JP7066639B2 - 患者における抗ｃｄ１９治療の治療的有用性を予測するための方法 - Google Patents

Description

本開示は、抗ＣＤ１９抗体を用いる治療から利益を得る患者における特徴およびバイオマーカーを同定することを対象とする。

ＣＤ１９は、２つの細胞外免疫グロブリン様ドメインおよび広範な細胞質側末端を有する免疫グロブリンスーパーファミリーの９５ｋＤａの膜貫通糖タンパク質である。このタンパク質は、汎Ｂリンパ球表面受容体であり、プレＢ細胞発生の最初期からそれ以降、形質細胞への末端分化の間に下方制御されるまで広範に発現される。それはＢリンパ球系統に特異的であり、造血幹細胞および他の免疫細胞では、一部の濾胞樹状細胞を除いて発現されない。ＣＤ１９は、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達の陽性調節剤として機能し、Ｂ細胞の活性化および増殖ならびに体液性免疫応答の発生において重要である。それは、ＣＤ２１およびＣＤ８１と併せて同時刺激分子として作用し、Ｔ細胞依存性抗原に対するＢ細胞応答において重要である。ＣＤ１９の細胞質側末端は、タンパク質チロシンキナーゼのｓｒｃ－ファミリーを介して下流シグナル伝達経路を作動させるチロシンキナーゼのファミリーに物理的に関連する。ＣＤ１９は、ほぼすべての慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ならびに他の多くの異なるタイプの白血病、例えば急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）およびヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）において高度に発現されることから、リンパ系起源のがんにおける興味深い標的である。

ＣＤ１９特異的抗体の臨床開発は従来、ＣＤ１９抗原の内部移行により制限されていたが、抗体修飾技術の改善により、この有望な治療標的が回復している。ＭＯＲ００２０８（以前はＸｍＡｂ５５７４と称される）は、ＣＤ１９に結合するＦｃが改変されたヒト化モノクローナル抗体である。ＸｍＡｂの改変された突然変異による、ＭＯＲ００２０８のＦｃへのＦｃγＲへの結合における増強は、非修飾抗体と比べて、腫瘍に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、および直接的細胞傷害性効果（アポトーシス）をインビトロで著しく増強する。ＭＯＲ００２０８は、補体依存性細胞傷害性を媒介することが示されていない。

ＭＯＲ００２０８は、ＣＬＬ、ＡＬＬおよびＮＨＬにおける臨床試験において試験されているかまたは現在試験中である。具体的には、慢性リンパ性白血病におけるＸｍＡｂ（登録商標）５５７４の安全性および耐容性という表題の第Ｉ相試験、ならびにＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）を治療するためのＦｃ最適化抗ＣＤ１９抗体（ＭＯＲ００２０８）の試験という表題の第ＩＩａ相試験は完了している。非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を治療するためのＦｃ最適化抗ＣＤ１９抗体（ＭＯＲ００２０８）の試験という表題の第ＩＩａ相試験は、募集を完了している。また以下の試験、すなわち、再発性または難治性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）（Ｂ－ＭＩＮＤ）を有する成人患者におけるベンダムスチン（ＢＥＮ）を伴うＭＯＲ００２０８対ＢＥＮを伴うリツキシマブ（ＲＴＸ）の有効性および安全性を評価するための試験という表題の第ＩＩ／ＩＩＩ相試験、ＢＴＫｉで前処置されたＲ／Ｒ ＣＬＬ／ＳＬＬ患者におけるイデラリシブを伴うＭＯＲ００２０８の有効性および安全性を評価するための試験という表題の第ＩＩ相試験、Ｒ－Ｒ ＤＬＢＣＬを有する患者におけるＭＯＲ００２０８を伴うレナリドミドの有効性および有効性を評価するための試験という表題の第ＩＩ相試験、ならびに再発性もしくは難治性ＣＬＬ、ＳＬＬもしくはＰＬＬを有する患者または未治療のＣＬＬ、ＳＬＬもしくはＰＬＬを有する高齢患者におけるレナリドミドと組み合わせた第ＩＩ相ＭＯＲ００２０８という表題の第ＩＩ相試験が、計画されるかまたは進行中である。さらなる現行の第ＩＩ相試験（ＣＯＳＭＯＳ）では、再発性または難治性ＣＬＬ、ＳＬＬを有する患者におけるイデラリシブまたはベネトクラクスと組み合わせたＭＯＲ００２０８の有効性および安全性が試験される。

ＭＯＲ００２０８の単剤有効性は、ＣＬＬおよびＮＨＬにおいて報告されている。しかし、患者のモノクローナル抗体療法薬に対する一般的な変動しやすい奏効率によると、どの患者がかかる抗体療法薬に応答する可能性が高いかを正確に予測し、恩恵を受ける可能性が最も高い患者にその治療薬を投与することができるような方法が必要であることが示される。患者の特定のバイオマーカーまたは特徴は、各バイオマーカーにおける特定の濃度または範囲がかかる治療薬に対する応答性と相関する場合に見出され得る。

リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン塩酸塩（ヒドロキシダウノマイシン）、ビンクリスチン硫酸塩（Ｏｎｃｏｖｉｎ）およびプレドニゾン（Ｒ－ＣＨＯＰ）で治療されたＤＬＢＣＬを有する患者の生存に対するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞数の影響が評価された。Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４９：３，１６２－１６９（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１４）。以前、末梢ＮＫ細胞数が、ａａｌＰＩ ２－３ＤＬＢＣＬを有する患者における臨床成績に関連することが報告された。Ｐｌｏｎｑｕｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ ２００７；１８：１２０９－１５。

有効性を予測するかかる患者の特徴およびバイオマーカーを発見および同定するために相当な努力および投資が必要であることは明らかである。

ＭＯＲ００２０８は、ＣＬＬ、ＡＬＬ、ＮＨＬおよびＳＬＬを有する患者において試験されている。したがって、ＭＯＲ００２０８治療から利益を得る可能性がより高い患者の特徴またはバイオマーカーを同定するため、臨床データの徹底分析が現在まで完了している。

ＭＯＲ００２０８は、ＣＤ１９表面抗原を特異的に標的にし、その増強されたＡＤＣＣエフェクター機能を介して直接的な腫瘍細胞死を媒介する。前臨床試験では、ＭＯＲ００２０８は、１５，０００～１０５，０００分子／細胞の範囲のＣＤ１９抗原レベルを発現する、ヒトリンパ腫および白血病（バーキットリンパ腫、ＣＬＬ、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、ＣＤ１９^＋慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の広範囲にわたるＣＤ１９^＋腫瘍細胞系に対するＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、および直接的細胞傷害性効果（アポトーシス）をインビトロで著しく増強することが示されている。同様の効果は、新しく単離された患者のＣＬＬまたはＡＬＬ細胞との関連でも認められており、ＡＬＬおよびＣＬＬ Ｂ細胞について報告された発現範囲がＮＨＬ Ｂ細胞において認められる範囲をカバーすることから、原発性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）細胞に置き換えられることも期待される（Ｇｉｎａｌｄｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｏｌｅｊｎｉｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．，２００６）。様々なタイプのＢ細胞新生物全体に及ぶＣＤ１９の広範かつ均質な表面発現に基づき、本試験におけるＭＯＲ００２０８の効果は、広範囲のヒトリンパ腫および白血病、例えば、ＣＬＬ、ＡＬＬ、ＮＨＬおよびＳＬＬならびにそれらのサブタイプに向けることができる。

非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を治療するためのＦｃ最適化抗ＣＤ１９抗体（ＭＯＲ００２０８）の試験という表題の第ＩＩａ相試験からのデータは徹底分析されている。これら効果の結果として、以下の開示は、抗ＣＤ１９抗体が有効である場合の患者の特徴およびバイオマーカーを提供する。

詳細には、患者の少なくとも以下の特徴、すなわち、ａ）年齢、ｂ）性別、ｃ）患者が直近６か月以内にリツキシマブの投与を受けていたか否か、ｄ）患者がリツキシマブ難治性であるか否か、ｅ）患者がＦｃγＲＩＩＩａ高親和性または低親和性対立遺伝子を有するか否か、ｆ）患者がＦｃγＲＩＩａ高親和性または低親和性対立遺伝子を有するか否か、ｇ）患者が１２か月を超える前治療に対する応答の持続期間を有するか否か、ｈ）ベースライン末梢Ｔ細胞数（細胞／μｌ）、ｉ）ベースライン末梢ＮＫ細胞数（細胞／μｌ）およびｊ）末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現（細胞あたりの結合抗体－ＡＢＣ）が評価された。

１）ベースライン末梢ＮＫ細胞数および２）末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現の双方が、ＭＯＲ００２０８治療との患者応答に対して明確な相関を示した。具体的には、より多いベースライン末梢ＮＫ細胞数／μｌを有する患者は、より高い疾患制御率（ＤＣＲ）と相関した。ＤＣＲは、患者が完全寛解（ＣＲ）＋部分寛解（ＰＲ）＋安定疾患（ＳＤ）を有することを含む。加えて、かかる患者は、より少ないＮＫ細胞数を有する患者と比べて、有意により良好な進行のない生存（ＰＦＳ）を有した。さらに、少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）のＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現を有する患者は、より高い疾患制御率（ＤＣＲ）と相関した。

したがって、ＣＬＬ、ＡＬＬ、ＮＨＬおよびＳＬＬと診断され、かつａ）多い末梢ＮＫ細胞数または２）少なくとも６０，０００ＡＢＣの末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現のいずれかを有する患者は、ＭＯＲ００２０８治療から利益を得る可能性がより高い。

１）ベースライン末梢ＮＫ細胞数および２）末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現の双方は、ＭＯＲ００２０８治療との患者応答に対して明確な相関を示した。具体的には、少なくとも５０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数を有する患者は、より高い疾患制御率（ＤＣＲ）と相関した。ＤＣＲは、患者が完全寛解（ＣＲ）＋部分寛解（ＰＲ）＋安定疾患（ＳＤ）を有することを含む。加えて、少なくとも５０細胞／μｌのベースラインＮＫ細胞数を有する患者は、より少ないＮＫ細胞数を有する患者と比べて、有意により良好な進行のない生存（ＰＦＳ）を有した。さらに、少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）のＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現を有する患者は、より高い疾患制御率（ＤＣＲ）と相関した。

