JP7404689B2 - Fc結合性タンパク質を固定化した抗体吸着剤、およびそれを用いた抗体分離法 - Google Patents
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(a)配列番号3に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該33番目から208番目までのアミノ酸残基において、少なくとも192番目のバリンがフェニルアラニンにアミノ酸置換され、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(b)配列番号3に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該33番目から208番目までのアミノ酸残基において、少なくとも192番目のバリンがフェニルアラニンにアミノ酸置換され、さらに1もしくは数個の位置での1もしくは数個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、または付加を含むアミノ酸配列を有し、かつFcR9のアミノ酸置換を保持し、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(c)配列番号3に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該33番目から208番目までのアミノ酸配列に対して80%以上の相同性を有し、かつFcR9のアミノ酸置換を保持し、かつ少なくとも192番目のバリンがフェニルアラニンにアミノ酸置換され、かつ抗体結合活性を有するタンパク質(d)配列番号13に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(e)配列番号13に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該33番目から208番目までのアミノ酸残基において、さらに1もしくは数個の位置での1もしくは数個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、または付加を含むアミノ酸配列を有し、かつFcR36iのアミノ酸置換を保持し、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(f)配列番号13に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該33番目から208番目までのアミノ酸配列に対して80%以上の相同性を有し、かつFcR36iのアミノ酸置換を保持し、かつ抗体結合活性を
有するタンパク質
[4]多孔質親水性ポリマーが、ポリメタクリレートである、[1]から[3]のいずれかに記載の吸着剤。
(i)配列番号1に記載の天然型ヒトFcγRIIIaのアミノ酸配列のうち、細胞外領域(図1ではEC領域)の一部である、17番目のグリシンから192番目のグルタミンまでのアミノ酸残基を少なくとも含むタンパク質;
(ii)配列番号1に記載のアミノ酸配列の17番目のグリシンから192番目のグルタミンまでのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該17番目から192番目までのアミノ酸残基において、少なくとも176番目のバリンがフェニルアラニンにアミノ酸置換され、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(iii)配列番号1に記載のアミノ酸配列の17番目のグリシンから192番目のグルタミンまでのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該17番目から192番目までのアミノ酸残基において、少なくとも176番目のバリンがフェニルアラニンにアミノ酸置換され、さらに1もしくは数個の位置での1もしくは数個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、または付加を含むアミノ酸配列を有し、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;(iv)配列番号1に記載のアミノ酸配列の17番目のグリシンから192番目のグルタミンまでのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該17番目から208番目までのアミノ酸配列に対して70%以上、好ましくは80%以上、更に好ましくは90%以上、特に好ましくは95%以上、の相同性を有し、かつ少なくとも176番目のバリンがフェニルアラニンにアミノ酸置換され、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(v)配列番号3に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基(配列番号1に記載のアミノ酸配列の17番目のグリシンから192番目のグルタミンまでのアミノ酸残基のうち、9箇所アミノ酸置換したポリペプチド)を少なくとも含み、ただし当該33番目から208番目までのアミノ酸残基において、少なくとも192番目のバリンがフェニルアラニンにアミノ酸置換され、かつ抗体結合活性を有するタンパク質(vi)配列番号3に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該33番目から208番目までのアミノ酸残基において、少なくとも192番目のバリンがフェニルアラニンにアミノ酸置換され、さらに1もしくは数個の位置での1もしくは数個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、または付加を含むアミノ酸配列を有し、かつFcR9のアミノ酸置換を保持し、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(vii)配列番号3に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該33番目から208番目までのアミノ酸配列に対して80%以上、より好ましくは90%以上、更に好ましくは95%以上、の相同性を有し、かつFcR9のアミノ酸置換を保持し、かつ少なくとも192番目のバリンがフェニルアラニンにアミノ酸置換され、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(viii)配列番号5に記載のアミノ酸配列のうち、33番目のグリシンから208番目のグルタミンまでのアミノ酸残基(配列番号3に記載のアミノ酸配列の33番目のグリシンから208番目のグルタミンまでのアミノ酸残基のうち、192番目のバリンをフェニルアラニンにアミノ酸置換したポリペプチド)を少なくとも含むタンパク質;
(ix)配列番号1に記載のアミノ酸配列の17番目のグリシンから192番目のグルタミンまでのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該17番目から192番目までのアミノ酸残基において、少なくとも176番目のバリンがイソロイシンにアミノ酸置換され、
かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(x)配列番号1に記載のアミノ酸配列の17番目のグリシンから192番目のグルタミンまでのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該17番目から192番目までのアミノ酸残基において、少なくとも176番目のバリンがイソロイシンにアミノ酸置換され、さらに1もしくは数個の位置での1もしくは数個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、または付加を含むアミノ酸配列を有し、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;;
(xi)配列番号1に記載のアミノ酸配列の17番目のグリシンから192番目のグルタミンまでのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該17番目から208番目までのアミノ酸配列に対して70%以上、好ましくは80%以上、更に好ましくは90%以上、特に好ましくは95%以上、の相同性を有し、かつ少なくとも176番目のバリンがイソロイシンにアミノ酸置換され、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(xii)配列番号13に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基(配列番号1に記載のアミノ酸配列の17番目のグリシンから192番目のグルタミンまでのアミノ酸残基のうち、36箇所アミノ酸置換したポリペプチド)を少なくとも含み、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(xiii)配列番号13に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、さらに1もしくは数個の位置での1もしくは数個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、または付加を含むアミノ酸配列を有し、かつFcR36iのアミノ酸置換を保持し、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(xiv)配列番号13に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該33番目から208番目までのアミノ酸配列に対して80%以上、より好ましくは90%以上、更に好ましくは95%以上、の相同性を有し、かつFcR36iのアミノ酸置換を保持し、かつ抗体結合活性を有するタンパク質。
空孔率(%)=((Vn-Vo)/(Vc-Vo))x100。
WO2015/199154号に記載の方法で作製したFc結合性タンパク質FcR9(配列番号3)に対し、192番目のバリン(配列番号1に記載のアミノ酸配列からなる天然型ヒトFcγRIIIaでは176番目のバリンに相当)をフェニルアラニンにアミノ酸置換したFc結合性タンパク質FcR9_Fを作製した。
