JP7011815B2 - がんの判定方法 - Google Patents
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(1)対象におけるがんの有無を判定する方法であって、
(I):
WDR1-2ペプチド(Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser)(配列番号:1)またはその変異体、
WDR1-9ペプチド(Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser)(配列番号:2)または変異体、
WDR1-16ペプチド(Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala)(配列番号:3)またはその変異体、
WDR1-21ペプチド(Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val)(配列番号:4)またはその変異体、
WDR1-24ペプチド(Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr)(配列番号:5)またはその変異体、
WDR1-33ペプチド(Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn)(配列番号:6)またはその変異体、および
WDR1-37ペプチド(Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu)(配列番号:7)またはその変異体
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを用いて対象由来の試料中の抗WDR1抗体の力価を測定すること、および/または
(II):
フィブロネクチン1-19ペプチド(Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile)(配列番号:8)またはその変異体、
フィブロネクチン1-20ペプチド(Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly)(配列番号:9)またはその変異体、
フィブロネクチン1-27ペプチド(Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser)(配列番号:10)またはその変異体、
フィブロネクチン1-29ペプチド(Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile)(配列番号:11)またはその変異体、および
フィブロネクチン1-30ペプチド(Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys)(配列番号:12)またはその変異体
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを用いて対象由来の試料中の抗フィブロネクチン1抗体の力価を測定すること
を含む方法。
(2)がんが分泌腺組織に生じるがんである、(1)記載の方法。
(3)がんが甲状腺がんである、(2)記載の方法。
(4)がんが進行がんである、(1)~(3)のいずれか記載の方法。
(5)WDR1-2ペプチド(Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser)(配列番号:1)またはその変異体、
WDR1-9ペプチド(Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser)(配列番号:2)または変異体、
WDR1-16ペプチド(Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala)(配列番号:3)またはその変異体、
WDR1-21ペプチド(Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val)(配列番号:4)またはその変異体、
WDR1-24ペプチド(Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr)(配列番号:5)またはその変異体、
WDR1-33ペプチド(Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn)(配列番号:6)またはその変異体、
WDR1-37ペプチド(Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu)(配列番号:7)またはその変異体
フィブロネクチン1-19ペプチド(Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile)(配列番号:8)またはその変異体、
フィブロネクチン1-20ペプチド(Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly)(配列番号:9)またはその変異体、
フィブロネクチン1-27ペプチド(Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser)(配列番号:10)またはその変異体、
フィブロネクチン1-29ペプチド(Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile)(配列番号:11)またはその変異体、および
フィブロネクチン1-30ペプチド(Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys)(配列番号:12)またはその変異体
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを含む、対象におけるがんの有無を判定するためのキット。
(6)がんが分泌腺組織に生じるがんである、(5)記載のキット。
(7)がんが甲状腺がんである、(6)記載のキット。
(8)がんが進行がんである、(5)~(7)のいずれか記載のキット。
(9)WDR1-2ペプチド(Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser)(配列番号:1)またはその変異体、
WDR1-9ペプチド(Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser)(配列番号:2)または変異体、
WDR1-16ペプチド(Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala)(配列番号:3)またはその変異体、
WDR1-21ペプチド(Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val)(配列番号:4)またはその変異体、
WDR1-24ペプチド(Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr)(配列番号:5)またはその変異体、
WDR1-33ペプチド(Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn)(配列番号:6)またはその変異体、および