したがって、ＣＬＬ、ＡＬＬ、ＮＨＬおよびＳＬＬと診断され、かつａ）少なくとも５０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数または２）少なくとも６０，０００ＡＢＣの末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現のいずれかを有する患者は、ＭＯＲ００２０８治療から利益を得る可能性がより高い。

１）ベースライン末梢ＮＫ細胞数および２）末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現の双方は、ＭＯＲ００２０８治療との患者応答に対して明確な相関を示した。具体的には、少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数を有する患者は、より高い疾患制御率（ＤＣＲ）と相関した。ＤＣＲは、患者が完全寛解（ＣＲ）＋部分寛解（ＰＲ）＋安定疾患（ＳＤ）を有することを含む。加えて、少なくとも１００細胞／μｌのベースラインＮＫ細胞数を有する患者は、より少ないＮＫ細胞数を有する患者と比べて、有意により良好な進行のない生存（ＰＦＳ）を有した。さらに、少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）のＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現を有する患者は、より高い疾患制御率（ＤＣＲ）と相関した。

したがって、ＣＬＬ、ＡＬＬ、ＮＨＬおよびＳＬＬと診断され、かつａ）少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数または２）少なくとも６０，０００ＡＢＣの末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現のいずれかを有する患者は、ＭＯＲ００２０８治療から利益を得る可能性がより高い。

図１は、ＭＯＲ００２０８の可変ドメインおよびＣＤＲのアミノ酸配列を示す。 図２は、ＭＯＲ００２０８の完全重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を示す。 図３は、ＤＣＲにおける予測因子としての末梢ＮＫ細胞数の受信者動作特性（ＲＯＣ）分析を示す。 図４は、ＤＣＲにおける予測因子としての末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現レベル（ＡＢＣ）のＲＯＣ分析を示す。 図５は、ＤＣＲにおける有望な予測因子としての末梢Ｔ細胞数のＲＯＣ分析を示す。 図６は、末梢ＮＫ細胞数および末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現レベルが独立変数であり、かつ相関しないことを示す。 図７は、特定のベースラインの特徴およびバイオマーカーを有する患者サブグループにおけるＤＣＲを伴うフォレストプロットを示す。 図８は、少なくとも１００細胞／μｌの末梢ＮＫ細胞数を有する患者とより少ないＮＫ細胞数を有する患者との間の進行のない生存の差異を示す。 図９は、末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現において少なくとも６０，０００のＡＢＣを有する患者とより少ないＮＫ細胞上のＣＤ１６発現を有する患者との間の進行のない生存の差異を示す。 図１０は、少なくとも５００細胞／μｌの末梢Ｔ細胞数を有する患者とより少ないＴ細胞数を有する患者との間の進行のない生存の差異を示す。

用語「抗体」は、任意のアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含むモノクローナル抗体を意味する。ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合によって連結される２つの同一の重鎖および２つの同一の軽鎖からなる。各々の重鎖および軽鎖は、定常領域および可変領域を含む。各可変領域は、主に抗原のエピトープへの結合に関与する「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）または「超可変領域」と称される３つのセグメントを含む。それらは、Ｎ末端から順番に番号付けられ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と称される。ＣＤＲ外部の可変領域のより高度に保存された部分は、「フレームワーク領域」と称される。「抗体断片」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２断片、または他の断片を意味し、それは少なくとも１つの可変重鎖または可変軽鎖を含み、各々はＣＤＲおよびフレームワーク領域を含む。

「ＶＨ」は、抗体、または抗体断片の免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。「ＶＬ」は、抗体、または抗体断片の免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。

「Ｆｃ領域」は、抗体の定常領域を意味し、それはヒトにおいては、ｌｇＧ１、２、３、４サブクラスまたはその他に属し得る。ヒトＦｃ領域の配列は、ＩＭＧＴ、すなわちヒトＩＧＨ Ｃ－ＲＥＧＩＯＮ（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／Ｐｒｏｔｅｉｎｓ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ｈｕｍａｎ／ＩＧＨ／ＩＧＨＣ／Ｈｕ＿ＩＧＨＣａｌｌｇｅｎｅｓ．ｈｔｍｌ（２０１１年５月１６日に検索））で利用可能である。

患者という用語は、ヒトを含む。

ＮＨＬは、リンパ球に起源をもつ不均一な悪性腫瘍である。米国では、発生率が６５，０００例／年で死亡数が約２０，０００と推定される（アメリカがん協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ），２００６；およびＳＥＥＲ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ Ｒｅｖｉｅｗ）。この疾患はすべての年齢で発生し得、通常の発症は４０歳を超える成人において始まり、発生率は年齢とともに増加する。ＮＨＬは、リンパ節、血液、骨髄および脾臓において蓄積するリンパ球のクローン増殖によって特徴づけられるが、任意の主要な臓器が関与し得る。病理学者および臨床医によって用いられる現在の分類体系は、ＮＨＬを前駆体および成熟Ｂ細胞またはＴ細胞新生物にオーガナイズする、腫瘍の世界保健機関（ＷＨＯ）分類である。ＰＤＱは現在、臨床試験へのエントリーにおいて、ＮＨＬを無痛性または侵襲性に分けている。無痛性ＮＨＬグループは、主に濾胞性サブタイプ、小リンパ球性リンパ腫、ＭＡＬＴ（粘膜関連リンパ組織）、および辺縁帯からなり；無痛性は、新規に診断されるＢ細胞ＮＨＬ患者の約５０％を包含する。侵襲性ＮＨＬは、主に、びまん性大細胞型Ｂ細胞（ＤＬＢＬ、ＤＬＢＣＬ、またはＤＬＣＬ）（すべての新規に診断される患者の４０％はびまん性大細胞型を有する）、バーキット、およびマントル細胞の組織学的診断を有する患者を含む。ＮＨＬの臨床経過は非常に変化しやすい。臨床経過の主要な決定因子は、組織学的サブタイプである。ＮＨＬの大部分の無痛性型は、不治の病と考えられる。患者は最初、化学療法または抗体療法のいずれかに応答し、大部分は再発することになる。現在までの試験では、早期介入を伴う生存における改善は実証されていない。無症候患者では、患者が症候性になるかまたは疾患のペースが加速しているように見えるまで「経過観察する」ことは認容できる。経時的には、この疾患はより侵襲性の組織像に変化し得る。中央値生存は８～１０年であり、無痛性患者は、彼らの疾患の治療期間中、３つ以上の治療を受けることが多い。歴史的には、症候性無痛性ＮＨＬ患者の初期治療は、組み合わせ化学療法であった。最も一般的に使用される薬剤は、シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（ＣＶＰ）；またはシクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチン、プレドニゾン（ＣＨＯＰ）を含む。患者の約７０％～８０％は、彼らの初期化学療法に応答することになり、寛解の持続期間は２～３年程度にわたる。最終的には、患者の大半が再発する。抗ＣＤ２０抗体であるリツキシマブの発見および臨床用途は、奏効率および生存率において有意な改善をもたらしている。大部分の患者における現行の標準治療は、リツキシマブ＋ＣＨＯＰ（Ｒ－ＣＨＯＰ）またはリツキシマブ＋ＣＶＰ（Ｒ－ＣＶＰ）である。インターフェロンは、アルキル化剤と組み合わせることで、ＮＨＬの初期治療薬として認可されているが、米国では使用が制限されている。リツキシマブ治療は、ＮＨＬの幾つかのタイプにおいて有効であることが示されており、現在、無痛性（濾胞性リンパ腫）と侵襲性ＮＨＬ（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）の双方における第一選択治療として認可されている。しかし、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）には、一次耐性（再発性無痛性患者において５０％の応答）、獲得耐性（再治療時、５０％の奏効率）、まれな完全寛解（再発性集団内で２％の完全奏効率）、および再発の継続パターンを含む、有意な制限がある。最後に、多数のＢ細胞がＣＤ２０を発現しないことから、多数のＢ細胞障害が抗ＣＤ２０抗体療法を用いて治療不能である。

ＮＨＬに加えて、Ｂ細胞の調節不全から生じる白血病の幾つかのタイプが存在する。慢性リンパ性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）（「慢性リンパ性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ）」または「ＣＬＬ」としても公知）は、Ｂリンパ球の異常な蓄積によって引き起こされる成人白血病の一種である。ＣＬＬでは、悪性リンパ球は、正常で成熟した外観を呈し得るが、感染に有効に対処することができない。ＣＬＬは、成人における白血病の最も一般的な形態である。男性は、女性の２倍、ＣＬＬを発症しやすい。しかし、主要なリスク因子は年齢である。新しい症例の７５％超が、５０歳を超える患者において診断されている。毎年１０，０００超の症例が診断され、死亡数は年間でほぼ５，０００名である（アメリカがん協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ），２００６；およびＳＥＥＲ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ Ｒｅｖｉｅｗ）。ＣＬＬは不治の病であるが、大部分の症例では徐々に進行する。ＣＬＬを有する多くの人々は、長年にわたり普通の活動的な生活を送る。その遅発性が理由で、早期ＣＬＬは、早期のＣＬＬ介入が生存期間または生活の質を改善しないと考えられることから、一般に治療されない。その代わり、状態は経時的に監視される。初期ＣＬＬ治療は、正確な診断および疾患の進行に応じて変わる。ＣＬＬ治療に用いられる薬剤は多数存在する。組み合わせ化学療法レジメン、例えばＦＣＲ（フルダラビン、シクロホスファミドおよびリツキシマブ）、およびＢＲ（イブルチニブおよびリツキシマブ）は、新規に診断されたＣＬＬおよび再発性ＣＬＬの双方において有効である。同種骨髄（幹細胞）移植は、そのリスク故に、ＣＬＬにおける第一選択治療として用いられるのはまれである。

白血病の別のタイプが、ＣＬＬ診断に要求されるクローン性リンパ球増加が欠如するが、それ以外では病理学的および免疫表現的特徴を共有するＣＬＬ変異体と考えられる小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である（Ｃａｍｐｏ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。ＳＬＬの定義には、リンパ節腫脹および／または脾腫の存在を必要とする。さらに、末梢血中のＢリンパ球の数は、５×１０９／Ｌを超えない必要がある。ＳＬＬでは、診断は、可能な限りいつでも、リンパ節生検の病理組織学的評価により確認される必要がある（Ｈａｌｌｅｋ ｅｔ ａｌ．，２００８）。ＳＬＬの発生率は、米国ではＣＬＬの約２５％である（Ｄｏｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００７）。

