JP7008452B2

JP7008452B2 - 高吸収型経口チロシン製剤

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Publication number: JP7008452B2
Application number: JP2017183667A
Authority: JP
Inventors: 晃太郎田村; 真純岩下; 慶彦峯岸
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2017-09-25
Filing date: 2017-09-25
Publication date: 2022-01-25
Anticipated expiration: 2037-09-25
Also published as: US20200261533A1; WO2019059356A1; JP2019059678A; US11278586B2

Description

本発明はチロシンの生体吸収性を向上させた高吸収型経口チロシン製剤に関する。

チロシンは、タンパク質を構成するアミノ酸の一種で、アミノ酸輸液や経口栄養剤などの栄養成分としても用いられている。また、脳内神経伝達物質ドーパミンの前駆体であることから、ストレスやうつ症状を軽減することが知られており（非特許文献１，２）、サプリメント等の健康食品の成分としても用いられている。

一方、チロシンは難水溶性であり、生体吸収性が低いことが知られている。これに対して、チロシンを誘導体化することによりチロシンの溶解性を改善することが行われている。例えば、アラニルチロシンを経口投与した場合に、チロシンの血中濃度が速やかに上昇されることが報告されている(特許文献１)。しかしながら、チロシンの生体利用率を高めるには十分ではなかった。

また、遊離アミノ酸の形態での点滴投与が困難なチロシンをジペプチドとして点滴投与る方法(特許文献２等)も知られているが、経口摂取でチロシンの血中濃度を高めるものではない。

国際特許公開第２００９／０３８１０６号特開平２－１２１９２８号公報

Tyrosine for depression. J. Psychiat. Res. 1982-83 Vol.17 No.2 p175-180 Treatment with tyrosine, a neurotransmitter precursor, reduces environmental stress in human. Brain Res. Bull. 1989 Vol.22 p759-762

本発明は、経口摂取した場合にチロシンの生体吸収性が優れたチロシン製剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題に鑑み検討したところ、チロシンのジペプチド誘導体であるグリシルチロシンを経口投与した場合に、チロシンの生体吸収性が格段に向上し、その効果はアラニルチロンシンより優れていることを見出した。

すなわち、本発明は、以下の１）～３）に係るものである。
１）グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を含有する高吸収型経口チロシン製剤。
２）グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする体内チロシン濃度増加剤。
３）グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする脳内神経伝達物質の枯渇から生じる症状の予防又は改善剤。

本発明によれば、経口摂取による生体利用率が低いことが知られていたチロシンの血中移行性を高めることができる。したがって、より少ない摂取量でチロシンに基づく生理活性を効率的に発揮させることが可能となる。

製剤投与後の血中チロシン濃度を示すグラフ。製剤投与後の最高血中濃度（Cmax）及び上昇血中濃度－時間曲線下面積（iAUC）を示すグラフ

本発明の高吸収型経口チロシン製剤（以下、「チロシン製剤」と称する）において、「グリシルチロシン」は、下記式（１）で示されるジペプチドであり、その構成アミノ酸であるチロシンは、Ｌ体、Ｄ体、ＤＬ体のいずれであってもよいが、Ｌ体が好ましい。

グリシルチロシンの塩としては、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩等が挙げられる。
酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、α－ケトグルタル酸塩、グルコン酸塩、カプリル酸塩等の有機酸塩が挙げられる。

金属塩としては、アルカリ金属（カリウム、ナトリウム等）の塩、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）の塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等が挙げられる。
アンモニウム塩としては、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等の塩が挙げられる。
有機アミン付加塩としては、例えばトリエチルアミン、メチルアミン、ジメチルアミン、シクロペンチルアミン、ベンジルアミン、フェネチルアミン、ピペリジン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、リジン、アルギニン、Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン等の塩が挙げられる。

