JP7288569B1

JP7288569B1 - 甘草抽出物

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Publication number: JP7288569B1
Application number: JP2022160431A
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Inventors: 誉郎大西
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Publication date: 2023-06-08
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Abstract

【課題】多機能性原料として使用可能な甘草抽出物を提供する。【解決手段】甘草抽出物は、Ａ）グリチルリチン酸、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸、および、グリチルレチン酸誘導体からなる群から選択される１つ以上と、（Ｂ）上記（Ａ）以外の甘草サポニン類と、（Ｃ）甘草フラボノイド類とを含み、（Ｂ）は、リコリスサポニンＨ２と、リコリスサポニンＧ２と、マセドノシドＡを含む。【選択図】なし

Description

本発明は、甘草の成分を抽出して得られる甘草抽出物に関する。

甘草は従来から食品添加物や医薬品の原料の１つとして利用されてきた。特に、甘草に含まれるグリチルリチン酸や甘草フラボノイド類の作用に注目して、特有の用途に用いられることがある。

例えば、特許第６５８９１０２号公報（特許文献１）には、甘草に含まれるグリチルリチン酸に注目して、過剰排卵処理後に得られた胚の品質の改善を目的とした哺乳動物用飼料添加剤と改善方法を目的として、黒毛和種の牛に、少なくとも１３％のグリチルリチン酸含量を有する甘草エキスを、胚を回収するまでの６０～９０日間、持続的に給餌することが記載されている。

また例えば、特開平２－２０４４１７号公報（特許文献２）には、甘草疎水性フラボノイド製剤を提供するため、エタノールを抽出溶媒にして甘草根粉砕物より得られた抽出物を吸着樹脂等を用いて精製し、甘草疎水性フラボノイド含量約５０％の精製抽出物を得、これに中鎖脂肪酸トリグリセライドを加えて乳化物を製造し、乳化物を乾燥させて粉末化することが記載されている。

また、特開２０１５－７０８２３号公報（特許文献３）には、甘草抽出液からグリチルリチン酸を晶析させた後の晶析母液に含まれる甘草フラボノイド類を有効成分として利用する果実又は野菜の糖度向上剤及びその製造方法、ならびに糖度向上方法が記載されている。

特開２０１８－１６１１４４号公報（特許文献４）には、甘草の加工物を有効成分として含有する健康肥満維持剤が記載されており、甘草加工物は、グリチルリチン酸、２２β－アセトキシグリチルリチン、リコリスサポニンＧ２、リコリスサポニンＨ２、リクイリチン、リクイリチゲニン、イソリクイリチン、イソリクイリチゲニン等を含有することが記載されている。

特開２００９－２０３１８２号公報（特許文献５）には、リコリスサポニンＨ２を含有する甘草抽出物を用いることで優れたヒアルロニダーゼ阻害作用を有した食品組成物を提供し、ニキビ、肌荒れ等の課題を解決することが記載されている。

特許第６５８９１０２号公報特開平２－２０４４１７号公報特開２０１５－７０８２３号公報特開２０１８－１６１１４４号公報特開２００９－２０３１８２号公報

しかしながら、従来の甘草抽出物は、例えば哺乳動物または家畜の健康状態を維持、または、向上させるために必要な複数の機能を同時に果たす効果が十分ではなかった。

そこで、この発明の目的は、多機能性原料として使用することが可能な甘草抽出物を提供することである。

本発明者は、鋭意研究の結果、従来から有効成分として利用されてきたグリチルリチン酸や甘草フラボノイド類のそれぞれを個別に高純度で用いたり、高濃度で用いたりするのではなく、グリチルリチン酸と甘草フラボノイド類に加えて、グリチルリチン酸以外の甘草サポニン類との複合的な作用によって、様々な用途において、それぞれを単独で用いる場合からは予想できない高い効果を得ることができ、甘草抽出物を多機能性原料として用いることができることを見出した。以上の知見に基づいて、本発明は次のように構成される。

本発明に従った甘草抽出物は、（Ａ）グリチルリチン酸、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸、および、グリチルレチン酸誘導体からなる群から選択される１つ以上と、（Ｂ）上記（Ａ）以外の甘草サポニン類と、（Ｃ）甘草フラボノイド類とを含み、（Ｂ）は、リコリスサポニンＨ２と、リコリスサポニンＧ２と、マセドノシドＡを含む。

このようにすることにより、多機能性原料として使用することが可能な甘草抽出物を提供することができる。

試験１の各区のオス１０頭平均の食べ残し量の比較を示す図である。試験１の各区のメス１０頭平均の食べ残し量の比較を示す図である。試験１の各区のオス１０頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験１の各区のメス１０頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験１の各区のオス８頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験１の各区のメス８頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験１の各区のオス１０頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験１の各区のメス１０頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験１の各区のオス８頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験１の各区のメス８頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験１の各区のオス１０頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験１の各区のメス１０頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験１の各区のオス８頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験１の各区のメス８頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験１の各区のオス１０頭平均のセリ市場出荷時の重量を示す図である。試験１の各区のメス１０頭平均のセリ市場出荷時の重量を示す図である。試験１の各区のオス８頭平均のセリ市場出荷時の重量を示す図である。試験１の各区のメス８頭平均のセリ市場出荷時の重量を示す図である。試験２の各区のオス１０頭平均の食べ残し量の比較を示す図である。試験２の各区のメス１０頭平均の食べ残し量の比較を示す図である。試験２の各区のオス１０頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験２の各区のメス１０頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験２の各区のオス８頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験２の各区のメス８頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験２の各区のオス１０頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験２の各区のメス１０頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験２の各区のオス８頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験２の各区のメス８頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験２の各区のオス１０頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験２の各区のメス１０頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験２の各区のオス８頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験２の各区のメス８頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験２の各区のオスの導入時体重を示す図である。試験２の各区のメスの導入時体重を示す図である。試験２の各区のオスの到着時体重を示す図である。試験２の各区のメスの到着時体重を示す図である。試験２の各区のオスの増体重を示す図である。試験２の各区のメスの増体重を示す図である。試験２の各区のオスの食用肝臓廃棄率を示す図である。試験２の各区のメスの食用肝臓廃棄率を示す図である。試験２の各区のオスの枝肉重量を示す図である。試験２の各区のメスの枝肉重量を示す図である。試験２の各区のオス１０頭平均の枝肉歩留率を示す図である。試験２の各区のメス１０頭平均の枝肉歩留率を示す図である。試験２の各区のオス８頭平均の枝肉歩留率を示す図である。試験２の各区のメス８頭平均の枝肉歩留率を示す図である。試験３の各区のオス１２頭平均の食べ残し量を示す図である。試験３の各区のメス１２頭平均の食べ残し量を示す図である。試験３の各区のオス１２頭平均の完食までの日数を示す図である。試験３の各区のメス１２頭平均の完食までの日数を示す図である。試験４の各区のオス１０頭平均の食べ残し量の比較を示す図である。試験４の各区のメス１０頭平均の食べ残し量の比較を示す図である。試験４の各区のオス１０頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験４の各区のメス１０頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験４の各区のオス８頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験４の各区のメス８頭平均の総コレステロール値を示す図である。試験４の各区のオス１０頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験４の各区のメス１０頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験４の各区のオス８頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験４の各区のメス８頭平均のビタミンＡ値を示す図である。試験４の各区のオス１０頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験４の各区のメス１０頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験４の各区のオス８頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験４の各区のメス８頭平均のＧＯＴ値を示す図である。試験５の下痢の発生割合を示す図である。試験５の下痢の治療日数平均を示す図である。試験５の風邪の発生割合を示す図である。試験５の風邪の治療日数平均を示す図である。

以下、本発明の甘草抽出物について具体例を交えながら詳細に説明する。本発明は以下に示される実施形態に限定されるものではなく、本発明の技術的思想を逸脱しない範囲内で各種の変更が可能である。

本発明において甘草とは、カンゾウ属に属する植物をいう。カンゾウ属は、地中海地方、小アジア、ロシア南部、中央アジア、中国北部、北アメリカ等に自生するマメ科の多年草である。本発明においては、例えば、Glycyrrhiza acanthocarpa、G.aspera、G.astragalina、G.bucharica、G.echinata（ロシアカンゾウ）、G.eglandulosa、G.foetida、G.foetidissima、G.glabra（スペインカンゾウ）、G.gontscharovii、G.iconica、G.inflate、G.korshinskyi、G.lepidota（アメリカカンゾウ）、G.pallidiflora、G.squamulosa、G.triphylla、G.uralensis（ウラルカンゾウ）、G.yunnanensis、G.inflata（新疆カンゾウ）を用いることができる。これらは１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。

本発明の甘草抽出物は、（Ａ）グリチルリチン酸、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸、および、グリチルレチン酸誘導体からなる群から選択される１つ以上と、（Ｂ）上記（Ａ）以外の甘草サポニン類と、（Ｃ）甘草フラボノイド類とを含み、（Ｂ）は、リコリスサポニンＨ２と、リコリスサポニンＧ２と、マセドノシドＡを含む。

