JP7304565B2 - 細菌メタゲノム解析を通した脳腫瘍診断方法 - Google Patents
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Description
(a)正常ヒトおよび被検者サンプルから分離した細胞外小胞からDNAを抽出する段階;
(b)前記抽出したDNAに対して配列番号1および配列番号2のプライマーペアを用いてPCR(polymerase chain reaction)を行う段階;および
(c)前記PCR産物の配列分析を通して正常ヒト由来サンプルと細菌由来細胞外小胞の含有量の増減を比較する段階。
(a)正常ヒトおよび被検者サンプルから分離した細胞外小胞からDNAを抽出する段階;
(b)前記抽出したDNAに対して配列番号1および配列番号2のプライマーペアを用いてPCRを行う段階;および
(c)前記PCR産物の配列分析を通して正常ヒト由来サンプルと細菌由来細胞外小胞の含有量の増減を比較する段階。
(a)正常ヒトおよび被検者サンプルから分離した細胞外小胞からDNAを抽出する段階;
(b)前記抽出したDNAに対して配列番号1および配列番号2のプライマーペアを用いてPCRを行う段階;および
(c)前記PCR産物の配列分析を通して正常ヒト由来サンプルと細菌由来細胞外小胞の含有量の増減を比較する段階。
(a)正常ヒトおよび被検者サンプルから分離した細胞外小胞からDNAを抽出する段階;
(b)前記抽出したDNAに対して配列番号1および配列番号2のプライマーペアを用いてPCR(polymerase chain reaction)を行う段階;および
(c)前記PCR産物の配列分析を通して正常ヒト由来サンプルと細菌由来細胞外小胞の含有量の増減を比較する段階。
クロストリジウム綱(Clostridia)、バシラス綱(Bacilli)、エリュシペロトリクス綱(Erysipelotrichia)、ガンマプロテオバクテリア綱(Gammaproteobacteria)、アルファプロテオバクテリア綱(Alphaproteobacteria)、ネガティウィクテス綱(Negativicutes)、サッカリバクテリア綱(Saccharibacteria(p))、クロロプラスト綱(Chloroplast)、放線菌綱(Actinobacteria)およびモリクテス綱(Mollicutes)からなる群から選ばれる1種以上の綱(class)細菌由来細胞外小胞、
クロストリジウム目(Clostridiales)、ビフィドバクテリウム目(Bifidobacteriales)、エリュシペロトリクス目(Erysipelotrichales)、ラクトバシラス目(Lactobacillales)、ミクロコッカス目(Micrococcales)、スフィンゴモナス目(Sphingomonadales)、セレノモナス目(Selenomonadales)、クロロプラスト目(Chloroplast(c))、サッカリバクテリア目(Saccharibacteria(p))、ツリシバクテラレス目(Turicibacterales)およびキサントモナス目(Xanthomonadales)からなる群から選ばれる1種以上の目(order)細菌由来細胞外小胞、
ルミノコッカス科(Ruminococcaceae)、ペプトストレプトコッカス科(Peptostreptococcaceae)、エリュシペロトリクス科(Erysipelotrichaceae)、ラクノスピラ科(Lachnospiraceae)、レンサ球菌科(Streptococcaceae)、ビフィドバクテリウム科(Bifidobacteriaceae)、スフィンゴモナス科(Sphingomonadaceae)、ポルフィロモナス科(Porphyromonadaceae)、バクテロイデス科(Bacteroidaceae)、バクテロイダレスS24-7(Bacteroidales S24-7)、クロロプラスト科(Chloroplast(c))、プレボテラ科(Prevotellaceae)、サッカリバクテリア科(Saccharibacteria(p))、イントラスポランギウム科(Intrasporangiaceae)、ラクトバシラス科(Lactobacillaceae)、モギバクテリア科(Mogibacteriaceae)、ツリシバクター科(Turicibacteraceae)、ノカルディア科(Nocardiaceae)、キサントモナス科(Xanthomonadaceae)、ウィクセラセエ(Weeksellaceae)、およびベイヨネラ科(Veillonellaceae)からなる群から選ばれる1種以上の科(family)細菌由来細胞外小胞、または、
