JP2024053914A - 甘草抽出物 - Google Patents
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Abstract
Description
工程Aは甘草根から抽出液を得る工程である。甘草の根の1種、または2種以上を乾燥し破砕し、水およびアンモニアを加えて甘草根から抽出液を得る。抽出液に硫酸を加えて沈殿させ、粘エキスと上清を分離する。粘エキスを乾燥し、得られた1次抽出物を甘草抽出物(濃縮甘草)とする。
工程Bは分離精製工程である。工程Aで得られた濃縮甘草をエタノール水溶液に溶解し、ろ過して不溶物を取り除く。得られた抽出液にアンモニアを加え甘草サポニンをアンモニウム塩として晶析(結晶化)させ、ろ過して結晶と抽出母液に分離する。抽出母液を減圧濃縮し、エタノールを回収し、炭酸ナトリウムを加えpHを6~7に調整する。得られた濃縮液をスプレードライで乾燥し、混合し、甘草抽出物を得る。
工程Cは別の分離精製工程である。工程Bで得られた抽出母液に活性炭を加えて不純物を取り除き、得られた液をスプレードライで乾燥して甘草抽出物を得ることができる。
甘草としてグラブラ(glabra)種とウラレンシス(uralensis)種とインフラータ(inflata)種を用いて、以下の工程で甘草抽出物を製造した。実施例1,2,4,5,7,8および比較例1ではグラブラ(glabra)種を用いた。実施例9ではインフラータ(inflata)種を用いた。実施例3ではグラブラ(glabra)種とウラレンシス(uralensis)種を用いた。実施例6,10ではグラブラ(glabra)種とインフラータ(inflata)種を用いた。
甘草の根の1種、2種、または、3種を乾燥し破砕した。粉砕した甘草根1kgに約8~10Lの常温の水およびアンモニア水を適量加えて抽出し、抽出液を得た。その際、pH9前後になるように、加えるアンモニア水の量を調整した。得られた抽出液に硫酸を加えて成分を沈殿させ、粘エキスと上清(上澄み)を分離した。その際、硫酸の量は沈殿スラッジのpH1.8前後になるよう調整した。分離した粘エキスを乾燥し、得られた1次抽出物を甘草抽出物(濃縮甘草)とした。工程Aは、所望の成分含有量を得るまで、必要に応じて繰り返した。
工程Aで得られた濃縮甘草100gに90%前後のエタノール600~800mLを加えて抽出し、ろ過して不要物を除去し、抽出液を得た。抽出液を50~60℃に加温し、アンモニアを加え、甘草サポニンをアンモニア塩として晶析(結晶化)させた。常温まで冷却した後、甘草サポニンのアンモニウム塩を遠心分離して取り除き、抽出母液(甘草抽出液)を得た。その際、加えるアンモニア水の量は、晶析スラッジのpH5前後になるように調整した。ここまでの工程は、所望の成分含有量を得るまで、必要に応じて繰り返した。抽出母液(甘草抽出液)を減圧濃縮し、エタノールを回収し、残液を約100mLとした。減圧濃縮した抽出母液(甘草抽出液)に炭酸ナトリウムを加え、pHを6~7に調整した。得られた液をスプレードライで乾燥し、甘草抽出物を得た。
工程Bで得られた抽出母液(甘草抽出液)に活性炭を加えて不純物を取り除き、この工程を1~2回行い、抽出母液(甘草抽出液)を得た。得られた液をスプレードライで乾燥して甘草抽出物を得た。
各実施例と比較例の甘草抽出物の(A)グリチルリチン酸、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸、および、グリチルレチン酸誘導体からなる群から選択される1つ以上のうち、グリチルリチン酸、および、(B)リコリスサポニンH2、リコリスサポニンG2、マセドノシドAを次の条件でHPLC分析によって測定した。
測定用の試料の調製は、水に溶ける甘草抽出物は(1)、水に溶けない甘草抽出物は(2)に従って行った。
試料約200mgを量り取り、水を加えて正確に100mLとして試料溶液とした。別にグリチルリチン酸標準品を用いて調製した標準溶液を用いて液体クロマトグラフィーにより分析を行った。ただし試料の採取量は乾燥物換算%で補正した。
試料0.1gを量り取り、アンモニア水(28%)3滴及び水で正確に50mLとし試料溶液とした。別にグリチルリチン酸標準品に希エタノールを加えて標準溶液を調製した。標準溶液を用いて液体クロマトグラフィーにより分析を行った。ただし試料の採取量は式1によって乾燥物換算%で補正した。
WS:標準溶液濃度 WT:乾燥物換算した試料溶液濃度
グリチルリチン酸測定の試験条件(高圧対応HPLC(アジレント・テクノロジー株式会社製LC1290))は次の通りであった。
検出器:紫外吸光光度計(測定波長254nm)
カラム:Tosoh TSK Gel ODS80TsQA
カラム温度:30℃付近の一定温度
流速:グリチルリチン酸の保持時間が約7~8分になるように調整した
移動相:2%酢酸:アセトニトリル=60:40
注入量:20μL
甘草サポニン類測定の試験条件(高圧対応HPLC(アジレント・テクノロジー株式会社製LC1290))は次の通りであった。
検出器:紫外吸光光度計(測定波長:254nm)
カラム:TSK Gel ODS80TsQA
カラム温度:30℃付近の一定温度
流速:0.8mL/分
移動相:移動相A:0.1%ギ酸(水)/移動相B:0.1%ギ酸(アセトニトリル)
注入量:20μL
移動相の濃度勾配は、流量比をA:B=90:10(0~3分)から10:90(3分~60分)に変化させた。
各実施例と比較例の甘草フラボノイド類は次の試験条件でHPLC分析によって測定した。測定用の試料は上述のグリチルリチン酸とその他の甘草サポニン類の測定と同様に調製した。標準溶液としてはグリチルリチン酸標準溶液(測定波長254nm)、リクイリチン酸標準溶液(測定波長280nm)、イソリクイリチゲニン酸標準容器(測定波長355nm)、イソリクイリチン酸標準溶液(測定波長355nm)を用いて、試料溶液及び標準溶液を液体クロマトグラフィーによりグラジェント分析しフラボノイド含量を求めた。ただし試料の乾燥物換算%で補正した。
検出器:紫外吸光光度計(測定波長:280nm,355nm)
カラム:TSK Gel ODS80TsQA
カラム温度:30℃付近の一定温度
流速:0.8mL/分
移動相:移動相A:0.1%ギ酸(水)/移動相B:0.1%ギ酸(アセトニトリル)
注入量:20μL
移動相の濃度勾配は、流量比をA:B=90:10(0~3分)から10:90(3分~60分)に変化させた。
子牛は生後、高濃度の代用乳で哺乳育成された後、生後約80日齢から徐々に離乳して飼料給与による育成に切り替えられる。高濃度の代用乳によって消化器官に負担がかかると、飼料摂取量の低下やバラツキを引き起こす。また、離乳時に哺乳育成枠から飼料育成枠に移動する際の環境変化によるストレスや群飼いによるストレス、代用乳から配合飼料や粗飼料への切り替えによるストレスによっても飼料摂取量の低下やバラツキが起きる。このような消化器官への負担、ストレス、飼料摂取量の低下やバラツキによって、消化器官の発達、例えば、胃の中のルーメンの発達が遅れ得る。飼料摂取量の低下やバラツキ、消化器官の発達の遅れは、発育を遅らせ、飼料効率を低下させる。
上述のように、約81日齢以降は飼料を配合飼料、イナワラ、オーツヘイの順番で給与したため、残飼料が発生する場合はオーツヘイが残飼料となる。従ってオーツヘイの残飼料重量を食べ残し量として計測した。約81日齢の離乳初日を第1日目とし、食べ残しの量の推移を図1と図2に示す。
牛の栄養状態や代謝状態を把握するため、血液検査を行い、総コレステロール値、ビタミンA値(VA値)、GOT値を測定した。総コレステロール値は総合的な栄養摂取状況を反映する。VA値は成長や発育に関連し、ビタミンAの欠乏は発育障害や免疫力の低下をまねく。GOT値は急性の肝障害や臓器障害の判断材料となる。特にGOT値が高値の場合は肝臓の疾患が疑われる。
牛はセリ市場出荷時に、セリ市場にて個体別体重を必ず測定される。セリ市場出荷時に測定した体重のオス・メス各区10頭の平均値と10頭中の数値最上位と最下位の2頭を除いた8頭の平均値を図15~図18に示す。なお、セリ市場開催日が限定されているため、出荷時日齢に多少の差がある。
育成農家からセリ市場に出荷された子牛は、その後、肥育農家に導入される。この間、子牛は、育成農家から子牛セリ会場へトラック輸送により移動し、セリ購入落札後に新しい肥育農家の牧場にトラックで移送されることによる移動のストレスや、生育場所と飼育者等が変わることによる環境変化のストレスを受ける。北海道の市場から鹿児島、宮崎などの牧場までの長距離の移動もよくある。さらに、肥育牧場に導入された日から、給与される飼料の種類や量などが変わることによるストレスや、肥育牧場でのヒートストレスとコールドストレス(暑熱期・寒冷期のストレス)や群飼い等のストレスもある。これらのストレスは牛の飼料摂取量、栄養状態、代謝、発育、肝機能に悪影響を及ぼし得る。また、肥育牧場への導入時には、増体目的で既に高濃度の配合飼料や多種多様な添加剤等を食餌していたことで消化器官や内臓器官、特に肝機能がダメージを受けていることが多い。
上述のように、飼料を配合飼料、イナワラ、ビール・カス、オーツヘイの順番で給与したため、残飼料が発生する場合はオーツヘイが残飼料となる。従ってオーツヘイの残飼料重量を食べ残し量として計測した。食べ残しの量の推移を図19~図20に示す。
全ての牛の血液検査(総コレステロール値、VA値、GOT値)を肥育牧場への導入時、導入後6ヶ月、導入後12か月の3回実施し、総コレステロール値、GOT値、VA値を測定した。
肥育牧場の導入時と枝肉市場の到着時の体重と増体重を測定した。子牛セリ市場で計測された体重を肥育牧場の導入時の体重とした。肥育牧場から枝肉市場に到着した時に計測した体重を到着時体重とした。導入時体重と到着時体重の差を増体量とした。
屠畜時における食用肝臓の廃棄割合を確認した。食用肝臓の廃棄は経済的損失を招く。枝肉市場出荷時における鋸屑肝、肝出血などの肝臓病変は、肥育期間中の肝臓への負担増加が原因で発生する。肝臓病変が少ないことは、肝機能を健康な状態に維持していたことを示す。
枝肉市場で枝肉重量を測定した。また、枝肉市場到着時の体重と枝肉重量から枝肉歩留率((枝肉重量/枝肉市場到着時の体重)×100)を算出した。なお、枝肉とは、生体から頭、皮、内臓、血液などを抜いた状態をいい、可食部分となる。
「試験2.肥育導入時から枝肉市場出荷まで」において述べた通り、肥育牧場への導入時の子牛は移動や環境変化のストレスを特に受ける。また、肥育牧場への導入時には既に増体目的の食餌によって消化器官など内臓器官や肝機能等がダメージを受けている。そこで、肥育牧場への導入日から10日間のみ甘草抽出物を給与して、飼料の食べ残しの量、飼料の完食までの日数、栄養状態(血液検査の総コレステロール値、ビタミンA値、GOT値)に与える本発明の甘草抽出物の影響を調べた。
上述のように、飼料を配合飼料、イナワラ、オーツヘイの順番で給与したため、残飼料が発生する場合はオーツヘイが残飼料となる。従ってオーツヘイの残飼料重量を食べ残し量として計測した。食べ残しの量の推移を図47と図48に示し、完食までの日数を図49と図50に示す。
上述のように、子牛は生後約90日齢で離乳されることが目安とされている。離乳後の生後約91日齢から子牛セリ市場出荷時までの間に消化器官に負荷・負担がかかったり、ストレスがかかったりすることで、飼料摂取量が低下し、消化器官の発達が遅れる。消化器官の発達が遅れることにより飼料摂取量が低下する悪循環となる。これが増体と飼料効率の低下につながる。
上述のように、生後約91日齢以降は飼料を配合飼料、オーツヘイの順番で給与したため、残飼料が発生する場合はオーツヘイが残飼料となる。従ってオーツヘイの残飼料重量を食べ残し量として計測した。食べ残しの量の推移を図51と図52に示す。
牛の栄養状態や代謝状態を把握するため、血液検査を行い、総コレステロール値、ビタミンA値(VA値)、GOT値を測定した。
牛の哺乳期に消化器官など内臓器官や肝機能に負荷がかかると、免疫力や代謝が低下し、下痢や風邪が発生する。内臓器官や肝機能の負荷は、哺乳期の高濃度の代用乳や配合飼料の摂取によって生じる場合がある。また、生後すぐに母牛から離されて飼育員によって育成されることによるストレス、成長に応じて飼料の種類や量が変更されることによるストレス、暑熱期・寒冷期のヒートストレス・コールドストレスや寒暖差など環境変化による肉体へのストレスによっても内臓器官や肝機能に負荷がかかったり、免疫力や代謝が低下したりする場合がある。特に子牛は発育が十分でないため、内臓器官や肝機能への負荷やストレスによって食欲不振になりやすく、栄養不足になり、さらに内臓器官や肝機能への負荷やストレスを増す悪循環に陥ることがあり、下痢や風邪になりやすい。
6.1 下痢の発生件数
生後約5日齢から約60日齢の黒毛和種の子牛オス60頭と黒毛和種の子牛メス60頭、合計120頭を対象に、生後約60日間の下痢の発生割合と完治までの治療日数を調べた。
下痢をした子牛を対象に飼料添加剤Aと飼料添加剤Bを給与して治療日数を調べた。対象は、生後日齢に関係なく、下痢をしたオス子牛36頭とメス子牛28頭、合計64頭であり、表20に示すように給与区と無給与区に分けた。
各実施例と比較例の甘草フラボノイド類は次の試験条件でHPLC分析によって測定した。測定用の試料は上述のグリチルリチン酸とその他の甘草サポニン類の測定と同様に調製した。標準溶液としてはグリチルリチン酸標準溶液(測定波長254nm)、リクイリチン標準溶液(測定波長280nm)、イソリクイリチゲニン標準溶液(測定波長355nm)、イソリクイリチン標準溶液(測定波長355nm)を用いて、試料溶液及び標準溶液を液体クロマトグラフィーによりグラジェント分析しフラボノイド含量を求めた。ただし試料の乾燥物換算%で補正した。
Claims (11)
- (A)グリチルリチン酸、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸、および、グリチルレチン酸誘導体からなる群から選択される1つ以上と、
(B)前記(A)以外の甘草サポニン類と、
(C)甘草フラボノイド類とを含み、
前記(B)は、リコリスサポニンH2と、リコリスサポニンG2と、マセドノシドAを含む、甘草抽出物。 - 前記(C)甘草フラボノイド類は、リクイリチンアピオシド、リクイリチン、リクイリチゲニン、リクイリチゲニンアピオシド、イソリクイリチン、および、
イソリクイリチゲニンを含む、請求項1に記載の甘草抽出物。 - 前記(A)を10質量%以上、および/または、
前記(B)を3質量%以上、および/または、
前記(C)を4質量%以上含む、請求項2に記載の甘草抽出物。 - 前記(B)はリコリスサポニンH2を2質量%以上含み、リコリスサポニンG2を0.5質量%以上含み、マセドノシドAを0.5質量%以上含む、請求項3に記載の甘草抽出物。
- 前記(A)を14質量%以上、
前記(B)を9質量%以上、
前記(C)を19質量%以上含む、請求項4に記載の甘草抽出物。 - 請求項1から請求項5までのいずれか1項に記載の甘草抽出物と、任意で水溶性食物繊維を含む、哺乳動物または家畜の飼料添加剤。
- 前記甘草抽出物と前記水溶性食物繊維を、甘草抽出物:水溶性食物繊維=10:90~40:60の質量比で含む、請求項6に記載の飼料添加剤。
- 前記水溶性食物繊維はグルコマンナンである、請求項7に記載の飼料添加剤。
- 請求項6に記載の飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、哺乳動物哺乳動物または家畜の食餌摂取量の増量、血液中の総コレステロール値の増加、血液中のビタミンA値の増加、血液中のGOT値の低下、体重の増加、下痢の予防、下痢の治療日数の低減、風邪の予防、および、風邪の治療日数の低減からなる群から選択される少なくとも1つによって、健康状態を改善する、哺乳動物または家畜の飼育方法。
- 前記哺乳動物または家畜は食肉生産用の家畜であり、
請求項6に記載の飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、枝肉の重量を増加し、枝肉歩留率を改善し、および/または、肉畜の肝臓廃棄率を低減する、哺乳動物または家畜の飼育方法。 - 前記哺乳動物または家畜は食肉生産用の家畜であり、
請求項6に記載の飼料添加剤を哺乳動物または家畜に給与することによって、飼料効率を増大させる方法。
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