JP7290390B2 - 癌細胞転移抑制剤、癌細胞の転移に関与するmiRNAの発現抑制剤および癌細胞転移抑制用飲食品組成物 - Google Patents
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Description
本発明の第1の形態は、ふきのとう抽出物を含む、癌細胞転移抑制剤である。
本発明に係るふきのとう抽出物は、フキ(Petasites japonicus)の蕾である「ふきのとう」(全部または一部)を適当な溶媒を用い抽出することによって得られる。
上述のとおり、本発明の一実施形態は、本発明に係る癌細胞転移抑制剤を含む、生殖器系の癌の転移の抑制および/または予防剤(本明細書中、単に「生殖器系の癌の転移抑制/予防剤」とも称する)に関する。本発明に係る癌細胞転移抑制剤は、生殖器系の癌のうち、特に乳癌細胞の転移を抑制・予防できる。
本発明の第3の形態では、ふきのとう抽出物を含む、癌細胞転移抑制用飲食品組成物が提供される。
乾燥したふきのとうを、ブレンダーで1~5mm程度に裁断し、裁断したふきのとう10.0gに対して、70体積%のエタノール水溶液を100ml加え、90℃で2時間加温し抽出した。その後抽出液を濾過し、固形物を取り除き、減圧濃縮することでふきのとう抽出物を3.9g得た。得られた抽出物をジメチルスルホキシド(DMSO)に溶解して、30mg/mlおよび10mg/mlのサンプルを調製した。
ヒト乳腺癌由来細胞(MDA-MB-231)を、10(v/v)%FBS含有RPMI1640培地を用いて、5体積%CO2雰囲気下、37℃で培養した。この培養細胞を、6ウェルプレートに1ウェルあたり5×104個になるように2ml播種した。播種してから24時間後、培地を新しい10体積%FBS含有RPMI1640培地に交換し、上記で調製された各サンプルを、ふきのとう抽出物の最終濃度が30μg/mlおよび10μg/mlとなるように、培地に2μl添加した。コントロールには、溶媒(DMSO)のみを2μl添加した。5体積%CO2雰囲気下、37℃で48時間培養した後、スクレーパーを用いて細胞を回収して、2500rpmで5分間遠心分離した。上清を捨て、細胞のペレットにPBSを1ml加え、洗浄し、再度2500rpmで5分間遠心分離した。上清を捨て、NucleoSpin(登録商標) miRNA(タカラバイオ社)に付属のLysis Buffer MLを300μl加え、細胞を溶解した。以下、NucleoSpin(登録商標) miRNAのプロトコールに従い、RNAを抽出した。抽出したRNAを12.5ng/μlになるようにRNase-free H2Oで調製し、TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kitを用いてcDNAを作製した。評価を行ったマイクロRNAは、miR-21、125b、221、222、RNU6Bであり、miR-21、125b、221、222はがん転移関連マイクロRNAであり、RNU6Bは内部標準である。その後、THUNDERBIRD(登録商標) Probe qPCR Mixを用いて、コントロールおよび各サンプルを添加した細胞における上記マイクロRNAの発現量を定量した。その結果を図1に示す。
ヒト乳腺癌由来細胞(MDA-MB-231)を、10(v/v)%FBS含有RPMI1640培地を用いて、5体積%CO2雰囲気下、37℃で培養した。この培養細胞を、6ウェルプレートに1ウェルあたり5×104個になるように2ml播種した。5体積%CO2雰囲気下、37℃で72時間、MDA-MB-231細胞を培養した後、マイクロピペット用のチップを用いて細胞を一定の間隔(幅:約240mm)で掻き取った(下記図2の左上側の写真参照)。培地を新しい10(v/v)%FBS含有RPMI1640培地に交換し、上記で調製された各サンプルを、最終濃度が30μg/mlおよび10μg/mlとなるように、培地に2μl添加した。コントロールには、溶媒(DMSO)のみを2μl添加した。各サンプルまたはDMSOを添加した直後(0時間後)および上記添加後5体積%CO2雰囲気下、37℃で48時間培養した後のMDA-MB-231細胞の様子を写真に収め、細胞の遊走能について評価を行った。各写真からランダムに4ヶ所選び、細胞が遊走した面積を画像処理ソフトGNU Image Manipulation Programを用いて計測し、その平均値および標準偏差を計算した。結果を図2および図3に示す。図3において、各値は、コントロールの遊走面積を100%としたときの各サンプルを添加したMDA-MB-231細胞の遊走面積を平均値±標準偏差(n=4)として表したものである。図3中、「*」は、コントロールと比較した場合に有意差がある(p<0.01である)ことを示す。
Claims (8)
- ふきのとう抽出物を含む、癌細胞転移抑制剤であって、
miR-222の発現抑制のために用いられる、癌細胞転移抑制剤。 - 前記miR-222、miR-125bおよびmiR-221の発現抑制のために用いられる、請求項1に記載の癌細胞転移抑制剤。
- 前記miR-222、前記miR-125b、前記miR-221およびmiR-21の発現抑制のために用いられる、請求項2に記載の癌細胞転移抑制剤。
- 請求項1~3のいずれか1項に記載の癌細胞転移抑制剤を含み、前記miR-222、前記miR-222、前記miR-125bおよび前記miR-221、または前記miR-222、前記miR-125b、前記miR-221および前記miR-21の発現抑制のために用いられる、生殖器系の癌の転移の抑制および/または予防剤。
- 前記生殖器系の癌が乳癌である、請求項4に記載の生殖器系の癌の転移の抑制および/または予防剤。
- ヒト、またはペット動物に経口的に使用される、請求項4または5に記載の生殖器系の癌の転移の抑制および/または予防剤。
- 請求項1~3のいずれか1項に記載の癌細胞転移抑制剤を含み、前記miR-222、前記miR-222、前記miR-125bおよび前記miR-221、または前記miR-222、前記miR-125b、前記miR-221および前記miR-21の発現抑制のために用いられる、癌細胞転移抑制用飲食品組成物。
- ヒト用健康食品またはペットフード組成物である、請求項7に記載の癌細胞転移抑制用飲食品組成物。
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Non-Patent Citations (5)
Title |
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Ann.Transl.Med.,2015年,3(21):330 |
Exp.Ther.Med.,2015年,9,pp.1791-1796 |
Food Chem.Toxicol.,2014年,68,pp.218-225 |
in vivo,2010年,24,pp.401-408 |
J.Agric.Food Chem.,2011年,59,pp.9683-9690 |
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