JP7036512B2 - 巨大遺伝子の切除および挿入 - Google Patents
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Description
本願は、2013年11月19日に提出された米国仮特許出願第61/906,188号に基づく優先権を主張するものであり、あらゆる目的のために、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。
本発明は、米国国立衛生研究所の助成番号第P50HG005550号の政府助成を受けてなされた。米国政府は、本発明における一定の権利を有する。
sgRNA標的配列
ヒトゲノム中でのヒトThy1およびCD147遺伝子の特有性に基づいて、これら遺伝子の周辺の種々の位置で、計算アルゴリズムを用いてsgRNA(一本鎖ガイドRNA)配列(Mali, P. et al. Science 339, 823-826 (2013))を同定した。
Cas9およびsgRNAプラスミド構築
U6プロモーターおよびsgRNA骨格配列をMali, P. et al. Science 339, 823-826 (2013) に記載されているように合成し(IDT社)、以下のプライマーを用いてpUC19からPCR増幅された、アンピシリン耐性遺伝子およびpBR322 oriを含む最小プラスミド骨格中に、等温アセンブリを用いてクローニングした。
標的化プラスミドの構築
sgRNA部位の周辺に相同性を有するマウスThy1標的化ベクター(Outside)は、等温アセンブリを用いてクローニングした。マウスThy1のエキソン2および3を、プライマー5′TGGTGGTGGTTGTGGTACACACC3′(配列番号27)および5′AATAGGGAGGGCCGGGGTACC3′(配列番号28)を用いて、C57BL/6JゲノムDNA(Jackson Laboratories)からPCR増幅した。上流ヒトThy1ホモロジーアームは、以下のプライマーを用いて、PGP1 iPSCゲノムDNAからPCR増幅した。
TALENアセンブリ
Iterative Capped Assemblyを用いてヒトThy1遺伝子を標的化するTALEペア(16.5塩基長)をアセンブルした。L3 sgRNA部位上を標的化するTALEペアは、左側:5′T ACCAGCAGTTCACCCAT3′(配列番号85);右側:5′T CTTTGTCTCACGGGTCA3′(配列番号86)であった。R1 sgRNA部位上を標的化するTALENペアは、左側:5′T CTCCCCAACCACTTAGT3′(配列番号87);右側:5′T GTGCAGTCATTAGCCCC3′(配列番号88)であった。等温アセンブリを用いてFokIヘテロダイマーヌクレアーゼドメイン上にTALEをクローニングした。アセンブルされたTALEを、プライマー5′GGCCGCCACCATGGATTATAAGGAC3′(配列番号89)および5′GGAACCTGCCACTCGATGTG3′(配列番号90)を用いてPCR増幅した。Sharkey変異を有するFokIヘテロダイマーヌクレアーゼドメインであるKKRおよびELDは、QuikChange Lightning Site‐Directed Mutagenesis Kit(Stratagene社)を用いて、pMG10(Addgene#31238)から得た。KKR‐Sharkey FokIドメインは、以下のプライマーを用いてPCR増幅した。
iPSC培養およびトランスフェクション
Personal Genome Projectドナーの検証されたヒトiPSCであるPGP1およびPGP4は、Coriell社から入手した。製造業者の説明書に従って、細胞株をマトリゲルコートプレート(BD社)上で維持し、mTesr1(Stem Cell Technologies社)中で生育した。Accutase(Millipore社)を用いた継代の前、最中、および後に、10μMのRock阻害剤Y‐27632(Millipore社)を培養に加えた。iPSC培養物の多能性をTRA‐1/60 FACS染色(BD社)で検証した。
FACS染色
TrypLE Express(Invitrogen社)を用いてiPSCを解離し、FACSバッファー:PBS(Invitrogen社)+0.2%ウシ血清アルブミン(Sigma社)中で洗浄した。10%ウシ胎仔血清を加えたFACSバッファー中で細胞を4℃で30分間染色した。以下の抗体、すなわち、抗ヒトThy1 APC(eBio5E10)、抗マウスThy1.2 PE(30‐H12)、抗ヒトCD147 APC(8D12)、抗マウスCD147 PE(RL73)、アイソタイプコントロール マウスIgG1 κ APC(P3.6.2.8.1)、アイソタイプコントロール マウスIgG2b PE(eBMG2b)は、eBioscience社から購入した。細胞をFACSバッファー中で2回洗浄した後、生細胞染色色素であるSYTOX Blue(Invitrogen社)と共にFACSバッファー中に再懸濁した。High Throughput Sampler(HTS)を備えたBD LSRFortessaフローサイトメーターを用いてサンプルを回収し、FlowJoソフトウェア(Tree Star社)を用いて分析した。
単一細胞iPSCのFACSソーティング
FACSソーティングでは、フィーダー細胞を含む96ウェルプレート中に、1ウェルあたり1細胞となるようiPSCをソートした。前日の夜に、96ウェル平底組織培養プレートをゼラチン(Millipore社)でコーティングし、照射CF‐1マウス胎仔線維芽細胞(1プレート当たり106個のMEF;Global Stem社)と培養した。ソーティング前に、プレート中の培地を、100ng/ml bFGF(Millipore社)、SMC4阻害剤(BioVision社)、および5μg/mlフィブロネクチン(Sigma社)を含むhES細胞維持培地に交換した。
PCRジェノタイピング
ソートされたiPSCクローン由来のゲノムDNAを96ウェルプレートから精製した。KAPA HiFi HotStartポリメラーゼを用い、4セットのPCRプライマーを用いて、各クローンをジェノタイピングし(図1A~図1D参照)、0.8%アガロースゲルで泳動した。