本発明において、グリチルリチン酸誘導体は、限定ではなく、例えばグリチルリチン酸ジカリウムである。グリチルレチン酸誘導体は、限定ではなく、例えばグリチルレチン酸ジカリウムである。本発明の甘草抽出物において、（Ａ）はグリチルリチン酸であることが好ましい。甘草抽出物は、（Ａ）グリチルリチン酸、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸、および、グリチルレチン酸誘導体からなる群から選択される１つ以上を１０質量％以上含むことが好ましく、１４質量％以上含むことがさらに好ましい。

甘草抽出物は、上記（Ａ）以外の甘草サポニン類を３質量％以上含むことが好ましく、９質量％以上含むことがさらに好ましい。（Ｂ）は、リコリスサポニンＨ２を２質量％以上含み、リコリスサポニンＧ２を０．５質量％以上含み、マセドノシドＡを０．５質量％以上含むことが好ましい。（Ｂ）成分として、リコリスサポニンＨ２、リコリスサポニンＧ２、および、マセドノシドＡ以外の甘草サポニン類を含んでもよい。

甘草抽出物は、（Ｃ）甘草フラボノイド類を４質量％以上含むことが好ましく、１９質量％以上含むことがさらに好ましい。（Ｃ）甘草フラボノイド類として、リクイリチンアピオシド、リクイリチン、リクイリチゲニン、イソリクイリチンアピオシド、イソリクイリチン、イソリクイリチゲニンを含むことが好ましい。（Ｃ）成分として、その他の甘草フラボノイド類を含んでもよい。

本発明の甘草抽出物は甘草の成分を抽出、分離、精製して得られる甘草エキスなどの甘草抽出物である。甘草抽出物の形態は限定されず、水あめ状、粘稠性の液体、液体、懸濁液、粉末、顆粒、錠剤、球状、団子状等、性質や用途に応じて選択される。甘草抽出物の形態は粉末であることが好ましい。

本発明の甘草抽出物の一例として甘草抽出物の製造方法の一例を説明する。本発明の甘草抽出物の製造工程は、工程Ａ～Ｃの少なくとも１つ以上を含むことが好ましい。

工程Ａ
工程Ａは甘草根から抽出液を得る工程である。甘草の根の１種、または２種以上を乾燥し破砕し、水およびアンモニアを加えて甘草根から抽出液を得る。抽出液に硫酸を加えて沈殿させ、粘エキスと上清を分離する。粘エキスを乾燥し、得られた１次抽出物を甘草抽出物（濃縮甘草）とする。

工程Ｂ
工程Ｂは分離精製工程である。工程Ａで得られた濃縮甘草をエタノール水溶液に溶解し、ろ過して不溶物を取り除く。得られた抽出液にアンモニアを加え甘草サポニンをアンモニウム塩として晶析（結晶化）させ、ろ過して結晶と抽出母液に分離する。抽出母液を減圧濃縮し、エタノールを回収し、炭酸ナトリウムを加えｐＨを６～７に調整する。得られた濃縮液をスプレードライで乾燥し、混合し、甘草抽出物を得る。

工程Ｃ
工程Ｃは別の分離精製工程である。工程Ｂで得られた抽出母液に活性炭を加えて不純物を取り除き、得られた液をスプレードライで乾燥して甘草抽出物を得ることができる。

甘草抽出物は必要に応じて包装されてもよい。

甘草抽出物の抽出溶媒は限定ではなく、例えば水、アルコール（例えばメタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、ｎ－ブタノールなど）、アセトン、酢酸エチルなどを用いることができる。また、乾燥粉末を得る場合には、上述の甘草抽出物に対し、例えば減圧乾燥や噴霧乾燥等、公知の手法を用いることができる。

甘草抽出物の製造においては、各成分が所望の濃度になるように、工程Ａ～Ｃの各工程を繰り返し、および／または、省略することができる。また、各成分が所望の濃度になるように、工程Ａ～Ｃの各工程で得られた甘草抽出物を混合して新たな甘草抽出物を得ることもできる。

本発明の甘草抽出物をそのまま、または、他の成分や添加物を加えて、食品、サプリメント、または、飼料添加剤等として用いることができる。例えば、甘草抽出物と、乾燥させた甘草根を粉砕した甘草根末を組み合わせて甘草加工物として用いてもよい。

本発明の甘草抽出物をそのまま、または、他の成分や添加物を加えて、飼料添加剤として飼料に添加することによって、哺乳動物または家畜の健康を維持および向上させるために必要な複数の機能を同時に飼料に付与することができる。本発明の飼料添加剤中の甘草抽出物の含有量は１００質量％であってもよい。

本発明において、哺乳動物とは、限定ではなく、例えば、サル、イヌ、ネコ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、モルモット、ウサギ、マウス、ラット、または、ヒトであり、好ましくはウシである。本発明において、家畜には、哺乳動物の他、鶏、鳩、家鴨などの鳥類も含まれる。

本発明において、飼料とは、哺乳動物または家畜による摂取に適し、またはそれが意図される、あらゆる化合物、調製品、混合物、または組成物を意味する。本発明において飼料添加剤とは、家畜等の栄養に供することを目的として使用される餌（飼料）に添加して飼料の品質保持や補助栄養として利用される添加剤のことである。

飼料添加剤の剤型は限定されず、水あめ状、粘稠性の液体、液体、懸濁液、粉末、顆粒、錠剤、球状、団子状等、性質や用途に応じて選択される。

飼料添加剤中の本発明の甘草抽出物の含有量は、限定ではなく、１ｇ／日／頭以上であることが好ましく、１０ｇ／日／頭未満であることが好ましく、５ｇ／日／頭以下であることがより好ましい。従来、飼料添加剤として用いられる甘草抽出物は、例えば１０～４０ｇ／日／頭の量で添加されていたが、本発明の甘草抽出物はより少ない添加量で複数の機能を飼料に付与することができる。

飼料添加剤には、任意で水溶性食物繊維を含んでもよい。水溶性食物繊維は、水に添加されると粘性のあるゾル状になる。水溶性食物繊維としては、限定ではなく、プランタゴオバタ種皮（サイリューム）、カラギーナン、キサンタンガム、カードラン、ペクチン、アラビアガム、アルギン酸、キチン、キトサン、グアガム、グルコマンナン、ジェランガム、タラガム、タマリンドガム、トラガントガム、プルラン、難消化性デキストリン、ポリデキストロースなどを用いることができ、グルコマンナンを用いることが好ましい。グルコマンナンは、水または含水エタノールなどで精製した上で用いてもよく、グルコマンナン含有物としてこんにゃく粉を用いてもよい。一般的なこんにゃく粉は平均粒子径が約４２０μｍ（３５メッシュ全通）であり、比較的粒子径が大きいが、本発明の飼料添加剤には平均粒子径が約１７７μｍ（８０メッシュ全通）以下のこんにゃく粉または粉末状のグルコマンナンを用いることが好ましい。このようにすることにより、粒子の表面積が大きくなり、水との親和性が高くなり、グルコマンナンの膨潤速度が速くなる。グルコマンナンを添加することによって甘草加工物の整腸作用を高めることができる。

甘草抽出物と水溶性食物繊維は、本発明の飼料添加剤中、甘草抽出物：水溶性食物繊維が１０：９０～４０：６０の質量比で含まれることが好ましい。

本発明の飼料添加剤は、さらに、デンプン分解物を含むことが好ましい。デンプン分解物を含む場合は、甘草抽出物：水溶性食物繊維：デンプン分解物が１０：３０：６０の質量比で含まれることが好ましい。

本発明の甘草抽出物を含む飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、哺乳動物または家畜の食餌摂取量の増量、血液中の総コレステロール値の増加、血液中のビタミンＡ値の増加、血液中のＧＯＴ値の低下、体重の増加、下痢の予防、下痢の治療日数の低減、風邪の予防、および、風邪の治療日数の低減からなる群から選択される少なくとも１つによって、健康状態を改善するために飼料添加剤を給与することができる。

本発明の甘草抽出物を含む飼料添加剤を給与される哺乳動物または家畜は食肉生産用の家畜であることが好ましく、飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、枝肉の重量を増加し、枝肉歩留率を改善し、および／または、肉畜の肝臓廃棄率を低減するために飼料添加剤を給与することができる。

本発明を要約すると以下の通りである。

（１）甘草抽出物は、（Ａ）グリチルリチン酸、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸、および、グリチルレチン酸誘導体からなる群から選択される１つ以上と、（Ｂ）上記（Ａ）以外の甘草サポニン類と、（Ｃ）甘草フラボノイド類とを含み、（Ｂ）は、リコリスサポニンＨ２と、リコリスサポニンＧ２と、マセドノシドＡを含む。

