JPWO2019059399A1 - イムノグロブリン結合タンパク質、及びそれを用いたアフィニティー担体 - Google Patents
イムノグロブリン結合タンパク質、及びそれを用いたアフィニティー担体 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2019059399A1 JPWO2019059399A1 JP2019543140A JP2019543140A JPWO2019059399A1 JP WO2019059399 A1 JPWO2019059399 A1 JP WO2019059399A1 JP 2019543140 A JP2019543140 A JP 2019543140A JP 2019543140 A JP2019543140 A JP 2019543140A JP WO2019059399 A1 JPWO2019059399 A1 JP WO2019059399A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- seq
- acid sequence
- sequence shown
- position corresponding
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000028557 immunoglobulin binding proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 73
- 108091009323 immunoglobulin binding proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 73
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 84
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 83
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 53
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 21
- 102000012960 Immunoglobulin kappa-Chains Human genes 0.000 claims abstract 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 271
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 200
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 99
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 75
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 75
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 63
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 63
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 47
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 claims description 38
- 108010090227 Immunoglobulin kappa-Chains Proteins 0.000 claims description 35
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 31
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims description 31
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 27
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 24
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 23
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 22
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 22
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 22
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 20
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 19
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 18
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 15
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 12
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 11
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 11
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 11
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 10
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 10
- 150000003148 prolines Chemical class 0.000 claims description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 9
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 8
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 8
- 125000003588 lysine group Chemical class [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- 125000000291 glutamic acid group Chemical class N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 claims description 5
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 claims description 5
- 230000014616 translation Effects 0.000 claims description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 4
- 125000000341 threoninyl group Chemical class [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- 150000003668 tyrosines Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000000613 asparagine group Chemical class N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims 1
- 108010026228 mRNA guanylyltransferase Proteins 0.000 abstract description 39
- 239000003513 alkali Substances 0.000 abstract description 21
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 43
- 102100029572 Immunoglobulin kappa constant Human genes 0.000 description 33
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 14
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101000723938 Homo sapiens Transcription factor HIVEP3 Proteins 0.000 description 7
- 102100028336 Transcription factor HIVEP3 Human genes 0.000 description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 7
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 description 7
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 102000002110 C2 domains Human genes 0.000 description 5
