て、単離収率７７％で「化合物ＯＢＩ－３４２４－ＬＲ」に首尾よく変換した。

図式５．ＣＢＳ還元およびリパーゼ濃縮の組合せを介した化合物ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＲの調製

（実施例４）
化合物ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＳの合成
ステップ１．Ｒ－ＣＢＳ不斉還元（Ｓ体優勢）：
構造を確認した後、本発明者らは、次に、合成経路を改変して、化合物ＯＢＩ－３４２４－６を生成した（図式６を参照のこと）。ＣＢＳ試薬を、（Ｒ）－５，５－ジフェニル－２－メチル－３，４－プロパノ－１，３，２－オキサザボロリジン（ＣＡＳ＝［１１２０２２－８３－０］）と置き換えた。化合物ＯＢＩ－３４２４－５の不斉還元により、化合物ＯＢＩ－３４２４－６エナンチオマー混合物を、１／４のＲ／Ｓ比および単離収率９０％で得た（図３）。この混合物を、次に、酵素（リパーゼ）で処理して、光学純度を高めた。

図式６．Ｓ体優勢の化合物ＯＢＩ－３４２４－６を合成するための化合物ＯＢＩ－３４２４－５の不斉還元

ステップ２．リパーゼ選択的アシル保護：
喜ばしいことに、リパーゼは、Ｒ／Ｓ混合物中のＲ体化合物ＯＢＩ－３４２４－６を選択的にアセチル化することができた。消極的選択でアセチル化されないＳ体化合物ＯＢＩ－３４２４－６（ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＳ）は、精製後、直接得ることができた。化合物ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＲ合成ステップと比較して、１ステップが省略された（化合物ＯＢＩ－３４２４－６－Ａｃからアセチル基を除去する）。シリカゲルパッドを通した単純カラム精製後、化合物ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＳを、収率７７％およびｅｅ値９９％で収集できた（図式７、図４）。

図式７．Ｓ体化合物ＯＢＩ－３４２４－６に対する酵素反応

（実施例５）
化合物ＯＢＩ－３４２４－６Ｒ／Ｓ混合物の一般的合成

ＢＨ₃（ＴＨＦ中の１Ｍ、１．０５モル当量）およびＣＢＳ試薬（０．２モル当量）を、０℃で窒素保護下で混合した。（注記：２種の異なるＣＢＳ試薬を個々に使用し、Ｒ体優勢の生成物を、（Ｓ）－５，５－ジフェニル－２－メチル－３，４－プロパノ－１，３，２－オキサザボロリジンから得て、一方、（Ｒ）－５，５－ジフェニル－２－メチル－３，４－プロパノ－１，３，２－オキサザボロリジンの使用により、Ｓ体優勢の生成物を得た。）５分間の撹拌後、化合物ＯＢＩ－３４２４－５（１．０モル当量、すなわち、２ｍＬの無水ＴＨＦに０．４５ｇを溶解した）を、反応物に添加した。反応物を撹拌し、窒素保護下でゆっくりと２５℃まで上げた。添加して約１．５時間撹拌した後、ＴＬＣを確認した（体積比ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＥｔＯＡｃ＝２／１、化合物ＯＢＩ－３４２４－６のＲｆ値＝０．３）。化合物ＯＢＩ－３４２４－５がなくなったときに、反応粗製物とＥｔＯＡｃ（反応粗製物の４倍^v／_v）および冷却した１ＮＨＣｌ（ＥｔＯＡｃの２５％体積）とを混合した。反応粗製物を、抽出し、分離した。次に、水性層を、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ₃、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、次に、ロータリーエバポレーターにより濃縮して（水浴＝３５℃、約１００ｍｂａｒ）、黄色シロップを得た。得られたシロップを、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッドを通して精製した。溶離液系は、以下の記載のように提案された：（体積比パッキング＝ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝３／１）、溶離液：ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１／１（１カラム体積）、ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＥｔＯＡｃ＝２／１（１カラム体積）、ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＥｔＯＡｃ＝１／１（３カラム体積）、期待された生成物が収集されるまで。収集した生成物を、ロータリーエバポレーター（水浴＝３５℃、約１２０ｍｂａｒ）および高真空（約２５℃、１６時間）により濃縮して、化合物ＯＢＩ－３４２４－６Ｒ／Ｓ混合物を黄色シロップとして得た（単離収率約９０％、Ｒ／Ｓ比は、キラルカラムを使用したＨＰＬＣにより判断した）。

