JP7082619B2 - 光源のアレイを用いた透過照明撮像 - Google Patents
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Description
本願は、米国出願第15/375512号(2016年12月12日出願)に対する優先権を主張し、上記出願の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
平面基板上に支持される生物細胞の層が、撮像顕微鏡を用いて可視化されることができる。顕微鏡は、光が細胞を通して撮像検出器に伝送される透過照明撮像を実施するように設計され得る。細胞は、それらが撮像される前に染色されるか、または染色されないままであり得る。
本開示は、透過照明撮像のための方法およびシステムを提供する。例示的方法では、サンプルが、ウェルの中で照射される。サンプルは、生物細胞と、メニスカスを形成する液体または半固体培地とを含み得る。照射するステップは、互いに異なる向きにおいてメニスカスに入射するそれぞれの光ビームの光を生成する光源のアレイを用いて実施され得る。1つ以上の画像が、検出され得る。1つ以上の画像への光源の2つ以上のサブセットからの光の均整の取れた寄与が、メニスカスによる屈折を補償し、コントラストを向上させるように、互いに対する2つ以上のサブセットの差を伴う通電によって制御され得る。
例えば、本願は以下の項目を提供する。
(項目1)
透過照明撮像の方法であって、前記方法は、
ウェルの中に位置しているサンプルを照射することであって、前記サンプルは、生物細胞と、メニスカスを形成する液体または半固体培地とを含み、前記サンプルを照射するステップは、互いに異なる向きにおいて前記メニスカスに入射するそれぞれの光ビームの光を生成する光源のアレイを用いて実施される、ことと、
前記それぞれの光ビームの光で形成され、前記ウェルの底面の周囲の少なくとも一部を含む視野を表す1つ以上の画像を検出することと、
を含み、
前記1つ以上の画像への前記光源の2つ以上のサブセットからの光の均整の取れた寄与は、前記メニスカスによる屈折を補償し、コントラストを向上させるように、互いに対する前記2つ以上のサブセットの差を伴う通電によって制御される、方法。
(項目2)
前記照射するステップは、互いに異なる時間に前記光源の前記2つ以上のサブセットをオンおよび/またはオフにし、前記2つ以上のサブセットの前記差を伴う通電を少なくとも部分的に生じさせるステップを含む、項目1に記載の方法。
(項目3)
前記照射するステップは、異なるレベルの電力を前記光源の前記2つ以上のサブセットのうちの各サブセットに供給し、前記2つ以上のサブセットの前記差を伴う通電を少なくとも部分的に生じさせるステップを含む、項目1に記載の方法。
(項目4)
前記光源の前記2つ以上のサブセットは、第1のサブセットと、第2のサブセットとを含み、前記第1のサブセットは、前記アレイにおいて中心に位置付けられ、前記第2のサブセットは、前記アレイにおいて側方に位置付けられている、項目1に記載の方法。
(項目5)
前記光源のアレイは、第1の光源と第2の光源とを含み、前記底面は、縁領域と中心領域とを有し、前記検出するステップは、前記縁領域および前記中心領域の単位面積あたり、前記第1の光源から、前記中心領域よりも多い前記縁領域を通過した光を検出し、前記第2の光源から、前記縁領域よりも多い前記中心領域を通過した光を検出するステップを含む、項目1に記載の方法。
(項目6)
前記1つ以上の画像を前記検出するステップは、同一のウェルの2つ以上の異なる視野の各々のために実施され、前記異なる視野に対応する画像をマージし、前記ウェルの前記底面全体を表す単一の画像を作成することをさらに含む、項目1に記載の方法。
(項目7)
前記それぞれの光ビームは、第1の光ビームと第2の光ビームとを含み、前記第1の光ビームは、前記第2の光ビームよりも垂直向きにおいて前記メニスカスに入射する、項目1に記載の方法。
(項目8)
前記サンプルと撮像検出器との間の光学経路に位置している対物レンズを用いて光を収集するステップをさらに含み、前記対物レンズは、光を収集するための受光角を画定し、前記それぞれの光ビームのうちの少なくとも1つの光ビームは、前記受光角の半分より大きい垂直線に対する角度オフセットにおいて前記メニスカスに入射する、項目1に記載の方法。
(項目9)
前記サンプルと撮像検出器との間の光学経路に位置している対物レンズを用いて光を収集するステップをさらに含み、前記光を収集するステップは、約0.3以下の開口数を有する対物レンズを用いて実施される、項目1に記載の方法。
(項目10)
