JP7024965B2 - ＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲ遺伝子の発現促進剤の製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、ＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲ遺伝子の発現促進剤の製造方法に関する。

近年、日本等の先進諸国を始め、急速な近代化および欧米化が進展しているアジア諸国等では、食生活やライフスタイルの変化等に伴い、人口に占める肥満者の割合が増加し、これに起因する生活習慣病（糖尿病、高血圧、高脂血症等）の罹患者も増加している。このようなことから、肥満を改善することが重要である。

肥満を改善するためには、一般に、摂取エネルギーを制限することや、既に体内に蓄積している脂肪を低減させることが考えられる。肥満症の治療においては、摂取エネルギーを制限することを中心に考えられている。

しかしながら、摂取エネルギーを制限することは、空腹感あるいはストレスといった肉体的および精神的苦痛を強いるものである。そのため、脂肪代謝を改善し、体内に蓄積している脂肪を低減させること（例えば、脂肪の分解を促進すること、または体脂肪の蓄積を抑制すること等）が注目されている。

植物由来の成分は、種々の研究によって様々な生理機能性を有することが確認されており、また、一般に、副作用の可能性が小さいという点において、生理機能改善剤としての利用が期待されている。

脂肪の分解を促進したり、体脂肪の蓄積を抑制したりする脂肪代謝改善剤においても、植物由来の成分として、藻類の抽出物（例えば、特許文献１参照）が提案されている。

しかしながら、従来の植物由来成分は、総合的脂肪代謝に対する幅広い機能性を有するという点において十分満足できるものではなく、細胞レベルで脂肪代謝を改善し、これらの性質を満足する脂肪代謝改善剤が切望されている。

特開２０００－７２６４２号公報

本発明の目的は、ＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲ遺伝子の発現を促進するＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲ遺伝子の発現促進剤の製造方法を提供することにある。

このような目的は、下記（１）に記載の本発明により達成される。

（１） 抽出溶媒としての１４体積％以上６０体積％以下のエタノール水溶液と、ロサ・センチフォリアの花弁とを接触させて、前記花弁の含有成分を抽出する抽出工程と、
前記抽出工程で得られた抽出物を、４０体積％以上８５体積％以下のエタノール水溶液を溶離液として用い、充填材として合成吸着樹脂を用いたカラムクロマトグラフィーに供することにより精製する精製工程と、
前記精製工程で得られた溶出液を濃縮する濃縮工程とを有することを特徴とするＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲ遺伝子の発現促進剤の製造方法。

本発明によれば、ＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲ遺伝子の発現を促進するＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲ遺伝子の発現促進剤の製造方法を提供することができる。

ＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲ遺伝子に対するバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の影響を示すグラフである。 ＨｅｐＧ２細胞におけるＡＣＣ１遺伝子に対するバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の影響を示すグラフである。 ＨｅｐＧ２細胞におけるＦＡＳ遺伝子に対するバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の影響を示すグラフである。 ＨｅｐＧ２細胞におけるＳＲＥＢＰ１ｃ遺伝子に対するバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の影響を示すグラフである。 ＨｅｐＧ２細胞におけるＡＣＯＸ遺伝子に対するバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の影響を示すグラフである。 ＨｅｐＧ２細胞におけるＣＰＴ１ａ遺伝子に対するバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の影響を示すグラフである。

以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。
［脂肪代謝改善剤］
まず、本発明の脂肪代謝改善剤について説明する。

本発明の脂肪代謝改善剤は、バラ花弁抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明に係るバラ花弁抽出物は、動物に投与されたときに、脂肪代謝（特に肝臓（肝細胞）における脂肪代謝）に関連する遺伝子（脂肪代謝遺伝子）の発現を調節する作用を有する。具体的には、血漿中から肝細胞内へＬＤＬ（低比重リポタンパク質：Ｌｏｗ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）の取り込みに関与する遺伝子の発現を促進することによって脂肪輸送を促進する。また、脂肪酸のβ酸化に関与する遺伝子の発現を促進することによって蓄積脂肪の分解を促進するとともに、脂肪酸の合成に関与する遺伝子の発現を抑制することにより脂肪の蓄積を抑制する。これらが相乗的に作用することにより、細胞レベルでの総合的な脂肪代謝がより効果的に改善される。

そして、本発明の脂肪代謝改善剤は、上記のような作用を有するバラ花弁抽出物を有効成分として含むことにより、従来の脂肪代謝改善剤とは異なり、細胞レベルで総合的に脂肪代謝を改善することができる。

したがって、本発明の脂肪代謝改善剤は、例えば、脂肪代謝促進（特に、肝臓の脂肪代謝促進）、体脂肪低減促進、脂肪肝の予防または治療、肥満の予防または治療、メタボリックシンドロームの予防または治療、肥満に起因する糖尿病、高血圧、高脂血症等の生活習慣病の予防または治療等のために用いることができる。

本発明の脂肪代謝改善剤（後述する本発明の組成物、成形体も同様）は、動物としてのヒトに適用されるものであってもよいし、ヒト以外の動物に適用されるものであってもよい。

なお、本明細書において、脂肪代謝とは、血漿中から肝細胞内へＬＤＬを取り込む作用、肝細胞において脂肪酸をβ酸化により分解する作用、および、肝細胞における脂肪酸の合成を抑制する作用を含む概念である。

