JP7248693B2 - 溶液中の生物分子またはリガンドを検出し、定量化する生物発光バイオセンサー - Google Patents
溶液中の生物分子またはリガンドを検出し、定量化する生物発光バイオセンサー Download PDFInfo
- Publication number
- JP7248693B2 JP7248693B2 JP2020545086A JP2020545086A JP7248693B2 JP 7248693 B2 JP7248693 B2 JP 7248693B2 JP 2020545086 A JP2020545086 A JP 2020545086A JP 2020545086 A JP2020545086 A JP 2020545086A JP 7248693 B2 JP7248693 B2 JP 7248693B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- luciferase
- domain
- biosensor
- binding
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/542—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with steric inhibition or signal modification, e.g. fluorescent quenching
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/66—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving luciferase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
- G01N21/763—Bioluminescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6845—Methods of identifying protein-protein interactions in protein mixtures
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Description
サンプルを本発明の第1の態様のバイオセンサーと接触させるステップと;
サンプルの存在下でバイオセンサーの発光の変化を決定するステップと;
サンプルを本発明の第2の態様のバイオセンサーと接触させるステップと、
サンプルの存在下でバイオセンサーの発光の変化を決定するステップと、
リガンドの定量的なおよび/または定性的な存在または非存在に対する、サンプルの存在下でサンプルの発光変化を決定するステップと、を含む。
図1は、センサーの一般的な設計を示す。この例では、スプリットNanoLucが、相補複合体が青色発光であり、SBiTバリアントの多様性がLBiTに対する0.7nM~190μMの親和性で利用可能であることから相補性レポーターとして選択された(Dixon,et al.ACS Chem.Biol.,2016,11,400;配列番号19)。
チューニングセンサー性能
センサー設計のモジュール方式に挑むために、エピトープ配列が、異なる抗体標的にするエピトープ配列に交換できるかどうか試験した。治療抗体トラスツズマブ(TRAS-NB-LUMABS-1、配列番号13;TRAS-NB-LUMABS-1、配列番号14;およびTRAS-NB-LUMABS-3、配列番号15)を標的にするセンサーを、NB-LUMABS-1、-5および-7に存在するエピトープ配列をトラスツズマブ結合ミミトープQLGPYELWELS(配列番号5)で置換することによって構築した。トラスツズマブはHer2陽性転移性乳房癌の治療に使用される。集団薬物動態は、クリアランスにおいて患者間のばらつきを示し、10%の患者で速いクリアランスがあり、薬のレベルが最小有効濃度より下となる(Bruno,et al.Cancer Chemother.Pharmacol.2005,56,361)。トラスツズマブに対するミミトープの一価親和性は294nMであった。これらの3つのセンサーについて、効率的なBRETが、トラスツズマブがない状態で見られた(図4)。1μMトラスツズマブをTRAS-NB-LUMABS-1に追加すると、穏やかなBRETの低下が生じ、ダイナミックレンジは37%であった。大量のトラスツズマブを添加した際に、発光率の増加が見られた。場合により、抗体の2つの分子がセンサーの1つの分子と結合し、センサーが閉じた状態として回復した。TRAS-NB-LUMABS-2は抗体価測定の間、閉じた状態で保たれた。LBiTとSBiT2との間の親和性は、弱いエピトープ親和性が二価抗体結合をもたらすことができないほど高いと予想される。TRAS-NB-LUMABS-3は、トラスツズマブの添加により発光率の穏やかな変化を示し、ダイナミックレンジが36%であった。トラスツズマブの抗体価測定の結果、TRAS-NB-LUMABS-1についてのKd,appが74.0±9.4nmであり、TRAS-NB-LUMABS-3については85.7±6.3nmであった。
クローニングおよび変異誘発
NB-LUMABS-1をコードする合成DNA配列(配列番号6)は、GenScript(Piscataway,USA)に発注した。NB-LUMABS-2(配列番号7)、NB-LUMABS-3(配列番号10)、NB-LUMABS-4(配列番号9)、NB-LUMABS-5(配列番号10)、NB-LUMABS-6(配列番号11)およびNB-LUMABS-7(配列番号12)は、特異的なプライマーを用いる部位特異的な変異誘発によってNB-LUMABS-1から構築した(表3)。QuickChange部位特異的変異誘発キット(Agilent Technologies)を製造者の説明書に従って使用して、所望の変異を導入した。
表3.NB-LUMABSバリアントの構築
標準プロトコールを用いて、タンパク質を発現し、精製した。簡単に述べると、適切なpET28aプラスミドをE.coli BL21(DE3)に形質転換した。細胞を、30μg/mlカナマイシンを含むLB培地にて37℃で培養した。タンパク質発現を、0.6のOD600で0.1mM IPTGを用いて20℃で一晩誘導した。細胞を回収し、Bugbuster試薬(Novagen)を用いて溶解した。センサータンパク質をNi-NTAアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製した後、製造者の説明書従ってStrep-Tactin精製を行った。タンパク質濃度を、減衰係数(タンパク質配列から計算)を用いて、280nmでの吸光度で測定することによって決定した。タンパク質純度を、SDS-PAGEによって確認した。精製したタンパク質を-80℃で使用まで保存した。