- 108050009459 C2 domains Proteins 0.000 description 5
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 5
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- -1 polyethyleneoxy group Polymers 0.000 description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 5
- 229940035024 thioglycerol Drugs 0.000 description 5
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 4
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 102200029613 rs35593767 Human genes 0.000 description 4
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 102220618489 Isocitrate dehydrogenase [NAD] subunit gamma, mitochondrial_N54Q_mutation Human genes 0.000 description 3
- 150000001508 asparagines Chemical class 0.000 description 3
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 3
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 3
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZPVFWPFBNIEHGJ-UHFFFAOYSA-N 2-octanone Chemical compound CCCCCCC(C)=O ZPVFWPFBNIEHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000192016 Finegoldia magna Species 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 102200072124 rs863224863 Human genes 0.000 description 2
- 102200016161 rs864309488 Human genes 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N serine Chemical compound OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKOOOVKGLHCLTP-UHFFFAOYSA-N 2-methylprop-2-enoic acid;propane-1,2,3-triol Chemical compound CC(=C)C(O)=O.OCC(O)CO RKOOOVKGLHCLTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- KWOLFJPFCHCOCG-UHFFFAOYSA-N Acetophenone Chemical compound CC(=O)C1=CC=CC=C1 KWOLFJPFCHCOCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 102100029567 Immunoglobulin kappa light chain Human genes 0.000 description 1
- 101710189008 Immunoglobulin kappa light chain Proteins 0.000 description 1
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001522306 Serinus serinus Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- OKKRPWIIYQTPQF-UHFFFAOYSA-N Trimethylolpropane trimethacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCC(CC)(COC(=O)C(C)=C)COC(=O)C(C)=C OKKRPWIIYQTPQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- CWGJBBRZFIPXNZ-UHFFFAOYSA-N [C-]#N.Br Chemical compound [C-]#N.Br CWGJBBRZFIPXNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical group 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N glycidyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCC1CO1 VOZRXNHHFUQHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000005660 hydrophilic surface Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 238000007561 laser diffraction method Methods 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- RVTZCBVAJQQJTK-UHFFFAOYSA-N oxygen(2-);zirconium(4+) Chemical compound [O-2].[O-2].[Zr+4] RVTZCBVAJQQJTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000002964 rayon Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical class [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229910001928 zirconium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
イムノグロブリン結合タンパク質であって、
イムノグロブリン結合ドメインの変異体を少なくとも1つ含み、
該イムノグロブリン結合ドメインの変異体が、配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列であって且つ以下の(a)〜(h):
(a)配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(b)配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(c)配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(d)配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(e)配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(f)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(g)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対する少なくとも1つのアミノ酸残基の挿入;
(h)少なくとも1つのプロリンの欠失、
からなる群より選択される少なくとも1つの変異を有するアミノ酸配列からなり、イムノグロブリンκ鎖結合活性を有する、
イムノグロブリン結合タンパク質。
本発明はまた、前記ポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
本発明はまた、前記ベクターを含む形質転換体を提供する。
本発明はまた、固相担体と、該固相担体に結合した前記イムノグロブリン結合タンパク質とを含む、アフィニティー担体を提供する。
本発明はまた、前記アフィニティー担体を用いる、抗体又はその断片の単離方法を提供する。
本発明はまた、前記イムノグロブリン結合タンパク質を、前記形質転換体、もしくは無細胞タンパク質合成系において発現させるか、又は化学合成することを含む、イムノグロブリン結合タンパク質の製造方法を提供する。
イムノグロブリン結合ドメインの変異体の製造方法であって、
配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列又はこれらと少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つイムノグロブリンκ鎖結合活性を有するポリペプチドに対して、以下の(a)〜(h):