白血病のもう一つのタイプが、急性リンパ球性白血病としても知られる急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。ＡＬＬは、骨髄における悪性および未熟白血球（リンパ芽球としても公知）の過剰産生および継続的増殖によって特徴づけられる。「急性」は、循環リンパ球（「芽球」）の未分化な未熟状態を指し、しかも疾患は、未治療のままであれば迅速に進行し、平均余命は数週から数か月である。ＡＬＬは、小児において最も一般的であり、４～５歳が最高発生率である。１２～１６歳の子供は、ＡＬＬが原因で他者よりも容易に死亡する。現在、小児ＡＬＬの少なくとも８０％は治癒可能と考えられる。毎年４，０００未満の症例が診断され、死亡数は年間でほぼ１，５００名である（アメリカがん協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ），２００６；およびＳＥＥＲ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ Ｒｅｖｉｅｗ）。

非特異的なＢ細胞リンパ腫におけるＣＤ１９抗体の使用は、国際公開第２００７０７６９５０号パンフレット（米国特許出願公開第２００７１５４４７３号明細書）（双方とも参照により援用される）に考察されている。ＣＬＬ、ＮＨＬおよびＡＬＬにおけるＣＤ１９抗体の使用は、Ｓｃｈｅｕｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，ＣＤ１９ Ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ Ｌｙｍｐｈｏｍａ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ａｎｄ Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｖｏｌ．１８，３８５－３９７（１９９５）（その全体が参照により援用される）に記載されている。

ＣＤ１９に特異的なさらなる抗体は、国際公開第２００５０１２４９３号パンフレット（米国特許第７１０９３０４号明細書）、国際公開第２０１００５３７１６号パンフレット（米国特許出願第１２／２６６，９９９号明細書）（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；国際公開第２００７００２２２３号パンフレット（米国特許第８０９７７０３号明細書）（Ｍｅｄａｒｅｘ）；国際公開第２００８０２２１５２号パンフレット（米国特許出願第１２／３７７，２５１号明細書）および国際公開第２００８１５０４９４号パンフレット（Ｘｅｎｃｏｒ）、国際公開第２００８０３１０５６号パンフレット（米国特許出願第１１／８５２，１０６号明細書）（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；国際公開第２００７０７６９５０号パンフレット（米国特許出願第１１／６４８，５０５号明細書）（Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ ＧｍｂＨ）；国際公開第２００９／０５２４３１号パンフレット（米国特許出願第１２／２５３，８９５号明細書）（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；ならびに国際公開第２０１００９５０３１号パンフレット（米国特許出願第１２／７１０，４４２号明細書）（Ｇｌｅｎｍａｒｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、国際公開第２０１２０１０５６２号パンフレットおよび国際公開第２０１２０１０５６１号パンフレット（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、国際公開第２０１１１４７８３４号パンフレット（ＲｏｃｈｅＧｌｙｃａｒｔ）、ならびに国際公開第２０１２／１５６４５５号パンフレット（Ｓａｎｏｆｉ）（すべてはそれら全体が参照により援用される）に記載されている。

用語「ＣＤ１９」は、以下の同義語：Ｂ４、Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、ＣＶＩＤ３、分化抗原ＣＤ１９、ＭＧＣ１２８０２、およびＴ細胞表面抗原Ｌｅｕ－１２を有する、ＣＤ１９として公知のタンパク質を指す。

ヒトＣＤ１９は、

のアミノ酸配列を有する。

「ＭＯＲ００２０８」は、抗ＣＤ１９抗体である。可変ドメインのアミノ酸配列は、図１に提示される。ＭＯＲ００２０８の重鎖および軽鎖Ｆｃ領域のアミノ酸配列は、図２に提示される。「ＭＯＲ００２０８」および「ＸｍＡｂ５５７４」は、図１および２に示される抗体を記述するための同義語として用いられる。ＭＯＲ００２０８抗体は、米国特許出願第１２／３７７，２５１号明細書（その全体が参照により援用される）に記載されている。

米国特許出願第１２／３７７，２５１号明細書は、以下：
＞４Ｇ７ Ｈ１．５２ハイブリッドＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ

＞４Ｇ７ Ｌ１．１５５

のような４Ｇ７ Ｈ１．５２ハイブリッドＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／４Ｇ７ Ｌ１．１５５と称される（後にＭＯＲ００２０８と称される）抗体を記述している。

医薬組成物は、活性薬剤、例えばヒトにおける治療用抗体を含む。医薬組成物は、薬学的に許容できる担体または賦形剤をさらに含んでもよい。

「投与される」または「投与」は、例えば、吸入用の鼻スプレーもしくはエアロゾルとして、または摂取可能溶液、カプセル剤もしくは錠剤としての注射剤型による、例えば、静脈内、筋肉内、皮内もしくは皮下経路または粘膜経路などによる医薬組成物の送達を指す。

本開示に従って投与される抗体は、治療有効量で患者に投与される。「治療有効量」は、所与の疾患または障害の臨床症状での何らかの改善をもたらすのに十分な量を指す。例として、例示される試験における患者は、ＭＯＲ００２０８の投与を、１２ｍｇ／ｋｇで毎週１回、また維持段階では２週毎もしくは月毎に１回受けた。

特定の治療目的にとって有効な量は、疾患または損傷の重症度、ならびに被験者の体重および全身状態に依存することになる。適切な用量の決定が、値のマトリックスを作成し、マトリックス内の異なる点を試験することによる通常の実験を用いて達成され得、それらすべてが熟練した医師または臨床科学者の通常の技能の範囲内にあることは理解されるであろう。

ベースラインは、所望される治療薬の投与前を意味する。例えば、所望される抗ＣＤ１９抗体の投与前である。

受信者動作特性（ＲＯＣ）分析を用いて、予測性、感受性、特異性を分析し、有望なバイオマーカー、例えばＮＫ細胞数、ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現レベル、およびＴ細胞数におけるカットオフを決定した。最適なカットオフを推定するため、以下のさらなる方法：「Ｍａｘ．Ａｃｃｕｒａｃｙ」－正確性を最大化するカットオフ；ｂ）「Ｍａｘ．ＤＯＲ」－診断オッズ比を最大化するカットオフ；ｃ）「Ｅｒｒｏｒ．ｒａｔｅ」－誤差率を最小化するカットオフ；ｄ）「Ｍａｘ．Ａｃｃｕｒａｃｙ．ａｒｅａ」－正確性の範囲を最大化するカットオフ；ｅ）「Ｍａｘ．Ｓｅｎｓ＋Ｓｐｅｃ」－特異性を併せた感受性の合計を最大化するカットオフ；ｆ）「Ｍａｘ．Ｙｏｕｄｅｎ」－Ｙｏｕｄｅｎ指数を最大化するカットオフ；ｇ）「Ｓｅ＝Ｓｐ」－感受性が特異性に等しいカットオフ；ｈ）「Ｍｉｎ．ＲＯＣ．Ｄｉｓｔ」－曲線とグラフの左上端との間の距離を最小化するカットオフ；ｉ）「Ｍａｘ．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ」－効率を最大化するカットオフ；およびｊ）「Ｍｉｎ．ＭＣＴ」－誤分類コストの項目を最小化するカットオフ、が存在する。Ｌｏｐｅｚ－Ｒａｔｏｎ，Ｍ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ａｌｖａｒｅｚ，Ｍ．Ｘ，Ｃａｄａｒｓｏ－Ｓｕａｒｅｚ，Ｃ．ａｎｄ Ｇｕｄｅ－Ｓａｍｐｅｄｒｏ，Ｆ．（２０１４）．Ｏｐｔｉｍａｌ Ｃｕｔｐｏｉｎｔｓ：Ａｎ Ｒ Ｐａｃｋａｇｅ ｆｏｒ Ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ Ｏｐｔｉｍａｌ Ｃｕｔｐｏｉｎｔｓｉｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｔｅｓｔｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ６１（８），１－３６を参照のこと。

ＣＤ１９に特異的な抗体はまた、他の薬剤と組み合わせて前臨床的に試験されている。例えば、ＭＯＲ００２０８は、ナイトロジェンマスタード、プリン類似体、サリドマイド類似体、ホスホイノシチド３－キナーゼ阻害剤、ＢＣＬ－２阻害剤およびブルトンのチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤と組み合わせて試験されていた。

「ナイトロジェンマスタード」は、化学療法剤として用いられる非特異的ＤＮＡアルキル化剤である。アルキル化剤は、アルキル基（ＣｎＨ２ｎ＋１）を核酸塩基に、例えばアルキル基をＤＮＡのグアニン塩基のイミダゾール環の７位の窒素原子で付加する。アルキル化ステップは、鎖間架橋（ＩＣＬ）の形成をもたらす。これらのＩＣＬは、複製および転写などの基本的な代謝過程を遮断することから、細胞傷害性が高い。ナイトロジェンマスタードは、シクロホスファミド、クロラムブシル、ウラムスチン、イホスファミド、メルファランおよびベンダムスチンを含む。

ベンダムスチンは、リボムスチン（ｒｉｂｏｍｕｓｔｉｎ）（登録商標）、およびトレアンダ（登録商標）という名称で市販されており、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、無痛性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、および他のリンパ腫の治療における、Ｍｕｎｄｉｐｈａｒｍａ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ ＧｍｂＨのライセンシー）およびＣｅｐｈａｌｏｎにより、ＳＤＸ－１０５としても公知である。ベンダムスチンは、以下の構造：

を有する。

プリン類似体は、代謝プリンの構造を模倣し、それにより核酸の合成に干渉する代謝拮抗物質である。例えば、フルダラビンは、プリンヌクレオチド、アデニンおよびグアニンに対して置換することにより、ＲＮＡおよびＤＮＡに組み込まれ得る。プリン類似体は、個体の高速増殖性細胞、例えばがん細胞、骨髄細胞または胃腸管内に存在する細胞の増殖を阻害する。プリン類似体は、メルカプトプリン、アザチオプリン、チオグアニンおよびフルダラビンを含む。フルダラビンまたはリン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））は、慢性リンパ性白血病および無痛性非ホジキンリンパ腫の治療において用いられる化学療法剤である。フルダラビンは、プリン類似体である。フルダラビンは、リボヌクレオチドレダクターゼおよびＤＮＡポリメラーゼに干渉することによりＤＮＡ合成を阻害し、（これらの酵素はＤＮＡ複製中に極めて活性が高いことから）Ｓ期に特異的である。フルダラビンは、以下の構造：