(1)実施例1で作製したFcR9_F(配列番号5)をコードするポリヌクレオチド(配列番号6)を含む発現ベクターpET-FcR9_Fを鋳型としてPCRを実施した。当該PCRにおけるプライマーは、配列番号7(5’-TAGCCATGGGCATGCGTACCGAAGATCTGCCGAAAGC-3’)および配列番号8(5’-CCCAAGCTTATCCGCAGGTATCGTTGCGGCACCCTTGGGTAATGGTAATATTCACGGTCTCGCTGC-3’)に記載の配列からなるオリゴヌクレオチドを用いた。PCRは、表1に示す組成の反応液を調製後、当該反応液を98℃で5分間熱処理し、98℃で10秒間の第1ステップ、55℃で5秒間の第2ステップ、72℃で1分間の第3ステップを1サイクルとする反応を30サイクル繰り返すことで実施した。
(1)実施例2で作製したFcR9_F_Cysを発現する形質転換体を2Lのバッフルフラスコに入った100μg/mLのカルベニシリンを含む400mLの2YT液体培地(ペプトン16g/L、酵母エキス10g/L、塩化ナトリウム5g/L)に接種し、37℃で一晩、好気的に振とう培養することで前培養を行なった。
配列番号2に示す天然型ヒトFcγRIIIa細胞外領域を含むFc結合性タンパク質に対し、36箇所のアミノ酸置換したFc結合性タンパク質FcR36iを作製した。FcR36iは、配列番号2に示す天然型ヒトFcγRIIIa細胞外領域を含むFc結合性タンパク質において、37番目(配列番号1では21番目に相当)のグルタミン酸をグリシンに、39番目(配列番号1では23番目に相当)のロイシンをメチオニンに、43番目(配列番号1では27番目に相当)のバリンをグルタミン酸に、45番目(配列番号1では29番目に相当)のフェニルアラニンをイソロイシンに、49番目(配列番号1では33番目に相当)のグルタミンをプロリンに、51番目(配列番号1では35番目に相当)のチロシンをアスパラギンに、56番目(配列番号1では40番目に相当)のリジンをグルタミンに、64番目(配列番号1では48番目に相当)のグルタミンをアルギニンに、67番目(配列番号1では51番目に相当)のチロシンをヒスチジンに、70番目(配列番号1では54番目に相当)のグルタミン酸のアスパラギン酸に、72番目(配列番号1では56番目に相当)のアスパラギンをアスパラギン酸に、81番目(配列番号1では65番目に相当)のセリンをアルギニンに、84番目(配列番号1では68番目に相当)のセリンをプロリンに、90番目(配列番号1では74番目に相当)のチロシンをフェニルアラニンに、91番目(配列番号1では75番目に相当)のフェニルアラニンをイソロイシンに、94番目(配列番号1では78番目に相当)のアラニンをセリンに、96番目(配列番号1では80番目に相当)のスレオニンをセリンに、108番目(配列番号1では92番目に相当)のアスパラギンをセリンに、133番目(配列番号1では117番目に相当)のバリンをグルタミン酸に、135番目(配列番号1では119番目に相当)のリジンをバリンに、137番目(配列番号1では121番目に相当)のグルタミン酸をグリシンに、138番目(配列番号1では122番目に相当)のアスパラギン酸をグルタミン酸に、148番目(配列番号1では132番目に相当)のリジンをアルギニン に、156番目(配列番号1では140番目に相当)のスレオニンをメチオニンに、157番目(配列番号1では141番目に相当)のチロシンをフェニルアラニンに、163番目(配列番号1では147番目に相当)のグリシンをバリンに、174番目(配列番号1では158番目に相当)のチロシンをバリンに、181番目(配列番号1では165番目に相当)のリジンをグルタミン酸に、187番目(配列番号1では171番目に相当)のフェニルアラニンをセリンに、192番目(配列番号1では176番目に相当)のバリンをイソロイシンに、194番目(配列番号1では178番目に相当)のセリンをアルギニンに、196番目(配列番号1では180番目に相当)のアスパラギンをリジンに、200番目(配列番号1では184番目に相当)のグルタミン酸をグリシンに、201番目(配列番号1では185番目に相当)のスレオニンをアラニンに、203番目(配列番号1では187番目に相当)のアスパラギンをアスパラギン酸に、206番目(配列番号1では190番目に相当)のイソロイシンをバリンに、それぞれアミノ酸置換したFc結合性タンパク質である。本明細書では、前記の特定位置の36箇所のアミノ酸置換を「FcR36iのアミノ酸置換」と称することがある。
(1)実施例4で作製したFcR36i(配列番号13)をコードするポリヌクレオチド(配列番号14)を含む発現ベクターpET-FcR36iを鋳型として、実施例2(1)と同様の方法でPCRを実施した。なお、PCRにおけるプライマーは、配列番号15(5’- CATATGAAAATAAAAACAGGTGCACGCATCCTCGCATTATCCGCATTAACGAC-3’)および配列番号16(5’- CCCAAGCTTATCCGCAGGTATCGTTGCGGCACCCTTGGGTAACGGTAATGTCCACGGCCCCGCTG-3’)に記載の配列からなるオリゴヌクレオチドを用いた。