加えて、本発明者らはまた、ＣＢＳ触媒と置き換えるために、数種のキラル還元試薬（例えば、ＤＩＰ塩化物、水素化ホウ素ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍｂｏｒｏｈｙｄｒａｔｅ）または（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール）の試験を行った。

（Ｒ）／（Ｓ）－Ｍｅ－ＣＢＳ試薬の手順
異なるケトン基質および（Ｒ）／（Ｓ）Ｍｅ－ＣＢＳ触媒（ＴｏｋｙｏＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙＣｏ．，Ｌｔｄ．）の溶液を、０℃まで１０分間、窒素保護下で冷却した。ＢＨ₃（ＴＨＦ中の１Ｍ）（ＡｃｒｏｓＯｒｇａｎｉｃｓ；ロット番号：Ａ０４００５０５）を、反応物にゆっくりと添加し、１０分間撹拌した。次に、反応混合物を室温で１時間撹拌した。完了時に、反応混合物を、１ＮのＨＣｌおよび水でクエンチした。水性層を、２回ＥｔＯＡｃで抽出した。収集した有機層を、ＮａＨＣＯ₃およびブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、黄色粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ロット番号ＨＴ８０１８６）を通して精製した。体積比（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）を有する溶離液系。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。

（＋）／（－）－ＤＩＰ塩化物試薬の手順
ＴＨＦ（ＡｃｒｏｓＯｒｇａｎｉｃｓ；ロット番号：１８５０２６６）に溶解した異なるケトン基質の溶液を、０℃まで１０分間、窒素保護下で冷却した。（＋）／（－）－ＤＩＰ塩化物（ＴｏｋｙｏＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙＣｏ．，Ｌｔｄ．）を、反応物にゆっくりと添加し、１０分間撹拌した。次に、反応混合物を室温で３時間撹拌した。完了時に、反応混合物を、１ＮＨＣｌおよびＭｅＯＨでクエンチした。水性層を、２回ＥｔＯＡｃで抽出した。収集した有機層を、ＮａＨＣＯ₃およびブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、黄色粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。体積比（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）を有する溶離液系。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。

水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ₄）の手順
異なるケトン基質の溶液を、ＭｅＯＨに室温で溶解した。水素化ホウ素ナトリウムをゆっくりと反応物に添加した。次に、反応混合物を室温で１時間撹拌した。完了時に、反応混合物を、水でクエンチした。水性層を、２回ＥｔＯＡｃで抽出した。収集した有機層を、ＮａＨＣＯ₃およびブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。体積比（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）を有する溶離液系。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。

（Ｓ）－（－）－ＢＩＮＯＬ試薬の手順
（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール（ＴｏｋｙｏＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙＣｏ．，Ｌｔｄ．；ロット番号：４ＨＮ７Ｂ－ＯＤ）およびトリメチルアルミニウム溶液（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；ロット番号ＳＴＢＧ１１３５Ｖ）の溶液を、室温で１０分間、窒素保護下で撹拌し、その後、白色沈殿が形成された。ケトン基質２および２－プロパノール（ＴｅｄｉａＣｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．；ロット番号：１５０４０１２８）を反応物に添加し、室温で１６時間撹拌した。完了時に、反応混合物をロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ロット番号ＨＴ８０１８６）を通して精製した。体積比（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）を有する溶離液系。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。
表６は、異なるキラル還元試薬を使用することによる、化合物ＯＢＩ－３４２４－６の生成物収率を示す。それにより、ＣＢＳ触媒が、化合物ＯＢＩ－３４２４－６合成に関して最も効率的な試薬であることが示された。それどころか、ＮａＢＨ₄を使用することにより、Ｓ体またはＲ体特異的生成物を生成することはできなかった。

さらに、本発明者らはまた、Ｒ－ＣＢＳ／Ｓ－ＣＢＳ、（－）－ＤＩＰ塩化物／（＋）塩化物、水素化ホウ素ナトリウム、または（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトールを使用することにより、数種のケトン基質の試験を行った（表７を参照のこと）。表７は、異なるケトン基質を使用することによる生成物収率を示した。