を有する。

「サリドマイド類似体」は、限定はされないが、サリドマイド自身、レナリドミド（ＣＣ－５０１３、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（商標））、ポマリドミド（ＣＣ４０４７、Ａｃｔｉｍｉｄ（商標））ならびに国際公開第２００２０６８４１４号パンフレットおよび国際公開第２００５０１６３２６号パンフレット（それら全体が参照により援用される）に開示される化合物を含む。この用語は、骨格としてサリドマイド構造を用いる合成化合物を指す（例えば、側鎖が付加されているかまたはかかる側鎖が親構造から欠失されている）。類似体は、分子断片としてのアルキル鎖の１つ以上の官能基分の長さの差、またはイオン化における変化により、サリドマイドおよびその代謝産物化合物と構造が異なる。用語「サリドマイド類似体」はまた、サリドマイドの代謝産物を含む。サリドマイド類似体は、各化合物のＳ－およびＲ－鏡像異性体のラセミ混合物、ならびに個別にＳ－鏡像異性体またはＲ－鏡像異性体を含む。ラセミ混合物は好ましい。

サリドマイド類似体は、以下の構造：

の化合物を含む。

「ホスホイノシチド３－キナーゼ阻害剤」は、増殖制御、代謝および翻訳開始などの多くの細胞機能にとって重要なシグナル伝達経路のＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路の一部である、ホスホイノシチド３－キナーゼ酵素の１つ以上を阻害することにより機能する薬剤のクラスである。

ＰＩ３Ｋには幾つかの異なるクラスおよびアイソフォームが存在する。クラス１のＰＩ３Ｋは、４つのタイプ（アイソフォーム）－ｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０γおよびｐ１１０δを有する、ｐ１１０として知られる触媒サブユニットを有する。試験中の現行の阻害剤は、クラスＩのＰＩ３Ｋの１つ以上のアイソフォームを阻害する。

ホスホイノシチド３－キナーゼ阻害剤は、少なくともイデラリシブ、デュベリシブおよびコパンリシブを含む。イデラリシブは、Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．によって市販されている（商品名Ｚｙｄｅｌｉｇ、ＧＳ－１１０１またはＣＡＬ－１０１とも称される）。イデラリシブは現在、他の併存症が要因でリツキシマブ単独が適切な治療と考えられるような患者におけるリツキシマブと組み合わせた再発性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の治療薬；少なくとも２つの先行的な全身治療法を受けている患者における再発性濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＦＬ）の治療薬；少なくとも２つの先行的な全身治療法を受けている患者における再発性小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）の治療薬として分類される。この物質は、ホスホイノシチド３－キナーゼ阻害剤として作用し；より詳細には、それは、酵素ホスホイノシチド３－キナーゼのδアイソフォームであるＰ１１０δを遮断する。

イデラリシブの式は、

である。

「ブルトンのチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤」は、Ｂ細胞発生において重要な役割を担うチロシン－タンパク質キナーゼＢＴＫ酵素を阻害することによって機能する薬剤のクラスである。詳細には、ＢＴＫは、ホスファチジルイノシトール（３，４，５）－三リン酸（ＰＩＰ３）に結合するＰＨドメインを含む。ＰＩＰ３の結合は、ＢｔｋがホスホリパーゼＣをリン酸化することを誘導し、次いでホスファチジルイノシトールＰＩＰ２を、イノシトール三リン酸（ＩＰ３）およびジアシルグリセロール（ＤＡＧ）という２つの二次メッセンジャーに加水分解し、次いで下流タンパク質の活性をＢ細胞シグナル伝達の間に調節するようになる。

ブルトンのチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤は、イブルチニブを含む。イブルチニブは、Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ，ＩｎｃおよびＪｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ’ｓ Ｊａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌによって市販されている（商品名Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ、ＰＣＩ－３２７６５とも称される）。イブルチニブは現在、少なくとも１つの前治療を受けているマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を有する患者、少なくとも１つの前治療を受けている慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する患者、１７ｐ欠失を伴う慢性リンパ性白血病を有する患者、およびワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症を有する患者の治療薬として分類される。イブルチニブの式は、１－［（３Ｒ）－３－［４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル］－１－ピペリジニル］－２－プロペン－１－オンであり、以下の構造：

を有する。

「ＢＣＬ－２阻害剤」は、抗アポトーシスＢ細胞リンパ腫－２（Ｂｃｌ－２）タンパク質を阻害し、細胞のプログラム細胞死を導くことによって機能する薬剤のクラスである。ＢＣＬ－２阻害剤は、ベネトクラクスを含む。ベネトクラクスは、ＡｂｂｖｉｅおよびＧｅｎｅｎｔｅｃｈによって市販されている（商品名ＶＥＮＣＬＥＸＴＡ（商標）、ＧＤＣ－０１９９、ＡＢＴ－１９９、およびＲＧ７６０１としても公知）。ベネトクラクスは現在、少なくとも１つの前治療を受けている、ＦＤＡ認証試験による検出としての１７ｐ欠失を伴う慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を有する患者の治療薬として分類される。ベネトクラクスの式は、４－（４－｛［２－（４－クロロフェニル）－４，４－ジメチル－１－シクロヘキセン－１－イル］メチル｝－１－ピペラジニル）－Ｎ－（｛３－ニトロ－４－［（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）－２－（１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－５－イルオキシ）ベンズアミドであり、以下の構造：

を有する。

「ベネトクラクス」、「ＡＢＴ」、および「ＡＢＴ－１９９」は、本明細書で同義語として用いられる。

実施形態
一態様は、抗ＣＤ１９抗体を用いる治療に応答性である慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する被験者を同定する方法において、
ａ．前記抗ＣＤ１９抗体を用いる治療前に前記被験者から得られる試料を準備するステップと、
ｂ．ｉ．末梢ＮＫ細胞数、および
ｉｉ．末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現レベル
からなる群から選択される前記試料中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを測定するステップと、
ｃ．前記試料中の前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを所定のカットオフレベルと比較するステップと、
を含み、所定のカットオフレベルまたはそれを超える前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが抗ＣＤ１９抗体を用いる治療から利益を得ることになる被験者を示す、方法。

実施形態では、試料は、血液試料である。実施形態では、前記試料は、末梢ＮＫ細胞を含む。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフレベルは、少なくとも５０細胞／μｌ、少なくとも７５細胞／μｌ、少なくとも１００細胞／μｌ、少なくとも１２５細胞／μｌ、少なくとも１５０細胞／μｌ、少なくとも１７５細胞／μｌ、少なくとも２００細胞／μｌ、少なくとも２２５細胞／μｌ、または少なくとも２５０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数である。実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフレベルは、少なくとも４５，０００ＡＢＣ、少なくとも６０，０００ＡＢＣ、少なくとも７５，０００ＡＢＣ、または少なくとも９０，０００ＡＢＣの末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルである。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、
ａ．少なくとも５０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、または
ｂ．少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
である。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、
ａ．少なくとも５０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、および
ｂ．少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
である。

実施形態では、所定のカットオフレベルは、少なくとも５０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数である。実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルである。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、
ａ．少なくとも７０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、または
ｂ．少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
である。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、
ａ．少なくとも７０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、および
ｂ．少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
である。

実施形態では、所定のカットオフレベルは、少なくとも７０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数である。実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルである。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、
ａ．少なくとも８０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、または
ｂ．少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
である。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、
ａ．少なくとも８０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、および
ｂ．少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
である。

実施形態では、所定のカットオフレベルは、少なくとも８０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数である。実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルである。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、
ａ．少なくとも９０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、または
ｂ．少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
である。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、
ａ．少なくとも９０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、および
ｂ．少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
である。

実施形態では、所定のカットオフレベルは、少なくとも９０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数である。実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルである。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、
ａ．少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、または
ｂ．少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
である。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、
ａ．少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、および
ｂ．少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
である。

実施形態では、所定のカットオフレベルは、少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数である。実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルである。

一態様は、抗ＣＤ１９抗体を用いる治療に応答性である慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する被験者を同定する方法において、
ａ．前記抗ＣＤ１９抗体を用いる治療前に前記被験者から得られる血液試料を準備するステップと、
ｂ．ｉ．末梢ＮＫ細胞数、および
ｉｉ．末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現レベル
からなる群から選択される前記試料中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを測定するステップと、
ｃ．前記試料中の前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを所定のカットオフレベルと比較するステップと、
を含み、ベースライン末梢ＮＫ細胞数が、少なくとも５０細胞／μｌ、少なくとも６０細胞／μｌ、少なくとも７０細胞／μｌ、少なくとも８０細胞／μｌ、少なくとも９０細胞／μｌまたは少なくとも１００細胞／μｌであり、かつ末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルが少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）であり、また抗ＣＤ１９抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）を含むＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）を含むＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）を含むＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）を含むＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）を含むＬＣＤＲ２領域、および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）を含むＬＣＤＲ３領域を含む、方法。

一態様は、抗ＣＤ１９抗体を用いる治療に応答性である慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する被験者を同定する方法において、
ａ．前記抗ＣＤ１９抗体を用いる治療前に前記被験者から得られる血液試料を準備するステップと、
ｂ．ｉ．末梢ＮＫ細胞数、および
ｉｉ．末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現レベル
からなる群から選択される前記試料中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを測定するステップと、
ｃ．前記試料中の前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを所定のカットオフレベルと比較するステップと、
を含み、ベースライン末梢ＮＫ細胞数が少なくとも１００細胞／μｌであり、または末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルが少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）であり、また抗ＣＤ１９抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）を含むＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）を含むＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）を含むＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）を含むＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）を含むＬＣＤＲ２領域、および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）を含むＬＣＤＲ３領域を含む、方法。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフは、
ａ．少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、および
ｂ．少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
である。

実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフレベルは、少なくとも５０細胞／μｌ、少なくとも７５細胞／μｌ、少なくとも１００細胞／μｌ、少なくとも１２５細胞／μｌ、少なくとも１５０細胞／μｌ、少なくとも１７５細胞／μｌ、少なくとも２００細胞／μｌ、少なくとも２２５細胞／μｌ、または少なくとも２５０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数である。実施形態では、前記バイオマーカーの所定のカットオフレベルは、少なくとも４５，０００ＡＢＣ、少なくとも６０，０００ＡＢＣ、少なくとも７５，０００ＡＢＣ、または少なくとも９０，０００ＡＢＣの末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルである。