本発明の脂肪代謝改善剤によって発現が調整される脂肪代謝遺伝子としては、具体的には、以下のようなものが挙げらる。すなわち、脂肪輸送に関与する遺伝子としては、例えば、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ：Ｌｏｗ Ｄｅｎｓｉｔｙ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）遺伝子等が挙げられる。また、脂肪酸のβ酸化に関与する遺伝子としては、例えば、ＣＰＴ１ａ（Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ／Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ １ａ）遺伝子、ＡＣＯＸ（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍａｌ ａｓｙｌ－ＣｏＡ ｏｘｉｄｅ）遺伝子等が挙げられる。また、脂肪酸の合成に関与する遺伝子としては、例えば、ＡＣＣ１（Ａｃｅｔｙｌ ＣｏＡ Ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ １）遺伝子、ＡＣＣ２（Ａｃｅｔｙｌ ＣｏＡ Ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ ２）遺伝子、ＳＲＥＢＰ２（Ｓｔｅｒｏｌ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｅｌｅｍｅｎｔ－Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ ２）遺伝子、ＳＲＥＢＰ１ｃ（Ｓｔｅｒｏｌ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｅｌｅｍｅｎｔ－Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ １ｃ）遺伝子、ＦＡＳ（Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ）遺伝子等が挙げられる。

本発明に係るバラ花弁抽出物と上記の遺伝子との関係の具体例は、以下のとおりである。

すなわち、本発明に係るバラ花弁抽出物は、ＬＤＬＲ遺伝子の発現を促進する作用を有する。細胞内へのＬＤＬ受容体遺伝子の発現が促進されることによって、血漿中から細胞内への、ＬＤＬ（低比重リポタンパク質）の取り込み（脂肪輸送）が促進される、特に、肝臓に発現するＬＤＬＲ遺伝子は、血漿ＬＤＬの減少に大きな役割を果たしている。

また、本発明に係るバラ花弁抽出物は、ＣＰＴ１ａ遺伝子、ＡＣＯＸ遺伝子の発現を促進する作用を有する。これらの遺伝子の発現が促進されることによって、脂肪酸のβ酸化が促進され、蓄積脂肪の分解が促進される。

さらに、本発明に係るバラ花弁抽出物は、ＡＣＣ１遺伝子、ＳＲＥＢＰ１ｃ遺伝子の発現を抑制する作用を有する。これらの遺伝子の発現が抑制されることによって、肝臓における脂肪酸の合成が抑制され、脂肪の蓄積が抑制される。

また、本発明に係るバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）は、バラ特有の優れた香気を有している。特に、経口で摂取した場合にも、穏やかな香気を感じることができ、かつ、苦み、渋み、えぐみ等の不快な味覚は抑えられているため、全体として優れた風味が得られる。したがって、経口等の各種の方法での摂取において、不快感を生じにくい。

＜バラ花弁抽出物＞
本発明に係るバラ花弁抽出物は、バラ科に属する植物の花弁の抽出物であればよいが、バラ亜科に属する植物の花弁の抽出物であるのが好ましく、バラ属に属する植物の花弁の抽出物であるのがより好ましい。

これにより、抽出物中の有効成分の含有率をより高いものとすることができ、複数の成分を含む抽出物全体としての脂肪代謝に関する作用をより高いものとすることができる。

バラ属に属するバラとしては、例えば、一重咲きのもの、半八重咲きのもの、八重咲きのもの等が挙げられ、これらから選択される１種または２種以上を組み合わせて用いてもよい。

また、バラ属に属するバラの花型としては、例えば、平咲き、カップ咲き、ロゼット咲き、クオーター咲き、ポンポン咲き、剣弁高芯咲き、半剣弁高芯咲き、丸弁抱え咲き等が挙げられるが、これらのいずれのものを用いてもよく、また、２種以上を組み合わせて用いてもよい。

また、バラ属に属するバラには、一季咲きのもの、返り咲きのもの、繰り返し咲きのもの、四季咲きのものが挙げられるが、これらから選択される１種または２種以上を組み合わせて用いてもよい。

また、バラ属に属するバラの樹形としては、例えば、ブッシュ（木立性）、シュラブ（半つる性）、クライミング（つる性）等が挙げられるが、これらのいずれのものを用いてもよく、また、２種以上を組み合わせて用いてもよい。