（実施例６）
化合物ＯＢＩ－３４２６－６Ｒ／Ｓ混合物からのリパーゼ酵素選択によるエナンチオマー分離

化合物ＯＢＩ－３４２４－６を酢酸イソプロペニルに溶解して、予混合物溶液とした。リパーゼ（ＣＡＬＢ）およびＮａ₂ＣＯ₃を、予混合物溶液に添加して、室温（２５℃）に置いた。反応時間が、Ｒ体およびＳ体の選択で異なることに注意されたい（２．１節、Ｒ－選択は４時間、一方、Ｓ－選択は２０時間）。反応後、上部の溶液を濾過して（またはピペットで取り出し）、リパーゼ樹脂を除去し、さらなる精製のために清浄な試験官に移した（ＴＬＣ確認系＝ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／２／１体積比）。酵素反応溶液を、ロータリーエバポレーター（水浴の温度＝約３５℃、圧力＝約５０ｍｂａｒ）により濃縮して、シロップを得た。シロップを、次に、シリカゲルのパッド上に載せて（体積比ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝５／１パッキング）、溶離液系は、以下の記載のように提案された：体積比ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝３／１（１カラム体積）、次に、１／１（１．５カラム体積）、次に、１／４（３カラム体積）、期待された生成物が収集されるまで；ＴＬＣ確認溶離液系＝ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／２／１、化合物ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＳのＲｆ＝０．３、化合物ＯＢＩ－３４２４－６－ＡｃのＲｆ＝０．５。化合物ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＳを、このステップで得る。加えて、本発明者らはまた、異なる種類のリパーゼ（例えば、コウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ）からのリパーゼＢまたはカンジダ・アンタークチカ（ＣａｎｄｉｄａＡｎｔａｒｃｔｉｃａ）から固定化されたリパーゼ）の反応活性の試験を行った。ヒドロキシル基質の溶液を、酢酸イソプロペニル（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；ロット番号ＳＴＢＨ５７６８）に室温で溶解した。Ｎａ₂ＣＯ₃（Ｓｈｏｗａ．；ロット番号ＫＤＬ－１００Ｗ）およびリパーゼアクリル樹脂（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ．Ｉｎｃ．；ロット番号ＳＬＢＷ１５４４）またはＩｍｍｏｂｅａｄ１５０に固定化された、コウジカビからの組換え体のリパーゼＢカンジダ・アンタークチカ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；ロット番号ＢＣＢＺ７６０４）、またはカンジダ・アンタークチカからの固定化されたリパーゼ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；ロット番号ＢＣＢＤ５５５１）を、溶液に添加した。反応混合物を、室温で１６時間置いた。反応混合物を濾過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。

加えて、本発明者らはまた、酢酸イソプロペニルと置き換えるために、別の試薬－酪酸２，２，２－トリフルオロエチルの試験を行った。ヒドロキシル基質の溶液を、酪酸２，２，２－トリフルオロエチル（ＴｏｋｙｏＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙＣｏ．，Ｌｔｄ．；ロット番号：ＣＯＲＰＣ－ＨＱ）に室温で溶解した。Ｎａ₂ＣＯ₃（Ｓｈｏｗａ．；ロット番号ＫＤＬ－１００Ｗ）およびリパーゼアクリル樹脂（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；ロット番号ＳＬＢＷ１５４４）を溶液に添加した。反応混合物を、室温で１６時間置いた。反応混合物を濾過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。表８は、異なるリパーゼを使用することによる生成物収率を示した。異なる種類のリパーゼ間に有意な差異はないことが示された。

さらに、本発明者らはまた、異なる種類のリパーゼを使用することにより、数種の基質の試験を行った（表９を参照のこと）。表９は、リパーゼを使用することによる、数種の異なる基質の生成物収率を示した。

（実施例７）
Ｓ体優勢のリパーゼ選択的加水分解

ステップＡ：アセチル基質の溶液を、ＴＨＦ（ＡｃｒｏｓＯｒｇａｎｉｃｓ；ロット番号：１８５０２６６）および０．１Ｍ、ｐＨ７．０のリン酸カリウム緩衝剤（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；ロット番号ＭＫＢＸ６３８８Ｖ）に室温で溶解した。リパーゼアクリル樹脂（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；ロット番号ＳＬＢＷ１５４４）を、溶液に添加した。反応混合物を、室温で１６時間置いた。反応混合物を濾過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。