精製したNB-LUMABSタンパク質を50mM トリス-HCl(pH7.4)中1mMトリス-カルボキシエチルホスフィン(TCEP)で、室温で20分間還元した。その後、水(10mg/ml)に溶解したスルホ-シアニン3マレイミド(Lumiprobe)を30倍モル過剰でタンパク質溶液に添加し、1時間室温でインキュベーションした後、4℃で一晩インキュベーションした。反応しなかった染料をPD10脱塩カラムを用いて除去し、複合体を10kDaのAmicon遠心分離濾過フィルターを用いて濃縮した。染料:タンパク質比を280nmおよび553nmでの吸光度を測定し、タンパク質について39,420M-1cm-1、染料について162,000M-1cm-1の減衰係数を仮想するによって決定した。Cy3標識NB-LUMABSタンパク質をQ-ToF LC-MSによって確認した。
Promed UVL-30UV光源(4×9watt)を用いて光共役化反応を実施した。PBS緩衝液中の(pH7.4)の2μMの抗体(HyTest)および8μMのpG-NB-LUMABSを光共役化効率試験に使用した。混合物をUV光下(365nm)に、氷上で、30、60、または90分間置いた。その後、試料をSDS-PAGEゲルで移動させて、光共役化効率を決定した。
抗-HIV1-p17抗体をZeptometrix(クローン32/1.24.89)から入手した。トラスツズマブ(ハーセプチン、Roche)およびセツキシマブ(エルビタックス、Merck)を、Catherina hospital pharmacy(Eindhoven,Netherlands)を介して入手した。PerkinElmer flat white96-well Optiplateにおいて、100μL PBS(pH7.4、1mg/ml BSA)中で、1pMのセンサー濃度を用いて、NB-LUMABSに対する抗体価測定を実施した。100pMのセンサーをトラスツズマブおよびセツキシマブ抗体価測定のために使用した。2時間のセンサーおよび抗体のインキュベーション後、NanoGlo基質を1000倍の最終希釈で添加した。
398nm~653nmのルミネセンススペクトルを、Tecan Spark10Mプレートリーダーで15nmのステップサイズ、25nmの帯域幅、1000msの積分時間で記録した。抗体価測定を等式1に適合させ、見かけのKd valuEを得た。
白色96ウェルプレートに、100pM CTX-NB-LUMABS、異なる濃度のセツキシマブおよび1μL NanoGlo基質を含む200μL PBS緩衝液(pH7.4、1mg/ml BSA)を添加した。プレートを暗室内のStyrofoam boxに置いて、周囲の光を除いた。血液血漿測定のために、試料を、5nmセンサーを用いて200μL 未希釈血液血漿にて調製した。ホールinboxを用いてSONY DSC-RX100デジタルカメラを用いて、暴露時間10~30s、1.8のF値および1600~6400のISO値でbox内のホールを通じて画像を撮影した。ImageJを用いて画像を分析して、青色と赤色チャネルとの平均強度間の比率値を計算した。
Claims (15)
- 第1の末端と第2の末端とを含むリンカーを含むバイオセンサーであって、
前記リンカーの前記第1の末端は、第1の結合ドメインを介して第1のルシフェラーゼドメインの1つの末端に融合されており、
前記リンカーの前記第2の末端は、第2の結合ドメインを介して第2のルシフェラーゼドメインに融合されており、
前記バイオセンサーは、任意選択的にスペーサーを介して前記第1のルシフェラーゼドメインの他の末端に融合した第3のルシフェラーゼドメインを含み、
結合ドメインは生物分子に結合するように構成されており、
バイオセンサーは2つの構造で存在し、前記2つの構造は、前記第2のルシフェラーゼドメインまたは前記第3のルシフェラーゼドメインのいずれかが相補ルシフェラーゼを形成するように前記第1のルシフェラーゼドメインに結合する構造、およびフルオロフォアが前記第2のルシフェラーゼドメインまたは前記第3のルシフェラーゼドメインのうちの1つの次に結合する構造であり、前記2つの構造のうちの1つのみにおいてルシフェラーゼと前記フルオロフォアとの間の効率的な生物発光共鳴エネルギー転移(BRET)が生じることを特徴とするバイオセンサー。 - 前記第3のルシフェラーゼドメインがスペーサーを介して前記第1のルシフェラーゼドメインの他の末端に融合されている請求項1に記載のバイオセンサー。
- 前記第1のルシフェラーゼドメインが大きいルシフェラーゼドメイン、好ましくはラージスプリットルシフェラーゼ断片であり、前記第2のおよび第3のルシフェラーゼドメインが小さいルシフェラーゼドメイン、好ましくはスモールスプリットルシフェラーゼ断片である請求項1または2に記載のバイオセンサー。
- 前記リンカーが半柔軟なリンカーである請求項1~3のいずれかに記載のバイオセンサー。
- 前記生物分子が抗体、抗原、タンパク質またはアプタマーを含む請求項1~4のいずれかに記載のバイオセンサー。
- 第1の結合ドメインが前記生物分子と抱合したシステム形成するように構成されており、第2の結合ドメインが生物分子のリガンド結合部位に結合するように構成されている請求項1~5のいずれかに記載のバイオセンサー。
- 前記生物分子のリガンド結合部位は抗体の抗原結合部位を含む請求項6に記載のバイオセンサー。
- 前記生物分子が前記バイオセンサーの前記第1の結合ドメインに共役結合している請求項6または7に記載のバイオセンサー。
- サンプルを請求項1~5のいずれかに記載のバイオセンサーと接触させるステップと、
サンプルの存在下で前記バイオセンサーの発光の変化を決定するステップと、
生物分子の定量的なおよび/または定性的な存在または非存在に対する、サンプルの存在下での発光変化を決定するステップと、を含む生体外の生物分子検出方法。 - 生物分子の非存在下で前記バイオセンサーが、前記第1のルシフェラーゼドメインの少なくとも一部が前記第2のルシフェラーゼドメインを補完する生物分子がない状態である請求項9に記載の生体外の生物分子検出方法。