本開示の態様は、抗生物質選択マーカーを用いた場合であっても標的遺伝子置換を制限し得る、頻度の低い相同組換え(HR)(10-3~10-7)の改善に関する。Deng, C. & Capecchi, M. R. Mol. Cell. Biol. 12, 3365-3371 (1992) 参照。本開示の態様は、効率的なゲノム改変、例えば長い遺伝子配列などの長い核酸配列の切除および置換のための、例えばジンクフィンガーヌクレアーゼ(ZFN)(Urnov, F. D., Rebar, E. J., Holmes, M. C., Zhang, H. S. & Gregory, P. D. Nat. Rev. Genet. 11, 636-646 (2010))、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ(TALEN)(Joung, J. K. & Sander, J. D. Nature Reviews Molecular Cell Biology 14, 49-55 (2012))、またはCRISPR/Cas9ヌクレアーゼ(Mali, P. et al. Science 339, 823-826 (2013))などのカスタム改変ヌクレアーゼシステムの使用を想定している。本開示の態様は、従来の方法を用いた遺伝子編集に抵抗性を示し得る細胞種の使用を想定している。
標的ベクターデザインの最適化
本開示の態様は、巨大核酸置換のための標的化ベクターデザインの最適化に関する。例示的なある態様によれば、Personal Genome Project(PGP)ドナー由来のヒトiPSCにおいて、2.7kbのヒトThy1遺伝子(hThy1)をそのマウスホモログ(mThy1)と置換した。ヒトThy1(CD90)は、ヒトiPSCの表面で発現され、インビトロでの細胞生存に必須でなく、種特異的染色抗体が利用可能であるので、本明細書に記載の方法を用いた巨大遺伝子置換の例を実証するのに好都合である。この例は単なる例示であると理解されるべきであり、本開示の範囲をヒトThy1の切除およびマウスThy1との置換に限定することを意図するものではない。
ヒトiPSCにおける標的遺伝子置換に対する相同長の影響の決定
従来の遺伝子標的化ベクターは通常、直線化プラスミドとしてトランスフェクトされる。ZFNを用いる場合、MMEJ媒介遺伝子挿入では直線状コンストラクトの方が効率的であったが、HR媒介遺伝子挿入率は環状プラスミド標的化コンストラクトの方が直線化プラスミドより高かった(Orlando, S. J. et al. Nucleic Acids Research 38, e152 (2010), Cristea, S. et al. Biotechnol. Bioeng. 110, 871-880 (2013))。線状化mThy1標的化ベクターは、環状プラスミドより遺伝子標的化がはるかに低かった(図A~B)。これは、直線化プラスミドのヌクレオフェクション効率が低いこと、または分解の増加によるものであり得る(Cristea, S. et al. Biotechnol. Bioeng. 110, 871-880 (2013))。
ヒトiPSCにおけるCas9媒介欠失の頻度とサイズとの関係の決定
全体的により大きな欠失サイズでは欠失頻度が低下するものの、腫瘍細胞株においてZFNを用いた数キロベースの欠失が達成されている(Lee, H. J., Kim, E. & Kim, J.-S. Genome Research 20, 81-89 (2010), Chen, F. et al. Nature Methods 8, 753-755 (2011))。ヒトiPSCにおけるCas9媒介欠失の頻度とサイズとの関係を明らかにするために、様々な距離で離れてhThy1を標的化する、2種類の左側sgRNAおよび10種類の右側sgRNAをデザインした(図2A)。標的化ベクターを用いなかったので、両方のhThy1アレルが破壊された細胞はhThy1-になった(図2B)。hThy1-細胞のバックグラウンドレベルを決定するため、左側sgRNAのみをヌクレオフェクトした細胞を用いた(図2B、右列)。バックグラウンドレベルを上回るホモ接合型欠失の頻度は、距離が短いほど高い傾向を示した(2.7kbの欠失で最大24%および86kbの欠失で8%)が、他のsgRNA部位は欠失頻度がはるかに低く、常にサイズに対応しているわけではなかった(図2D)。
種々のヌクレアーゼを用いた遺伝子置換および遺伝子置換ベクターの最適なデザイン
ある態様によれば、本明細書に記載の遺伝子置換ベクターのデザインは、DNA切断を引き起こすシステムに対して特有のものではないため、種々のヌクレアーゼと共に用いることができる。ZFNヌクレアーゼ、TALENヌクレアーゼ、およびCRISPRヌクレアーゼを用いて効率的な数キロベースの遺伝子置換が達成されている(図5A~図5Bおよび未掲載データ)。1つの切断部位を用いた標的遺伝子置換はさほど効率的ではなかったが、単一の切断部位の使用により、形成される潜在的遺伝子型およびオフターゲット変異が低減する。現在の技術は、dsDNA切断が変異部位または挿入部位から100bp以内に形成される必要があり、これにより潜在的に利用可能なsgRNA部位が限定される(Elliott, B., Richardson, C., Winderbaum, J., Nickoloff, J. A. & Jasin, M. Mol. Cell. Biol. 18, 93-101 (1998), Yang, L. et al. Nucleic Acids Research (2013). doi:10.1093/nar/gkt555)。ある態様によれば、遺伝子周辺またはイントロン内に位置する、より幅広いヌクレアーゼ部位を用いて、巨大遺伝子置換を行うことができる。本方法の範囲内において付加的な固有sgRNA部位が有用であり、遺伝子ファミリー内の保存されたコード配列が回避される。これにより、特定の領域についての複数のsgRNAの試験が容易になる(図2A~図2E)。本明細書に記載の方法では、隣接する最大2kbのホモロジーアームにより、遺伝子標的化効率が改善される(図7A~図7B)。
本開示に係る態様は以下のものも含む。
<1>
細胞において標的核酸を改変する方法であって、
前記標的核酸を含むDNAに相補的な1種類または複数種類のガイドRNA配列をコードする第1の外来核酸を前記細胞に導入すること、
前記DNAに結合し、且つ前記1種類または複数種類のガイドRNA配列によってガイドされる、Cas9タンパク質をコードする第2の外来核酸を前記細胞に導入すること、
前記標的核酸配列中に取り込まれる外来性核酸配列をコードする第3の外来核酸を前記細胞に導入することを含み、
前記1種類または複数種類のガイドRNA配列、前記Cas9タンパク質、および前記外来性核酸配列が発現し、
前記1種類または複数種類のガイドRNA配列および前記Cas9タンパク質が前記DNAに共局在し、前記Cas9タンパク質が2つ以上の二本鎖切断を形成して関心のある第1の核酸配列を除去し、前記外来性核酸配列が、前記標的核酸の2つの切断点の間に挿入される、
方法。
<2>
前記標的核酸配列中に取り込まれる前記外来性核酸配列は、前記遺伝子置換の周辺部位に相補的な配列で挟まれている、<1>に記載の方法。
<3>
前記外来性核酸の長さが100塩基対超~約100,000塩基対である、<1>に記載の方法。
<4>
前記関心のある第1の核酸配列の長さが100塩基対超~約10,000塩基対である、<1>に記載の方法。
<5>
前記細胞が真核細胞である、<1>に記載の方法。
<6>
前記細胞が、酵母細胞、植物細胞、または動物細胞である、<1>に記載の方法。
<7>
前記ガイドRNAが約10~約500ヌクレオチドである、<1>に記載の方法。
<8>
前記ガイドRNAが約20~約100ヌクレオチドである、<1>に記載の方法。
<9>
前記1種類または複数種類のガイドRNA配列がcrRNAである、<1>に記載の方法。
<10>
前記1種類または複数種類のガイドRNA配列がtracrRNA‐crRNA融合体である、<1>に記載の方法。
<11>
前記DNAが、ゲノムDNA、ミトコンドリアDNA、ウイルスDNA、または外来性DNAである、<1>に記載の方法。
<12>
前記外来性核酸配列が、相同組換えにより前記標的核酸配列中に挿入される、<1>に記載の方法。
<13>
前記外来性核酸配列が、非相同末端結合により前記標的核酸配列中に挿入される、<1>に記載の方法。
Claims (27)
- 真核細胞において遺伝子を置換する方法(ただし置換がヒトの体内で行われる場合を除く)であって、
置換対象の遺伝子の一方の側にある標的核酸配列に相補的なガイドRNAの配列をコードする第1の外来核酸を前記真核細胞に導入すること、
前記遺伝子の一方の側のみに切断部位を作製するためのCas9タンパク質をコードする第2の外来核酸を前記真核細胞に導入すること、および
前記遺伝子を置換するための、置換対象の前記遺伝子の両側にそれぞれ相補的であるホモロジーアーム配列とホモロジーアーム配列の間に位置する外来性核酸配列、を含む標的化ベクターを前記真核細胞に導入すること、ここでそれぞれのホモロジーアーム配列の長さは0.2~5kbであり、前記切断部位とは反対側のホモロジーアーム配列は前記切断部位側のホモロジーアーム配列よりも長い、
を含み、
前記ガイドRNAおよび前記Cas9タンパク質が発現し、
前記ガイドRNAおよび前記Cas9タンパク質が前記標的核酸配列に共局在し、前記Cas9タンパク質が前記切断部位を生成して前記外来性核酸配列が前記切断部位において挿入される、方法。 - 挿入される前記外来性核酸配列が遺伝子である、請求項1に記載の方法。
- 前記外来性核酸配列の長さが1,000塩基対~100,000塩基対である、請求項1に記載の方法。
- 前記真核細胞がヒト細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記真核細胞が幹細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記真核細胞がヒト幹細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記真核細胞が誘導多能性幹細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記真核細胞がヒト誘導多能性幹細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記ガイドRNAがtracrRNA‐crRNA融合体である、請求項1に記載の方法。
- 前記遺伝子を有する核酸が、ゲノムDNA、ミトコンドリアDNA、ウイルスDNA、または外来性DNAである、請求項1に記載の方法。
- 前記外来性核酸配列が、相同組換えにより前記標的核酸配列中に挿入される、請求項1に記載の方法。
- 前記外来性核酸配列の長さが10,000塩基対~100,000塩基対である、請求項1に記載の方法。
- 前記外来性核酸配列の長さが1,000塩基対~10,000塩基対である、請求項1に記載の方法。
- 前記切断部位とは反対側のホモロジーアーム配列は前記切断部位側のホモロジーアーム配列よりも24塩基超長い、請求項1に記載の方法。
- 前記ホモロジーアーム配列の各々の長さが2kb以下である、請求項1に記載の方法。
- 前記切断部位とは反対側のホモロジーアーム配列は前記切断部位側のホモロジーアーム配列よりも24塩基以上長い、請求項1に記載の方法。
- 前記ホモロジーアーム配列の合計長さが、1.5kb~2kbである、請求項1に記載の方法。
- 置換対象の遺伝子の一方の側にある標的核酸配列に相補的なガイドRNAの配列をコードする第1の外来核酸、
前記遺伝子の一方の側のみに切断部位を作製するためのCas9タンパク質をコードする第2の外来核酸、および
前記遺伝子を置換するための、置換対象の前記遺伝子の両側にそれぞれ相補的であるホモロジーアーム配列とホモロジーアーム配列の間に位置する外来性核酸配列、を含む標的化ベクター、ここでそれぞれのホモロジーアーム配列の長さは0.2~5kbであり、前記切断部位とは反対側のホモロジーアーム配列は前記切断部位側のホモロジーアーム配列よりも長い、
を含む、真核細胞において遺伝子を置換するためのシステム。 - 前記外来性核酸配列が遺伝子である、請求項18に記載のシステム。
- 前記外来性核酸配列の長さが1,000塩基対~100,000塩基対である、請求項18に記載のシステム。
- 前記ガイドRNAがtracrRNA‐crRNA融合体である、請求項18に記載のシステム。
- 前記外来性核酸配列の長さが10,000塩基対~100,000塩基対である、請求項18に記載のシステム。
- 前記外来性核酸配列の長さが1,000塩基対~10,000塩基対である、請求項18に記載のシステム。
- 前記切断部位とは反対側のホモロジーアーム配列は前記切断部位側のホモロジーアーム配列よりも24塩基超長い、請求項18に記載のシステム。
- 前記ホモロジーアーム配列の各々の長さが2kb以下である、請求項18に記載のシステム。
- 前記切断部位とは反対側のホモロジーアーム配列は前記切断部位側のホモロジーアーム配列よりも24塩基以上長い、請求項18に記載のシステム。
- 前記ホモロジーアーム配列の合計長さが、1.5kb~2kbである、請求項18に記載のシステム。
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EP3957735A1 (en) | 2014-03-05 | 2022-02-23 | Editas Medicine, Inc. | Crispr/cas-related methods and compositions for treating usher syndrome and retinitis pigmentosa |
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EP3553176A1 (en) | 2014-03-10 | 2019-10-16 | Editas Medicine, Inc. | Crispr/cas-related methods and compositions for treating leber's congenital amaurosis 10 (lca10) |
US11141493B2 (en) | 2014-03-10 | 2021-10-12 | Editas Medicine, Inc. | Compositions and methods for treating CEP290-associated disease |
EP3122880B1 (en) | 2014-03-26 | 2021-05-05 | Editas Medicine, Inc. | Crispr/cas-related methods and compositions for treating sickle cell disease |
WO2015155686A2 (en) | 2014-04-08 | 2015-10-15 | North Carolina State University | Methods and compositions for rna-directed repression of transcription using crispr-associated genes |
ES2784754T3 (es) | 2014-06-06 | 2020-09-30 | Regeneron Pharma | Métodos y composiciones para modificar un locus objetivo |
DK3161128T3 (en) | 2014-06-26 | 2018-11-05 | Regeneron Pharma | METHODS AND COMPOSITIONS FOR TARGETED GENTICAL MODIFICATIONS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF |
US10077453B2 (en) | 2014-07-30 | 2018-09-18 | President And Fellows Of Harvard College | CAS9 proteins including ligand-dependent inteins |
EP3186375A4 (en) | 2014-08-28 | 2019-03-13 | North Carolina State University | NEW CAS9 PROTEINS AND GUIDING ELEMENTS FOR DNA TARGETING AND THE GENOME EDITION |
ES2741387T3 (es) | 2014-10-15 | 2020-02-10 | Regeneron Pharma | Métodos y composiciones para generar o mantener células pluripotentes |
CA2963820A1 (en) | 2014-11-07 | 2016-05-12 | Editas Medicine, Inc. | Methods for improving crispr/cas-mediated genome-editing |
LT3221457T (lt) | 2014-11-21 | 2019-06-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Nukreipiančios genetinės modifikacijos būdai ir kompozicijos, naudojant suporuotas kreipiančiąsias rnr sekas |
KR20240013283A (ko) | 2014-12-03 | 2024-01-30 | 애질런트 테크놀로지스, 인크. | 화학적 변형을 갖는 가이드 rna |
KR102656470B1 (ko) | 2014-12-10 | 2024-04-09 | 리전츠 오브 더 유니버스티 오브 미네소타 | 질환을 치료하기 위한 유전적으로 변형된 세포, 조직 및 장기 |
NZ732895A (en) | 2014-12-19 | 2022-05-27 | Regeneron Pharma | Methods and compositions for targeted genetic modification through single-step multiple targeting |
CN105821073B (zh) | 2015-01-27 | 2021-08-10 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 一种通过基因瞬时表达对整株植物定点改造的方法 |
JP6873911B2 (ja) | 2015-04-06 | 2021-05-19 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | 初代細胞において標的核酸の遺伝子調節を誘導するためにインビトロで行う方法 |
JP2018522249A (ja) | 2015-04-24 | 2018-08-09 | エディタス・メディシン、インコーポレイテッド | Cas9分子/ガイドrna分子複合体の評価 |
EP3095870A1 (en) | 2015-05-19 | 2016-11-23 | Kws Saat Se | Methods for the in planta transformation of plants and manufacturing processes and products based and obtainable therefrom |
KR102451796B1 (ko) | 2015-05-29 | 2022-10-06 | 노쓰 캐롤라이나 스테이트 유니버시티 | 크리스퍼 핵산을 사용하여 박테리아, 고세균, 조류 및 효모를 스크리닝하는 방법 |
KR20220158846A (ko) | 2015-06-15 | 2022-12-01 | 노쓰 캐롤라이나 스테이트 유니버시티 | 핵산 및 rna-기반 항미생물제를 효율적으로 전달하기 위한 방법 및 조성물 |
IL295616A (en) | 2015-07-31 | 2022-10-01 | Us Health | Adapted cells and treatment methods |
JP2018527920A (ja) | 2015-08-14 | 2018-09-27 | インスティテュート・オブ・ジェネティクス・アンド・ディヴェロプメンタル・バイオロジー、チャイニーズ・アカデミー・オブ・サイエンシズInstitute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences | 部位特異的ヌクレオチド置換によりグリホサート耐性イネを取得するための方法 |
EP3786294A1 (en) | 2015-09-24 | 2021-03-03 | Editas Medicine, Inc. | Use of exonucleases to improve crispr/cas-mediated genome editing |
US11286480B2 (en) | 2015-09-28 | 2022-03-29 | North Carolina State University | Methods and compositions for sequence specific antimicrobials |
EP3365357B1 (en) | 2015-10-23 | 2024-02-14 | President and Fellows of Harvard College | Evolved cas9 proteins for gene editing |
EP3370513A1 (en) * | 2015-11-06 | 2018-09-12 | The Jackson Laboratory | Large genomic dna knock-in and uses thereof |
WO2017112620A1 (en) | 2015-12-22 | 2017-06-29 | North Carolina State University | Methods and compositions for delivery of crispr based antimicrobials |
US11597924B2 (en) | 2016-03-25 | 2023-03-07 | Editas Medicine, Inc. | Genome editing systems comprising repair-modulating enzyme molecules and methods of their use |
EP3433364A1 (en) | 2016-03-25 | 2019-01-30 | Editas Medicine, Inc. | Systems and methods for treating alpha 1-antitrypsin (a1at) deficiency |
WO2017180694A1 (en) | 2016-04-13 | 2017-10-19 | Editas Medicine, Inc. | Cas9 fusion molecules gene editing systems, and methods of use thereof |
CN105861485B (zh) * | 2016-04-20 | 2021-08-17 | 上海伊丽萨生物科技有限公司 | 一种提高基因置换效率的方法 |
US10767175B2 (en) | 2016-06-08 | 2020-09-08 | Agilent Technologies, Inc. | High specificity genome editing using chemically modified guide RNAs |
EP3478313B1 (en) * | 2016-06-29 | 2022-05-04 | CRISPR Therapeutics AG | Materials and methods for treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als) and other related disorders |
CA3032822A1 (en) | 2016-08-02 | 2018-02-08 | Editas Medicine, Inc. | Compositions and methods for treating cep290 associated disease |
WO2018025206A1 (en) * | 2016-08-02 | 2018-02-08 | Kyoto University | Method for genome editing |
AU2017306676B2 (en) | 2016-08-03 | 2024-02-22 | President And Fellows Of Harvard College | Adenosine nucleobase editors and uses thereof |
AU2017308889B2 (en) | 2016-08-09 | 2023-11-09 | President And Fellows Of Harvard College | Programmable Cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof |
US20190185850A1 (en) * | 2016-08-20 | 2019-06-20 | Avellino Lab Usa, Inc. | Single guide rna/crispr/cas9 systems, and methods of use thereof |
US11542509B2 (en) | 2016-08-24 | 2023-01-03 | President And Fellows Of Harvard College | Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing |
SG11201903089RA (en) | 2016-10-14 | 2019-05-30 | Harvard College | Aav delivery of nucleobase editors |
WO2018075664A1 (en) | 2016-10-18 | 2018-04-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Tumor infiltrating lymphocytes and methods of therapy |
WO2018119359A1 (en) | 2016-12-23 | 2018-06-28 | President And Fellows Of Harvard College | Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection |
WO2018165504A1 (en) | 2017-03-09 | 2018-09-13 | President And Fellows Of Harvard College | Suppression of pain by gene editing |
US11542496B2 (en) | 2017-03-10 | 2023-01-03 | President And Fellows Of Harvard College | Cytosine to guanine base editor |
EP3596217A1 (en) | 2017-03-14 | 2020-01-22 | Editas Medicine, Inc. | Systems and methods for the treatment of hemoglobinopathies |
IL306092A (en) | 2017-03-23 | 2023-11-01 | Harvard College | Nucleic base editors that include nucleic acid programmable DNA binding proteins |
EP3622070A2 (en) | 2017-05-10 | 2020-03-18 | Editas Medicine, Inc. | Crispr/rna-guided nuclease systems and methods |
WO2018209320A1 (en) | 2017-05-12 | 2018-11-15 | President And Fellows Of Harvard College | Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation |
WO2018232356A1 (en) | 2017-06-15 | 2018-12-20 | The Regents Of The University Of California | Targeted non-viral dna insertions |
WO2019006418A2 (en) | 2017-06-30 | 2019-01-03 | Intima Bioscience, Inc. | ADENO-ASSOCIATED VIRAL VECTORS FOR GENE THERAPY |
WO2019014564A1 (en) | 2017-07-14 | 2019-01-17 | Editas Medicine, Inc. | SYSTEMS AND METHODS OF TARGETED INTEGRATION AND GENOME EDITING AND DETECTION THEREOF WITH INTEGRATED PRIMING SITES |
JP2020534795A (ja) | 2017-07-28 | 2020-12-03 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | ファージによって支援される連続的進化(pace)を用いて塩基編集因子を進化させるための方法および組成物 |
WO2019139645A2 (en) | 2017-08-30 | 2019-07-18 | President And Fellows Of Harvard College | High efficiency base editors comprising gam |
US11795443B2 (en) | 2017-10-16 | 2023-10-24 | The Broad Institute, Inc. | Uses of adenosine base editors |
JPWO2019093418A1 (ja) * | 2017-11-13 | 2021-01-21 | 国立大学法人広島大学 | 哺乳動物細胞内の標的染色体部位で目的遺伝子を含むポリヌクレオチドを増幅させる方法およびベクター、ならびにその利用 |
WO2019099982A1 (en) * | 2017-11-17 | 2019-05-23 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods for efficient genome editing |
US20210180045A1 (en) * | 2018-08-31 | 2021-06-17 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Scalable tagging of endogenous genes by homology-independent intron targeting |
US10711267B2 (en) | 2018-10-01 | 2020-07-14 | North Carolina State University | Recombinant type I CRISPR-Cas system |
JP2022526908A (ja) | 2019-03-19 | 2022-05-27 | ザ ブロード インスティテュート,インコーポレーテッド | 編集ヌクレオチド配列を編集するための方法および組成物 |
US20220186263A1 (en) * | 2019-04-05 | 2022-06-16 | Osaka University | Method for producing knock-in cell |
EP4085145A4 (en) * | 2019-12-30 | 2024-02-21 | Broad Inst Inc | GUIDED EXCISION-TRANSPOSITION SYSTEMS |
JP6867635B1 (ja) * | 2020-04-06 | 2021-04-28 | 株式会社Logomix | ゲノム改変方法及びゲノム改変キット |
EP4134431A1 (en) * | 2020-04-06 | 2023-02-15 | Logomix, Inc. | Genome alteration method and genome alteration kit |
AU2021267940A1 (en) | 2020-05-08 | 2022-12-08 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence |
MY197253A (en) | 2020-06-06 | 2023-06-08 | Lanzatech Inc | Microorganism with knock-in at acetolactate decarboxylase gene locus |
WO2022164890A2 (en) * | 2021-01-26 | 2022-08-04 | Washington State University | Bacteria producing gamma-aminobutyric acid (gaba) and uses of the bacteria |
AU2022343300A1 (en) | 2021-09-10 | 2024-04-18 | Agilent Technologies, Inc. | Guide rnas with chemical modification for prime editing |
WO2023077148A1 (en) | 2021-11-01 | 2023-05-04 | Tome Biosciences, Inc. | Single construct platform for simultaneous delivery of gene editing machinery and nucleic acid cargo |
WO2023122764A1 (en) | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Tome Biosciences, Inc. | Co-delivery of a gene editor construct and a donor template |
WO2023205744A1 (en) | 2022-04-20 | 2023-10-26 | Tome Biosciences, Inc. | Programmable gene insertion compositions |
CN114891750A (zh) * | 2022-04-29 | 2022-08-12 | 武汉大学 | 筛选经cyp3a4介导代谢毒性外源化合物的细胞模型及其构建方法、应用 |
WO2023225670A2 (en) | 2022-05-20 | 2023-11-23 | Tome Biosciences, Inc. | Ex vivo programmable gene insertion |
WO2024020587A2 (en) | 2022-07-22 | 2024-01-25 | Tome Biosciences, Inc. | Pleiopluripotent stem cell programmable gene insertion |
Family Cites Families (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008108989A2 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Danisco A/S | Cultures with improved phage resistance |
US8546553B2 (en) | 2008-07-25 | 2013-10-01 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Prokaryotic RNAi-like system and methods of use |
US20100076057A1 (en) | 2008-09-23 | 2010-03-25 | Northwestern University | TARGET DNA INTERFERENCE WITH crRNA |
WO2010054108A2 (en) | 2008-11-06 | 2010-05-14 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Cas6 polypeptides and methods of use |
WO2011053957A2 (en) | 2009-11-02 | 2011-05-05 | Gen9, Inc. | Compositions and methods for the regulation of multiple genes of interest in a cell |
US10087431B2 (en) | 2010-03-10 | 2018-10-02 | The Regents Of The University Of California | Methods of generating nucleic acid fragments |
SG185481A1 (en) | 2010-05-10 | 2012-12-28 | Univ California | Endoribonuclease compositions and methods of use thereof |
WO2012164565A1 (en) | 2011-06-01 | 2012-12-06 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Compositions and methods for downregulating prokaryotic genes |
GB201122458D0 (en) | 2011-12-30 | 2012-02-08 | Univ Wageningen | Modified cascade ribonucleoproteins and uses thereof |
EP3272356A1 (en) | 2012-02-24 | 2018-01-24 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Compositions and methods for the treatment of hemoglobinopathies |
JP6490426B2 (ja) | 2012-02-29 | 2019-03-27 | サンガモ セラピューティクス, インコーポレイテッド | ハンチントン病を治療するための方法および組成物 |
US9637739B2 (en) | 2012-03-20 | 2017-05-02 | Vilnius University | RNA-directed DNA cleavage by the Cas9-crRNA complex |
WO2013141680A1 (en) | 2012-03-20 | 2013-09-26 | Vilnius University | RNA-DIRECTED DNA CLEAVAGE BY THE Cas9-crRNA COMPLEX |
SG10201702445TA (en) * | 2012-04-25 | 2017-04-27 | Regeneron Pharma | Nuclease-mediated targeting with large targeting vectors |
RU2650819C2 (ru) | 2012-05-07 | 2018-04-17 | Сангамо Терапьютикс, Инк. | Способы и композиции для опосредованной нуклеазой направленной интеграции трансгенов |
LT3401400T (lt) | 2012-05-25 | 2019-06-10 | The Regents Of The University Of California | Būdai ir kompozicijos, skirtos rnr molekulės nukreipiamai tikslinės dnr modifikacijai ir rnr molekulės nukreipiamam transkripcijos moduliavimui |
WO2014022702A2 (en) | 2012-08-03 | 2014-02-06 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions for controlling gene expression by rna processing |
DE202013012597U1 (de) * | 2012-10-23 | 2017-11-21 | Toolgen, Inc. | Zusammensetzung zum Spalten einer Ziel-DNA, umfassend eine für die Ziel-DNA spezifische guide-RNA und eine Cas-Protein-codierende Nukleinsäure oder ein Cas-Protein, sowie deren Verwendung |
US8697359B1 (en) | 2012-12-12 | 2014-04-15 | The Broad Institute, Inc. | CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products |
ES2658401T3 (es) * | 2012-12-12 | 2018-03-09 | The Broad Institute, Inc. | Suministro, modificación y optimización de sistemas, métodos y composiciones para la manipulación de secuencias y aplicaciones terapéuticas |
CA3081054A1 (en) * | 2012-12-17 | 2014-06-26 | President And Fellows Of Harvard College | Rna-guided human genome engineering |
EP4286517A3 (en) | 2013-04-04 | 2024-03-13 | President and Fellows of Harvard College | Therapeutic uses of genome editing with crispr/cas systems |
US20140359795A1 (en) * | 2013-05-31 | 2014-12-04 | Recombinetics, Inc. | Genetic techniques for making animals with sortable sperm |
US20140356956A1 (en) * | 2013-06-04 | 2014-12-04 | President And Fellows Of Harvard College | RNA-Guided Transcriptional Regulation |
RU2685914C1 (ru) | 2013-12-11 | 2019-04-23 | Регенерон Фармасьютикалс, Инк. | Способы и композиции для направленной модификации генома |
-
2014
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2020
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-
2021
- 2021-03-15 AU AU2021201624A patent/AU2021201624B2/en active Active
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Genetics, 2013, Vol. 194, pp. 1029-1035, Supporting Information |
J. Biol. Chem., 2000, Vol.275, No.40, pp.30833-30838 |
Journal of Guangxi Agric. and Biol. Science, 2007, Vol.26, Sup., pp.1-6 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2020062033A (ja) | 2020-04-23 |
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EP3604543A1 (en) | 2020-02-05 |
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AU2014353100A1 (en) | 2016-06-02 |
WO2015077290A3 (en) | 2015-08-06 |
CA2930828A1 (en) | 2015-05-28 |
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