ステップＢ：アセチル基質の溶液を、ＭｅＯＨ（ＢｉｏＳｕｐｅｒＳｔａｒＣｏ．，Ｌｔｄ．；ロット番号：１４０２２５６９）に室温で溶解した。ＮａＯＭｅを、溶液に添加した。次に、反応混合物を室温で１時間撹拌した。完了時に、反応混合物をＨＣｌ（ＭｅＯＨ中の１Ｎ）でクエンチし、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。表１０は、リパーゼを使用することによる、アセチル基質の生成物収率を示した。

（実施例８）
化合物ＯＢＩ－３４２６－６Ｒ／Ｓ混合物からのプロテアーゼ酵素選択エステル交換

ステップＡ：ヒドロキシル基質の溶液を、２，２，２－酪酸トリフルオロエチル（ＴｏｋｙｏＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙＣｏ．，Ｌｔｄ．；ロット番号：ＣＯＲＰＣ－ＨＱ）に室温で溶解した。異なる種からのプロテアーゼ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）から、ロット番号ＳＬＢＸ１９８６またはストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｕｓ）から、ロット番号ＳＬＣＢ９８１５）を、溶液に添加した。反応混合物を、室温で１６時間置いた。反応混合物を濾過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＳＹ３５０）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。

ステップＢ：アセチル基質の溶液を、ＭｅＯＨに室温で溶解した。ＮａＯＭｅを、溶液に添加した。次に、反応混合物を室温で１時間撹拌した。完了時に、反応混合物をＨＣｌ（ＭｅＯＨ中の１Ｎ）でクエンチし、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。表１１は、異なるプロテアーゼを使用することによる生成物収率を示した。２種のリパーゼが両方とも低収率であることが示された。

（実施例９）
Ｓ体優勢のプロテアーゼ選択的加水分解

アセチル基質の溶液を、エチルエーテル（ＡｖａｎｔｏｒＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＭａｔｅｒｉａｌｓ，Ｉｎｃ．；ロット番号：００００１２８５３３）および０．１Ｍ、ｐＨ７．０のリン酸カリウム緩衝剤（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；ロット番号ＭＫＢＸ６３８８Ｖ）に室温で溶解した。プロテアーゼ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；バチルス・リケニフォルミスからのプロテアーゼ、ロット番号ＳＬＢＸ１９８６）を、溶液に添加した。反応混合物を、室温で１６時間置いた。反応混合物を濾過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。表１２は、プロテアーゼを使用することによる、アセチル基質の生成物収率を示した。

（実施例１０）
ケトン－Ｒ体優勢のエナンチオ選択的還元
ステップＡ：ヒドロキシル基質の溶液を、酢酸イソプロペニル（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；ロット番号ＳＴＢＨ５７６８）に室温で溶解した。Ｎａ₂ＣＯ₃およびリパーゼアクリル樹脂（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；ロット番号ＳＬＢＷ１５４４）を溶液に添加した。反応混合物を、室温で１６時間置いた。反応混合物を濾過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。
ステップＢ：アセチル基質の溶液を、ＭｅＯＨに室温で溶解した。ＮａＯＭｅを、溶液に添加した。次に、反応混合物を室温で１時間撹拌した。完了時に、反応混合物をＨＣｌ（ＭｅＯＨ中の１Ｎ）でクエンチし、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。表１３は、リパーゼ試薬を使用することによる、アセチル基質の生成物収率を示した。

（実施例１１）
Ｒ体優勢のリパーゼ選択的加水分解

アセチル基質の溶液を、エチルエーテル（ＡｖａｎｔｏｒＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＭａｔｅｒｉａｌｓ，Ｉｎｃ．；ロット番号：００００１２８５３３）および０．１Ｍ、ｐＨ７．０のリン酸カリウム緩衝剤に室温で溶解した。リパーゼアクリル樹脂（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；ロット番号ＳＬＢＷ１５４４）を溶液に添加した。反応混合物を、室温で１６時間置いた。反応混合物を濾過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。表１４は、リパーゼ試薬を使用することによる、アセチル基質の生成物収率を示した。

