JP7354270B2 - 肝細胞を培養するための培地、肝細胞の製造方法および肝細胞 - Google Patents
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Description
<1> 肝細胞を培養するための培地であって、
ROCK阻害剤、nicotinamideおよびその類縁体のうちの一種以上を含み、
血清成分の含有量が5容量%未満であり、
EGFレセプター活性化因子の含有量が1ng/mL未満であり、
ALK阻害剤の含有量が、0.1μmol/L未満である、
上記の培地。
<2> 血清成分を含有せず、EGFレセプター活性化因子を含有せず、ALK阻害剤を含有しない、<1>に記載の培地。
<3> ROCK阻害剤と、nicotinamideまたはその類縁体とを含む、<1>又は<2>に記載の培地。
<4> ROCK阻害剤が、Y-27632である、<1>から<3>の何れか一に記載の培地。
<5> 肝細胞が、組織由来の肝細胞または多能性幹細胞由来の肝細胞である、<1>から<4>の何れか一に記載の培地。
<6> 肝細胞の代謝機能もしくは維持期間を改善するための培地である、<1>から<5>の何れか一に記載の培地。
<7> 肝細胞を、<1>から<6>の何れか一に記載の培地中で維持培養する方法。
<8> 肝細胞を、<1>から<6>の何れか一に記載の培地において培養することを含む、肝細胞の製造方法。
<9> <8>に記載の方法により得られる肝細胞。
本明細書における略号は以下の意味を有する。
ALDH2(Aldehyde Dehydrogenase 2):アルデヒドデヒドロゲナーゼ2
ASGR1(asialoglycoprotein receptor1):アシアログリコプロテインレセプター1)
ALK(anaplastic lymphoma kinase):未分化リンパ腫キナーゼ
CPS1(Carbamoyl-phosphate synthetase I):カルバモイルリン酸シンテターゼ1
CYP(Cytochrome P450):シトクロムP450
DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium):ダルベッコ改変イーグル培地
DMEM/F12(DMEM Ham’s F-12):ダルベッコ改変イーグル培地/栄養混合物F-12ハム
Dnmt3L(DNA Methyltransferase 3 Like):DNAメチルトランスフェラーゼ3様
EGF(Epidermal Growth Factor):上皮成長因子
ERas(ES cell expressed Ras):ES細胞で発現するRas
ESG(Embryonal stem cell-specific gene):胚性幹細胞特異的遺伝子
Fbx15(F-Box Protein 15):Fボックス タンパク質15
bFGF(basic Fibroblast growth factor):塩基性線維芽細胞増殖因子
Fthl17(Ferritin heavy polypeptide-like 17):フェリチン重鎖ポリペプチド様17
Gdf3(Growth differentiation factor-3):増殖分化因子3
GSTA1(Glutathione S-transferase A1):グルタチオンS-トランスフェラーゼA1
Grb2(Growth factor receptor-bound protein 2):増殖因子受容体結合タンパク質2
HGF(Hepatocyte growth factor):肝細胞増殖因子
Klf(Kruppel-like factor):クルッペル様因子
HNF4a(Hepatocyte nuclear factor 4 alpha):肝細胞核ファクター4α
Nr5a2(nuclear receptor subfamily 5,group A,member 2):核内受容体サブファミリー5、グループA、メンバー2
Oct(octamer-binding transcription factor):オクタマー結合性転写因子
PCR(polymerase chain reaction):ポリメラーゼ連鎖反応
TDO(tryptophan 2,3-dioxygenase):トリプトファン2,3-ジオキシゲナーゼ
UGT1A1(Uridine diphosphate glucuronosyltransferase1A1):UDPグルクロン酸転移酵素1A1
Prdm14(PR/SET domain family 14):PR/SETドメインファミリー14
Rex1(Reduced-expression 1):低発現タンパク質-1
ROCK(Rho-associated coiled-coil forming kinase):Rho結合コイルドコイル形成キナーゼ
Sall4(Sal-like protein 4):Sal様タンパク質4
Stat3(Signal Transducer and Activator of Transcription 3):シグナル伝達兼転写活性化因子3
Tcl1(T-cell leukemia/lymphoma 1A):T細胞白血病/リンパ腫1A
Tert(Telomerase Reverse Transcriptase):テロメラーゼ逆転写酵素
TGF-α(transforming growth factor-α):トランスフォーミング増殖因子α
UTF1(Undifferentiated Embryonic Cell Transcription Factor 1)未分化胚性幹細胞転写因子1
本発明の培地は、肝細胞を培養するための培地であって、