前記視野は、前記底面の周囲全体を含む、項目1に記載の方法。
(項目11)
1つのみの画像が、前記検出するステップ中に検出され、前記光源のアレイは、第1の光源と第2の光源とを含み、前記照射するステップは、第1の電流を前記第1の光源に供給し、第2の電流を前記第2の光源に供給するステップを含み、前記第1の電流および前記第2の電流は、互いに異なる、項目1に記載の方法。
(項目12)
前記光源のアレイのうちの各光源の放射束は、前記1つのみの画像が検出されている間、実質的に一定である、項目11に記載の方法。
(項目13)
1つのみの画像が、前記検出するステップ中に検出され、前記光源の前記2つ以上のサブセットのうちの少なくとも1つのサブセットの通電は、前記検出するステップの開始および終了に対する中間時点で変更される、項目1に記載の方法。
(項目14)
前記2つ以上の光源の第1のサブセットのみが、前記検出するステップのうちの一部中、光を生成しており、前記光源の第2のサブセットのみまたは全てが、前記検出するステップのうちの別の一部中、光を生成している、項目13に記載の方法。
(項目15)
前記検出するステップは、2つ以上の画像を検出するステップを含み、前記2つ以上の画像を処理し、前記2つ以上の画像から単一の画像を作成するステップをさらに含む、項目1に記載の方法。
(項目16)
前記光源の通電は、前記2つ以上の画像のそれぞれの検出のために異なる、項目15に記載の方法。
(項目17)
サンプルパラメータのためのユーザからの入力を受信するステップをさらに含み、前記照射するステップは、前記入力に基づいて、差を伴って前記光源の前記2つ以上のサブセットに通電するステップを含む、項目1に記載の方法。
(項目18)
前記サンプルパラメータは、前記メニスカスを形成する前記培地に関連している、項目17に記載の方法。
(項目19)
前記サンプルパラメータは、前記培地の体積、高さ、および/または組成に関している、項目18に記載の方法。
(項目20)
各々が前記サンプルおよび/またはウェルの異なる構成に対応している所定の通電手順のセットから、前記照射するステップのための通電手順を選択するステップをさらに含み、前記選択するステップは、プロセッサを用いて実施される、項目17に記載の方法。
(項目21)
透過照明撮像のためのシステムであって、前記システムは、
複数のウェルを含むマルチウェルサンプル保持器であって、前記複数のウェルのうちの1つのウェルは、底面を有し、生物細胞とメニスカスを形成する液体または半固体培地とを含むサンプルを含む、マルチウェルサンプル保持器と、
前記サンプル保持器を支持するステージと、
光源のアレイを含む照射サブシステムであって、前記光源のうちの少なくとも1つは、前記システムの光軸から側方にオフセットされており、前記光源は、互いに異なる向きにおいて前記メニスカスに入射するそれぞれの光ビームの光を生成するように構成されている、照射サブシステムと、
光を収集するための対物レンズと、
1つ以上の画像を検出するように構成された撮像検出器であって、前記1つ以上の画像は、前記収集された光で形成され、前記底面の周囲の少なくとも一部を含む同一の視野を表す、撮像検出器と、
プロセッサと
を備え、
前記プロセッサは、互いに対する前記2つ以上のサブセットの差を伴う通電によって、前記メニスカスによる屈折を補償し、コントラストを向上させるように、前記1つ以上の画像への前記光源の2つ以上のサブセットからの光の均整の取れた寄与を制御するように構成されている、システム。
本開示は、透過照明撮像のための方法およびシステムを提供する。例示的方法では、サンプルが、ウェルの中で照射される。サンプルは、生物細胞と、メニスカスを形成する液体または半固体培地とを含み得る。照射するステップは、互いに異なる向きにおいてメニスカスに入射するそれぞれの光ビームの光を生成する光源のアレイを用いて実施され得る。1つ以上の画像が、検出され得る。1つ以上の画像への光源の2つ以上のサブセットからの光の均整の取れた寄与が、メニスカスによる屈折を補償し、コントラストを向上させるように、互いに対する2つ以上のサブセットの差を伴う通電によって制御され得る。
本節は、従来技術の透過照明撮像システム50によって検出される画像の質への液体または半固体メニスカスの悪影響を解説する(図1-3参照)。
本節は、光源のアレイが画質への液体または半固体メニスカスの悪影響を補償し得る方法を説明する(図4-7参照)。独立して制御され得る複数の光源の使用が、より一様な輝度およびコントラストを伴う画像の検出を可能にする。