バラ属に属するバラとしては、例えば、ロサ・アルバ（Ｒｏｓａ ａｌｂａ）、ロサ・カニナ（Ｒｏｓａ ｃａｎｉｎａ）、ロサ・ガリカ（Ｒｏｓａ ｇａｌｌｉｃａ）、ロサ・キナモメナ（Ｒｏｓａ ｃｉｎｎａｍｏｍｅａ）、ロサ・グラウカ（Ｒｏｓａ ｇｌａｕｃａ）、ロサ・センチフォリア（Ｒｏｓａ ｃｅｎｔｉｆｏｌｉａ）、ロサ・スピノシッシマ（Ｒｏｓａ ｓｐｉｎｏｓｉｓｓｉｍａ）、ロサ・ウィクライアナ（Ｒｏｓａ ｗｉｃｈｕｒａｉａｎａ）、ロサ・フェティダ（Ｒｏｓａ ｆｏｅｔｉｄａ）、ロサ・フェティダ・ビコロール（Ｒｏｓａ ｆｏｅｔｉｄａ ｂｉｃｏｌｏｒ）、ロサ・フェティダ・ペルシアナ（Ｒｏｓａ ｆｏｅｔｉｄａ ｐｅｒｓｉａｎａ）、ロサ・フェッチェンコアナ（Ｒｏｓａ ｆｅｄｔｓｃｈｅｎｋｏａｎａ）、ロサ・ダマスケナ（Ｒｏｓａ ｄａｍａｓｃｅｎａ）、コウシンバラ（Ｒｏｓａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、ナニワイバラ（Ｒｏｓａ ｌａｅｖｉｇａｔａ）、ロサ・ギガンティア（Ｒｏｓａ ｇｉｇａｎｔｅａ）、ロサ・プリムラ（Ｒｏｓａ ｐｒｉｍｕｌａ）、ロサ・マリガニー（Ｒｏｓａ ｍｕｌｌｉｇａｎｉｉ）、ロサ・セリカナ・プテラカンサ（Ｒｏｓａ ｓｅｒｉｃａｎａ ｐｔｅｒａｃａｎｔｈａ）、ロサ・ユゴニス（Ｒｏｓａ ｈｕｇｏｎｉｓ）、ロサ・バンクシアエ・ルテア（Ｒｏｓａ ｂａｎｋｓｉａｅ ｌｕｔｅａ）（モッコウバラ）、ロサ・キネンシス（Ｒｏｓａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、テリハノイバラ（照葉野茨）イザヨイバラ（Ｒｏｓａ ｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ）、サンショウバラ（Ｒｏｓａ ｈｉｒｔｕｌａ）、タカネイバラ（Ｒｏｓａ ａｃｉｃｕｌａｉｓｉｓ ｎｉｐｐｏｎｅｎｓｉｓ）、ノイバラ（Ｒｏｓａ ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）、テリハノイバラ（Ｒｏｓａ ｗｉｃｈｕｒａｉａｎａ）、ハマナス（Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａ）、サクライバラ（Ｒｏｓａ ｕｃｈｉｙａｍａｎａ）、モリイバラ（Ｒｏｓａ ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ）、フジイバラ（Ｒｏｓａ ｆｕｊｉｓａｎｅｎｓｉｓ）、ロサ・キンナモメア（Ｒｏｓａ ｃｉｎｎａｍｏｍｅａ）、ロサ・ニティダ（Ｒｏｓａ ｎｉｔｉｄａ）、ロサ・カリフォルニカ（Ｒｏｓａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）、ロサ・ヴィルギニアナ（Ｒｏｓａ ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ）、ロサ・パルストリス（Ｒｏｓａ ｐａｌｕｓｔｒｉｓ）、ロサ・モスカータ（Ｒｏｓａ ｍｏｓｃｈａｔａ）等の原種（野生種）や、オールドローズ、モダンローズ等の園芸種が挙げられる。

オールドローズとしては、例えば、アルバ（Ａｌｂａ）、センチフォリア（Ｃｅｎｔｉｆｏｌｉａ）、ダマスク（Ｄａｍａｓｋ）、ガリカ（Ｇａｌｌｉｃａ）、ブルボン（Ｂｏｕｒｂｏｎ）、ノワゼット（Ｎｏｉｓｅｔｔｅ）、ティ（Ｔｅａ）、チャイナ（Ｃｈｉｎａ）、モス（Ｍｏｓｓ）、ポートランド（Ｐｏｒｔｌａｎｄ）、ポリアンサ（Ｐｏｌｙａｎｔｈａ）、ランブラー（Ｒａｍｂｌｅｒ）、エグラテリア・ローズ（Ｅｇｌａｎｔｅｒｉａ Ｒｏｓｅｓ）、ハイブリッド・パーペチュアル（Ｈ．Ｐｅｒｐｅｔｕａｌ）、ハイブリッド・フェティダ（Ｈ．Ｆｏｅｔｉｄａ）、ハイブリッド・マクランタ（Ｈ．Ｍａｃｒａｎｔｈａ）、ハイブリッド・ムスク（Ｈ．Ｍｕｓｋ）、ハイブリッド・モエシー（Ｈ．Ｍｏｙｅｓｉｉ）、ハイブリッド・センパビエレン（Ｈ．Ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎ）、ハイブリッド・ムルティフローラ（Ｈ．Ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）、ハイブリッド・ルゴサ（Ｈ．Ｒｕｇｏｓａ）等が挙げられる。

また、モダンローズとしては、例えば、ハイブリッド・ティー（Ｈｙｂｒｉｄ Ｔｅａ）、フロリバンダ（Ｆｌｏｒｉｂｕｎｄａ）、ミニチュア（Ｍｉｎｉａｔｕｒｅ）、つるハイブリッド・ティー（Ｃｌｉｍｂｉｎｇ Ｈｙｂｒｉｄ Ｔｅａ）、つるフロリバンダ（Ｃｌｉｍｂｉｎｇ Ｆｌｏｒｉｂｕｎｄａ）、つるミニチュア（Ｃｌｉｍｂｉｎｇ Ｍｉｎｉａｔｕｒｅ）、つる（Ｃｌｉｍｂｉｎｇ）、シュラブ（Ｓｈｒｕｂ）、イングリッシュ・ローズ（Ｅｎｇｌｉｓｈ Ｒｏｓｅｓ）、修景用（Ｌａｎｄｓｃａｐｅ Ｒｏｓｅｓ）、ハイブリッド・コルデシー（Ｈ．Ｋｏｒｄｅｓｉｉ）等が挙げられる。

本発明の脂肪代謝改善剤は、バラ花弁抽出物を含んでいればよく、その他の成分、例えば、バラの花弁以外の部位の抽出物や、バラ由来の非抽出成分（例えば、製造過程で生じたバラ由来の微粉末等）等を含んでいてもよい。

ただし、本発明の脂肪代謝改善剤中におけるバラ花弁抽出物の含有率は、９０質量％以上であるのが好ましく、９５質量％以上であるのがより好ましく、９９質量％以上であるのがさらに好ましい。
これにより、前述したような効果がより顕著に発揮される。

本発明に係るバラ花弁抽出物は、いかなる方法、条件で抽出されたものであってもよいが、エタノールを含有する抽出溶媒による抽出物であるのが好ましい。

これにより、有効成分の抽出効率が高まり、単位重量の原料（バラ花弁抽出物）当たりの有効成分の抽出量を増やすことができるとともに、抽出物中に含まれる複数種の有効成分の含有率のバランスをより好適なものとすることができる。その結果、前述したような脂肪代謝改善効果がより顕著に発揮される。また、単位重量の原料から十分な量の有効成分を抽出するのに要する時間を短縮することができ、脂肪代謝改善剤の生産性を向上することができるとともに、脂肪代謝改善剤の製造過程における有効成分の劣化等を効果的に防止することができる。また、有効成分の抽出効率を高めつつ、不要成分の抽出を効果的に防止することができる。また、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の香気、風味等をより優れたものとすることができる。

なお、本発明の脂肪代謝改善剤の製造方法（バラ花弁抽出物の抽出方法を含む）については、後に詳述する。

本発明の脂肪代謝改善剤は、粉末状（顆粒を含む）、フィルム状、液状、ペースト状等、いかなる形状のものであってもよいが、粉末状をなすものであるのが好ましい。

これにより、脂肪代謝改善剤を経口で摂取した場合に、脂肪代謝改善効果がより顕著に発揮され易くなる。また、脂肪代謝改善剤を後述するような本発明の組成物、成形体の製造により好適に用いることができる。また、脂肪代謝改善剤の生産性をより優れたものとすることができる。

本発明の脂肪代謝改善剤が粉末状をなすものである場合、その平均粒径は、特に限定されないが、１μｍ以上５０００μｍ以下であるのが好ましく、１０μｍ以上３０００μｍ以下であるのがより好ましく、１００μｍ以上１０００μｍ以下であるのがさらに好ましい。

これにより、脂肪代謝改善剤を経口で摂取した場合に、脂肪代謝改善効果がさらに顕著に発揮され易くなる。また、脂肪代謝改善剤を後述するような本発明の組成物、成形体の製造にさらに好適に用いることができる。また、脂肪代謝改善剤の生産性をさらに優れたものとすることができる。

なお、本明細書において、平均粒径とは、特に断りのない限り、体積平均粒径のことを言う。

［脂肪代謝改善剤の製造方法］
次に、本発明の脂肪代謝改善剤の製造方法について説明する。

本発明の脂肪代謝改善剤の製造方法は、エタノールを含有する抽出溶媒と、バラの花弁とを接触させて、バラ花弁の含有成分を抽出する抽出工程を有することを特徴とする。

これにより、前述したような脂肪代謝改善剤を効率よく製造することができる脂肪代謝改善剤の製造方法を提供することができる。また、有効成分の抽出効率が高まり、単位重量の原料（バラ花弁抽出物）当たりの有効成分の抽出量を増やすことができるとともに、抽出物中に含まれる複数種の有効成分の含有率のバランスをより好適なものとすることができる。その結果、前述したような脂肪代謝改善効果がより顕著に発揮される。また、有効成分の抽出効率を高めつつ、不要成分の抽出を効果的に防止することができる。また、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の香気、風味等をより優れたものとすることができる。

＜抽出工程＞
抽出工程では、エタノールを含有する抽出溶媒と、バラの花弁とを接触させて、バラ花弁の含有成分を抽出する。

本工程では、例えば、摘み取ったバラの花弁をそのまま用いてもよいし、バラの花弁に予め前処理を施したものを用いてもよい。

バラの花弁に対する前処理としては、例えば、洗浄処理、乾燥処理、凍結処理、加熱処理、粉砕処理、揉処理、発酵処理等が挙げられる。

抽出溶媒とバラの花弁との接触は、いかなる方法で行ってもよく、例えば、バラの花弁と抽出溶媒とを混合した後、有効成分の活性を失活させない程度に加温加熱する加熱抽出法や、超臨界抽出法等を採用することできる。また、所定量の抽出溶媒にバラの花弁を浸漬してバッチ処理する浸漬抽出法や連続的にバラの花弁を送り続ける連続抽出法等を採用することができる。

特に、本工程は、バラの花弁を前記抽出溶媒中に浸漬すること（浸漬抽出法）により行うのが好ましい。

これにより、低コストで、有効成分の抽出効率を高めることができ、単位重量の原料（バラ花弁抽出物）当たりの有効成分の抽出量を増やすことができるとともに、抽出物中に含まれる複数種の有効成分の含有率のバランスをより好適なものとすることができる。その結果、前述したような脂肪代謝改善効果がより顕著に発揮される。また、有効成分の抽出効率を高めつつ、不要成分の抽出をより効果的に防止することができる。また、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の香気、風味等をより優れたものとすることができる。

抽出溶媒は、エタノールを含有していればよいが、抽出溶媒中におけるエタノールの含有率は、２体積％以上８０体積％以下が好ましく、８体積％以上７０体積％以下がより好ましく、１４体積％以上６０体積％以下がさらに好ましい。

これにより、有効成分の抽出効率がさらに高まり、単位重量の原料（バラ花弁抽出物）当たりの有効成分の抽出量をさらに増やすことができるとともに、抽出物中に含まれる複数種の有効成分の含有率のバランスをより好適なものとすることができる。その結果、前述したような脂肪代謝改善効果がより顕著に発揮される。また、単位重量の原料から十分な量の有効成分を抽出するのに要する時間をさらに短縮することができ、脂肪代謝改善剤の生産性をさらに向上することができるとともに、脂肪代謝改善剤の製造過程における有効成分の劣化等をより効果的に防止することができる。また、有効成分の抽出効率を高めつつ、不要成分の抽出をより効果的に防止することができる。また、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の香気、風味等をさらに優れたものとすることができる。

また、抽出溶媒は、エタノールに加え、水を含む混合溶媒であるのが好ましい。
これにより、水溶性に優れたバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）を得ることができ、その後の処理が容易になるとともに、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の生体吸収性をより優れたものとすることができる。また、有効成分の抽出効率がさらに高まり、単位重量の原料（バラ花弁抽出物）当たりの有効成分の抽出量をさらに増やすことができるとともに、抽出物中に含まれる複数種の有効成分の含有率のバランスをより好適なものとすることができる。その結果、前述したような脂肪代謝改善効果がより顕著に発揮される。また、単位重量の原料から十分な量の有効成分を抽出するのに要する時間をさらに短縮することができ、脂肪代謝改善剤の生産性をさらに向上することができるとともに、脂肪代謝改善剤の製造過程における有効成分の劣化等をより効果的に防止することができる。また、有効成分の抽出効率を高めつつ、不要成分の抽出をより効果的に防止することができる。また、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の香気、風味等をさらに優れたものとすることができる。

抽出溶媒中における水の含有率は、２０体積％以上９５体積％以下が好ましく、３０体積％以上９０体積％以下がより好ましく、４０体積％以上８５体積％以下がさらに好ましい。

これにより、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の水溶性をさらに向上させることができる。有効成分の抽出効率がさらに高まり、単位重量の原料（バラ花弁抽出物）当たりの有効成分の抽出量をさらに増やすことができるとともに、抽出物中に含まれる複数種の有効成分の含有率のバランスをさらに好適なものとすることができる。その結果、前述したような脂肪代謝改善効果がさらに顕著に発揮される。また、単位重量の原料から十分な量の有効成分を抽出するのに要する時間をさらに短縮することができ、脂肪代謝改善剤の生産性をさらに向上することができるとともに、脂肪代謝改善剤の製造過程における有効成分の劣化等をさらに効果的に防止することができる。また、有効成分の抽出効率を高めつつ、不要成分の抽出をさらに効果的に防止することができる。また、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の香気、風味等をさらに優れたものとすることができる。

また、抽出溶媒は、エタノールおよび水以外の成分を含むものであってもよいが、エタノールおよび水以外の成分（その他の成分）の含有率は、３体積％以下であるのが好ましく、２体積％以下であるのがより好ましく、１体積％以下であるのがさらに好ましい。

また、抽出溶媒のｐＨは、４．０以上９．０以下が好ましく、４．５以上８．５以下がより好ましく、５．０以上８．０以下がさらに好ましい。

これにより、有効成分の不本意な変性等を効果的に防止し、より好適な組成の抽出物をさらに効率的に得ることができる。

抽出温度は、特に限定されないが、５℃以上８０℃以下であるのが好ましく、１０℃以上６０℃以下であるのがより好ましく、１５℃以上５０℃以下であるのがさらに好ましい。

これにより、有効成分の不本意な変性等を効果的に防止し、より好適な組成の抽出物を短時間で効率的に得ることができ、脂肪代謝改善剤の生産性をより向上させることができる。

また、抽出時間は、特に限定されないが、１時間以上１０日間以下であるのが好ましく、３時間以上７日間以下であるのがより好ましく、５時間以上５日間以下であるのがさらに好ましい。

これにより、有効成分の不本意な変性等を効果的に防止し、より好適な組成の抽出物をさらに効率的に得ることができ、脂肪代謝改善剤の生産性をより向上させることができる。

特に、本工程を浸漬抽出法により行い場合、抽出時間（抽出溶媒への浸漬時間）は、６時間以上１０日間以下であるのが好ましく、１２時間以上７日間以下であるのがより好ましく、１日間以上５日間以下であるのがさらに好ましい。

＜後処理工程＞
上記のような抽出工程の後、必要に応じて、後処理工程を行ってもよい。

後処理工程としては、例えば、抽出液中に含まれる異物である固形分を、濾過、デカンテーション、遠心分離等により除去する固形分除去処理を行う固形分除去工程、溶媒の少なくとも一部を除去する濃縮処理を行う濃縮工程、抽出物中に含まれる成分の少なくとも一部に対して、化学構造の変換を伴う化学反応処理を行う化学反応工程、抽出物中に含まれる不要成分の少なくとも一部を除去する精製処理を行う精製工程、得られた抽出物を所定の形状に成形する成形処理を施す成形工程等が挙げられ、これらのうち１つまたは２つ以上を組み合わせて行ってもよい。

例えば、化学反応工程を行うことにより、抽出物中に含まれる有効成分以外の成分（例えば、有効成分の前駆体等の非有効成分）を有効成分に変換することにより、最終的に得られる脂肪代謝改善剤中における有効成分の含有率を高めたり、複数種の有効成分の比率がより好適なものとなるように調整することができる。また、抽出物中に含まれる有効成分についても、化学反応を行ってもよい。これにより、例えば、抽出物中に含まれる複数種の有効成分の比率がより好適なものとなるように調整することができる。

精製工程で行う精製処理としては、例えば、分液漏斗等を用いた分液処理、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）やカラムクロマトグラフィー（高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）等を含む）等が挙げられる。

上記のうち少なくとも１つの工程は、例えば、異なるタイミングで複数回行ってもよい。例えば、濃縮工程を複数回行う場合、前記抽出工程で得られた抽出溶媒を含む抽出物に対して行い（第１の濃縮工程）、その後に行う精製工程後に、再度、精製工程で用いた溶媒（溶離液、展開溶媒等）を除去する濃縮工程（第２の濃縮工程）を行ってもよい。

また、精製工程を複数回行う場合、例えば、分液漏斗等を用いた分液処理を行う精製工程（第１の精製工程）と、カラムクロマトグラフィーを用いた精製処理を行う精製工程（第２の精製工程）とを組み合わせて行ってもよい。第１の精製工程と、第２の精製工程との間には、濃縮工程を行ってもよい。

カラムクロマトグラフィーで用いる充填材としては、例えば、イオン交換樹脂、合成吸着樹脂、活性炭、キレート樹脂、シリカゲル、アルミナ、デキストランや、これらの修飾体（例えば、オクタデシル化シリカゲル（ＯＤＳ）、ヒドロキシプロピル化デキストラン等）等が挙げられる。