溶媒和物としては、例えば、水、アルコール系の溶媒（例えば、エタノール等）との溶媒和物が挙げられ、好適には水和物である。

本発明におけるグリシルチロシンは、化学合成法、蛋白質加水分解法、酵素法または発酵法など、いずれの製造方法で製造されたものでもよい。
例えば、該当アミノ酸配列を有する天然蛋白質を酵素的に加水分解することによって得る方法や、ベリヒテ・デァ・ドイチェン・ケミッシェン・ゲゼルシャフト（Berichte der Deutschen Chemischen Gesellschaft）、2486頁（1904年）に記載された化学合成法等が挙げられる。

また、本発明におけるグリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物は、エボニック社、東京化成工業社、和光純薬工業社等から販売されている市販品を用いることもできる。

グリシルチロシンの経口投与は、後記実施例に示すように、チロシンを投与した場合に比べてチロシンの生体吸収性が格段に向上し、その作用はアラニルチロシンよりも優れている。
したがって、グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を含有する製剤は、高吸収型経口チロシン製剤となり得る。
「高吸収型経口チロシン製剤」とは、ヒトまたは非ヒト動物へ経口投与した場合に、チロシン自体を投与した場合に比べて、速やかに生体に吸収され体内チロシン濃度を増大させる製剤を意味する。
尚、生体吸収性の向上又は体内チロシン濃度の増大は、製剤投与後の最高血中濃度（Cmax）や投与後一定期間の上昇血中濃度－時間曲線下面積（iAUC：increase area under the curve）等を測定することにより評価することができる。

本発明のチロシン製剤は、グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を、必要により製剤学的に許容し得る担体と混合し、当該技術分野において公知の方法（例えば、流動層造粒、攪拌造粒、押し出し造粒、転動造粒、気流造粒、圧縮成型造粒、解砕造粒、噴霧造粒、噴射造粒等の造粒方法、パンコーティング、流動層コーティング、ドライコーティング等のコーティング方法、パフドライ、過剰水蒸気法、フォームマット方法、マイクロ波加熱方法等の膨化方法、押出造粒機やエキストルーダー等の押出方法等）により製造され、各種の製剤（例えば医薬製剤、サプリメント等の食品製剤等）として提供される。
製剤学的に許容し得る担体としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニトール、ソルビトール等の糖類、バレイショ、コムギ、トウモロコシ等の澱粉、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム等の無機物、結晶セルロース、カンゾウ末、ゲンチアナ末等の植物末等の賦形剤、澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコーン油等の滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルメロース、ゼラチン、澱粉のり液等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤等が挙げられる。

また、当該製剤中には、更に必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の薬効成分等を含有させることもできる。
また、食品製剤とする場合は、食品添加物として使用が認められている甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色剤、漂白剤、防かび剤、ガムベース、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物等を適宜配合することができる。

本発明のチロシン製剤の製剤形態は、例えば散剤、錠剤、顆粒剤、丸剤、ペレット、カプセル剤等の固形製剤、懸濁剤、乳剤、浸剤・煎剤、シロップ剤、液剤、エリキシル剤、エキス剤、チンキ剤、流エキス剤等の液体製剤等が挙げられる。
また、食品製剤の場合は、例えば粉末食品、シート状食品、カプセル食品、タブレット状食品、流動食品、ドリンク剤等の形態とすることができる。

本発明のチロシン製剤中のグリシルチロシンもしくはその塩又はそれらの溶媒和物の含有量は、製剤形態、投与又は摂取法、投与または摂取により期待される効果等に応じて適宜選択されるが、グリシルチロシンに換算して、通常０．０１質量％以上、好ましくは０．５質量％以上、より好ましくは１質量％以上、さらに好ましくは５質量％以上であり、且つ９０質量％以下、好ましくは８０質量％以下、より好ましくは７０質量％以下、さらに好ましくは６０質量％以下である。また、０．０１～９０質量％、好ましくは０．５～８０質量％、より好ましくは１～７０質量％、さらに好ましくは５～６０質量％である。