- 前記バイオセンサーの結合ドメインと前記生物分子との間の結合が、ルシフェラーゼとフルオロフォアとの間のBRET変化するように、生物分子がないバイオセンサーの状態と生物分子と複合化したバイオセンサーの状態との間の平衡を変化させる請求項9または10に記載の生体外の生物分子検出方法。
- サンプルを請求項6~8のいずれかに記載のバイオセンサーと接触させるステップと、
サンプルの存在下でバイオセンサーの発光の変化を決定するステップと、
リガンドの定量的なおよび/または定性的な存在または非存在に対するサンプルの存在下での発光変化を決定するステップと、を含むことを特徴とする生体外のリガンド検出方法。 - リガンドの非存在下で生物分子が、前記第2のルシフェラーゼドメインと前記第1のルシフェラーゼドメインとの相互作用を破壊する第2の結合ドメインに結合する請求項12に記載の生体外のリガンド検出方法。
- リガンドの存在下で前記バイオセンサーが、前記第1のルシフェラーゼドメインの少なくとも一部が前記第2のルシフェラーゼドメインを補完することを可能にするリガンド複合化状態である請求項12または13に記載の生体外のリガンド検出方法。
- 請求項1~8のいずれかに記載のバイオセンサーを含むパーツキットであって、前記バイオセンサーは、2つの結合ドメインを含む半柔軟なリンカーを介して第2のルシフェラーゼドメインに融合した第1のルシフェラーゼドメインをリンカーの末端に含み、前記パーツキットは第3のルシフェラーゼドメインをさらに含むことを特徴とするパーツキット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201862635053P | 2018-02-26 | 2018-02-26 | |
US62/635,053 | 2018-02-26 | ||
PCT/NL2019/050122 WO2019164402A1 (en) | 2018-02-26 | 2019-02-26 | Bioluminescent biosensor for detecting and quantifying biomolecules |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021515216A JP2021515216A (ja) | 2021-06-17 |
JP7248693B2 true JP7248693B2 (ja) | 2023-03-29 |
Family
ID=66349611
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020545086A Active JP7248693B2 (ja) | 2018-02-26 | 2019-02-26 | 溶液中の生物分子またはリガンドを検出し、定量化する生物発光バイオセンサー |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210215682A1 (ja) |
EP (1) | EP3759233B1 (ja) |
JP (1) | JP7248693B2 (ja) |
CN (1) | CN112352055A (ja) |
DK (1) | DK3759233T3 (ja) |
ES (1) | ES2923526T3 (ja) |
PL (1) | PL3759233T4 (ja) |
WO (1) | WO2019164402A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2023503653A (ja) * | 2019-11-27 | 2023-01-31 | プロメガ コーポレイション | 多分子ルシフェラーゼペプチド及びポリペプチド |
EP3916388A1 (en) * | 2020-05-27 | 2021-12-01 | Miltenyi Biotec B.V. & Co. KG | Reagents for detection of chimeric antigen receptor cells |
US20230257756A1 (en) * | 2020-08-10 | 2023-08-17 | The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services | Real-time cellular thermal shift assay (rt-cetsa) for research and drug discovery |
CN116042766A (zh) * | 2021-10-28 | 2023-05-02 | 同济大学 | 一种基于生物发光测定蛋白连接酶活力的组合物、方法及其应用 |
CN116256505A (zh) * | 2021-12-09 | 2023-06-13 | 深圳先进技术研究院 | 基于qd-lumabs的抗体定量检测的曲线建立方法、检测方法及其试剂盒 |
CN114540419A (zh) * | 2022-03-04 | 2022-05-27 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种分析包膜病毒膜融合效率的三功能报告系统 |
WO2023212662A2 (en) * | 2022-04-28 | 2023-11-02 | Oregon Health & Science University | Compositions and methods for modulating antigen binding activity |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002088733A1 (fr) | 2001-04-23 | 2002-11-07 | Eiken Kagaku Kabushiki Kaisha | Methode d'analyse faisant intervenir une interaction intermoleculaire par rapporteur (marqueur) |
WO2015067302A1 (en) | 2013-11-05 | 2015-05-14 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) | Sensor molecules and uses thereof |