（２）上記（１）の甘草抽出物は、（Ｃ）甘草フラボノイド類は、リクイリチンアピオシド、リクイリチン、リクイリチゲニン、イソリクイリチンアピオシド、イソリクイリチン、および、イソリクイリチゲニンを含むことが好ましい。

（３）上記（２）の甘草抽出物は、（Ａ）を１０質量％以上、および／または、（Ｂ）を３質量％以上、および／または、（Ｃ）を４質量％以上含むことが好ましい。

（４）上記（３）の甘草抽出物においては、（Ｂ）はリコリスサポニンＨ２を２質量％以上含み、リコリスサポニンＧ２を０．５質量％以上含み、マセドノシドＡを０．５質量％以上含むことが好ましい。

（５）上記（４）の甘草抽出物においては、（Ａ）を１４質量％以上、（Ｂ）を９質量％以上、（Ｃ）を１９質量％以上含むことが好ましい。

（６）哺乳動物または家畜の飼料添加剤は、上記（１）～（５）のいずれかの甘草抽出物と、任意で水溶性食物繊維を含むことが好ましい。

（７）上記（６）の飼料添加剤においては、甘草抽出物：水溶性食物繊維が１０：９０～４０：６０の質量比で含まれることが好ましい。

（８）上記の（７）の飼料添加剤においては、水溶性食物繊維はグルコマンナンであることが好ましい。

（９）哺乳動物または家畜の飼育方法は、上記（６）に記載の飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、哺乳動物または家畜の食餌摂取量の増量、血液中の総コレステロール値の増加、血液中のビタミンＡ値の増加、血液中のＧＯＴ値の低下、体重の増加、下痢の予防、下痢の治療日数の低減、風邪の予防、および、風邪の治療日数の低減からなる群から選択される少なくとも１つによって、健康状態を改善することが好ましい。

（１０）哺乳動物または家畜の飼育方法は、哺乳動物または家畜は食肉生産用の家畜であり、上記（６）に記載の飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、枝肉の重量を増加し、枝肉歩留率を改善し、および／または、肉畜の肝臓廃棄率を低減することが好ましい。

（１１）本発明に従った飼料効率を増大させる方法は、哺乳動物または家畜は食肉生産用の家畜であり、上記（６）に記載の飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、飼料効率を増大させる方法である。

本発明に係る甘草抽出物と、甘草抽出物を含む飼料添加剤を用いる哺乳動物または家畜の飼育方法をより詳細に説明する。

＜甘草抽出物の製造＞
甘草としてグラブラ（glabra）種とウラレンシス（uralensis）種とインフラータ（inflata）種を用いて、以下の工程で甘草抽出物を製造した。実施例１，２，４，５，７，８および比較例１ではグラブラ（glabra）種を用いた。実施例９ではインフラータ（inflata）種を用いた。実施例３ではグラブラ（glabra）種とウラレンシス（uralensis）種を用いた。実施例６，１０ではグラブラ（glabra）種とインフラータ（inflata）種を用いた。

工程Ａ
甘草の根の１種、２種、または、３種を乾燥し破砕した。粉砕した甘草根１ｋｇに約８～１０Ｌの常温の水およびアンモニア水を適量加えて抽出し、抽出液を得た。その際、ｐＨ９前後になるように、加えるアンモニア水の量を調整した。得られた抽出液に硫酸を加えて成分を沈殿させ、粘エキスと上清（上澄み）を分離した。その際、硫酸の量は沈殿スラッジのｐＨ１．８前後になるよう調整した。分離した粘エキスを乾燥し、得られた１次抽出物を甘草抽出物（濃縮甘草）とした。工程Ａは、所望の成分含有量を得るまで、必要に応じて繰り返した。

工程Ｂ
工程Ａで得られた濃縮甘草１００ｇに９０％前後のエタノール６００～８００ｍＬを加えて抽出し、ろ過して不要物を除去し、抽出液を得た。抽出液を５０～６０℃に加温し、アンモニアを加え、甘草サポニンをアンモニア塩として晶析（結晶化）させた。常温まで冷却した後、甘草サポニンのアンモニウム塩を遠心分離して取り除き、抽出母液（甘草抽出液）を得た。その際、加えるアンモニア水の量は、晶析スラッジのｐＨ５前後になるように調整した。ここまでの工程は、所望の成分含有量を得るまで、必要に応じて繰り返した。抽出母液（甘草抽出液）を減圧濃縮し、エタノールを回収し、残液を約１００ｍＬとした。減圧濃縮した抽出母液（甘草抽出液）に炭酸ナトリウムを加え、ｐＨを６～７に調整した。得られた液をスプレードライで乾燥し、甘草抽出物を得た。

工程Ｃ
工程Ｂで得られた抽出母液（甘草抽出液）に活性炭を加えて不純物を取り除き、この工程を１～２回行い、抽出母液（甘草抽出液）を得た。得られた液をスプレードライで乾燥して甘草抽出物を得た。

各成分の含有量が所望の量になるよう、工程Ａ～Ｃの各工程で得られた甘草抽出物を必要に応じて混合した。

実施例１～６の甘草抽出物は、工程Ａと工程Ｂによって製造した。実施例７，８の甘草抽出物は、工程Ａ～Ｃの各工程で得られた甘草抽出物を混合して製造した。実施例９，１０の甘草抽出物は、工程Ａによって製造した。比較例１の甘草抽出物は、工程Ａ～Ｃによって製造した。

＜甘草抽出物中の成分の測定＞
各実施例と比較例の甘草抽出物の（Ａ）グリチルリチン酸、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸、および、グリチルレチン酸誘導体からなる群から選択される１つ以上のうち、グリチルリチン酸、および、（Ｂ）リコリスサポニンＨ２、リコリスサポニンＧ２、マセドノシドＡを次の条件でＨＰＬＣ分析によって測定した。

＜測定用試料の調製＞
測定用の試料の調製は、水に溶ける甘草抽出物は（１）、水に溶けない甘草抽出物は（２）に従って行った。

（１）水に溶ける甘草抽出物
試料約２００ｍｇを量り取り、水を加えて正確に１００ｍＬとして試料溶液とした。別にグリチルリチン酸標準品を用いて調製した標準溶液を用いて液体クロマトグラフィーにより分析を行った。ただし試料の採取量は乾燥物換算％で補正した。

（２）水に溶けない甘草抽出物
試料０．１ｇを量り取り、アンモニア水（２８％）３滴及び水で正確に５０ｍＬとし試料溶液とした。別にグリチルリチン酸標準品に希エタノールを加えて標準溶液を調製した。標準溶液を用いて液体クロマトグラフィーにより分析を行った。ただし試料の採取量は式１によって乾燥物換算％で補正した。

ＡＴ：試料溶液の面積ＡＳ：標準溶液の面積
ＷＳ：標準溶液濃度ＷＴ：乾燥物換算した試料溶液濃度

＜グリチルリチン酸の測定＞
グリチルリチン酸測定の試験条件（高圧対応ＨＰＬＣ（アジレント・テクノロジー株式会社製ＬＣ１２９０））は次の通りであった。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長２５４ｎｍ）
カラム：ＴｏｓｏｈＴＳＫＧｅｌＯＤＳ８０ＴｓＱＡ
カラム温度：３０℃付近の一定温度
流速：グリチルリチン酸の保持時間が約７～８分になるように調整した
移動相：２％酢酸：アセトニトリル＝６０：４０
注入量：２０μＬ

＜甘草サポニン類の測定＞
甘草サポニン類測定の試験条件（高圧対応ＨＰＬＣ（アジレント・テクノロジー株式会社製ＬＣ１２９０））は次の通りであった。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２５４ｎｍ）
カラム：ＴＳＫＧｅｌＯＤＳ８０ＴｓＱＡ
カラム温度：３０℃付近の一定温度
流速：０．８ｍＬ／分
移動相：移動相Ａ：０．１％ギ酸（水）／移動相Ｂ：０．１％ギ酸（アセトニトリル）
注入量：２０μＬ
移動相の濃度勾配は、流量比をＡ：Ｂ＝９０：１０（０～３分）から１０：９０（３分～６０分）に変化させた。

＜甘草フラボノイド類の測定＞
各実施例と比較例の甘草フラボノイド類は次の試験条件でＨＰＬＣ分析によって測定した。測定用の試料は上述のグリチルリチン酸とその他の甘草サポニン類の測定と同様に調製した。標準溶液としてはグリチルリチン酸標準溶液（測定波長２５４ｎｍ）、リクイリチン標準溶液（測定波長２８０ｎｍ）、イソリクイリチゲニン標準溶液（測定波長３５５ｎｍ）、イソリクイリチン標準溶液（測定波長３５５ｎｍ）を用いて、試料溶液及び標準溶液を液体クロマトグラフィーによりグラジェント分析しフラボノイド含量を求めた。ただし試料の乾燥物換算％で補正した。

測定条件（高圧対応ＨＰＬＣ（アジレント・テクノロジー株式会社製ＬＣ１２９０））は次の通りであった。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２８０ｎｍ，３５５ｎｍ）
カラム：ＴＳＫＧｅｌＯＤＳ８０ＴｓＱＡ
カラム温度：３０℃付近の一定温度
流速：０．８ｍＬ／分
移動相：移動相Ａ：０．１％ギ酸（水）／移動相Ｂ：０．１％ギ酸（アセトニトリル）
注入量：２０μＬ
移動相の濃度勾配は、流量比をＡ：Ｂ＝９０：１０（０～３分）から１０：９０（３分～６０分）に変化させた。

得られた甘草抽出物の主な成分を表１に示す。なお、表１中の「％」は質量％を意味する。

本発明の甘草抽出物による効果を確認するため、哺乳動物または家畜として食肉生産用の家畜である牛を対象に、以下の試験を行った。

試験１．生後５日齢から約２４０日齢～約２７０日齢まで
子牛は生後、高濃度の代用乳で哺乳育成された後、生後約８０日齢から徐々に離乳して飼料給与による育成に切り替えられる。高濃度の代用乳によって消化器官に負担がかかると、飼料摂取量の低下やバラツキを引き起こす。また、離乳時に哺乳育成枠から飼料育成枠に移動する際の環境変化によるストレスや群飼いによるストレス、代用乳から配合飼料や粗飼料への切り替えによるストレスによっても飼料摂取量の低下やバラツキが起きる。このような消化器官への負担、ストレス、飼料摂取量の低下やバラツキによって、消化器官の発達、例えば、胃の中のルーメンの発達が遅れ得る。飼料摂取量の低下やバラツキ、消化器官の発達の遅れは、発育を遅らせ、飼料効率を低下させる。

そこで、生後５日齢から約２４０日齢～約２７０日齢までの子牛に本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することにより、離乳時の飼料の食べ残しの量の低減（食餌摂取量の増加）、栄養状態（血液検査の総コレステロール値、ビタミンＡ値、ＧＯＴ値）、体重に与える本発明の甘草抽出物の影響を調べた。

通常、約９０日齢で離乳させることを目安に約８０日齢から代用乳及び餌付け飼料を徐々に減らしながら、イナワラ・オーツヘイ・配合飼料の給与量を増やしていく。しかし本試験では、甘草抽出物による効果を明確に確認するために、約８０日齢で完全離乳させた。

対象は、生後５日齢～１０日齢から子牛セリ市場出荷時日齢（オス２４１～２６１日齢、メス２４６～２９１日齢）までの黒毛和種オス子牛３０頭、メス子牛３０頭、合計６０頭であった。表２に示す３群に分けた。

ＫＳ区は実施例５の甘草抽出物を生後約５日齢から飼料添加剤として飼料に添加し、Ｋ区では比較例１の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加した。無給与区は甘草抽出物を飼料に添加しなかった。甘草抽出物以外の飼料（代用乳、人工乳、配合飼料、牧草等粗飼料）は表３（オスの１頭当たりの給与飼料）と表４（メスの１頭当たりの給与飼料）に示す飼料を１日３回に分けて、８１日齢以降は配合飼料、イナワラ、オーツヘイの順番で、各群に同量を同時間に給与した。餌付け飼料とオーツヘイは生後約２週間後から給与した。

ＫＳ区では、生後約５日目から１ｇ／日／頭、生後約４１日から２ｇ／日／頭、生後約８１日から約２４０日～約２７０日まで３ｇ／日／頭の実施例５の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加して給与した。Ｋ区では、生後約５日目から１ｇ／日／頭、生後約４１日から２ｇ／日／頭、生後約８１日から約２４０日～約２７０日まで３ｇ／日／頭の比較例１の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加して給与した。

１．１食べ残し量
上述のように、約８１日齢以降は飼料を配合飼料、イナワラ、オーツヘイの順番で給与したため、残飼料が発生する場合はオーツヘイが残飼料となる。従ってオーツヘイの残飼料重量を食べ残し量として計測した。約８１日齢の離乳初日を第１日目とし、食べ残しの量の推移を図１と図２に示す。

図１に示すように、オスは、ＫＳ区では離乳初日から食べ残しがなく完食し続けた。Ｋ区では、８～９日目の２日間で一度完食したが、再度食べ残しが発生し、完食継続までに１１日間要した。無給与区は完食継続までに１４日間要した。

図２に示すように、メスは、ＫＳ区では離乳１日目（約８１日齢）及び３日目に完食し２日目及び４日目に食べ残しが発生し、５日目から完食継続した。Ｋ区は、完食のバラつきを見せながら、１２日目から完食継続した。無給与区は、完食継続まで１５日間を要した。

生後約５日齢から実施例５の甘草抽出物を給与していたＫＳ区では、約８１日齢の離乳時から甘草抽出物の給与による効果が表れていた。グリチルリチン酸を１３％以上含む甘草抽出物を給与したＫ区と比較しても高い効果が確認されたことで、食べ残し量の低減（食餌摂取量の増加）に対する実施例５の甘草抽出物に含まれるグリチルリチン酸、甘草サポニン類、甘草フラボノイド類の相乗効果が確認された。

上述のように、飼料摂取量は子牛のストレスや消化器官の負担、消化器官の発達程度を反映すると考えられる。離乳直後から完食し、飼料摂取量が多いＫＳ区では、Ｋ区、無給与区と比較して、牛のストレスが低減され、消化器官の負担が少なく、消化器官の発達状態がよいと考えられる。

１．２血液検査結果（総コレステロール値、ＶＡ値、ＧＯＴ値）
牛の栄養状態や代謝状態を把握するため、血液検査を行い、総コレステロール値、ビタミンＡ値（ＶＡ値）、ＧＯＴ値を測定した。総コレステロール値は総合的な栄養摂取状況を反映する。ＶＡ値は成長や発育に関連し、ビタミンＡの欠乏は発育障害や免疫力の低下をまねく。ＧＯＴ値は急性の肝障害や臓器障害の判断材料となる。特にＧＯＴ値が高値の場合は肝臓の疾患が疑われる。

全ての牛の血液検査（総コレステロール値、ＶＡ値、ＧＯＴ値）を生後約４０日齢と約１６０日齢の２回実施した。

オス・メス各区１０頭の平均値と１０頭中の数値最上位と最下位の２頭を除いた８頭の平均値を図３～図６（総コレステロール値）、図７～図１０（ＶＡ値）、図１１～図１４（ＧＯＴ値）に示す。

図３～図６に示すように、離乳前の生後約５日齢から本発明の甘草抽出物を給与したＫＳ区では、オス・メス共に生後約４０日齢と約１６０日齢のいずれの時点でも他区に比べて高い数値となっている。高い総コレステロール値は、栄養摂取状態がよいこと、代謝が促進されていることを示すと考えられる。一方、無給与区では栄養不足が疑われる。栄養不足は免疫力を低下させたり、疾病にかかる危険性を高めたりする。本発明の甘草抽出物は、栄養状態と代謝をよくすることができることがわかった。

図７～図１０に示すように、ＫＳ区ではオス・メス共にＶＡ値も高かった。ビタミンＡは発育に欠かせない成分であり、ＶＡ値は増体（家畜の体重増加量）に影響を及ぼす。しかしＶＡは体内で合成できないため、食物によって体内に取り込まなければならない。ＶＡが極端に少なくなると発育障害や免疫力の低下をまねき、風邪や下痢などの疾病を発症する場合がある。ＫＳ区ではＶＡ値が生後約４０日齢と約１６０日齢のいずれの時点でも他区よりも高く、特に生後約１６０日齢では他区と比べてより高くなっており、ＫＳ区が増体に有利であることが示されている。本発明の甘草抽出物は増体に必要なＶＡ値を増加・維持させることができることがわかった。

図１１～図１４に示すように、ＫＳ区では生後約４０日齢と生後約１６０日齢のいずれの時点でも他区に比べてＧＯＴ値が低かった。ＫＳ区ではさらに、生後約４０日齢よりも生後約１６０日齢でＧＯＴ値が低かった。一方、Ｋ区では生後約４０日齢と生後約１６０日齢のＧＯＴ値がほぼ横ばいであった。無給与区では、生後約４０日齢の血液検査で他区よりもＧＯＴ値が高く、生後約１６０日齢ではさらに上昇した高いＧＯＴ値が確認された。本発明の甘草抽出物は肝機能を高める効果があることがわかった。

以上の結果から、グリチルリチン酸を多く含有するＫ区の甘草抽出物（比較例１）よりも、甘草フラボノイド類と、グリチルリチン酸以外の甘草サポニン類を含有するＫＳ区の甘草抽出物（実施例５）が、グリチルリチン酸による効果ではなく、グリチルリチン酸とその他の甘草サポニン類と甘草フラボノイド類の複合的な効果によって、栄養状態と代謝（総コレステロール値）、発育状態（ビタミンＡ値）、肝機能（ＧＯＴ値）によい影響を与えることがわかった。

１．３体重
牛はセリ市場出荷時に、セリ市場にて個体別体重を必ず測定される。セリ市場出荷時に測定した体重のオス・メス各区１０頭の平均値と１０頭中の数値最上位と最下位の２頭を除いた８頭の平均値を図１５～図１８に示す。なお、セリ市場開催日が限定されているため、出荷時日齢に多少の差がある。

図１５～図１８に示すように、オス・メス共にＫＳ区の体重が他区よりも大きかった。上述のように、本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することによって、ＫＳ区では他区と比べて飼料摂取量が多く、栄養状態と代謝、発育状態、肝機能がよいため、免疫力を低下させず、疾病の発生を防ぐことができ、例えば疾病による食欲不振、食餌摂取量の低下も防ぐことができ、増体につながったと考えられる。

増体が大きいことは、セリ市場への出荷日齢の短縮、すなわち、飼育期間の短縮を可能にし、人件費や飼料代などの経費を削減することにつながる。また、ＫＳ区、Ｋ区、無給与区で、甘草抽出物以外は同じ種類、同じ量の飼料を給与したにも関わらず、ＫＳ区で他区よりも増体が大きいことから、本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することによって飼料効率を増大させることができることがわかる。

生後約５日齢から約２４０日齢～約２７０日齢の間には哺育期、離乳時期、その後の成長過程があり、飼料の種類、給与内容、給与方法が変化していく。牛は些細な環境変化で精神的・肉体的ストレスを強く感じ体調に変化が生じることが知られているが、本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することによって、環境の変化やストレスが飼料摂取量、栄養状態、代謝、発育、肝機能に与える悪影響を低減することができ、増体させることができた。

試験２．肥育導入時から枝肉市場出荷まで
育成農家からセリ市場に出荷された子牛は、その後、肥育農家に導入される。この間、子牛は、育成農家から子牛セリ会場へトラック輸送により移動し、セリ購入落札後に新しい肥育農家の牧場にトラックで移送されることによる移動のストレスや、生育場所と飼育者等が変わることによる環境変化のストレスを受ける。北海道の市場から鹿児島、宮崎などの牧場までの長距離の移動もよくある。さらに、肥育牧場に導入された日から、給与される飼料の種類や量などが変わることによるストレスや、肥育牧場でのヒートストレスとコールドストレス（暑熱期・寒冷期のストレス）や群飼い等のストレスもある。これらのストレスは牛の飼料摂取量、栄養状態、代謝、発育、肝機能に悪影響を及ぼし得る。また、肥育牧場への導入時には、増体目的で既に高濃度の配合飼料や多種多様な添加剤等を食餌していたことで消化器官や内臓器官、特に肝機能がダメージを受けていることが多い。

そこで、肥育導入時から販売目的で枝肉市場に出荷するまでの牛に本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することにより、肥育導入時の食べ残しの量、栄養状態（血液検査の総コレステロール値、ビタミンＡ値、ＧＯＴ値）、体重、肝臓廃棄率、枝肉重量、枝肉歩留率に与える本発明の甘草抽出物の影響を調べた。

対象は、約９ヶ月齢～約１０ヶ月齢（生後２６６日齢から３０８日齢）の黒毛和種オス牛３０頭、および、約９ヶ月齢～約１０ヶ月齢（生後２７４日齢から３０４日齢）の黒毛和種メス牛３０頭、合計６０頭であった。子牛セリ市場で購入時に計測される体重結果を基に、各区の個別体重および日齢がほぼ平等になるように表５に示す３群に分けた。

ＫＳ区は実施例５の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加し、Ｋ区では比較例１の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加した。無給与区は甘草抽出物を飼料に添加しなかった。甘草抽出物以外の飼料は、表６（オスの１頭当たりの給与飼料）と表７（メスの１頭当たりの給与飼料）に示す飼料を１日３回に分けて、各群に同量を同時間に給与した。肥育牧場導入後、完食するまでは配合飼料、イナワラ、ビール・カス、オーツヘイの順番で給与した。

ＫＳ区では、実施例５の甘草抽出物を３ｇ／日／頭を肥育牧場導入日から約１９ヶ月間、飼料添加剤として飼料に添加して給与した。Ｋ区では、比較例１の甘草抽出物を３ｇ／日／頭を肥育牧場導入日から約１９ヶ月間、飼料添加剤として飼料に添加して給与した。

２．１食べ残し量
上述のように、飼料を配合飼料、イナワラ、ビール・カス、オーツヘイの順番で給与したため、残飼料が発生する場合はオーツヘイが残飼料となる。従ってオーツヘイの残飼料重量を食べ残し量として計測した。食べ残しの量の推移を図１９～図２０に示す。

図１９に示すように、オスは、ＫＳ区では完食まで給与開始後５日、Ｋ区は完食まで９日間を要し、無給与区は完食まで１４日間を要した。

図２０に示すように、メスは、ＫＳ区では完食まで給与開始後４日、Ｋ区は完食まで１０日間を要し、無給与区では完食までオス同様１４日間を要した。

本発明の甘草抽出物の給与が肥育導入後に開始されても、グリチルリチン酸を１３％以上含む甘草抽出物を給与したＫ区と比較しても高い効果が確認されたことで、実施例５の甘草抽出物に含まれるグリチルリチン酸、甘草サポニン類、甘草フラボノイド類の相乗効果が確認された。

肥育導入直後から完食し、飼料摂取量が多いＫＳ区では、Ｋ区、無給与区と比較して、牛のストレスが低減され、消化器官の負担が少なく、消化器官の機能や状態がよいと考えられる。

２．２血液検査結果（総コレステロール値、ＶＡ値、ＧＯＴ値）
全ての牛の血液検査（総コレステロール値、ＶＡ値、ＧＯＴ値）を肥育牧場への導入時、導入後６ヶ月、導入後１２か月の３回実施し、総コレステロール値、ＧＯＴ値、ＶＡ値を測定した。

オス・メス各区１０頭の平均値と１０頭中の数値最上位と最下位の２頭を除いた８頭の平均値を図２１～図２４（総コレステロール値）、図２５～図２８（ＶＡ値）、図２９～図３２（ＧＯＴ値）に示す。

図２１～図２４に示す通り、総コレステロール値はオス・メス共にＫＳ区が高い数値となった。この結果から、上述の通りＫＳ区では肥育導入後、他区よりも早い段階から飼料摂取量が多かったが、それに加えて、摂取した飼料の消化吸収と代謝もよかったことがわかる。

図２５～図２８に示すように、ＶＡ値もオス・メス共にＫＳ区が高い数値となった。肥育導入時と比較して６か月後と１２か月後ではどの区でもＶＡ値が低下しているが、ＫＳ区では６か月後と１２か月後はほぼ横ばいを維持したかむしろ向上した。一方、Ｋ区と無給与区では６か月後から１２か月後にかけてさらにＶＡ値が低下した。

図２９～図３２に示すように、オス・メス共にＫＳ区では肥育導入後６か月後と１２か月後のいずれの時点でも他区に比べてＧＯＴ値が低かった。Ｋ区と無給与区では肥育導入後より６か月後にＧＯＴ値が高くなり、１２か月後にＧＯＴ値がさらに高くなった。

以上の結果から、本発明の甘草抽出物の給与が肥育導入後に開始されても、グリチルリチン酸とその他の甘草サポニン類と甘草フラボノイド類の複合的な効果によって、栄養状態と代謝（総コレステロール値）、発育状態や免疫力（ビタミンＡ値）、肝機能（ＧＯＴ値）によい影響を与えることがわかった。

２．３体重
肥育牧場の導入時と枝肉市場の到着時の体重と増体重を測定した。子牛セリ市場で計測された体重を肥育牧場の導入時の体重とした。肥育牧場から枝肉市場に到着した時に計測した体重を到着時体重とした。導入時体重と到着時体重の差を増体量とした。

図３２～図３８に示すように、オス・メス共に、到着時体重も増体重もＫＳ区で最も大きかった。増体重が大きいことは、以下の好循環が生まれていることによると考えられる。すなわち、上述のようにＫＳ区では他区よりも肥育導入後早い時期から飼料摂取量が多く、加えて消化吸収と代謝、発育や免疫力、肝機能もよいことによって、環境や飼料の変化があってもストレスの悪影響を受けにくく、消化器官等内臓の状態を良好に保つことができる。その結果、疾病を防ぐことができ、また、疾病による食欲不振も防ぐことができる。こうしてＫＳ区では安定して飼料摂取量が多くなり、枝肉市場への出荷時までに他区よりも大きな増体を得ることができると考えられる。

試験１でも述べた通り、ＫＳ区、Ｋ区、無給与区で、甘草抽出物以外は同じ種類、同じ量の飼料を給与したにも関わらず、ＫＳ区で他区よりも増体が大きいことから、本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することを肥育牧場導入日以後に開始しても、飼料効率を増大させることができることがわかる。

２．４食用肝臓の廃棄割合
屠畜時における食用肝臓の廃棄割合を確認した。食用肝臓の廃棄は経済的損失を招く。枝肉市場出荷時における鋸屑肝、肝出血などの肝臓病変は、肥育期間中の肝臓への負担増加が原因で発生する。肝臓病変が少ないことは、肝機能を健康な状態に維持していたことを示す。

図３９～図４０に示すように、オス・メス共に、ＫＳ区では他区と比べて食用肝臓の廃棄割合が非常に少なかった。グリチルリチン酸を１３％以上含む甘草抽出物を給与したＫ区でも無給与区とほぼ同程度の食用肝臓廃棄率であった。本発明の甘草抽出物は肝機能を健康な状態に維持する効果が非常に大きいことがわかった。

２．５枝肉重量・歩留率
枝肉市場で枝肉重量を測定した。また、枝肉市場到着時の体重と枝肉重量から枝肉歩留率（（枝肉重量／枝肉市場到着時の体重）×１００）を算出した。なお、枝肉とは、生体から頭、皮、内臓、血液などを抜いた状態をいい、可食部分となる。

図４１～図４２に示すように、ＫＳ区は、可食部分となる枝肉重量が他区と比べて多いことが分かる。さらに、図４３～図４６に示すように、ＫＳ区では枝肉歩留率も他区と比べて高い。増体がよくても、歩留率がよくなければ体重の割に枝肉が得られない。本発明の甘草抽出物を給与することによって、肥育導入後、早い段階から安定した高い飼料摂取量と消化器官や肝臓の健康を維持することができ、これが増体と枝肉重量、枝肉歩留率の向上をもたらしたと考えられる。

上述の通り、ＫＳ区、Ｋ区、無給与区で、甘草抽出物以外は同じ種類、同じ量の飼料を給与したにも関わらず、ＫＳ区で他区よりも枝肉重量も枝肉歩留率も大きいことから、本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することを肥育牧場導入日以後に開始しても、飼料効率を増大させることができることが確認された。

試験３．肥育導入日から１０日間のみ給与
「試験２．肥育導入時から枝肉市場出荷まで」において述べた通り、肥育牧場への導入時の子牛は移動や環境変化のストレスを特に受ける。また、肥育牧場への導入時には既に増体目的の食餌によって消化器官など内臓器官や肝機能等がダメージを受けている。そこで、肥育牧場への導入日から１０日間のみ甘草抽出物を給与して、飼料の食べ残しの量、飼料の完食までの日数、栄養状態（血液検査の総コレステロール値、ビタミンＡ値、ＧＯＴ値）に与える本発明の甘草抽出物の影響を調べた。

対象は、肥育目的で子牛セリ市場にて購入して肥育牧場に導入した約９ヶ月齢～約１０ヶ月齢（生後２７５日齢から３０８日齢）の黒毛和種オス牛３６頭、約９ヶ月齢～約１０ヶ月齢（生後２７９日齢～３０９日齢）の黒毛和種メス牛３６頭であった。肥育牧場への導入時からオス・メスとも表８に示すように４頭１枠×３枠＝各区１２頭の３群に分けた。

ＫＳ区は実施例５の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加し、Ｋ区では比較例１の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加した。無給与区は甘草抽出物を飼料に添加しなかった。甘草抽出物以外の飼料は、オスには１頭当たり配合飼料３．０ｋｇ、イナワラ０．４ｋｇ、ビール・カス（水分５０％）２．０ｋｇ、オーツヘイ６．０ｋｇ、メスには１頭当たり配合飼料３．０ｋｇ、イナワラ０．４ｋｇ、ビール・カス（水分５０％）２．０ｋｇ、オーツヘイ５．０ｋｇを、１日３回に分けて、配合飼料、イナワラ、ビール・カス、オーツヘイの順番で、各群に同量を同時間に給与した。飼料摂取量・採食性の増加を確認するため、飼料添加剤（甘草抽出物）の量を通常より増量した。

ＫＳ区では、実施例５の甘草抽出物５ｇ／日／頭を肥育牧場導入日から１０日間、飼料添加剤として飼料に添加して給与した。Ｋ区では、比較例１の甘草抽出物５ｇ／日／頭を肥育牧場導入日から１０日間、飼料添加剤として飼料に添加して給与した。本試験は１０日間で打ち切った。

３．１食べ残し量と完食までの日数
上述のように、飼料を配合飼料、イナワラ、オーツヘイの順番で給与したため、残飼料が発生する場合はオーツヘイが残飼料となる。従ってオーツヘイの残飼料重量を食べ残し量として計測した。食べ残しの量の推移を図４７と図４８に示し、完食までの日数を図４９と図５０に示す。

図４８～図５２に示すように、オス肥育牛は、ＫＳ区では１２頭全て完食するまでに３日、Ｋ区は８日間を要し、無給与区は１０日間を要した。オスの完食までの平均日数はＫＳ区で２．６６日、Ｋ区で７．６６日、無給与区では８．３３日であった。メス肥育牛は、ＫＳ区では１２頭全てが完食するまでに４日、Ｋ区は９日間を要し、無給与区においては、１０日後でも完食に至らない牛がいた。完食までの平均日数はＫＳ区で３．６６日、Ｋ区で８．６６日（無給与区は１０日間で完食せず）であった。

この結果から、本発明の甘草抽出物は、肥育導入時の子牛のストレスを改善し、内臓器官や肝機能を改善することができるといえる。また、肥育導入時の子牛の食べ残しを減少させることで肥育導入後早い時期から増体をもたらすことができる。

試験３は肥育導入日から１０日間のみ行われたので、試験終了時（肥育導入から１０日目）にはまだ肥育途中であり、この時点での食肉の生産量も、与えた飼料と食肉生産量の重量比（飼料効率）もわからない。しかし、試験１，２と同様に、ＫＳ区、Ｋ区、無給与区で、甘草抽出物以外は同じ種類、同じ量の飼料を給与したにも関わらず、ＫＳ区で他区よりも食べ残し量が少なく（食餌摂取量が多く）、完食までの日数も少ないことから、本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することを肥育牧場導入後１０日間のみ行っても、飼料効率を増大させることができると考えられる。

試験４．生後約９１日齢から約１５０日齢まで
上述のように、子牛は生後約９０日齢で離乳されることが目安とされている。離乳後の生後約９１日齢から子牛セリ市場出荷時までの間に消化器官に負荷・負担がかかったり、ストレスがかかったりすることで、飼料摂取量が低下し、消化器官の発達が遅れる。消化器官の発達が遅れることにより飼料摂取量が低下する悪循環となる。これが増体と飼料効率の低下につながる。

そこで、生後約９１日齢から約１５０日齢までの牛に本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することにより、離乳後の子牛の食べ残しの量、栄養状態（血液検査の総コレステロール値、ビタミンＡ値、ＧＯＴ値）に与える本発明の甘草抽出物の影響を調べた。

対象は、生後約９１日齢～約１５０日齢までの黒毛和種オス子牛３０頭、メス子牛３０頭、合計６０頭であった。表９に示す３群に分けた。ここで、離乳前の生後約７０日齢で１回目の血液検査を行い、血液検査によって測定された総コレステロール値、ＶＡ値、ＧＯＴ値の各平均値が同等になるように３区に分けた。これらの値のうち、ＧＯＴ値の平均値が高い区をＫＳ区とした。

ＫＳ区は実施例５の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加し、Ｋ区では比較例１の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加した。無給与区は甘草抽出物を飼料に添加しなかった。甘草抽出物以外の飼料（代用乳、餌付け飼料、配合飼料、オーツヘイ）は表１０（オスの１頭当たりの給与飼料）と表１１（メスの１頭当たりの給与飼料）に示す飼料を１日３回に分けて、約９１日齢以降は配合飼料、オーツヘイの順番で、各群に同量を同時間に給与した。

ＫＳ区では、生後約９１日齢から約１５０日齢までの間、３ｇ／日／頭の実施例５の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加して給与した。Ｋ区では、生後約９１日齢から約１５０日齢までの間、３ｇ／日／頭の比較例１の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加して給与した。

４．１食べ残し量
上述のように、生後約９１日齢以降は飼料を配合飼料、オーツヘイの順番で給与したため、残飼料が発生する場合はオーツヘイが残飼料となる。従ってオーツヘイの残飼料重量を食べ残し量として計測した。食べ残しの量の推移を図５１と図５２に示す。

図５１と図５２に示すように、オスは、ＫＳ区では、５日目で完食し、完食が継続した。Ｋ区では、完食継続までに１１日間要した。無給与区では、更に日数を要し、完食継続までに１４日間要した。メスは、ＫＳ区では、オスよりも１日早く４日目で完食し、その後も完食が継続した。Ｋ区では、１日目から９日目までのバラつきを見せながら、１３日目で完食し、その後も完食が継続した。ＫＳ区ではＫ区と比較しても完食までに要する日数が少なかった。

本発明の甘草抽出物の給与が離乳後に開始されても、飼料摂取量を向上させる効果があることがわかった。

４．２血液検査結果（総コレステロール値、ＶＡ値、ＧＯＴ値）
牛の栄養状態や代謝状態を把握するため、血液検査を行い、総コレステロール値、ビタミンＡ値（ＶＡ値）、ＧＯＴ値を測定した。

全ての牛の血液検査（総コレステロール値、ＶＡ値、ＧＯＴ値）を生後約７０日齢時点と、約１５０日齢時点の２回、実施した。

オス・メス各区１０頭の平均値と１０頭中の数値最上位と最下位の２頭を除いた８頭の平均値を図５３～図５６（総コレステロール値）、図５７～図６０（ＶＡ値）、図６１～図６４（ＧＯＴ値）に示す。

図５３～図５６に示すように、甘草抽出物の給与開始前の約７０日齢の血液検査では、オス・メスともに総コレステロール値は各区の間でほとんど差が無かった。一方、約１５０日齢の血液検査では、オス・メス共にＫＳ区で最も高い総コレステロール値となっていた。Ｋ区では約７０日齢と約１５０日齢で総コレステロール値はほぼ横ばいであり、無給与区の総コレステロール値は約７０日齢よりも約１５０日齢の方が低かった。

図５７～図６０に示すように、ＶＡ値は、甘草抽出物の給与開始前の約７０日齢の血液検査では、オス・メスともに各区の間でほとんど差が無く、ＫＳ区ではむしろ他区よりも値が低かった。一方、約１５０日齢の血液検査では、オス・メス共にＫＳ区で最も高いＶＡ値となっていた。Ｋ区では約７０日齢と約１５０日齢でＶＡ値はほぼ横ばいであり、無給与区のＶＡ値は約７０日齢よりも約１５０日齢の方が低かった。

図６１～６４に示すように、ＧＯＴ値は、甘草抽出物の給与開始前の約７０日齢の血液検査では、オス・メスともにＫＳ区では他区よりも値が高かった。一方、約１５０日齢の血液検査では、オス・メス共にＫＳ区で最も低いＧＯＴ値となっていた。Ｋ区では約７０日齢と約１５０日齢でＧＯＴ値はほぼ横ばいであり、無給与区のＧＯＴ値は約７０日齢よりも約１５０日齢の方が高かった。

以上の結果から、離乳後に本発明の甘草抽出物の給与を開始しても、甘草フラボノイド類と、グリチルリチン酸以外の甘草サポニン類を含有するＫＳ区の甘草抽出物（実施例５）が、グリチルリチン酸による効果ではなく、グリチルリチン酸とその他の甘草サポニン類と甘草フラボノイド類の複合的な効果によって、栄養状態と代謝（総コレステロール値）、発育状態（ビタミンＡ値）、肝機能（ＧＯＴ値）によい影響を与えることがわかった。

試験４は生後約９１日齢から約１５０日齢までの間のみ行われたので、試験終了時にはまだ食肉の生産量も、与えた飼料と食肉生産量の重量比（飼料効率）もわからない。しかし、試験１，２と同様に、ＫＳ区、Ｋ区、無給与区で、甘草抽出物以外は同じ種類、同じ量の飼料を給与したにも関わらず、ＫＳ区で他区よりも食べ残し量が少なく（食餌摂取量が多く）、完食までの日数も少ないことから、本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することを離乳後に行っても、飼料効率を増大させることができると考えられる。

試験５．生後約５日齢から約６０日齢までの約２カ月間
牛の哺乳期に消化器官など内臓器官や肝機能に負荷がかかると、免疫力や代謝が低下し、下痢や風邪が発生する。内臓器官や肝機能の負荷は、哺乳期の高濃度の代用乳や配合飼料の摂取によって生じる場合がある。また、生後すぐに母牛から離されて飼育員によって育成されることによるストレス、成長に応じて飼料の種類や量が変更されることによるストレス、暑熱期・寒冷期のヒートストレス・コールドストレスや寒暖差など環境変化による肉体へのストレスによっても内臓器官や肝機能に負荷がかかったり、免疫力や代謝が低下したりする場合がある。特に子牛は発育が十分でないため、内臓器官や肝機能への負荷やストレスによって食欲不振になりやすく、栄養不足になり、さらに内臓器官や肝機能への負荷やストレスを増す悪循環に陥ることがあり、下痢や風邪になりやすい。

下痢の症状が発生すると、多くの場合、薬の投与、抗菌剤の投与、生菌剤の連続投与等の治療が行われる。下痢は体内の水分を奪い脱水症状を引き起こすこともあり、治療が長引くと免疫力や抵抗力の低下をまねき、風邪を同時に発症してしまうことが少なくない。

ここで、子牛に多く見られる下痢は、一般的に大きく分けて２つ知られている。１つは、高濃度のミルク及び飼料の摂取、暑熱期・寒冷期や寒暖差等による気象条件や初乳の摂取不足、飼料変化等により、内臓器官・消化器官に負荷がかかり代謝能力・免疫力が低下することで消化不良になることによる下痢である。もう１つは、細菌、ウイルス、寄生虫等が良質乾燥や飼料の中に混入していることであり、これはこまめに飼料等を取り換えることで防ぐことができるので、牛舎の衛生管理が原因であるともいえる。

そこで、生後約５日齢から約６０日齢までの子牛に本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することにより、消化不良による下痢の発生割合、消化不良による下痢の治療日数、風邪の発生割合、風邪の治療日数に与える本発明の甘草抽出物の影響を調べた。

対象は、生後約５日齢から約６０日齢の期間、黒毛和種子牛１５０頭とホルスタイン子牛３０頭であった。表１２に示す３つの区に分けた。

ＫＳ区は実施例５の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加し、Ｋ区では比較例１の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加した。無給与区は甘草抽出物を飼料に添加しなかった。甘草抽出物以外の飼料（代用乳、餌付け飼料、オーツヘイ）は、オス・メスとも、１日３回に分けて各群に同量を同時間に給与した。餌付け飼料とオーツヘイは生後約２週間後から給与した。

ＫＳ区では、生後約５日齢から生後約６０日齢まで、２ｇ／日／頭の実施例５の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加して給与した。Ｋ区では、生後約５日齢から生後約６０日齢まで、２ｇ／日／頭の比較例１の甘草抽出物を飼料添加剤として飼料に添加して給与した。

合計１８０頭の牛の消化不良による下痢の発生件数（頭数）を表１３と図６５に示し、下痢の治療日数を表１４と図６６に示す。

表１３と図６５に示すように、ＫＳ区では、約６０日齢までの下痢の発生件数がＫ区の５２％程度、無給与区の４２％程度であった。また、ＫＳ区ではほぼ全ての週において他区よりも下痢の発生件数が少なかった。過半数の牛が下痢をしなかったのはＫＳ区だけであった。

表１４と図６６に示すように、ＫＳ区では治療日数も他区に比べて少なかった。本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することによって、下痢の発生を抑え、かつ、下痢になっても重症化しにくく比較的短い治療期間で回復することがわかった。

従来、甘草は生薬の「大黄甘草湯」に用いられ、瀉下作用（下痢をする・させる）があることが知られている。しかしながら、本発明の甘草抽出物は、下痢をしない（させない）という従来の技術常識から予想できない新たな効果があることが確認できた。

本発明の甘草抽出物にはグリチルリチン酸だけでなく、グリチルリチン酸以外の甘草サポニン類と、甘草フラボノイド類が含まれている。これまでに延べてきたように、これらの成分の相乗効果によって、牛がストレスの影響を受けにくくなり、飼料摂取量を増加させ、消化吸収や免疫力や代謝を向上させ、増体させたことも、下痢をしにくくさせた一因であると考えられる。

合計１８０頭の牛の風邪の発生件数（頭数）を表１５と図６７に示し、風邪の治療日数を表１６と図６８に示す。

表１５と図６７に示すように、ＫＳ区では、約６０日齢までの風邪の発生件数がＫ区の３３％程度、無給与区の２２％程度であった。また、ＫＳ区ではほぼ全ての週において他区よりも風邪の発生件数が少なかった。

表１６と図６８に示すように、ＫＳ区では治療日数も他区に比べて少なかった。本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することによって、風邪の発生を抑え、かつ、風邪になっても重症化しにくく比較的短い治療期間で回復することがわかった。

また、Ｋ区と無給与区では、下痢も風邪も全期間に亘って発生しているが、発生数の増減は下痢と風邪で似ていることがわかる。免疫力や抵抗力の弱い牛は風邪と下痢を同時に発症しやすい。本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することによって、下痢と風邪をどちらも予防することができ、発症した場合でも重症化を防ぎ、治療日数を低減することができる。

子牛の風邪は、母牛からの移行免疫の低下、気候や環境の変化によるストレス、換気不良によるアンモニアガスやほこりの吸引など牛舎の衛生管理が不十分であることなどが原因である。これらの原因によって免疫力や抵抗力が低下したところへウイルスや細菌に感染して風邪をひく。健康な子牛の体温は３８．５～３９℃であるが、風邪をひくと３９．５～４０℃以上の発熱や、咳、鼻水、呼吸が早くなるなどの症状が見られる。また、元気消失、起立不能、哺乳困難、虚弱、食欲不振に陥り、重症化すると死亡したり、回復後も発育不良になったりすることがあるため、早期治療と予防の必要がある。

従来、予防の１つの方法として、初乳を飲ませ、免疫力や抵抗力をつけさせていた。しかし、初乳給与不足や飼料を食べない牛は栄養不足になる。また、これまでに述べたように、増体を目的とした高濃度のミルクや高濃度の飼料の摂取によって消化器官など内臓器官や肝機能に負荷がかかり、免疫力や抵抗力が低下し、風邪をひくことがある。

試験１～試験５の結果に示されているように、本発明の甘草抽出物は、飼料摂取量の増加、栄養の消化吸収と代謝の改善、発育状態と免疫力の改善、肝機能の改善、体重増加などの効果がある。本発明の甘草抽出物を飼料添加剤として給与することによって、風邪の原因となる栄養不足や免疫力の低下を防ぎ、風邪を予防し、重症化を防ぎ、治療日数を低減することができる。

本発明の甘草抽出物は、飼料摂取量の増加、栄養の消化吸収と代謝の改善、発育状態と免疫力の改善、肝機能の改善、体重増加、枝肉重量の増加、枝肉歩留率の向上、下痢の予防、下痢の治療日数の低減、風邪の予防、および／または、風邪の治療日数の低減を目的とした多機能性の飼料添加剤の原料として用いることができる。

試験６．甘草抽出物と水溶性食物繊維を含む飼料添加剤の給与
６．１下痢の発生件数
生後約５日齢から約６０日齢の黒毛和種の子牛オス６０頭と黒毛和種の子牛メス６０頭、合計１２０頭を対象に、生後約６０日間の下痢の発生割合と完治までの治療日数を調べた。

対象の牛を表１７に示す給与区と無給与区に分けた。給与区の牛には実施例５の甘草抽出物を含む飼料添加剤Ａと飼料添加剤Ｂを飼料に添加して給与した。無給与区の飼料には甘草抽出物を添加しなかった。

飼料添加剤Ａは、実施例５の甘草抽出物１０質量％、水溶性食物繊維としてグルコマンナン（平均粒子径１５０～２００メッシュ）３０質量％、および、デンプン分解物（松谷化学工業株式会社、パインデックス＃１）６０質量％を均一に混合して調製された。

飼料添加剤Ｂは、実施例５の甘草抽出物４０質量％と水溶性食物繊維としてグルコマンナン（平均粒子径１５０～２００メッシュ）６０質量％を均一に混合して調製された。

飼料添加剤Ａ，Ｂの成分は表１８に示す通りであった。

生後約５日齢から生後約３０日齢までの期間は、飼料添加剤Ａを代用乳に均一に分散させて、５ｇ／頭を朝・夕の２回給与し、合計１０ｇ／日／頭給与した。生後約３１日齢から生後約６０日齢の期間は、飼料添加剤Ｂに水を適量加えて団子状にしたものを２．５ｇ／頭を朝・夕の２回経口給与し、合計５ｇ／日／頭給与した。

下痢の発生件数（頭数）と発生割合を表１９に示す。

表１９に示すように、給与区では無給与区の１／３程度まで下痢の発生が抑えられた。

６．２下痢の治療日数
下痢をした子牛を対象に飼料添加剤Ａと飼料添加剤Ｂを給与して治療日数を調べた。対象は、生後日齢に関係なく、下痢をしたオス子牛３６頭とメス子牛２８頭、合計６４頭であり、表２０に示すように給与区と無給与区に分けた。

下痢の治療日数と平均治療日数を表２１に示す。

表２１に示すように、給与区では無給与区の１／３以下に下痢の治療日数を短縮することができた。本発明の甘草抽出物にグルコマンナンを添加した本発明の飼料添加剤によって、甘草抽出物による効果とグルコマンナンによる整腸作用が加わり、効果的に下痢の発生を抑え、治療日数を低減することができた。

以上の通り、本発明の飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、哺乳動物または家畜の食餌摂取量の増量、血液中の総コレステロール値の増加、血液中のビタミンＡ値の増加、血液中のＧＯＴ値の低下、体重の増加、下痢の予防、下痢の治療日数の低減、風邪の予防、および、風邪の治療日数の低減からなる群から選択される少なくとも１つによって、健康状態を改善できることが確認された。

また、以上の通り、哺育、離乳、肥育のどの段階で行った試験でも、ＫＳ区、Ｋ区、無給与区で甘草抽出物以外は同じ種類、同じ量の飼料を給与したにも関わらず、ＫＳ区で他区よりも食べ残し量が少なく（食餌摂取量が多く）、増体や枝肉重量の増加、枝肉歩留率の増大、食用肝臓廃棄率の低下の効果があった。本発明の飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、与えた飼料と食肉生産量の重量比（飼料効率）を増大させられることが確認された。

以上に開示された実施の形態と実施例はすべての点で例示であって制限的なものではないと考慮されるべきである。本発明の範囲は、以上の説明ではなく、特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変形を含むものである。

Claims

（Ａ）グリチルリチン酸、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸、および、グリチルレチン酸誘導体からなる群から選択される１つ以上と、
（Ｂ）前記（Ａ）以外の甘草サポニン類と、
（Ｃ）甘草フラボノイド類とを含み、
前記（Ｂ）は、少なくともリコリスサポニンＨ２を２質量％以上と、リコリスサポニンＧ２を０．５質量％以上と、マセドノシドＡを０．５質量％以上とを含み、
前記（Ｃ）は、少なくともリクイリチンアピオシドを２．４質量％以上と、イソリクイリチンアピオシドを０．４質量％以上と、イソリクイリチンを０．３質量％以上とを含む、甘草抽出物。
前記（Ａ）を１０質量％以上、および／または、
前記（Ｂ）を３質量％以上、および／または、
前記（Ｃ）を４質量％以上含む、請求項１に記載の甘草抽出物。
前記（Ａ）を１４質量％以上、
前記（Ｂ）を９質量％以上、
前記（Ｃ）を１９質量％以上含む、請求項１に記載の甘草抽出物。
前記（Ｂ）は、少なくともリコリスサポニンＨ２を６．３質量％以上と、リコリスサポニンＧ２を０．８質量％以上と、マセドノシドＡを２．６質量％以上とを含み、
前記（Ｃ）は、少なくともリクイリチンアピオシドを５．６質量％以上と、イソリクイリチンアピオシドを１．８質量％以上と、イソリクイリチンを２．７質量％以上とを含む、請求項１に記載の甘草抽出物。
前記（Ａ）を１４．５質量％以上、
前記（Ｂ）を９．７質量％以上、
前記（Ｃ）を１９．８質量％以上含み、
前記（Ｂ）は、少なくともリコリスサポニンＨ２を６．３質量％以上と、リコリスサポニンＧ２を０．８質量％以上と、マセドノシドＡを２．６質量％以上とを含み、
前記（Ｃ）は、少なくともリクイリチンアピオシドを５．６質量％以上と、イソリクイリチンアピオシドを１．８質量％以上と、イソリクイリチンを２．７質量％以上とを含む、請求項１に記載の甘草抽出物。
請求項１から請求項５までのいずれか１項に記載の甘草抽出物を含む、哺乳動物または家畜の飼料添加剤。
水溶性食物繊維を含む、請求項６に記載の哺乳動物または家畜の飼料添加剤。
前記甘草抽出物と前記水溶性食物繊維を、甘草抽出物：水溶性食物繊維＝１０：９０～４０：６０の質量比で含む、請求項７に記載の飼料添加剤。
前記水溶性食物繊維はグルコマンナンである、請求項７に記載の飼料添加剤。
請求項６に記載の飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、哺乳動物または家畜の食餌摂取量の増量、血液中の総コレステロール値の増加、血液中のビタミンＡ値の増加、血液中のＧＯＴ値の低下、体重の増加、下痢の予防、下痢の治療日数の低減、風邪の予防、および、風邪の治療日数の低減からなる群から選択される少なくとも１つによって、健康状態を改善する、哺乳動物または家畜の飼育方法。
前記哺乳動物または家畜は食肉生産用の家畜であり、
請求項６に記載の飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、枝肉の重量を増加し、枝肉歩留率を改善し、および／または、肉畜の肝臓廃棄率を低減する、哺乳動物または家畜の飼育方法。
前記哺乳動物または家畜は食肉生産用の家畜であり、
請求項６に記載の飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、飼料効率を増大させる方法。