JP7144380B2 - 細胞又は組織の凍結保存用治具 - Google Patents
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Description
短冊状の先端部を有する本体部材及び該本体部材の先端部を被包するキャップ部材を少なくとも有する細胞又は組織の凍結保存用治具であって、該先端部は保存液吸収体を有する載置部を少なくとも有し、該先端部の短軸方向の長さは1.75mm以下で且つ該キャップ部材の内径(該内径はキャップ部材の内腔の最大径)の70%以上であり、該キャップ部材は開口した片端と閉塞した片端を有する略円筒形状を有し、該キャップ部材の内腔の長軸方向の長さが該先端部の長軸方向の長さの200%以下であることを特徴とする細胞又は組織の凍結保存用治具。
P=(V/T)×100(%)
P:空隙率(%)
V:空隙容量(ml/m2)
T:厚み(μm)
図1及び図3に示す形態で、実施例1の細胞又は組織の凍結保存用治具を作製した。ポリエチレンテレフタレート樹脂フィルム(全光線透過率89%、ヘーズ値2.3%)を支持体として、該支持体上に、保存液吸収体として、アドバンテック東洋社製のポリテトラフルオロエチレン多孔体(細孔径0.2μm、空隙率71%、厚み35μm)を、ヘンケルジャパン社製のホットメルトウレタン樹脂Purmelt(登録商標) QR 170-7141Pを接着層として、短軸側の二辺のみを貼り合わせて、固定し、載置部を有する先端部を作製した。また、本体部材の把持部及び嵌合構造部と、キャップ部材を、ABS樹脂を用いて作製した。先端部と把持部及び嵌合構造部を接合し、実施例1の細胞又は組織の凍結保存用治具を作製した。実施例1の細胞又は組織の凍結保存用治具の本体部材が有する先端部の短軸方向の長さは1.75mmであり、長軸方向の長さは20mmである。また、実施例1の細胞又は組織の凍結保存用治具のキャップ部材の内径は2.1mmであり、内腔の長軸方向の長さは35mmである。
本体部材が有する先端部の短軸方向の長さを1.75mmにかえて、1.5mmとした以外は、実施例1と同様にして、実施例2の細胞又は組織の凍結保存用治具を作製した。
キャップ部材の内腔の長軸方向の長さを35mmにかえて、40mmとした以外は、実施例2と同様にして、実施例3の細胞又は組織の凍結保存用治具を作製した。
保存液吸収体を設けずに、支持体をそのまま載置部とした以外は、実施例2と同様にして、比較例1の細胞又は組織の凍結保存用治具を作製した。
本体部材が有する先端部の短軸方向の長さを1.75mmにかえて、0.7mmとした以外は、実施例1と同様にして、比較例2の細胞又は組織の凍結保存用治具を作製した。
キャップ部材の内腔の長軸方向の長さが80mmとなるようなキャップ部材を作製した。また、細胞又は組織の凍結保存用治具の本体部材の長さ及び、キャップ部材を本体部材に嵌合・固定した際の全長は実施例1の細胞又は組織の凍結保存用治具と同じになるような形状で、嵌合構造部の形状を把持部側に拡張した以外は、実施例1と同様にして、比較例3の細胞又は組織の凍結保存用治具を作製した。
実施例1~3及び比較例1~3の細胞又は組織の凍結保存用治具の載置部上に、ガラスビーズ(直径100μm)を疑似細胞として、保存液0.1μLと共に、透過型顕微鏡下で滴下付着させた。なお、保存液は、シグマアルドリッチ社製 Medium199培地に、15容積%DMSO、15容積%エチレングリコール、17質量%スクロースが含まれる組成のものを用いた。次いで、透過型顕微鏡下で、載置部を含む先端部をキャップ部材に挿入した。その際に、キャップ部材の開口部側の端面に載置部上に載置された保存液が接触してしまうか否かの評価を5回行い、「凍結操作時のキャップ部材の挿入作業性の評価」として以下の基準で評価した。これらの結果を表1に示す。
×:5回の評価の中で、保存液がキャップ部材の開口部側の端面に接触してしまうことが1回以上あった。
上記と同様の手順により、実施例1~3及び比較例1~3の細胞又は組織の凍結保存用治具の載置部上に疑似細胞を保存液と共に載置部へ滴下付着し、本体部材にキャップ部材を完全に嵌合・固定した後に、液体窒素に浸漬して凍結した。保冷工程の後に、融解工程に先立って、図8に示す形態の固定具に、図9に示す形態で本体部材を固定した。その後、疑似細胞が液体窒素の液面よりも下にある状態を維持し、かつ、液体窒素に触れないようにしながら、キャップ部材の嵌合・固定をわずかに緩めた。次いで、図10に示す形態のように、キャップ部材を固定具に固定したまま、本体部材を抜き取ることで、キャップ部材と分離し、本体部材の先端部を融解液中に浸漬させ、この際の所要時間を計測し、「融解操作時の融解液浸漬における作業性の評価」として以下の基準で評価した。なお、融解液は、前記Medium199培地に34質量%スクロースが含まれる組成のものを用いた。これらの結果を表1に示す。
○:操作にかかる時間が0.75秒を超え1秒以内だった。
×:操作に1秒を超える時間を要した。
上記の「融解操作時の融解液浸漬における作業性の評価」と同様の方法により、実施例1~3及び比較例1~3の細胞又は組織の凍結保存用治具の載置部を有する先端部を融解液中に浸漬させた。その後、顕微鏡下で、融解液中の載置部及び載置部上の疑似細胞の様子を観察した。その際の融解液中で観察される載置部上の気泡の付着の有無を確認したが実施例1~3及び比較例1~3の全ての細胞又は組織の凍結保存用治具において、載置部上への気泡の付着は見られず、融解操作時の回収作業において、高い作業性を有することが示された。
2 本体部材
3 キャップ部材
4 先端部
5 載置部
6 支持体
7 先端マーキング部
8 把持部
9 把持部マーキング部
10 嵌合構造部
11 キャップ部材の内腔
12 固定部位
13 接合部
14 細胞
15 保存液
16 固定具
17 スリット部
18 スリット固定部
19 凍結容器
20 液体窒素
21 液面
22 融解液
Claims (1)
- 短冊状の先端部を有する本体部材及び該本体部材の先端部を被包するキャップ部材を少なくとも有する細胞又は組織の凍結保存用治具であって、該先端部は保存液吸収体を有する載置部を少なくとも有し、該先端部の短軸方向の長さは1.75mm以下で且つ該キャップ部材の内径(該内径はキャップ部材の内腔の最大径)の70%以上であり、該キャップ部材は開口した片端と閉塞した片端を有する略円筒形状を有し、該キャップ部材の内腔の長軸方向の長さが該先端部の長軸方向の長さの200%以下であることを特徴とする細胞又は組織の凍結保存用治具。
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