実施例5で作製したFcR36i_Cysを発現する形質転換体を用いたこと以外は、実施例3(1)から(7)と同様の方法により行い、高純度のFcR36i_Cysを約20mg得た。
(1)粒子径10μmの多孔質親水性ポリマー粒子表面に存在する水酸基をヨードアセチル基で活性化後、当該活性化ゲルに実施例3で調製したFcR9_F_Cysを反応させることにより、FcR9_F固定化ゲルを得た。
0μL)をスピンカラム(コスモスピンフィルターH 0.45μm、ナカライテスク製)へ添加し、3000rpmで1分間遠心することで、サクションドライゲルを調製した。
り未吸着の抗体を含んだ溶液とゲルを分離した。
3回繰り返すことでゲルを洗浄した。
pmで1分間遠心した。本操作を3回繰り返すことでゲルに吸着した抗体を溶出した。溶
出液の吸光度を測定することで抗体の濃度を算出し、FcR9_F固定化ゲルへの抗体の
吸着量を求めた。
(1)実施例6で調製したFcR36i_Cysを用いたこと以外は実施例7(1)と同様の方法により、FcR36i固定化ゲルを得た。
ー粒子による抗体吸着量の測定
(1)粒子径5.8μmの非多孔質親水性ポリマー粒子を用いたこと以外は、実施例7(1)と同様の方法によりFcR9_F固定化ゲルを得た。
粒子(比較例1)よりも粒子径10μmの多孔質親水性ポリマー粒子(実施例7、本発明の一態様)を用いたほうが、抗体吸着量が高いことがわかる。
(1)実施例6で調製したFcR36i_Cysを用いたこと以外は、比較例1(1)と同様の方法によりFcR36i固定化ゲルを得た。
(1)実施例7(1)で作製したFcR9_F固定化ゲル3.3mLをステンレスカラム(東ソー製、内径7.5mm)に充填し、当該カラムをHPLC装置(AKTA Avant、GEヘルスケア製)に接続後、pH5.8の50mMのクエン酸緩衝液(BufferA)を用いて平衡化した。
グラジエント)で、固定化ゲルに吸着したモノクローナル抗体を溶出した。
実施例8(1)で作製したFcR36i固定化ゲルを用いたこと以外は、実施例9(1)から(3)と同様の方法で抗体を分離した。
(1)粒子径30から60μmの多孔質親水性ポリマー粒子を用いたこと以外は実施例7(1)と同様の方法によりFcR9_F固定化ゲルを得た。
mの多孔質親水性ポリマー(実施例9、本発明の一態様)を使用したほうが、分離能が高いことがわかる。
(1)実施例6で調製したFcR36i_Cysを用いたこと以外は比較例3(1)と同様の方法によりFcR36i固定化ゲルを得た。
抗体としてアービタックス(メルクセローノ製)を用いたこと以外は、実施例9(1)から(3)と同様の方法で抗体を分離した。
溶出パターンを図6に示す。重なり合ったおよそ3つのピークに抗体を分離した。
また、図6に示す3つのフラクションFrE、FrFおよびFrGを分取し、糖鎖構造解析(実施例18)に用いた。
抗体としてハーセプチン(ロシュ製)を用いたこと以外は、実施例9(1)から(3)と同様の方法で抗体を分離した。
溶出パターンを図7に示す。3つのピークに抗体を分離した。
また、図7に示す3つのフラクションFrH、FrIおよびFrJを分取し、糖鎖構造解析(実施例19)に用いた。
抗体としてカドサイラ(ロシュ製)を用いたこと以外は、実施例9(1)から(3)と同様の方法で抗体を分離した。
溶出パターンを図8に示す。抗体は1つの大きなブロードなピークとして溶出された。
また、図8に示す3つのフラクションFrK、FrLおよびFrMを分取し、糖鎖構造解析(実施例20)に用いた。
抗体としてアバスチン(ロシュ製)を用いたこと以外は、実施例9(1)から(3)と同様の方法で抗体を分離した。
溶出パターンを図9に示す。抗体は大きな1つのピークとそのピークと重なった2つのピークとして溶出された。
また、図9に示す3つのフラクションFrN、FrOおよびFrPを分取し、糖鎖構造解析(実施例21)に用いた。
抗体としてヒュミラ(アッヴィ合同製)を用いたこと以外は、実施例9(1)から(3)と同様の方法で抗体を分離した。
溶出パターンを図10に示す。抗体は大きな1つのピークとそのピークと重なった2つのピークとして溶出された。
また、図10に示す4つのフラクションFrQ、FrR、FrSおよびFrTを分取し、糖鎖構造解析(実施例22)に用いた。
抗体としてアクテムラ(ロシュ製)を用いたこと以外は、実施例9(1)から(3)と同様の方法で抗体を分離した。
溶出パターンを図11に示す。抗体は重なり合った3つのピークとして溶出された。
また、図11に示す3つのフラクションFrU、FrVおよびFrWを分取し、糖鎖構造解析(実施例23)に用いた。
(1)実施例9で分取した図2のFrA、FrB、FrCおよびFrDにそれぞれ含まれる抗体を100℃、10分の熱処理により変性後、グリコアミダーゼA/ペプシンおよびプロナーゼで順次処理し、ゲルろ過法による精製操作を経て糖鎖画分を取得した。
実施例18 本発明の抗体吸着剤(FcR9_F、粒子径10μm)を用いてリニアグラジエント溶出により分離した抗体の糖鎖構造解析(アービタックス)
実施例11で分取した図6のFrE、FrFおよびFrGにそれぞれ含まれる抗体を用いたこと以外は、実施例17の(1)から(4)と同様の方法で糖鎖構造の解析を行った。