本発明のチロシン製剤を生体に投与又は摂取した場合、有効成分であるグリシルチロシンが、体内で速やかにチロシンに分解され、体内チロシン濃度を増加することにより、チロシンが有する生理活性を速やかに発揮し得る。
チロシンが有する生理活性としては、脳内神経伝達物質（ドーパミン、ノルアドレナリン、アドレナリン等のカテコールアミン）に変換することによる、当該脳内神経伝達物質の補充が挙げられる。
したがって、本発明のチロシン製剤は、体内チロシン濃度増加剤として、さらには脳内神経伝達物質の枯渇から生じる症状の予防又は改善剤として、体内チロシン濃度の低下や脳内神経伝達物質の枯渇から生じる症状、例えば疲労感、うつ症状、眠気、集中力の低下、注意力の低下、意欲の低下などの症状の予防又は改善のために使用することができる。

本発明のチロシン製剤の投与又は摂取量は、投与又は摂取形態、被投与者又は摂取者の年齢、体重等に応じて異なるが、通常成人に対し１日あたり、グリシルチロシンに換算して、１ｍｇ以上、好ましくは１０ｍｇ以上、より好ましくは１００ｍｇ以上であり、且つ４０００ｍｇ以下、好ましくは２０００ｍｇ以下、より好ましくは１０００ｍｇ以下である。また、１～４０００ｍｇ、好ましくは１０～２０００ｍｇ、より好ましくは１００～１０００ｍｇである。
斯かる投与又は摂取は、１日に１回または数回に分けて行うことができる。

本発明のチロシン製剤の投与又は摂取の対象は、ヒトであるのが好ましいが、ヒト以外の動物（ほ乳類、鳥類、は虫類、両性類、魚類等）であってもよい。

上述した実施形態に関し、本発明においてはさらに以下の態様が開示される。
＜１＞グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を含有する高吸収型経口チロシン製剤。
＜２＞液状又は固形製剤である＜１＞の製剤。
＜３＞食品製剤である＜２＞の製剤。
＜４＞グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする体内チロシン濃度増加剤。
＜５＞グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする脳内神経伝達物質の枯渇から生じる症状の予防又は改善剤。
＜６＞＜１＞～＜３＞のいずれかの製剤、又は＜４＞又は＜５＞の剤において、グリシルチロシンもしくはその塩又はそれらの溶媒和物の含有量は、グリシルチロシンに換算して、通常０．０１質量％以上、好ましくは０．５質量％以上、より好ましくは１質量％以上、さらに好ましくは５質量％以上であり、且つ９０質量％以下、好ましくは８０質量％以下、より好ましくは７０質量％以下、さらに好ましくは６０質量％以下である。また、０．０１～９０質量％、好ましくは０．５～８０質量％、より好ましくは１～７０質量％、さらに好ましくは５～６０質量％である。
＜７＞＜１＞～＜３＞のいずれかの製剤、又は＜４＞又は＜５＞の剤の投与又は摂取量は、通常成人に対し１日あたり、グリシルチロシンに換算して、１ｍｇ以上、好ましくは１０ｍｇ以上、より好ましくは１００ｍｇ以上であり、且つ４０００ｍｇ以下、好ましくは２０００ｍｇ以下、より好ましくは１０００ｍｇ以下である。また、１～４０００ｍｇ、好ましくは１０～２０００ｍｇ、より好ましくは１００～１０００ｍｇである。

以下に、実施例および参考例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。

実施例１グリシルチロシン経口投与によるチロシンの生体吸収性向上効果
（１）方法
C57B6Jマウス（日本クレア, 8週齢, 雄性）を1週間の予備飼育後、各群の個体の平均体重が同じになるように群わけし（各群N=４）、各種アミノ酸を表１の投与量となるように水に懸濁したものを作製し、ゾンデにて経口投与した。投与前、投与15, 30, 45, 60分後にイソフルラン麻酔下においてヘパリン処理ヘマトクリット微量採血管（VITREX）用いて眼底より静脈血を採取した。これを遠心分離（8,000Ｘg, 10分間, 4℃）することにより血漿を得た。その後、血漿の3倍量の15質量％スルホサリチル酸水溶液を加えて混合し、遠心分離（8,000Ｘg, 10分間, 4℃）を行うことによりタンパク質を除去して得られた血漿を分析用サンプルとした。分析用サンプル中のアミノ酸の定量はLC-MS/MSを用いて実施した。液体クロマトグラフィーは、Infinity 1290 （Agilent）、質量分析は3200 QTRAP（AB Sciex）を用いた。
なお、グリシルチロシン投与群のコントロールとしてチロシン投与群および、チロシンとグリシン（それぞれ等モル量）混合投与群を設定した。また、効果比較のためにアラニルチロシン投与群も設定した。また、各投与物は表２記載の製品を用いた。