一態様は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する患者を抗ＣＤ１９抗体を用いて治療する方法において、
ａ．患者におけるベースライン末梢ＮＫ細胞数、または患者の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルを得るステップと、
ｂ．抗ＣＤ１９抗体を、少なくとも５０細胞／μｌ、少なくとも６０細胞／μｌ、少なくとも７０細胞／μｌ、少なくとも８０細胞／μｌ、少なくとも９０細胞／μｌもしくは少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数または少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルを有する患者に有効量で投与するステップと、
を含む、方法。

一態様は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する患者を、抗ＣＤ１９抗体を用いて治療する方法において、
ａ．患者におけるベースライン末梢ＮＫ細胞数、または患者の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルを得るステップと、
ｂ．抗ＣＤ１９抗体を、少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数または少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルを有する患者に有効量で投与するステップと、
を含む、方法。

実施形態では、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する患者を抗ＣＤ１９抗体で治療する方法は、
ａ．患者におけるベースライン末梢ＮＫ細胞数を得るステップと、
ｂ．抗ＣＤ１９抗体を、少なくとも５０細胞／μｌ、少なくとも６０細胞／μｌ、少なくとも７０細胞／μｌ、少なくとも８０細胞／μｌ、少なくとも９０細胞／μｌもしくは少なくとも１００細胞／μｌのＮＫ細胞数を有する患者に有効量で投与するステップと、
を含む。

実施形態では、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する患者を抗ＣＤ１９抗体で治療する方法は、
ａ．患者におけるベースライン末梢ＮＫ細胞数を得るステップと、
ｂ．抗ＣＤ１９抗体を、少なくとも５０細胞／μｌ、少なくとも６０細胞／μｌ、少なくとも７０細胞／μｌ、少なくとも８０細胞／μｌ、少なくとも９０細胞／μｌもしくは少なくとも１００細胞／μｌのＮＫ細胞数を有する患者に有効量で投与するステップと、
を含む。

実施形態では、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する患者を抗ＣＤ１９抗体で治療する方法は、
ａ．患者におけるベースライン末梢ＮＫ細胞数を得るステップと、
ｂ．抗ＣＤ１９抗体を、少なくとも１００細胞／μｌのＮＫ細胞数を有する患者に有効量で投与するステップと、
を含む。

実施形態では、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する患者を抗ＣＤ１９抗体で治療する方法は、
ａ．患者の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルを得るステップと、
ｂ．抗ＣＤ１９抗体を、少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）のＮＫ細胞上のＣＤ１６レベルを有する患者に有効量で投与するステップと、
を含む。

実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも５０細胞／μｌ、少なくとも６０細胞／μｌ、少なくとも７０細胞／μｌ、少なくとも８０細胞／μｌ、少なくとも９０細胞／μｌもしくは少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、および少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルの双方を有する患者に投与される。

実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、および少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルの双方を有する患者に投与される。

実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも５０細胞／μｌ、少なくとも７５細胞／μｌ、少なくとも１００細胞／μｌ、少なくとも１２５細胞／μｌ、少なくとも１５０細胞／μｌ、少なくとも１７５細胞／μｌ、少なくとも２００細胞／μｌ、少なくとも２２５細胞／μｌ、または少なくとも２５０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数を有する患者に投与される。実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも４５，０００ＡＢＣ、少なくとも６０，０００ＡＢＣ、少なくとも７５，０００ＡＢＣ、または少なくとも９０，０００ＡＢＣの末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルを有する患者に投与される。

一態様は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する患者を、抗ＣＤ１９抗体を用いて治療する方法において、
ａ．前記抗ＣＤ１９抗体を用いる治療前に前記被験者から得られる試料を準備するステップと、
ｂ．ｉ．末梢ＮＫ細胞数、および
ｉｉ．末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現レベル
からなる群から選択される前記試料中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを測定するステップと、
ｃ．前記試料中の前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを所定のカットオフレベルと比較するステップと、
ｄ．抗ＣＤ１９抗体を、少なくとも１００細胞／μｌの末梢ＮＫ細胞数、または少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現レベルを有する患者に有効量で投与するステップと、
を含む、方法である。

一態様は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する患者を治療する方法において、
ａ．患者のベースライン末梢ＮＫ細胞数が少なくとも１００細胞／μｌであるか、または
ｂ．末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルが少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）である場合、抗ＣＤ１９抗体を患者に有効量で投与するステップを含む、方法である。

一態様は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する患者を治療する方法において、
ａ．患者の末梢ＮＫ細胞数を得るステップと、
ｂ．抗ＣＤ１９抗体を少なくとも１００細胞／μｌの末梢ＮＫ細胞数を有する患者に有効量で投与するステップと、
を含む、方法である。

一態様は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）または小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する患者を治療する方法において、
ａ．患者の末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現レベルを得るステップと、
ｂ．抗ＣＤ１９抗体を、少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現レベルを有する患者に有効量で投与するステップと、
を含む、方法である。

実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数、および少なくとも６０，０００（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルの双方を有する患者に投与される。実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも５０細胞／μｌ、少なくとも７５細胞／μｌ、少なくとも１００細胞／μｌ、少なくとも１２５細胞／μｌ、少なくとも１５０細胞／μｌ、少なくとも１７５細胞／μｌ、少なくとも２００細胞／μｌ、少なくとも２２５細胞／μｌ、または少なくとも２５０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数を有する患者に投与される。実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、少なくとも４５，０００ＡＢＣ、少なくとも６０，０００ＡＢＣ、少なくとも７５，０００ＡＢＣ、または少なくとも９０，０００ＡＢＣの末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルを有する患者に投与される。

実施形態では、ベースライン末梢ＮＫ細胞数または末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６レベル（ＡＢＣ）は、患者から採取される血液試料から得られる。実施形態では、末梢ＮＫ細胞数および／またはＣＤ１６発現レベルは、抗ＣＤ１９抗体の投与前に測定される。

実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）を含むＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）を含むＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）を含むＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）を含むＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）を含むＬＣＤＲ２領域、および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）を含むＬＣＤＲ３領域を含む。

実施形態では、ベースライン末梢ＮＫ細胞数または末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベルは、患者から採取される血液試料から得られる。

一実施形態では、患者は、非ホジキンリンパ腫を有する。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯、びまん性大細胞型Ｂ細胞、バーキット、およびマントル細胞からなる群から選択される。一実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫である。一実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、無痛性非ホジキンリンパ腫である。一実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、小リンパ球性リンパ腫である。一実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、粘膜関連リンパ組織である。一実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、辺縁帯リンパ腫である。一実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。一実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、バーキットリンパ腫である。一実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、マントル細胞リンパ腫である。一実施形態では、患者は、慢性リンパ性白血病を有する。一実施形態では、患者は、急性リンパ芽球性白血病を有する。一実施形態では、患者は、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を有する。

実施形態では、この治療は、疾患制御率（ＤＣＲ）および進行のない生存の持続期間延長からなる群から選択される治療効果をもたらす。

実施形態では、この治療は、ナイトロジェンマスタードの有効量での投与をさらに含む。一実施形態では、そのナイトロジェンマスタードは、ベンダムスチンである。実施形態では、治療は、プリン類似体の有効量での投与をさらに含む。実施形態では、プリン類似体は、フルダラビンである。実施形態では、治療は、ブルトンのチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤の有効量での投与をさらに含む。実施形態では、ブルトンのチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤は、イブルチニブである。実施形態では、治療は、ホスホイノシチド３－キナーゼ阻害剤の有効量での投与をさらに含む。一実施形態では、ホスホイノシチド３－キナーゼ阻害剤は、イデラリシブである。実施形態では、治療は、サリドマイド類似体の有効量での投与をさらに含む。一実施形態では、サリドマイド類似体は、レナリドミドである。実施形態では、治療は、ＢＣＬ－２阻害剤の有効量での投与をさらに含む。一実施形態では、ＢＣＬ－２阻害剤は、ベネトクラクスである。

例示された抗ＣＤ１９抗体および他の抗ＣＤ１９抗体がＣＤ１９に結合することから、同様の結果が他の抗ＣＤ１９抗体の場合に認められ得ると考えられる。他の抗ＣＤ１９抗体は、米国特許出願第１２／３７７，２５１号明細書（Ｘｅｎｃｏｒ）、国際公開第２００５０１２４９３号パンフレット、国際公開第２０１００５３７１６号パンフレット（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；国際公開第２００７００２２２３号パンフレット（Ｍｅｄａｒｅｘ）；国際公開第２００８０２２１５２号パンフレット（Ｘｅｎｃｏｒ）；国際公開第２００８０３１０５６号パンフレット（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；国際公開第２００７／０７６９５０号パンフレット（Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ ＧｍｂＨ）；国際公開第２００９／０５２４３１号パンフレット（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；および国際公開第２０１００９５０３１号パンフレット（Ｇｌｅｎｍａｒｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（これらのすべてはそれら全体が参照により援用される）に記載されている。

実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）を含むＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）を含むＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）を含むＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）を含むＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）を含むＬＣＤＲ２領域、および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）を含むＬＣＤＲ３領域を含む抗体と交差競合する抗体を含む。

実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）を含むＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）を含むＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）を含むＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）を含むＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）を含むＬＣＤＲ２領域、および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）を含むＬＣＤＲ３領域を含む抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む。

実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域、および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む。

実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列

の可変重鎖および配列

の可変軽鎖を含む。

一実施形態では前記抗体は、配列

の重鎖定常ドメインを含む。

一実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列

の軽鎖定常ドメインを含む。

一実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列

を有する重鎖を含む。

一実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列

を有する軽鎖を含む。

実施形態は、医薬組成物を含む。実施形態では、組成物は、許容できる担体を含む。実施形態では、組成物は、有効量で投与される。

実施例１：Ｔ細胞およびＮＫ細胞計数
ＭＯＲ００２０８Ｃ２０１臨床試験の範囲には、幾つかの探索的バイオマーカーの評価が含まれた。このイニシアチブの一部として、ベースライン末梢ＴおよびＮＫ細胞計数を臨床現場で実施した。

Ｔ細胞は、細胞性免疫における中心的役割を担うリンパ球の一種（白血球のサブタイプ）である。それは、細胞表面上でのＴ細胞受容体の存在により、他のリンパ球、例えばＢ細胞およびＮＫ細胞と区別され得る。

ナチュラルキラー細胞すなわちＮＫ細胞は、自然免疫系にとって必須の細胞傷害性リンパ球の一種である。ＮＫ細胞は、ウイルス感染細胞に対して迅速な応答をもたらし、感染後約３日目に作用し、腫瘍形成に応答する。典型的には、免疫細胞は、感染細胞表面上に提示される主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）を検出し、サイトカイン放出を誘導し、溶解またはアポトーシスを引き起こす。しかし、ＮＫ細胞は、抗体およびＭＨＣの不在下でストレス細胞を認識する能力を有することから独特であり、はるかにより迅速な免疫反応を可能にする。

材料および方法
ＴｒｉＴｅｓｔ ＣＤ３ ＦＩＴＣ／ＣＤ１６＋ＣＤ５６ ＰＥ／ＣＤ４５ ＰｅｒＣＰ（ＴｒｕＣＯＵＮＴチューブを備える）、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ：３４０４０３（ＵＳ）；３４２４４２（Ｅｕｒｏｐｅ）。２０μＬ、５０μＬおよび４５０μＬを送達可能なピペッターおよびピペットチップ、Ｇｉｌｓｏｎ Ｉｎｃ．ＦＡＣＳ Ｌｙｓｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ：３４９２０２。

機器：フローサイトメーター、ボルテックス
フローサイトメトリーの背景：
全血を、白血球表面抗原に特異的に結合する蛍光色素標識抗体（ＴｒｉＴＥＳＴ試薬）で染色する。細胞は、レーザービームを通過し、レーザー光を散乱させる。染色された細胞は蛍光を発する。機器によって検出されるこれらの散乱および蛍光シグナルは、細胞の大きさ、内部の複雑性、および相対蛍光強度についての情報を提供する。ＴｒｉＴＥＳＴ試薬では、ゲート内での非溶解または有核赤血球の汚染を低減するための、ＮＫおよびＴ細胞リンパ球集団の直接的な蛍光ゲーティングを可能にする蛍光トリガーが用いられる。

染色
各患者試料においては、ＴｒｕＣＯＵＮＴチューブに試料同定番号をラベルした。ＴｒｉＴＥＳＴ ＣＤ３／ＣＤ１６＋ＣＤ５６／ＣＤ４５試薬２０μＬをチューブの底にピペッティングした。十分に混合した抗凝固剤処置全血５０μＬをチューブの底にピペッティングした。室温（２０～２５℃）で貯蔵した抗凝固剤処置血液（ＥＤＴＡ）は、採取の２４時間以内に染色し、染色の６時間以内に分析する（室温で維持し、光から保護する）必要がある。チューブを緩やかにボルテックスし、混合した。チューブを、室温（２０～２５℃）、暗所で１５分間インキュベートした。１×ＦＡＣＳ溶解溶液４５０μＬをチューブに添加した。再びチューブを、室温（２０～２５℃）、暗所で１５分間ボルテックスおよびインキュベートした。

ＴｒｕＣＯＵＮＴチューブを用いて、既知の体積の試料をＴｒｕＣＯＵＮＴチューブ内で直接染色する。チューブ内の凍結乾燥ペレットを溶かし、既知の数の蛍光ビーズを遊離させる。分析の間、試料中の陽性細胞の絶対数（細胞／μＬ）は、細胞事象をビーズ事象と比較することにより判定することができる。

フローサイトメトリー
細胞は、フローサイトメーターで流す前に（低速で）徹底的にボルテックスし、凝集を低減した。

データ分析
ＣＤ４５対ＳＳＣドットプロットを目視検査した。リンパ球は、低い～中程度のＳＳＣを伴う明るい緻密な細胞集団のように見える。単球（Ｍ）および顆粒球（Ｇ）は、異なる集団のように見える。単球およびリンパ球の細胞集団が明確な分離を示した時、分析を完了した。

最初にリンパ球をＣＤ４５陽性の低いＳＳＣの細胞集団としてゲーティングした。ＣＤ１６／ＣＤ５６対ＣＤ３を前選択した。Ｔ細胞（Ｔ）は、緻密な明るいＣＤ３陽性クラスターのように見えるはずであった。ＮＫ細胞（ＮＫ）は、緻密な明るいＣＤ１６／ＣＤ５６陽性クラスターのように見えるはずであった。ゲーティングが完了し、ＴおよびＮＫ細胞を計数した。

ビーズ事象の計数を、ＣＤ１６／ＣＤ５６対ＣＤ３プロットを前選択ゲーティングを全くすることなく用いて行った。ビーズは、ＰＥ／ＦＩＴＣ二重陽性クラスターのように見えるはずであった。

絶対数を計算する
試料中のＴ細胞またはＮＫ細胞の絶対数（細胞／μＬ血液）は、細胞事象をビーズ事象と比較することによって判定した。ＭｕｌｔｉＳＥＴソフトウェアまたはマニュアル（ＣｅｌｌＱｕｅｓｔまたは他のソフトウェアを用いる）のいずれかによるデータ分析を行った。マニュアル計数においては、陽性細胞の得られた事象の数（＃）を得られたビーズ事象の数（＃）で除し、次に（５０μＬの全血試料体積で除した総ＴｒｕＣＯＵＮＴビーズ数（ロット依存性））を掛けた。結果は、絶対細胞数／μＬである。
方程式：

例：

実施例２：ＮＫ細胞に対するＣＤ１６の定量化
ＭＯＲ００２０８Ｃ２０１臨床試験の一部として、末梢ＮＫ細胞に対するＣＤ１６（探索性バイオマーカー）は、中心的にＩＣＯＮ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）により定量化された。

材料および方法
抗体：ＣＤ４５ ＡｍＣｙａｎ（クローン２Ｄ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号３３９１９２）；ＣＤ３ ＦＩＴＣ（クローンＵＣＨＴ１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号３００４０６）；マウスＩｇＧ ＦＩＴＣ（クローンＭＯＰＣ－２１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４００１１０）；ＣＤ１６ ＰＥ（クローン３Ｇ８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０２００８）；ＭＯＲ００２０８；マウスＩｇＧ ＰＥ（クローンＭＯＰＣ－２１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４００１１４）；ＣＤ５６ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（クローンＨＣＤ５６、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１８３２２）；およびマウスＩｇＧ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（クローンＭＯＰＣ－２１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４００１５０）。

材料：ＰｈａｒｍａＴｈｅｒｍ製インシュレーテッドシッパー（ｉｎｓｕｌａｔｅｄ ｓｈｉｐｐｅｒｓ）（Ｉｎｔｅｌｓｉｕｓ、カタログ番号ＰＨＴ０１４）；ＢＤ Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ Ｃｅｌｌ Ｔｕｂｅ－ヘパリンナトリウム（１６×１２５ｍｍ／８ｍＬ）（ＢＤ、カタログ番号３６２７５３）；ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ（商標）１２×７５ｍｍの丸底チューブ（ＢＤ、カタログ番号３５２０５２）；ＣＳ＆Ｔビーズ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号６４２２１２）；ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、熱不活化（Ｓｉｇｍａ Ｆ４１３５、または等価物）；Ｃａ^＋＋およびＭｇ^＋＋を有しないダルベッコＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１４１９０、または等価物）；ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ、セルストレーナー、１００μｍ、黄色（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号３５２３６０）；ＦＡＣＳ緩衝液、１×ＤＰＢＳ中の熱不活化ＦＢＳの３％；脱イオン水、実験室ストック；粉砕（濡れた）氷；アイスバケット；アルミニウム箔；コニカルチューブ、５０ｍＬ；コニカルチューブ、１５ｍＬ；滅菌したフィルターピペットチップ；ＢＤ Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ溶解緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５５８９９）；ＶｉＶｉＤ ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉｏｌｅｔ死細胞染色キット、４０５ｎｍの励起用（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ｌ３４９５５）；ＡｒＣアミン反応性ビーズ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ａ１０３４６）；ＢＤ ＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥビーズ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号３４０４９５）；および５２μｍのナイロンメッシュ（Ｍｉａｍｉ Ａｑｕａ Ｃｕｌｔｕｒｅ、カタログでは、５２μｍのナイロン、材料中に織り込まれた３２％の空き領域）。

機器：遠心機（冷却能）；ラブクエーク（Ｌａｂ ｑｕａｋｅ）（チューブロッカー）；ボルテックスミキサー；層流フード；インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ_２で設定）；Ａｄｖｉａ（セルカウンター）；ＢＤ ＦＡＣＳＣＡＮＴＯＩＩフローサイトメーター；Ｄｅｓｉ－Ｖａｃ（商標）容器、１．５リットル（ＶＷＲ、カタログ番号６２３４４－９３０）；Ｈｕｍｉｄｉｔｙ Ｓｐｏｎｇｅ（商標）Ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ（ＶＷＲ、カタログ番号６１１６１－３１９）；およびＴｒａｃｅａｂｌｅ Ｈｕｍｉｄｉｔｙ－Ｏｎ－Ａ－Ｃａｒｄ（ＶＷＲ、カタログ番号１５５５１－０１２）。