各種クロマトグラフィーにおける溶離液・展開溶媒としては、例えば、水、水溶性溶媒、低極性溶媒、無極性溶媒等を用いることができ、２種以上の溶媒の混合物（混合溶媒）を用いてもよい。

水溶性溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の１価のアルコール；１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；アセトニトリル等が挙げられるが、炭素数１以上５以下の１価のアルコールが好ましく、メタノール、エタノールがより好ましい。

特に、溶離液・展開溶媒としては、水と水溶性溶媒との混合溶媒を用いるのが好ましく、水とエタノールとの混合溶媒を用いるのがより好ましい。

溶離液・展開溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いる場合、当該混合溶媒中におけるエタノールの含有率は、２０体積％以上９５体積％以下が好ましく、３０体積％以上９０体積％以下がより好ましく、４０体積％以上８５体積％以下がさらに好ましい。

これにより、不要成分を効率よく除去することができ、より好適な組成の抽出物を容易に得ることができる。

溶離液・展開溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いる場合、当該混合溶媒中における水の含有率は、２体積％以上８０体積％以下が好ましく、８体積％以上７０体積％以下がより好ましく、１４体積％以上６０体積％以下がさらに好ましい。

これにより、不要成分を効率よく除去することができ、より好適な組成の抽出物を容易に得ることができる。

濃縮処理を行う場合、当該濃縮処理としては、例えば、エバポレーターを用いた処理、噴霧乾燥（スプレードライ）、真空乾燥、凍結乾燥等の方法が挙げられる。

［組成物、成形体］
次に、本発明の組成物、成形体について説明する。

本発明の組成物および成形体は、前述したような本発明に係る脂肪代謝改善剤に加え、他の成分（その他の成分）を含有することを特徴とする。

これにより、細胞レベルでの総合的な脂肪代謝を効果的に改善する脂肪代謝改善剤を含有する組成物、成形体を提供することができる。特に、脂肪代謝改善効果を得つつ、その他の成分に対応する機能を発揮させることができ、例えば、食品や医薬品、医薬部外品等の各種組成物、各種成形体に好適に適用することができる。

また、上記のように、本発明に係るバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）は、バラ特有の優れた香気を有しており、穏やかな香気を感じることができ、かつ、苦み、渋み、えぐみ等の不快な味覚は抑えられており、全体として優れた風味が得られる。したがって、本発明の組成物、成形体においても、上記のような効果が得られる。

また、本発明に係るバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）自体が、優れた香気、風味を有しているため、矯味剤や香料等を使用しなかったり、矯味剤の使用量を抑制した場合であっても、本発明の組成物、成形体全体としての風味等を優れたものとすることができる。

本発明の成形体は、所定の形状に成形されたものである。
成形体を得るための成形方法は、特に限定されないが、例えば、圧縮成形、圧粉成形（打錠を含む）、押出成形、射出成形、カプセルへの充填、三次元造形法による成形等が挙げられる。

本発明の組成物、成形体の動物への投与方法は、特に限定されないが、例えば、経口投与、頬側投与、舌下投与、直腸投与、血管内投与（静脈内投与、動脈内投与等）、骨内投与、筋肉内投与、脳内投与、脳室内投与、髄腔内投与、皮下投与、腹腔内投与、眼内投与、鼻腔内投与、気管内投与、気管支内投与、経真皮投与、硬膜外投与、頭蓋内投与、経皮投与、膣内投与、子宮内投与、硝子体内投与、経粘膜投与等が挙げられる。

特に、本発明の組成物、成形体は、口腔内に付与して用いられる経口物であるのが好ましい。

経口物としては、例えば、食品、内服薬、吸入薬等の経口医薬品等のように口腔内に付与された後に、その大部分が食道、気道等の体腔（口腔以外の体腔）に導入されるものや、口腔用錠剤（舌下錠等）、口腔用軟膏等の経口医薬品のようにその大部分が口腔内の粘膜から吸収されるもの、歯磨き、うがい薬、洗口剤等の口腔ケア製品、噛みたばこ、ガム等のように一旦口腔内に付与した後に、その大部分が口から体外に排出されるもの等が挙げられる。

組成物、成形体の用途としては、例えば、食品；嗜好品（例えば、噛みたばこ等）；歯磨き、うがい薬、洗口剤等の口腔ケア製品；医薬品；医薬部外品；石鹸、ボディーソープ、手洗い用洗剤（ハンドソープ）、食器用洗剤、衣類用洗剤（柔軟剤を含む）、浴室用洗剤、トイレ用洗剤、ガラス用洗剤、車両用洗剤等の各種洗剤；シャンプー、リンス、コンディショナー、トリートメント、整髪料、毛染め剤、育毛剤、セッティング剤・スタイル保持剤（例えば、ジェル、ムース、スプレー等）、ポマード等のヘアケア製品；化粧水、クリーム、乳液、美容液、美白剤、洗顔料（洗顔用クレンザーを含む）等のスキンケア製品；リップクリーム、口紅等のリップ用製品；化粧下地、チーク、ファンデーションクリーム、マスカラ等の化粧品；ポリッシュ、ポリッシュリムーバー、ストレンスナー、レングスナー、ハードナー、キューティクルリムーバー、ソフナー等のネイルケア製品；シェービングクリームおよびローション、脱毛剤、髭剃り後のスキンコンディショナー等の脱毛関連製品；その他、アンチエイジング剤、制汗剤、日焼け止め剤、日焼け促進剤、香水、各種ワックス、入浴剤、冷却用スプレー等の冷却剤等が挙げられる。