ルミノコッカス科(Ruminococcaceae)UCG-014、ラクノスピラ科(Lachnospiraceae)NK4A136、ルミノコッカス科(Ruminococcaceae)UCG-013、ルミニクロストリジウム(Ruminiclostridium)6、ペプトクロストリジウム(Peptoclostridium)、ユウバクテリウム・コプロスタノリゲネス([Eubacterium] coprostanoligenes)、大腸菌-赤痢菌属(Escherichia-Shigella)、ブラウティア(Blautia)、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)、ストレプトコッカス(Streptococcus)、バクテロイデス(Bacteroides)、エリシペラトクロストリジウム(Erysipelatoclostridium)、バクテロイダレス(Bacteroidales)S24-7、クロロプラスト属(Chloroplast(c))、プレボテラ(Prevotella)9、カンジタダスサカリモナス(Candidatus Saccharimonas)、ステノトロホモナス(Stenotrophomonas)、ラクトバシラス(Lactobacillus)、ツリシバクター(Turicibacter)、テピディモナス(Tepidimonas)、スフィンゴモナス(Sphingomonas)、ロドコッカス(Rhodococcus)、およびクロアシバクテリウム(Cloacibacterium)からなる群から選ばれる1種以上の属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量の増減を比較できる。
テネリクテス門(Tenericutes)の門(phylum)細菌由来細胞外小胞、
モリクテス綱(Mollicutes)の綱(class)細菌由来細胞外小胞、
ツリシバクテラレス目(Turicibacterales)の目(order)細菌由来細胞外小胞、
ラクトバシラス科(Lactobacillaceae)、モギバクテリア科(Mogibacteriaceae)、ツリシバクター科(Turicibacteraceae)、ノカルディア科(Nocardiaceae)、およびウィクセラセエ(Weeksellaceae)からなる群から選ばれる1種以上の科(family)細菌由来細胞外小胞、または、
ラクトバシラス(Lactobacillus)、ツリシバクター(Turicibacter)、テピディモナス(Tepidimonas)、ロドコッカス(Rhodococcus)、およびクロアシバクテリウム(Cloacibacterium)からなる群から選ばれる1種以上の属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量が増加している場合、脳腫瘍と診断できる。
放線菌門(Actinobacteria)の門(phylum)細菌由来細胞外小胞、
放線菌綱(Actinobacteria)の綱(class)細菌由来細胞外小胞、
キサントモナス目(Xanthomonadales)の目(order)細菌由来細胞外小胞、
イントラスポランギウム科(Intrasporangiaceae)、キサントモナス科(Xanthomonadaceae)、およびベイヨネラ科(Veillonellaceae)からなる群から選ばれる1種以上の科(family)細菌由来細胞外小胞、または、
ステノトロホモナス(Stenotrophomonas)およびスフィンゴモナス(Sphingomonas)からなる群から選ばれる1種以上の属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量が減少している場合、脳腫瘍と診断できる。
フィルミクテス門(Firmicutes)由来細胞外小胞、
クロストリジウム綱(Clostridia)、バシラス綱(Bacilli)、およびエリュシペロトリクス綱(Erysipelotrichia)からなる群から選ばれる1種以上の綱(class)細菌由来細胞外小胞、
クロストリジウム目(Clostridiales)、ビフィドバクテリウム目(Bifidobacteriales)、およびエリュシペロトリクス目(Erysipelotrichales)からなる群から選ばれる1種以上の目(order)細菌由来細胞外小胞、
ルミノコッカス科(Ruminococcaceae)、ラクトバシラス科(Lactobacillaceae)、ペプトストレプトコッカス科(Peptostreptococcaceae)、およびエリュシペロトリクス科(Erysipelotrichaceae)からなる群から選ばれる1種以上の科(family)細菌由来細胞外小胞、または、
