JP7031956B2 - Maldi質量分析用の水不溶性物質試料の製造方法及びmaldi質量分析を利用した水不溶性物質の定量分析方法 - Google Patents
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Description
以下、本発明についてより詳しく説明する。
具体的なKBrペレットカップの製作過程は、次の通りである。
前記フレーム1の円形穴及び円形部材3中心の穴のサイズは、特に限定されるものではない。
一実施形態において、前記ペレットカップは、円形または多角形の形態を有してもよい。
段階1:試料の製造
分析しようとする水不溶性物質として、下記化学式で表現されるPigment Red 177(PR177、C28H16N2O4、Exact Mass 444.11)とマトリックスとしてDCTB(trans-2-[3-(4-tert-butylphenyl)-2-methyl-2-propenylidene]malononitrile)とを使用した。図2に示すように、前記水不溶性物質及びマトリックスを乳鉢に1:20の重量比で入れ、乳棒で磨きながら混合した。これに、前記混合物を分散させるための揮発性溶媒としてTHF(2mL)を投入して混合し続けた。引き続き、THFが蒸発するまでスパチュラでかき混ぜながら混合し続けて、水不溶性物質及びマトリックスが均一に分布された試料を取得した。
前記段階から製造された試料を図4に示すように製作したKBrペレットカップの溝に満たした。試料が満たされたKBrペレットカップをひっくり返してMALDIサンプルプレートに装着した後、前記KBrペレットカップに5barの圧力を20秒間加えた。引き続き、KBrを水で溶かして厚さが約10μmであるPR177試片を製作した。
段階1:試料の製造
水不溶性物質としてPR 177及びマトリックスとしてDCTBを乳鉢に1:20の重量比で入れ、乳棒で磨きながら混合する過程のみを行って、試料を製造した。
実施例1の段階2と同じ過程で試片を製造した。
段階1:試料の製造
実施例1の段階1と同じ過程で試料を製造した。
段階1から取得された試料をKBrペレットカップの使用なしに、MALDIサンプルプレート上に載せた後、単純プレスすることにより、試片を製造した。
MALDI-TOF質量分析器(UltrafleXtreme,Bruker Daltonics,Germany)を使用して、前記実施例及び比較例によって、それぞれ製造されたPR177試片の5箇所地点に対してMALDI質量スペクトルを得た。前記スペクトルの結果から、各地点でのPR177イオン(A+・)の基本ピークとDCTB由来イオンのうち、最も大きな強度(intensity)を有するイオン(M+)の基本ピークとの強度比率(A+・/M+ intensity ratio)を計算した。比較例1によって製造されたPR177試片の5箇所地点のそれぞれに対する強度比率を図6の(a)で、比較例2によって製造されたPR177試片の5箇所地点のそれぞれに対する強度比率を図6の(b)で、実施例1によって製造されたPR177試片の5箇所地点のそれぞれに対する強度比率を図6の(c)で示した。
前記実施例によって同じ条件下で3つの試片を製造した。各試片に対して得たMALDI質量スペクトルを図7に(a)、(b)及び(c)で示した。
図7の質量スペクトルピークを用いて分析物質(水不溶性物質)及びマトリックスのシグナル強度比率を算出し、それを分析物質とマトリックスとの重量比で図示して定量検定線を作成し、その結果を図8に示した。
Claims (9)
- (ステップS1)水不溶性物質とマトリックスとを混合した後、揮発性溶媒を投入して、前記揮発性溶媒が蒸発するまで前記水不溶性物質とマトリックスとを分散させて、水不溶性物質の試料を取得する段階と、
(ステップS2)前記試料を水溶性材質からなるペレットカップの溝に満たし、それをひっくり返してプレスした後、前記ペレットカップを水で溶かして水不溶性物質試片を得る段階と、
を含む、水不溶性物質の定量分析のためのMALDI質量分析用試片の製造方法。 - 前記水不溶性物質が、アントラキノン系顔料、銅フタロシアニン系顔料、ペリレン系顔料、ジケトピロロピロール系顔料、ベンズイミダゾロン系顔料、イソインドリン系顔料、ジオキサジン系顔料またはこれらの混合物を含む、請求項1に記載のMALDI質量分析用試片の製造方法。
- 前記アントラキノン系顔料が、Pigment Red 177(PR177、4,4'-diamino[1,1'-bianthracen]-9,9',10,10'-tetraon)である、請求項2に記載のMALDI質量分析用試片の製造方法。
- 前記水不溶性物質と混合される前記マトリックスは、DCTB(trans-2-[3-(4-tert-butylphenyl)-2-methyl-2-propenylidene]malononitrile)、DPF(α、β-diphenylfumaronitrile)、α-シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸、ジトラノール(1,8,9-trihydroxyanthracene)またはこれらの混合物を含む、請求項1から3の何れか一項に記載のMALDI質量分析用試片の製造方法。
- 前記水不溶性物質及び前記マトリックスに投入される前記揮発性溶媒は、テトラヒドロフラン(THF)、クロロホルムまたはこれらの混合物を含む、請求項1から4の何れか一項に記載のMALDI質量分析用試片の製造方法。
- 前記ペレットカップは、KBr、NaBr、MgBr2、NaClまたはこれらの混合物からなる、請求項1から5の何れか一項に記載のMALDI質量分析用試片の製造方法。
- 請求項1から6の何れか一項に記載のMALDI質量分析用試片の製造方法で製造された水不溶性物質試片を利用した水不溶性物質の定量分析方法であって、
前記水不溶性物質試片に対してMALDI質量スペクトルを得る段階と、
前記MALDI質量スペクトルのピークの結果から水不溶性物質及びマトリックスのシグナル強度比率を算出し、それを不溶性物質とマトリックスとの重量比で図示して定量検定線を作成する段階と、
を含む、水不溶性物質の定量分析方法。 - 前記水不溶性物質試片の互いに異なる地点から測定されたMALDI質量スペクトルの相対標準偏差(RSD)が、40%以下である、請求項7に記載の水不溶性物質の定量分析方法。
- 前記水不溶性物質試片を同一条件下で製造された複数個で適用して測定されたMALDI-TOF質量スペクトルのRSDが、40%以下である、請求項7または8に記載の水不溶性物質の定量分析方法。
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