(a)配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(b)配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(c)配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(d)配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(e)配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(f)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(g)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対する少なくとも1つのアミノ酸残基の挿入;
(h)少なくとも1つのプロリンの欠失、
からなる群より選択される少なくとも1つの変異を加えることを含む、方法。
〔1〕イムノグロブリン結合タンパク質であって、
イムノグロブリン結合ドメインの変異体を少なくとも1つ含み、
該イムノグロブリン結合ドメインの変異体が、配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列であって且つ以下の(a)〜(h):
(a)配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(b)配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(c)配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(d)配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(e)配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(f)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(g)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対する少なくとも1つのアミノ酸残基の挿入;
(h)少なくとも1つのプロリンの欠失、
からなる群より選択される少なくとも1つの変異を有するアミノ酸配列からなり、イムノグロブリンκ鎖結合活性を有する、
イムノグロブリン結合タンパク質。
〔2〕前記(a)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(b)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(c)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(d)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(e)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(f)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(g)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対する1個のアミノ酸残基の挿入であり、
前記(h)の変異が、1〜3個のプロリンの欠失である、
〔1〕記載のイムノグロブリン結合タンパク質。
〔3〕前記(a)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるリジンのアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸への置換であり、
前記(b)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるリジンのアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸への置換であり、
前記(c)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるトレオニンのアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸への置換であり、
前記(d)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるグルタミン酸のリジンへの置換であり、
前記(e)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるチロシンのフェニルアラニン又はトリプトファンへの置換であり、
前記(f)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアスパラギンのグルタミンへの置換であり、
前記(g)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアスパラギンと55位に相当する位置におけるグリシンとの間に対するアラニン、ロイシン又はチロシンの挿入であり、
前記(h)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置におけるプロリン、7位に相当する位置におけるプロリン、及び10位に相当する位置におけるプロリンからなる群より選択される1つ以上のプロリンの欠失である、
〔1〕又は〔2〕記載のイムノグロブリン結合タンパク質。
〔4〕前記イムノグロブリン結合ドメインの変異体が、配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有し且つ以下の(a’)〜(h’):
(a’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸;
(b’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸;
(c’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸;
(d’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるリジン;
(e’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるフェニルアラニン又はトリプトファン;
(f’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるグルタミン;
(g’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間におけるアラニン、ロイシン又はチロシン;
(h’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置、7位に相当する位置、及び10位に相当する位置からなる群より選択される少なくとも1つの位置におけるプロリンの欠失、
からなる群より選択される少なくとも1つを有するアミノ酸配列からなる、〔1〕〜〔3〕のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質。
〔5〕前記イムノグロブリン結合ドメインの変異体が、配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有し且つ以下の(a")〜(l")のいずれか:
(a")配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアルギニン;
(b")配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアルギニン;
(c")配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアルギニン;
(d")配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるリジン;
(e")配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるフェニルアラニン;
(f")配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるグルタミン;
(g1")配列番号9で示されるアミノ酸配列の55位に相当する位置と56位に相当する位置の間におけるアラニン;
(g2")配列番号9で示されるアミノ酸配列の55位に相当する位置と56位に相当する位置の間におけるチロシン;
(h1")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(h2")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置及び7位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(h3")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置、7位に相当する位置、及び10位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(i")該(a")及び(b")の組み合わせ;
(j")該(b")、(c")及び(f")の組み合わせ;
(k")該(b")、(c")、(d")及び(f")の組み合わせ;
(l")該(a")、(b")、(c")、(d")、(f")及び(h3")の組み合わせ、
を有するアミノ酸配列からなる、〔1〕〜〔4〕のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質。
〔6〕前記配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列が、配列番号9で示されるアミノ酸配列である、〔1〕〜〔5〕のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質。
〔7〕前記少なくとも85%の同一性が少なくとも90%の同一性である、〔1〕〜〔6〕のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質。