WDR1-37ペプチド(Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu)(配列番号:7)またはその変異体
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを用いることを特徴とする、対象由来の試料中の抗WDR1抗体の力価を測定する方法。
(10)WDR1-2ペプチド(Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser)(配列番号:1)またはその変異体、
WDR1-9ペプチド(Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser)(配列番号:2)または変異体、
WDR1-16ペプチド(Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala)(配列番号:3)またはその変異体、
WDR1-21ペプチド(Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val)(配列番号:4)またはその変異体、
WDR1-24ペプチド(Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr)(配列番号:5)またはその変異体、
WDR1-33ペプチド(Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn)(配列番号:6)またはその変異体、および
WDR1-37ペプチド(Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu)(配列番号:7)またはその変異体
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを含む、抗WDR1抗体の力価を測定するためのキット。
(11)フィブロネクチン1-19ペプチド(Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile)(配列番号:8)またはその変異体、
フィブロネクチン1-20ペプチド(Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly)(配列番号:9)またはその変異体、
フィブロネクチン1-27ペプチド(Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser)(配列番号:10)またはその変異体、
フィブロネクチン1-29ペプチド(Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile)(配列番号:11)またはその変異体、および
フィブロネクチン1-30ペプチド(Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys)(配列番号:12)またはその変異体
からなる群より選択される1種またはそれ以上のペプチドを用いることを特徴とする、対象由来の試料中の抗フィブロネクチン抗体の力価を測定する方法。
(12)フィブロネクチン1-19ペプチド(Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile)(配列番号:8)またはその変異体、
フィブロネクチン1-20ペプチド(Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly)(配列番号:9)またはその変異体、
フィブロネクチン1-27ペプチド(Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser)(配列番号:10)またはその変異体、
フィブロネクチン1-29ペプチド(Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile)(配列番号:11)またはその変異体、および
フィブロネクチン1-30ペプチド(Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys)(配列番号:12)またはその変異体
からなる群より選択される1種またはそれ以上のペプチドを含む、抗フィブロネクチン抗体の力価を測定するためのキット。
WDR1-9:Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser(配列番号:2)
WDR1-16:Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala(配列番号:3)
WDR1-21:Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val(配列番号:4)
WDR1-24:Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr(配列番号:5)
WDR1-33:Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn(配列番号:6)
WDR1-37:Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu(配列番号:7)
フィブロネクチン1-20:Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly(配列番号:9)
フィブロネクチン1-27:Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser(配列番号:10)
フィブロネクチン1-29:Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile(配列番号:11)
フィブロネクチン1-30:Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys(配列番号:12)
対象におけるがんの有無を判定する方法であって、
(I):
WDR1-2ペプチド(Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser)(配列番号:1)またはその変異体、
WDR1-9ペプチド(Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser)(配列番号:2)または変異体、
WDR1-16ペプチド(Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala)(配列番号:3)またはその変異体、
WDR1-21ペプチド(Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val)(配列番号:4)またはその変異体、
WDR1-24ペプチド(Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr)(配列番号:5)またはその変異体、
WDR1-33ペプチド(Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn)(配列番号:6)またはその変異体、および
WDR1-37ペプチド(Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu)(配列番号:7)またはその変異体