（２）結果
１．血中チロシン濃度
投与後いずれの時間においても、血漿中にグリシルチロシンおよびアラニルチロシンは検出されなかった（結果示さず）。
チロシン投与群、チロシンとグリシン混合投与群、グリシルチロシン投与群および、アラニルチロシン投与群の血中チロシン濃度の経時変化および、チロシンとグリシン混合投与群とグリシルチロシン投与群の血中グリシン濃度の経時変化を図１に示す。各値は平均±標準誤差で示した。統計解析については、繰り返しのある2元配置分散分析を行い、ポストホック検定にはDunnetを用いた（**; p<0.01, チロシン0.55mmol/kg体重投与群に対して有意であることを示す）。
チロシン投与群と比較して、グリシルチロシン投与群のみ、サンプル投与15分後の血中チロシン濃度が優位に高い値を示した（図１）。一方で、投与後いずれの時間においても、チロシンとグリシン混合投与群とグリシルチロシン投与群の血中グリシン濃度には有意な差は見られなかった（図１）。

２．最高血中濃度（Cmax）及び上昇血中濃度－時間曲線下面積（iAUC）
各投与群の血中チロシン濃度をもとに計算した、サンプル投与後の最高血中濃度（Cmax）および、投与60分後までの上昇血中濃度－時間曲線下面積（iAUC：increase area under the curve）を図２に示す。各値は平均±標準誤差で示した。統計解析には、1元配置分散分析を行い、ポストホック検定にはDunnetを用いた（*; p<0.05, **; p<0.01, チロシン投与群に対して有意であることを示す）。
ＣｍａｘおよびｉＡＵＣはチロシン投与群と比較して、グリシルチロシン投与群においてのみ有意に高い値を示した（図２）。

以上の結果から、グリシルチロシンの経口投与・摂取によるチロシンの生体吸収性向上作用は、アラニルチロシンの経口投与・摂取よりも優れていると考えられる。グリシルチロシンおよびアラニルチロシンは、チロシンと比較して溶解度が高いことが知られ、20℃の水に対する溶解度はそれぞれチロシンの約７５倍、約３６倍とされる（Fust et al., (2001) J. Nutr.）。しかし、今回検討した投与量０．５５ｍｍｏｌ／ｋｇ体重は、チロシンの溶解度の１０倍に相当する量であり、投与サンプル中のグリシルチロシンおよびアラニルチロシンは、両者とも完全に水に溶解していたが、これにもかかわらず、グリシルチロシンの経口投与・摂取にのみ、優れたチロシンの生体吸収性向上作用が確認された。したがって、当該作用は溶解度向上によるものではなく、グリシルチロシン固有の効果であると考えられる。

Claims

グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を含有する、経口投与した場合に、チロシン自体を投与した場合に比べて体内チロシン濃度を増大させる高吸収型経口チロシン製剤。
液状又は固形製剤である請求項１記載の製剤。
食品製剤である請求項２記載の製剤。
グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を、グリシルチロシン換算で０．０１質量％以上、９０質量％以下含有する請求項１～３のいずれか１項記載の製剤。
グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする体内チロシン濃度増加剤。
グリシルチロシン若しくはその塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする脳内神経伝達物質の枯渇から生じる症状の予防又は改善剤。
脳内神経伝達物質がドーパミン、ノルアドレナリン及びアドレナリンから選ばれるカテコールアミンである請求項６記載の剤。