ＰＢＭＣの調製および標識手順
患者の末梢血をＣＰＴ管内に収集し、インシュレーテッドシッパーで臨床現場から中央研究所に一晩で輸送した。ＣＰＴ管を、ブレーキがオンの状態で、室温、１８００×ｇで２５分間遠心分離した。遠心分離後、ＣＰＴ管を直ぐに反転させ、ラブクエーク上に１０分間置いて、ＰＢＭＣ層を自家血漿に再懸濁し、形成された細胞凝集体の大部分を分解した。滅菌条件下で、均質化したＰＢＭＣ／血漿懸濁液を、滅菌した５０ｍＬのコニカルチューブの最上部に静止している１００μｍのセルストレーナーの中央にゆっくりとデカントした。等容量の１×ＤＰＢＳを、１５ｍＬのコニカルチューブ内のＰＢＭＣ／血漿懸濁液（約４ｍＬ）に添加した。管を４℃、３００×ｇで１０分間遠心分離し、上清を除去した。管をボルテックスし、細胞ペレットを再懸濁した。細胞ペレットを、ＤＢＰＳで洗浄し、遠心分離し、上清を除去し、ボルテックスにより再懸濁した。洗浄したＰＢＭＣ懸濁液をＶｉＶｉＤ保存液１μｍを含有するエッペンドルフチューブに添加し；氷上で１５分間インキュベートし、（アルミニウム箔でカバーした）暗所で維持した。染色したＶｉＶｉＤ ＰＢＭＣを新しくラベルしたコニカルチューブに移し、次に氷冷ＦＡＣＳ緩衝液を添加した。細胞を再懸濁のために再び遠心分離およびボルテックスした。各試料に対して、ポリスチレン製ファルコンチューブをラベルした（表１）。抗体またはアイソタイプ対照抗体を適切な管に添加した。ＶｉＶｉＤ染色ＰＢＭＣの一定分量を各管に添加した（表１）。管をボルテックスおよびインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を添加し、細胞を再懸濁のために再び遠心分離およびボルテックスした。ＢＤ Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ溶解緩衝液を添加し、細胞をボルテックスし、遠心分離し、吸引し、上清を除去し、再びボルテックスし、再懸濁した。ＦＡＣＳ緩衝液を再び添加し、細胞を再懸濁のために再び遠心分離およびボルテックスした。次に、試料をＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩサイトメーター上に得て、ＡＢＣ（細胞あたりの結合抗体）を、Ｉｙｅｒ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ６９ ｏｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｕｓｉｎｇ Ｒ－ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ ｌａｂｅｌｅｄ ｂｅａｄｓ，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，１９９６；＃ＡＣ７８（Ｓｕｐｐｌ．８）：１１３およびＩｙｅｒ Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，ＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥ：Ａ Ｎｅｗ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｆｏｒ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ．１９９７．Ｗｈｉｔｅ Ｐａｐｅｒに記載のような標準化されたＭＦＩから推定した。

実施例３：ＮＨＬ試験
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を治療するためのＦｃ最適化抗ＣＤ１９抗体（ＭＯＲ００２０８）の試験、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子：ＮＣＴ０１６８５００８は、既に募集を終了している。

組み入れ基準は以下の通りであった。
１．男性または女性患者≧１８歳。
２．以下のＢ細胞リンパ腫：ａ．ＦＬ、ｂ．ＭＣＬ、ｃ．ＤＬＢＣＬ、ｄ．他の無痛性ＮＨＬ（例えば、ＭＺＬ／ＭＡＬＴ）の、ＲＥＡＬ／ＷＨＯ分類に従う組織学的に確認された診断。

３．患者のＮＨＬは、少なくとも１回の先行的リツキシマブを含む投与計画後、進行している必要がある。
４．磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンにより測定可能な疾患の１つの部位は少なくとも１．５×１．５ｃｍの寸法がある少なくとも１つの病変と定義されるが、例外として、ＭＣＬのみを有する患者については、測定不能な疾患であるが評価可能な部位（骨髄、脾臓、末梢血、胃腸管）を有する患者は登録可能である。
５．以前に自家幹細胞移植を受けている患者は、試験薬投与前、移植後少なくとも４週間である必要があり、完全な血液学的回復を示している必要がある。
６．先行的なモノクローナル抗体療法（リツキシマブを除く）の中断または試験薬投与前少なくとも６０日間の放射免疫療法の実施。
７．スクリーニング訪問前少なくとも１４日間のリツキシマブの中止と、リツキシマブ治療後、応答を有しないかまたは疾患進行を有することのいずれかが確認されること。
８．ＤＬＢＣＬを有する患者が、ベースライン（Ｃｈｅｓｏｎ応答基準）時、［１８Ｆ］フルオロデオキシグルコース陽電子放射断層撮影（ＦＤＧ－ＰＥＴ）スキャン陽性であったこと。
９．３か月を超える平均余命。
１０．３より小さいＥＣＯＧ活動状態。
１１．スクリーニング時の実験室基準：ａ）絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１．０（１０００／ｍｍ３）ｂ）第１試験薬投与から１０日以内の先行輸血なしでの血小板数≧７５×１０９／Ｌ；ｃ）ヘモグロビン≧８．０ｇ／ｄＬ（輸血されていてもよい）；ｄ）血清クレアチニン＜２．０×正常上限（ＵＬＮ）；ｅ）総ビリルビン≦２．０×ＵＬＮ；ｆ）アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）≦２．５×ＵＬＮ。
１２．出産可能性を有する女性の場合、二重障壁避妊、経口避妊薬＋障壁避妊薬の登録および使用、または臨床的に実証された全子宮摘出術および／もしくは卵巣摘出術、卵管結紮を受けていることの確認に先立ち、陰性妊娠試験で確認される必要がある。
１３．男性の場合、患者が出産可能性を有する女性と性的に活発である場合、試験期間および最終投与後３か月間、有効な避妊の障壁法が用いられる必要がある。
１４．すべての試験に関連する手順、投薬使用、および評価に従うことができる。
１５．書面のインフォームドコンセントを理解および提出し、試験プロトコルに従うことができる。

除外基準は以下の通りであった。
１．細胞傷害性化学療法、免疫療法、放射線療法もしくは他のリンパ腫に特異的な治療による前治療がスクリーニング訪問前１４日以内であるか、または患者が先行的なリンパ腫に特異的な治療の副作用から回復していないこと
２．スクリーニング訪問前２８日以内での全身治験薬を用いた治療。
３．抗ＣＤ１９抗体または断片を用いた前治療。
４．以前の同種幹細胞移植。
５．試験製剤中に含有される賦形剤に対しての既知のまたは疑われる過敏症。
６．臨床的に有意な心血管疾患または心不全、心筋症、既存の臨床的に有意な不整脈、登録３か月以内の急性心筋梗塞、登録３か月以内の狭心症。
７．活動性Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎の臨床的または実験室的証拠。
８．ＨＩＶ感染の病歴。
９．試験薬投与４週以内の活性非経口抗生物質治療を必要とする任意の活動性全身感染（ウイルス、真菌、または細菌）。
１０．処方されたコルチコステロイド（１０ｍｇ以下のプレドニゾン当量）以外の免疫抑制剤を用いた現行治療。
１１．第１試験薬投与前４週以内の主要な手術または放射線治療。
１２．治験責任医師の意見における、試験治療を妨げることになる全身性疾患（心血管、腎臓、肝臓など）。
１３．脳転移を含む、中枢神経系（ＣＮＳ）、髄膜、または硬膜外疾患の病歴または臨床的証拠。
１４．過去５年以内での別の原発性悪性腫瘍に対する積極的治療／化学療法。
１５．女性における妊娠または母乳栄養および許容できる受胎調節方法を用いない出産可能性のある女性。
１６．服薬内容に対する不履行の履歴または潜在的に信頼できずに非協同的と考えられる患者。

次のようにＭＯＲ００２０８を用いて患者を治療した。患者は、ＭＯＲ００２０８を１、８、１５、および２２日目に１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与するような２回の２８日サイクルで治療した。２回サイクルの終了時、安定疾患以上を有する患者を、最初の２サイクルと同じ用量およびスケジュールを適用する３回目の２８日サイクルで治療した。３回目サイクルの終了時、部分寛解以上を有する患者は維持段階に移行した。維持段階では、ＭＯＲ００２０８を、１４または２８日毎に１２ｍｇ／ｋｇの用量で疾患進行まで投与した。

試験終了時、患者の特性は次のようであった。

他のｉＮＨＬは、さらに特定されていない無痛性の侵襲性でないＮＨＬ型の異質群、例えば、周辺細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、および粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫を意味する。

主要な一次および二次エンドポイントは、以下の通りである。
・一次：奏効率（ＯＲＲ）＝ＣＲ＋ＰＲ
・二次：
○疾患制御率（ＤＣＲ）＝ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ
〇進行のない生存（ＰＦＳ）

この試験における応答基準は、表４に定義される通りである。それらのすべては、国際作業グループ応答基準（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｃｒｉｔｅｒｉａ）（２００７）に基づく。

ＳＤを有する患者の大部分が著明な標的病変の減少を有したが、試験設計に応じてサイクル３以降は治療されなかったことから、ＤＣＲ（ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ）は、この試験における患者の特徴およびバイオマーカーの分析として最も関連性のある有効性エンドポイントと考えられた。したがって、ＳＤを有する患者を分析に含めた。

抗ＣＤ１９抗体を用いて治療した患者の特徴と観察されたＤＣＲとの間に相関が存在するか否かを判定するため、患者の少なくとも以下の特徴：ａ）年齢、ｂ）性別、ｃ）患者が直近６か月以内にリツキシマブの投与を受けていたか否か、ｄ）患者がリツキシマブ難治性であるか否か、ｅ）患者がＦｃγＲＩＩＩａ高親和性または低親和性対立遺伝子を有するか否か、ｆ）患者がＦｃγＲＩＩａ高親和性または低親和性対立遺伝子を有するか否か、ｇ）患者が１２か月を超える前治療に対する応答の持続期間を有するか否か、ｈ）ベースライン末梢Ｔ細胞数（細胞／μｌ）、ｉ）ベースライン末梢ＮＫ細胞数（細胞／μｌ）およびｊ）末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現（細胞あたりの結合抗体－ＡＢＣ）を評価した。

上の実施例１および実施例２を用いて、ベースライン末梢ＮＫ細胞数、Ｔ細胞数および末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現を評価した。データを表２に示す。

受信者動作特性（ＲＯＣ）分析を用いて、予測性、特異性および感受性を分析し、ＮＫ細胞数、Ｔ細胞数および末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現（ＡＢＣ）の有望なバイオマーカーにおけるカットオフを決定した。ＲＯＣプロットは、連続的または別々の順位出力を伴う二項分類法の性能を示す。出力閾値がすべての考えられる値の範囲にわたって変動することから、それは感受性（正確に分類された陽性所見の割合）および特異性（正確に分類された陰性所見の割合）を示す。Ｓｗｅｔｓ ＪＡ：Ｔｈｅ Ｒｅｌａｔｉｖｅ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｙ．Ｓｃｉｅｎｃｅ １９７３，１８２：９９０－１０００、およびＰｅｐｅ ＭＳ：Ｔｈｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．Ｏｘｆｏｒｄ：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；２００３を参照のこと。ＲＯＣと関連して、曲線下面積（ＡＵＣ）は、分類子の性能の尺度であり、方法の比較に適用されることが多い。より高いＡＵＣは、より優れた分類を意味する。末梢ＮＫ／Ｔ細胞数におけるＡＵＣおよびＮＫ細胞上のＣＤ１６発現におけるＡＵＣは各々、０．６６、０．５３および０．６１である（図３、４および５）。

一般に、カットオフの決定は、各方法が指向する目的に依存する。最大正確性、最大診断オッズ比、最小誤差率、最大感受性および／または最大特異性などの様々な基準であれば、カットオフの異なる決定を導くことになる。さらに、かかる基準の２つ以上、例えば感受性と特異性との間の平衡についても、カットオフの明確な決定を導くことになる。

したがって、正確性、感受性＋特異性、的中率、診断尤度比または有病率を最大化する方法を含む、最適なカットオフを選択するための幾つかの方法または基準が存在する。ＣＤ１６発現－ＲＯＣ曲線の非対称性（図４を参照）により、方法の大部分が６０，０００ＡＢＣのカットオフ（ＲＯＣ曲線と二等分線との間の最大距離を伴う点）をもたらす一方、ＮＫ細胞数ＲＯＣ曲線の対称性（図３を参照）は、異なる方法を適用するとき、最良のカットオフに対して異なる値が得られ得る理由を説明する。この特定の試験では、両方のバイオマーカーにおいて、感受性にさらなる重みを割り当て、ひいては１００のＮＫ細胞／μｌおよび６０，０００ＡＢＣのＣＤ１６発現レベルの各々をカットオフとして選択することで、サブグループ内のＤＣＲおよびＰＦＳを分析した。末梢Ｔ細胞数については、ＡＵＣは０．５３であり、ＲＯＣ曲線は特異性および感受性の任意の値で二等分線に近似することから、５００細胞／μｌ以上に異なるカットオフを選択しても、ＤＣＲおよびＰＦＳサブグループ分析の陰性結果に対する影響を有しなかった。

カットオフの決定は、感受性または特異性のいずれかに有利に平衡化され得る。最適なカットオフの同定のため、さらに多くの重みを感受性に割り当てる場合、その方法は異なるものとなり、ＮＫ細胞数におけるより低いカットオフについて検討する。かかる場合、少なくとも５０ＮＫ細胞／μｌのカットオフを決定する。あるいは、少なくとも６０ＮＫ細胞／μｌ、少なくとも７０ＮＫ細胞／μｌ、少なくとも８０ＮＫ細胞／μｌ、少なくとも９０ＮＫ細胞／μｌまたは少なくとも１００ＮＫ細胞／μｌのカットオフを決定する。

本開示方法の特異性を最大化するため、ＮＫ細胞数におけるカットオフは、増加させ、少なくとも１００ＮＫ細胞／μｌから最大で少なくとも１５０ＮＫ細胞／μｌの間で決定する。したがって、特異性を最大化するため、少なくとも１００ＮＫ細胞／μｌ、少なくとも１１０ＮＫ細胞／μｌ、少なくとも１２０ＮＫ細胞／μｌ、少なくとも１３０ＮＫ細胞／μｌ、少なくとも１４０ＮＫ細胞／μｌまたは少なくとも１５０ＮＫ細胞／μｌのカットオフを選択する。

この特定の試験において決定したカットオフ値（１００ＮＫ細胞／μｌおよび６０，０００ＡＢＣのＣＤ１６発現レベル）を、以下の統計学的分析に用いた。

フォレストプロットを用いて、すべての患者の特徴およびバイオマーカーを分析し、個別の特徴とＤＣＲとの相関を判定した。結果を図７に示す。ＤＬＢＣＬおよびｉＮＨＬ患者における異なる患者の特徴およびそれらのＤＣＲとの相関のフォレストプロット分析に基づき、以下の特徴は統計学的有意差を示した：１）少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数および少なくとも６０，０００ＡＢＣの末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６のベースライン発現（χ^２未調整Ｐ値＝０．０２９／０．００３）（図７）。

ＣＤ１６発現およびＮＫ細胞数が、互いに影響を及ぼさない非依存的特徴を有することを確認するため、パラメトリックおよびノンパラメトリック相関分析を行った。ＣＤ１６発現およびＮＫ細胞数に関するデータは、患者５１名について利用可能であった。ピアソンのｒは、両側Ｐ値＝０．９で０，０１９であり、スピアマンのｒは、両側Ｐ値＝０．８で０，０３６であった。結果を図６に図示する。結論として、決定された閾値でのＣＤ１６発現およびＮＫ細胞数は相関しないことから、それらは患者がＭＯＲ００２０８治療から利益を得る確率の完全に独立した予測変数と考えられる。

以下の特徴：ａ）年齢、ｂ）性別、ｃ）患者が直近６か月以内にリツキシマブの投与を受けていたか否か、ｄ）患者がリツキシマブ難治性であるか否か、ｅ）患者がＦｃγＲＩＩＩａ高親和性または低親和性対立遺伝子を有するか否か、ｆ）患者がＦｃγＲＩＩａ高親和性または低親和性対立遺伝子を有するか否か、ｇ）患者が１２か月を超える治療に対する応答の持続期間を有するか否か、またはｈ）ベースライン末梢Ｔ細胞数は、ＤＣＲを予測することが見出されなかった。図７を参照のこと。

１）ベースライン末梢ＮＫ細胞数および２）末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現の双方は、ＭＯＲ００２０８治療との患者応答に対して明確な相関を示した。具体的には、少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数を有する患者は、より高い疾患制御率（ＤＣＲ）と相関した。ＤＣＲは、患者が完全寛解（ＣＲ）＋部分寛解（ＰＲ）＋安定疾患（ＳＤ）を有することを含む。さらに、少なくとも６０，０００ＡＢＣの末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現を有する患者は、より高い疾患制御率（ＤＣＲ）と相関した。

進行のない生存（ＰＦＳ）は、患者が疾患状態で生活してもそれが悪化することがない、疾患の治療の間および後の時間の長さである。これは、臨床試験の追加的な重要なエンドポイントであり、患者における有効性の指標である。ＰＦＳは、以下の患者の特徴：ａ）少なくとも１００細胞／μｌ以下のベースライン末梢ＮＫ細胞数、ｂ）少なくとも６０，０００ＡＢＣ以下の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現、およびｃ）少なくとも５００細胞／μｌ以下のベースライン末梢Ｔ細胞数、の範囲内で比較した。結果を図８～１０に示す。少なくとも１００細胞／μｌを有するＮＫ細胞数を有する患者をより少ないＮＫ細胞数を有する患者と比べるときのＰＦＳの比較によると、０．１５６１のＨＲで統計学的有意差が示された（未調整ログランクＰ値＝０．０００３）。これにより、ＭＯＲ００２０８を用いて治療した、ＣＬＬ、ＮＨＬ、ＡＬＬまたはＳＬＬを有する患者の応答におけるＮＫ細胞数の予測性がさらに確認される。

説明、具体例およびデータが、例示的な実施形態を示す一方で、実例として与えられ、また本発明を限定することが意図されないことは理解されるべきである。本発明の範囲内での様々な変更および修飾は、本明細書に含まれる考察、開示内容およびデータから当業者にとって明白となることから、本発明の一部と考えられる。

Claims (17)

1. 非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を有する対象から得られた血液試料を分析する方法であって、当該方法が、
   ａ．抗ＣＤ１９抗体を用いる治療前に前記対象から得られた血液試料を準備するステップと、
   ｂ．ｉ．末梢ＮＫ細胞数、および
   ｉｉ．末梢ＮＫ細胞上のＣＤ１６発現レベル
   からなる群から選択される前記試料中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを測定するステップと、
   ｃ．前記試料中の前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを所定のカットオフレベルと比較するステップと、
   ｄ．前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが、前記所定のカットオフレベルにあるか、またはそれを超えるかを決定するステップと
   を備えることを特徴とする方法。
2. 請求項１に記載の方法において、
   前記バイオマーカーの所定のカットオフが、
   ａ．少なくとも５０細胞／μＬのベースライン末梢ＮＫ細胞数、または
   ｂ．少なくとも６０，０００の細胞あたりの結合抗体（ＡＢＣ）の末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
   であることを特徴とする方法。
3. 請求項１または２に記載の方法において、
   前記バイオマーカーの前記所定のカットオフが、
   ａ．少なくとも６０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数
   であることを特徴とする方法。
4. 請求項１～３のいずれか一項に記載の方法において、
   前記バイオマーカーの前記所定のカットオフが、
   ａ．少なくとも７０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数
   であることを特徴とする方法。
5. 請求項１～４のいずれか一項に記載の方法において、
   前記バイオマーカーの前記所定のカットオフが、
   a. 少なくとも８０細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数
   であることを特徴とする方法。
6. 請求項１～５のいずれか一項に記載の方法において、
   前記バイオマーカーの前記所定のカットオフが、
   ａ．少なくとも１００細胞／μｌのベースライン末梢ＮＫ細胞数
   であることを特徴とする方法。
7. 請求項１～６のいずれか一項に記載の方法において、
   前記バイオマーカーの前記所定のカットオフが、
   ａ．少なくとも６０，０００ＡＢＣの末梢ＮＫ細胞上のベースラインＣＤ１６発現レベル
   であることを特徴とする方法。
8. 請求項１～７のいずれか一項に記載の方法において、
   前記抗ＣＤ１９抗体が、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）を含むＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）を含むＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）を含むＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）を含むＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）を含むＬＣＤＲ２領域、および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）を含むＬＣＤＲ３領域を含むことを特徴とする方法。
9. 請求項１～８のいずれか一項に記載の方法において、
   前記抗ＣＤ１９抗体が、配列
   

   

   の可変重鎖および配列
   

   

   の可変軽鎖を含むことを特徴とする方法。
10. 請求項１～９のいずれか一項に記載の方法において、
    前記抗ＣＤ１９抗体が、配列
    

    

    を有する重鎖および配列
    

    

    を有する軽鎖を含むことを特徴とする方法。
11. 請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法において、前記非ホジキンリンパ腫が、濾胞性リンパ腫であることを特徴とする方法。
12. 請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法において、前記非ホジキンリンパ腫が、小リンパ球性リンパ腫であることを特徴とする方法。
13. 請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法において、前記非ホジキンリンパ腫が、粘膜関連リンパ組織リンパ腫であることを特徴とする方法。
14. 請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法において、前記非ホジキンリンパ腫が、辺縁帯リンパ腫であることを特徴とする方法。
15. 請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法において、前記非ホジキンリンパ腫が、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫であることを特徴とする方法。
16. 請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法において、前記非ホジキンリンパ腫が、バーキットリンパ腫であることを特徴とする方法。
17. 請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法において、前記非ホジキンリンパ腫が、マントル細胞リンパ腫であることを特徴とする方法。

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