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを用いて対象由来の試料中の抗WDR1抗体の力価を測定すること、あるいは
(II):
フィブロネクチン1-19ペプチド(Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile)(配列番号:8)またはその変異体、
フィブロネクチン1-20ペプチド(Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly)(配列番号:9)またはその変異体、
フィブロネクチン1-27ペプチド(Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser)(配列番号:10)またはその変異体、
フィブロネクチン1-29ペプチド(Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile)(配列番号:11)またはその変異体、および
フィブロネクチン1-30ペプチド(Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys)(配列番号:12)またはその変異体
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを用いて対象由来の試料中の抗フィブロネクチン1抗体の力価を測定すること
を含む方法
を提供する。
WDR1-2ペプチド(Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser)(配列番号:1)またはその変異体、
WDR1-9ペプチド(Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser)(配列番号:2)または変異体、
WDR1-16ペプチド(Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala)(配列番号:3)またはその変異体、
WDR1-21ペプチド(Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val)(配列番号:4)またはその変異体、
WDR1-24ペプチド(Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr)(配列番号:5)またはその変異体、
WDR1-33ペプチド(Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn)(配列番号:6)またはその変異体、
WDR1-37ペプチド(Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu)(配列番号:7)またはその変異体
フィブロネクチン1-19ペプチド(Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile)(配列番号:8)またはその変異体、
フィブロネクチン1-20ペプチド(Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly)(配列番号:9)またはその変異体、
フィブロネクチン1-27ペプチド(Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser)(配列番号:10)またはその変異体、
フィブロネクチン1-29ペプチド(Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile)(配列番号:11)またはその変異体、および
フィブロネクチン1-30ペプチド(Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys)(配列番号:12)またはその変異体
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを含む、対象におけるがんの有無を判定するためのキット
を提供する。本発明のキットはさらに抗WDR1抗体力価および/または抗フィブロネクチン1抗体力価を測定するための手段を含んでいてもよく、例えばELISA用試薬や器具を含んでいてもよい。通常は、キットに取扱説明書が添付される。本発明のキットを用いて、がんの有無の判定および進行がんの検出を高い精度で効率的に行うことができる。
WDR1-2ペプチド(Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser)(配列番号:1)またはその変異体、
WDR1-9ペプチド(Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser)(配列番号:2)または変異体、
WDR1-16ペプチド(Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala)(配列番号:3)またはその変異体、
WDR1-21ペプチド(Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val)(配列番号:4)またはその変異体、
WDR1-24ペプチド(Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr)(配列番号:5)またはその変異体、
WDR1-33ペプチド(Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn)(配列番号:6)またはその変異体、および
WDR1-37ペプチド(Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu)(配列番号:7)またはその変異体
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを用いることを特徴とする、対象由来の試料中の抗WDR1抗体の力価を測定する方法
を提供する。本発明の方法を用いることにより、抗WDR1抗体の力価を高い精度で測定することができる。
1種またはそれ以上の上記ペプチドまたはその変異体を含む、対象由来の試料中の抗WDR1抗体の力価を測定するためのキット
を提供する。本発明のキットはさらに抗WDR1抗体力価を測定するための手段を含んでいてもよく、例えばELISA用試薬や器具を含んでいてもよい。通常は、キットに取扱説明書が添付される。本発明のキットを用いることにより、抗WDR1抗体の力価を高い精度で測定することができる。
フィブロネクチン1-19ペプチド(Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile)(配列番号:8)またはその変異体、
フィブロネクチン1-20ペプチド(Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly)(配列番号:9)またはその変異体、
フィブロネクチン1-27ペプチド(Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser)(配列番号:10)またはその変異体、