ルミノコッカス科(Ruminococcaceae)UCG-014、ラクノスピラ科(Lachnospiraceae)NK4A136、ルミノコッカス科(Ruminococcaceae)UCG-013、ラクトバシラス(Lactobacillus)、ルミニクロストリジウム(Ruminiclostridium)6、ペプトクロストリジウム(Peptoclostridium)からなる群から選ばれる1種以上の属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量が増加している場合、脳腫瘍と診断できる。
放線菌門(Actinobacteria)およびプロテオバクテリア門(Proteobacteria)からなる群から選ばれる1種以上の門(phylum)細菌由来細胞外小胞、
ガンマプロテオバクテリア綱(Gammaproteobacteria)、放線菌綱(Actinobacteria)、アルファプロテオバクテリア綱(Alphaproteobacteria)、およびネガティウィクテス綱(Negativicutes)からなる群から選ばれる1種以上の綱(class)細菌由来細胞外小胞、
ラクトバシラス目(Lactobacillales)、ミクロコッカス目(Micrococcales)、スフィンゴモナス目(Sphingomonadales)、およびセレノモナス目(Selenomonadales)からなる群から選ばれる1種以上の目(order)細菌由来細胞外小胞、
ラクノスピラ科(Lachnospiraceae)、レンサ球菌科(Streptococcaceae)、ビフィドバクテリウム科(Bifidobacteriaceae)、スフィンゴモナス科(Sphingomonadaceae)、およびポルフィロモナス科(Porphyromonadaceae)からなる群から選ばれる1種以上の科(family)細菌由来細胞外小胞、または、
ユウバクテリウム・コプロスタノリゲネス([Eubacterium] coprostanoligenes)、大腸菌-赤痢菌属(Escherichia-Shigella)、ブラウティア(Blautia)、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)、ストレプトコッカス(Streptococcus)、およびスフィンゴモナス(Sphingomonas)からなる群から選ばれる1種以上の属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量が減少している場合、脳腫瘍と診断できる。
放線菌門(Actinobacteria)、プロテオバクテリア門(Proteobacteria)、フィルミクテス門(Firmicutes)、およびバクテロイデス門(Bacteroidetes)からなる群から選ばれる1種以上の門(phylum)細菌由来細胞外小胞、
エリュシペロトリクス綱(Erysipelotrichia)細菌由来細胞外小胞、
エリュシペロトリクス目(Erysipelotrichales)細菌由来細胞外小胞、
エリュシペロトリクス科(Erysipelotrichaceae)およびバクテロイデス科(Bacteroidaceae)からなる群から選ばれる1種以上の科(family)細菌由来細胞外小胞、または、
バクテロイデス(Bacteroides)およびエリシペラトクロストリジウム(Erysipelatoclostridium)からなる群から選ばれる1種以上の属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量が増加している場合、脳腫瘍と診断できる。
藍色細菌門(Cyanobacteria)およびサッカリバクテリア(Saccharibacteria)からなる群から選ばれる1種以上の門(phylum)細菌由来細胞外小胞、
クロストリジウム綱(Clostridia)、サッカリバクテリア綱(Saccharibacteria(p))、およびクロロプラスト綱(Chloroplast)からなる群から選ばれる1種以上の綱(class)細菌由来細胞外小胞、
クロストリジウム目(Clostridiales)、クロロプラスト目(Chloroplast(c))、およびサッカリバクテリア目(Saccharibacteria(p))からなる群から選ばれる1種以上の目(order)細菌由来細胞外小胞、
