JP7362916B2 - キサンチンオキシダーゼ阻害剤としてのチオフェン誘導体およびその使用 - Google Patents

Description

＜関連出願への相互参照＞
本出願は、２０１９年１０月３０日に出願されたＣＮ２０１９１１０４９９５１．７および２０２０年０２月２１日に出願されたＣＮ２０２０１０１１０４８２．１に基づく優先権を主張する。

本発明は、キサンチンオキシダーゼ（ＸＯ）阻害剤、およびキサンチンオキシダーゼに関連する疾患のための医薬品の調製におけるその使用に関する。具体的に、式（Ｉ）で表される化合物およびその薬学的に許容される組成物に関する。

痛風性関節炎は、よく見られる複雑なタイプの関節炎である。ヒトの血液中の尿酸の濃度が７ｍｇ／ｄＬを超えると、尿酸がモノナトリウム塩として関節、軟骨および腎臓に沈着し、体の免疫系が過剰反応（感作）して、痛みを伴う炎症を引き起こす。一般的に、発症部位は、足の親指の関節、足首の関節、膝の関節などである。高尿酸血症は痛風性関節炎の病理学的基礎である。高尿酸血症とは、人体のプリン体の代謝が乱れ、人体の尿酸の合成が増加したり、排泄が減少したり、血液中の尿酸レベルが異常に高くなる病状を指す。国際的には、ＨＵＡの診断は次のように定義されている。通常のプリン食の状態で、２つの異なる日の空腹時血中尿酸レベル：男性の場合は＞４００μｍｏｌ／Ｌ（６．８ｍｇ／ｄＬ）であり、女性の場合は＞３６０μｍｏｌ／Ｌ（６ｍｇ／ｄＬ）である。高尿酸血症は、排泄低下型、産生過剰型および混合型の３つのタイプに分類される。臨床研究の結果は、原発性高尿酸血症の９０％が排泄低下型に該当することを示している。

高尿酸血症は痛風と切り離せないものであり、代謝性疾患［糖尿病、メタボリックシンドローム（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＭＳ）、高脂血症など］、慢性腎臓病、心血管疾患、脳卒中の独立したリスク要因である。したがって、人体の尿酸レベルを下げることは、高尿酸血症および痛風の治療や予防に用いられるだけでなく、高尿酸血症に関連する他の合併症のリスクを減らすことができる。

ヒトにおけるプリン源は２つがある。内因性プリンは、自己合成または核酸分解に由来するもの（約６００ｍｇ／ｄ）であり、外因性プリンは、摂取されたプリン食に由来するもの（約１００ｍｇ／ｄ）である。通常の状態では、体内の尿酸プールは１２００ｍｇであり、尿酸の１日あたりの生成量は約７００ｍｇであり、そのうち、２／３は腎臓から排泄され、１／３は腸から排泄され、また、ごく少量が汗腺から排泄される。したがって、現在臨床診療で一般的に使用されている尿酸降下薬としては、尿酸の産生を阻害するキサンチンオキシダーゼ（Ｘａｎｔｈｉｎｅ Ｏｘｉｄａｓｅ）阻害剤（例えば、アロプリノール及びフェブステインなど）と、尿酸排泄促進薬であるＵｒａｔ１阻害剤（ベンブロマロン及びレジナードなど）がある。

キサンチンオキシダーゼは特異性が高くない酵素であり、ヒポキサンチンを触媒してキサンチンを生成し、さらに尿酸を生成するだけでなく、キサンチンを触媒して尿酸を直接に生成することもできる。キサンチンオキシダーゼ阻害剤は、高尿酸血症の治療のための第一選択薬である。現在、市販されている医薬品は、主にアロプリノールとフェブステインである。しかし、そのような医薬品は、すべての患者の臨床ニーズを満たすことはできず、重大な副作用がある。アロプリノールは、世界中で入手できる唯一の尿酸降下薬であるが、深刻な皮膚有害事象につながる。アロプリノール関連の深刻な過敏反応は、白血球抗原（ＨＬＡ）－Ｂ＊５８０１と密接に関連しており、中国人のＨＬＡ－Ｂ＊５８０１陽性率（６％～８％）は白人（～２％）より高く、過敏反応のリスクはより高くなる。フェブステインの尿酸降下効果はアロプリノールよりも優れているが、８０ｍｇ／日の高用量でも、患者の４０％～５２％が尿酸低下という期待された目標を達成せず、急性痛風の発作リスクを増加させる。２０１７年１１月、アメリカ食品医薬品局は、フェブキソスタットがアロプリノールと比較して心臓関連およびすべての原因による死亡を実際に増加させる可能性があるため、さらなる研究が必要であるという声明を発表した。

ＰＦ－０６４７４６４９は、臨床研究段階に入った唯一のキサンチンオキシダーゼとＵｒａｔ１との二重標的阻害剤（ｄｕａｌ ｔａｒｇｅｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）である。しかしながら、臨床第Ｉ相試験では、２人の被験者が投与後に急性ＰＦ－０６７４３６４９誘発性腎障害の副作用を発症した。これは、ＰＦ－０６７４３６４９のより高いＵｒａｔ１阻害活性によって引き起こされる尿細管での尿酸の沈殿に関連している可能性があることが示唆された（Ｃｌｉｎ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２０１６，３５，２０４５－２０５１）。

上記の分析によれば、市場には、安全で効果的な尿酸降下薬に対する臨床ニーズが依然として存在する。

本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤は、良好なキサンチンオキシダーゼ阻害活性を持ち、人体の血液中の尿酸を低下させる良好な効果を有することが期待される。

本発明は、式（Ｉ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
ここで、
各Ｒ_１は、それぞれ、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＮ、Ｃ_１－３アルキルおよびＣ_１－３アルコキシからなる群から選択され、前記のＣ_１－３アルキルおよびＣ_１－３アルコキシは１個、２個または３個のＲ_ａで置換されていてもよく；
ｎは、０、１、２、３および４から選択され；
Ｒ_ａは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨおよびＮＨ_２からなる群から選択され；
Ｒ_２は、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２およびＣＮからなる群から選択され；
環Ａは、Ｃ_５－６シクロアルキルおよび５～６員ヘテロシクロアルキルからなる群から選択される。

本発明の一部の実施形態において、上記の各Ｒ_１は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨ_３ＣＨ_２およびＣＨ_３Ｏからなる群から選択され、前記のＣＨ_３、ＣＨ_３ＣＨ_２およびＣＨ_３Ｏは１個、２個または３個のＲ_ａで置換されていてもよく、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の各Ｒ_１は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨ_３ＣＨ_２、ＣＨ_３ＯおよびＣＦ_３からなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の環Ａは、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、ジオキサニル、およびピペリジルからなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の環Ａは、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラニル、およびジオキサニルからなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の構造単位
は、
からなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の構造単位
は、
からなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の環Ａは、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、およびピペリジルからなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の環Ａは、シクロペンチル及びシクロヘキシルからなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の式（Ｉ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。
ここで、
各Ｒ_１は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＮ、Ｃ_１－３アルキル、およびＣ_１－３アルコキシからなる群から選択され、前記のＣ_１－３アルキルおよびＣ_１－３アルコキシは１個、２個または３個のＲ_ａで置換されていてもよく；
ｎは、０、１、２、３および４から選択され；
Ｒ_ａは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨおよびＮＨ_２からなる群から選択され；
Ｒ_２は、独立してＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２およびＣＮからなる群から選択され；
環Ａは、Ｃ_５－６シクロアルキルおよび５～６員ヘテロシクロアルキルからなる群から選択される。

本発明の一部の実施形態において、上記のＲ_１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨ_３ＣＨ_２およびＣＨ_３Ｏからなる群から選択され、前記のＣＨ_３、ＣＨ_３ＣＨ_２およびＣＨ_３Ｏは１個、２個または３個のＲ_ａで置換されていてもよく、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記のＲ_１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨ_３ＣＨ_２、ＣＨ_３ＯおよびＣＦ_３からなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の環Ａは、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、およびピペリジルからなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の環Ａは、シクロペンチルおよびシクロヘキシルからなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の構造単位
は、
からなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態において、上記の構造単位
は、
からなる群から選択され、他の変数は本発明で定義した通りである。

本発明の一部の実施形態は、上記の変数を任意に組み合わせたものである。

本発明の一部の実施形態において、上記の化合物またはその薬学的に許容される塩は、
からなる群から選択され、
ここで、
Ｒ_１、ｎおよびＲ_２は本発明で定義した通りであり；
Ｅ_１、Ｅ_２、Ｅ_３は、それぞれ独立して、ＣＨ_２およびＯから選択される。

また、本発明は、以下の式で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。

本発明の一部の実施形態において、キサンチンオキシダーゼ阻害剤に関連する医薬品の調製における、上記の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。

本発明の一部の実施形態において、上記のキサンチンオキシダーゼ阻害剤に関連する医薬品は、治療痛風性関節炎および高尿酸血症の治療に用いられる医薬品である。

定義と用語
特に明記しない限り、本明細書で使用される以下の用語は、以下の意味を有することを意図している。特定の用語は、特定の定義がない場合に、不定または不明瞭と見なされるべきではないが、通常の意味で理解されるべきである。本明細書に商品名が記載される場合、その対応する商品またはその活性成分を指す。

ここで、用語「薬学的に許容される」とは、これらの化合物、材料、組成物、および／または剤形について、信頼性のある医学的判断の範囲内で、ヒトおよび動物の組織と接触して使用することに適し、過度の毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題または合併症を伴うことなく、合理的な利益／リスク比に見合うことをいう。

用語「薬学的に許容される塩」とは、本発明で発見された特定の置換基を有する化合物を比較的毒性のない酸または塩基と反応させることで調製される本発明の化合物の塩を指す。本発明の化合物が比較的酸性の官能基を含む場合、純粋な溶液または適宜な不活性溶媒中で、このような化合物を十分な量の塩基と接触させることで、塩基付加塩が得られる。薬学的に許容される塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミンもしくはマグネシウムの塩、または類似の塩を含む。本発明の化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、純粋な溶液または適宜な不活性溶媒中で、このような化合物を十分な量の酸と接触させることで、酸付加塩が得られる。薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸塩と有機酸塩を含む。上記の無機酸塩として、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、重炭酸塩、リン酸、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、硫酸、硫酸水素塩、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの無機酸塩が挙げられる。上記の有機酸塩として、例えば、酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などの類似の酸の塩や、アミノ酸（例えばアルギニンなど）の塩、およびグルクロン酸などの有機酸の塩が挙げられる。本発明の一部の特定の化合物は、塩基性官能基と酸性官能基の両方を含むため、塩基付加塩または酸付加塩のいずれかに変換することができる。

本発明の薬学的に許容される塩は、通常の化学的方法によって酸性または塩基性部分を含む親化合物から調製することができる。一般的に、このような塩は、水または有機溶媒或いは両者の混合物中で、これらの化合物を遊離酸または塩基として化学量論量の適宜な塩基または酸と反応させることで調製される。

本発明の化合物は、特定の幾何異性体または立体異性体として存在してもよい。本発明では、シスとトランス異性体、（－）と（＋）エナンチオマー、（Ｒ）と（Ｓ）エナンチオマー、ジアステレオ異性体、（Ｄ）異性体、（Ｌ）異性体、およびそのラセミ混合物、他の混合物、例えばエナンチオマーまたはジアステレオ異性体が豊富な混合物を含むすべてのこのような化合物が想定される。これらはすべて本発明の範囲内に含まれる。アルキル基などの置換基は、さらなる不斉炭素原子を有していてもよい。これらの異性体およびそれらの混合物はすべて、本発明の範囲内に含まれる。

特に明記しない限り、「エナンチオマー」または「光学異性体」という用語は、互いに鏡像関係にある立体異性体を指す。

特に明記しない限り、「シス－トランス異性体」または「幾何異性体」という用語は、二重結合や環形成炭素原子間の単結合が自由に回転できないことにより生成される。

特に明記しない限り、「ジアステレオマー」という用語は、分子に２つ以上のキラル中心を含み、且つ分子間で非鏡像関係にある立体異性体を指す。

特に明記しない限り、「（＋）」とは右旋性異性体を意味し、「（－）」とは左旋性異性体を意味し、「（±）」とはラセミ体を意味する。

特に明記しない限り、くさび形の実線結合（
）およびくさび形の破線結合（
）で立体中心の絶対配置を表し、直線形の実線結合（
）と直線形の破線結合（
）で立体中心の相対配置を表し、波線（
）でくさび形の実線結合（
）またはくさび形の破線結合（
）を表し、或いは波線（
）で直線形の実線結合（
）または直線形の破線結合（
）を表す。

特に明記しない限り、「１つの異性体に富む」、「異性体に富む」、「１つの鏡像異性体に富む」または「鏡像異性体に富む」という用語は、１つの異性体または鏡像異性体の含有量が１００％未満であり、且つその異性体または鏡像異性体の含有量は６０％以上、または７０％以上、または８０％以上、または９０％以上、または９５％以上、または９６％以上、または９７％以上、または９８％以上、または９９％以上、または９９．５％以上、または９９．６％以上、または９９．７％以上、または９９．８％以上、または９９．９％以上であることを意味する。

特に明記しない限り、「異性体過剰率」または「鏡像異性体過剰率」という用語は、２つの異性体または２つの鏡像異性体の相対パーセンテージ間の差を指す。例えば、一方の異性体または鏡像異性体が９０％の量で存在し、他方の異性体または鏡像異性体が１０％の量で存在する場合、異性体または鏡像異性体過剰率（ｅｅ値）は８０％である。

光学活性を有する（Ｒ）と（Ｓ）異性体、およびＤとＬ異性体は、キラル合成、キラル試薬または他の従来技術を用いて調製される。本発明のある化合物の１種類のエナンチオマーを得たい場合、純粋な所望のエナンチオマーは、不斉合成、または得られたジアステレオマー混合物の分離および補助基の開裂を含む、キラル補助剤による誘導作用によって得ることができる。或いは、分子が塩基性官能基（アミノ基など）または酸性官能基（カルボキシル基など）を含む場合、化合物は適宜な光学活性を有する酸または塩基と反応して、ジアステレオマー異性体の塩を形成し、その後、当技術分野における一般的な方法でジアステレオマーの分離を行い、純粋なエナンチオマーを回収する。さらに、エナンチオマーおよびジアステレオ異性体は、一般的に、キラル固定相を使用した、任意に化学誘導法（例えば、アミンからカルバメートを生成する）と組み合わせたクロマトグラフィーによって単離される。

本発明の化合物は、該化合物を構成する１つ以上の原子で非自然な割合の原子同位体を含んでもよい。本発明の化合物は、この化合物を構成する１つ以上の原子に非天然な割合で同位体原子を含有していてもよい。例えば、トリチウム（^３Ｈ）、ヨウ素－１２５（^１２５Ｉ）またはＣ－１４（^１４Ｃ）のような放射性同位体で標識された化合物が用いられる。別の例として、水素を重水素に置き換えて重水素化薬物を形成することができる。重水素と炭素との結合は、通常の水素と炭素との結合よりも強い。重水素化されていない薬物と比較して、重水素化された薬物は、毒性副作用の低減、薬物の安定性の向上、有効性の向上、および薬物の生物学的半減期の延長などの利点を有する。本発明の化合物のすべての同位体組成の変化は、放射能を有するかどうかにかかわらず、本発明の範囲内に含まれる。

「置換された」という用語は、特定の原子上の１個以上の水素原子が置換基によって置換されることを指し、また、特定の原子の原子価が正常であり、且つ置換された化合物は安定している限り、重水素および水素の変種を含んでも良い。置換基がオキソ基（即ち、＝Ｏ）である場合、２個の水素原子が置換されていることを意味する。なお、芳香環基では、オキソ基の置換は起こらない。

「置換されていてもよい」という用語は、原子が置換基で置換されても置換されていなくてもよいことを意味し、特に断りのない限り、置換基の種類および数は、化学的に実現可能である限り任意でもよい。

いずれの変数（例えば、Ｒ）でも化合物の組成や構造中に一回以上現れる場合、それぞれの場合での定義は独立している。したがって、例えば、ある基が０～２個のＲで置換されている場合、上記の基は多くても２個のＲで置換されていてもよく、且つそれぞれの場合におけるＲは独立した選択肢を有する。さらに、置換基および／またはその変種の組み合わせは、安定な化合物を生じる場合に限り許容される。

例えば－（ＣＲＲ）_０－のような、連結基の数が０である場合、その連結基は単結合であることを意味する。

置換基の数が０である場合、その置換基は存在しないことを意味する。例えば、－Ａ－（Ｒ）_０は、この構造が実際には－Ａであることを意味する。

置換基が空いている場合、その置換基は存在しないことを意味する。例えば、Ａ－ＸにおけるＸが空いている場合、この構造は実際にはＡであることを意味する。

１個の変数が単結合である場合、該単結合によって結合された２つの基が直接結合していることを意味する。例えば、Ａ－Ｌ－ＺにおけるＬが単結合を表す場合、該構造は実質にＡ－Ｚである。

置換基の結合が環上の２つ以上の原子に架橋され得る場合、このような置換基は、この環上の任意の原子に結合され得る。例えば、構造単位
は、置換基Ｒが、シクロヘキシルまたはシクロヘキサジエンの任意の位置で置換する可能性がある。挙げられた置換基においてどの原子を介して置換される基に結合することを明記していない場合、このような置換基は、いずれの原子によって結合しても良く、例えば、置換基としてのピリジル基は、ピリジン環のいずれかの炭素原子を介して、置換される基に結合してもよい。

挙げられた連結基の連結方向を明記しない場合、その連結方向は任意である。例えば、
における連結基Ｌが－Ｍ－Ｗ－である場合、－Ｍ－Ｗ－は、左から右への読み取り順序と同じ方向で環Ａと環Ｂを連結して
となってもよく、左から右への読み取り順序と逆方向で環Ａと環Ｂを連結して
となってもよい。前記した連結基、置換基および／またはその変種の組み合わせは、このような組み合わせが安定な化合物を生じる場合に限り許容される。

特に明記しない限り、ある基に１つ以上の接続可能な部位がある場合、この基の任意の１つ以上の部位を化学結合を介して他の基に接続することができる。この化学結合の接続位置が可変であり、且つ接続可能な部位にＨ原子が存在する場合、化学結合に接続されると、この部位のＨ原子は、接続された化学結合の数が増えることに応じて減少し、対応する価数の基になる。前記の部位と他の基との間の化学結合は、直線形の実線結合（
）、直線形の破線結合（
）、または波線（
）で表すことができる。例えば、－ＯＣＨ_３における直線形の実線結合は、この基における酸素原子を介して他の基に接続することを示し；
における直線形の破線結合は、この基における窒素原子の両端を介して他の基に接続することを示し；
における波線は、このフェニル基における１位と２位の炭素原子を介して他の基に接続することを示し；
は、このピペリジニル基における接続可能な部位が、
を含む少なくとも４つの接続方式で、１つの化学結合を介して他の基に接続することを示し、なお、－Ｎ－にＨ原子を描いた場合でも、
には、
のような接続方式の基を含み、１つの化学結合が接続されている場合にのみ、この部位のＨが１つ減少し、対応する一価のピペリジニル基になる。

特に明記しない限り、環上の原子数は、通常、環の員数として定義され、例えば、「５～７員環」とは、環状に配置されている５～７個の原子からなる「環」を意味する。

特に明記しない限り、「５～６員環」は、５～６個の環原子からなるシクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクロアルケニル基、シクロアルキニル基、ヘテロシクロアルキニル基、アリール基またはヘテロアリール基を表す。いわゆる環としては、単環に加えて、スピロ環、縮合環および架橋環などの二環式系が挙げられる。特に明記しない限り、この環は、Ｏ、ＳおよびＮから選択される１個、２個または３個のヘテロ原子を含んでいてもよい。前記の「５～６員環」は、例えば、フェニル、ピリジルおよびピペリジルなどの５員環や６員環を含む。一方、用語「５～６員ヘテロシクロアルキル」は、ピペリジルを含むが、フェニルを含まない。また、用語「環」は、各「環」がそれぞれ独立して上記の定義を満たす少なくとも１つの環を含有する環系を含む。

特に明記しない限り、「Ｃ_５～６シクロアルキル」とは、５～６個の炭素原子からなる飽和環状炭化水素基を意味し、一価、二価、または多価であり得る単環式系である。Ｃ_５～６シクロアルキル基の例としは、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが含まれるが、これらに限定されない。

特に明記しない限り、Ｃ_{ｎ－ｎ＋ｍ}またはＣ_ｎ－Ｃ_ｎ＋ｍは、ｎからｎ＋ｍ個の炭素のいずれかを含む。例えば、Ｃ_１－１２は、Ｃ_１、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_７、Ｃ_８、Ｃ_９、Ｃ_１０、Ｃ_１１、およびＣ_１２を含み、また、ｎからｎ＋ｍのうちの任意の範囲を含み、例えば、Ｃ_１－１２は、Ｃ_１－３、Ｃ_１－６、Ｃ_１－９、Ｃ_３－６、Ｃ_３－９、Ｃ_３－１２、Ｃ_６－９、Ｃ_６－１２、およびＣ_９－１２などを含む。同様に、ｎ員からｎ＋ｍ員は、環上の原子の数がｎからｎ＋ｍ個であることを意味する。例えば、３～１２員環は、３員環、４員環、５員環、６員環、７員環、８員環、９員環、１０員環、１１員環、および１２員環を含み、また、ｎからｎ＋ｍのうちの任意の範囲を含み、例えば、３～１２員環は、３～６員環、３～９員環、５～６員環、５～７員環、６～７員環、６～８員環、および６～１０員環などを含む。

特に明記しない限り、用語「５～６員ヘテロシクロアルキル」は、それ自体で、または他の用語と組み合わせて、炭素とＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１、２、３または４個の環ヘテロ原子とを含む５～６個の環原子からなる飽和環状基を表し、ここで、窒素原子は、四級アンモニウム化されていてもよく、窒素および硫黄のヘテロ原子は、酸化（すなわち、ＮＯおよびＳ（Ｏ）ｐであり、ｐは１または２である）されていてもよい。この用語は、単環式系と二環式系を含み、ここで、二環式系は、スピロ環、縮合環および架橋環を含む。なお、「５～６員ヘテロシクロアルキル」について、ヘテロ原子は、ヘテロシクロアルキル基が分子の残り部分に結合している位置を占めてもよい。前記の５～６員ヘテロシクロアルキルは、５員と６員のヘテロシクロアルキルを含む。５～６員ヘテロシクロアルキルの例として、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロチエニル（テトラヒドロチオフェン－２－イル及びテトラヒドロチオフェン－３－イルなどを含む）、テトラヒドロフラニル（テトラヒドロフラン－２－イルなどを含む）、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル（１－ピペリジル、２－ピペリジルおよび３－ピペリジルなどを含む）、ピペラジニル（１－ピペラジニルおよび２－ピペラジニルなどを含む）、モルホリニル（３－モルホリニルおよび４－モルホリニルなどを含む）、ジオキサニル、ジチアニル、イソキサゾリジニル、イソチアゾリジニル、１，２－オキサジニル、１，２－チアジニル、ヘキサヒドロピリダジニル、ホモピペラジニル、またはホモピペリジニルが挙げられるが、これらに限定されない。

特に明記しない限り、用語「Ｃ_１－３アルキル」は、１～３個の炭素原子からなる直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素基を示す。前記のＣ_１－３アルキルは、Ｃ_１－２アルキルおよびＣ_２－３アルキルなどを含み、一価のもの（例えばメチル）、二価のもの（例えばメチレン）または多価のもの（例えばメテニル）であり得る。Ｃ_１－３アルキルの例としては、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル（ｎ－プロピルおよびイソプロピルを含む）などが含まれるが、これらに限定されない。

特に明記しない限り、用語「Ｃ_１－３アルコキシ」は、１つの酸素原子を介して分子の残りの部分に結合している１～３個の炭素原子からなるアルキル基を意味する。前記のＣ_１－３アルコキシは、Ｃ_１－２、Ｃ_２－３、Ｃ_３およびＣ_２アルコキシなどを含む。Ｃ_１－３アルコキシの例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（ｎ－プロポキシおよびイソプロポキシを含む）などが含まれるが、これらに限定されない。

本発明の化合物は、以下の実施形態、それらを他の化学合成方法と組み合わせた実施形態、および当業者に周知の同等置換を含む、当業者に周知の様々な合成方法によって調製される。好ましい実施形態は、本発明の実施例を含むが、これらに限定されない。

本発明の化合物の構造は、当業者に周知の従来の方法によって確認することができる。本発明が化合物の絶対配置に関する場合、その絶対配置は、当技術分野の従来の技術によって確認することができる。例えば、単結晶Ｘ線回折法（ＳＸＲＤ）では、得られた単結晶について、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ回折計（スキャンモード：φ／ωスキャン、光源：ＣｕＫα線）を使用して回折強度データを収集した後、さらに、直接法（Ｓｈｅｌｘｓ９７）で結晶構造を分析し、絶対配置を確認する。

本発明で使用される全ての溶媒は市販されている。

本発明は以下の略語を使用する。ＤＭＳＯは、ジメチルスルポキシドを表す。ＨＣｌは、塩酸を表す。ＡＣＮは、アセト二トリルを表す。

化合物は、当技術分野における一般的な命名法又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアによって命名され、市販の化合物は、メーカのカタログ名を使用する。

本発明は、実施例により以下に詳細に記載される。しかしながら、これらの例が本発明に対して不利な制限を有することは意図されていない。本発明は本明細書で詳細に説明されており、実施形態も開示されている。本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本明細書に開示される実施形態に様々な変更および修正を加えることができることは当業者には明らかであろう。

実施例１：化合物１の調製

工程１：化合物１－２の合成。
化合物１－１（１．０ｇ，３．４６ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）と水（５ｍＬ）との混合溶媒に加えた後、水酸化ナトリウム（２７６．６２ｍｇ，６．９２ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応液５５℃で攪拌しながら４時間反応させた。反応液を回転蒸発してメタノールを除去し、残留物を２Ｍ塩酸でｐＨ＝２～３に調整し、大量の固形物が析出し、固体を濾過により収集し、粗生成物を得た。この粗生成物を酢酸エチル／石油エーテル（Ｖ／Ｖ＝１：１，３ｍＬ）に加え、室温で１０分間攪拌し、固体を濾過により収集し、４５℃で３０分間真空乾燥させ、化合物１－２を得た。^１Ｈ ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ：３．０６－３．００（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．５２（ｍ，２Ｈ），１．８１－１．６８（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２６０．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程２：化合物１－３の合成
化合物１－２（３９０ｍｇ，１．４９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解させた後、カルボニルジイミダゾール（２９０．６０ｍｇ，１．７９ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応液を室温２５℃で攪拌しながら１時間反応させた。次に、この反応液をアンモニア水溶液（１．５４ｇ，７．４７ｍｍｏｌ，１．６９ｍＬ，含有量１７％）に注ぎ、２０分間激しく攪拌した。反応液を回転蒸発して乾燥させ、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～３５％）により精製して化合物１－３を得た。^１Ｈ ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ：５．５６（ｂｒｓ，１Ｈ），２．９９－２．９４（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．５３（ｍ，２Ｈ），１．８１－１．７４（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２５９．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程３：化合物１－４の合成
化合物１－３（２７１ｍｇ，１．０４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液を０℃まで冷却した後、塩化シアヌル（２３０．５２ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）を加え、最終反応液を得た。氷浴を取り除き、室温２５℃で攪拌しながら１時間反応させた。反応液を酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈した後、水（３ｍＬ×３）で洗浄し、有機相用適量の無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾去し、減圧下で溶媒を除去して、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル．石油エーテル＝０～３％）により精製して化合物１－４を得た。

工程４：化合物１－５の合成
化合物１－４（８２ｍｇ，３３８．６５μｍｏｌ）、ホウ酸１－４Ａ（１０６．６７ｍｇ，５０７．９８μｍｏｌ）および炭酸カリウム（９３．６１ｍｇ，６７７．３１μｍｏｌ）を、ジオキサン（２ｍＬ）と水（０．４ｍＬ）との混合溶媒に加えた後、１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２）（２４．７８ｍｇ，３３．８７μｍｏｌ）を加えた。得られた反応液を窒素ガスで十分に置き換えた後、１１０℃の油浴に入れ、攪拌しながら１８時間反応させた。反応液を回転蒸発して乾燥させ、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～２０％）により精製して化合物１－５を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３２７．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程５：化合物１－６の合成
化合物１－５（４０ｍｇ，１２２．１８μｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（０．５ｍＬ）に溶解させ、氷浴を０℃まで冷却した後、窒素下で三臭化ホウ素（６１．２２ｍｇ，２４４．３５μｍｏｌ，２３．５４μＬ）を加えた。得られた反応液を室温２５℃で攪拌しながら２時間反応させた。氷水浴で冷却し、反応液に水（０．５ｍＬ）を添加して反応をクエンチした後、酢酸エチル（１０ｍＬ）を添加して攪拌し、溶解させ、得られた溶液を水（２ｍＬ×２）で洗浄し、有機相を回転蒸発して乾燥させ、粗生成物である化合物１－６を得た。粗生成物を次の工程でそのまま使用した。

工程６：化合物１の合成
化合物１－６（３７．８３ｍｇ，１２０．７１μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１ｍＬ）および水（１ｍＬ）に加えた後、水酸化リチウム一水和物（１５．２０ｍｇ，３６２．１２μｍｏｌ）を加え、得られた反応液を２５℃で攪拌しながら１５時間反応させた。反応液を回転蒸発して乾燥させ、残留物を１Ｍ塩酸でｐＨ＝２～３に調整し、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム：Ｖｅｎｕｓｉｌ ＡＳＢ Ｐｈｅｎｙｌ １５０＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動相：［水（０．０５％ＨＣｌ）－ＡＣＮ］；ＡＣＮ％：６５％－９５％，９ｍｉｎ）により精製して化合物１を得た。
１Ｈ ＮＭＲ： （４００ＭＨｚ， ＭｅＯＤ－ｄ_４） δ：７．９６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１３－７．０５（ｍ，２Ｈ），２．９０（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．８３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．９３－１．７７（ｍ，４Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２９９．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

実施例２：化合物２の調製

工程１：化合物２－２の合成
化合物２－１（２．５ｇ，１０．１５ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解させた後、水（１０ｍＬ）および水酸化ナトリウム（１．６２ｇ，４０．６１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応液を４０℃の油浴に入れ、攪拌しながら２時間反応させた。反応液を減圧下で半分の量まで濃縮し、残留物に水（５ｍＬ）を添加し、攪拌しながら６Ｍの塩酸でｐＨ＝２～３に調整したところ、大量の白色固形物が析出した。固形物を濾過により収集し、５０℃で３時間真空乾燥させ、化合物２－２を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ： ７．２８（ｓ，１Ｈ），３．３０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），３．２２（ｔ，Ｊ＝１４．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２５（ｔｔ，Ｊ＝６．８，１３．４Ｈｚ，２Ｈ）。

工程２：化合物２－３の合成
化合物２－２（５００ｍｇ，２．２９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させた後、カルボニルジイミダゾール（４４５．８３ｍｇ，２．７５ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応液を窒素下で攪拌しながら１時間反応させた。次に、この反応液を、激しく攪拌していたアンモニア水（２．８７ｇ，２２．９１ｍｍｏｌ，３．１５ｍＬ，含有量２８％）のテトラヒドロフラン溶液（５ｍＬ）に注ぎ、攪拌しながら３０分間反応させた。２５℃、減圧で反応液を濃縮し、残留物を酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、回転蒸発して乾燥させ、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～４５％）により精製して化合物２－３を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３ ） δ： ７．１０（ｓ，１Ｈ），５．５８（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．２８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．２１（ｔ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，２Ｈ），２．２４（ｔｔ，Ｊ＝６．９，１３．４Ｈｚ，２Ｈ）。

工程３：化合物２－４の合成
化合物２－３（３２０ｍｇ，１．４７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液を０℃まで冷却した後、塩化シアヌル（２９８．８１ｍｇ，１．６２ｍｍｏｌ）を加え、最終反応液を、窒素下で攪拌しながら２時間反応させた（この間に大量の白色固形物が析出した）。反応液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈した後、水（１０ｍＬ×３）および飽和食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、有機相を適量の無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去した。減圧下で溶媒を除去し、粗生成物である化合物２－４を得た。粗生成物を次の工程でそのまま使用した。^１Ｈ ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ： ７．２５（ｓ，１Ｈ），３．２１（ｔ，Ｊ＝１４．３Ｈｚ，２Ｈ），３．０９（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｔｔ，Ｊ＝６．８，１３．２Ｈｚ，２Ｈ）。

工程４：化合物２－５の合成
化合物２－４（２９０ｍｇ，１．４６ｍｍｏｌ）を酢酸（２ｍＬ）に溶解させた後、液体臭素（３４８．９４ｍｇ，２．１８ｍｍｏｌ，１１２．５６μＬ）を加え、得られた反応液を室温２５℃で攪拌しながら１５時間反応させた。反応液を回転蒸発して乾燥させ、残留物に酢酸エチル（３０ｍＬ）を添加して飽和炭酸ナトリウムでｐＨ＝７～８に調整した。有機相を分離し、水相を酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせ、減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～５％）により精製して化合物２－５を得た。 ^１Ｈ ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ， ＣＤＣＬ_３） δ：３．１０－２．９９ ｍ，４Ｈ），２．３２－２．１９（ｍ，２Ｈ）。

工程５：化合物２－６の合成
化合物２－５（１４０ｍｇ，５０３．３９μｍｏｌ）、ホウ酸エステル２－５Ａ（１７８．３９ｍｇ，５５３．７３μｍｏｌ）、炭酸カリウム（１３９．１４ｍｇ，１．０１ｍｍｏｌ）をジオキサン（３ｍＬ）および水（０．６ｍＬ）に加えた後、１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２）（３６．８３ｍｇ，５０．３４μｍｏｌ）を加え、次に、窒素下で１０５℃の油浴に入れ、攪拌しながら１５時間反応させた。反応液を回転蒸発して乾燥させ、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～２５％）により精製して化合物２－６を得た。^１Ｈ ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＨＣｌ_３） δ： ７．８７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０（ｓ，２Ｈ），３．３（ｓ，３Ｈ），３．５５（ｓ，３Ｈ），３．２３（ｔ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．１３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３９－２．２４（ｍ，２Ｈ）。

工程６：化合物２－７の合成
化合物２－６（１０５ｍｇ，２６６．９０μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２ｍＬ）に溶解させた後、水酸化リチウム一水和物の水溶液（２Ｍ，５３３．８０μＬ）を加え、得られた反応液を室温２５℃で攪拌しながら１５時間反応させた。反応液を４０℃でテトラヒドロフランを回転蒸発して除去させ、残留物を２Ｍ塩酸でｐＨ＝２～３に調整し、大量の固形物が析出し、酢酸エチル（５０ｍＬ）を添加して攪拌し、酢酸エチルを回転蒸発して乾燥させ、化合物２－７を得た。粗生成物を次の工程でそのまま使用した。

工程７：化合物２の合成
化合物２－７（１０５ｍｇ，２７６．７７μｍｏｌ）をメタノール（１ｍＬ）に溶解させた後、塩酸（６０．５５ｍｇ，１．６６ｍｍｏｌ，５９．３６μＬ）を加え、反応液が濁り、２５℃で攪拌しながら３時間反応させた。４０℃で反応液を回転蒸発して乾燥させ、得られた残留物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム： Ｖｅｎｕｓｉｌ ＡＳＢ Ｐｈｅｎｙｌ １５０＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動相：［水（０．０５％ＨＣｌ）－ＡＣＮ］；ＡＣＮ％：６０％－９０％，９ｍｉｎ）により精製して化合物２を得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ－ｄ_４） δ： ８．００（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１３－７．０４（ｍ，２Ｈ），３．３５－３．３２（ｍ，２Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．４５－２．３０（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ： ３３４．０２［Ｍ－Ｈ］^－。

実施例３：化合物３の調製

工程１：化合物３－２の合成
化合物３－１（１５．０１ｇ，８２．３６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（８０ｍＬ）に加え、Ｎ－ブロモスクシンイミド（２３．４６ｇ，１３１．７８ｍｍｏｌ）を添加し、室温２５℃で１２ｈ反応させた。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチル（６０ｍＬ）で溶解させた。得られた溶液を、水（２０ｍＬ）および飽和食塩水（１５ｍＬ）で順次に洗浄し、最後に無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾去し、濾液の溶媒を減圧下で蒸発させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～１５％）により精製して化合物３－２を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ：３．７６（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５６－２．５０（ｍ，２Ｈ），２．３８－２．３０（ｍ，２Ｈ）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２６０．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程２：化合物３－３の合成
化合物３－２（１．９８ｇ，７．５８ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）との混合溶液に加え、さらに水酸化ナトリウム（６０６．５４ｍｇ，１５．１６ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で攪拌しながら１時間反応させた。反応後、減圧下で蒸発させ、溶媒を除去し、残留物に水（２０ｍＬ）を添加した後、酢酸エチル（１０ｍＬ）で洗浄した。水相を塩酸でｐＨ＝４～５に調整したところ、大量の灰黄色の固形物が析出した。濾過し、フィルターケーキを水（１０ｍＬ）で洗浄した後、真空乾燥させ、化合物３－３を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６） δ：１３．０９（ｂｒｓ，１Ｈ），２．９０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５８－２．５３（ｍ，２Ｈ），２．３９－２．３３（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２４６．８［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程３：化合物３－４の合成
化合物３－３（１．５７ｇ，６．３６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に加え、さらにカルボニルジイミダゾール（１．２４ｇ，７．６３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を窒素下、２５℃で１．５時間攪拌した後、反応液を、攪拌していたアンモニア水（３Ｍ，２１．１９ｍＬ）のテトラヒドロフラン溶液に注ぎ、さらに０．５時間攪拌した。減圧下で蒸発させ、溶媒を除去した後、酢酸エチル（２０ｍＬ）を添加した。得られた混合液を水（１０ｍＬ）および飽和食塩水（５ｍＬ）で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで干燥させた。乾燥剤を濾去し、再び減圧下で濾液を蒸発させ、溶媒を除去し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～５０％）により精製して化合物３－４を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ ７．６０－６．９０（ｍ，２Ｈ），２．９３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５７－２．５５（ｍ，２Ｈ），２．３９－２．２９（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２４７．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程４：化合物３－５の合成
化合物３－４（５５０ｍｇ，２．２３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎジメチルホルムアミド（６ｍＬ）に溶解させ、０℃で塩化シアヌル（４１２．０９ｍｇ，２．２３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を２５℃に昇温し、窒素下で攪拌しながら２時間反応させた。この間に大量の白色固形物が析出した。メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（４０ｍＬ）で反応液を希釈した後、水（１０ｍＬ）および飽和食塩水（５ｍＬ）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、乾燥剤を濾去し、濾液の溶媒を減圧下で蒸発させた。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～２０％）により精製して化合物３－５を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ：２．８２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５９－２．５２（ｍ，２Ｈ），２．４４－２．３５（ｍ，２Ｈ）。

工程５：化合物３－６の合成
化合物３－５（１５０ｍｇ，６５７．５８μｍｏｌ）、ホウ酸エステル３－５Ａ（２３３．０３ｍｇ，７２３．３４μｍｏｌ）および１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２）（４８．１２ｍｇ，６５．７６μｍｏｌ）を反応フラスコに入れ、炭酸カリウム（１８１．７６ｍｇ，１．３２ｍｍｏｌ）をさらに加えた。水（０．６ｍＬ）とジオキサン（３ｍＬ）との混合液を加え、反応液を、窒素下、１０５℃の油浴で１２時間反応させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～２０％）により精製して化合物３－６を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６） δ：７．８２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．３７－７．３２（ｍ，１Ｈ），５．３５（ｓ，２Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．５２（ｓ，３Ｈ），３．０２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），２．８９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），２．６１－２．５１（ｍ，２Ｈ）。

工程６：化合物３－７の合成
化合物３－６（１６８ｍｇ，４８９．２３μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン溶液（５ｍＬ）に加え、水酸化リチウム（２Ｍ，１．４７ｍＬ）をさらに加え、２３℃で２時間反応させた。２Ｍ塩酸でｐＨ４～５に調整した後、減圧下で蒸発させ、テトラヒドロフランを除去し、残留物に酢酸エチル（１５ｍＬ）を添加した後、水（５ｍＬ）で１回洗浄してから、飽和食塩水（５ｍＬ）でさらに１回洗浄した。有機相を適量の無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して乾燥剤を除去した。減圧下で溶媒を除去して、粗生成物である化合物３－７を得た。粗生成物を次の工程でそのまま使用した。 ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３２９．９［Ｍ＋Ｈ］ ^＋。

工程７：化合物３の合成
化合物３－７（１６０ｍｇ，４８５．７８μｍｏｌ）にメタノール（２ｍＬ）を加え、塩酸（４９．２０ｍｇ，４８５．７８μｍｏｌ，４８．２３μＬ，３６％純度）をさらに加えた。２３℃で３時間反応させた後、減圧下で蒸発させ、溶媒を除去し、粗生成物を得た。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム： Ｖｅｎｕｓｉｌ ＡＳＢ Ｐｈｅｎｙｌ １５０＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動相：［水（０．０５％ＨＣｌ）－ＡＣＮ］；ＡＣＮ％：５５％－８５％，９ｍｉｎ）により精製して化合物３を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ－ｄ_４） δ：７．９７－７．９２（ｍ，１Ｈ），７．４５－７．２１（ｍ，２Ｈ），３．０１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．８９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．６５－２．５１（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２８６．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

実施例４：化合物４の調製

工程１：化合物４－２の合成
化合物４－１（１ｇ，７．０３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に加え、－７８℃、窒素下でｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ，３．１０ｍＬ）を滴下した後、さらに３０分間反応させ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（９５０．００ｍｇ，１３．００ｍｍｏｌ，１．００ｍＬ）を滴下した。滴下完了後、２３℃に昇温し、１ｈ反応させた。塩酸で溶液をｐＨ２～３に調整したところ、溶液に沈殿が析出した。析出した沈殿を濾過し、５ｍＬの水でフィルターケーキを洗浄した後、真空乾燥させ、化合物４－２を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ：９．９４（ｓ，１Ｈ）６．８２（ｓ，１Ｈ）４．３７－４．４１（ｍ，２Ｈ）４．２８－４．３１（ｍ，２Ｈ）。

工程２：化合物４－３の合成
化合物４－２（２００ｍｇ，１．１８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）に加え、Ｎ－ブロモスクシンイミド（２５０．９９ｍｇ，１．４１ｍｍｏｌ）をさらに加えた。得られた反応液を２３℃で４８時間反応させた。反応完了後、減圧下で蒸発させ、溶媒を除去し、酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈し、水（３ｍＬ）で２回洗浄し、有機層を分離した後、飽和塩化ナトリウム溶液２ｍＬで１回洗浄し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～２０％）により精製して化合物４－３を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ：９．８５（ｓ，１Ｈ），４．４５－４．３０（ｍ，４Ｈ）；ＬＣＭＳ ｍ／ｚ＝２４６．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程３：化合物４－４の合成
化合物４－３（２１５ｍｇ，８６３．１７μｍｏｌ，）をエタノール（４ｍＬ）に加え、ヒドロキシルアミン水溶液（５０％，１１４．０４ｍｇ，１．７３ｍｍｏｌ）をさらに加え、９０℃で２時間還流させて反応させた。反応完了後、そのまま減圧下で蒸発させ、溶媒を除去した。アセトニトリ（４ｍＬ）を加え、さらに減圧下で蒸発させ、溶媒を除去し、化合物４－４を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２６３．９［Ｍ＋Ｈ］^＋

工程４：化合物４－５の合成
化合物４－４（１３０ｍｇ，４９２．２４μｍｏｌ）をアセトニトリ（５ｍＬ）に加え、窒素下で塩化チオニル（２３４．２５ｍｇ，１．９７ｍｍｏｌ，１４２．８４μＬ）を加え、９０℃で４時間加熱還流させた。減圧下で蒸発させ、溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～３０％）により精製して化合物４－５を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ：４．３２－４．４１（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２４７．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程５：化合物４の合成
化合物４－５（１１０ｍｇ，４４７．０１μｍｏｌ）、４－５Ａ（１３８．７１ｍｇ，４９１．７１μｍｏｌ）および炭酸カリウム（１２３．５６ｍｇ，８９４．０１μｍｏｌ）をジオキサン（２ｍＬ）／水（０．４ｍＬ）に加えた後、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（３２．７１ｍｇ，４４．７０μｍｏｌ）を加えた。得られた反応液を、窒素下、１０５℃で１５時間反応させた。反応液を濃縮し、残留物にトリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を加え、室温で攪拌しながら１時間反応させた。反応液を濃縮し、残留物をジメチルスルホキシド（３ｍＬ）に溶解させ、分取用ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム： Ａｇｅｌａ ＡＳＢ １５０＊２５ｍｍ＊５μｍ；移動相：［水（０．０５％ＨＣｌ）－ＡＣＮ］； アセトニトリ％： ４６％－７６％，９ｍｉｎ）により精製して化合物４を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ＿ｄ_６） δ：７．８６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３４－７．２４（ｍ，２Ｈ），４．４９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ）． ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３０２．０［Ｍ－Ｈ］^－。

実施例 ５：化合物５の調製

工程１：化合物５－２の合成
化合物５－１（５ｇ，２１．０９ｍｍｏｌ）、１，２－ジブロモエタン（３１．７０ｇ，１６８．７３ｍｍｏｌ，１２．７３ｍＬ）および炭酸カリウム（１１．６６ｇ，８４．３６ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）に加え、８５℃に昇温し、攪拌しながら４時間反応させた。反応液を濃縮し、残留物に１００ｍＬの酢酸エチルを添加し、不溶物を１０分間攪拌し、減圧下で溶媒を除去して、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～２％）により精製して化合物５－２を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ：７．４１（ｓ，１Ｈ）４．４９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．７０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）。

工程２：化合物５－３の合成
化合物５－２（６．５ｇ，１８．８９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）に溶解させ、攪拌し、－７８℃まで冷却した後、ｎ－ブチルリチウム（２．５Ｍ，７．５６ｍＬ）を滴下した。滴下完了後、この温度で攪拌しながら２時間反応させた。飽和塩化アンモニウム溶液（２０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）で反応をクエンチし、有機相を分離した。水相を酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、濃縮した後、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～３５％）により精製して化合物５－３を得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ：６．９５（ｓ，１Ｈ），５．１０（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）。