（実施例１２）
Ｒ体優勢のプロテアーゼ選択的加水分解
ステップＡ：アセチル基質の溶液を、エチルエーテル（ＡｖａｎｔｏｒＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＭａｔｅｒｉａｌｓ，Ｉｎｃ．；ロット番号：００００１２８５３３）および０．１Ｍ、ｐＨ７．０のリン酸カリウム緩衝剤に室温で溶解した。プロテアーゼ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．；バチルス・リケニフォルミスからのプロテアーゼ、ロット番号ＳＬＢＸ１９８６）を、溶液に添加した。反応混合物を、室温で１６時間置いた。反応混合物を濾過し、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。

ステップＢ：アセチル基質の溶液を、ＭｅＯＨに室温で溶解した。ＮａＯＭｅを、溶液に添加した。次に、反応混合物を室温で１時間撹拌した。完了時に、反応混合物をＨＣｌ（ＭｅＯＨ中の１Ｎ）でクエンチし、ロータリーエバポレーターにより濃縮して、粗製物を得た。残留物を、カラムクロマトグラフィーによりシリカゲルのパッド（ＦＵＪＩＳｉｌｙｓｉａＣｈｅｍｉｃａｌＬｔｄ．；ＣａｔＮｏ．ＨＴ８０１８６）を通して精製した。カラム体積についての溶離液系（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１／４～３／１）。収集した画分を、ロータリーエバポレーターおよび高真空により濃縮して、生成物を得た。表１５は、プロテアーゼを使用することによる、アセチル基質の生成物収率を示した。

別段に定義されない限り、本明細書で使用されるあらゆる技術用語および科学用語ならびにあらゆる頭字語は、本発明の分野における通常の知識を有する者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または同等の情報を伝えるためのあらゆる組成物、方法、キット、および手段が、本発明を実行するために使用され得るが、情報を伝えるための好ましい組成物、方法、キット、および手段は、本明細書に記載されている。

本明細書に引用される全ての参考文献は、法的に許される程度の限り、本明細書に参照により組み込まれる。これらの参考文献の議論は、それらの著者によりなされる主張を単に要約することを意図する。任意の参考文献（または任意の参照文献の一部）が関連する先行技術であるとして認めるものではない。出願者は、任意の引用された参考文献の精確さおよび妥当性を問題にする権利を留保する。
次に、本発明のまた別の好ましい態様を示す。
１．式１の化合物を調製する方法であって、
ステップ（１）：式２の化合物を式３ａの化合物と、ＢＨ ₃ 、Ｂ－クロロジイソピノカンフェイルボラン（ＤＩＰ塩化物）、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ ₄ の存在下で反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、Ｎａ ₂ ＣＯ ₃ 、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、Ｎａ ₂ ＣＯ ₃ 、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させ；ステップ（Ｂ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させる
ステップを含む、方法。

式1

[式中、Ｒは、

、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、電子求引基、または電子供与基である]
２．環状基が、芳香族基、環状飽和もしくは部分的不飽和基、または複素環基であり；電子求引基が、ハロ、ニトロソ、アミノカルボニル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、アシル、ハロホルミル、トリハロメチル、シアノ、ニトロ、アンモニウム基、アジド、またはスルホニル基であり；電子供与基が、アルキル、ビニル、フェニル、アシルオキシル、アシルアミド、アルキルチオ、スルフヒドリル（ｓｕｌｆｈｙｆｒｙｌ）、ヒドロキシル、アルコキシ、またはアミノ基である、上記１に記載の方法。
３．式１の化合物が、式１ａの化合物であり、式２の化合物が、式２ａの化合物である、上記１に記載の方法。

４．ステップ（１）の生成物が、式５の化合物である、上記３に記載の方法。

式5
５．式１の化合物を調製する方法であって、
ステップ（１ａ）：式２の化合物を式３ａの化合物と、ＢＨ ₃ 、ＤＩＰ塩化物、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ ₄ の存在下で反応させるステップ；
ステップ（１ｂ）：ステップ（１ａ）の生成物を無水酢酸（Ａｃ ₂ Ｏ）と反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１ｂ）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、およびＮａ ₂ ＣＯ ₃ と反応させ；ステップ（Ａ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、およびＮａ ₂ ＣＯ ₃ と反応させる
ステップ
を含む、方法。