ルミノコッカス科(Ruminococcaceae)、バクテロイダレスS24-7(Bacteroidales S24-7)、クロロプラスト科(Chloroplast(c))、プレボテラ科(Prevotellaceae)、およびサッカリバクテリア科(Saccharibacteria(p))からなる群から選ばれる1種以上の科(family)細菌由来細胞外小胞、または、
バクテロイダレス(Bacteroidales)S24-7、クロロプラスト属(Chloroplast(c))、ラクノスピラ科(Lachnospiraceae)NK4A136、プレボテラ(Prevotella)9、およびカンジタダスサカリモナス(Candidatus Saccharimonas)からなる群から選ばれる1種以上の属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量が減少している場合、脳腫瘍と診断できる。
本発明は、細菌メタゲノム解析を通して脳腫瘍を診断する方法に関し、本発明者らは、正常ヒトおよび被検者由来サンプルを用いて細菌由来細胞外小胞から遺伝子を抽出し、これに対してメタゲノム解析を行い、脳腫瘍の原因因子として作用できる細菌由来細胞外小胞を同定した。
(b)前記抽出したDNAに対して配列番号1および配列番号2のプライマーペアを用いてPCRを行う段階;および
(c)前記PCR産物の配列分析を通して正常ヒト由来サンプルと細菌由来細胞外小胞の含有量の増減を比較する段階を含む脳腫瘍を診断するための情報提供方法を提供する。
門(phylum)レベルで、Firmicutes、Actinobacteria、Proteobacteria、
綱(class)レベルで、Clostridia、Bacilli、Erysipelotrichia、Gammaproteobacteria、Actinobacteria、Alphaproteobacteria、Negativicutes、
目(order)レベルで、Clostridiales、Bifidobacteriales、Erysipelotrichales、Lactobacillales、Micrococcales、Sphingomonadales、Selenomonadales、
科(family)レベルで、Ruminococcaceae、Lactobacillaceae、Peptostreptococcaceae、Erysipelotrichaceae、Lachnospiraceae、Streptococcaceae、Bifidobacteriaceae、Sphingomonadaceae、Porphyromonadaceae、
属(genus)レベルで、Ruminococcaceae UCG-014、Lachnospiraceae NK4A136、Ruminococcaceae UCG-013、Lactobacillus、Ruminiclostridium 6、Peptoclostridium、[Eubacterium] coprostanoligenes、Escherichia-Shigella、Blautia、Bifidobacterium、Streptococcus、Sphingomonas
の細菌由来細胞外小胞の含有量が脳腫瘍患者と正常ヒトとの間に有意差があった(実施例3参照)。
門(phylum)レベルで、Firmicutes、Bacteroidetes、Actinobacteria、Proteobacteria、Cyanobacteria、Saccharibacteria、
綱(class)レベルで、Erysipelotrichia、Clostridia、Saccharibacteria(p)、Chloroplast、
目(order)レベルで、Erysipelotrichales、Clostridiales、Chloroplast(c)、Saccharibacteria(p)、
科(family)レベルで、Bacteroidaceae、Erysipelotrichaceae、Ruminococcaceae、Bacteroidales S24-7群、Chloroplast(c)、Prevotellaceae、Saccharibacteria(p)、
属(genus)レベルで、Bacteroides、Erysipelatoclostridium、Bacteroidales S24-7群、Chloroplast(c)、Lachnospiraceae NK4A136群、Prevotella 9、Candidatus Saccharimonas
の細菌由来細胞外小胞の含有量が脳腫瘍患者と正常ヒトとの間に有意差があった(実施例5参照)。
以下、本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。しかしながら、下記の実施例は、本発明をより容易に理解するために提供されるものに過ぎず、下記実施例によって本発明の内容が限定されるものではない。
