JP7025077B2 - ヒト褐色脂肪由来幹細胞およびその使用 - Google Patents
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Description
本願は、それぞれ、2013年11月19日に出願された米国仮特許出願第61/906,087号および2013年4月19日に出願された米国仮特許出願第61/813,771号への優先権を主張し;この米国仮特許出願の各々の内容は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
本発明は一般に、細胞培養の分野、およびより具体的には細胞タイプ決定の分野に関する。
褐色脂肪組織(BAT)は、哺乳動物におけるエネルギーホメオスタシスの根底にある進化上保存された機構において重要な役割を果たす。それは、5~10ミクロン直径の脂肪空胞および熱発生の調節に中心的な脱共役タンパク質1(UCP1)の発現によって特徴付けられる。ヒト新生児において、BATの貯蔵場所は、代表的には、脈管構造および固形器官の周りに集まっている。これらの貯蔵場所は、血液をこれが末梢に運ばれる前に温めることによって寒冷曝露の間に体温を維持する。それらはまた、固形器官内の生化学反応に最適な温度を確保する。BATは、小児期および青年期の間を通じて消失すると考えられてきた。しかし、近年の研究では、成人において活発な褐色脂肪組織の存在とともに、例えば、頸部、鎖骨上、縦隔、傍脊椎および/もしくは副腎の領域に貯蔵場所があることが確認された。また、BAT(あるいはベージュ脂肪ともいわれる)が白色脂肪組織(WAT)内で見出され得ることもまた、報告された。
本発明は、部分的に、一日齢の雄性新生児から単離された、単離されたヒト褐色脂肪組織の幹細胞系に関する。一実施形態において、上記単離されたヒト褐色脂肪組織の幹細胞系は、CREB1、DIO2、IRS1、MAPK14、NRF1、FOXC2、PPARD、PGC1-A、PGC1-B、PRDM16、SRC、UCP1、およびWNT5Aなどのマーカーを発現する。別の実施形態において、上記細胞はまた、アンチ白色脂肪組織遺伝子(例えば、GATA2、KLF2、およびKLF3)のより高いレベルを発現する。さらに別の実施形態において、上記単離されたヒト褐色脂肪組織の幹細胞系は、骨芽細胞、軟骨細胞、および脂肪細胞へと分化することができる。さらになお別の実施形態において、上記系は、一日齢の雄性新生児に由来する。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
(項目1)
単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目2)
前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系は、一日齢の雄性新生児に由来する、項目1に記載の単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目3)
骨芽細胞、軟骨細胞、および脂肪細胞に分化することができる、項目1に記載の単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目4)
CREB1、DIO2、IRS1、MAPK14、NRF1、FOXC2、PPARD、PGC1-A、PGC1-B、PRDM16、SRC、UCP1、及びWNT5Aを発現する、単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目5)
前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系は、一日齢の雄性新生児に由来する、項目4に記載の単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目6)
骨芽細胞、軟骨細胞、および脂肪細胞に分化することができる、項目4に記載の単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目7)
遺伝子UCP1、PPARGC1A、NRF1、FOXC2、CREB1、SIRT3、およびWNT5A(REFX)を発現する単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目8)
前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系は、一日齢の雄性新生児に由来する、項目7に記載の単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目9)
骨芽細胞、軟骨細胞、および脂肪細胞に分化することができる、項目7に記載の単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目10)
CD14、CD34、CD45、およびSTRO-1を発現せず、CD9、SSEA4、CD44、CD90、CD166、およびCD73を発現する、単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目11)
前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系は、一日齢の雄性新生児に由来する、項目10に記載の単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目12)
骨芽細胞、軟骨細胞、および脂肪細胞に分化することができる、項目10に記載の単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目13)
不死化されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目14)
トランスフェクトされたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系。
(項目15)
ヒト新生児褐色脂肪由来細胞を含む薬物スクリーニングアッセイを含む組成物。
(項目16)
前記ヒト新生児褐色脂肪由来細胞が不死化される、項目15に記載の組成物。
(項目17)
薬物化合物をスクリーニングする方法であって、
項目15に記載の組成物を提供する工程;
候補薬物化合物と前記ヒト新生児褐色脂肪由来細胞を接触させる工程;および
該ヒト新生児褐色脂肪由来細胞に対する該薬物化合物の効果を観察する工程
を含む方法。
(項目18)
移植可能なコンストラクトであって
足場;および
該足場上で培養された単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞系
を備える移植可能なコンストラクト。
(項目19)
前記足場が多孔性細胞外マトリックスを含む、項目18に記載の移植可能なコンストラクト。
代謝的に活発な褐色脂肪組織幹細胞の集団は、一日齢の雄性新生児から単離された。上記幹細胞集団は、「新生児褐色脂肪由来幹細胞」(新生児BADSC)と称され、以下に対する潜在性を明らかに示した:(1)インビトロで増える;(2)多系統の潜在性を示す;および(3)代謝的に活発な褐色脂肪細胞へ機能的に分化する。このような幹細胞集団は、肥満症および関連代謝障害の処置のために、エネルギーホメオスタシスをインビボで回復および増強する新たな細胞ベースの手段を提供し得る。これらの幹細胞はまた、脂肪組織生物学を研究するための有用なツールである。
pUNO-hpf ハイグロマイシン;
pUNO-pur ピューロマイシン;
pUNO-zeo ゼオシン;および
pUNO-bla ブラストサイジン。
*mCherryのみ;
*NanoLuc(NL)のみ;および
*Secreted NanoLuc(sNL)のみ。
CP1-NL FMDV2自己プロセシングポリペプチド;
CP1-sNL FMDV2自己プロセシングポリペプチド;
NL-CP1 FMDV2自己プロセシングポリペプチド;および
sNL-CP1 FMDV2自己プロセシングポリペプチド。
Claims (13)
- 移植可能なコンストラクトであって
足場;
前記足場上で培養された単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞;および
前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞から分化したヒト新生児褐色脂肪組織分化細胞
を備え、
前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞は、フィブロネクチンIII型ドメイン含有タンパク質5(FNDC5)を含む培養培地中で培養され、前記ヒト新生児褐色脂肪組織分化細胞に分化しており、
ここで、UCP-1、ELOVL3およびPGC1A遺伝子発現は、FNDC5を含まない培養培地中で培養された前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞から得られたヒト新生児褐色脂肪組織分化細胞と比較して前記ヒト新生児褐色脂肪組織分化細胞においてアップレギュレートされている、
移植可能なコンストラクト。 - 前記足場が多孔性細胞外マトリックスを含む、請求項1に記載の移植可能なコンストラクト。
- 前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞が、一日齢の雄性新生児に由来する、請求項1に記載の移植可能なコンストラクト。
- 前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞が、CREB1、DIO2、IRS1、MAPK14、NRF1、FOXC2、PPARD、PGC1-B、PRDM16、SRC、およびWNT5Aのうちの少なくとも1つをさらに発現する、請求項1に記載の移植可能なコンストラクト。
- 前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞が、一日齢の雄性新生児に由来する、請求項4に記載の移植可能なコンストラクト。
- 前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞が、PPARGC1AおよびSIRT3のうちの少なくとも1つをさらに発現する、請求項1に記載の移植可能なコンストラクト。
- 前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞が、一日齢の雄性新生児に由来する、請求項6に記載の移植可能なコンストラクト。
- 前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞が、以下の細胞表面マーカー:CD9、SSEA4、CD44、CD90、CD166、およびCD73について陽性であり、以下の細胞表面マーカー:CD14、CD34、CD45、およびSTRO-1について陰性である、請求項1に記載の移植可能なコンストラクト。
- 前記単離されたヒト新生児褐色脂肪組織の幹細胞が、一日齢の雄性新生児に由来する、請求項8に記載の移植可能なコンストラクト。
- 前記ヒト新生児褐色脂肪組織分化細胞がヒト褐色脂肪細胞である、請求項1に記載の移植可能なコンストラクト。
- 患者における代謝障害を処置するための、前記患者に移植されることを特徴とする、請求項1に記載の移植可能なコンストラクト。
- 患者における肥満症を処置するための、前記患者に移植されることを特徴とする、請求項1に記載の移植可能なコンストラクト。
- 患者における糖尿病を処置するための、前記患者に移植されることを特徴とする、請求項1に記載の移植可能なコンストラクト。
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