式1

［式中、Ｒは、

、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、電子求引基、または電子供与基である］
６．環状基が、芳香族基、環状飽和もしくは部分的不飽和基、または複素環基であり；電子求引基が、ハロ、ニトロソ、アミノカルボニル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、アシル、ハロホルミル、トリハロメチル、シアノ、ニトロ、アンモニウム基、アジド、またはスルホニル基であり；電子供与基が、アルキル、ビニル、フェニル、アシルオキシル、アシルアミド、アルキルチオ、スルフヒドリル（ｓｕｌｆｈｙｆｒｙｌ）、ヒドロキシル、アルコキシ、またはアミノ基である、上記５に記載の方法。
７．式１の化合物が、式１ａの化合物であり、式２の化合物が、式２ａの化合物である、上記５に記載の方法。

８．ステップ（１ｂ）の生成物が、式６の化合物である、上記７に記載の方法。

式6
９．式４の化合物を調製する方法であって、
ステップ（１）：式２の化合物を式３ｂの化合物と、ＢＨ ₃ 、ＤＩＰ塩化物、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ ₄ の存在下で反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、Ｎａ ₂ ＣＯ ₃ 、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させ；ステップ（Ａ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、Ｎａ ₂ ＣＯ ₃ 、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させる
ステップを含む方法。

式4

［式中、Ｒは、

、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、電子求引基、または電子供与基である］
１０．環状基が、芳香族基、環状飽和もしくは部分的不飽和基、または複素環基であり；電子求引基が、ハロ、ニトロソ、アミノカルボニル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、アシル、ハロホルミル、トリハロメチル、シアノ、ニトロ、アンモニウム基、アジド、またはスルホニル基であり；電子供与基が、アルキル、ビニル、フェニル、アシルオキシル、アシルアミド、アルキルチオ、スルフヒドリル（ｓｕｌｆｈｙｆｒｙｌ）、ヒドロキシル、アルコキシ、またはアミノ基である、上記９に記載の方法。
１１．式４の化合物が、式４ａの化合物であり、かつ式２の化合物が、式２ａの化合物である、上記９に記載の方法。

１２．ステップ（１）の生成物が、式５の化合物である、上記１１に記載の方法。

式5
１３．式４の化合物を調製する方法であって、
ステップ（１ａ）：式２の化合物を式３ｂの化合物と、ＢＨ ₃ 、ＤＩＰ塩化物、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ ₄ の存在下で反応させるステップ；
ステップ（１ｂ）：ステップ（１ａ）の生成物をと無水酢酸（Ａｃ ₂ Ｏ）と反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１ｂ）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、およびＮａ ₂ ＣＯ ₃ と反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、およびＮａ ₂ ＣＯ ₃ と反応させ；ステップ（Ａ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させる
ステップを含む方法。

式4

［式中、Ｒは、

、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、電子求引基、または電子供与基である］
１４．環状基が、芳香族基、環状飽和もしくは部分的不飽和基、または複素環基であり；電子求引基が、ハロ、ニトロソ、アミノカルボニル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、アシル、ハロホルミル、トリハロメチル、シアノ、ニトロ、アンモニウム基、アジド、またはスルホニル基であり；電子供与基が、アルキル、ビニル、フェニル、アシルオキシル、アシルアミド、アルキルチオ、スルフヒドリル（ｓｕｌｆｈｙｆｒｙｌ）、ヒドロキシル、アルコキシ、またはアミノ基である、上記１３に記載の方法。
１５．式４の化合物が、式４ａの化合物であり、かつ式２の化合物が、式２ａの化合物である、上記５に記載の方法。

１６．ステップ（１ｂ）の生成物が、式６の化合物である、上記１５に記載の方法。

式6
１７．化合物（Ｒ）－１－（３－（３－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ，Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホルアミデート

および化合物（Ｓ）－１－（３－（３－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ，Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホルアミデート

の収率または光学純度を改善する方法であって、
ステップ（ａ）：不斉還元、
ステップ（ｂ）：リパーゼ／プロテアーゼ選択的保護、
ステップ（ｃ）：ホスフェート組込み；および
ステップ（ｄ）：アジリジン形成
のステップを含む、方法。
１８．ステップ（ｂ）が：
ステップ（ｉ）：リパーゼエステル交換反応，
ステップ（ｉｉ）：リパーゼ加水分解、
ステップ（ｉｉｉ）：プロテアーゼエステル交換反応；または
ステップ（ｉｖ）：プロテアーゼ加水分解
のステップをさらに含む、上記１７に記載の方法。