US20150285818A1 (en) | 2012-09-27 | 2015-10-08 | Technische Universiteit Eindhoven | Switchable Reporter Enzymes for Homogenous Antibody Detection |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007529718A (ja) * | 2004-03-12 | 2007-10-25 | ザ スクリップス リサーチ インスティチュート | 蛋白質活性の検出および定量のための蛍光シグナル発光型生細胞バイオセンサー分子ならびに色素 |
US7741128B2 (en) * | 2005-05-23 | 2010-06-22 | University Of Hawaii | Cooperative reporter systems, components, and methods for analyte detection |
CN101278194A (zh) * | 2005-05-23 | 2008-10-01 | 夏威夷大学 | 用于分析物检测的协同指示系统、组分以及方法 |
CN101473031A (zh) * | 2006-04-03 | 2009-07-01 | 普罗美加公司 | 变换和非变换的萤光素酶生物传感器 |
US9797889B2 (en) * | 2013-03-15 | 2017-10-24 | Promega Corporation | Activation of bioluminescence by structural complementation |
AU2013394649B2 (en) * | 2013-07-18 | 2020-07-16 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) | Means and methods for bioluminescence resonance energy transfer (BRET) analysis in a biological sample |
EP2913338A1 (en) * | 2014-02-28 | 2015-09-02 | Roche Diagniostics GmbH | Soluable and immunoreactive variants of HTLV capsid antigen p24 |
CN105807064B (zh) * | 2014-12-31 | 2017-07-28 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 一种荧光素酶互补量子点生物传感器及其构建方法及其应用 |
-
2019
- 2019-02-26 PL PL19721157.6T patent/PL3759233T4/pl unknown
- 2019-02-26 WO PCT/NL2019/050122 patent/WO2019164402A1/en unknown
- 2019-02-26 CN CN201980028397.6A patent/CN112352055A/zh active Pending
- 2019-02-26 ES ES19721157T patent/ES2923526T3/es active Active
- 2019-02-26 US US16/976,062 patent/US20210215682A1/en not_active Abandoned
- 2019-02-26 JP JP2020545086A patent/JP7248693B2/ja active Active
- 2019-02-26 DK DK19721157.6T patent/DK3759233T3/da active
- 2019-02-26 EP EP19721157.6A patent/EP3759233B1/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002088733A1 (fr) | 2001-04-23 | 2002-11-07 | Eiken Kagaku Kabushiki Kaisha | Methode d'analyse faisant intervenir une interaction intermoleculaire par rapporteur (marqueur) |
US20150285818A1 (en) | 2012-09-27 | 2015-10-08 | Technische Universiteit Eindhoven | Switchable Reporter Enzymes for Homogenous Antibody Detection |
WO2015067302A1 (en) | 2013-11-05 | 2015-05-14 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) | Sensor molecules and uses thereof |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Dual-Color Bioluminescent Sensor Proteins for Therapeutic Drug Monitoring of Antitumor Antibodies.,Analytical Chemistry,2018年02月14日,3592-3599 |
Semisynthetic Bioluminescent Sensor Proteins for Direct Detection of Antibodies and Small Molecules in Solution,ACS Sensors,2017年10月17日,1730-1736 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
PL3759233T3 (pl) | 2022-08-29 |
EP3759233B1 (en) | 2022-03-30 |
ES2923526T3 (es) | 2022-09-28 |
JP2021515216A (ja) | 2021-06-17 |
WO2019164402A1 (en) | 2019-08-29 |
EP3759233A1 (en) | 2021-01-06 |
DK3759233T3 (da) | 2022-07-11 |
CN112352055A (zh) | 2021-02-09 |
PL3759233T4 (pl) | 2022-10-10 |