〔8〕前記イムノグロブリン結合ドメインの変異体を2個以上含む、〔1〕〜〔7〕のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質。
〔9〕〔1〕〜〔8〕のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔10〕〔9〕記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
〔11〕〔10〕記載のベクターを含む形質転換体。
〔12〕固相担体と、該固相担体に結合した〔1〕〜〔8〕のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質とを含む、アフィニティー担体。
〔13〕〔12〕記載のアフィニティー担体を用いる、抗体又はその断片の単離方法。
〔14〕〔1〕〜〔8〕のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質を、〔11〕記載の形質転換体、もしくは無細胞タンパク質合成系において発現させるか、又は化学合成することを含む、イムノグロブリン結合タンパク質の製造方法。
〔15〕イムノグロブリン結合ドメインの変異体の製造方法であって、
配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列又はこれらと少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つイムノグロブリンκ鎖結合活性を有するポリペプチドに対して、以下の(a)〜(h):
(a)配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(b)配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(c)配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(d)配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(e)配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(f)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(g)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対する少なくとも1つのアミノ酸残基の挿入;
(h)少なくとも1つのプロリンの欠失、
からなる群より選択される少なくとも1つの変異を加えることを含む、方法。
〔16〕前記(a)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(b)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(c)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(d)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(e)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(f)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(g)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対する1個のアミノ酸残基の挿入であり、
前記(h)の変異が、1〜3個のプロリンの欠失である、
〔15〕記載の製造方法。
〔17〕前記(a)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるリジンのアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸への置換であり、
前記(b)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるリジンのアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸への置換であり、
前記(c)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるトレオニンのアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸への置換であり、
前記(d)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるグルタミン酸のリジンへの置換であり、
前記(e)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるチロシンのフェニルアラニン又はトリプトファンへの置換であり、
前記(f)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアスパラギンのグルタミンへの置換であり、
前記(g)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアスパラギンと55位に相当する位置におけるグリシンとの間に対するアラニン、ロイシン又はチロシンの挿入であり、
前記(h)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置におけるプロリン、7位に相当する位置におけるプロリン、及び10位に相当する位置におけるプロリンからなる群より選択される1つ以上のプロリンの欠失である、
〔15〕又は〔16〕記載の製造方法。
〔18〕前記少なくとも1つの変異が、以下の(a")〜(l")のいずれか:
(a")配列番号9で示されるアミノ酸配列17位に相当する位置におけるリジンのアルギニンへの置換;
(b")配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるリジンのアルギニンへの置換;
(c")配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるトレオニンのアルギニンへの置換;
(d")配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるグルタミン酸のリジンへの置換;
(e")配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるチロシンのフェニルアラニンへの置換;
(f")配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアスパラギンのグルタミンへの置換;
(g1")配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対するアラニンの挿入;
(g2")配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対するチロシンの挿入;
(h1")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(h2")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置及び7位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(h3")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置、7位に相当する位置、及び10位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(i")該(a")及び(b")の組み合わせ;
(j")該(b")、(c")及び(f")の組み合わせ;
(k")該(b")、(c")、(d")及び(f")の組み合わせ;
(l")該(a")、(b")、(c")、(d")、(f")及び(h3")の組み合わせ、
である、〔15〕〜〔17〕のいずれか1項記載の製造方法。
〔19〕前記配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列が、配列番号9で示されるアミノ酸配列である、〔15〕〜〔18〕のいずれか1項記載の製造方法。
〔20〕前記少なくとも85%の同一性が少なくとも90%の同一性である、〔15〕〜〔19〕のいずれか1項記載の製造方法。
〔21〕前記イムノグロブリン結合ドメインの変異体が、親ドメインと比べてアルカリ耐性が向上している、〔15〕〜〔20〕のいずれか1項記載の製造方法。
〔22〕前記変異を加えたポリペプチドを〔11〕記載の形質転換体、もしくは無細胞タンパク質合成系において発現させるか、又は化学合成することをさらに含む、〔15〕〜〔21〕のいずれか1項記載の製造方法。
〔23〕固相担体に、〔1〕〜〔8〕のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質を固定化することを含む、アフィニティー担体の製造方法。
本発明のイムノグロブリン結合タンパク質は、プロテインLのイムノグロブリン結合ドメインに由来するイムノグロブリン結合ドメインの変異体(以下、本発明の変異体ともいう)を少なくとも1つ含む。本発明の変異体は、親ドメインであるプロテインL由来のイムノグロブリン結合ドメイン又はその変異体に所定の変異を加えることによって得ることができる。本発明の変異体は、イムノグロブリンκ鎖結合性を有し、且つ親ドメインと比べてアルカリ耐性が向上している。本発明の変異体を有する本発明の変異イムノグロブリン結合タンパク質は、アフィニティー担体のリガンドとして使用することができる。