Claims

式１の化合物を調製する方法であって、
ステップ（１）：式２の化合物を式３ａの化合物と、ＢＨ₃、Ｂ－クロロジイソピノカンフェイルボラン（ＤＩＰ塩化物）、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ₄の存在下で反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させ；ステップ（Ｂ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させる
ステップを含む、方法。

式1

[式中、Ｒは、
、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、非置換もしくは置換された電子求引基、または非置換もしくは置換された電子供与基であり、ＲがＲｘである場合、Ｒｘは水素ではなく、環状基が、フェニル基であり；電子求引基が、ハロ、ニトロソ、アミノカルボニル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、アシル、ハロホルミル、トリハロメチル、シアノ、ニトロ、アンモニウム基、アジド、またはスルホニル基であり；電子供与基が、アルキル、ビニル、フェニル、アシルオキシル、アシルアミド、アルキルチオ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、アルコキシ、またはアミノ基である]
式１の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＳの化合物であり、式２の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－５の化合物である、請求項１に記載の方法。
ステップ（１）の生成物が、式５の化合物である、請求項２に記載の方法。

式5
式ＯＢＩ－３４２４－５の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－３の化合物を式ＯＢＩ－３４２４－４の化合物およびＣｓ₂ＣＯ₃と反応させて得られ、式ＯＢＩ－３４２４－３の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－１の化合物をＳＯＣｌ₂、マロン酸ジメチル、ＭｇＣｌ₂、及びＨＣｌと反応させて得られ、式ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＳの化合物が、ＰＯＣｌ₃、トリエチルアミン、およびＨ₂ＮＣＨ₂ＣＨ₂Ｂｒとの反応によって式ＯＢＩ－３４２４－７の化合物を調製するために使用され、式ＯＢＩ－３４２４の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－７の化合物をＡｇ₂Ｏと反応させて得られる、請求項２に記載の方法。
式１の化合物を調製する方法であって、
ステップ（１ａ）：式２の化合物を式３ａの化合物と、ＢＨ₃、ＤＩＰ塩化物、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ₄の存在下で反応させるステップ；
ステップ（１ｂ）：ステップ（１ａ）の生成物を無水酢酸（Ａｃ₂Ｏ）と反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１ｂ）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、およびＮａ₂ＣＯ₃と反応させ；ステップ（Ａ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、およびＮａ₂ＣＯ₃と反応させる
ステップ
を含む、方法。

式1

［式中、Ｒは、
、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、非置換もしくは置換された電子求引基、または非置換もしくは置換された電子供与基であり、ＲがＲｘである場合、Ｒｘは水素ではなく、環状基が、フェニル基であり；電子求引基が、ハロ、ニトロソ、アミノカルボニル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、アシル、ハロホルミル、トリハロメチル、シアノ、ニトロ、アンモニウム基、アジド、またはスルホニル基であり；電子供与基が、アルキル、ビニル、フェニル、アシルオキシル、アシルアミド、アルキルチオ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、アルコキシ、またはアミノ基である］
式１の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＳの化合物であり、式２の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－５の化合物である、請求項５に記載の方法。
ステップ（１ｂ）の生成物が、式６の化合物である、請求項６に記載の方法。

式6
式ＯＢＩ－３４２４－５の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－３の化合物を式ＯＢＩ－３４２４－４の化合物およびＣｓ₂ＣＯ₃と反応させて得られ、式ＯＢＩ－３４２４－３の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－１の化合物をＳＯＣｌ₂、マロン酸ジメチル、ＭｇＣｌ₂、及びＨＣｌと反応させて得られ、式ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＳの化合物が、ＰＯＣｌ₃、トリエチルアミン、およびＨ₂ＮＣＨ₂ＣＨ₂Ｂｒとの反応によって式ＯＢＩ－３４２４－７の化合物を調製するために使用され、式ＯＢＩ－３４２４の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－７の化合物をＡｇ₂Ｏと反応させて得られる、請求項６に記載の方法。
式４の化合物を調製する方法であって、
ステップ（１）：式２の化合物を式３ｂの化合物と、ＢＨ₃、ＤＩＰ塩化物、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ₄の存在下で反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させ；ステップ（Ａ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、Ｎａ₂ＣＯ₃、ならびに酢酸イソプロペニルおよび２，２，２－酪酸トリフルオロエチルのうちの１つと反応させる
ステップを含む方法。