フィブロネクチン1-29ペプチド(Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile)(配列番号:11)またはその変異体、および
フィブロネクチン1-30ペプチド(Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys)(配列番号:12)またはその変異体
からなる群より選択される1種またはそれ以上のペプチドを用いることを特徴とする、対象由来の試料中の抗フィブロネクチン抗体の力価を測定する方法
を提供する。本発明の方法を用いることにより、抗フィブロネクチン1抗体の力価を高い精度で測定することができる。
1種またはそれ以上の上記ペプチドまたはその変異体を含む、対象由来の試料中の抗フィブロネクチン1抗体の力価を測定するためのキット
を提供する。本発明のキットはさらに抗フィブロネクチン1抗体力価を測定するための手段を含んでいてもよく、例えばELISA用試薬や器具を含んでいてもよい。通常は、キットに取扱説明書が添付される。本発明のキットを用いることにより、抗フィブロネクチン1抗体の力価を高い精度で測定することができる。
(1)WDR1部分ペプチドの選定
本発明者らは、以前、GST結合組み換えWDR1を用いて抗体力価の測定を行ったが、以下のような課題があった。すなわち、WDR1の構造上、疎水性領域に富み、大腸菌、酵母などを用いた発現系にて安定した抗原蛋白の供給が困難であった。また、GST結合タンパクからGSTを切り離すとWDR1が不安定化するため、コントロールとしてGSTを用いることが必須であった。さらに、GST結合WDR1の精製には、封入体の破砕や透析の処理が必要となり、長期保存で断片化が生じるなど、長期保存にも問題があった。
WDR1-2:Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser(配列番号:1)
WDR1-9:Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser(配列番号:2)
WDR1-16:Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala(配列番号:3)
WDR1-21:Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val(配列番号:4)
WDR1-24:Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr(配列番号:5)
WDR1-33:Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn(配列番号:6)
WDR1-37:Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu(配列番号:7)。
対象血清試料中のWDR1抗体力価はELISA法により測定した。以下にELISA法の手順を説明する。
ペプチド濃度が10μg/mLとなるように0.1Mカーボネートバッファー(pH9.6)にて希釈し、プレートへ塗布し、4℃で一晩静置にて反応させた。反応後、0.01% Tween/PBSにて3回洗浄し、0.5%ヤギ血清、0.2%ゼラチン/PBSにてブロッキングした(室温、1時間以上反応)。その後0.01%Tween/PBSにて洗浄した。
血清試料を0.5%ヤギ血清、0.2%ゼラチン/PBSにて1/500希釈し、(i)のペプチドプレートで4℃、1時間、静置にて反応させた。反応後、0.01% Tween/PBSにて3回洗浄した。二次抗体(Anti-Human IgG (H+L),HRP Conjugate/Promega)を0.5%ヤギ血清、0.2%ゼラチン/PBSにて1/5000希釈し、ペプチドプレートで室温、1時間、静置にて反応させた。反応後、0.01% Tween/PBSにて3回洗浄した。酵素基質液(TMB+/Dako)と反応させ、室温で10分静置して発色させた。1N硫酸にて反応を停止させ、450nmの吸光度を測定した。
WDR1-2ペプチドと、進行甲状腺がん患者血清(n=16)、非進行甲状腺がん患者血清(n=8)、良性甲状腺結節患者血清(n=14)、自己免疫性甲状腺疾患患者血清(n=15)および正常コントロール対象血清(n=7)との反応をELISAにて検討した。進行甲状腺がんは未分化がん(9例)およびステージII以上の進行甲状腺乳頭がん(7例)であった(フィブロネクチン1-20ペプチドおよびフィブロネクチン1-29ペプチドを用いた実験を除き、以下の実験でも同じ)。非進行甲状腺がんはステージIの甲状腺乳頭がんであった(以下の実験でも同じ)。自己免疫性甲状腺疾患はバセドウ病(10例)および慢性甲状腺炎(5例)であった(以下の実験でも同じ)。結果を図1に示す。進行甲状腺がん患者血清のWDR1抗体力価が最も高く、次に非進行甲状腺がん患者血清のWDR1抗体力価が高かった。良性甲状腺結節患者血清、自己免疫性甲状腺疾患患者血清および正常コントロール対象血清では、進行甲状腺がん患者血清および非進行甲状腺がん患者血清と比較してWDR1抗体力価は低値であった。これらの結果から、WDR1-2ペプチドは、高い精度で甲状腺がんを検出でき、しかも進行がんを効率的に検出できることがわかった。
(1)フィブロネクチン1部分ペプチドの選定
本発明者らは、以前、組み換えフィブロネクチン1を用いて抗体力価の測定を行ったが、WDR1の場合と同様、タンパクの製造上の問題や長期保存性に関する問題があった。
フィブロネクチン1-19:Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile(配列番号:8)
フィブロネクチン1-20:Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly(配列番号:9)
フィブロネクチン1-27:Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser(配列番号:10)
フィブロネクチン1-29:Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile(配列番号:11)
フィブロネクチン1-30:Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys(配列番号:12)。
実施例1にて説明したELISA法により、甲状腺患者の血清試料中の抗フィブロネクチン1抗体力価を測定した。
フィブロネクチン1-19ペプチドと、進行甲状腺がん患者血清(n=16)、非進行甲状腺がん患者血清(n=8)、良性甲状腺結節患者血清(n=14)、自己免疫性甲状腺疾患患者血清(n=15)および正常コントロール対象血清(n=7)との反応をELISAにて検討した。結果を図8に示す。進行甲状腺がん患者血清のフィブロネクチン1抗体力価が最も高く、次に非進行甲状腺がん患者血清のフィブロネクチン1抗体力価が高かった。良性甲状腺結節患者血清、自己免疫性甲状腺疾患患者血清および正常コントロール対象血清では、進行甲状腺がん患者血清および非進行甲状腺がん患者血清と比較してフィブロネクチン1抗体力価は低値であった。これらの結果から、フィブロネクチン1-19ペプチドは、高い精度で甲状腺がんを検出でき、しかも進行がんを効率的に検出できることがわかった。