本節は、メニスカス補償を達成するための光源のアレイ92を伴う例示的透過照明撮像システム130を説明する(図8-10参照)。撮像システム130は、図4のように、3つのみの光源94、96、98および3つのみの光線100、102、104を伴って、図8および9に例示されるが、図10に例示されるように、光源の任意の好適な数および配置を有し得る。
本節は、光源のアレイを用いた透過照明撮像の例示的方法200、および、照射および画像検出のための例示的時系列および構成を説明する(例えば、図11-15参照)。
本節は、一連のインデックス付き段落の本開示の選択された実施形態を説明する。
Claims (20)
- 透過照明撮像の方法であって、前記方法は、
サンプルの1つ以上のサンプルパラメータの各々に対するそれぞれの値を規定するユーザ入力を受信することと、
前記ユーザ入力に基づいて、撮像プロトコルの所定のセットから1つの撮像プロトコルを選択することであって、前記撮像プロトコルは、通電手順と検出手順とを含む、ことと、
前記選択された撮像プロトコルに基づいて、ウェルの中に位置している前記サンプルを照射することであって、前記サンプルは、生物細胞と、メニスカスを形成する液体または半固体の培地とを含み、前記サンプルを照射するステップは、互いに異なる向きに前記メニスカスに入射するそれぞれの光ビームの光を生成する光源のアレイを用いて実行される、ことと、
1つ以上の画像を検出することであって、前記1つ以上の画像は、前記それぞれの光ビームの光で形成され、かつ、前記ウェルの底面の周囲の少なくとも一部を含む視野を表す、ことと、
を含み、
前記光源のアレイは、光源の2つ以上のサブセットを含み、前記光源の前記2つ以上のサブセットのうちの1つのサブセットは、前記メニスカスによる屈折を補償すること、および、コントラストを向上させることを目的として、(a)複数の異なる時間に光を生成することを開始すること、(b)複数の異なる時間に光を生成することを停止すること、および/または、(c)前記光源の前記2つ以上のサブセットのうちの別のサブセットに対して複数の異なる通電レベルで光を生成することを行うように構成されており、
単一の画像が、所与の視野に対して検出され、
前記光源の前記2つ以上のサブセットのうちの少なくとも1つのサブセットの通電は、前記検出するステップの開始および終了に対する中間時点で変更されることにより、前記サンプルの一様なコントラストを有する画像を生成する、方法。 - 前記照射するステップは、互いに異なる時間に前記光源の前記2つ以上のサブセットをオンにするおよび/またはオフにすることにより、前記2つ以上のサブセットの差を伴う通電を少なくとも部分的に生じさせるステップを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記照射するステップは、異なるレベルの電力を前記光源の前記2つ以上のサブセットのうちの各サブセットに供給することにより、前記2つ以上のサブセットの差を伴う通電を少なくとも部分的に生じさせるステップを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記光源の前記2つ以上のサブセットは、第1のサブセットと第2のサブセットとを含み、前記第1のサブセットは、前記アレイにおいて中心に位置付けられており、前記第2のサブセットは、前記アレイにおいて側方に位置付けられている、請求項1に記載の方法。
- 前記光源のアレイは、第1の光源と第2の光源とを含み、前記底面は、縁領域と中心領域とを有し、前記検出するステップは、前記縁領域および前記中心領域の単位面積あたり、前記第1の光源から、前記中心領域よりも多い前記縁領域を通過した光を検出し、前記第2の光源から、前記縁領域よりも多い前記中心領域を通過した光を検出するステップを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記1つ以上の画像を前記検出するステップは、同一のウェルの2つ以上の異なる視野の各々のために実行され、前記方法は、前記異なる視野に対応する画像をマージすることにより、前記ウェルの前記底面全体を表す単一の画像を作成するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記それぞれの光ビームは、第1の光ビームと第2の光ビームとを含み、前記第1の光ビームは、前記第2の光ビームよりも垂直向きに前記メニスカスに入射する、請求項1に記載の方法。
- 前記サンプルと撮像検出器との間の光学経路に位置している対物レンズを用いて光を収集するステップをさらに含み、前記対物レンズは、光を収集するための受光角を画定し、前記それぞれの光ビームのうちの少なくとも1つの光ビームは、前記受光角の半分より大きい垂直線に対する角度オフセットにおいて前記メニスカスに入射する、請求項1に記載の方法。