帰属した糖鎖構造の結果を図13および表5に示す。FrEに含まれる抗体と比較してFrGに含まれる抗体では末端にガラクトースを含む糖鎖構造(G1FaおよびG2F)を有した抗体の割合が高く、末端にガラクトースを含まない糖鎖構造(G0F)を有した抗体の割合が低かった。
実施例12で分取した図7のFrH、FrIおよびFrJにそれぞれ含まれる抗体を用いたこと以外は、実施例17の(1)から(4)と同様の方法で糖鎖構造の解析を行った。
帰属した糖鎖構造の結果を図14および表6に示す。FrHに含まれる抗体と比較してFrJに含まれる抗体では末端にガラクトースを含む糖鎖構造(G1FaおよびG2F)を有した抗体の割合が高く、末端にガラクトースを含まない糖鎖構造(G0F)を有した抗体の割合が低かった。
実施例13で分取した図8のFrK、FrLおよびFrMにそれぞれ含まれる抗体を用いたこと以外は、実施例17の(1)から(4)と同様の方法で糖鎖構造の解析を行った。
帰属した糖鎖構造の結果を図15および表7に示す。FrKに含まれる抗体と比較してFrMに含まれる抗体では末端にガラクトースを含む糖鎖構造(G1Fa)を有した抗体の割合が高く、末端にガラクトースを含まない糖鎖構造(G0F)を有した抗体の割合が低かった。
実施例14で分取した図9のFrN、FrOおよびFrPにそれぞれ含まれる抗体を用いたこと以外は、実施例17の(1)から(4)と同様の方法で糖鎖構造の解析を行った。
帰属した糖鎖構造の結果を図16および表8に示す。FrNに含まれる抗体と比較してFrPに含まれる抗体では末端にガラクトースを含む糖鎖構造(G1FaおよびG2F)を有した抗体の割合が高く、末端にガラクトースを含まない糖鎖構造(G0F)を有した抗体の割合が低かった。
実施例15で分取した図10のFrQ、FrR、FrSおよびFrTにそれぞれ含まれる抗体を用いたこと以外は、実施例17の(1)から(4)と同様の方法で糖鎖構造の解析を行った。
実施例16で分取した図11のFrU、FrVおよびFrWにそれぞれ含まれる抗体を用いたこと以外は、実施例17の(1)から(4)と同様の方法で糖鎖構造の解析を行った。
帰属した糖鎖構造の結果を図18および表10に示す。FrUに含まれる抗体と比較してFrWに含まれる抗体では末端にガラクトースを含む糖鎖構造(G1Fa)を有した抗体の割合が高く、末端にガラクトースを含まない糖鎖構造(G0F)を有した抗体の割合が低かった。
Claims (6)
- Fc結合性タンパク質を不溶性担体に固定化して得られる抗体吸着剤であって、不溶性担体が粒子径7μm以上15μm以下の多孔質親水性ポリマー粒子であり、
Fc結合性タンパク質がヒトFcγRIIIaであって、
以下の(a)から(f)のいずれかに記載のタンパク質である前記吸着剤。
(a)配列番号5に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、かつ抗体結合活性を有するタンパク質。
(b)配列番号5に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該33番目から208番目までのアミノ酸残基において、1もしくは数個の位置での1もしくは数個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、または付加を含むアミノ酸配列を有し、以下の(i)から(x)のアミノ酸残基を全て保持し、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(i)配列番号5の43番目のグルタミン酸
(ii)配列番号5の45番目のイソロイシン
(iii)配列番号5の51番目のアスパラギン
(iv)配列番号5の64番目のアルギニン
(v)配列番号5の91番目のロイシン
(vi)配列番号5の108番目のセリン
(vii)配列番号5の133番目のグルタミン酸
(viii)配列番号5の137番目のグリシン
(ix)配列番号5の187番目のセリン
(x)配列番号5の192番目のフェニルアラニン
(c)配列番号5に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ以下の(i)から(x)のアミノ酸残基を全て保持し、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(i)配列番号5の43番目のグルタミン酸
(ii)配列番号5の45番目のイソロイシン
(iii)配列番号5の51番目のアスパラギン
(iv)配列番号5の64番目のアルギニン
(v)配列番号5の91番目のロイシン
(vi)配列番号5の108番目のセリン
(vii)配列番号5の133番目のグルタミン酸
(viii)配列番号5の137番目のグリシン
(ix)配列番号5の187番目のセリン
(x)配列番号5の192番目のフェニルアラニン
(d)配列番号13に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(e)配列番号13に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸残基を少なくとも含み、ただし当該33番目から208番目までのアミノ酸残基において、さらに1もしくは数個の位置での1もしくは数個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、または付加を含むアミノ酸配列を有し、以下の(1)から(36)のアミノ酸残基を全て保持し、かつ抗体結合活性を有するタンパク質;