ソウル大学校病院と仁済大学校海雲台白病院から合計182人の脳腫瘍(BT,Brain Tumor)患者と125人の健康な対照群(HC,Healthy control)被験者の血清サンプルをそれぞれ収集した。また、ソウル大学校病院から収集した5人のBT患者と5人のHC被験者から組織サンプルを評価した。各BT臨床対象は、治療のために病院を訪問するようにする症状を示した。健康管理対象は、一般的な健康診断を通じて選別された。本発明の実験例は、ソウル大学校病院の臨床試験審査委員会(IRB番号H-1009-025-331)と仁済大学校海雲台白病院(IRB番号1297992-2015-064)により承認された。本発明のすべての方法は、承認された指針に従い行われ、すべての臨床対象から事前同意を得た。
使用されたすべてのマウスは、6週齢の雌C57BL/6マウスであった(Orient Bio Inc、城南、韓国)。マウスは、in vivo研究過程の全般にわたって12時間の昼夜周期で22±2℃および50±5%湿度の標準実験室の条件で収容し、維持した。
血清および組織サンプルからEVを抽出するために、10mlチューブに血液を入れ、遠心分離(3,500xg、10min、4℃)を実施して浮遊物を沈めて上澄み液のみを回収した後、新しい10mlチューブに移した。0.22μmフィルターを使って前記回収した上澄み液から細菌および異物を除去した後、セントリプレップチューブ(centrifugal filters 50kD)に移し、1500xg、4℃で15分間遠心分離して、50kDより小さい物質は捨て、10mlまで濃縮させた。再び0.22μmフィルターを使ってバクテリアおよび異物を除去した後、Type 90tiローターで150,000xg、4℃で3時間超高速遠心分離方法を使って上澄み液を捨て、固まったペレット(pellet)を生理食塩水(PBS)で溶かして小胞を得た。
前記実験例3の方法で遺伝子を抽出した後、前記表1に示した16S rDNAプライマーを使ってPCRを実施して遺伝子を増幅させ、シーケンシング(Illumina MiSeq sequencer)を行った。分類(Taxonomic assignment)は、プロファイリングプログラムMDx-Pro ver.2(MD Healthcare,Korea)で行った。paired-endリードをバーコードによってフィルタリングし、プライマー配列をCutadapt(バージョン1.1.6)を使ってトリミングした後、CASPERと併合した。高品質シーケンシングリードを収得するために、350bp未満または550bp超過のリード、および20未満のPhred品質スコアを有する配列を除外した。VSEARCH de novoクラスタリング方法を使って97%類似度臨界値を基準として、OTU(Operational Taxonomic Unit)を属レベルに分類した。一つのサンプルにのみ1個の配列を含むOTUは、追加分析から除外された。引き続いて、基本パラメーターの下でSilva 132 databaseに対してUCLUSTおよびQIIME 1.9.1を使って分類レベル指定を種レベルで行った。データベースの分類学的情報が十分でないため、属レベルで群集を割り当てることができない場合、分類群が次に高いレベルに指定した。分類名の周囲の括弧は、主にゲノムデータベース内の全体ゲノム系統の発生に基づいて確認されなかった、提案された分類(taxonomic assignment)を示す。
脳腫瘍(BT,Brain Tumor)予測診断モデルの開発のために、属レベルでOTUの相対存在量をモデル変数と見なした。
BTと対照群間の有意な年齢の差異は、それぞれ、スチューデントt-検定およびWilcoxonの順位和検定を通じて決定された。コホートの性別に基づくグループ間の統計的差異を決定するために、カイ二乗検定(Chi-square test)を行った。主座標分析(Principal Coordinate Analysis;PCoA)は、Bray-Curtisの非類似度距離によるグループの個別分類レベル群集を決定するために行われた。HCグループとBTグループ間のマイクロバイオーム組成の差異を分析するために、スチューデントt-検定を行った。LEfSeは、統計的および生物学的重要性を有するバイオマーカーの選択のために、臨床グループの間に有意であり、かつ差別化された豊富な属を決定するのに使用された。LEfSeアルゴリズムは、Wilcoxonの順位和検定およびLDA(Linear Discriminate Analysis)を使ってカットオフLDAスコア(log10)を2に設定した。p値が0.05未満(p<0.05)であるとき、有意なものと見なし、すべての分析は、Rバージョン3.6.1を使って行った。
HC(Healthy control)およびBT(Brain tumor)対象体グループの臨床的特性の評価によって、2つのグループ間に有意差があるものと決定された(p<0.001)。HC被験者は、40歳から78歳の間であり、平均年齢は、59.7(SD 10.5)であり、BT被験者は、16歳から81歳の間であり、平均年齢が51.5(SD 14.2)であった(表2)。
BT群では、種の豊富度のChao1指数と細菌群集多様性のシャノン指数が有意に高かったが、BT群と対照群間のシンプソン指数の差異は有意でなかった(図1a)。
門(phylum)レベルでFirmicutes豊富度は、患者群より対照群において顕著に低かった反面、ActinobacteriaとProteobacteriaはさらに高かった(図2aおよび図2c)。門レベルのバイオマーカーのLEfSe解析は、Actinobacteria、ProteobacteriaおよびFirmicutesをlog(LDA score)値が4より大きい唯一の門として導き出した(図3a)。
対照群およびBTグループの血清微生物EVメタゲノムプロファイルを使って、健康な対象体において脳腫瘍の危険を決定するための診断モデルを開発した。
門レベルでFirmicutes、Bacteroidetes、ActinobacteriaおよびProteobacteriaは、すべてのグループにおいて最も豊富な門であり、患者および対照群において組織EV分類群の80%以上を占めた。CyanobacteriaおよびSaccharibacteriaは、対照群が患者群より有意に高かった(図6a、図6c)。
(実施例6-1.血液から抽出したDNAのメタゲノム解析)
血液に存在する小胞を分離し、DNAを抽出するために、まず、10mlチューブに血液を入れ、遠心分離(3,500xg、10min、4℃)を実施して、浮遊物を沈めて上澄み液のみを回収した後、新しい10mlチューブに移した。0.22μmフィルターを使って前記回収した上澄み液から細菌および異物を除去した後、セントリプレップチューブ(centrifugal filters 50kD)に移し、1500xg、4℃で15分間遠心分離して、50kDより小さい物質は捨て、10mlまで濃縮させた。再び0.22μmフィルターを使ってバクテリアおよび異物を除去した後、Type 90tiローターで150,000xg、4℃で3時間超高速遠心分離方法を使って上澄み液を捨て、固まったペレット(pellet)を生理食塩水(PBS)で溶かして小胞を収得した。
前記実施例6-1の方法で、脳腫瘍患者170人と年齢と性別をマッチングした正常ヒト200人の血液から小胞を分離した後、メタゲノムシーケンシングを行った。診断モデルの開発は、まず、t検定で2つの群間のp値が0.05以下であり、グループ平均が0.1%以上である菌株を選定した後、ロジスティック回帰分析(logistic regression analysis)方法で診断的性能指標であるAUC(area under curve)、感度、および特異度を算出した。
Claims (5)
- (a)正常ヒトサンプルから分離した細胞外小胞からDNAを抽出し、被検者サンプルから分離した細胞外小胞からDNAを抽出する、段階;
(b)前記抽出した正常ヒトサンプル由来DNAおよび被検者サンプル由来DNAそれぞれに対して配列番号1および配列番号2のプライマーペアを用いてPCR(polymerase chain reaction)を行う段階;および
(c)前記PCR産物の配列分析を通して正常ヒト由来サンプルの細菌由来細胞外小胞の含有量と、被検者由来サンプルの細菌由来細胞外小胞の含有量を比較する段階
を含み、
前記正常ヒトサンプル及び前記被検者サンプルは、血液または血清であり、
前記正常ヒトサンプル及び前記被検者サンプルが血液である場合、前記段階(c)において、正常ヒト由来サンプルと被検者由来サンプルのラクトバシラス(Lactobacillus)、ロドコッカス(Rhodococcus)、スフィンゴモナス(Sphingomonas)、およびステノトロホモナス(Stenotrophomonas)属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量をそれぞれ比較する段階を含む;または
前記正常ヒトおよび被検者サンプルが血清である場合、前記段階(c)において、正常ヒト由来サンプルと被検者由来サンプルのノエリア(Knoellia)、ステノトロホモナス(Stenotrophomonas)、ラクトコッカス(Lactococcus)、およびツリシバクター(Turicibacter)属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量をそれぞれ比較する段階を含むことを特徴とする、脳腫瘍診断のための情報提供方法。 - 前記正常ヒトサンプルおよび前記被検者サンプルが血液である場合、
前記段階(c)で、正常ヒト由来サンプルと被検者由来サンプルのラクトバシラス(Lactobacillus)、ロドコッカス(Rhodococcus)、スフィンゴモナス(Sphingomonas)、およびステノトロホモナス(Stenotrophomonas)属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量をそれぞれ比較し;
正常ヒト由来サンプルと被検者由来サンプルの
放線菌門(Actinobacteria)およびテネリクテス門(Tenericutes)からなる群から選ばれる1種以上の門(phylum)細菌由来細胞外小胞、
放線菌綱(Actinobacteria)およびモリクテス綱(Mollicutes)からなる群から選ばれる1種以上の綱(class)細菌由来細胞外小胞、
ツリシバクテラレス目(Turicibacterales)およびキサントモナス目(Xanthomonadales)からなる群から選ばれる1種以上の目(order)細菌由来細胞外小胞、
イントラスポランギウム科(Intrasporangiaceae)、ラクトバシラス科(Lactobacillaceae)、モギバクテリア科(Mogibacteriaceae)、ツリシバクター科(Turicibacteraceae)、ノカルディア科(Nocardiaceae)、キサントモナス科(Xanthomonadaceae)、ウィクセラセエ(Weeksellaceae)、およびベイヨネラ科(Veillonellaceae)からなる群から選ばれる1種以上の科(family)細菌由来細胞外小胞、または、
ツリシバクター(Turicibacter)、テピディモナス(Tepidimonas)、およびクロアシバクテリウム(Cloacibacterium)からなる群から選ばれる1種以上の属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量をそれぞれ比較して、脳腫瘍を判定することを特徴とする、請求項1に記載の脳腫瘍診断のための情報提供方法。 - 前記正常ヒトおよび被検者サンプルが血清である場合、
前記段階(c)で、正常ヒト由来サンプルと被検者由来サンプルのノエリア(Knoellia)、ステノトロホモナス(Stenotrophomonas)、ラクトコッカス(Lactococcus)、およびツリシバクター(Turicibacter)属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量をそれぞれ比較し;
正常ヒト由来サンプルと被検者由来サンプルの
フィルミクテス門(Firmicutes)、放線菌門(Actinobacteria)、およびプロテオバクテリア門(Proteobacteria)からなる群から選ばれる1種以上の門(phylum)細菌由来細胞外小胞、
クロストリジウム綱(Clostridia)、バシラス綱(Bacill)、エリュシペロトリクス綱(Erysipelotrichia)、ガンマプロテオバクテリア綱(Gammaproteobacteria)、放線菌綱(Actinobacteria)、アルファプロテオバクテリア綱(Alphaproteobacteria)、およびネガティウィクテス綱(Negativicutes)からなる群から選ばれる1種以上の綱(class)細菌由来細胞外小胞、
クロストリジウム目(Clostridiales)、ビフィドバクテリウム目(Bifidobacteriales)、エリュシペロトリクス目(Erysipelotrichales)、ラクトバシラス目(Lactobacillales)、ミクロコッカス目(Micrococcales)、スフィンゴモナス目(Sphingomonadales)、およびセレノモナス目(Selenomonadales)からなる群から選ばれる1種以上の目(order)細菌由来細胞外小胞、
ルミノコッカス科(Ruminococcaceae)、ラクトバシラス科(Lactobacillaceae)、ペプトストレプトコッカス科(Peptostreptococcaceae)、エリュシペロトリクス科(Erysipelotrichaceae)、ラクノスピラ科(Lachnospiraceae)、レンサ球菌科(Streptococcaceae)、スフィンゴモナス科(Sphingomonadaceae)、およびポルフィロモナス科(Porphyromonadaceae)からなる群から選ばれる1種以上の科(family)細菌由来細胞外小胞、または
ルミノコッカス科(Ruminococcaceae)UCG-014、ラクノスピラ科(Lachnospiraceae)NK4A136、ルミノコッカス科(Ruminococcaceae)UCG-013、ラクトバシラス(Lactobacillus)、ルミニクロストリジウム(Ruminiclostridium)6、ペプトクロストリジウム(Peptoclostridium)、ユウバクテリウム・コプロスタノリゲネス([Eubacterium] coprostanoligenes)、大腸菌-赤痢菌属(Escherichia-Shigella)、ブラウティア(Blautia)、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)、ストレプトコッカス(Streptococcus)、スフィンゴモナス(Sphingomonas)、ソラナム・メロンゲーナ(Solanum melongena)、パラバクテロイデス(Parabacteroides)、アクチノマイセス(Actinomyces)、ルミニクロストリジウム(Ruminiclostridium)、フィーカリバクテリウム(Faecalibacterium)、ラクノスピラセエ(Lachnospiraceae)(f)、アシネトバクター(Acinetobacter)、スタフィロコッカス(Staphylococcus)、シュードモナス(Pseudomonas)、クレブシエラ(Klebsiella)、ルミノコッカス(Ruminococcus)1、サルモネラ(Salmonella)、クロストリジアレスバディンBB60(Clostridiales vadinBB60)(f)、ルミノコッカセエ(Ruminococcaceae)(f)、ルミノコッカス(Ruminococcus)2、ペプトコッカセエ(Peptococcaceae)(f)、ジアフォロバクター(Diaphorobacter)、コリネバクテリウム(Corynebacterium)1、プロピオニバクテリウム(Propionibacterium)、およびベイヨネラ(Veillonella)からなる群から選ばれる1種以上の属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量をそれぞれ比較して、脳腫瘍を判定することを特徴とする、請求項1に記載の脳腫瘍診断のための情報提供方法。 - 前記血液が、全血、血清、血漿、または血液単核球であることを特徴とする、請求項1に記載の脳腫瘍診断のための情報提供方法。
- 下記の段階を含む、脳腫瘍発病を予測するための情報提供方法:
(a)正常ヒトサンプルから分離した細胞外小胞からDNAを抽出し、被検者サンプルから分離した細胞外小胞からDNAを抽出する段階;
(b)前記抽出した正常ヒトサンプル由来DNAおよび被検者サンプル由来DNAそれぞれに対して配列番号1および配列番号2のプライマーペアを用いてPCR(polymerase chain reaction)を行う段階;および
(c)前記PCR産物の配列分析を通して正常ヒト由来サンプルの細菌由来細胞外小胞の含有量と被検者由来サンプルの細菌由来細胞外小胞の含有量を比較する段階を含み、
前記正常ヒトおよび被検者サンプルは、血液または血清であり、
前記正常ヒトおよび被検者サンプルが血液である場合、前記段階(c)で、正常ヒト由来サンプルと被検者由来サンプルのラクトバシラス(Lactobacillus)、ロドコッカス(Rhodococcus)、スフィンゴモナス(Sphingomonas)、およびステノトロホモナス(Stenotrophomonas)属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量をそれぞれ比較する段階を含む;または
前記正常ヒトおよび被検者サンプルが血清である場合、前記段階(c)で、正常ヒト由来サンプルと被検者由来サンプルのノエリア(Knoellia)、ステノトロホモナス(Stenotrophomonas)、ラクトコッカス(Lactococcus)、およびツリシバクター(Turicibacter)属(genus)細菌由来細胞外小胞の含有量をそれぞれ比較する段階を含むことを特徴とする、脳腫瘍の発病を予測するための情報提供方法。
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