- 前記方法は、前記サンプルと撮像検出器との間の光学経路に位置している対物レンズを用いて光を収集するステップをさらに含み、前記光を収集するステップは、約0.3以下の開口数を有する対物レンズを用いて実行される、請求項1に記載の方法。
- 前記視野は、前記底面の周囲全体を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記光源のアレイは、第1の光源と第2の光源とを含み、前記照射するステップは、第1の電流を前記第1の光源に供給し、第2の電流を前記第2の光源に供給するステップを含み、前記第1の電流および前記第2の電流は、互いに異なる、請求項1に記載の方法。
- 前記光源のアレイのうちの各光源の放射束は、前記単一の画像が検出されている間、実質的に一定である、請求項11に記載の方法。
- 前記光源の前記2つ以上のサブセットのうちの少なくとも1つのサブセットの通電は、前記検出するステップの開始および終了に対する中間時点で変更される、請求項1に記載の方法。
- 前記2つ以上の光源の第1のサブセットのみが、前記検出するステップのうちの一部の間、光を生成しており、前記光源の第2のサブセットのみまたは全てが、前記検出するステップのうちの別の一部の間、光を生成している、請求項13に記載の方法。
- 前記検出するステップは、2つ以上の画像を検出するステップを含み、前記方法は、前記2つ以上の画像を処理することにより、前記2つ以上の画像から単一の画像を作成するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記光源の通電は、前記2つ以上の画像のそれぞれの検出のために異なる、請求項15に記載の方法。
- 前記1つ以上のサンプルパラメータは、前記メニスカスを形成する前記液体または半固体の培地に関連している、請求項1に記載の方法。
- 前記1つ以上のサンプルパラメータは、前記培地の体積、高さ、および/または、組成に関している、請求項17に記載の方法。
- 前記選択するステップは、プロセッサを用いて実行される、請求項1に記載の方法。
- 透過照明撮像のためのシステムであって、前記システムは、
複数のウェルを含むマルチウェルサンプル保持器であって、前記複数のウェルのうちの1つのウェルは、底面を有し、生物細胞とメニスカスを形成する液体または半固体の培地とを含むサンプルを含む、マルチウェルサンプル保持器と、
前記サンプル保持器を支持するステージと、
光源のアレイを含む照射サブシステムであって、前記光源のうちの少なくとも1つは、前記システムの光軸から側方にオフセットされており、前記光源は、互いに異なる向きに前記メニスカスに入射するそれぞれの光ビームの光を生成するように構成されており、前記光源のアレイは、光源の2つ以上のサブセットを含む、照射サブシステムと、
光を収集するための対物レンズと、
1つ以上の画像を検出するように構成された撮像検出器であって、前記1つ以上の画像は、前記収集された光で形成され、かつ、前記底面の周囲の少なくとも一部を含む同一の視野を表す、撮像検出器と、
プロセッサと
を備え、
前記プロセッサは、前記メニスカスによる屈折を補償すること、および、コントラストを向上させることを目的として、(a)複数の異なる時間に光を生成することを開始すること、(b)複数の異なる時間に光を生成することを停止すること、および/または、(c)前記光源の前記2つ以上のサブセットのうちの別のサブセットに対して複数の異なる通電レベルで光を生成することを行うように、前記光源の前記2つ以上のサブセットのうちの1つのサブセットを制御するように構成されており、
前記プロセッサは、
前記サンプルの1つ以上のサンプルパラメータの各々に対するそれぞれの値を規定するユーザ入力を受信することと、
前記ユーザ入力に基づいて、撮像プロトコルの所定のセットから1つの撮像プロトコルを選択することであって、前記撮像プロトコルは、通電手順と検出手順とを含む、ことと、
前記選択された撮像プロトコルに基づいて、前記複数のウェルのうちの1つのウェルの中に位置している前記サンプルを照射すること、
前記撮像検出器を制御することにより、単一の画像を所与の視野に対して検出することと、
前記検出するステップの開始および終了に対する中間時点で変化するように、前記光源の前記2つ以上のサブセットのうちの少なくとも1つのサブセットの通電を制御することにより、前記サンプルの一様なコントラストを有する画像を生成することと
をさらに行うように構成されている、システム。
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