なお、食品の形態には、固形状、半固形状（ゼリー、プリン等のゲル状等）に加え、液状が含まれ、食品は、飲み物等も含む概念である。また、調味料や風味剤、食品添加物、サプリメント（健康補助食品）も食品の概念に含まれる。

本発明に係る組成物、成形体を医薬品や医薬部外品に適用する場合、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤等の経口剤、坐剤、軟膏、噴霧剤、注射剤、点滴剤、スプレー剤、点眼剤、経鼻投与剤、貼付剤等の非経口剤の形態とすることができる。

前記他の成分として、例えば、賦形剤、増粘剤、ゲル化剤、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、着色剤、充填剤、結合剤、凝固剤、滑たく剤、ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤、繊維素グリコール酸カルシウム等の崩壊剤、ラクトース等の安定化剤、グルタミン酸、アスパラギン酸等の溶解補助剤、乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等の希釈剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、エリキシル剤、風味剤、芳香剤、甘味料、清涼化剤、香料、矯味剤、コーティング剤、他の有効成分（薬効成分）等を含ませてもよい。

特に、本発明を錠剤に適用する場合、例えば、ショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等の糖衣、または胃溶性もしくは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。

以上、本発明の好適な実施形態について説明したが、本発明は、これらに限定されない。

例えば、前述した実施形態では、食品等の用途（例えば、［組成物、成形体］の項で例示した用途）には、脂肪代謝改善剤とその他の成分を含む組成物または成形体を適用する場合について代表的に説明したが、本発明の脂肪代謝改善剤（バラ花弁抽出物やその精製物等）そのものを、その他の成分と混合等することなく、上記のような用途に用いてもよい。この場合、これらの用途に用いられるものの形態としては、例えば、［組成物、成形体］の項で例示したようなもの等が挙げられる。

以下に具体的な実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は、以下の実施例のみに限定されるものではない。なお、以下の説明において、特に温度条件、湿度条件を示していない処理は、室温（２３℃）、相対湿度５０％において行ったものである。また、各種測定条件についても、特に温度条件、湿度条件を示していないものは、室温（２３℃）、相対湿度５０％における数値である。

［バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の調製］
（実施例１）
まず、バラとしてロサ・センチフォリアを用意した。

ロサ・センチフォリアに乾燥処理を施し、この乾燥したロサ・センチフォリアの花弁２０ｋｇに、３０体積％のエタノール水溶液３００Ｌを加えて攪拌抽出した。

その後、ろ過により固形物を除去した後、得られた抽出液を減圧濃縮し、合成吸着剤を充填したカラムを用いたカラムクロマトグラフィーに供した。溶離液としては、７０体積％のエタノール水溶液を用いた。

得られた溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥することにより、平均粒径４２０μｍの粉末状のバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）を得た。

［評価］
以下に示す評価では、ヒト肝癌由来細胞株であるＨｅｐＧ２細胞に、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）を添加し、２４時間放置した際の、脂肪代謝関連遺伝子の各ｍＲＮＡレベルに与える影響を、Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ定量ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）法により検討した。

＜条件１＞
（１日目）
チャコールデキストラン処理した１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）を含有する、フェノールレッドフリーＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ）を培地として用いた。

１１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように６ウェル（ｗｅｌｌ）プレートにＨｅｐＧ２細胞をまき、３７℃、５％のＣＯ_２存在下で、２４時間培養した。

ＦＢＳとしては、ＧＥ Ｈｅｌｔｈｃａｒｅ社製、ＨｙＣｌｏｎｅ（登録商標）、ＳＨ３００６８－０３を用いた。また、フェノールレッドフリーＤＭＥＭとしては、ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社製、１６４２７５４を用いた。また、６ウェルプレートとしては、Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、ＦＡＬＣＯＮ（登録商標）、Ｎｏ．３５３０４６を用いた。

（２日目（２４時間後））
１０％ＦＢＳ含有、フェノールレッドフリーＤＭＥＭで培地交換し、２４時間培養した。

（３日目（４８時間後））
培地を吸引除去し、ＨｅｐＧ２細胞を２．５ｍＬの血清フリーフェノールレッドフリーＤＭＥＭで洗浄した。

バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）を１．０μｇ／ｍＬでＨｅｐＧ２細胞に添加し、２４時間培養した。

＜条件２＞
バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の添加量を２．５μｇ／ｍＬとした以外は、前記条件１と同様にして培養した。

＜条件３＞
バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）の添加量を５．０μｇ／ｍＬとした以外は、前記条件１と同様にして培養した。

＜コントロール＞
バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）を添加しなかった（０．０μｇ／ｍＬ）以外は、前記条件１と同様にして培養した。

２４時間培養後、すべてのＨｅｐＧ２細胞からｔｏｔａｌ ＲＮＡを回収し、Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲによってＨｅｐＧ２細胞中の脂肪代謝関連遺伝子、およびβ－ａｃｔｉｎのｍＲＮＡレベルを測定した。

脂肪代謝関連遺伝子としては、標的遺伝子としてＬＤＬＲ遺伝子、ＡＣＣ１遺伝子、ＦＡＳ遺伝子、ＡＣＯＸ遺伝子、ＣＰＴ１ａ遺伝子、ＳＲＥＢＰ１ｃ遺伝子について、そのＲＮＡレベルを測定した。
また、β－ａｃｔｉｎ ｍＲＮＡレベルは、データ補正として用いた。

ＬＤＬの取り込みに関与するＬＤＬＲ遺伝子の発現がコントロールに比べて増加したときは、脂肪輸送を促進するものと判断することができる。

脂肪酸のβ酸化に関与するＣＰＴ１ａ遺伝子、ＡＣＯＸ遺伝子の発現がコントロールに比べて増加したときは、脂肪の分解を促進するものと判断することができる。

脂肪酸の合成に関与するＡＣＣ１遺伝子、ＳＲＥＢＰ１ｃ遺伝子、ＦＡＳ遺伝子の発現がコントロールに比べて減少したときは、脂肪の蓄積を抑制するものと判断することができる。

Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲで用いた、標的遺伝子の逆転写反応におけるプライマーの配列を表１に示す。実験結果の統計分析にはテューキーの検定（Ｔｕｋｅｙ’ｓ ｔｅｓｔ）を用いた。

ＨｅｐＧ２細胞にバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）を各種濃度で添加した場合の、ＬＤＬＲ遺伝子に対する影響を表２および図１に、ＡＣＣ１遺伝子に対する影響を表３および図２に、ＦＡＳ遺伝子に対する影響を表４および図３に、ＳＲＥＢＰ１ｃ遺伝子に対する影響を表５および図４に、ＡＣＯＸ遺伝子に対する影響を表６および図５に、ＣＰＴ１ａ遺伝子に対する影響を表７および図６に、それぞれ示す。

なお、表２～表７および図１～図６において、「％ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、コントロールに対する各遺伝子発現量の変化割合を示す。

表２～表７および図１～図６から明らかなように、条件１～条件３のいずれにおいても、本発明の脂肪代謝改善剤（バラ花弁抽出物）では、ＬＤＬの取り込みに関与するＬＤＬＲ遺伝子の発現がコントロールに比べて増加する傾向が認められ、脂肪酸のβ酸化に関与するＣＰＴ１ａ遺伝子、ＡＣＯＸ遺伝子の発現がコントロールに比べて増加する傾向が認められ、脂肪酸の合成に関与するＡＣＣ１遺伝子、ＳＲＥＢＰ１ｃ遺伝子、ＦＡＳ遺伝子の発現がコントロールに比べて減少する傾向が認められた。

特に、ＬＤＬＲ遺伝子の発現については、条件１～条件３のいずれにおいても有意に増加しており、ＡＣＣ１遺伝子の発現については、条件２において有意に増加しており、ＳＲＥＢＰ１ｃ遺伝子の発現については、条件２および条件３において有意に減少しており、ＡＣＯＸ遺伝子の発現については、条件１～条件３のいずれにおいても有意に増加しており、ＣＰＴ１ａ遺伝子の発現については、条件２および条件３において有意に増加していた。

このように、ヒト肝癌由来細胞株であるＨｅｐＧ２細胞に、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）を投与することにより、非添加の場合（コントロール）に比べて、ＬＤＬの取り込みに関与するＬＤＬ受容体遺伝子、脂肪酸のβ酸化に関与するＣＰＴ１ａ遺伝子、ＡＣＯＸ遺伝子の発現が増加しており、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）は、ＬＤＬの取り込みを促進し、さらに脂肪酸のβ酸化を促進するものと判断することができる。

また、ＨｅｐＧ２細胞に、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）を投与することにより、非添加の場合（コントロール）に比べて、脂肪酸の合成に関与するＡＣＣ１遺伝子、ＳＲＥＢＰ１ｃ遺伝子の発現が減少しており、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）は、脂肪酸の合成を抑制するものと判断することができる。

したがって、バラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）は、動物に投与されることで、血漿中から肝細胞へのＬＤＬの取り込み（脂肪輸送）、および、肝細胞における脂肪酸のβ酸化（脂肪分解）を促進し、かつ、肝細胞における脂肪酸の合成（脂肪蓄積）を抑制するという、細胞レベルで総合的に脂肪代謝をより効果的に改善するものと判断することができる。

また、バラとして、ロサ・センチフォリアの代わりにロサ・ガリカを用いた以外は、前記実施例１と同様にしてバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）を得、これについて前記と同様の評価を行ったところ、前記と同様の結果が得られた。

また、抽出溶媒としての水とエタノールとの混合溶媒中におけるエタノールの含有率を５体積％以上８０体積％以下の範囲で種々変更し、水の含有率を２０体積％以上９５体積％以下の範囲で種々変更した以外は、前記と同様にしてバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）を得、これについて前記と同様の評価を行ったところ、前記と同様の結果が得られた。

また、溶離液としての水とエタノールとの混合溶媒中におけるエタノールの含有率を２０体積％以上９５体積％以下の範囲で種々変更し、水の含有率を５体積％以上８０体積％以下の範囲で種々変更した以外は、前記と同様にしてバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）を得、これについて前記と同様の評価を行ったところ、前記と同様の結果が得られた。

また、前記のようにして得られたバラ花弁抽出物（脂肪代謝改善剤）：１００質量部に対して、粉末状の澱粉：３９５質量部、微粒二酸化ケイ素：５質量部を混合して、食品（組成物）としての粉末混合品を得た。
また、当該組成物を圧縮成形して、ブロック状の食品（成形体）を得た。

これらの食品（粉末状の組成物およびブロック状の成形体）をボランティアの被験者に食してもらったところ、バラの香気が感じられる一方で、苦み、渋み、えぐみ等の不快な味覚は感じられず、全体として優れた風味が得られた。

Claims (1)

1. 抽出溶媒としての１４体積％以上６０体積％以下のエタノール水溶液と、ロサ・センチフォリアの花弁とを接触させて、前記花弁の含有成分を抽出する抽出工程と、
   前記抽出工程で得られた抽出物を、４０体積％以上８５体積％以下のエタノール水溶液を溶離液として用い、充填材として合成吸着樹脂を用いたカラムクロマトグラフィーに供することにより精製する精製工程と、
   前記精製工程で得られた溶出液を濃縮する濃縮工程とを有することを特徴とするＨｅｐＧ２細胞におけるＬＤＬＲ遺伝子の発現促進剤の製造方法。

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