(1)ROCK阻害剤、nicotinamideおよびその類縁体のうちの一種以上を含み、
(2)血清成分の含有量が5容量%未満であり、
(3)EGFレセプター活性化因子の含有量が1ng/mL未満であり、
(4)ALK阻害剤の含有量が、0.1μmol/L未満である、
培地である。
(+)-(R)-トランス-4-(1-アミノエチル)-N-(4-ピリジル)シクロヘキサンカルボキサミド二塩酸塩(Y-27632)、
1-(5-イソキノリンスルホニル)ピペラジン塩酸塩(HA100) 、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジン二塩酸塩(Fasudil/HA-1077)、
(S)-(+)-2-メチル-4-グリシル-1-(4-メチルイソキノリニル-5-スルホニル)ホモピペリジン二塩酸塩(H-1152)、
1-(5-イソキノリンスルホニル)-2-メチルピペラジン(H-7) 、1-(5-イソキノリンスルホニル)-3-メチルピペラジン(イソH-7)、
N-2-(メチルアミノ)エチル-5-イソキノリンスルホンアミド二塩酸塩(H-8)、
N-(2-アミノエチル)-5-イソキノリンスルホンアミド二塩酸塩(H-9) 、
N-[2-(p-ブロモシンナミルアミノ)エチル]-5-イソキノリンスルホンアミド二塩酸塩(H-89) 、
N-(2-グアニジノエチル)-5-イソキノリンスルホンアミド塩酸塩(HA-1004) 、
N-[(LS)-2-ヒドロキシ-l-フェニルエチル]-N-[4-(4-ピリジニル)フェニル]-ウレア(AS1892802) 、
N-[3-[[ 2 -(4 - アミノ-1 ,2 ,5-オキサジアゾール-3-イル)-1-エチル-1H-イミダゾ[4 ,5-c]ピリジン-6-イル]オキシ]フェニル]-4-[2-(4-モルホリニル)エトキシ]ベンズアミド(GSK269962) 、
N-(6-フルオロ-1H-インダゾール-5-イル)-2-メチル-6-オキソ-4-(4-(トリフルオロメチル)フェニル)-1,4,5,6-テトラヒドロピリジン-3 -カルボキサミド(GSK429286) 、
ヒドロキシファスジル(HA1100)、
2-フルオロ-N-[[4-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-4-イル)フェニル]メチル]ベンゼンメタンアミン(OXA06)、
N-[(3-ヒドロキシフェニル)メチル]-N’-[4-(4-ピリジニル)-2-チアゾリル]ウレア(RKI1447)、
4-(7-{[(3S)-3-アミノ-1-ピロリジニル]カルボニル}-1-エチル-1Hイミダゾール[4,5-c]ピリジン-2-イル)-1,2,5-オキサジアゾール-3-アミン(SB772077B)、
N-[2-[2-(ジメチルアミノ)エトキシ]-4-(1H-ピラゾール-4-イル)フェニル-2,3-ジヒドロ-1,4-ベンゾジオキシン-2-カルボキシアミドジヒドロクロライド(SR3677)、
6-クロロ-N4-[3,5-ジフルオロ-4-[(3-メチル-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-4-イル)オキシ]フェニル]-2,4-ピリミジンジアミン(TC-S7001)。
最も好ましくは、ROCK阻害剤は、Y-27632である。
本発明によれば、肝細胞を、上記した本発明の培地において培養することを含む、肝細胞の製造方法が提供される。さらに、本発明によれば、上記した方法により得られる肝細胞が提供される。
さらに、本発明による肝細胞は、各種肝疾患の治療に適用可能である。特に、障害された(機能不全を含む)肝臓組織の再生・再建用の材料としての利用が想定され、再生医療への貢献が期待できる。
[ヒトiPS細胞由来肝細胞の培養]
細胞培養液として、DMEM/F12基礎培地とRPMI1640基礎培地を等量混合した培地に対して、各成分を以下の終濃度となるように添加した。
1xB-27supplement(Thermo Fisher Scientific社);
1xN-2 supplement(Thermo Fisher Scientific社);
1xMEM non-essential amino acids solution(Thermo Fisher Scientific社);
1.2mmol/L L-glutamine (Thermo Fisher Scientific社);
0.5mmol/L L-Ascorbic Acid(SIGMA-ALDRICH社);
1xpenicillin-streptomycin-glutamine(Thermo Fisher Scientific社);
12.5μg/mL gentamicin(Thermo Fisher Scientific社)、
1xiCell hepatocytes2.0 medium supplement(FUJIFILM Wako社);
1xinsulin,transferrin,selenium,ethanolamine solution(Thermo Fisher Scientific社);
90μmol/L N-acetyl-cystein(SIGMA-ALDRICH社);
10ng/mL recombinant human HGF(PeproTech社);
10-7mol/L dexamethasone(FUJIFILM Wako社);
10ng/mL recombinant human oncostatin M(R&D Systems社)
nicotinamide(NAMとも表記する)(FUJIFILM Wako社)(10mmol/L、5mmol/L、0mmol/L);