(1)配列番号13の37番目のグリシン
(2)配列番号13の39番目のメチオニン
(3)配列番号13の43番目のグルタミン酸
(4)配列番号13の45番目のイソロイシン
(5)配列番号13の49番目のプロリン
(6)配列番号13の51番目のアスパラギン
(7)配列番号13の56番目のグルタミン
(8)配列番号13の64番目のアルギニン
(9)配列番号13の67番目のヒスチジン
(10)配列番号13の70番目のアスパラギン酸
(11)配列番号13の72番目のアスパラギン酸
(12)配列番号13の81番目のアルギニン
(13)配列番号13の84番目のプロリン
(14)配列番号13の90番目のフェニルアラニン
(15)配列番号13の91番目のイソロイシン
(16)配列番号13の94番目のセリン
(17)配列番号13の96番目のセリン
(18)配列番号13の108番目のセリン
(19)配列番号13の133番目のグルタミン酸
(20)配列番号13の135番目のバリン
(21)配列番号13の137番目のグリシン
(22)配列番号13の138番目のグルタミン酸
(23)配列番号13の148番目のアルギニン
(24)配列番号13の156番目のメチオニン
(25)配列番号13の157番目のフェニルアラニン
(26)配列番号13の163番目のバリン
(27)配列番号13の174番目のバリン
(28)配列番号13の181番目のグルタミン酸
(29)配列番号13の187番目のセリン
(30)配列番号13の192番目のイソロイシン
(31)配列番号13の194番目のアルギニン
(32)配列番号13の196番目のリジン
(33)配列番号13の200番目のグリシン
(34)配列番号13の201番目のアラニン
(35)配列番号13の203番目のアスパラギン酸
(36)配列番号13の206番目のバリン
(f)配列番号13に記載のアミノ酸配列の33番目から208番目までのアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、以下の(1)から(36)のアミノ酸残基を全て保持し、かつ抗体結合活性を有するタンパク質
(1)配列番号13の37番目のグリシン
(2)配列番号13の39番目のメチオニン
(3)配列番号13の43番目のグルタミン酸
(4)配列番号13の45番目のイソロイシン
(5)配列番号13の49番目のプロリン
(6)配列番号13の51番目のアスパラギン
(7)配列番号13の56番目のグルタミン
(8)配列番号13の64番目のアルギニン
(9)配列番号13の67番目のヒスチジン
(10)配列番号13の70番目のアスパラギン酸
(11)配列番号13の72番目のアスパラギン酸
(12)配列番号13の81番目のアルギニン
(13)配列番号13の84番目のプロリン
(14)配列番号13の90番目のフェニルアラニン
(15)配列番号13の91番目のイソロイシン
(16)配列番号13の94番目のセリン
(17)配列番号13の96番目のセリン
(18)配列番号13の108番目のセリン
(19)配列番号13の133番目のグルタミン酸
(20)配列番号13の135番目のバリン
(21)配列番号13の137番目のグリシン
(22)配列番号13の138番目のグルタミン酸
(23)配列番号13の148番目のアルギニン
(24)配列番号13の156番目のメチオニン
(25)配列番号13の157番目のフェニルアラニン
(26)配列番号13の163番目のバリン
(27)配列番号13の174番目のバリン
(28)配列番号13の181番目のグルタミン酸
(29)配列番号13の187番目のセリン
(30)配列番号13の192番目のイソロイシン
(31)配列番号13の194番目のアルギニン
(32)配列番号13の196番目のリジン
(33)配列番号13の200番目のグリシン
(34)配列番号13の201番目のアラニン
(35)配列番号13の203番目のアスパラギン酸
(36)配列番号13の206番目のバリン - 多孔質親水性ポリマーが、ポリメタクリレートである、請求項1に記載の吸着剤。
- 請求項1または2のいずれかに記載の吸着剤を充填したカラムに平衡化液を添加してカラムを平衡化する工程と、前記平衡化したカラムに抗体を含む溶液を添加して抗体を前記吸着剤に吸着させる工程と、前記吸着剤に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出させる工程とを含む、抗体の分離法。
- 請求項3に記載の方法において、溶出液により溶出された抗体を含む画分を分取する工程をさらに含む、抗体医薬の製造方法。
- 請求項3の方法により、糖鎖構造の違いによって抗体を分離する方法。
- 糖鎖構造の違いが、末端のガラクトースの量の違いによる請求項5に記載の方法。
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TOSOH Research & Technology Review,2016年,Vol.60,p.59-63 |
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