工程３：化合物５－４の合成
化合物５－３（６２０ｍｇ，３．３７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解させた後、Ｎ－ブロモスクシンイミド（８９８．５６ｍｇ，５．０５ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応液を２５℃で攪拌しながら２４時間反応させた。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解させた後、飽和亜硫酸水素ナトリウム（１０ｍＬ）、飽和食塩水（１０ｍＬ）で順次に洗浄し、有機相を濃縮した後、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～２５％）により精製して化合物５－４を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２６２．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程４：化合物５－５の合成
化合物５－４（３１８ｍｇ，１．２１ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）に溶解させた後、水酸化ナトリウム溶液（２Ｍ，１．２１ｍＬ）を加え、得られた反応液を４５℃で攪拌しながら２時間反応させた。反応液を回転蒸発して乾燥させ、残留物に水（２ｍＬ）を添加して、６Ｍ塩酸でｐＨ～２－３に調整し、大量の沈殿物が析出した。１０分間攪拌した後、濾過して回収し、フィルターケーキを４５℃で２時間真空乾燥させ、化合物５－５を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２４８．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程５：化合物５－６の合成
化合物５－５（２５０ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解させた後、カルボニルジイミダゾール（２４４．１２ｍｇ，１．５１ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応液を窒素下で攪拌しながら１時間反応させた。次に、反応液をアンモニア水（１．３０ｇ，１０．０４ｍｍｏｌ，１．４３ｍＬ，濃度２７％）のテトラヒドロフラン溶液（５ｍＬ）に注ぎ、攪拌しながら３０分間反応させた。反応液を濃縮し、残留物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で溶解させた後、水（１０ｍＬ）および飽和食塩水（１０ｍＬ）で順次に洗浄した。有機相を適量の無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾去し、濾液を減圧下で濃縮し、溶媒を除去して粗生成物化合物５－６得た。そのまま次の反応に用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２４９．９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程６：化合物５－７の合成
化合物５－６（２３０ｍｇ，９２７．０６μｍｏｌ）をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解させた後、塩化シアヌル（２５６．４４ｍｇ，１．３９ｍｍｏｌ）を加え、得られた反応液を室温２５℃で攪拌しながら２時間反応させた。反応液を酢酸エチル（８０ｍＬ）で希釈した後、水（２０ｍＬ）および飽和食塩水（２０ｍＬ）で順次に洗浄した。有機相を適量の無水硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を濾去し、減圧下で溶媒を除去して、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～１５％）により精製して化合物５－７を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２５２．２［Ｍ＋Ｎａ］^＋。

工程７：化合物５－８の合成
化合物５－７（１３０ｍｇ，５６５．０２μｍｏｌ）、５－７Ａ（３０８．７０ｍｇ，８４７．５３μｍｏｌ）および炭酸カリウム（１９５．２２ｍｇ，１．４１ｍｍｏｌ）をジオキサン（１．５ｍＬ）および水（０．３ｍＬ）に加えた後、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（８２．６９ｍｇ，１１３．００μｍｏｌ）を加え、得られた反応液を窒素下、１１０℃で攪拌しながら１５時間反応させた。反応液を濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝０～２５％）により精製して化合物５－８を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３８８．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程８：化合物５の合成
化合物５－８（１４０ｍｇ，３６１．３４μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．５ｍＬ）に溶解させた後、トリフルオロ酢酸（４１２．０１ｍｇ，３．６１ｍｍｏｌ，２６７．５４μＬ）を加え、得られた反応液を２５℃で攪拌しながら２時間反応させた。反応液を濃縮して粗生成物を得た。粗生成物をＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解させ、ＨＰＬＣ（クロマトグラフィーカラム： Ｖｅｎｕｓｉｌ ＡＳＢ Ｐｈｅｎｙｌ １５０＊３０ｍｍ＊５μｍ；移動相：［水（０．０５％ＨＣｌ）－ＡＣＮ］；アセトニトリ％：４５％－７５％，９ｍｉｎ）により精製して化合物５を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ：７．９６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２０－７．０５（ｍ，２Ｈ），５．２０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．３９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２８６．０［Ｍ－１］^－。

生物学的試験データ：
実験例１：キサンチンオキシダーゼ阻害活性試験
１．１実験の目的
化合物のキサンチンオキシダーゼ活性に対する阻害のレベルを評価する。

１．２ 試薬
本研究で使用された主な試薬は、キサンチン（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号：Ｘ４００２－１Ｇ、ロット番号：ＳＬＢＢ５６６４Ｖ）およびキサンチンオキシダーゼ（Ｓｉｇｍａ，カタログ番号：Ｘ４３７６－５ＵＮ、ロット番号：ＳＬＢＱ１５１８Ｖ）を含む。

１．３ 装置
本研究で使用された主な装置は、マルチマイクロプレートリーダーである。

１．４ 実験方法
１）化合物のバックグラウンド対照ウェルおよびＨＰＥ（１００％阻害率活性）陽性対照ウェルに、５０μＬのダルベッコリン酸緩衝液（ＤＰＢＳ）を加えた。
２）２Ｕ／ｍＬのキサンチンオキシダーゼをＤＰＢＳで０．０４Ｕ／ｍＬに希釈し、図１の実験配置図に従って化合物活性試験ウェルおよびＺＰＥ（０％阻害率活性）陰性対照ウェルに、５０μＬのキサンチンオキシダーゼを加えた。
３）化合物をＤＭＳＯで３倍連続希釈し、８濃度を得た。次に、化合物をＤＰＢＳで希釈し、５０μＬずつ各３ウェルに添加した。ＨＰＥ（１００％阻害率活性）陽性対照ウェルおよびＺＰＥ（０％阻害率活性）陰性対照ウェルの各ウェルに、５０μＬのＤＰＢＳを添加した。
４）２００ｍＭのキサンチンをＤＰＢＳで３００μＭに希釈した。図１の実験配置図に従って、１００μＬのキサンチンを各ウェルに添加し、室温で３０分間反応させ、各ウェルのキサンチンオキシダーゼの最終濃度は０．０１Ｕ／ｍＬであり、各ウェルのＤＭＳＯの最終濃度は０．５％であった。なお、ＨＰＥ（１００％阻害率活性）陽性対照ウェルには、キサンチンを含んだが、キサンチンオキシダーゼを含まなかった。ＺＰＥ（０％阻害率活性）陰性対照ウェルには、キサンチンとキサンチンオキシダーゼを含んだ。化合物のバックグラウンド対照ウェルには、さまざまな濃度の化合物とキサンチンを含んだが、キサンチンオキシダーゼを含まなかった。
５）分光光度計で２９０ｎｍにおける吸光度値を測定した。
６）データ分析：次の式により、各ウェルのキサンチンオキシダーゼの阻害率を算出した。
＊ ＯＤ_{試験サンプル}は、化合物、キサンチン及びキサンチンオキシダーゼを含む化合物活性試験ウェルの光学密度（ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ）値であり；
＊ ＯＤ_{化合物対照}は、化合物とキサンチンを含むがキサンチンオキシダーゼを含まないさまざまな濃度の試験化合物のバックグラウンド光学密度（ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ）値であり；
＊ ＯＤ_ＺＰＥは、０．５％ＤＭＳＯ、キサンチン、およびキサンチンオキシダーゼを含む阻害活性無しの対照ウェルの光学密度（ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ）値の平均値であり；
＊ ＯＤ_ＨＰＥは、０．５％ＤＭＳＯとキサンチンを含むがキサンチンオキシダーゼを含まない１００％阻害活性の対照ウェルの光学密度（ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ）値の平均値である。
７）ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、化合物の阻害率データ（阻害率％）に対してｌｏｇ（ａｇｏｎｉｓｔ） ｖｓ． ｒｅｓｐｏｎｓｅ－－Ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｌｏｐｅ非線形フィッティング分析を実行し、化合物のＩＣ_５０値を得た。フィッティング式：Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ_５０－Ｘ）＊ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））。

１．５ 実験の結果
表１． 化合物のキサンチンオキシダーゼ阻害活性試験の結果

実験の結果は、本発明の化合物が良好なキサンチンオキシダーゼ阻害活性を有することを示している。

実験例２：化合物の尿酸摂取阻害活性試験
１． 実験の目的
本研究において、ヒトＵｒａｔ１遺伝子を安定的にトランスフェクトした細胞株を使用して、尿酸摂取に対する試験化合物の阻害活性を評価する。

２． 実験の材料
２．１細胞株
ヒトＵｒａｔ１遺伝子を安定的にトランスフェクトした細胞株は、ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ社によって構築された。ヒトＵｒａｔ１遺伝子を安定的にトランスフェクトした細胞株（Ｕｒａｔ１－ＭＤＣＫ）は、ヒトＵｒａｔ１遺伝子をトランスフェクトし、Ｇ４１８スクリーニングによって得られたＭＤＣＫ細胞である。細胞株は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、２ｍＭＬ－グルタミンおよび１％非必須アミノ酸、および２５０μｇ／ｍｌのＧ４１８を含むＭＥＭ培地で培養された。
２．１試薬
本研究で使用された主な試薬は、１４Ｃ尿酸（ＡＲＣ、カタログ番号：ＡＲＣ－０５１３、ロット番号：２００１２２）を含んだ。
２．２装置
本研究で使用された主な装置は、液体シンチレーションアナライザー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｔｒｉ－Ｃａｒｂ ４９１０ＴＲ）であった。