(a)配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(b)配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(c)配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(d)配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(e)配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(f)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(g)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対する少なくとも1つのアミノ酸残基の挿入;
(h)少なくとも1つのプロリンの欠失、
からなる群より選択される少なくとも1つの変異を導入して得られたポリペプチドであって、イムノグロブリンκ鎖結合活性を保持しているものである。
(a’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸;
(b’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸;
(c’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸;
(d’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるリジン;
(e’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるフェニルアラニン又はトリプトファン;
(f’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるグルタミン;
(g’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間におけるアラニン、ロイシン又はチロシン;
(h’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置、7位に相当する位置、及び10位に相当する位置からなる群より選択される少なくとも1つの位置におけるプロリンの欠失、
からなる群より選択される少なくとも1つを有するアミノ酸配列からなり、イムノグロブリンκ鎖結合活性を有するポリペプチドが挙げられる。
(a")配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアルギニン;
(b")配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアルギニン;
(c")配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアルギニン;
(d")配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるリジン;
(e")配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるフェニルアラニン;
(f")配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるグルタミン;
(g1")配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間におけるアラニン;
(g2")配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間におけるチロシン;
(h1")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(h2")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置及び7位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(h3")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置、7位に相当する位置及び10位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(i")該(a")及び(b")の組み合わせ;
(j")該(b")、(c")及び(f")の組み合わせ;
(k")該(b")、(c")、(d")及び(f")の組み合わせ;
(l")該(a")、(b")、(c")、(d")、(f")及び(h3")の組み合わせ、
を有するアミノ酸配列からなり、イムノグロブリンκ鎖結合活性を有するポリペプチドが挙げられる。
本発明のイムノグロブリン結合タンパク質は、当該分野で公知の手法、例えばアミノ酸配列に基づく化学合成法や、リコンビナント法などにより製造することができる。例えば、本発明のイムノグロブリン結合タンパク質は、Frederick M. AusbelらによるCurrent Protocols In Molecular Biologyや、Sambrookら編集のMolecular Cloning(Cold Spring Harbor Laboratory Press,3rd edition,2001)などに記載されている公知の遺伝子組換え技術を利用して製造することができる。すなわち、本発明のイムノグロブリン結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターを大腸菌などの宿主に形質転換し、得られた組換え体を適切な液体培地で培養することにより、培養後の細胞から、目的のタンパク質を大量且つ経済的に取得することができる。好ましい発現ベクターとしては、宿主細胞内で複製可能な既知のベクターのいずれをも用いることができ、例えば、米国特許第5,151,350号明細書に記載されているプラスミドや、Sambrookら編集のMolecular Cloning(Cold Spring Harbor Laboratory Press,3rd edition,2001)などに記載されているプラスミドが挙げられる。また、形質転換のための宿主としては、特に限定されないが、大腸菌などのバクテリア、真菌類、昆虫細胞、哺乳類細胞等の組換えタンパク質を発現させるために用いられる公知の宿主を用いることができる。宿主中に核酸を導入することにより宿主を形質転換させるためには、各宿主に応じて当該技術分野において知られるいずれの方法を用いてもよく、例えば、Sambrookら編集のMolecular Cloning(Cold Spring Harbor Laboratory Press,3rd edition,2001)などに記載されている公知の方法を利用することができる。得られた形質転換体(例えば細菌等の細胞)を培養して発現されたタンパク質を回収する方法は、当業者によく知られている。あるいは、本発明のイムノグロブリン結合タンパク質は、無細胞タンパク質合成系を用いて発現させてもよい。
本発明のイムノグロブリン結合タンパク質は、アフィニティーリガンドとして使用することができる。本発明のイムノグロブリン結合タンパク質を固相担体に固定化することによって、該本発明のイムノグロブリン結合タンパク質をリガンドとしたアフィニティー担体を製造することができる。当該アフィニティー担体は、プロテインL由来のイムノグロブリン結合タンパク質をリガンドとする担体であり、イムノグロブリンκ鎖結合活性を有する。また当該アフィニティー担体は、野生型プロテインLやそのドメインをリガンドとする担体に比べて、アルカリ耐性が向上している。
本発明の一実施形態に係る抗体又はその断片(以下、単に抗体と表記する。)の単離方法を説明する。本実施形態に係る抗体の単離方法は、好適には、本発明のイムノグロブリン結合タンパク質を固定化したアフィニティー担体に、抗体を含有する試料を通液し、該担体に抗体を吸着させる工程(第一の工程)、及び、該担体から該抗体を溶出させる工程(第二の工程)を含む。
(1)グリシジルメタクリレート(三菱レーヨン社製)8.2g、トリメチロールプロパントリメタクリレート(サートマー社製)65.9g及びグリセリンモノメタクリレート(日油社製)90.6gを、2−オクタノン(東洋合成工業社製)245.8g及びアセトフェノン(和光純薬工業社製)62gに溶解させ、2,2’−アゾイソブチロニトリル(和光純薬工業社製)2gを添加し、有機モノマー溶液を調製した。
(2)4240gの純水に、ポリビニルアルコール(クラレ社製 PVA−217)8.5g、ドデシル硫酸ナトリウム(花王社製 エマール10G)0.43g及び硫酸ナトリウム(和光純薬工業社製)21.3gを添加し、一晩撹拌して水溶液を調製した。
(3)(2)で得られた水溶液を7Lセパラブルフラスコ内に投入し、温度計、攪拌翼及び冷却管を装着して、温水バスにセットし、窒素雰囲気下、600rpmで撹拌した。続いて、セパラブルフラスコを温水バスにより加温し、水溶液の温度が85℃になったところで、この水溶液に滴下ロートを用いて(1)で得られた有機モノマー溶液を添加し、5時間攪拌を行った。
(4)(3)で得られた反応液を冷却した後、5Lのポリプロピレン製ビンに移し、粒子が浮遊するまで静置し、余分な水を下方から吸い出して廃棄した。残った粒子を含む液に、アセトンを加えて粒子を沈降させ、3分間静置した後、デカンテーションによりアセトンを除去した。この操作を2回繰り返した。残留物に水を加えて粒子を沈降させた後、3分間静置してデカンテーションした。この操作を2回繰り返して粒子を洗浄した後、液分をアセトンで置換して、一晩風乾したのち、真空乾燥機にて乾燥を行い、多孔質粒子(以下、PBと記す)90gを得た。PBの平均粒径は53μm、比表面積は95m2/gであった。