Y-27632 (FUJIFILM Wako社)(5μmol/L、2.5μmol/L、0μmol/L);
ウシ胎児血清 (FBS)(Thermo Fisher Scientific社)(5%、0%);
Recombinant Human EGF(PeproTech社)(5ng/mL、0ng/mL);
A83-01(Tocris Bioscience社)(2.5μmol/L、0μmol/L);
を組み合わせて添加し、各種肝細胞用培養培地を調製した。
図1の(a)、(b)は、5mmol/L nicotinamideおよび2.5μmol/L Y-27632含有培地におけるFBS、EGF、A83-01による影響を示す。図1の(c)は、FBS、EGF、およびA83-01不含培地におけるnicotinamide、Y-27632による影響を示す。図1における表記は以下の通りである。
+:5%
-:0%
EGF
+: 5ng/mL
-: 0ng/mL
A83-01
+: 2.5μmol/L
-: 0 μmol/L
Nicotinamide
++: 10mmol/L
+: 5mmol/L
-: 0mmol/L
Y-27632
++: 5μmol/L
+: 2.5μmol/L
-: 0μmol/L
[ヒト初代肝細胞の培養]
ヒト初代肝細胞(Thermo Fisher Scientific社、Cat#: HMCPP5)を、コラーゲンコートした96wellプレート上に1wellあたり1x105cells播種し、5mmol/L nicotinamide及び5μmol/L Y-27632を含有し、ウシ胎児血清 (FBS)、recombinant human EGF及びA83-01不含である本発明の培地(培地#1)100μL中で、37℃、5%炭酸ガス培養装置内で培養し、24時間後に培地交換を行った。比較として、5mmol/L nicotinamide、5μmol/L Y-27632、5%ウシ胎児血清 (FBS)、5ng/mL recombinant human EGF、及び2.5μmol/L A83-01を含有した培地(培地#2)においても、培地組成以外は上記培養条件と同様に培養し、培養48時間後における細胞内に発現する各種mRNA遺伝子量(CYP3A4、CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、Albumin)をTaqMan(登録商標)probe (Thermo Fisher Scientific社)を用いた定量PCRにより、実施例1の場合と同様に測定した。培地#2中での培養48時間後の遺伝子発現量を1とした相対的遺伝子発現量を図4に示す。
Claims (7)
- 肝細胞を培養するための培地であって、
ROCK阻害剤と、nicotinamide、ニコチン酸、ピコリンアミドまたは5-メチルニコチンアミドとを含み、
血清成分の含有量が5容量%未満であり、
EGFレセプター活性化因子の含有量が1ng/mL未満であり、
ALK阻害剤の含有量が、0.1μmol/L未満である、
前記の培地。 - 血清成分を含有せず、EGFレセプター活性化因子を含有せず、ALK阻害剤を含有しない、請求項1に記載の培地。
- ROCK阻害剤が、Y-27632である、請求項1又は2に記載の培地。
- 肝細胞が、組織由来の肝細胞または多能性幹細胞由来の肝細胞である、請求項1から3の何れか一項に記載の培地。
- 肝細胞の代謝機能もしくは維持期間を改善するための培地である、請求項1から4の何れか一項に記載の培地。
- 肝細胞を、請求項1から5の何れか一項に記載の培地中で維持培養する方法。
- 肝細胞を、請求項1から5の何れか一項に記載の培地において培養することを含む、肝細胞の製造方法。
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---|---|---|---|---|
JP2000245448A (ja) | 1999-03-03 | 2000-09-12 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 肝細胞培養方法 |
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---|---|---|---|---|
JPH01157377A (ja) * | 1987-09-09 | 1989-06-20 | Green Cross Corp:The | 無血清培地 |
AU2011263652B2 (en) * | 2010-06-11 | 2014-11-20 | Takara Bio Europe Ab | 3-dimensional scaffolds for improved differentiation of pluripotent stem cells to hepatocytes |
WO2013183571A1 (ja) * | 2012-06-08 | 2013-12-12 | 公立大学法人名古屋市立大学 | 人工多能性幹細胞を肝細胞へ分化誘導する方法 |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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CN108823168A (zh) | 2018-07-20 | 2018-11-16 | 王星 | 培养基及其用于建立hbv感染的人源原代肝癌细胞系的方法 |
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