３． 実験方法
３．１ 細胞プレーティング
３．１．１ Ｔ１５０細胞培養フラスコで培養されたＵｒａｔ１－ＭＤＣＫ細胞を０．２５％トリプシンで消化した後、新鮮な培地で希釈し、２００，０００細胞／ｍｌの懸濁液を調製した。
３．１．２ ４８ウェル細胞培養プレートにウェルあたり０．５ｍｌで細胞を播種した。最終細胞密度は１００，０００細胞／ウェルであった。
３．１．３ 細胞培養プレートを３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーターで一晩インキュベートした。
３．２ 化合物の処理および測定
３．２．１ 化合物をＤＭＳＯで５倍連続希釈し、４濃度を得た。希釈後の濃度は２００×最終実験濃度であった。次に、化合物をＨＢＳＳ緩衝液で１０倍希釈した。
３．２．２ １４Ｃ－尿酸の１０ｍＭ濃縮ストック溶液を、ＨＢＳＳ緩衝液で１ｍＭに希釈した。
３．２．３ 細胞培養プレートを一晩インキュベートした後、細胞培養培地をプレートから除去し、ＨＢＳＳ緩衝液で細胞を３回洗浄し、続いて各ウェルに９０μｌのＨＢＳＳ緩衝液を加えた。
３．２．４ 希釈された化合物５μｌを各ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーターで細胞を２０分間インキュベートした。各ウェルのＤＭＳＯの含有量は０．５％であった。試験化合物（１０μＭ）を１００％阻害率対照として使用し、０．５％ＤＭＳＯを０％阻害率対照として使用した。
３．２．５ 希釈された１４Ｃ－尿酸をウェルあたり５μｌで細胞プレートに添加した。各ウェルの尿酸の最終濃度は５０μＭであった。３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーターで細胞を１５分間インキュベートした。次に、事前に冷却したＨＢＳＳ緩衝液で細胞を３回洗浄した。
３．２．６ 各ウェルに０．１ＭのＮａＯＨ １５０μｌを加え、細胞を１０分間溶解した。
３．２．７ 細胞溶解物を液体シンチレーション検出バイアルに収集し、各バイアルに２ｍｌのシンチレーション液を加えた。
３．２．８ 液体シンチレーションアナライザーで各バイアルのサンプルの１４Ｃ含有量を測定した。
３．２．９ データ分析：
阻害率％＝（ＨＣ－ＣＰＤ）／（ＨＣ－ＬＣ）×１００％＊
＊ＣＰＤは、化合物ウェルの放射性シグナルの値であり；
ＨＣは、０％阻害率対照ウェルの放射性シグナルの平均値であり；
ＬＣは、１００％阻害率対照ウェルの放射性シグナルの平均値である。
３．２．１０ ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、非線形回帰ｌｏｇ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ） ｖｓ． ｒｅｓｐｏｎｓｅ－－Ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｌｏｐｅ法を採用して、以下の式により用量反応曲線をフィッティングし、化合物のＩＣ_５０値およびＩＣ_９０値を得た。
Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ_５０－Ｘ）＊ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））

４． 実験の結果
表２． 尿酸摂取に対する化合物の阻害活性

実験の結論：実験の結果は、本発明化合物が尿酸摂取に対して良好な阻害活性を有することを示している。

実験例３：肝細胞における代謝安定性（ＨＭＳ）の研究
１．実験の目的
ヒトおよびラット肝細胞における試験サンプルの代謝安定性を検出する。

２．実験の材料
２．１試験化合物（１０ｍＭ）、対照品：７－エトキシクマリン（７－Ｅｔｈｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ，３０ｍＭ）、７－ヒドロキシクマリン（７－Ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ、対照品、３０ｍＭ）

２．２細胞

２．３ 緩衝系：
解凍培地：５％のウシ胎児血清、３０％のＰｅｒｃｏｌｌ溶液および他の補助物質を含むウィリアム培地Ｅ。
インキュベーション培地：２ｍＭのＬ－グルタミンおよび２５ｍＭのヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸を含むウィリアム培地Ｅ（フェノールレッドを含まない）。
停止溶液：２００ｎｇ／ｍＬのトシルブチルアミドおよびラベタロールを内部標準として含むアセトニトリル。
希釈液：超純水。

３．実験方法
１）正確な量の陽性対照化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、３０ｍＭの溶液を調製した。
２）９６ウェルプレートにおいて、１０ｍＭの試験化合物および３０ｍＭの陽性対照化合物をＤＭＳＯで１ｍＭおよび３ｍＭに希釈した。
３）アセトニトリルで１ｍＭの試験化合物および３ｍＭの陽性対照化合物を１００μＭおよび３００μＭの定量溶液に希釈した。
４）凍結保存された細胞を解凍し、分離して培地に懸濁させた後、あらかじめ温めておいた培地で０．５×１０^６細胞／ｍＬに希釈した。
５）あらかじめ加熱した細胞懸濁液１９８μＬを９６ウェルプレートに加えた。
６）１００μＬの停止溶液（２００ｎｇ／ｍＬのトシルブチルアミドと２００ｎｇ／ｍＬのラベタロールを内部標準として含むアセトニトリル）を、事前にラベルを付けた９６ウェルプレートのセットに移した。
７）２μＬの１００μＭ試験化合物または３００μＭ陽性対照定量溶液を９６ウェルプレートの各ウェルに２回ずつ加えた。
８）Ｔ０サンプルを混合して、約１分間で均一に懸濁させた後、各サンプル２０μＬを直ちに１００μＬの氷冷停止溶液を含むウェルに移して混合した。
９）９５％加湿インキュベーター内、５％ＣＯ_２、３７℃ですべてのプレートをインキュベートし、約６００ｒｐｍで振とうして反応を開始させた。
１０）１５、３０、６０および９０分にサンプルを混合した後、各時点で各サンプル２０μＬを、１００μＬの氷冷停止液を含むウェルに移して混合した。
１１）細胞懸濁液以外と同様の成分を各ウェルに添加したことにより、Ｔ０およびＴ９０で、培地対照（ＭＣ）サンプルプレート（Ｔ０－ＭＣおよびＴ９０－ＭＣと表示した）を調製した。最終濃度表を得た。
１２）それぞれの時点で、インキュベーターからプレートを取り出し、１００μＬの氷冷停止溶液と混合したことにより、反応を停止させた。
１３）直ちにプレートシェーカーによりプレートを５００ｒｐｍで１０分間ボルテックスした。次に、３２２０×ｇ、４℃ですべてのサンプルプレートを２０分間遠心分離した。
１４）遠心分離後、３５μＬ／ウェルでサンプルプレートの上清を、プレート図に従って７０μＬの超純水を含む事前にラベル付けされた別の９６ウェルプレートのセットに移した。
１５）分析プレートを密封し、ＬＣ－ＭＳ－ＭＳ分析まで４℃で保存した。
以下の式により、試験化合物と対照化合物の残留率を得た。

時間に対する残留率の対数をプロットすることにより、肝細胞における試験化合物および対照化合物の消失速度定数ｋを算出し、この消失速度定数ｋから、半減期（Ｔ_１／２）およびインビトロ固有クリアランス（ＣＬ_ｉｎｔ）を求めた。式は以下の通りである。
Ｔ_１／２＝０．６９３／ｋ
ＣＬ_{ｉｎｔ（ｈｅｐ）}＝ｋ／１ｍｌあたりの細胞数（ｍｉｌｌｉｏｎ ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）
ＣＬ_{ｉｎｔ（ｌｉｖｅｒ）}＝ＣＬ_{ｉｎｔ（ｈｅｐ）}×肝重量体重比×肝臓１グラムあたりの肝細胞数
式中の各パラメーターは以下の通りである。

４．実験の結果
結果を表３に示す。
表３ ヒトおよびラットにおける化合物の肝固有クリアランス

実験の結論：化合物２および化合物３は両方とも、ヒト肝細胞では中程度のクリアランスであり、ラット肝細胞では高いクリアランスである。

実験例４．膜透過性ＭＤＲ１試験
１．実験の目的：
ＭＤＲ１－ＭＤＣＫ ＩＩ細胞は、ヒトＭＤＲ１遺伝子をトランスフェクトしたＭａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙイヌ腎臓細胞であり、この細胞は、Ｐ－ｇｐを安定して高発現することができる。本研究の目的は、ＭＤＲ１－ＭＤＣＫ ＩＩ細胞モデルにおける化合物の双方向透過性を検出し、また、それらが外部に輸送されるかどうかを評価することにある。

２．細胞の培養：
ＭＤＲ１－ＭＤＣＫ ＩＩ細胞（Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ Ｃａｎｃｅｒ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＰｉｅｔ Ｂｏｒｓｔから入手）を、４～７日間で融合細胞単層を形成するまで、９６ウェルインサートシステムのポリエチレンフィルム（ＰＴＥＴ）に２．５×１０^５細胞／ｍＬの密度で播種した。

３．実験方法
輸送緩衝液（ＨＢＳＳ、ＤＭＳＯを含む１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．４）で試験化合物を２μＭ（ＤＭＳＯ＜１％）の濃度に希釈し、細胞単層の頂端膜または基底外側膜に塗布した。試験化合物をＡからＢまたはＢからＡの方向に繰り返して試験し、ジゴキシンをＡからＢまたはＢからＡの方向に１０μＭで試験し、ナドロールおよびメトプロロールをＡからＢまで２μＭで試験した。３７±１℃のＣＯ_２インキュベーター内、飽和湿度５％のＣＯ_２で振とうせずにプレートを２．５時間インキュベートし、さらに各化合物の流出比を測定し、試験化合物および参照化合物の定量を行った。分析物／ＩＳのピーク面積比から、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した、輸送試験後、ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ排除アッセイにより、細胞単層の完全性を検出した。頂端膜および基底外側膜コンパートメントから緩衝液を除去した後、輸送緩衝液に７５μＬの１００μＭルシフェリンイエローを、頂端膜および基底外側膜コンパートメントに２５０μＬの輸送緩衝液をそれぞれ添加した。３７℃、５％ＣＯ_２、飽和湿度で振とうせずにプレートを３０分間インキュベートした。３０分間のインキュベーション後、頂端膜から２０μＬのルシフェリンイエローサンプルを採取し、６０μＬの輸送緩衝液を添加した。次に、基底外側膜から８０μＬのルシフェリンイエローサンプルを採取した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎマイクロプレートリーダーを使用して４２５／５２８ｎｍ（励起／発光）でルシフェリンイエローの相対蛍光単位（ＲＦＵ）を測定した。

