JP7215761B2 - 経口組成物、皮膚化粧料および頭髪化粧料 - Google Patents

Description

本発明は、天然物由来の化合物を有効成分とする、抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤および肝機能向上剤に関するものである。さらに本発明は、当該化合物を配合した経口組成物、皮膚化粧料および頭髪化粧料にも関する。

近年、飽食や運動不足等の生活習慣が原因となって体脂肪が増加し、肥満が増えている。このような肥満の増加は、人間ばかりでなく、ペットや家畜においても見られる。肥満は、高脂血症や動脈硬化等のメタボリックシンドロームの原因になるため、美容の面で問題となるばかりでなく、健康の面でも大きな問題となる。

ここで、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）は、生体内の脂肪分解に関与することが知られている。ｃＡＭＰは生体内に存在するリパーゼを活性化し、活性化されたリパーゼによって脂肪が脂肪酸とグリセロールとに分解される。しかし、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼが活性化されるとｃＡＭＰの分解が誘発され、リパーゼの活性化が阻害される。そのため、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼの活性を阻害することにより細胞内におけるｃＡＭＰが増量し、脂肪の分解を促進することができるものと考えられる。

また、炎症反応を引き起こす血小板凝集は、血小板中のサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の濃度と関係があり、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼによってｃＡＭＰが分解されてｃＡＭＰの濃度が低下すると、血小板は凝集しやすくなることが知られている。従って、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼの作用を抑制してｃＡＭＰ濃度の低下を防止すれば、血小板凝集を防止でき、これによりアレルギー性疾患や炎症性疾患等を予防、治療又は改善できると考えられる。ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有するものとして、ツベイモシドＩ（特許文献１参照）等が知られている。

ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（以下、「ＤＰＰ ＩＶ」ともいう。）は、セリンプロテアーゼの一つであって、Ｎ末端から２番目のプロリン又はアラニンを認識し、そのＣ末端側を切断する酵素活性を有する。ＤＰＰ ＩＶは、腎臓、肝臓、腸管、胎盤等の組織の上皮及び内皮細胞、並びにＴ細胞の細胞表面に発現しており、その酵素活性等を介して様々な生理現象に関与すると考えられている。

ＤＰＰ ＩＶの基質として、インクレチンと呼ばれるホルモンが挙げられる。インクレチンは、栄養素の刺激により腸管から分泌され、血糖依存的に膵β細胞からインスリン分泌を促進するホルモンの総称であり、ＧＬＰ－１やＧＩＰ等が知られている。これらインクレチンは、血糖依存的なインスリン分泌の促進だけでなく、α細胞からのグルカゴン分泌の抑制、血圧の低下、胃排出の抑制、さらには視床下部に作用しての摂食抑制等の作用を有している（非特許文献１参照）。しかし、インクレチンはＤＰＰ ＩＶにより分解されるため、例えばＧＬＰ－１の生体内における半減期は１．５分程度であることが知られている。そのため、ＤＰＰ ＩＶの酵素活性を阻害することができれば、インクレチンの生体内における半減期を延長することができ、これにより、前述したインクレチンの作用を通じ、２型糖尿病、肥満、高血圧症、インスリン抵抗性等のメタボリックシンドロームの治療に有用であると期待されている。

また、ＤＰＰ ＩＶはＴ細胞活性化マーカーの一つであるＣＤ２６と同一であり、多くの免疫調節ペプチドを基質とし、その活性を制御することが知られている。そのため、ＤＰＰ ＩＶの活性を制御することにより、関節リウマチ等の自己免疫疾患や移植による拒絶反応等の免疫反応を制御し得ると考えられる。さらに、ＤＰＰ ＩＶは、いくつかの神経ペプチドや成長ホルモンの代謝；癌における浸潤、転移、血管新生等；ＨＩＶのリンパ球への感染等への関与が知られている。そのため、ＤＰＰ ＩＶの活性を阻害することにより、疼痛、神経変性疾患及び神経精神疾患等の神経障害（例えば坐骨神経痛、アルツハイマー病、うつ病等）；成長ホルモン欠損症及び成長ホルモンが治療に使用される疾患；癌（例えばＴ－細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、甲状腺癌、基底細胞癌、乳癌等）；ＨＩＶ感染症（ＡＩＤＳ）等の疾患を治療することができると考えられる。

皮膚においてメラニンは、紫外線から生体を保護する役目も果たしているが、過剰生成や不均一な蓄積は、皮膚の黒化やシミの原因となる。一般にメラニンは、色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによって、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、ついで５，６－ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成されるものとされている。したがって、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）、シミ、ソバカス等を予防、治療又は改善するためには、メラニンの産生に関与するチロシナーゼの活性を阻害すること、又はメラニンの産生を抑制することが考えられる。

従来、皮膚色素沈着症、シミ、ソバカス等の予防、治療又は改善には、ハイドロキノン等の化学合成品を有効成分とする美白剤を外用する処置が行われてきた。しかしながら、ハイドロキノン等の化学合成品は、皮膚刺激、アレルギー等の副作用のおそれがある。そこで、安全性の高い天然原料を有効成分とする美白剤の開発が望まれており、チロシナーゼ活性阻害作用を有するものとしては、例えば、ヤナギタデ抽出物（特許文献２参照）等が知られている。また、メラニン産生抑制作用を有するものとしては、例えば、サウスウレア（Saussurea）属植物からの抽出物（特許文献３参照）等が知られている。

皮膚の表皮および真皮は、表皮細胞、線維芽細胞ならびにこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては線維芽細胞の増殖は活発であり、線維芽細胞、細胞外マトリックス成分等の皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。

ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲン、エラスチンおよびヒアルロン酸の産生量が減少するとともに、分解や変質を引き起こす。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質の異常剥離が生じるため、肌は張りや艶を失い、肌荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの変化、弾力性の低下等には、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等のマトリックス成分の減少・変性等が関与している。したがって、コラーゲン、エラスチンまたはヒアルロン酸の産生を促進することは、皮膚の老化を予防、治療または改善する上で重要である。

ここで、これらの細胞外マトリックス成分のうち、コラーゲンは、皮膚組織の構造および機械的強度の維持に寄与する繊維状タンパク質である。コラーゲンの産生を促進することができれば、しわ、たるみが起こりにくくなり、きめが粗くなり、張りが消失し、弾力性が低下する等といった皮膚の老化症状を予防、治療または改善することができると考えられる。

また、コラーゲンは、骨、腱、靱帯、角膜、血管等にも多く存在し、加齢等によるコラーゲン産生の低下が、骨粗鬆症等の原因になることが知られている。さらに、創傷の治癒過程において、コラーゲンの産生量が亢進し、線維芽細胞等の足場となることで、創傷の治癒を促進することが知られている。そのため、コラーゲンの産生を促進することは、骨粗鬆症等の予防又は治療、創傷治癒の促進といった観点からも重要である。コラーゲン産生促進作用を有するものとしては、例えば、クスノハガシワからの抽出物（特許文献４参照）等が知られている。

一方、前述した細胞外マトリックス成分のうち、エラスチンは、皮膚組織に弾力性を与える線維である。エラスチンの産生を促進することができれば、しわ、たるみが起こりにくくなり、張りの消失、弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防、治療または改善できると考えられる。
また、エラスチンは、エラスターゼという酵素により分解されるところ、エラスターゼは紫外線の照射により活性化され、これによりエラスチンの分解が加速する。そのため、エラスターゼの活性を阻害することによりエラスチンの分解が抑制され、張りの消失、弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防・改善できると考えられる。

さらに、エラスチンは皮膚組織の他に、肺や血管等、身体において弾力性を要する組織に広く発現している。加齢に伴ってこれらの組織から正常なエラスチンが減少すると、肺や血管等において弾力性が低下し、肺気腫等の肺疾患や高血圧、動脈瘤等の血管性疾患の原因となることが知られている。また、喫煙等によって生体内でのエラスターゼの活性が亢進することが知られており、肺胞壁を破壊して肺気腫等を招くおそれがあると考えられる。さらに、エラスターゼの活性の亢進により肺毛細血管が破壊され、肺水腫等の急性呼吸促進症候群（ＡＲＤＳ）を招くおそれがあると考えられる。
そのため、エラスチンの産生を促進することができれば、肺や血管等における弾力性の低下が起こりにくくなり、肺気腫等の肺疾患や高血圧、動脈瘤等の血管性疾患等を予防・治療できると考えられる。また、生体内でのエラスターゼの活性を阻害することができれば、肺気腫、肺水腫等の呼吸器系疾患を予防・治療することができるものと考えられる。
エラスチン産生促進作用を有するものとして、例えば、グミ科ヒッポファエ属に属する植物からの抽出物が知られている（特許文献５参照）。また、エラスターゼ活性阻害作用を有するものとして、例えば、スターフルーツ果実抽出物等が知られている（特許文献６参照）。

他方、前述の細胞外マトリックス成分のうち、ヒアルロン酸は、ムコ多糖の一種であり、細胞間の間隙に充填されることにより細胞を保持する機能を有し、さらに細胞間隙への水分の保持、組織への潤滑性や柔軟性の付与、機械的障害等の外力に対する抵抗等、数多くの機能を有している。ヒアルロン酸の産生を促進することができれば、皮膚の荒れ、しわ、くすみ、きめの変化、弾力性の低下及び保湿機能の低下等といった皮膚の老化症状を予防、治療または改善できると考えられる。また、表皮ヒアルロン酸の合成促進に関与するヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）の発現を促進することで、皮膚の老化を予防、治療または改善することができるものと考えられる。

また、ヒアルロン酸は、皮膚組織の他にも、軟骨、関節液、臍帯、眼硝子体、その他の結合組織に存在する。このうち、関節液に含まれるヒアルロン酸は、関節軟骨の表面を覆い、ヒアルロン酸が有する潤滑機能、軟骨に対する被覆・保護機能等により、関節の円滑な作動に役立っている。一方、慢性関節リウマチ等の関節炎において、関節液におけるヒアルロン酸の濃度が低下していることが知られている。したがって、ヒアルロン酸の産生を促進することで、慢性関節リウマチ、変形性関節炎、化膿性関節炎、痛風性関節炎、外傷性関節炎、又は骨関節炎等の関節炎を予防又は治療することができると考えられる。さらに、創傷又は熱傷の治癒過程において、肉芽（組織）が形成するが、肉芽中にヒアルロン酸が著しく増加することが知られている。そのため、ヒアルロン酸の産生を促進することで、創傷又は熱傷の治癒を促進することができると考えられる。ヒアルロン酸産生促進作用を有するものとしては、クスノハガシワからの抽出物（前述した特許文献４参照）等が知られている。また、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）発現促進作用を有するものとして、甘草葉部抽出物（特許文献７参照）等が知られている。

一方、皮膚を構成する表皮と真皮との境界部には、基底膜が存在する。基底膜は、表皮と真皮とを繋ぎ止めるだけでなく、皮膚機能の維持に重要な役割を果たしている（非特許文献２参照）。基底膜の主要骨格は、ＩＶ型コラーゲンからなる網目構造をしている。基底膜と表皮との境界に存在し、基底膜と表皮とを繋ぎとめているのがラミニン－３３２を主成分とする各種糖蛋白質で、かかるラミニン－３３２は、表皮に存在する表皮角化細胞より産生される。若い皮膚においては、基底膜の働きにより表皮、真皮の相互作用が恒常性を保つことで水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。

ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、基底膜の主要構成成分であるラミニン－３３２は分解・変質を起こし、基底膜構造が破壊される（非特許文献３参照）。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるから、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの変化、弾力性の低下等には、基底膜成分の減少、基底膜の構造変化が関与しており、ラミニン－３３２の産生を促進することにより、皮膚の老化症状を予防・改善することができると考えられる。

ラミニンは、α鎖、β鎖及びγ鎖の種々の組み合わせからなり、現在のところ１５種類（ラミニン１～ラミニン１５）が知られている。このうちラミニン－３３２（α３β３γ２）は、皮膚、消化器、腎臓、肺等の上皮組織の基底膜に多量に存在する。ラミニン－３３２の各鎖をコードする遺伝子の先天的な異常に起因する遺伝子疾患（致死型先天性表皮水疱症，Herlitz junctional epidermolysis bullosa）においては、全身の表皮が剥離する致死性の症状を示すことが知られている。そして、ラミニン－３３２は、他の細胞外マトリックス分子と比べ、強度に細胞を接着させ（細胞接着活性が高く）、細胞運動を強く促進する（細胞運動活性が高い）ことが知られている。

このように、ラミニン－３３２は、細胞運動活性が高いことから、損傷皮膚中の細胞移動を促進し、損傷治癒を促すことが知られている（特許文献８参照）。すなわち、ラミニン－３３２の産生を促進することは、基底膜の構造が破壊されるような皮膚損傷の治癒を促す上で重要である。

表皮は、外部刺激を緩和し、水分等の体内成分の逸失を制御する働きをしており、最下層である基底層から始まって、有棘層、顆粒層、角質層へと連なる４層構造から構成されている。各層に存在する大部分の細胞は、基底層から分化した角化細胞である。基底層で分裂、増殖した角化細胞は、有棘層、顆粒層を通過しながら分化し角質細胞となって、強固な架橋結合をもったケラチン蛋白線維で構成された角質層を構成し、最終的には垢として角質層から脱落する。

角質層は皮膚の最外殻に存在しており、外界からの刺激に対する物理的なバリアとしての役割を果たしている。皮膚ではこのバリア機能を持たせるため、角化細胞が基底層で産生されてから垢となって剥がれ落ちるまでのサイクル（角化）を通常４週間の周期で繰り返し、表皮の新陳代謝を行っている。しかしながら、この角質層も加齢によって新陳代謝機能が衰え、こじわ、くすみ、色素沈着、肌荒れ等の皮膚トラブルを発生することになる。そのため、角化細胞の増殖を促進し、肌の新陳代謝機能を回復させることにより、こじわ、くすみ、色素沈着等の皮膚の老化を改善できるものと考えられる。従来、表皮角化細胞増殖促進作用を有するものとして、土貝母抽出物（特許文献９参照）等が知られている。

また、細胞の増殖を促進するためには、細胞分裂に必要なエネルギーを細胞に補給することが重要である。生体のエネルギー物質としては、ＡＴＰが挙げられ、このＡＴＰの産生量を上げることにより、細胞内のエネルギー代謝が促進され、細胞増殖につながると考えられる。しかし、上記のように、機能の低下した細胞や老化した細胞では、エネルギー物質であるＡＴＰ量が正常細胞より減少することが報告されている（特許文献１０参照）。

そのため、細胞におけるＡＴＰの産生を促進することができれば、その細胞を活性化して細胞分裂を促し、その細胞の増殖能を回復することができると考えられる。特に、皮膚の細胞においてＡＴＰの産生を促進することは、皮膚のターンオーバーを促進し、肌の新陳代謝機能を回復させ、シワ、くすみ、きめの消失等の皮膚の老化を予防・改善する上で重要である。従来、ＡＴＰ産生促進作用を有するものとして、グリコーゲン（特許文献１０参照）、モモ等の天然物からの抽出物（特許文献１１参照）等が知られている。

グルタチオンは、グルタミン酸、システイン及びグリシンの３つのアミノ酸からなるトリペプチドであり、細胞内の主要なシステイン残基を有する化合物である。細胞内におけるグルタチオンは、ラジカルの捕捉、酸化還元による細胞機能の調節、異物代謝、各種酵素のＳＨ供与体としての機能を果たすものであり、活性酸素等に対する抗酸化成分としても知られている。その作用発現は、システイン残基に由来すると考えられている。しかしながら、過剰な酸化ストレスや異物の付加、加齢などにより、細胞内のグルタチオン量が欠乏又は低下することが報告されており、このことが細胞の酸化ストレスに対する防御能を低下させ、細胞のＤＮＡ及びタンパク質等の構成成分にダメージを与える一因であると考えられている。

このような、細胞内のグルタチオン量の低下又は欠乏が病態と関連することが知られている疾患として、皮膚におけるシミの生成等の酸化ストレスが原因となって誘発される疾患群のほか、肝障害（アルコールの多飲、又は重金属や化学物質等の異物の摂取が原因となる）等が知られている。すなわち、グルタチオンの産生を促進することは、細胞の酸化ストレスに対する防御能を高め、細胞内のグルタチオン量が低下又は欠乏することに起因する上記の疾患群を予防・治療することができると考えられる。グルタチオン産生促進作用を有するものとして、リクイリチゲニン（特許文献１２参照）等が知られている。

また、表皮を構成する基底層、有棘層、顆粒層、および角質層のうち、特に、顆粒層においては、細胞膜が肥厚して肥厚細胞膜を形成するとともに、トランスグルタミナーゼ－１の作用により、蛋白分子間がグルタミル－リジン架橋され、強靭なケラチン蛋白線維が形成される。さらに、その一部にセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで、細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角質バリア機能の基礎が形成される。

しかし、加齢とともに表皮におけるトランスグルタミナーゼ－１の産生量が減少すると、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能が低下するため、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状を呈したり、乾燥性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等）を発症したりするようになる。そのため、表皮におけるトランスグルタミナーゼ－１の産生を促進することにより、皮膚の老化症状や乾燥性皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができると考えられる。トランスグルタミナーゼ－１発現促進作用を有するものとして、湖南甜茶からの抽出物（特許文献１３参照）等が知られている。

セラミドは、表皮細胞の角化の過程においてセリンとパルミトイル－ＣｏＡとを基に、セラミド合成の律速酵素として知られるセリンパルミトイルトランスフェラーゼ（ＳＰＴ）をはじめとする酵素の働きにより生成される。セラミドは、皮膚最外層を覆う角質細胞間脂質の主成分として特異的に存在し、皮膚本来が持つ生体と外界とのバリア膜としての機能維持に重要な役割を果たしている。

角質層の構造は、レンガとモルタルとに例えられ、１５層ほどに積み重なった角質細胞を細胞間脂質が繋ぎ止める形で強固なバリア膜を形成している。角質細胞は、アミノ酸を主成分とする天然保湿因子を細胞内に含有することによって水分を保持し、一方、角質細胞間脂質は、約５０％のセラミドを主成分とし、コレステロール、脂肪酸等の両親媒性脂質から構成されており、疎水性部分と親水性部分とが交互に繰り返される層板構造、いわゆるラメラ構造を特徴としている。

様々な内的・外的要因による皮膚のバリア機能の低下は、経表皮水分蒸散量を増加させ、皮膚のかさつき、落屑、掻痒感等を惹き起こし、いわゆる乾燥肌に陥る。また、皮膚のバリア機能の低下は、皮膚の炎症を増大させ、外界からの様々な刺激に対する防御機能が低下するという悪循環に陥る。最近の研究において、加齢により、又はバリア障害として知られるアトピー性皮膚炎患者において、角質セラミド成分（いわゆる細胞間脂質）の減少や組成変化が報告されており（非特許文献４参照）、皮膚のバリア機能の維持、改善にセラミドが重要であることが広く知られるようになっている。皮膚のバリア機能を改善する方法として、セラミドを外部から補う方法（非特許文献５参照）や皮膚内部においてセラミド産生能を高める方法（非特許文献６参照）等が知られている。

皮膚細胞では、水チャンネルとして知られるアクアポリンが、細胞膜上に発現して、細胞間隙の水をはじめとする低分子物質を細胞内へ取り込む役割を担っていることが知られている。ヒトでは、１３種類のアクアポリン（ＡＱＰ０～ＡＱＰ１２）の存在が知られている。表皮細胞においては、主としてＡＱＰ３が存在しており、水に加えて、水分保持作用に関与するグリセロールや尿素等の低分子化合物をも取り込む役割を担っていると考えられている。

しかしながら、ＡＱＰ３は加齢とともに減少し、このことが水分保持機能の低下の一因であることが示唆されているため、ＡＱＰ３の発現を促進することにより、加齢による水分保持機能やバリア機能等を制御することが可能であると考えられる（非特許文献７参照）。ＡＱＰ３発現促進作用を有するものとして、例えば、スターフルーツの葉部からの抽出物（特許文献１４参照）等が知られている。

フィラグリンは、皮膚の構成成分であり、皮膚におけるバリア機能に関与し、アレルゲン、毒素、感染性生物の侵入を防ぐ機能を有していると考えられている。フィラグリンの遺伝子の変異等による機能の低下は、アトピー性皮膚炎（湿疹、皮膚の炎症、皮膚のかゆみ等）、アレルギー、喘息等を包含するアトピー性疾患の発症リスクと関連し、さらに重篤な場合は尋常性魚鱗癬等の皮膚疾患につながることが知られている（非特許文献８参照）。

一方、天然保湿因子（Natural Moisturizing Factors；ＮＭＦ）の主成分であるアミノ酸は、ケラトヒアリン顆粒に由来するフィラグリンが角質層内で分解されて産生される。このフィラグリンは、角質層直下の顆粒層に存在する表皮ケラチノサイトでプロフィラグリンとして発現する。その後、直ちにリン酸化し、ケラトヒアリン顆粒に蓄積され、脱リン酸、加水分解を経てフィラグリンへと分解され、角質層に移行して、ケラチンフィラメントの凝集効率を高め、角質細胞の内部構築に関与することが知られている（非特許文献９参照）。近年、このフィラグリンが、皮膚の水分保持に非常に重要かつ必要不可欠であること、および乾燥等の条件によってフィラグリンの合成力が低下し、角質層におけるアミノ酸量が低下することが知られている（非特許文献１０参照）。

したがって、表皮ケラチノサイトにおいて、フィラグリン（プロフィラグリン）の発現を促進することにより、アトピー性皮膚炎（湿疹、皮膚の炎症、皮膚のかゆみ等）、アレルギー、喘息等を包含するアトピー性疾患を予防・治療または改善できると考えられる。また、フィラグリンの発現を促進し、それにより角質層内のアミノ酸量を増大させることで、角質層の水分環境を本質的に改善できることが期待される。フィラグリン発現促進作用を有するものとして、ガイヨウ抽出物（特許文献１５参照）等が知られている。

従来は、皮膚のバリア機能は角質層のみが担っていると考えられていたが、近年、表皮顆粒層に存在するタイトジャンクション（以下「ＴＪ」と表記することがある。）の構成タンパク質を遺伝子レベルで欠損させると皮膚のバリア機能が崩壊することが見いだされ、ＴＪも皮膚のバリア機能に重要な役割を担うと考えられるようになっている（非特許文献１１参照）。ＴＪは、隣接する細胞同士を密着させるだけでなく、細胞と細胞との隙間をシールすることで物質の透過を制御する細胞間接着構造である。ＴＪを構成しているのは、細胞膜タンパク質であるクローディンやオクルディン、裏打ちタンパク質であるＺＯ－１やＺＯ－２等であり、これらのタンパク質はＴＪストランドの骨格を構成し、ＴＪのバリア機能を制御すると考えられている（非特許文献１２参照）。ここで、クローディンやオクルディンの発現が何らかの原因で減少した場合、ＴＪの構造的な破壊が起こり、物質の透過バリアとして機能しなくなることによって、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎や各種感染症などの皮膚症状の一因になると考えられる。

そのため、表皮においてクローディンやオクルディンの産生を促進することにより表皮角化細胞のＴＪ形成を促すことで、皮膚のバリア機能および水分保持機能を高め、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎や各種感染症などの皮膚症状を予防または改善することができると考えられる。クローディン産生促進作用およびオクルディン産生促進作用を有するものとして、アスパラサスリネアリス抽出物（特許文献１６）等が知られている。

糖質は、ヒトを初めとする生物においてエネルギー源として非常に重要である。しかし一方で、糖質はタンパク質と糖化反応（グリケーション）を起こすことが知られている。糖化反応は、糖質のカルボニル基とタンパク質等のアミノ基との非酵素的な反応を第一段階とし、シッフ塩基からアマドリ化合物を経て最終的に最終糖化産物（以下、「ＡＧＥｓ」ということがある。）を形成する一連の反応である。糖化反応により、タンパク質が非酵素的に糖により修飾されるため、これにより当該タンパク質の変性やタンパク質間の架橋等が起こり、その結果タンパク質の機能を低下させる。

糖化反応は、コラーゲン等の細胞外マトリックス構成タンパク質を修飾・構造変化させることにより直接的な障害を引き起こすほか、糖化タンパク質をリガンドとする受容体により認識されることで細胞応答を引き起こす等の影響をもたらす。特に、血液中のグルコース濃度が高い糖尿病の患者にとって、糖化反応の影響は深刻である。糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症等の糖尿病合併症は、タンパク質の糖化がその一因であることが知られている。また、血管壁における糖化反応は、内皮細胞の障害や変性タンパク質の蓄積などにより、動脈硬化の進展をもたらすことが知られている。さらに、コラーゲンを初めとする細胞外マトリックス成分は、骨や皮膚などの組織における乾燥重量の過半を占めている。そのため、例えば、コラーゲンが糖化され異常に架橋された状態となると、骨や軟骨組織においては骨粗鬆症や変形性関節症等を発症し、皮膚においては弾力性の低下、黄色化等によるくすみ等を生じる。さらに、異常に架橋したコラーゲン等はコラゲナーゼ等による分解を受けにくくなるため、コラゲナーゼ等の発現が誘導され、正常なコラーゲンまで分解されてしまうなどの問題が生じてしまう。

このため、糖化反応を何らかの形で抑制する、例えば、ＡＧＥｓの形成を抑制したり、またＡＧＥｓの分解を促進したりすることができれば、前述した疾患、すなわち糖尿病合併症、動脈硬化、骨粗鬆症、変形性関節症などの予防又は治療に有用であると期待される。さらには、皮膚の弾力性低下やくすみ等の予防又は改善にも効果があるものと期待される。ＡＧＥｓ形成抑制作用やＡＧＥｓ分解促進作用を有するものとして、キンモクセイ抽出物（特許文献１７参照）等が知られている。

多くのステロイドホルモンは産生臓器から分泌された分子型で受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えば、テストステロンは標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α－レダクターゼにより５α－ジヒドロテストステロン（５α－ＤＨＴ）に還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。

アンドロゲンは重要なホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等、さまざまな好ましくない症状を誘発する。そこで、従来から、これらの各種症状を改善するために過剰のアンドロゲンの作用を抑制する方法、具体的には、テストステロンを活性型５α－ＤＨＴに還元するテストステロン５α－レダクターゼの作用を阻害することにより、活性な５α－ＤＨＴが生じるのを抑制する方法が知られている。これまでに、テストステロン５α－レダクターゼ阻害作用を有するものとして、例えば、東紫蘇からの抽出物（特許文献１８参照）等が知られている。

毛髪は、成長期、退行期及び休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期にかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられており、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖・分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞に働きかけてその増殖を促進する等、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において重要な役割を担っている（非特許文献１３参照）。

このように、毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において重要な役割を果たしており、毛乳頭細胞の増殖を促進することで、脱毛症を予防・改善することができると考えられる。これまでに、毛乳頭細胞増殖促進作用を有するものとしては、例えば、ワイルドタイム抽出物（特許文献１９参照）等が知られている。

炎症性疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、アトピー性皮膚炎、その他肌荒れを伴う各種皮膚炎症性疾患、関節リウマチ、変形性関節症、喘息等の原因及び発症機構は、多種多様である。その原因として、主に一酸化窒素（ＮＯ）の過剰な産生によるもの、ヒスタミンの遊離によるもの、ヒアルロニダーゼの活性の亢進によるもの、プロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２）の産生によるものなどが知られている。

一酸化窒素（ＮＯ）は、大気汚染、酸性雨等の要因となる窒素酸化物であるが、近年、この一酸化窒素が、血管内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）、神経伝達物質、生体防御における微生物・腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが見出されている。生体防御においては、特にマクロファージから産生される一酸化窒素が、細菌やウイルスの感染を防御している。

しかし、一酸化窒素が大量に生合成されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リウマチ、糖尿病等の病態の原因となっている。また、大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こすことも知られている。

したがって、炎症性疾患においては、一酸化窒素の過剰な産生を抑制することが重要となる。一酸化窒素の産生抑制作用を有するものとして、例えば、唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花、花椒（非特許文献１４参照）、ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物（特許文献２０参照）、マルツロシルアルギニン（特許文献２１参照）等が知られている。

ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象であり、遊離されたヒスタミンが炎症反応を引き起こす。そのため、ヒスタミン遊離を阻害又は抑制する物質により、アレルギー性疾患及び炎症性疾患を予防又は治療する試みがなされている。しかし、ヒスタミンの遊離を直接的に評価することは困難であり、ヒスタミンの遊離と同時に遊離されることが確認されているヘキソサミニダーゼの遊離を指標にヒスタミンの遊離を評価することができる。したがって、ヘキソサミニダーゼの遊離を抑制することにより、同時にヒスタミンの遊離も抑制でき、これにより炎症性疾患等の予防、治療又は改善に効果があるものと考えられる。

また、ヒスタミンは局所伝達物質として細胞間の情報伝達を仲介しており、消化器官においては胃酸分泌を亢進し、中枢神経系における神経伝達物質として機能し、覚醒状態の維持に寄与することが知られている。ここで、ヒスタミン遊離が過剰となると、消化器官においては胃酸過多による潰瘍の原因となり、中枢神経系においては睡眠障害の一因となる。前述したように、ヘキソサミニダーゼの遊離を抑制することにより、同時にヒスタミンの遊離も抑制できることから、これにより、胃酸過多を原因とする胃潰瘍、睡眠障害等を予防、治療又は改善できると考えられる。ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有するものとして、例えば、藤茶からの抽出物（特許文献２２参照）等が知られている。

ヒアルロニダーゼは、ヒアルロン酸の加水分解酵素である。体組織への親和性を保つヒアルロン酸塩は、含水系の中では紫外線、酸素等によって分解され、分子量の低下に伴って保水効果も減少する。また、ヒアルロン酸は、生体内において細胞間組織として存在し、血管透過性にも関与している。さらに、ヒアルロニダーゼは、肥満細胞中に存在するが、その活性化により起こる脱顆粒により遊離され、炎症系ケミカルメディエーターとして作用する。したがって、ヒアルロニダーゼの活性を阻害することで、保湿の強化及び炎症の予防・軽減が期待される。ヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有するものとして、例えば、オスベッキア属植物からの抽出物（特許文献２３参照）等が知られている。

炎症は、発赤、浮腫、発熱、痛み、痒み、機能障害等の症状を示す複雑な反応である。例えば、皮膚においては、紫外線が曝露されたり、刺激性物質と接触したりすると、皮膚内で炎症性サイトカイン等が生成され、皮膚炎症が引き起こされる。その結果、皮膚組織がダメージを受け、肌荒れ、発赤、浮腫、色素沈着等の諸症状が生じるようになる。

炎症性サイトカインの一つとして、プロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２）が挙げられる。ＰＧＥ_２は、皮膚においては例えば角化細胞（ケラチノサイト）等で産生され、皮膚炎症を誘発する原因となる。この炎症時におけるプロスタグランジンの産生には、主として誘導型のシクロオキシゲナーゼであるシクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ－２）が関与することが明らかとなっている。このため、皮膚炎症を治療または予防する方法として、角化細胞でのＰＧＥ_２の産生を抑制し、あるいはＣＯＸ－２の活性を阻害することが考えられる。角化細胞に対しＰＧＥ_２産生抑制作用を有する成分として、ペンタエリスリトール等が知られている（特許文献２４参照）。

肝臓は、代謝の中心的な役割を担う生命維持に不可欠の臓器であり、その主な機能だけでも、糖・たんぱく質・脂質・ホルモンの代謝、有害物質の解毒、胆汁の生成、血液の貯蔵などが挙げられる。肝臓は障害を受けても症状が現れにくい臓器であるが、それでも飲酒、栄養過多、薬剤の乱用、肝炎ウイルス等により肝機能が障害を受けると、疲労感、倦怠感、食欲不振等を示し、さらには黄胆等を呈する場合がある。そして、肝機能障害が進行すると、肝炎、肝硬変等の生活習慣病につながるおそれがあり、肝機能を向上させること、障害から保護することは、健康な生活を維持するうえで極めて重要である。

肝臓を保護する生体内成分として、グルタチオンが知られている。グルタチオンは、グルタミン酸、システイン、グリシンの３つのアミノ酸からなるトリペプチドであり、細胞内の主要なシステイン残基を有する化合物である。グルタチオンは、主に肝臓で産生されて全身に供給され、細胞内においてラジカルの捕捉、酸化還元による細胞機能の調節、各種酵素のＳＨ供与体等としての役割のほか、特に肝臓においては解毒機構に関与し、肝機能を保護することが知られている。肝臓のグルタチオンは、飲酒によりエタノールを代謝する過程、あるいは薬剤を代謝・解毒する過程等において大量に消費され、肝臓グルタチオン量が低下すると、急性または慢性アルコール性肝炎、薬剤性肝炎等の肝機能障害の原因となるほか、全身のグルタチオン量が減少し、白内障、パーキンソン病、皮膚におけるシミの生成等、多様な症状の原因となることが知られている。

したがって、肝臓（肝細胞）におけるグルタチオンの産生を促進することができれば、肝機能を向上させ、またグルタチオン減少に起因した各種障害の予防、治療または改善が期待できると考えられる。肝細胞においてグルタチオン産生促進作用を有するものとして、リクイリチン（前述した特許文献１１参照）等が知られている。

肝機能を向上させる成分として、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）が知られている。ＡＴＰは、ブドウ糖や脂肪の代謝により産生され、エネルギー源として利用される。肝臓においては、エタノールや薬剤の代謝・解毒等、肝臓で行われる多くの化学反応におけるエネルギー源としてＡＴＰが利用されており、ＡＴＰの産生量が低下すると、これらの代謝・解毒等の効率が低下するほか、労働や運動等の活動に必要なエネルギーが不足し、その結果として疲労を招くと考えられている。
そのため、肝臓においてＡＴＰの産生を促進することができれば、エタノール摂取に起因した諸症状（例えば、二日酔い等）の予防または改善、薬剤に起因した肝障害の予防、治療または改善のほか、疲労回復を促進することができると考えられる。肝細胞においてＡＴＰ産生促進作用を有するものとして、ヒハツ抽出物（特許文献２５参照）等が知られている。

特開２００６－０５６８５５号公報 特開２００４－０８３４８８号公報 特開２００２－２０１１２２号公報 特開２００３－１４６８３７号公報 特開２００５－０２２９９３号公報 特開２００３－３００８９３号公報 特開２０１０－０９００３５号公報 特開２００６－０６３０３３号公報 特開２００６－０５６８５４号公報 特開２００３－３２１３７３号公報 特開２００９－２５６２７２号公報 特開２００９－２６９８８９号公報 特開２００７－０９９６９８号公報 特開２００９－１９１０３９号公報 特開２０１２－２１９０４７号公報 特開２００９－２５６２４４号公報 特開２０１３－０２３４８７号公報 特開２０１０－１８４９１５号公報 特開２００６－２１９４０７号公報 特開２００６－２８０３６号公報 特開２０１０－９００７６号公報 特開２００３－０１２５３２号公報 特開２００３－０５５２４２号公報 特開２０１５－２１４５３３号公報 特開２０１１－１８４３８１号公報

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本発明は、天然物由来の化合物の中から、抗メタボリックシンドローム作用、美白作用、抗老化作用、育毛作用、抗炎症作用または肝機能向上作用において優れた作用を有するものを見出し、それらを有効成分とする抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤および肝機能向上剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、抗メタボリックシンドローム作用、美白作用、抗老化作用、育毛作用、抗炎症作用または肝機能向上作用において優れた作用を有する天然物由来化合物を配合した、抗メタボリックシンドローム用途、美白用途、抗老化用途、育毛用途、抗炎症用途または肝機能向上用途に好適な経口組成物、皮膚化粧料および頭髪化粧料を提供することを目的とする。

上記課題を解決するために、本発明の抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤および肝機能向上剤は、下記一般式（Ｉ）で表される化合物１～３からなる群より選択される１種または２種以上を有効成分とすることを特徴とする。
また、本発明の経口組成物、皮膚化粧料および頭髪化粧料は、下記一般式（Ｉ）で表される化合物１～３からなる群より選択される１種または２種以上を配合することを特徴とする。

本発明によれば、上記一般式（Ｉ）で表される化合物１～３からなる群より選択される１種または２種以上を有効成分とすることにより、優れた作用効果を有する抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤および肝機能向上剤を提供することができる。
また、上記一般式（Ｉ）で表される化合物１～３からなる群より選択される１種または２種以上を配合することにより、抗メタボリックシンドローム用途、美白用途、抗老化用途、育毛用途、抗炎症用途または肝機能向上用途に好適な経口組成物、皮膚化粧料および頭髪化粧料を提供することができる。

以下、本発明の実施の形態について説明する。

〔フェニルプロピオン酸類〕
本実施形態に係る抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤および肝機能向上剤は、下記一般式（Ｉ）で表される化合物１～３からなる群より選択される１種または２種以上を有効成分とすることを特徴とする。
また、本実施形態に係る経口組成物、皮膚化粧料および頭髪化粧料は、下記一般式（Ｉ）で表される化合物１～３からなる群より選択される１種または２種以上を配合することを特徴とする。

上記一般式（Ｉ）で表される化合物は、いずれもフェニルプロピオン酸誘導体であり、化合物１は、３,４－ジヒドロキシヒドロ桂皮酸（3,4-Dihydroxyhydrocinnamic acid）である。また、化合物２は、３－（４－ヒドロキシフェニル）プロピオン酸（3-(4-Hydroxyphenyl)propionic acid）であり、化合物３は、３－フェニルプロピオン酸（3-phenylpropionic acid）である。
以下、本明細書において、上記式（Ｉ）で表される化合物を「フェニルプロピオン酸類」ということがある。

上記フェニルプロピオン酸類は、例えば、フェニルプロピオン酸類を含有する植物抽出物から単離・精製することにより製造することができる。この場合、このようなフェニルプロピオン酸類を含有する植物抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法によって得ることができる。上記フェニルプロピオン酸類を含有する植物としては、例えば、米、大麦、小麦、大豆、小豆、とうもろこし等が挙げられる。

また、上記フェニルプロピオン酸類は、例えば、３,４－ジヒドロキシ桂皮酸、４－ヒドロキシ桂皮酸もしくは桂皮酸（以下、これら３種化合物を「桂皮酸類」と総称することがある）、またはこれらを含有する組成物（例えば、植物の破砕物もしくは抽出物等）を、フェノール酸還元酵素を有する微生物により醗酵させ、桂皮酸類をフェニルプロピオン酸類に変換した後、得られた醗酵物を抽出・単離・精製することにより製造することもできる。桂皮酸類を含有する組成物としては、例えば、コーヒー、コムギ、トウモロコシ、トマト、マテ、ヨモギ、ゴボウ等の植物の破砕物及び抽出物などが挙げられる。また、桂皮酸類は木本植物及び草本植物におけるリグニンの構成成分であるため、リグニンまたはこれを含有する組成物を醗酵原料として利用してもよい。一方、フェノール酸還元酵素を有する微生物としては、例えば、Lactobacillus plantarum、Lactobacillus fermentum、Lactobacillus gasseri、Lactobacillus johnsonii、Lactobacillus crispatus、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus amylovorus、Lactobacillus delbrueckii、Lactobacillus buchneri、Lactobacillus kefiranofaciens、Lactobacillus gallinarum、Enterococcus faecalis等の乳酸菌などが挙げられる。

上記植物または醗酵物などから上記フェニルプロピオン酸類を抽出・単離・精製する方法は特に限定されず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出処理は、抽出原料としての上記植物または醗酵物を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供すればよい。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。

抽出溶媒としては、極性溶媒を使用することが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独でまたは２種以上を組み合わせて、室温または溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。

抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本実施形態において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１～５の低級脂肪族アルコール；１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２～５の多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン等が挙げられる。

２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は任意であり、適宜調整することができる。例えば、水と親水性有機溶媒との混合液を抽出溶媒として使用する場合には、任意の比率、すなわち０：１００超、１００：０未満（容量比，以下同様に表記）の間で混和して用いることができ、適宜調整することができる。
例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を抽出溶媒として使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比（容量比）を９：１以上とすることができ、さらには７：３以上とすることができ、あるいは水と低級脂肪族アルコールとの混合比を１：９以下、さらには２：８以下とすることができる。また、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水と多価アルコールとの混合比を８：２以上、あるいは１：９以下とすることができ、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水と低級脂肪族ケトンとの混合比を９：１以上、あるいは２：８以下とすることができる。

抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５～１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温または還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。

以上のようにして得られた抽出液、当該抽出液の濃縮物または当該抽出液の乾燥物から上記フェニルプロピオン酸類を単離・精製する方法は、特に限定されるものではなく、常法により行うことができる。例えば、抽出物を展開溶媒に溶解し、シリカゲルやアルミナ等の多孔質物質、スチレン－ジビニルベンゼン共重合体やポリメタクリレート等の多孔性樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーに付して、フェニルプロピオン酸類を含む画分を回収する方法等が挙げられる。この場合、展開溶媒は使用する固定相に応じて適宜選択すればよいが、例えば固定相としてシリカゲルを用いた順相クロマトグラフィーにより抽出物を分離する場合、展開溶媒としてはクロロホルム：メタノール＝９５：５等が挙げられる。さらに、カラムクロマトグラフィーにより得られたフェニルプロピオン酸類を含む画分を、ＯＤＳを用いた逆相シリカゲルクロマトグラフィー、再結晶、液－液向流抽出、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー等の任意の有機化合物精製手段を用いて精製してもよい。

〔抗メタボリックシンドローム剤，美白剤，抗老化剤，育毛剤，抗炎症剤，肝機能向上剤〕
以上のようにして得られる上記フェニルプロピオン酸類は、抗メタボリックシンドローム作用、美白作用、抗老化作用、育毛作用、抗炎症作用および肝機能向上作用において優れた作用を有しているため、抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤および肝機能向上剤の有効成分として用いることができる。また、抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤を製造するために、上記フェニルプロピオン酸類を使用することができる。
本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤および肝機能向上剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品等の幅広い用途に使用することができる。

ここで、上記フェニルプロピオン酸類が有する抗メタボリックシンドローム作用は、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）ホスホジエステラーゼ活性阻害作用および／またはジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ ＩＶ）活性阻害作用に基づいて発揮されることが好ましい。ただし、上記フェニルプロピオン酸類が有する抗メタボリックシンドローム作用は上記作用に基づいて発揮される抗メタボリックシンドローム作用に限定されるものではない。
また、上記フェニルプロピオン酸類は、そのｃＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用またはＤＰＰ ＩＶ活性阻害作用を利用して、それぞれｃＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害用途、またはＤＰＰ ＩＶ活性阻害用途に用いることができる。すなわち、本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤は、上記フェニルプロピオン酸類を有効成分とするｃＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤またはＤＰＰ ＩＶ活性阻害剤として用いることもできる。

上記フェニルプロピオン酸類が有する美白作用は、チロシナーゼ活性阻害作用および／またはメラニン産生抑制作用に基づいて発揮されることが好ましい。ただし、上記フェニルプロピオン酸類が有する美白作用は上記作用に基づいて発揮される美白作用に限定されるものではない。
また、上記フェニルプロピオン酸類は、そのチロシナーゼ活性阻害作用またはメラニン産生抑制作用を利用して、それぞれチロシナーゼ活性阻害用途またはメラニン産生抑制用途に用いることができる。すなわち、本実施形態の美白剤は、上記フェニルプロピオン酸類を有効成分とするチロシナーゼ活性阻害剤またはメラニン産生抑制剤として用いることもできる。

上記フェニルプロピオン酸類が有する抗老化作用は、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ１）ｍＲＮＡ発現促進作用、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ（ＳＰＴ）ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－４ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディンｍＲＮＡ発現促進作用、最終糖化産物（ＡＧＥｓ）形成抑制作用、および最終糖化産物（ＡＧＥｓ）分解促進作用からなる群より選択される１種または２種以上の作用に基づいて発揮されることが好ましい。ただし、上記フェニルプロピオン酸類が有する抗老化作用は上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。
また、上記フェニルプロピオン酸類は、そのＩ型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、ＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリンｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－４ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディンｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＧＥｓ形成抑制作用、またはＡＧＥｓ分解促進作用を利用して、それぞれＩ型コラーゲン産生促進用途、エラスチン産生促進用途、ヒアルロン酸産生促進用途、エラスターゼ活性阻害用途、ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進用途、ラミニン－３３２産生促進用途、表皮角化細胞増殖促進用途、ＡＴＰ産生促進用途、グルタチオン産生促進用途、ＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進用途、ＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進用途、ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進用途、フィラグリンｍＲＮＡ発現促進用途、クローディン－１ｍＲＮＡ発現促進用途、クローディン－４ｍＲＮＡ発現促進用途、オクルディンｍＲＮＡ発現促進用途、ＡＧＥｓ形成抑制用途、またはＡＧＥｓ分解促進用途に用いることができる。
すなわち、本実施形態の抗老化剤は、上記フェニルプロピオン酸類を有効成分とするＩ型コラーゲン産生促進剤、エラスチン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、エラスターゼ活性阻害剤、ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進剤、ラミニン－３３２産生促進剤、表皮角化細胞増殖促進剤、ＡＴＰ産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、ＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤、クローディン－１ ｍＲＮＡ発現促進剤、クローディン－４ ｍＲＮＡ発現促進剤、オクルディン ｍＲＮＡ発現促進剤、ＡＧＥｓ形成抑制剤、またはＡＧＥｓ分解促進剤として用いることもできる。

上記フェニルプロピオン酸類が有する育毛作用は、テストステロン５α－レダクターゼ活性阻害作用および／または毛乳頭細胞増殖促進作用に基づいて発揮されることが好ましい。ただし、上記フェニルプロピオン酸類が有する育毛作用は上記作用に基づいて発揮される育毛作用に限定されるものではない。
また、上記フェニルプロピオン酸類は、そのテストステロン５α－レダクターゼ活性阻害作用または毛乳頭細胞増殖促進作用を利用して、それぞれテストステロン５α－レダクターゼ活性阻害用途または毛乳頭細胞増殖促進用途に用いることができる。すなわち、本実施形態の育毛剤は、上記フェニルプロピオン酸類を有効成分とするテストステロン５α－レダクターゼ活性阻害剤または毛乳頭細胞増殖促進剤として用いることもできる。

上記フェニルプロピオン酸類が有する抗炎症作用は、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、およびプロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２）活性阻害作用からなる群より選択される１種または２種以上の作用に基づいて発揮されることが好ましい。ただし、上記フェニルプロピオン酸類が有する抗炎症作用は上記作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。
また、上記フェニルプロピオン酸類は、そのＮＯ産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、またはＰＧＥ_２産生促進作用を利用して、それぞれＮＯ産生抑制用途、ヒアルロニダーゼ活性阻害用途、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制用途、またはＰＧＥ_２産生促進用途に用いることができる。すなわち、本実施形態の抗炎症剤は、上記フェニルプロピオン酸類を有効成分とするＮＯ産生抑制剤、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤、またはＰＧＥ_２産生促進剤として用いることもできる。

上記フェニルプロピオン酸類が有する肝機能向上作用は、肝細胞グルタチオン産生促進作用および／または肝細胞アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）産生促進作用に基づいて発揮されることが好ましい。ただし、上記フェニルプロピオン酸類が有する肝機能向上作用は上記作用に基づいて発揮される肝機能向上作用に限定されるものではない。
また、上記フェニルプロピオン酸類は、その肝細胞グルタチオン産生促進作用または肝細胞ＡＴＰ産生促進作用を利用して、それぞれ肝細胞グルタチオン産生促進用途、または肝細胞ＡＴＰ産生促進用途に用いることができる。すなわち、本実施形態の肝機能向上剤は、上記フェニルプロピオン酸類を有効成分とする肝細胞グルタチオン産生促進剤または肝細胞ＡＴＰ産生促進剤として用いることもできる。

なお、本実施形態に係る抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤の有効成分として、単離した上記フェニルプロピオン酸類に替えて、フェニルプロピオン酸類を含有する組成物を用いてもよい。ここで、本実施形態における「フェニルプロピオン酸類を含有する組成物」には、上記フェニルプロピオン酸類を含有する植物を抽出原料として得られる抽出物、フェニルプロピオン酸類を含有する醗酵物、及び当該醗酵物を抽出原料として得られる抽出物が含まれる。また、「抽出物」には、抽出処理により得られる抽出液、当該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、または当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物が含まれる。

本実施形態に係る抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤の有効成分として、上記フェニルプロピオン酸類を含有する組成物を用いる場合は、組成物中にフェニルプロピオン酸類が０．１質量％以上であることが好ましく、５質量％以上であることがさらに好ましく、５０質量％以上であることが特に好ましい。フェニルプロピオン酸類の純度を高めたものを有効成分として使用することによって、より一層作用効果に優れた抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤を得ることができる。

本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤は、上記フェニルプロピオン酸類またはフェニルプロピオン酸類を含有する組成物のみからなるものでもよいし、フェニルプロピオン酸類またはフェニルプロピオン酸類を含有する組成物を製剤化したものでもよい。

本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤および肝機能向上剤は、他の組成物（例えば、後述する経口組成物、皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。

本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤を製剤化した場合、上記フェニルプロピオン酸類またはフェニルプロピオン酸類を含有する組成物の含有量は、特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜設定することができる。

なお、本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤は、必要に応じて、抗メタボリックシンドローム作用、美白作用、抗老化作用、育毛作用、抗炎症作用または肝機能向上作用を有する他の天然抽出物等を、上記フェニルプロピオン酸類またはフェニルプロピオン酸類を含有する組成物とともに配合して有効成分として用いることができる。

本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤の患者に対する投与方法としては、経口投与、経皮投与、腹腔内投与、静脈投与、皮下投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防又は治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。

本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤は、その抗メタボリックシンドローム作用、好ましくはｃＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を通じて、脂肪の分解を促進することができ、この結果、肥満症、およびこれに伴う動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等の様々な生活習慣病を予防・改善することができる。また、本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤は、その抗メタボリックシンドローム作用、好ましくはＤＰＰ ＩＶ活性阻害作用を通じて、２型糖尿病、肥満、高血圧症、インスリン抵抗性等を予防・治療することができる。ただし、本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤は、これらの用途以外にも、抗メタボリックシンドローム作用、好ましくは、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用またはＤＰＰ ＩＶ活性阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

例えば、本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤または前述したｃＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害剤は、ｃＡＭＰの分解を抑制するため、血小板の凝集を抑制することができ、これによりアレルギー疾患や各種炎症性疾患等を予防、治療又は改善することができる。
また、本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤または前述したＤＰＰ ＩＶ活性阻害剤は、そのＤＰＰ ＩＶ活性阻害作用を通じて、関節リウマチ等の自己免疫疾患や移植拒絶反応を予防・治療することができるとともに、疼痛、神経変性疾患、及び神経精神疾患等の神経障害（例えば坐骨神経痛、アルツハイマー病、うつ病等）；成長ホルモン欠損症及び成長ホルモンが治療に使用される疾患；癌（例えばＴ－細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、甲状腺癌、基底細胞癌、乳癌等）；ＨＩＶ感染症（ＡＩＤＳ）等の疾患を予防・治療することができる。

本実施形態の美白剤は、その美白作用、好ましくはチロシナーゼ活性阻害作用および／またはメラニン産生抑制作用を通じて、皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着を予防・改善することができる。ただし、本実施形態の美白剤は、これらの用途以外にも、美白作用、好ましくはチロシナーゼ活性阻害作用またはメラニン産生抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

本実施形態の抗老化剤は、その抗老化作用、好ましくはＩ型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、ＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１ ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－４ ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディン ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＧＥｓ形成抑制作用、およびＡＧＥｓ分解促進作用からなる群より選択される１または２以上の作用を通じて、皮膚のシワの形成、弾力性の低下、保湿機能の低下等の皮膚の老化症状を予防、治療または改善することができる。
ただし、本実施形態の抗老化剤は、これらの用途以外にも、抗老化作用、好ましくは、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、ＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１ ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－４ ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディン ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＧＥｓ形成抑制作用、またはＡＧＥｓ分解促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

例えば、本実施形態の抗老化剤または前述したＩ型コラーゲン産生促進剤は、そのＩ型コラーゲン産生促進作用を通じて、骨粗鬆症等のコラーゲン産生の低下に起因する疾患の予防、治療又は改善；損傷した腱や靱帯の再生促進；創傷又は熱傷の治癒の促進；等の用途に用いることができる。また、本実施形態の抗老化剤または前述したエラスチン産生促進剤もしくはエラスターゼ活性阻害剤は、そのエラスチン産生促進作用またはエラスターゼ活性阻害作用により、肺気腫等の肺疾患；高血圧、動脈瘤等の血管性疾患；などの予防、治療または改善の用途に用いることができる。さらに、本実施形態の抗老化剤または前述したヒアルロン酸産生促進剤は、そのヒアルロン酸産生促進作用により、慢性関節リウマチ、変形性関節炎、化膿性関節炎、痛風性関節炎、外傷性関節炎、骨関節炎等の関節炎の予防、治療または改善；創傷または熱傷の治癒の促進；などの用途に用いることができる。

前述した用途の他、本実施形態の抗老化剤または前述したラミニン－３３２産生促進剤は、そのラミニン－３３２産生促進作用を通じて、基底膜構造の再構築を誘導し、皮膚における創傷を治療・改善することができる。また、本実施形態の抗老化剤または前述したラミニン－３３２産生促進剤は、ラミニン－３３２の欠乏（欠損）に起因する疾患（表皮水疱症等）の予防又は治療剤として用いることができる。

前述した用途の他、本実施形態の抗老化剤または前述した表皮角化細胞増殖促進剤は、その表皮角化細胞増殖促進作用を通じて、肌の新陳代謝を回復させ、こじわ、くすみ、色素沈着等の予防、治療または改善；再生医療；などの用途に使用することができる。また、本実施形態の抗老化剤または前述したＡＴＰ産生促進剤は、そのＡＴＰ産生促進作用を通じて、ターンオーバーを促進し、皮膚においてはシワ、きめの消失、弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防・改善することができるとともに、メラニンが異常蓄積した角質細胞の角質層からの脱落等、肌の新陳代謝機能を回復することにより、皮膚におけるくすみ、色素沈着等の症状を予防・改善することができる。さらに、本実施形態の抗老化剤または前述したＡＴＰ産生促進剤もしくはグルタチオン産生促進剤は、後述する肝細胞ＡＴＰ産生促進作用または肝細胞グルタチオン産生促進作用にそれぞれ基づく用途に用いることもできる。

前述した用途の他、本実施形態の抗老化剤または前述したＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進剤もしくはフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤は、そのＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進作用またはフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用を通じて、皮膚のバリア機能を強化し、肌荒れ、乾燥肌等のほか、乾燥性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等）を予防、治療または改善することができる。また、本実施形態の抗老化剤または前述したフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進剤もしくはＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、そのフィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用またはＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を通じて、加齢による水分保持機能やバリア機能等を改善することができる。

前述した用途の他、本実施形態の抗老化剤または前述したクローディン－１ ｍＲＮＡ発現促進剤、クローディン－４ ｍＲＮＡ発現促進剤、もしくはオクルディン ｍＲＮＡ発現促進剤は、そのクローディン－１ ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－４ ｍＲＮＡ発現促進作用またはオクルディン ｍＲＮＡ発現促進作用を通じて、表皮角化細胞におけるタイトジャンクションの形成を促すことができ、これにより、皮膚のバリア機能および水分保持機能を高め、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎や各種感染症などの皮膚症状を予防または改善することができる。また、本実施形態の抗老化剤または前述したクローディン－１ ｍＲＮＡ発現促進剤、クローディン－４ ｍＲＮＡ発現促進剤、もしくはオクルディン ｍＲＮＡ発現促進剤は、消化管におけるバリア機能を改善し、炎症性腸疾患や食物アレルギー、消化管から感染する各種感染症などを予防または改善することができる。

前述した用途の他、本実施形態の抗老化剤または前述したＡＧＥｓ形成抑制剤もしくはＡＧＥｓ分解促進剤は、そのＡＧＥｓ形成抑制作用またはＡＧＥｓ分解促進作用を通じて、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症等の糖尿病合併症；タンパク質の糖化反応に起因する動脈硬化；タンパク質の糖化反応に起因する骨粗鬆症や変形性関節症等；などを予防または治療することができる。また、本実施形態の抗老化剤または前述したＡＧＥｓ形成抑制剤は、そのＡＧＥｓ形成抑制作用を通じて、タンパク質の糖化反応に起因する毛髪の損傷を予防又は抑制することができ、これにより毛髪のゴワつきを予防又は抑制し、毛髪の弾力性やしなやかさ等を回復し、また毛髪にハリ・コシを付与することができる。

本実施形態の育毛剤は、その育毛作用、好ましくはテストステロン５α－レダクターゼ活性阻害作用および／または毛乳頭細胞増殖促進作用を通じて、男性型脱毛症、円形脱毛症、トリコチロマニア等の脱毛症等を予防、治療または改善することができ、特に男性型脱毛症の予防、治療または改善に好適である。ただし、本発明の育毛剤は、これらの用途以外にも、育毛作用、好ましくはテストステロン５α－レダクターゼ活性阻害作用または毛乳頭細胞増殖促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

例えば、本実施形態の育毛剤または前述したテストステロン５α－レダクターゼ活性阻害剤は、そのテストステロン５α－レダクターゼ活性阻害作用を通じて、男性ホルモンが関与する疾患、例えば、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等を予防、治療又は改善することができる。また、本実施形態の育毛剤または前述した毛乳頭細胞増殖促進剤は、その毛乳頭細胞増殖促進作用を通じて、毛乳頭細胞を用いた毛髪再生等の再生医療分野への応用に使用することもできる。

本実施形態の抗炎症剤は、その抗炎症作用、好ましくはＮＯ産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、およびＰＧＥ_２産生促進作用からなる群より選択される１または２以上の作用を通じて、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、アトピー性皮膚炎、その他肌荒れに伴う各種皮膚炎症性疾患を予防、治療または改善することができる。ただし、本実施形態の抗炎症剤は、これらの用途以外にも、抗炎症作用、好ましくは、ＮＯ産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、またはＰＧＥ_２産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

例えば、本実施形態の抗炎症剤または前述したＮＯ産生抑制剤、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤、もしくはＰＧＥ_２産生促進剤は、そのＮＯ産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、またはＰＧＥ_２産生促進作用を通じて、関節リウマチ、変形性関節症、喘息などを予防、治療または改善することができる。また、本実施形態の抗炎症剤または前述したヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤は、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を通じて、胃酸過多を原因とする胃潰瘍、睡眠障害等を予防、治療又は改善することができる。

本実施形態の肝機能向上剤は、その肝機能向上作用、好ましくは肝細胞グルタチオン産生促進作用および／または肝細胞ＡＴＰ産生促進作用により、肝機能を向上させることができる。肝機能向上用途に包含されるものとして：エタノール摂取に起因した症状（例えば二日酔い等）の予防、治療または改善；糖や脂肪等の代謝・分解の促進；脂肪肝、アルコール性肝炎や薬剤性肝炎等の肝炎、肝硬変等の予防、治療または改善；などの用途が挙げられる。
ただし、本実施形態の肝機能向上剤は、これらの用途以外にも、肝機能向上作用、好ましくは、肝細胞グルタチオン産生促進作用または肝細胞ＡＴＰ産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

例えば、本実施形態の肝機能向上剤または前述した肝細胞グルタチオン産生促進剤は、その肝細胞グルタチオン産生促進作用を通じて、白内障、パーキンソン病等、生体内グルタチオン濃度の低下と関連した疾患の予防、治療または改善；皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着の予防、治療または改善；などの用途に用いることができる。また、本実施形態の肝機能向上剤または前述した肝細胞ＡＴＰ産生促進剤は、その肝細胞ＡＴＰ産生促進作用を通じて、疲労感・倦怠感の回復等の用途に用いることができる。

また、本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤および肝機能向上剤は、それぞれ抗メタボリックシンドローム作用、美白作用、抗老化作用、育毛作用、抗炎症作用および肝機能向上作用において優れた作用を有するので、これらの作用機構に関する研究のための試薬としても好適に利用することができる。

〔経口組成物〕
上記フェニルプロピオン酸類は、抗メタボリックシンドローム作用、美白作用、抗老化作用、育毛作用、抗炎症作用および肝機能向上作用において優れた作用を有しているため、経口組成物に配合するのに好適である。この場合、上記フェニルプロピオン酸類またはフェニルプロピオン酸類を含有する組成物をそのまま配合してもよいし、フェニルプロピオン酸類から製剤化した、抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤を配合してもよい。

上記フェニルプロピオン酸類もしくはフェニルプロピオン酸類を含有する組成物、またはフェニルプロピオン酸類もしくはフェニルプロピオン酸類を含有する組成物から製剤化した抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤もしくは肝機能向上剤を経口組成物に配合することにより、それぞれ抗メタボリックシンドローム用途、美白用途、抗老化用途、育毛用途、抗炎症用途または肝機能向上用途に好適な経口組成物とすることができる。これらの中でも、抗メタボリックシンドローム作用および肝機能向上作用は、経口組成物に付与されることで作用効果が発揮されやすいため、好適である。

ここで、経口組成物とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品等の区分に制限されるものではない。したがって、本実施形態における「経口組成物」は、経口的に摂取される一般食品、飼料、健康食品、保健機能食品（特定保健用食品，栄養機能食品，機能性表示飲食品）、医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものである。本実施形態に係る経口組成物は、当該経口組成物またはその包装に、上記フェニルプロピオン酸類が有する好ましい作用を表示することのできる経口組成物であることが好ましく、保健機能食品（特定保健用食品，機能性表示食品，栄養機能食品）、医薬部外品または医薬品であることが特に好ましい。

上記フェニルプロピオン酸類もしくはフェニルプロピオン酸類を含有する組成物、またはフェニルプロピオン酸類もしくはフェニルプロピオン酸類を含有する組成物から製剤化した抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤もしくは肝機能向上剤を経口組成物に配合する場合、それらにおける有効成分の配合量は、使用目的、症状、性別等を考慮して適宜変更することができるが、添加対象となる経口組成物の一般的な摂取量を考慮して、フェニルプロピオン酸類の成人１日あたりの摂取量が約１～１０００ｍｇになるようにするのが好ましい。なお、添加対象経口組成物が顆粒状、錠剤状またはカプセル状の経口組成物の場合、上記フェニルプロピオン酸類もしくはフェニルプロピオン酸類を含有する組成物、またはフェニルプロピオン酸類もしくはフェニルプロピオン酸類を含有する組成物から製剤化した抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤もしくは肝機能向上剤の添加量は、添加対象経口組成物に対して通常０．１～１００質量％であり、好ましくは５～１００質量％である。

本実施形態の経口組成物は、上記フェニルプロピオン酸類をその活性を妨げないような任意の経口組成物に配合したものであってもよいし、上記フェニルプロピオン酸類を主成分とする栄養補助食品であってもよい。

本実施形態の経口組成物を製造する際には、例えば、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類などの任意の助剤を添加して任意の形状の経口組成物にすることができる。

上記フェニルプロピオン酸類を配合し得る経口組成物は特に限定されないが、その具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物；その他種々の形態の健康・栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤などが挙げられ、これらの経口組成物に上記フェニルプロピオン酸類を配合するときに、通常用いられる補助的な原料や添加物を併用することができる。

〔皮膚化粧料，頭髪化粧料〕
上記フェニルプロピオン酸類は、抗メタボリックシンドローム作用、美白作用、抗老化作用、育毛作用、抗炎症作用および肝機能向上作用において優れた作用を有しているため、皮膚化粧料または頭髪化粧料に配合するのに好適である。この場合、上記フェニルプロピオン酸類をそのまま配合してもよいし、上記フェニルプロピオン酸類から製剤化した抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤または肝機能向上剤を配合してもよい。

上記フェニルプロピオン酸類または上記抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤もしくは肝機能向上剤を配合することにより、皮膚化粧料または頭髪化粧料に抗メタボリックシンドローム作用、美白作用、抗老化作用、育毛作用、抗炎症作用または肝機能向上作用を付与することができ、抗メタボリックシンドローム用途、美白用途、抗老化用途、育毛用途、抗炎症用途または肝機能向上用途に用いることのできる皮膚化粧料または頭髪化粧料とすることができる。

これらの中でも、美白作用、抗老化作用および抗炎症作用は、皮膚化粧料に配合したときに作用効果が発揮されやすく、すなわち美白用途、抗老化用途または抗炎症用途に特に好適な皮膚化粧料とすることができる。また、育毛作用、抗老化作用および抗炎症作用は、頭髪化粧料に配合したときに作用効果が発揮されやすく、すなわち育毛用途、抗老化用途または抗炎症用途に特に好適な頭髪化粧料とすることができる。

上記フェニルプロピオン酸類、または上記抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤もしくは肝機能向上剤を配合し得る皮膚化粧料または頭髪化粧料の種類は特に限定されるものではなく、皮膚化粧料としては、例えば、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、ジェル、美容オイル、パック、ファンデーション等が挙げられ、また、頭髪化粧料としては、例えば、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンス等が挙げられる。

上記フェニルプロピオン酸類、または上記抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤もしくは肝機能向上剤を皮膚化粧料または頭髪化粧料に配合する場合、その配合量は、皮膚化粧料または頭髪化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、約０．０００１～１０質量％であり、特に好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．００１～１質量％である。

本実施形態の皮膚化粧料または頭髪化粧料は、上記フェニルプロピオン酸類が有する抗メタボリックシンドローム作用、美白作用、抗老化作用、育毛作用、抗炎症作用または肝機能向上作用を妨げない限り、通常の皮膚化粧料または頭髪化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された他の有効成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。

本実施形態の皮膚化粧料は、上記フェニルプロピオン酸類が有する美白作用、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用；抗老化作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、ＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１ ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－４ ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディン ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＧＥｓ形成抑制作用、ＡＧＥｓ分解促進作用；育毛作用、テストステロン５α－レダクターゼ活性阻害作用、毛乳頭細胞増殖促進作用；抗炎症作用、ＮＯ産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、ＰＧＥ_２産生促進作用；抗メタボリックシンドローム作用、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用、ＤＰＰ ＩＶ活性阻害作用；肝機能向上作用、肝細胞グルタチオン産生促進作用、肝細胞ＡＴＰ産生促進作用；からなる群より選択される１または２以上の作用を通じて、皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着の予防、治療または改善；皮膚のシワの形成、弾力性の低下、保湿機能の低下等の皮膚の老化症状の予防、治療または改善；創傷又は熱傷の治癒の促進；肌荒れ、乾燥肌等のほか、乾燥性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等）の予防、治療または改善；脂漏症、座瘡（ニキビなど）等の男性ホルモンが関与する疾患の予防、治療または改善；接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚炎症性疾患の予防、治療または改善；肥満症、およびそれに伴う動脈硬化、糖尿病、メタボリック症候群等の生活習慣病の予防、治療または改善；などをすることができる。

また、本実施形態の頭髪化粧料は、上記フェニルプロピオン酸類が有する育毛作用、テストステロン５α－レダクターゼ活性阻害作用、毛乳頭細胞増殖促進作用；抗炎症作用、ＮＯ産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、ＰＧＥ_２産生促進作用；抗老化作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、ＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１ ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－４ ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディン ｍＲＮＡ発現促進作用、ＡＧＥｓ形成抑制作用、ＡＧＥｓ分解促進作用；抗メタボリックシンドローム作用、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用、ＤＰＰ ＩＶ活性阻害作用；美白作用、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用；肝機能向上作用、肝細胞グルタチオン産生促進作用、肝細胞ＡＴＰ産生促進作用；からなる群より選択される１または２以上の作用を通じて、男性型脱毛症、円形脱毛症、トリコチロマニア等の脱毛症の予防、治療または改善；接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚炎症性疾患の予防、治療または改善；肌荒れ、乾燥肌等のほか、乾燥性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等）の治療；などをすることができる。

なお、本実施形態の抗メタボリックシンドローム剤、美白剤、抗老化剤、育毛剤、抗炎症剤、肝機能向上剤、経口組成物、皮膚化粧料および頭髪化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば，マウス，ラット，ハムスター，イヌ，ネコ，ウシ，ブタ，サル等）に対して適用することもできる。

以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。なお、本試験例においては、被験試料として、以下の市販の化合物を使用した。

〔試験例１〕サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにしてサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を試験した。

５mmol/Lの塩化マグネシウムを含有する５０mmol/L Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）０．２mLに、２．５mg/mLウシ血清アルブミン溶液０．１mL、０．１mg/mLサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ溶液０．１mL、および被験試料溶液（試料１，最終濃度は下記表２を参照）０．０５mLを加え、３７℃にて５分間静置した。その後、０．５mg/mLサイクリックＡＭＰ溶液０．０５mLを加え、３７℃で６０分間反応させた。反応終了後、３分間沸騰水浴上で煮沸することにより反応を停止させ、これを遠心（２２６０×ｇ，１０分間，４℃）し、上清中の反応基質であるサイクリックＡＭＰを、下記の高速液体クロマトグラフィー条件にて分析した。また、コントロールとして、試料無添加の溶媒のみを加えて同様の操作を行った。

＜高速液体クロマトグラフィー条件＞
製品名：Ｃｈｒｏｍａｔｏｃｏｒｄｅｒ １２（SYSTEM INSTRUMENTS社製）
固定相：Ｗａｋｏｓｉｌ Ｃ_１８－ＯＤＳ ５μm（富士フィルム和光純薬社製）
カラム長：２５０mm
移動相：１mmol/L ＴＢＡＰ in ２５mmol/L ＫＨ_２ＰＯ_４：ＣＨ_３ＣＮ＝９０：１０
移動相流速：１．０mL/min
検出：２６０nm

次に、サイクリックＡＭＰ標準品のピーク面積（Ａ）、試料無添加時におけるサイクリックＡＭＰ標準品とサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼとの反応溶液の上清のピーク面積（Ｂ１）及び被験試料添加時におけるサイクリックＡＭＰ標準品とサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼとの反応溶液の上清のピーク面積（Ｂ２）を求めた。得られた結果から、下記式により試料無添加時のサイクリックＡＭＰ標準品の分解率（Ｃ）及び被験試料添加時のサイクリックＡＭＰ標準品の分解率（Ｄ）を算出した。

試料無添加での標準品の分解率（Ｃ，％）＝（１－Ｂ１／Ａ）×１００
被験試料添加での標準品の分解率（Ｄ，％）＝（１－Ｂ２／Ａ）×１００

その後、上記式により算出した各分解率（Ｃ，Ｄ）に基づいて、下記式によりサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害率（％）を算出した。
ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害率（％）＝（１－Ｄ／Ｃ）×１００
結果を表２に示す。

表２に示すように、化合物１（試料１）は、優れたサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有することが確認された。

〔試験例２〕ＤＰＰ ＩＶ活性阻害作用試験
化合物１～３（試料１～３）について、以下のようにしてジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ ＩＶ）活性阻害作用を試験した。

９６ウェルプレートにて、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）にて調製した被験試料（試料１～３，最終濃度は下記表３を参照）２５μLと、上記緩衝液にて調製した０．４μg/mLＤＰＰ ＩＶ（Ｒ＆Ｄシステム社製，ｒｈＣＤ２６）溶液２５μLとを混合し、３７℃にて５分間プレインキュベーションした。その後、上記緩衝液にて調製した０．５ｍＭ Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－ｐ－ＮＡ・Ｔｏｓ（ペプチド研究所社製）５０μLを添加し、３７℃にて９０分間反応させた。反応終了後、波長４１５nmにおける吸光度を測定した。得られた結果から、下記式によりＤＰＰ ＩＶ活性阻害率（％）を算出した。

ＤＰＰ ＩＶ活性阻害率（％）＝｛１－（Ｃ－Ｄ）／（Ａ－Ｂ）｝×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：試料無添加・酵素添加での波長４１５nmにおける吸光度
Ｂ：試料無添加・酵素無添加での波長４１５nmにおける吸光度
Ｃ：被験試料添加・酵素添加での波長４１５nmにおける吸光度
Ｄ：被験試料添加・酵素無添加での波長４１５nmにおける吸光度
結果を表３に示す。

表３に示すように、化合物１（試料１）、化合物２（試料２）、および化合物３（試料３）は、いずれも優れたＤＰＰ ＩＶ阻害作用を示した。

〔試験例３〕チロシナーゼ活性阻害作用試験
化合物３（試料３）について、以下のようにしてチロシナーゼ活性阻害作用を試験した。

４８ウェルプレートに、Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６．８）０．２mL、０．３mg/mLチロシン溶液０．０６mL、２５％ＤＭＳＯ溶液に溶解した被験試料（試料３，最終濃度は下記表４を参照）０．１８mLを加え、３７℃で１０分間静置した。これに、１０００units/mLチロシナーゼ溶液０．０２mLを加え、引き続き３７℃で１５分間反応させた。反応終了後、波長４７５nmにおける吸光度を測定した。

また、ブランクとして、酵素溶液を添加しない場合についても同様の操作および吸光度の測定を行った。さらに、コントロールとして、試料溶液を添加せずに２５％ＤＭＳＯ溶液を添加した場合についても同様の測定を行った。得られた測定結果から、下記式によりチロシナーゼ活性阻害率（％）を算出した。

チロシナーゼ活性阻害率（％）＝｛１－（Ａ－Ｂ）／（Ｃ－Ｄ）｝×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加・酵素添加での波長４７５nmにおける吸光度
Ｂ：被験試料添加・酵素無添加での波長４７５nmにおける吸光度
Ｃ：試料無添加・酵素添加での波長４７５nmにおける吸光度
Ｄ：試料無添加・酵素無添加での波長４７５nmにおける吸光度
結果を表４に示す。

表４に示すように、化合物３（試料３）は、優れたチロシナーゼ活性阻害作用を有していると認められた。

〔試験例４〕Ｂ１６メラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用試験
化合物１～３（試料１～３）について、以下のようにしてＢ１６メラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用を試験した。

Ｂ１６メラノーマ細胞を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２４．０×１０^４cells/mLの細胞密度になるように１０％ＦＢＳおよび１mmol/Lテオフィリン含有ＤＭＥＭで希釈した後、４８ウェルプレートに１ウェルあたり３００μLずつ播種し、６時間培養した。

培養終了後、１０％ＦＢＳおよび１mmol/Lテオフィリン含有ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料１～３，最終濃度は下記表５を参照）を各ウェルに３００μL添加し、４日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の１０％ＦＢＳおよび１mmol/Lテオフィリン含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。培養終了後、培地を除去し、２mol/L ＮａＯＨ溶液２００μLを添加して超音波破砕機により細胞を破壊し、波長４７５nmにおける吸光度を測定した。測定した吸光度の値から、合成メラニン（SIGMA社製）を用いて作成した検量線をもとにメラニン量を算出した。

また、細胞生存率を測定するために、上記と同様にして培養した後、培地を除去し４００μLのＰＢＳ（－）緩衝液で洗浄して、終濃度０．０５mg/mLで１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解したニュートラルレッドを各ウェルに２００μL添加し、２．５時間培養した。培養後、ニュートラルレッド溶液を除去し、エタノール・酢酸溶液（エタノール：酢酸：水＝５０：１：４９）を各ウェルに２００μL添加し、色素を抽出した。抽出後、波長５４０nmにおける吸光度を測定した。得られた結果から、下記式により細胞生存率により補正したメラニン産生抑制率（％）を算出した。

メラニン産生抑制率（％）＝｛１－（Ｂ／Ｄ）／（Ａ／Ｃ）｝×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：試料無添加におけるメラニン量
Ｂ：被験試料添加におけるメラニン量
Ｃ：試料無添加での波長５４０nmにおける吸光度
Ｄ：被験試料添加での波長５４０nmにおける吸光度
結果を表５に示す。

表５に示すように、化合物１（試料１）、化合物２（試料２）、および化合物３（試料３）は、いずれも優れたメラニン産生抑制作用を有していると認められた。

〔試験例５〕Ｉ型コラーゲン産生促進作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにしてＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。

正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０^５cells/mLの細胞密度になるように０．２５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで希釈した後、９６ウェルマイクロプレートに１ウェルあたり１００μLずつ播種し、一晩培養した。

培養終了後、０．２５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料１，最終濃度は下記表６を参照）を各ウェルに１００μLずつ添加し、３日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の０．２５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。培養後、各ウェルの培地中のＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。測定結果から、下記式によりＩ型コラーゲン産生促進率（％）を算出した。

Ｉ型コラーゲン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加でのＩ型コラーゲン量
Ｂ：試料無添加でのＩ型コラーゲン量
結果を表６に示す。

表６に示すように、化合物１（試料１）は、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認された。

〔試験例６〕エラスチン産生促進作用試験
化合物２（試料２）および化合物３（試料３）について、以下のようにしてエラスチン産生促進作用を試験した。

正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．２×１０^５cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、９６ウェルマイクロプレートに１ウェル当たり１００μLずつ播種し、一晩培養した。

培養終了後、培地を除去し、０．２５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料２および３，最終濃度は下記表７を参照）を各ウェルに１５０μL添加し、５日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の０．２５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。培養終了後、上清を回収し、培養上清に遊離したエラスチン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。測定結果から、下記式によりエラスチン産生促進率（％）を算出した。

エラスチン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加でのエラスチン量
Ｂ：試料無添加でのエラスチン量
結果を表７に示す。

表７に示すように、化合物２（試料２）および化合物３（試料３）はいずれも優れたエラスチン産生促進作用を示した。

〔試験例７〕エラスターゼ活性阻害作用試験
化合物１～３（試料１～３）について、以下のようにしてエラスターゼ活性阻害作用を試験した。

９６穴マイクロプレートにて、０．２mol/L Ｔｒｉｓ－ＨＣl緩衝液（ｐＨ８．０）で調製した被験試料（試料１～３，最終濃度は下記表８を参照）５０μLと、２０μg/mL エラスターゼ・タイプIII（SIGMA-Aldrich社製）溶液５０μLとを混合した。その後、上記緩衝液にて調製した０．４５１４mg/mL Ｎ-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide（SIGMA-Aldrich社製）１００μＬ添加して、２５℃にて１５分間反応させた。反応終了後、波長４１５nmにおける吸光度を測定した。また、同様にして酵素無添加の空試験を行い補正した。得られた結果から、下記式によりエラスターゼ活性阻害率（％）を算出した。

エラスターゼ活性阻害率（％）＝｛１－（Ｃ－Ｄ）／（Ａ－Ｂ）｝×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：試料無添加・酵素添加での波長４１５nmにおける吸光度
Ｂ：試料無添加・酵素無添加での波長４１５nmにおける吸光度
Ｃ：被験試料添加・酵素添加での波長４１５nmにおける吸光度
Ｄ：被験試料添加・酵素無添加での波長４１５nmにおける吸光度
結果を表８に示す。

表８に示すように、化合物１～３（試料１～３）は、優れたエラスターゼ活性阻害作用を有していると認められた。

〔試験例８〕ヒアルロン酸産生促進作用試験
化合物１（試料１）および化合物２（試料２）について、以下のようにしてヒアルロン酸産生促進作用を試験した。

正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０^５cells/mLの細胞密度になるよう０．２５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μLずつ播種し、一晩培養した。

培養終了後、０．２５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料１および２，最終濃度は下記表９を参照）を各ウェルに１００μL添加し、３日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の０．２５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。培養後、各ウェルの培地中のヒアルロン酸量を、ヒアルロン酸結合タンパク（ＨＡＢＰ）を用いたサンドイッチ法により測定した。得られた結果から、下記式によりヒアルロン酸産生促進率（％）を算出した。

ヒアルロン酸産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加でのヒアルロン酸量
Ｂ：試料無添加でのヒアルロン酸量
結果を表９に示す。

表９に示すように、化合物１（試料１）および化合物２（試料２）は、優れたヒアルロン酸産生促進作用を有することが確認された。

〔試験例９〕ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにしてＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１５×１０^４cells/mLの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに２mLずつ播種し（３０×１０^４cells／ウェル）、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地（ＫＢＭ，上記ＫＧＭに増殖添加剤（ｈＥＧＦ，ＢＰＥ，インスリン，抗菌剤，ハイドロコーチゾン）を添加していないもの）に交換し、さらに２４時間培養した。

２４時間培養後、培地を除去し、ＫＢＭに溶解した被験試料（試料１，最終濃度は下記表１０を参照）を各ウェルに２mLずつ添加し、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下にて２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ II（ニッポンジーン社製）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、１５０ng/μLになるように総ＲＮＡを調製した。

この総ＲＮＡを鋳型とし、ＨＡＳ３および内部標準であるＧＡＰＤＨについて、ｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Thermal Cycler Dice Real Time System III（タカラバイオ社製）を用いて、PrimeScript^TM RT Master Mix（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）TB Green ^(R) Fast qPCR Mix（タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。プライマーはタカラバイオ社製のものを使用した。ＨＡＳ３ ｍＲＮＡの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。

ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での補正値
Ｂ：試料無添加での補正値
結果を表１０に示す。

表１０に示すように、化合物１（試料１）は、優れたＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有していた。

〔試験例１０〕ラミニン－３３２産生促進作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにしてラミニン－３３２産生促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、７５ｃｍ^２フラスコにて正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０⁵ cell/mLの細胞密度となるように、ＫＧＭからＢＰＥを除いた培地（ＫＧＭ－ＢＰＥ）で希釈した後、２４ウェルプレートに１ウェルあたり５００μLずつ播種し、一日間培養した。

培養終了後、培地を除去し、ＫＧＭ－ＢＰＥに溶解した被験試料（試料１，最終濃度は下記表１１を参照）を各ウェルに５００μLずつ添加し、４８時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＧＭ－ＢＰＥを用いて同様に培養した。培養終了後、培地上清１００μLをＥＬＩＳＡプレートに移し換え、３７℃で２時間プレートに吸着させた後、吸着させたラミニン－３３２の量をＥＬＩＳＡ法により測定した。得られた測定結果から、下記式によりラミニン－３３２産生促進率（％）を算出した。

ラミニン－３３２産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加でのラミニン－３３２量
Ｂ：試料無添加でのラミニン－３３２量
結果を表１１に示す。

表１１に示すように、化合物１（試料１）は優れたラミニン－３３２産生促進作用を有することが確認された。

〔試験例１１〕表皮角化細胞増殖促進作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにして表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理にて細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０^４cells/mLの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μLずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、ＫＧＭに溶解した被験試料（試料１，最終濃度は下記表１２を参照）を各ウェルに１００μL添加し、３日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＧＭを用いて同様に培養した。

表皮角化細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。３日間培養後、培地を除去し、終濃度０．４mg/mLでＰＢＳ（－）緩衝液に溶解したＭＴＴを各ウェルに１００μLずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２－プロパノール１００μLで抽出した。抽出後、波長５７０nmにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０nmにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。得られた結果から、下記式により表皮角化細胞増殖促進率（％）を算出した。

表皮角化細胞増殖促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加でのブルーホルマザン生成量
Ｂ：試料無添加でのブルーホルマザン生成量
結果を表１２に示す。

表１２に示すように、化合物１（試料１）は優れた表皮角化細胞増殖促進作用を有していると認められた。

〔試験例１２〕ＡＴＰ産生促進作用試験（表皮角化細胞）
化合物１（試料１）および化合物２（試料２）について、以下のようにしてＡＴＰ産生促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０^５cells/mLの細胞密度になるようＫＧＭで希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μLずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を除去し、被験試料（試料１および２，最終濃度は下記表１３を参照）を添加したＫＧＭを各ウェルに１００μL添加し、２時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＧＭを用いて同様に培養した。

ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定した。すなわち、２時間培養後、ＡＴＰ測定試薬（東洋ビーネット社製，商品名「『細胞の』ＡＴＰ測定試薬」）を各ウェルに１００μLずつ添加し、ルシフェラーゼによる化学発光反応を行った。反応後、細胞内ＡＴＰ量に比例した化学発光量を、化学発光測定装置（Thermo Fisher Scientific社製，製品名：Varioskan LUX マルチモードマイクロプレートリーダー）を用いて測定した。得られた結果から、下記式によりＡＴＰ産生促進率（％）を算出した。

ＡＴＰ産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での化学発光量
Ｂ：試料無添加での化学発光量
結果を表１３に示す。

表１３に示すように、化合物１（試料１）および化合物２（試料２）は、優れたＡＴＰ産生促進作用を有していると認められた。

〔試験例１３〕グルタチオン産生促進作用試験（皮膚線維芽細胞）
化合物１～３（試料１～３）について、以下のようにして、皮膚線維芽細胞におけるグルタチオン産生促進作用を試験した。

正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有α改変型イーグル最小必須培地（α－ＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０⁵ cells/mLの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有α－ＭＥＭで希釈した後、４８ウェルプレートに１ウェル当たり２００μLずつ播種し、４８時間培養した。

培養後、培地を除去し、１％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）に溶解した被験試料（試料１～３，最終濃度は下記表１４を参照）を各ウェルに２００μL添加し、２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加の１％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。培養終了後、各ウェルから培地を除去し、４００μLのＰＢＳ（－）緩衝液にて洗浄した後、１５０μLのＭ－ＰＥＲ（PIERCE社製）を使用して細胞を溶解した。

このうちの１００μLを使用して総グルタチオンの定量を行った。すなわち、９６ウェルプレートに、溶解した細胞抽出液１００μL、０．１mol/Ｌリン酸緩衝液５０μL、２mmol/Ｌ ＮＡＤＰＨ２５μL、および３．２unit/mLのグルタチオンレダクターゼ２５μLを加え、３７℃で１０分間加温した後、１０mmol/Ｌ 5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid)２５μLを加え、５分後までの波長４１２nmにおける吸光度を測定し、ΔＯＤ/minを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオン（富士フィルム和光純薬社製）を使用して作成した検量線をもとに算出した。得られた値を総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記式によりグルタチオン産生促進率（％）を算出した。

グルタチオン産生促進率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：試料無添加における総タンパク量当たりのグルタチオン量
Ｂ：被験試料添加における総タンパク量当たりのグルタチオン量
結果を表１４に示す。

表１４に示すように、化合物１（試料１）、化合物２（試料２）および化合物３（試料３）は、いずれも線維芽細胞において優れたグルタチオン産生促進作用を有していると認められた。

〔試験例１４〕トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ１）ｍＲＮＡ発現促進作用試験
化合物１～３（試料１～３）について、以下のようにしてＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１５×１０^４cells/mLの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに２mLずつ播種し（３０×１０^４cells／ウェル）、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地（ＫＢＭ，上記ＫＧＭに増殖添加剤（ｈＥＧＦ，ＢＰＥ，インスリン，抗菌剤，ハイドロコーチゾン）を添加していないもの）に交換し、さらに２４時間培養した。

２４時間培養後、培地を除去し、ＫＢＭに溶解した被験試料（試料１～３，最終濃度は下記表１５を参照）を各ウェルに２mLずつ添加し、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下にて２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ II（ニッポンジーン社製）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、１５０ng/μLになるように総ＲＮＡを調製した。

この総ＲＮＡを鋳型とし、ＴＧＭ１および内部標準であるＧＡＰＤＨについて、ｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Thermal Cycler Dice Real Time System III（タカラバイオ社製）を用いて、PrimeScript^TM RT Master Mix（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）TB Green ^(R) Fast qPCR Mix（タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。プライマーは、それぞれ5'-AGGTGGAGCTTAGCCCTGTG-3'および5'-GCAAGTGAAGACTGACTCCCTCTC-3'の配列を有するものを用いた。
ＴＧＭ１ ｍＲＮＡの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。

ＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での補正値
Ｂ：試料無添加での補正値
結果を表１５に示す。

表１５に示すように、化合物１（試料１）、化合物２（試料２）および化合物３（試料３）は、いずれも優れたＴＧＭ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を有していた。

〔試験例１５〕セリンパルミトイルトランスフェラーゼ（ＳＰＴ）ｍＲＮＡ発現促進作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにしてＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１５×１０^４cells/mLの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに２mLずつ播種し（３０×１０^４cells／ウェル）、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地（ＫＢＭ，上記ＫＧＭに増殖添加剤（ｈＥＧＦ，ＢＰＥ，インスリン，抗菌剤，ハイドロコーチゾン）を添加していないもの）に交換し、さらに２４時間培養した。

２４時間培養後、培地を除去し、ＫＢＭに溶解した被験試料（試料１，最終濃度は下記表１６を参照）を各ウェルに２mLずつ添加し、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下にて２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ II（ニッポンジーン社製）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、１５０ng/μLになるように総ＲＮＡを調製した。

この総ＲＮＡを鋳型とし、ＳＰＴおよび内部標準であるＧＡＰＤＨについて、ｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Thermal Cycler Dice Real Time System III（タカラバイオ社製）を用いて、PrimeScript^TM RT Master Mix（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）TB Green ^(R) Fast qPCR Mix（タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。プライマーはタカラバイオ社製のものを使用した。ＳＰＴ ｍＲＮＡの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。

ＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での補正値
Ｂ：試料無添加での補正値
結果を表１６に示す。

表１６に示すように、化合物１（試料１）は、優れたＳＰＴ ｍＲＮＡ発現促進作用を有していた。

〔試験例１６〕アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにしてＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１５×１０^４cells/mLの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに２mLずつ播種し（３０×１０^４cells／ウェル）、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地（ＫＢＭ，上記ＫＧＭに増殖添加剤（ｈＥＧＦ，ＢＰＥ，インスリン，抗菌剤，ハイドロコーチゾン）を添加していないもの）に交換し、さらに２４時間培養した。

２４時間培養後、培地を除去し、ＫＢＭに溶解した被験試料（試料１，最終濃度は下記表１７を参照）を各ウェルに２mLずつ添加し、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下にて２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ II（ニッポンジーン社製）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、１５０ng/μLになるように総ＲＮＡを調製した。

この総ＲＮＡを鋳型とし、ＡＱＰ３および内部標準であるＧＡＰＤＨについて、ｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Thermal Cycler Dice Real Time System III（タカラバイオ社製）を用いて、PrimeScript^TM RT Master Mix（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）TB Green ^(R) Fast qPCR Mix（タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。プライマーはタカラバイオ社製のものを使用した。ＡＱＰ３ ｍＲＮＡの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。

ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での補正値
Ｂ：試料無添加での補正値
結果を表１７に示す。

表１７に示すように、化合物１（試料１）は優れたＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有していた。

〔試験例１７〕フィラグリン（ＦＬＧ）ｍＲＮＡ発現促進作用試験
化合物１～３（試料１～３）について、以下のようにしてＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１５×１０^４cells/mLの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに２mLずつ播種し（３０×１０^４cells／ウェル）、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地（ＫＢＭ，上記ＫＧＭに増殖添加剤（ｈＥＧＦ，ＢＰＥ，インスリン，抗菌剤，ハイドロコーチゾン）を添加していないもの）に交換し、さらに２４時間培養した。

２４時間培養後、培地を除去し、ＫＢＭに溶解した被験試料（試料１～３，最終濃度は下記表１８を参照）を各ウェルに２mLずつ添加し、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下にて２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ II（ニッポンジーン社製）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、１５０ng/μLになるように総ＲＮＡを調製した。

この総ＲＮＡを鋳型とし、ＦＬＧおよび内部標準であるＧＡＰＤＨについて、ｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Thermal Cycler Dice Real Time System III（タカラバイオ社製）を用いて、PrimeScript^TM RT Master Mix（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）TB Green ^(R) Fast qPCR Mix（タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。プライマーはタカラバイオ社製のものを使用した。ＦＬＧ ｍＲＮＡの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。

ＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での補正値
Ｂ：試料無添加での補正値
結果を表１８に示す。

表１８に示すように、化合物１（試料１）、化合物２（試料２）および化合物３（試料３）は、いずれも優れたＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進作用を有していた。

〔試験例１８〕クローディン－１（ＣＬＤＮ１）ｍＲＮＡ発現促進作用試験
化合物１（試料１）および化合物３（試料３）について、以下のようにしてＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１５×１０^４cells/mLの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに２mLずつ播種し（３０×１０^４cells／ウェル）、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地（ＫＢＭ，上記ＫＧＭに増殖添加剤（ｈＥＧＦ，ＢＰＥ，インスリン，抗菌剤，ハイドロコーチゾン）を添加していないもの）に交換し、さらに２４時間培養した。

２４時間培養後、培地を除去し、ＫＢＭに溶解した被験試料（試料１および３，最終濃度は下記表１９を参照）を各ウェルに２mLずつ添加し、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下にて２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ II（ニッポンジーン社製）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、１５０ng/μLになるように総ＲＮＡを調製した。

この総ＲＮＡを鋳型とし、ＣＬＤＮ１および内部標準であるＧＡＰＤＨについて、ｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Thermal Cycler Dice Real Time System III（タカラバイオ社製）を用いて、PrimeScript^TM RT Master Mix（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）TB Green ^(R) Fast qPCR Mix（タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。プライマーはタカラバイオ社製のものを使用した。ＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。

ＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での補正値
Ｂ：試料無添加での補正値
結果を表１９に示す。

表１９に示すように、化合物１（試料１）および化合物３（試料３）は、いずれも優れたＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を有していた。

〔試験例１９〕クローディン－４（ＣＬＤＮ４）ｍＲＮＡ発現促進作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにしてＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１５×１０^４cells/mLの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに２mLずつ播種し（３０×１０^４cells／ウェル）、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地（ＫＢＭ，上記ＫＧＭに増殖添加剤（ｈＥＧＦ，ＢＰＥ，インスリン，抗菌剤，ハイドロコーチゾン）を添加していないもの）に交換し、さらに２４時間培養した。

２４時間培養後、培地を除去し、ＫＢＭに溶解した被験試料（試料１，最終濃度は下記表２０を参照）を各ウェルに２mLずつ添加し、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下にて２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ II（ニッポンジーン社製）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、１５０ng/μLになるように総ＲＮＡを調製した。

この総ＲＮＡを鋳型とし、ＣＬＤＮ４および内部標準であるＧＡＰＤＨについて、ｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Thermal Cycler Dice Real Time System III（タカラバイオ社製）を用いて、PrimeScript^TM RT Master Mix（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）TB Green ^(R) Fast qPCR Mix（タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。プライマーはタカラバイオ社製のものを使用した。ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。

ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での補正値
Ｂ：試料無添加での補正値
結果を表２０に示す。

表２０に示すように、化合物１（試料１）は優れたＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進作用を有していた。

〔試験例２０〕オクルディン（ＯＣＬＮ）ｍＲＮＡ発現促進作用試験
化合物１（試料１）および化合物３（試料３）について、以下のようにしてＯＣＬＮ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地（ＫＧＭ）を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１５×１０^４cells/mLの細胞密度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに２mLずつ播種し（３０×１０^４cells／ウェル）、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地（ＫＢＭ，上記ＫＧＭに増殖添加剤（ｈＥＧＦ，ＢＰＥ，インスリン，抗菌剤，ハイドロコーチゾン）を添加していないもの）に交換し、さらに２４時間培養した。

２４時間培養後、培地を除去し、ＫＢＭに溶解した被験試料（試料１および３，最終濃度は下記表２１を参照）を各ウェルに２mLずつ添加し、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下にて２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ II（ニッポンジーン社製）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、１５０ng/μLになるように総ＲＮＡを調製した。

この総ＲＮＡを鋳型とし、ＯＣＬＮおよび内部標準であるＧＡＰＤＨについて、ｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Thermal Cycler Dice Real Time System III（タカラバイオ社製）を用いて、PrimeScript^TM RT Master Mix（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）TB Green ^(R) Fast qPCR Mix（タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。プライマーはタカラバイオ社製のものを使用した。ＯＣＬＮ ｍＲＮＡの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりＯＣＬＮ ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。

ＯＣＬＮ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での補正値
Ｂ：試料無添加での補正値
結果を表２１に示す。

表２１に示すように、化合物１（試料１）および化合物３（試料３）は、いずれも優れたＯＣＬＮ ｍＲＮＡ発現促進作用を有していた。

〔試験例２１〕最終糖化生成物（ＡＧＥｓ）形成抑制作用試験
化合物１（試料１）および化合物２（試料２）について、以下のようにしてＡＧＥｓの形成抑制作用を試験した。

９６ウェルのＩ型コラーゲンコートプレート（旭硝子社製）に、ＰＢＳ（－）緩衝液にて調製した０．２Ｍ Ｄ（－）－リボースおよび被験試料（試料１および２，最終濃度は下記表２２を参照）の混合液１００μLを添加した後、３７℃で２０日間静置し、ＡＧＥｓを形成させた。なお、陰性対照としてＰＢＳ（－）緩衝液のみ、および陽性対照としてＰＢＳ（－）緩衝液にて調製した０．２Ｍ Ｄ（－）－リボース溶液を、それぞれ同様に静置した。２０日後、抗ＡＧＥｓ抗体（トランスジェニック社製）を用いたＥＬＩＳＡ法によりＡＧＥｓ量を測定し、ＡＧＥｓ形成抑制作用を評価した。得られた結果から、下記式によりＡＧＥｓ形成抑制率（％）を算出した。

ＡＧＥｓ形成抑制率（％）＝｛（Ｂ－Ｃ）／（Ｂ－Ａ）｝×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：陰性対照での波長４０５nmにおける吸光度
Ｂ：陽性対照での波長４０５nmにおける吸光度
Ｃ：被験試料添加での波長４０５nmにおける吸光度
結果を表２２に示す。

表２２に示すように、化合物１（試料１）および化合物２（試料２）は優れたＡＧＥｓ形成抑制作用を示した。

〔試験例２２〕最終糖化生成物（ＡＧＥｓ）分解促進作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにしてＡＧＥｓの分解促進作用を試験した。

９６ウェルのＩ型コラーゲンコートプレート（旭硝子社製）に、ＰＢＳ（－）緩衝液にて調製した０．２ＭＤ （－）－リボース溶液１００μLを添加し、３７℃で２週間静置し、ＡＧＥｓを形成させた。なお、陰性対照としてＰＢＳ（－）緩衝液のみ添加したものを同様に静置した。２週間後、ＰＢＳ（－）緩衝液にて調製した被験試料（試料１，最終濃度は下記表２３を参照）を１００μLずつ添加し、さらに３７℃で２０日間静置した。なお、陽性対照として、被験試料に代えてＰＢＳ（－）緩衝液のみ、および陰性対照として引き続きＰＢＳ（－）緩衝液のみを、それぞれ同様に静置した。２０日後、抗ＡＧＥｓ抗体（トランスジェニック社製）を用いたＥＬＩＳＡ法によりＡＧＥｓ量を測定し、ＡＧＥｓ分解促進作用を評価した。得られた結果から、下記式によりＡＧＥｓ分解促進率（％）を算出した。

ＡＧＥｓ分解促進率（％）＝｛（Ｂ－Ｃ）／（Ｂ－Ａ）｝×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：陰性対照での波長４０５nmにおける吸光度
Ｂ：陽性対照での波長４０５nmにおける吸光度
Ｃ：被験試料添加での波長４０５nmにおける吸光度
結果を表２３に示す。

表２３に示すように、化合物１（試料１）は優れたＡＧＥｓ分解促進作用を示した。

〔試験例２３〕テストステロン５α－レダクターゼ阻害作用試験
化合物１～３（試料１～３）について、以下のようにしてテストステロン５α－レダクターゼ阻害作用を試験した。

蓋付Ｖ底試験管にて、プロピレングリコールで調製した４．２mg/mLテストステロン（富士フィルム和光純薬社製）溶液２０μLと、１mg/mL ＮＡＤＰＨを含有する５mmol/L Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．１３）緩衝液８２５μLとを混合した。

さらに、８０％エタノールにて調製した被験試料（試料１～３，最終濃度は下記表２４を参照）溶液８０μLと、Ｓ－９（オリエンタル酵母工業社製，ラット肝臓ホモジネート）７５μLとを加えて混合し、３７℃にて６０分間インキュベートした。その後、塩化メチレン１mLを加えて反応を停止させた。これを遠心分離し（１６００×ｇ，１０分間）、塩化メチレン層を分取して、分取した塩化メチレン層について、下記の条件にてガスクロマトグラフィー分析に供し、３α－アンドロスタンジオール、５α－ジヒドロテストステロン（５α－ＤＨＴ）およびテストステロンの濃度を定量した。なお、コントロールとして、被験試料溶液の代わりに試料溶媒を同量（８０μL）用いて同様に処理し、ガスクロマトグラフィー分析に供した。

＜ガスクロマトグラフィー条件＞
使用装置：Shimadzu ＧＣ－２０１０（島津製作所社製）
カラム：ＤＢ－１７０１（内径：０．５３ｍｍ，長さ：３０ｍ，膜厚：１．０μｍ）（J&W Scientific社製）
カラム温度：２４０℃
注入口温度：３００℃
検出器：ＦＩＤ
試料注入量：１μL
スプリット比：１：２
キャリアガス：窒素ガス
キャリアガス流速：１２mL/min

３α－アンドロスタンジオール、５α－ＤＨＴ及びテストステロンの濃度の定量は、下記の方法により行った。
３α－アンドロスタンジオール、５α－ＤＨＴ及びテストステロンの標準品をエタノールに溶解し、当該溶液をガスクロマトグラフィー分析に供し、これらの化合物の濃度（μg/mL）及びピーク面積から、ピーク面積と化合物の濃度との対応関係を予め求めておいた。そして、テストステロンとＳ－９との反応後の３α－アンドロスタンジオール、５α－ＤＨＴおよびテストステロンのそれぞれのピーク面積あたりの濃度を、予め求めておいた対応関係を利用して、下記式（１）に基づいて求めた。

Ａ＝Ｂ×Ｃ／Ｄ・・・（１）
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：３α－アンドロスタンジオール、５α－ＤＨＴまたはテストステロンの濃度
Ｂ：３α－アンドロスタンジオール、５α－ＤＨＴまたはテストステロンのピーク面積
Ｃ：標準品の濃度
Ｄ：標準品のピーク面積

式（１）に基づいて算出された化合物濃度を用いて、下記式（２）に基づき、変換率（テストステロン５α－レダクターゼによりテストステロンが還元されて生成した３α－アンドロスタンジオールおよび５α－ＤＨＴの濃度と、テストステロンの初期濃度との濃度比）を算出した。

変換率＝（Ｅ＋Ｆ）／（Ｅ＋Ｆ＋Ｇ）・・・（２）
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ｅ：３α－アンドロスタンジオールの濃度（μg/mL）
Ｆ：５α－ＤＨＴの濃度（μg/mL）
Ｇ：テストステロンの濃度（μg/mL）

式（２）に基づいて算出された変換率を用いて、下記式（３）に基づき、テストステロン５α－レダクターゼ阻害率（％）を算出した。
テストステロン５α－レダクターゼ阻害率（％）＝（１－Ｈ／Ｉ）×１００・・・（３）
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ｈ：被検試料添加での変換率
Ｉ：試料無添加での変換率
結果を表２４に示す。

表２４に示すように、化合物１（試料１）、化合物２（試料２）および化合物３（試料３）は、優れたテストステロン５α－レダクターゼ阻害作用を有することが確認された。

〔試験例２４〕毛乳頭細胞増殖促進作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにして毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。

正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（ＨＦＤＰＣ，男性頭頂部由来）を、１％ＦＣＳおよび増殖添加剤を含有する毛乳頭細胞用増殖培地（ＰＣＧＭ，東洋紡績社製）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて１．０×１０^４cells/mLの細胞密度になるように希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェルあたり２００μLずつ播種し、３日間培養した。

その後、培地を除去し、無血清ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料１，最終濃度は下記表２５を参照）２００μLを各ウェルに添加し、さらに４日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の無血清ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。培養終了後、ＭＴＴアッセイにより毛乳頭細胞増殖促進作用を測定した。すなわち、培地を除去し、無血清ＤＭＥＭで調製した０．４mg/mL ＭＴＴを各ウェルに１００μLを添加し、さらに２時間培養した後、細胞内に生成したブルーホルマザンを２－プロパノール１００μLで抽出した。この抽出液について、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０nmの吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０nmにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。測定結果から、下記式に基づいて、毛乳頭細胞増殖促進率（％）を算出した。

毛乳頭細胞増殖促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加でのブルーホルマザン生成量
Ｂ：試料無添加でのブルーホルマザン生成量
結果を表２５に示す。

表２５に示すように、化合物１（試料１）は、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有していると認められた。

〔試験例２５〕一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにして一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を試験した。

マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０^６cells/mLの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有フェノールレッド不含有ＤＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μLずつ播種し、４時間培養した。

培養後、培地を除去し、終濃度０．５％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有フェノールレッド不含有ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料１，最終濃度は下記表２６を参照）を各ウェルに１００μL添加し、１０％ＦＢＳ含有フェノールレッド不含有ＤＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ，終濃度１μg/mL，E. coli 0111:B4，ＤＩＦＣＯ社製）を１００μL加え、４８時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料溶液に代えて、試料無添加の終濃度０．５％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有フェノールレッド不含有ＤＭＥＭを用い、同様にＬＰＳ処理を行った。

一酸化窒素（ＮＯ）産生量は、亜硝酸イオン（ＮＯ_２ ^－）量を指標に測定した。培養終了後、各ウェルの培養液に、培養上清と同量のグリス試薬（１質量％スルファニルアミド及び０．１質量％ N-1-naphthyl ethylendiamine dihydrochlorideを含む５質量％リン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応させた。反応後、波長５４０nmにおける吸光度を測定した。一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制率（％）は、試料無添加時（コントロール）の一酸化窒素（ＮＯ）産生量を基に、下記式により算出した。

ＮＯ産生抑制率（％）＝｛（Ｂ－Ａ）／Ｂ｝×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加時のＮＯ量
Ｂ：被験試料添加時のＮＯ量
結果を表２６に示す。

表２６に示すように、化合物１（試料１）は、優れた一酸化窒素産生抑制作用を有することが確認された。

〔試験例２６〕ヒアルロニダーゼ活性阻害作用試験
化合物１～３（試料１～３）について、以下のようにしてヒアルロニダーゼ活性阻害作用を試験した。

０．１mol/L酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）に溶解した被験試料（試料１～３，最終濃度は下記表２７を参照）０．２mLに、ヒアルロニダーゼ溶液（SIGMA社製，Type IV-S，from bovine testes，400 NF units/mL）０．１mLを加え、３７℃で２０分間静置した。さらに、活性化剤として２．５mmol/L塩化カルシウム０．２mLを加え、３７℃で２０分間静置した。これに０．８mg/mLヒアルロン酸ナトリウム溶液（from rooster comb）０．５mLを加え、３７℃で４０分間反応した。その後、０．４mol/L水酸化ナトリウム０．２mLを加えて反応を止め冷却した後、各反応溶液にホウ酸溶液０．２mLを加え、３分間煮沸した。氷冷後、ｐ－ＤＡＢＡ試薬６mLを加え、３７℃で２０分間反応した。その後、波長５８５nmにおける吸光度を測定した。

また、ブランクとして、酵素溶液を添加しない場合についても同様の操作および吸光度の測定を行った。さらに、コントロールとして、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。得られた結果から、下記式によりヒアルロニダーゼ活性阻害率（％）を算出した。
ヒアルロニダーゼ活性阻害率（％）＝｛１－（Ａ－Ｂ）／（Ｃ－Ｄ）｝×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加・酵素添加での波長５８５nmにおける吸光度
Ｂ：被験試料添加・酵素無添加での波長５８５nmにおける吸光度
Ｃ：試料無添加・酵素添加での波長５８５nmにおける吸光度
Ｄ：試料無添加・酵素無添加での波長５８５nmにおける吸光度
結果を表２７に示す。

表２７に示すように、化合物１（試料１）、化合物２（試料２）および化合物３（試料３）は、いずれも優れたヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有することが確認された。

〔試験例２７〕ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験
化合物２（試料２）について、以下のようにしてヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。

ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ－２Ｈ３）を、１５％ＦＢＳ含有スピナー改変型イーグル最小必須培地（Ｓ－ＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０^５cells/mLの細胞密度になるように１５％ＦＢＳ含有Ｓ－ＭＥＭで希釈し、終濃度０．５μg/mLとなるようにＤＮＰ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥを添加した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μLずつ播種し、一晩培養した。

培養後、培地を除去し、シラガニアン緩衝液１００μLにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μLと、同緩衝液に溶解した被験試料（試料２，最終濃度は下記表２８を参照）１０μLとを各ウェルに添加し、３７℃にて１０分間静置した。なお、コントロールとして、試料無添加のシラガリアン緩衝液４０μLを用いて同様の操作を行った。続いて、４００ng/mL ＤＮＰ－ＢＳＡ溶液１０μLを加え、３７℃にて１５分間静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。

その後、９６ウェルプレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。各ウェルの細胞上清１０μLを新たな９６ウェルプレートに採取し、各ウェルに１mmol/L ｐ－ニトロフェニル－Ｎ－アセチル－β－Ｄ－グルコサミニド（ｐ－ＮＡＧ）溶液１０μLを添加し、３７℃で１時間反応させた。

反応終了後、各ウェルに０．１mol/L Ｎａ_２ＣＯ_３／ＮａＨＣＯ_３２５０μLを加え、波長４１５nm及び６５０nmにおける吸光度を測定し、４１５nmにおける吸光度から６５０nmにおける吸光度を減じた値を補正値とした。得られた測定結果から、下記式によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を算出した。

ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝｛１－（Ｂ／Ａ）｝×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：試料無添加での波長４１５－６５０nmにおける吸光度
Ｂ：被験試料添加での波長４１５－６５０nmにおける吸光度
結果を表２８に示す。

表２８に示すように、化合物２（試料２）は、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有することが確認された。

〔試験例２８〕マウスマクロファージにおけるプロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２）産生抑制作用試験
化合物１（試料１）について、以下のようにしてＰＧＥ_２産生抑制作用を試験した。

マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０^５cells/mLの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μLずつ播種し、１８時間培養した。

培養終了後、既に存在するＣＯＸ－１および少量発現しているＣＯＸ－２をアセチル化し失活させるため、培地を５００μmol/Lアスピリン含有培地に交換し４時間培養した。その後、細胞をＰＢＳ（－）緩衝液で３回洗浄し、終濃度０．５％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで溶解した被験試料（試料１，最終濃度は下記表２９を参照）を各ウェルに１００μL添加した後、終濃度１μg/mLで１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ）（DIFCO社製，E.coli 0111;B4）を１００μL添加し、１６時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の終濃度０．５％ＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。培養終了後、各ウェルの培養上清中のプロスタグランジンＥ_２量を、ＰＧＥ_２ ＥＩＡ Ｋｉｔ（Cayman Chemical社製）を用いて定量した。得られた結果から、下記式によりＰＧＥ_２産生抑制率（％）を算出した。

ＰＧＥ_２産生抑制率（％）＝｛１－（Ａ－Ｃ）／（Ｂ－Ｃ）｝×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加・ＬＰＳ刺激でのＰＧＥ_２量
Ｂ：試料無添加・ＬＰＳ刺激でのＰＧＥ_２量
Ｃ：試料無添加・ＬＰＳ無刺激でのＰＧＥ_２量
結果を表２９に示す。

表２９に示すように、化合物１（試料１）は、マクロファージにおいて優れたＰＧＥ_２産生抑制作用を有することが確認された。

〔試験例２９〕グルタチオン産生促進作用試験（肝細胞）
化合物１～３（試料１～３）について、肝細胞におけるグルタチオン産生促進作用を以下のように試験した。

正常ヒト肝細胞（Hepatocyte）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１０×１０^４ cells/mLの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで希釈した後、４８wellプレートに１wellあたり２００μLずつ播種し、一晩培養した。

培養後、培地を除去し、１％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料１～３，最終濃度は下記表３０を参照）を各wellに２００μLずつ添加し、さらに２４時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の１％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。培養終了後、各wellから培地を除去し、４００μLのＰＢＳ(－)にて洗浄した後、１５０μLのＭ－ＰＥＲ（PIERCE社製）を用いて細胞を溶解した。

このうちの１００μLを用いて総グルタチオンの定量を行った。すなわち、９６wellプレートに溶解した細胞抽出液１００μL、０．１mol/Lのリン酸緩衝液５０μL、２mmol/LのＮＡＤＰＨ２５μLおよび３．２unit/mLのグルタチオンレダクターゼ２５μLを加え３７℃で１０分間加温した後、１０mmol/Lの5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid)２５μLを加え、５分後までの波長４１２nmにおける吸光度を測定し、ΔＯＤ/minを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオン（富士フィルム和光純薬社製）を使用して作成した検量線をもとに算出した。得られた値を総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記式に基づいてグルタチオン産生促進率（％）を算出した。

グルタチオン産生促進率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：試料無添加における総タンパク量当たりのグルタチオン量
Ｂ：被験試料添加における総タンパク量当たりのグルタチオン量
結果を表３０に示す。

表３０に示すように、化合物１（試料１）、化合物２（試料２）および化合物３（試料３）は、いずれも肝細胞において優れたグルタチオン産生促進作用を有しているものと認められた。

〔試験例３０〕肝細胞におけるＡＴＰ産生促進作用試験
化合物１～３（試料１～３）について、肝細胞におけるＡＴＰ産生促進作用を以下のように試験した。

正常ヒト肝細胞（Hepatocyte）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０^５cells/mLの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで希釈した後、９６wellプレートに１wellあたり１００μLずつ播種し、一晩培養した。

培養終了後、培地を除去し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料１～３，最終濃度は下記表３１を参照）を各wellに１００μLずつ添加し、２時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。

ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定することにより評価した。すなわち、２時間培養後、ＡＴＰ測定試薬（東洋ビーネット社製，商品名「『細胞の』ＡＴＰ測定試薬」）を各ウェルに１００μLずつ添加し、ルシフェラーゼによる化学発光反応を行った。反応後、細胞内ＡＴＰ量に比例した化学発光量を、化学発光測定装置（Thermo Fisher Scientific社製，製品名：Varioskan LUX マルチモードマイクロプレートリーダー）を用いて測定した。得られた結果から、下記式によりＡＴＰ産生促進率（％）を算出した。

ＡＴＰ産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
Ａ：被験試料添加での化学発光量
Ｂ：試料無添加での化学発光量
結果を表３１に示す。

表３１に示すように、化合物１（試料１）、化合物２（試料２）および化合物３（試料３）は、いずれも肝細胞において優れたＡＴＰ産生促進作用を有しているものと認められた。

〔配合例１〕
常法により、以下の組成を有する錠剤を製造した。
化合物１ ５．０ｍｇ
ドロマイト（カルシウム20％、マグネシウム10％含有） ８３．４ｍｇ
カゼインホスホペプチド １６．７ｍｇ
ビタミンＣ ３３．４ｍｇ
マルチトール １３６．８ｍｇ
コラーゲン １２．７ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル １２．０ｍｇ

〔配合例２〕
常法により、以下の組成を有する経口液状製剤を製造した。
＜１アンプル（１本１００mL）中の組成＞
化合物２ ０．３質量％
ソルビット １２．０質量％
安息香酸ナトリウム ０．１質量％
香料 １．０質量％
硫酸カルシウム ０．５質量％
精製水 残部（１００質量％）

〔配合例３〕
常法により、以下の組成を有するカプセル剤を製造した。なお、カプセルとしては、１号ハードゼラチンカプセルを使用した。
＜１カプセル（１錠２００ｍｇ）中の組成＞
化合物３ １０．０ｍｇ
コーンスターチ ７０．０ｍｇ
乳糖 １００．０ｍｇ
乳酸カルシウム １０．０ｍｇ
ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ－Ｌ） １０．０ｍｇ

〔配合例４〕
下記組成に従い、乳液を常法により製造した。
化合物１ ０．０１ｇ
ホホバオイル ４．００ｇ
１，３－ブチレングリコール ３．００ｇ
アルブチン ３．００ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.O.） ２．５０ｇ
オリーブオイル ２．００ｇ
スクワラン ２．００ｇ
セタノール ２．００ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２．００ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） ２．００ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
グリチルレチン酸ステアリル ０．１０ｇ
黄杞エキス ０．１０ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１０ｇ
イチョウ葉エキス ０．１０ｇ
コンキオリン ０．１０ｇ
オウバクエキス ０．１０ｇ
カミツレエキス ０．１０ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例５〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
化合物２ ０．０５ｇ
クジンエキス ０．１ｇ
オウゴンエキス ０．１ｇ
流動パラフィン ５．０ｇ
サラシミツロウ ４．０ｇ
スクワラン １０．０ｇ
セタノール ３．０ｇ
ラノリン ２．０ｇ
ステアリン酸 １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
１，３－ブチレングリコール ６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
香料 ０．１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例６〕
下記組成の美容液を常法により製造した。
化合物３ ０．０１ｇ
カミツレエキス ０．１ｇ
ニンジンエキス ０．１ｇ
キサンタンガム ０．３ｇ
ヒドロキシエチルセルロース ０．１ｇ
カルボキシビニルポリマー ０．１ｇ
１，３－ブチレングリコール ４．０ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
グリセリン ２．０ｇ
水酸化カリウム ０．２５ｇ
香料 ０．０１ｇ
防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
エタノール ２．０ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例７〕
下記組成のヘアトニックを常法により製造した。
化合物１ ０．２ｇ
化合物２ ０．１ｇ
化合物３ ０．１ｇ
酢酸トコフェロール 適量
セファラチン ０．００２ｇ
イソプロピルメチルフェノール ０．１ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム ０．１５ｇ
グリセリン １５．０ｇ
エタノール １５．０ｇ
香料 適量
キレート剤（エデト酸ナトリウム） 適量
防腐剤（ヒノキチオール） 適量
可溶化剤（ポリオキシエチレンセチルエーテル） 適量
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例８〕
下記組成のシャンプーを常法により製造した。
化合物１ ０．２ｇ
化合物２ ０．２ｇ
化合物３ ０．２ｇ
マジョラム抽出物 １．０ｇ
ウメ果実部抽出物 ０．２ｇ
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １０．０ｇ
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ２０．０ｇ
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ４．０ｇ
プロピレングリコール ２．０ｇ
香料 適量
精製水 残部（全量を１００ｇとする）

Claims (5)

1. 下記一般式（Ｉ）で表される化合物１～３からなる群より選択される１種または２種以上を有効成分とすることを特徴とする抗老化剤。
   

   
2. 下記一般式（Ｉ）で表される化合物１～３からなる群より選択される１種または２種以上を有効成分とすることを特徴とする育毛剤。
   

   

   
   
3. 下記一般式（Ｉ）で表される化合物１～３からなる群より選択される１種または２種以上を配合した経口組成物であって、
   抗老化用途、および／または、育毛用途に用いられることを特徴とする経口組成物。
   

   
4. 下記一般式（Ｉ）で表される化合物１～３からなる群より選択される１種または２種以上を配合したことを特徴とする抗老化用皮膚化粧料。
   

   
5. 下記一般式（Ｉ）で表される化合物１～３からなる群より選択される１種または２種以上を配合したことを特徴とする育毛用頭髪化粧料。