配列番号10〜23のいずれかに示すアミノ酸配列からなるイムノグロブリン結合ドメイン変異体(変異ドメイン)を複数個含むタンパク質をコードする遺伝子のそれぞれをpET−24a(+)ベクターに組み込んだプラスミドを、人工遺伝子合成メーカーより入手した。これらのプラスミドを大腸菌コンピテントセルBL21(DE3)(NEW ENGLAND BioLabs製)に形質転換して形質転換細胞を得た。
得られた形質転換細胞を、吸光度(OD600)が約10に到達するまで37℃でインキュベートした。その後、終濃度で1mMになるようにIPTG(Sigma−Aldrich製)を添加し、さらに4時間37℃でインキュベートして、組み換え型イムノグロブリンκ鎖結合タンパク質を発現させた。細胞を回収し、pH9.5のトリス緩衝液中で破砕した。得られた細胞破砕液から、陰イオン交換クロマトグラフィー(Q−セファロースFF、GEヘルスケアバイオサイエンス社製)及び陽イオン交換クロマトグラフィー(SP−セファロースFF、GEヘルスケアバイオサイエンス社製)によって、組み換えイムノグロブリン結合タンパク質を精製した。精製したイムノグロブリン結合タンパク質を、10mMクエン酸緩衝液pH6.6に対して16時間透析した。SDS−PAGEによって確認された組み換え型イムノグロブリン結合タンパク質の純度は95%以上であった。精製された組換え型イムノグロブリンκ鎖結合タンパク質を、それぞれKBP1〜14とした。
配列番号9に示すアミノ酸配列からなる野生型イムノグロブリン結合ドメインを複数個含むタンパク質をコードする遺伝子を組み込んだプラスミドを用いて、実施例1と同様の手順で、組換え型イムノグロブリンκ鎖結合タンパク質KBP0を製造した。
実施例1で調製したPBを8mg含むように150μLの純水に懸濁させ、フィルターチューブ(Millipore社)に移し遠心して純水を除いた。ここに、比較例1で調製したKBP0を1mg溶解した450μLの0.85M硫酸ナトリウムを含む0.1M炭酸緩衝液(pH10)を加え、25℃で5時間振盪させ、KBP0をPBに結合させた。生成した粒子を濾過した後、1Mチオグリセロール400μLと混合して25℃で16時間反応させ、残余のエポキシ基をブロッキングし、30mM NaOHで洗浄後、50mMクエン酸ナトリウムバッファー(pH2.5)及び0.1Mリン酸ナトリウムバッファー(pH7.6)で洗浄し、400μLの結合多孔質粒子(KBP0/PB)を得た。
同様の手順で、KBP1〜14のいずれかが結合した多孔質粒子(KBP1/PB〜KBP14/PB)を得た。
(1)アルカリ処理なしでの多孔質粒子のSBCの測定
2mgの多孔質粒子(KBP0/PB)を含む100μLの懸濁液をフィルターチューブ(Millipore社)に移し、遠心して透過液を除いた。これに20mMリン酸バッファー(pH7.5)400μLを添加し、遠心して透過液を除去し、チューブ内の粒子を平衡化させた。次いでこれに0.8mgのFabを含む20mMリン酸バッファー(pH7.5)400μLを添加し、1時間インキュベートし、遠心した後、さらに20mMリン酸バッファー(pH7.5)400μLで洗浄し、遠心した。次いで50mMクエン酸ナトリウムバッファー(pH2.5)400μLを添加し、遠心してFabを含む溶出液を回収した。溶出液中のFab量を吸光度測定により算出し、溶出Fab量と担体体積から静的結合容量(SBC)を求めた。同様の手順で、KBP1/PB〜KBP14/PBのSBCを求めた。
2mgの多孔質粒子(KBP0/PB)を含む100μLの懸濁液をフィルターチューブ(Millipore社)に移し、遠心して透過液を除いた。これに0.1M NaOHを400μL添加し、24時間振盪しながら浸漬後、遠心して透過液を除去した。次いで20mMリン酸バッファー(pH・BR>V.5)400μLを添加し、遠心して透過液を除去し、チューブ内の粒子を平衡化させた。これに0.8mgのFabを含む20mMリン酸バッファー(pH7.5)400μLを添加し、1時間インキュベートし、遠心した後、さらに20mMリン酸バッファー(pH7.5)400μLで洗浄し、遠心した。次いで50mMクエン酸ナトリウムバッファー(pH2.5)400μLを添加し、遠心してFabを含む溶出液を回収した。溶出液中のFab量を吸光度測定により算出し、溶出Fab量と担体体積から静的結合容量(SBC)を求め、(1)で求めたアルカリ処理なしでのSBCに対する相対値(SBC維持率、%)を算出した。同様の手順で、KBP1/PB〜KBP14/PBのSBC維持率(%)を求めた。
測定結果を表3に示す。アルカリ処理をしない条件下では、変異ドメインを用いた多孔質粒子(KBP1/PB〜KBP14/PB)のSBCは、野生型ドメインを用いたKBP0/PBとほぼ同等であった。一方、アルカリ処理後には、KBP1/PB〜KBP14/PBのSBCは、KBP0/PBと比べて顕著に向上していた。この結果から、変異ドメインを含むリガンドタンパク質KBP1〜14は、野生型タンパク質と比べてアルカリ耐性が高く、0.1M水酸化ナトリウムに24時間曝露するという過酷な条件下でも高い抗体結合性を維持することができることが示された。
Claims (16)
- イムノグロブリン結合タンパク質であって、
イムノグロブリン結合ドメインの変異体を少なくとも1つ含み、
該イムノグロブリン結合ドメインの変異体が、配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列であって且つ以下の(a)〜(h):
(a)配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(b)配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(c)配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(d)配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(e)配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(f)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(g)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対する少なくとも1つのアミノ酸残基の挿入;
(h)少なくとも1つのプロリンの欠失、
からなる群より選択される少なくとも1つの変異を有するアミノ酸配列からなり、イムノグロブリンκ鎖結合活性を有する、
イムノグロブリン結合タンパク質。 - 前記(a)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(b)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(c)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(d)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(e)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(f)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換であり、
前記(g)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対する1個のアミノ酸残基の挿入であり、
前記(h)の変異が、1〜3個のプロリンの欠失である、
請求項1記載のイムノグロブリン結合タンパク質。 - 前記(a)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるリジンのアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸への置換であり、
前記(b)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるリジンのアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸への置換であり、
前記(c)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるトレオニンのアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸への置換であり、
前記(d)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるグルタミン酸のリジンへの置換であり、
前記(e)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるチロシンのフェニルアラニン又はトリプトファンへの置換であり、
前記(f)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアスパラギンのグルタミンへの置換であり、
前記(g)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアスパラギンと55位に相当する位置におけるグリシンとの間に対するアラニン、ロイシン又はチロシンの挿入であり、
前記(h)の変異が、配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置におけるプロリン、7位に相当する位置におけるプロリン、及び10位に相当する位置におけるプロリンからなる群より選択される1つ以上のプロリンの欠失である、
請求項1又は2記載のイムノグロブリン結合タンパク質。 - 前記イムノグロブリン結合ドメインの変異体が、配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有し且つ以下の(a’)〜(h’):
(a’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸;
(b’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸;
(c’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアルギニン、グルタミン酸又はアスパラギン酸;
(d’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるリジン;
(e’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるフェニルアラニン又はトリプトファン;
(f’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるグルタミン;
(g’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間におけるアラニン、ロイシン又はチロシン;
(h’)配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置、7位に相当する位置、及び10位に相当する位置からなる群より選択される少なくとも1つの位置におけるプロリンの欠失、
からなる群より選択される少なくとも1つを有するアミノ酸配列からなる、請求項1〜3のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質。 - 前記イムノグロブリン結合ドメインの変異体が、配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有し且つ以下の(a")〜(l")のいずれか:
(a")配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアルギニン;
(b")配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアルギニン;
(c")配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアルギニン;
(d")配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるリジン;
(e")配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるフェニルアラニン;
(f")配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるグルタミン;
(g1")配列番号9で示されるアミノ酸配列の55位に相当する位置と56位に相当する位置の間におけるアラニン;
(g2")配列番号9で示されるアミノ酸配列の55位に相当する位置と56位に相当する位置の間におけるチロシン;
(h1")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(h2")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置及び7位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(h3")配列番号9で示されるアミノ酸配列の4位に相当する位置、7位に相当する位置、及び10位に相当する位置におけるプロリンの欠失;
(i")該(a")及び(b")の組み合わせ;
(j")該(b")、(c")及び(f")の組み合わせ;
(k")該(b")、(c")、(d")及び(f")の組み合わせ;
(l")該(a")、(b")、(c")、(d")、(f")及び(h3")の組み合わせ、
を有するアミノ酸配列からなる、請求項1〜4のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質。 - 前記配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列が、配列番号9で示されるアミノ酸配列である、請求項1〜5のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質。
- 前記少なくとも85%の同一性が少なくとも90%の同一性である、請求項1〜6のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質。
- 前記イムノグロブリン結合ドメインの変異体を2個以上含む、請求項1〜7のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質。
- 請求項1〜8のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
- 請求項9記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
- 請求項10記載のベクターを含む形質転換体。
- 固相担体と、該固相担体に結合した請求項1〜8のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質とを含む、アフィニティー担体。
- 請求項12記載のアフィニティー担体を用いる、抗体又はその断片の単離方法。
- 請求項1〜8のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質を、請求項11記載の形質転換体、もしくは無細胞タンパク質合成系において発現させるか、又は化学合成することを含む、イムノグロブリン結合タンパク質の製造方法。
- イムノグロブリン結合ドメインの変異体の製造方法であって、
配列番号1〜9のいずれかで示されるアミノ酸配列又はこれらと少なくとも85%の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つイムノグロブリンκ鎖結合活性を有するポリペプチドに対して、以下の(a)〜(h):
(a)配列番号9で示されるアミノ酸配列の17位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(b)配列番号9で示されるアミノ酸配列の26位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(c)配列番号9で示されるアミノ酸配列の35位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(d)配列番号9で示されるアミノ酸配列の42位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(e)配列番号9で示されるアミノ酸配列の44位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(f)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置におけるアミノ酸残基の他のアミノ酸残基への置換もしくは欠失、又は当該位置の前もしくは後の位置への他のアミノ酸残基の挿入;
(g)配列番号9で示されるアミノ酸配列の54位に相当する位置と55位に相当する位置の間に対する少なくとも1つのアミノ酸残基の挿入;
(h)少なくとも1つのプロリンの欠失、
からなる群より選択される少なくとも1つの変異を加えることを含む、方法。 - 固相担体に、請求項1〜8のいずれか1項記載のイムノグロブリン結合タンパク質を固定化することを含む、アフィニティー担体の製造方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017184158 | 2017-09-25 | ||
JP2017184158 | 2017-09-25 | ||
PCT/JP2018/035418 WO2019059399A1 (ja) | 2017-09-25 | 2018-09-25 | イムノグロブリン結合タンパク質、及びそれを用いたアフィニティー担体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2019059399A1 true JPWO2019059399A1 (ja) | 2020-10-22 |
JP7159175B2 JP7159175B2 (ja) | 2022-10-24 |
Family
ID=65810429
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019543140A Active JP7159175B2 (ja) | 2017-09-25 | 2018-09-25 | イムノグロブリン結合タンパク質、及びそれを用いたアフィニティー担体 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11753449B2 (ja) |
EP (1) | EP3689894A4 (ja) |
JP (1) | JP7159175B2 (ja) |
CN (1) | CN111148753B (ja) |
TW (1) | TW201920290A (ja) |
WO (1) | WO2019059399A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7159151B2 (ja) * | 2017-09-25 | 2022-10-24 | Jsr株式会社 | イムノグロブリン結合タンパク質、及びそれを用いたアフィニティー担体 |
GB202112386D0 (en) * | 2021-08-31 | 2021-10-13 | Cytiva Bioprocess R & D Ab | Modified kappa light chain-binding polypeptides |
JP7414106B2 (ja) | 2022-01-14 | 2024-01-16 | 東ソー株式会社 | 免疫グロブリン結合活性を有するタンパク質 |
WO2023074642A1 (ja) * | 2021-10-25 | 2023-05-04 | 東ソー株式会社 | 免疫グロブリン結合性タンパク質 |