US20210215682A1 (en) | 2021-07-15 |
WO2019164402A8 (en) | 2021-01-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7248693B2 (ja) | 溶液中の生物分子またはリガンドを検出し、定量化する生物発光バイオセンサー | |
US7741128B2 (en) | Cooperative reporter systems, components, and methods for analyte detection | |
Hayashi et al. | Analysis of cell-surface receptor dynamics through covalent labeling by catalyst-tethered antibody | |
US7335478B2 (en) | Reactivation-based molecular interaction sensors | |
JP7498971B2 (ja) | がん診断及び治療のための新規psma特異的結合タンパク質 | |
WO2011135040A1 (en) | Fluorescent antibody fusion protein, its production and use | |
US20110009601A1 (en) | Labeled protein and method for obtaining the same | |
JP3784111B2 (ja) | 抗原濃度測定方法 | |
JP2007040834A (ja) | 免疫測定用試薬 | |
Chung et al. | Development of a fluorescent protein-antibody Förster resonance energy transfer probe for the detection and imaging of osteocalcin | |
US20220348984A1 (en) | Ratiometric detection of luciferase assays using a calibrator luciferase | |
Schlattner et al. | Isoenzyme-directed selection and characterization of anti-creatine kinase single chain Fv antibodies from a human phage display library | |
Piotukh et al. | A novel hSH3 domain scaffold engineered to bind folded domains in CD2BP2 and HIV capsid protein | |
Sasamoto et al. | Efficient and rapid linker optimization with heterodimeric coiled coils improves the response of fluorescent biosensors comprising antibodies and protein M | |
KR102650014B1 (ko) | 근접 단백질가수분해 반응에 기반한 표적물질 검출방법 | |
JP5576585B2 (ja) | リン酸化タンパク質免疫測定用試薬 | |
JP2005237234A (ja) | カベオリン抗原とその用途 | |
WO2015137441A1 (ja) | 抗ミリストイル化タンパク質抗体又はその抗原結合フラグメント、ミリストイル化タンパク質検出キット、医薬、遺伝子、及びベクター | |
Van Fossen | Employing Genetic Code Expansion Tools to Elucidate Disease Mechanisms and Generate New Therapeutics | |
US20100317032A1 (en) | Method for detecting antigen and antigen detection device | |
Zhang et al. | Fluorescence quenching-based immunological probe for ticagrelor monitoring | |
Bae | Development of Functional Protein-based Target-specific Labeling Nanoplatforms for Biological Applications | |
EP1570073A2 (en) | Detection of molecular interaction by reactivation of an auto-inhibited responder (rair) | |
Westerfield | Bifunctional peptides: targeting acidity and receptor transmembrane domains | |
WO2023094704A1 (en) | Specific binding molecules for fibroblast activation protein (fap) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220118 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20221222 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230117 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230201 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230221 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230316 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7248693 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |