JP7190248B2 - 皮膚支帯改善剤 - Google Patents
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Description
本発明者らは、以上の知見に基づいて、本発明を完成させた。
本発明によれば、前記タンパク質の発現量を増加させることにより皮膚支帯を改善することができる。
異なるタンパク質の発現量を増加させる形態とすることにより、皮膚支帯の改善作用を向上させることができる。
したがって、本発明は、腱細胞及び/又は線維芽細胞における前記タンパク質の発現量を増加させるために用いることが好ましい。
フウロソウ科(Geraniaceae)フウロソウ属(Geranium)、バラ科(Rosaceae)バラ属(Rosa)、ツバキ科(Theaceae)ツバキ属(Camellia)、マメ科(Fabaceae)アスパラサス属(Aspalathus)、アカネ科(Rubiaceae)カズキカズラ属(Uncaria)。
フウロソウ科(Geraniaceae)フウロソウ属(Geranium)ゲンノショウコ(Geraniumthunbergii)、バラ科(Rosaceae)バラ属(Rosa)ノイバラ(Rosa multiflora)、ツバキ科(Theaceae)ツバキ属(Camellia)チャノキ(Camellia sinensis)、マメ科(Fabaceae)アスパラサス属(Aspalathus)リネアリス(Aspalathus linearis)、アカネ科(Rubiaceae)カズキカズラ属(Uncaria)ガンビールノキ(Uncaria gambir)。
植物抽出物として、これらの植物の抽出物を用いることによって、前記全タンパク質の発現量を増加させることができ、より高い皮膚支帯改善効果を得ることができる。
皮膚直下にある皮下組織には皮膚支帯(Retinacula cutis)と呼ばれる網目状の線維構造が存在しており、その構成成分としてミメカン(Mimecan)、アネキシンA2(Annexin A2)、バイグリカン(Biglycan)、ビンキュリン(Vinculin)、ミクロフィブリル結合タンパク質4(Microfibrillar-associated protein 4、MFAP4)、6型コラーゲン(Collagen type 6)、1型コラーゲン(Collagen type 1)、アネキシンA5(Annexin A5)、デコリン(Decorin)、ルミカン(Lumican)、プロラルギン(Prolargin)などが知られている。
本発明の皮膚支帯改善剤は、これらタンパク質のうちミメカン(Mimecan)、バイグリカン(Biglycan)、ビンキュリン(Vinculin)、ミクロフィブリル結合タンパク質4(Microfibrillar-associated protein 4、MFAP4)から選ばれる少なくとも1種のタンパク質の発現量を増加させる植物抽出物からなる。
本発明における植物抽出物は、前記タンパク質の発現量を増加させる作用を有するものであれば特に限定されない。本発明に用いる植物の属する属としては、フウロソウ科(Geraniaceae)フウロソウ属(Geranium)、バラ科(Rosaceae)バラ属(Rosa)、バラ科(Rosaceae)サンザシ属(Crataegus)、マメ科(Fabaceae)クララ属(Sophora)、アサ科(Cannabaceae)カラハナソウ属(Humulus)、ツツジ科(Ericaceae)スノキ属(Vaccinium)、ユキノシタ科(Saxifragaceae)ユキノシタ属(Saxifraga)、アカバナ科(Onagraceae)マツヨイグサ属(Oenothera)、カタバミ科(Oxalidaceae)ゴレンシ属(Averrhoa)、キク科(Asteraceae)ゴボウ属(Arctiumu)、ツバキ科(Theaceae)ツバキ属(Camellia)、イネ科(Poaceae)マダケ属(Phyllostachys)、オトギリソウ科(Guttiferae)オトギリソウ属(Hypericum)、ミカン科(Rutaceae)ミカン属(Citrus)、マメ科(Fabaceae)アスパラサス属(Aspalathus)、アカネ科(Rubiaceae)カギカズラ属(Uncaria)、シソ科(Lamiaceae)タツナミソウ属(Scutellaria)、バラ科(Rosaceae)キイチゴ属(Rubus)、アカネ科(Rubiaceae)キナノキ属(Cinchona)が例示できる。好ましくは、フウロソウ科(Geraniaceae)フウロソウ属(Geranium)、バラ科(Rosaceae)バラ属(Rosa)、ツバキ科(Theaceae)ツバキ属(Camellia)、マメ科(Fabaceae)アスパラサス属(Aspalathus)、アカネ科(Rubiaceae)カギカズラ属(Uncaria)、キンポウゲ科(Ranunculaceae)オウレン属(Coptis)、マメ亜科(Faboideae)インドカリン属(Pterocarpus)、ブドウ科(Vitaceae)ブドウ属(Vitaceae)が例示できる。
より具体的には、表1及び2に示した植物の抽出物のうち、異なるタンパク質の発現量を増加させる作用を有する2以上の植物抽出物の組み合わせからなる実施の形態とすることが好ましい。
このような実施の形態とすることにより、より高い皮膚支帯改善作用を実現することができる。
表2に示すように、フウロソウ科(Geraniaceae)フウロソウ属(Geranium)ゲンノショウコ(Geranium thunbergii)、バラ科(Rosaceae)バラ属(Rosa)ノイバラ(Rosa multiflora)、ツバキ科(Theaceae)ツバキ属(Camellia)チャノキ(Camellia sinensis)、マメ科(Fabaceae)アスパラサス属(Aspalathus)リネアリス(Aspalathus linearis)、アカネ科(Rubiaceae)カギカズラ属(Uncaria)ガンビールノキ(Uncaria gambir)の植物抽出物は、ミメカン、バイグリカン、ビンキュリン及びミクロフィブリル結合タンパク質4の全ての発現を向上させる作用がある。
したがって、これらの植物抽出物の少なくとも1つを用いる実施の形態とすることが特に好ましい。
したがって、本発明は、好ましくは腱細胞及び/又は線維芽細胞、特に好ましくは腱細胞における、前記タンパク質の発現量を増加させるために用いる形態とすることが好ましい。
抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕あるいは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、1,3-ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される1種乃至は2種以上が好適なものとして例示することができる。具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物1質量に対して、溶媒を1~30質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却し後、所望により不溶物及び/又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。
本発明の皮膚支帯改善剤は、製剤化に用いられる任意の成分と適宜組み合わせて、外用剤又は経口剤の形態とすることが好ましい。
外用剤としては、例えば、化粧料、医薬部外品、皮膚外用医薬等の形態が挙げられる。また、それらの剤形は特に制限されない。中でも、皮膚支帯成分の発現を促進させるという用途との関係から、継続的に使用可能な化粧料の形態が好ましく、中でも、化粧水、美容液、乳液、クリーム、ジェル、サンケア品等の形態が好ましい。
また、皮膚支帯成分の発現促進剤の種類は、1種類のみでなく2種類以上であってもよい。
したがって、本発明の皮膚支帯改善剤は抗老化剤として有用であり、特にシワ改善、タルミ改善、ハリの低下防止、肌の弾力性の低下防止剤としての使用が好ましい。
美白成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、4-n-ブチルレゾルシノール、アスコルビン酸グルコシド、3-О-エチルアスコルビン酸、トラネキサム酸、アルブチン、1-トリフェニルメチルピペリジン、1-トリフェニルメチルピロリジン、2-(トリフェニルメチルオキシ)エタノール、2-(トリフェニルメチルアミノ)エタノール、2-(トリフェニルメチルオキシ)エチルアミン、トリフェニルメチルアミン、トリフェニルメタノール、トリフェニルメタン及びアミノジフェニルメタン、N-(o-トルオイル)システイン酸、N-(m-トルオイル)システイン酸、N-(p-トルイル)システイン酸、N-(p-メトキシベンゾイル)システイン酸等が挙げられる。更にその他の美白成分として、N-ベンゾイル-セリン、N-(p-メチルベンゾイル)セリン、N-(p-エチルベンゾイル)セリン、N-(p-メトキシベンゾイル)セリン、N-(p-フルオロベンゾイル)セリン、N-(p-トリフルオロメチルベンゾイル)セリン、N-(2-ナフトイル)セリン、N-(4-フェニルベンゾイル)セリン、N-(p-メチルベンゾイル)セリン メチルエステル、N-(p-メチルベンゾイル)セリン エチルエステル、N-(2-ナフトイル)セリン メチルエステル、N-ベンゾイル-O-メチルセリン、N-(p-メチルベンゾイル)-O-メチルセリン、N-(p-メチルベンゾイル)-O-アセチルセリン、N-(2-ナフトイル)-O-メチルセリン等があげられる。
化粧料における美白成分の含有量は、通常0.0001~30質量%であり、0.001~10質量%が好ましく、0.01~5質量%がより好ましい(抽出物の場合は乾燥質量)。
化粧料中における抗炎症成分の含有量は、通常0.01~30質量%であり、0.1~10質量%が好ましく、1~5質量%がより好ましい(抽出物の場合は乾燥質量)。
食品中における前記任意の動植物抽出物の含有量(乾燥質量)は、通常0.01~80質量%であり、0.1~50質量%が好ましく、1~30質量%がより好ましい。
ヒト正常真皮線維芽細胞を、10% FBS/DEME培地で24穴プレートに2.0×104個/ウェルとなるように播種し、37℃、5%、CO2環境下で24時間培養した。
播種24時間後、表3~5に示す抽出溶媒を用いて調製した植物抽出物を添加した(最終濃度0.5質量%)。
QuantiTect Primer Assay(QIAGEN社製)を用いて定量的RT-PCRを行い、加齢で減少する皮膚支帯構成タンパク質であるバイグリカン(Biglycan)、ビンキュリン(Vinculin)、ミクロフィブリル結合タンパク質4(Microfibrillar-associated protein 4、MFAP4)をコードする遺伝子のmRNA量を測定した。
前述のmRNA発現量は、β-actinを内在性コントロールとして比較CT法により算出し、被験物質非添加のヒト正常真皮線維芽細胞における目的のmRNA発現量を「1」とした場合の相対値として結果を表3~5に示した。
これらの結果より、以上の植物抽出物は、真皮由来線維芽細胞において、Biglycan、Vinculin、MFAP4のうち何れか少なくとも一つの遺伝子の発現量を向上させることができることがわかった。
ヒト腱由来腱細胞を、専用培地でコラーゲンIコート24穴プレートに2.0×104個/ウェルとなるように播種し、37℃、5%、CO2環境下で24時間培養した。
播種24時間後、表6~9に示す抽出溶媒を用いて抽出した種々の植物抽出物を添加した(最終濃度0.5質量%)。
24時間後、培地を除きPBSで洗浄し、FastLane Cell RT-PCR Kit(QIAGEN社製)を用いてmRNAを回収し、QuantiTect Reverse Transcription Kit(QIAGEN社製)でcDNAを合成した。
QuantiTect Primer Assay(QIAGEN社製)を用いて定量的RT-PCRを行い、加齢で減少する皮膚支帯構成タンパク質であるミメカン(Mimecan)、バイグリカン(Biglycan)、ビンキュリン(Vinculin)、ミクロフィブリル結合タンパク質4(Microfibrillar-associated protein 4、MFAP4)をコードする遺伝子のmRNA量を測定した。
前述のmRNA発現量は、β-actinを内在性コントロールとして比較CT法により算出し、被験物質非添加のヒト腱由来細胞における目的のmRNA発現量を「1」とした場合の相対値として、結果を表6~9に示した。
他の植物抽出物を添加した場合においても、Mimecan、Biglycan、Vinculin、MFAP4の何れか少なくとも一つの遺伝子の発現量比を増大させることができることがわかった。
以上の抽出物は、腱細胞において、Mimecan、Biglycan、Vinculin、MFAP4のうち何れか少なくとも一つの遺伝子の発現量比を増大することが明らかとなり、皮膚支帯改善剤の有効成分として好適であることがわかった。
Claims (1)
- 腱細胞における、ミメカン(Mimecan)、バイグリカン(Biglycan)、ビンキュリン(Vinculin)及びミクロフィブリル結合タンパク質4(Microfibrillar-associated protein 4、MFAP4)の全タンパク質の発現量を増加させる作用を有する植物抽出物からなり、
前記植物抽出物は、以下の群から選択される植物の抽出物である、皮膚支帯改善剤:
フウロソウ科(Geraniaceae)フウロソウ属(Geranium)ゲンノショウコ(Geraniumthunbergii)、バラ科(Rosaceae)バラ属(Rosa)ノイバラ(Rosa multiflora)、ツバキ科(Theaceae)ツバキ属(Camellia)チャノキ(Camellia sinensis)、マメ科(Fabaceae)アスパラサス属(Aspalathus)リネアリス(Aspalathus linearis)、アカネ科(Rubiaceae)カズキカズラ属(Uncaria)ガンビールノキ(Uncaria gambir)。
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C211 | Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings |
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C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
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C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
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C13 | Notice of reasons for refusal |
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A521 | Request for written amendment filed |
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C23 | Notice of termination of proceedings |
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C03 | Trial/appeal decision taken |
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C30A | Notification sent |
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