配列番号:2はWDR1-9ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号:3はWDR1-16ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号:4はWDR1-21ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号:5はWDR1-24ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号:6はWDR1-33ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号:7はWDR1-37ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号:8はフィブロネクチン1-19ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号:9はフィブロネクチン1-20ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号:10はフィブロネクチン1-27ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号:11はフィブロネクチン1-29ペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号:12はフィブロネクチン1-30ペプチドのアミノ酸配列である。
Claims (8)
- 対象における甲状腺がんの有無を判定するための方法であって、
(I):
WDR1-2ペプチド(Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser)(配列番号:1)、
WDR1-9ペプチド(Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser)(配列番号:2)、
WDR1-16ペプチド(Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala)(配列番号:3)、
WDR1-21ペプチド(Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val)(配列番号:4)、
WDR1-24ペプチド(Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr)(配列番号:5)、
WDR1-33ペプチド(Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn)(配列番号:6)、および
WDR1-37ペプチド(Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu)(配列番号:7)
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを用いて対象由来の試料中の抗WDR1抗体の力価を測定すること、および/または
(II):
フィブロネクチン1-19ペプチド(Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile)(配列番号:8)、
フィブロネクチン1-20ペプチド(Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly)(配列番号:9)、
フィブロネクチン1-27ペプチド(Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser)(配列番号:10)、
フィブロネクチン1-29ペプチド(Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile)(配列番号:11)、および
フィブロネクチン1-30ペプチド(Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys)(配列番号:12)
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを用いて対象由来の試料中の抗フィブロネクチン1抗体の力価を測定すること
を含む方法。 - 甲状腺がんが進行がんである、請求項1記載の方法。
- WDR1-2ペプチド(Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser)(配列番号:1)、
WDR1-9ペプチド(Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser)(配列番号:2)、
WDR1-16ペプチド(Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala)(配列番号:3)、
WDR1-21ペプチド(Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val)(配列番号:4)、
WDR1-24ペプチド(Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr)(配列番号:5)、
WDR1-33ペプチド(Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn)(配列番号:6)、
WDR1-37ペプチド(Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu)(配列番号:7)
フィブロネクチン1-19ペプチド(Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile)(配列番号:8)、
フィブロネクチン1-20ペプチド(Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly)(配列番号:9)、
フィブロネクチン1-27ペプチド(Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser)(配列番号:10)、
フィブロネクチン1-29ペプチド(Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile)(配列番号:11)、および
フィブロネクチン1-30ペプチド(Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys)(配列番号:12)
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを含む、対象における甲状腺がんの有無を判定するためのキット。 - 甲状腺がんが進行がんである、請求項3記載のキット。
- WDR1-2ペプチド(Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser)(配列番号:1)、
WDR1-9ペプチド(Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser)(配列番号:2)、
WDR1-16ペプチド(Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala)(配列番号:3)、