WO2023247468A2 (en) * | 2022-06-22 | 2023-12-28 | Puridify Limited | Kappa light chain-binding convection matrix |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005033130A2 (en) * | 2003-10-03 | 2005-04-14 | Domantis Limited | Mutated ig binding domains of protein l |
JP2016079149A (ja) * | 2014-10-21 | 2016-05-16 | 株式会社プロテイン・エクスプレス | プロテインl変異体 |
WO2016096643A1 (en) * | 2014-12-17 | 2016-06-23 | Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab | Modified kappa light chain-binding polypeptides |
WO2017069158A1 (ja) * | 2015-10-22 | 2017-04-27 | プロテノバ株式会社 | イムノグロブリン結合ポリペプチド |
WO2019059400A1 (ja) * | 2017-09-25 | 2019-03-28 | Jsr株式会社 | イムノグロブリン結合タンパク質、及びそれを用いたアフィニティー担体 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5151350A (en) | 1982-10-27 | 1992-09-29 | Repligen Corporation | Cloned genes encoding recombinant protein a |
SE9601368D0 (sv) | 1996-04-11 | 1996-04-11 | Pharmacia Biotech Ab | Process for the production of a porous cross-linked polysaccharide gel |
EP1114161B1 (en) | 1998-09-14 | 2004-03-03 | Affitech As | Immunoglobulin binding protein |
GB9823071D0 (en) | 1998-10-21 | 1998-12-16 | Affibody Technology Ab | A method |
WO2007097361A1 (ja) | 2006-02-21 | 2007-08-30 | Protenova Co., Ltd. | イムノグロブリン親和性リガンド |
CN108064286A (zh) | 2015-01-26 | 2018-05-22 | 株式会社钟化 | 突变型免疫球蛋白κ链可变区结合性肽 |
WO2017191748A1 (ja) | 2016-05-02 | 2017-11-09 | 株式会社カネカ | 改変型免疫グロブリンκ鎖可変領域結合性ペプチド |
-
2018
- 2018-09-25 CN CN201880061699.9A patent/CN111148753B/zh active Active
- 2018-09-25 WO PCT/JP2018/035418 patent/WO2019059399A1/ja unknown
- 2018-09-25 US US16/649,879 patent/US11753449B2/en active Active
- 2018-09-25 JP JP2019543140A patent/JP7159175B2/ja active Active
- 2018-09-25 TW TW107133673A patent/TW201920290A/zh unknown
- 2018-09-25 EP EP18859372.7A patent/EP3689894A4/en active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005033130A2 (en) * | 2003-10-03 | 2005-04-14 | Domantis Limited | Mutated ig binding domains of protein l |
JP2016079149A (ja) * | 2014-10-21 | 2016-05-16 | 株式会社プロテイン・エクスプレス | プロテインl変異体 |
WO2016096643A1 (en) * | 2014-12-17 | 2016-06-23 | Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab | Modified kappa light chain-binding polypeptides |
WO2017069158A1 (ja) * | 2015-10-22 | 2017-04-27 | プロテノバ株式会社 | イムノグロブリン結合ポリペプチド |
WO2019059400A1 (ja) * | 2017-09-25 | 2019-03-28 | Jsr株式会社 | イムノグロブリン結合タンパク質、及びそれを用いたアフィニティー担体 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
BIOCHEMISTRY, vol. 43, JPN6018048228, 2004, pages 2445 - 2457, ISSN: 0004786527 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN111148753A (zh) | 2020-05-12 |
US20210163545A1 (en) | 2021-06-03 |
TW201920290A (zh) | 2019-06-01 |
JP7159175B2 (ja) | 2022-10-24 |
US11753449B2 (en) | 2023-09-12 |
EP3689894A1 (en) | 2020-08-05 |
CN111148753B (zh) | 2024-02-23 |
WO2019059399A1 (ja) | 2019-03-28 |
EP3689894A4 (en) | 2021-12-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7159151B2 (ja) | イムノグロブリン結合タンパク質、及びそれを用いたアフィニティー担体 | |
JP7159175B2 (ja) | イムノグロブリン結合タンパク質、及びそれを用いたアフィニティー担体 | |
JP5298242B2 (ja) | アフィニティークロマトグラフィー用担体およびイムノグロブリンを単離する方法 | |
JP7204086B2 (ja) | 改変κ軽鎖結合ポリペプチド | |
JP6705806B2 (ja) | イムノグロブリン結合タンパク質およびそれを用いたアフィニティー担体 | |
JP7335881B2 (ja) | イムノグロブリン結合タンパク質、及びそれを用いたアフィニティー担体 | |
KR102578538B1 (ko) | 친화성 담체 및 이뮤노글로불린을 단리하는 방법 | |
JP2022081709A (ja) | イムノグロブリン結合タンパク質、及びそれを用いたアフィニティー担体 | |
CN112639099B (en) | Immunoglobulin-binding proteins and affinity carriers using the same | |
WO2019203248A1 (ja) | イムノグロブリン結合性ポリペプチド、及びそれを用いたアフィニティー担体 | |
WO2019039602A1 (ja) | タンパク質、及び当該タンパク質を含む担体を用いる抗体又はその断片の単離方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210219 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220125 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220228 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220531 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220630 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20220630 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20220706 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20220712 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220913 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220927 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221011 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221012 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7159175 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |