JP7264815B2 - Lepidopteran昆虫に対する活性を有する殺虫毒性タンパク質 - Google Patents
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Description
本出願は、2017年1月12日出願の米国仮出願番号62/445,313の利益を主張するものであり、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書では、2018年1月11日に作成された「MONS434WO―sequence listing.txt」という名称のファイルを含有するコンピュータ可読形式の配列表を提供する。このファイルはMS-Windows(登録商標)による測定において166,134バイトであり、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。この配列表は配列番号:1~配列番号:12から構成される。
Bacillus thuringiensis(Bt)細菌種が産生する昆虫阻害性タンパク質は当技術分野において周知である。特定のBtタンパク質を使用し、1種または複数種のこのようなタンパク質を含有する農業的に許容される製剤を植物に散布して、殺虫剤として有効な量のこのようなタンパク質を含有するように配合した組成物で種子をコーティングすることにより、または、結果的に有効となる1種または複数種のタンパク質を植物/種子内で発現させることにより、作物植物の農業害虫を防除することができる。
配列番号:1は、BCW 001 Lepidopteran毒性タンパク質をコードする天然B.thuringiensis株EG4384のヌクレオチド配列である。
本実施例は、毒性タンパク質BCW 001の発見及び解析、ならびに、キメラ毒性BCW 002及びBCW 003の構築について教示する。
本実施例は、BCW 001、002及び003タンパク質の効果的なLepidopteran害虫防除生物活性について教示する。
本実施例は、BCW 001のドメインII及びIIIをその他のCry1毒素などの対応するドメインに置換する際に、このようなドメインが、クロヨトウムシ生物活性をその他のCry1毒性タンパク質に伝えるのに十分であることについて教示する。
本実施例では、様々なLepidopteran害虫に対するバイオアッセイで試験を行った際のBCW 001、002及び003の毒性特性について説明する。
本実施例は、植物、植物に使用する植物ベクター及び構築物の作製、ならびに、本発明のタンパク質を発現する植物の生成に使用する、本発明のタンパク質をコードする合成配列の構築について教示する。
Claims (11)
- (a)配列番号:10または配列番号:12のアミノ酸配列に対して少なくとも99%の同一性を示すポリペプチドフラグメントであって、昆虫阻害活性を有するポリペプチドフラグメント、または
(b)配列番号:8のアミノ酸配列に対して少なくとも99%の同一性を示すポリペプチドフラグメントであって、昆虫阻害活性を有するポリペプチドフラグメント、
をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド構築物であって、
前記ヌクレオチド配列は異種プロモーター配列に機能的に連結する、
前記ポリヌクレオチド構築物。 - 前記(a)のポリペプチドフラグメント及び前記(b)のポリペプチドフラグメントは、スポドプテラ・エクシグア(Spodoptera exigua)、スポドプテラ・リトゥラ(Spodoptera litura)、マメストラ・コンフィギュラタ(Mamestra configurata)、ストリアコスタ・アルビコスタ(Striacosta albicosta)、トリコプルシア・ニ(Trichoplusia ni)、シュードプルシア・インクルデンス(Pseudoplusia includens)、アンチカルシア・ゲマタリス(Anticarsia gemmatalis)、ハイペナ・スカブラ(Hypena scabra)、ヘリオチス・ビレセンス(Heliothis virescens)、アグロティス・サブテラネア(Agrotis subterranea)、シューダレティア・ユニプンクタ(Pseudaletia unipuncta)、アグロティス・イプシロン(Agrotis ipsilon)、アグロティス・オルトゴニア(Agrotis orthogonia)、オストリニア・ヌビラリス(Ostrinia nubilalis)、アミュエロイス・トランシテッラ(Amyelois transitella)、クランバス・カリギノセルス(Crambus caliginosellus)、ヘルペトグラマ・リカルシサリス(Herpetogramma licarsisalis)、ホモエオソマ・エレクテラム(Homoeosoma electellum)、エラスモパルプス・リグノセルス(Elasmopalpus lignosellus)、シディア・ポモネラ(Cydia pomonella)、エンドピザ・ビテアナ(Endopiza viteana)、グラホリタ・モレスタ(Grapholita molesta)、スレイマ・ヘリアンサナ(Suleima helianthana)、プルテラ・キロステラ(Plutella xylostella)、ペクチノホラ・ゴシピエラ(Pectinophora gossypiella)、リマントリア・ジスパル(Lymantria dispar)、アラバマ・アルギラセア(Alabama argillacea)、アルキプス・アルギロスピラ(Archips argyrospila)、アルキプス・ロザナ(Archips rosana)、キロ・スプレサリス(Chilo suppressalis)、クナファロクロチス・メジナリス(Cnaphalocrocis medinalis)、クランバス・カリギノセルス(Crambus caliginosellus)、クランバス・テテレルス(Crambus teterrellus)、ジアトラエア・グランジオセラ(Diatraea grandiosella)、ジアトラエア・サッカラリス(Diatraea saccharalis)、エアリアス・インスラナ(Earias insulana)、エグリアス・ビテラ(Egrias vittella)、ヘリコベルパ・アルミゲラ(Helicoverpa armigera)、ヘリコベルパ・ゼア(Helicoverpa zea)、ヘリオチス・ビレセンス(Heliothis virescens)、ヘルペトグラマ・リカルシサリス(Herpetogramma licarsisalis)、ロベシア・ボトラナ(Lobesia botrana)、ペクチノホラ・ゴシピエラ(Pectinophora gossypiella)、フィロクニスティス・シトレラ(Phyllocnistis citrella)、ピエリス・ブラッシカエ(Pieris brassicae)、ピエリス・ラパエ(Pieris rapae)、プルテラ・キロステラ(Plutella xylostella)、及びツタ・アブソルタ(Tuta absoluta)からなる群から選択されるレピドプテラ(Lepidopteran)種に対する阻害活性を示す、請求項1に記載のポリヌクレオチド構築物。
- 請求項1に記載のポリヌクレオチド構築物を含むベクター。
- 請求項1に記載のポリヌクレオチド構築物を含む宿主細胞であって、前記宿主細胞は、細菌細胞、イースト細胞及び植物細胞からなる群から選択される、前記宿主細胞。
- 前記植物細胞は、アルファルファ、バナナ、大麦、インゲン、ブロッコリー、キャベツ、アブラナ属、人参、キャッサバ、トウゴマ、カリフラワー、セロリ、ヒヨコマメ、ハクサイ、柑橘類、ココナッツ、コーヒー、トウモロコシ、クローバー、綿、ウリ科、キュウリ、ダグラスモミ、ナス、ユーカリ、亜麻、ニンニク、ブドウ、ホップ、リーキ、レタス、テーダマツ、キビ、メロン、ナッツ、オート麦、オリーブ、タマネギ、観賞植物、ヤシ、牧草、エンドウ、ピーナッツ、コショウ、キマメ、マツ、ジャガイモ、ポプラ、カボチャ、ラジアータマツ、ダイコン、菜種、イネ、根茎、ライ麦、ベニバナ、低木、モロコシ、ダイオウマツ、ダイズ、ホウレンソウ、トウナス、イチゴ、サトウダイコン、サトウキビ、ヒマワリ、スイートコーン、モミジバフウ、サツマイモ、スイッチグラス、茶、タバコ、トマト、ライ小麦、芝草、スイカ及び小麦の植物細胞からなる群から選択される、請求項4に記載の宿主細胞。
- 請求項1に記載のポリヌクレオチド構築物を含む植物。
- 請求項6に記載の植物から生成された種子であって、前記種子は検出可能量の前記ポリヌクレオチド構築物を含む、前記種子。
- 前記植物から生成された種子、花粉、子孫、植物細胞、植物組織及び商品生産物は、検出可能量の前記ポリヌクレオチド構築物を含み、前記商品生産物が、バイオマス、油、粗びき粉、動物飼料、穀粉、フレーク、糠、リント及び加工種子からなる群から選択される、請求項6に記載の植物。
- 検出可能量の請求項1に記載のポリヌクレオチド構築物を含む生物試料。
- 請求項1に記載のポリヌクレオチド構築物を含む種子を生成するための方法であって、前記方法は、
(a)前記ポリヌクレオチド構築物を含む1つまたは複数の種子を植えることと、
(b)前記種子から植物を栽培することと、
(c)前記植物から多数の種子を収穫することであって、前記種子は前記ポリヌクレオチド構築物を含む、前記収穫することと、
を含む、
前記方法。 - 機能的に連結する、
(a)Cry1AドメインIアミノ酸配列を含む第1のペプチドセグメントと、
(b)配列番号:2のアミノ酸256~606を含む第2のペプチドセグメントと、
を含むレピドプテラ(Lepidopteran)毒性タンパク質であって、
前記レピドプテラ(Lepidopteran)毒性タンパク質は、クロヨトウムシ(A.ipsilon)、オオタバコガ(H.zea)、西部インゲンヨトウムシ(S.albicosta)、ヨーロッパアワノメイガ(O.nubilalis)、南西部アワノメイガ(D.grandiosella)、イラクサギンウワバ(T.ni)、ダイズシャクトリムシ(P.includens)、及びサトウキビメイガ(D.saccharalis)からなる群から選択されるレピドプテラ(Lepidopteran)害虫に対して試験を行う際に、毒性の生物活性を示す、
前記レピドプテラ(Lepidopteran)毒性タンパク質。
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