WDR1-21ペプチド(Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val)(配列番号:4)、
WDR1-24ペプチド(Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr)(配列番号:5)、
WDR1-33ペプチド(Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn)(配列番号:6)、および
WDR1-37ペプチド(Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu)(配列番号:7)
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを用いることを特徴とする、対象由来の試料中の抗WDR1抗体の力価を測定する方法。 - WDR1-2ペプチド(Ser-Phe-Ala-Gly-Lys-Gly-His-Thr-Asn-Gln-Val-Ser)(配列番号:1)、
WDR1-9ペプチド(Val-Arg-Tyr-Thr-Ser-Leu-Met-Leu-Arg-Asp-Tyr-Ser)(配列番号:2)、
WDR1-16ペプチド(Pro-Lys-Cys-Val-Ala-Val-Gly-Pro-Gly-Gly-Tyr-Ala)(配列番号:3)、
WDR1-21ペプチド(Phe-Ser-Ile-Asp-Asn-Pro-Gly-Tyr-Glu-Pro-Glu-Val)(配列番号:4)、
WDR1-24ペプチド(Glu-Gly-Lys-Leu-Leu-Glu-Ala-Lys-Gly-Pro-Val-Thr)(配列番号:5)、
WDR1-33ペプチド(Val-Phe-Ser-Val-Ala-Asp-Gly-Tyr-Ser-Glu-Asn-Asn)(配列番号:6)、および
WDR1-37ペプチド(Met-Met-Val-Tyr-Val-Trp-Thr-Leu-Ser-Asp-Pro-Glu)(配列番号:7)
からなる群より選択される1種または2種のペプチドを含む、抗WDR1抗体の力価を測定するためのキット。 - フィブロネクチン1-19ペプチド(Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile)(配列番号:8)、
フィブロネクチン1-20ペプチド(Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly)(配列番号:9)、
フィブロネクチン1-27ペプチド(Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser)(配列番号:10)、
フィブロネクチン1-29ペプチド(Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile)(配列番号:11)、および
フィブロネクチン1-30ペプチド(Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys)(配列番号:12)
からなる群より選択される1種またはそれ以上のペプチドを用いることを特徴とする、対象由来の試料中の抗フィブロネクチン抗体の力価を測定する方法。 - フィブロネクチン1-19ペプチド(Arg-Thr-Ile-Lys-Pro-Asp-Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile)(配列番号:8)、
フィブロネクチン1-20ペプチド(Val-Arg-Ser-Tyr-Thr-Ile-Thr-Gly-Leu-Gln-Pro-Gly)(配列番号:9)、
フィブロネクチン1-27ペプチド(Ser-Asn-Leu-Arg-Phe-Leu-Ala-Thr-Thr-Pro-Asn-Ser)(配列番号:10)、
フィブロネクチン1-29ペプチド(Leu-Leu-Val-Ser-Trp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile)(配列番号:11)、および
フィブロネクチン1-30ペプチド(Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-Ile-Thr-Gly-Tyr-Ile-Ile-Lys)(配列番号:12)
からなる群より選択される1種またはそれ以上のペプチドを含む、抗フィブロネクチン抗体の力価を測定するためのキット。
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---|---|---|---|
JP2018045806A JP7011815B2 (ja) | 2018-03-13 | 2018-03-13 | がんの判定方法 |
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JP2019158606A JP2019158606A (ja) | 2019-09-19 |
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CN116023443B (zh) * | 2022-11-24 | 2024-04-30 | 安徽农业大学 | 具有肝癌细胞毒性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的环色-丝-缬-亮-亮肽及制备方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101144323B1 (ko) * | 2009-12-30 | 2012-05-11 | 한국과학기술연구원 | 유방암 진단용 자가항체마커 및 이의 조합으로 구성된 다중마커진단 키트 |
-
2018
- 2018-03-13 JP JP2018045806A patent/JP7011815B2/ja active Active
Non-Patent Citations (2)
Title |
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Autoantibody against WD Repeat Domain 1 Is a Novel Serological Biomarker for Screening of Thyroid Neoplasia,Clinical Endocrinology,2013年,Vol.79, No.1,pp.35-42 |
Local Radiotherapy Increases the Level of Autoantibodies to Ribosomal P0 protein but not to Heat Schock Proteins, Extracellular Matrix Molecules and EGFR/ErbB2 Receptors i Prostate Cancer Patients,Oncology Reports,2013年,Vol.29, No.3,pp.1167-1174 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2019158606A (ja) | 2019-09-19 |
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