式4

［式中、Ｒは、
、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、非置換もしくは置換された電子求引基、または非置換もしくは置換された電子供与基であり、ＲがＲｘである場合、Ｒｘは水素ではなく、環状基が、フェニル基であり；電子求引基が、ハロ、ニトロソ、アミノカルボニル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、アシル、ハロホルミル、トリハロメチル、シアノ、ニトロ、アンモニウム基、アジド、またはスルホニル基であり；電子供与基が、アルキル、ビニル、フェニル、アシルオキシル、アシルアミド、アルキルチオ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、アルコキシ、またはアミノ基である］
式４の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＲの化合物であり、かつ式２の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－５の化合物である、請求項９に記載の方法。
ステップ（１）の生成物が、式５の化合物である、請求項１０に記載の方法。

式5
式ＯＢＩ－３４２４－５の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－３の化合物を式ＯＢＩ－３４２４－４の化合物およびＣｓ₂ＣＯ₃と反応させて得られ、式ＯＢＩ－３４２４－３の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－１の化合物をＳＯＣｌ₂、マロン酸ジメチル、ＭｇＣｌ₂、及びＨＣｌと反応させて得られ、式ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＲの化合物が、ＰＯＣｌ₃、トリエチルアミン、およびＨ₂ＮＣＨ₂ＣＨ₂Ｂｒとの反応によって式ＯＢＩ－３４２４－７の化合物を調製するために使用され、式ＯＢＩ－３４２３の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－７の化合物をＡｇ₂Ｏと反応させて得られる、請求項１０に記載の方法。
式４の化合物を調製する方法であって、
ステップ（１ａ）：式２の化合物を式３ｂの化合物と、ＢＨ₃、ＤＩＰ塩化物、（Ｓ）－（－）－１，１’－Ｂｉ－２－ナフトール、またはＮａＢＨ₄の存在下で反応させるステップ；
ステップ（１ｂ）：ステップ（１ａ）の生成物を無水酢酸（Ａｃ₂Ｏ）と反応させるステップ；および
ステップ（２）：ステップ（１ｂ）の生成物を
（Ａ）リパーゼアクリル樹脂、およびＮａ₂ＣＯ₃と反応させるか；または
（Ｂ）プロテアーゼ、およびＮａ₂ＣＯ₃と反応させ；ステップ（Ｂ）の生成物をナトリウムメトキシドとメタノールの存在下で反応させる
ステップを含む方法。

式4

［式中、Ｒは、
、脂肪族鎖、またはＲｘであり；
Ｒｘは、水素、非置換もしくは置換された環状基、非置換もしくは置換された電子求引基、または非置換もしくは置換された電子供与基であり、ＲがＲｘである場合、Ｒｘは水素ではなく、環状基が、フェニル基であり；電子求引基が、ハロ、ニトロソ、アミノカルボニル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、アシル、ハロホルミル、トリハロメチル、シアノ、ニトロ、アンモニウム基、アジド、またはスルホニル基であり；電子供与基が、アルキル、ビニル、フェニル、アシルオキシル、アシルアミド、アルキルチオ、スルフヒドリル、ヒドロキシル、アルコキシ、またはアミノ基である］
式４の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＲの化合物であり、かつ式２の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－５の化合物である、請求項１３に記載の方法。
ステップ（１ｂ）の生成物が、式６の化合物である、請求項１４に記載の方法。

式6
式ＯＢＩ－３４２４－５の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－３の化合物を式ＯＢＩ－３４２４－４の化合物およびＣｓ₂ＣＯ₃と反応させて得られ、式ＯＢＩ－３４２４－３の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－１の化合物をＳＯＣｌ₂、マロン酸ジメチル、ＭｇＣｌ₂、及びＨＣｌと反応させて得られ、式ＯＢＩ－３４２４－６－ＬＲの化合物が、ＰＯＣｌ₃、トリエチルアミン、およびＨ₂ＮＣＨ₂ＣＨ₂Ｂｒとの反応によって式ＯＢＩ－３４２４－７の化合物を調製するために使用され、式ＯＢＩ－３４２３の化合物が、式ＯＢＩ－３４２４－７の化合物をＡｇ₂Ｏと反応させて得られる、請求項１４に記載の方法。