４．データの計算
以下の式により、見かけの透過係数（Ｐａｐｐ、ｃｍ／ｓ）、流出率（ｅｆｆｌｕｘ ｒａｔｅ）および回収率（ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ）を算出した。
以下の式により、見かけの透過係数（Ｐａｐｐ、ｃｍ／ｓ）を算出した。
Ｐａｐｐ＝（ｄＣ_ｒ／ｄ_ｔ）×Ｖ_ｒ／（Ａ×Ｃ_０）
ｄＣ_ｒ／ｄ_ｔは、単位時間にわたる受け側の化合物の累積濃度（μＭ／ｓ）であり；Ｖ_ｒは、受け側の溶液の容量（頂端膜と基底端の溶液の容量はそれぞれ０．０７５ｍＬと０．２５０ｍＬ）であり；Ａは、細胞単層の相対表面積（０．０８０４ｃｍ^２）であり；Ｃ_０は、投与側の試験物質の初期濃度（ｎＭ）または対照物質のピーク面積比である。
以下の式により、流出率を算出した。
流出率＝Ｐ_ａｐｐ（ＢＡ）／Ｐ_ａｐｐ（ＡＢ）
以下の式により、回収率を算出した。
％回收率＝１００×［（Ｖ_ｒ×Ｃ_ｒ）＋（Ｖ_ｄ×Ｃ_ｄ）］／（Ｖ_ｄ×Ｃ_０）
Ｃ_０は、投与側の試験物質の初期濃度（ｎＭ）または対照物質のピーク面積比であり；Ｖ_ｄは投与側の容量（頂端膜側は０．０７５ｍＬ、基底側は０．２５０ｍＬ）であり；Ｃ_ｄおよびＣ_ｒは、それぞれ、投与側および受け側での試験物質の最終濃度（ｎＭ）または対照物質のピーク面積比である。
以下の式により、基底外側膜ウェルにおけるルシファーイエローの百分率を算出した。
ここで、ＲＦＵＡｐｉｃａｌおよびＲＦＵＢａｓｏｌａｔｅｒａｌは、それぞれ、頂端膜および基底外側膜のウェルにおけるルシファーイエローの相対蛍光単位値であり；ＶＡｐｉｃａｌおよびＶＢａｓｏｌａｔｅｒａｌは、それぞれ、頂端膜および基底外側膜のウェルの体積（０．０７５ｍＬおよび０．２５ｍＬ）である。なお、％ルシファーイエローは２未満である。

５．実験の結果
表４ ＭＤＲ１細胞に対する化合物の膜透過性のデータ
結果を表４に示す。

実験の結論：化合物２および化合物３は両方とも高い透過性のものである。

実験例５．シトクロムＰ４５０アイソザイム阻害活性試験
１．実験の目的
ヒトシトクロムＰ４５０アイソザイムの異なるサブタイプに対する試験化合物の阻害活性を測定する。
２．実験方法
試験化合物、標準阻害剤（１００×最終濃度）および混合基質作業溶液を調製し；－８０℃の冷凍庫で凍結されたミクロソーム（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃから購入）を取り出して解凍した。対応するウェルに、２０μＬの試験化合物および標準阻害剤の溶液を添加し、同時に、阻害剤なしの対照ウェル（ＮＩＣ）およびブランク対照ウェル（Ｂｌａｎｋ）に、対応する溶媒２０μＬを添加した。次に、Ｂｌａｎｋウェル（Ｂｌａｎｋウェルに２０μＬのリン酸緩衝液（ＰＢ）を添加した）を除いて、対応するウェルに２０μＬの混合基質溶液を添加した。ヒト肝臓ミクロソーム溶液（使用後の日付をマークし、すぐに冷蔵庫に戻した）を調製し、１５８μＬのヒト肝臓ミクロソーム溶液をすべてのウェルに直ちに添加した。上記のサンプルプレートを３７℃の水浴でプレインキュベートした後、補酵素因子（ＮＡＤＰＨ）溶液を調製した。１０分間後、すべてのウェルに２０μＬのＮＡＤＰＨ溶液を加えた。サンプルプレートをよく振った後、３７℃の水浴で１０分間インキュベートした。対応する時点で、４００μＬの冷アセトニトリル溶液（内部標準：２００ｎｇ／ｍＬのトルブタミドおよびラベタロール）を添加して反応を停止させた。サンプルプレートを十分に混合した後、４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、タンパク質を沈殿させた。上清液２００μＬを取り出し、水１００μＬに加え、均一に振とうした後、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳで検出した。

３．実験の結果
結果を表５に示す。

表５ 化合物によるＰ４５０アイソザイムの阻害のＩＣ_５０値

実験の結論：試験化合物は、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ３Ａ４－Ｍに対して非常に低い阻害活性を有し、ＣＹＰ２Ｃ９に対して中程度の阻害活性を有する。

実験例６．ＳＤラットにおけるｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態
１．実験の目的：
ＳＤラットにおける試験化合物のｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態。

２．実験の材料：
Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（雄、１８０～３５０ｇ、６～１０週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｂｅｉｊｉｎｇ）

３．実験方法：
化合物２を５％ＤＭＳＯ／１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ／８５％水と混合し、撹拌し、ボルテックスして、注射群投与用の０．６ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を調製し、ミクロポーラス膜で濾過した。化合物２を５％ＤＭＳＯ／１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ／８５％水と混合し、撹拌し、ボルテックスして、経口投与用の１ｍｇ／ｍＬの透明な溶液を調製した。６匹の雄ＳＤラットを２つの群に分けた。第１群の動物には、静脈内に単回投与され、用量が３ｍｇ／ｋｇであり、溶媒が５％ＤＭＳＯ／１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ／８５％水であり、投与量が５ｍＬ／ｋｇであった。第２群の動物には、試験化合物２を１０ｍｇ／ｋｇで単回強制経口投与し、経口溶媒が５％ＤＭＳＯ／１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ／８５％水であり、経口容量が１０ｍＬ／ｋｇであった。投与後の０（強制経口投与群のみ）、０．０８３（静脈内注射のみ）、０．２５、０．５、１、２、４、８および２４時間に、全血を採取した。３２００ｇ、４℃で全血を１０分間遠心分離して血漿を得た。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法により血漿中の化合物２および尿酸（強制経口投与群のみ）の濃度を測定し、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェアによりピーク濃度、ピーク濃度到達時間、クリアランス、半減期、薬物血中濃度－時間曲線下面積、バイオアベイラビリティなどの薬物動態パラメータを算出した。

実験の結果を表６に示す。
表６ ラットにおける化合物２の薬物動態データ

実験の結論：化合物２は、薬物動態特性が良好で、経口バイオアベイラビリティが高い。ここで、Ｃ_０は初期濃度、Ｔ_１／２は消失半減期、Ｖｄ_ｓｓは定常状態の見かけの分布容積、Ｃ_ｌは総クリアランス、ＡＵＣ_{０－ｌａｓｔ}は０時間から最後の定量化可能な時点までの薬物血中濃度－時間曲線下面積、ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}は０時間から外挿された無限大までの血漿濃度－時間曲線下面積、Ｃ_ｍａｘはピーク濃度、Ｔ_ｍａｘはピーク濃度到達時間である。

Claims (11)

1. 式（Ｉ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
   ここで、
   各Ｒ_１は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＮ、Ｃ_１－３アルキル、およびＣ_１－３アルコキシからなる群から選択され、前記のＣ_１－３アルキルおよびＣ_１－３アルコキシは１個、２個または３個のＲ_ａで置換されていてもよく；
   ｎは、０、１、２、３および４から選択され；
   Ｒ_ａは、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨおよびＮＨ_２からなる群から選択され；
   Ｒ_２は、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ_２およびＣＮからなる群から選択され；
   環Ａは、Ｃ_５－６シクロアルキルおよび５～６員ヘテロシクロアルキルからなる群から選択され；
   前記の５～６員ヘテロシクロアルキルは、－ＮＨ－、－Ｏ－およびＮからなる群から独立して選択される１個、２個、３個または４個のヘテロ原子またはヘテロ原子団を含む、
   式（Ｉ）で表される化合物またはその薬学的に許容される塩。
2. 各Ｒ_１が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨ_３ＣＨ_２およびＣＨ_３Ｏからなる群から選択され、前記のＣＨ_３、ＣＨ_３ＣＨ_２およびＣＨ_３Ｏが１個、２個または３個のＲ_ａで置換されていてもよい、
   請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
3. 各Ｒ_１が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨ_３ＣＨ_２、ＣＨ_３ＯおよびＣＦ_３からなる群から選択される、
   請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
4. 環Ａが、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、ジオキサニル、およびピペリジルからなる群から選択される、
   請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
5. 環Ａが、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラニル、およびジオキサニルからなる群から選択される、
   請求項４に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
6. 下式で表される、式（Ｉ）中の構造単位：
   が、
   下記：
   からなる群から選択される、
   請求項１～５のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
7. 下式で表される、式（Ｉ）中の構造単位
   が、下記：
   から選択される、
   請求項６に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
8. 前記の化合物が、下式で表される化合物：
   からなる群から選択され、
   ここで、
   Ｒ_１、ｎおよびＲ_２が、請求項１～４のいずれか１項に定義した通りであり、
   Ｅ_１、Ｅ_２およびＥ_３が、それぞれ独立してＣＨ_２およびＯから選択される、
   請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
9. 下記：
   からなる群から選択される、
   化合物またはその薬学的に許容される塩。
10. 請求項１～９のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含有する、キサンチンオキシダーゼを阻害するための医薬組成物。
11. 痛風性関節炎および高尿酸血症から選択される疾患の治療に用いられる、請求項１０に記載の医薬組成物。