JP6976926B2 - 油およびタンパク質が豊富なスラウストキトリッドバイオマス、培養方法および使用 - Google Patents
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Description
a.適切な培養液中、約24℃〜35℃の間の範囲の温度で、従属栄養性または混合栄養性の条件下、かつ乾燥物質の重量に対して、重量で、少なくとも35%のタンパク質のレベルでタンパク質の産生を促進することができる条件下、スラウストキトリッドを培養する第一工程;
b.工程a)より低い約18℃〜25℃の間の温度で、従属栄養性または混合栄養性の条件下、少なくとも40g/L乾燥物質、好ましくは少なくとも60g/L、より好ましくは少なくとも80g/Lの培養密度が得られるまで、少なくとも20%まで、好ましくは少なくとも30%までの脂質の蓄積を促進することができ、かつ少なくとも25%まで、好ましくは少なくとも35%までの脂質内にDHAの蓄積を促進することができる条件下での第二の培養工程;
c.第二工程で得られたバイオマスを、培養液から、前記バイオマスを分離することによって回収する第三工程(採取);この工程に続いて、均質化してもよく、ならびに、必要により、
d.第三工程で回収されたバイオマスを乾燥する第四工程;
を含むことを特徴とする、上記および下記に定義されるバイオマスを製造するための方法にも関する。
raustochytrium kinnei)DQ323165;スラウストキトリウム・モチバム(Thraustochytrium motivum);スラウストキトリウム・マルチルジメンタレ(Thraustochytrium multirudimentale);スラウストキトリウム・パキデルマム(Thraustochytrium pachydermum);スラウストキトリウム・ローゼウム(Thraustochytrium roseum);スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)13A4.1;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)ATCC 26185;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BL13;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BL14;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BL2;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BL3;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BL4;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BL5;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BL6;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BL7;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BL8;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BL9;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BP3.2.2;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)BP3.3.3;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)カウディボラム(caudivorum);スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)CHN−1;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)FJN−10;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)HK1;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)HK10;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)HK5;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)HK8;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)HK8a;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)KK17−3;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)KL1;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)KL2;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)KL2a;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)ONC−T18;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)PJA10.2;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)TR1.4;スラウストキトリウム種(Thraustochytrium sp.)TRR2;スラウストキトリウム・ストリアタム(Thraustochytrium striatum);スラウストキトリウム・ストリアタム(Thraustochytrium striatum)ATCC24473;スラウストキトリウム・ストリアタム(Thraustochytrium striatum)DQ323163;スラウストキトリウム・ストリアタム(Thraustochytrium striatum)DQ356665;スラウストキトリウム・ビスルゲンス(Thraustochytrium visurgense);ウルケニア・アモエボイデア(Ulkenia amoeboidea)SEK 214;ウルケニア・プロフンダ(Ulkenia profunda);ウルケニア・プロフンダ(Ulkenia profunda)BUTRBG 111;ウルケニア種(Ulkenia sp.);ウルケニア種(Ulkenia sp.)ATCC 28207;ウルケニア・ビスルゲンシス(Ulkenia visurgensis);ウルケニア・ビスルゲンシス(Ulkenia visurgensis)BURAAA 141;ウルケニア・ビスルゲンシス(Ulkenia visurgensis)ATCC 28208の種から選択されてもよい。
CCAPに2014年5月20日に寄託されたオーランチオキトリウム・マングローヴァイ(Aurantiochytrium mangrovei)CCAP 4062/3、
CCAPに2014年5月20日に寄託されたオーランチオキトリウム・マングローヴァイ(Aurantiochytrium mangrovei)CCAP 4062/4、
CCAPに2014年5月20日に寄託されたオーランチオキトリウム・マングローヴァイ(Aurantiochytrium mangrovei)CCAP 4062/5、
CCAPに2014年5月20日に寄託されたオーランチオキトリウム・マングローヴァイ(Aurantiochytrium mangrovei)CCAP 4062/6、
CCAPに2013年6月21日に寄託されたオーランチオキトリウム(Aurantiochytrium)CCAP 4062/1、
CCAPに2014年5月20日に寄託されたシゾキトリウム種(Schizochytrium sp)CCAP 4087/3、
CCAPに2012年2月28日に寄託されたシゾキトリウム種(Schizochytrium sp)CCAP 4087/1、
CCAPに2014年5月20日に寄託されたシゾキトリウム種(Schizochytrium sp)CCAP 4087/4、および
CCAPに2014年5月20日に寄託されたシゾキトリウム種(Schizochytrium sp)CCAP 4087/5
の種から選択されてもよい。
− オーランチオキトリウム(Aurantiochytrium)およびSchyzochitrium(シゾキトリウム)の属から、好ましくはオーランチオキトリウム・マングローヴァイ(Aurantiochytrium mangrovei)CCAP 4062/2;オーランチオキトリウム・マングローヴァイ(Aurantiochytrium mangrovei)CCAP 4062/3;オーランチオキトリウム・マングローヴァイ(Aurantiochytrium mangrovei)CCAP 4062/4;オーランチオキトリウム・マングローヴァイ(Aurantiochytrium mangrovei)CCAP 4062/5;オーランチオキトリウム・マングローヴァイ(Aurantiochytrium mangrovei)CCAP 4062/6;オーランチオキトリウム・マングローヴァイ(Aurantiochytrium mangrovei)CCAP 4062/1;シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.)CCAP 4087/3;シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.)CCAP 4087/1;シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.)CCAP 4087/4;シゾキトリウム種(Schizochytrium sp.)CCAP 4087/5の種から選択されてもよい、スラウストキトリッド;ならびに、
− 乾燥物質の重量に対して、重量で、少なくとも30%、好ましくは少なくとも40%、非常に好ましくは35%〜55%または45%〜55%のタンパク質含量;
− 乾燥物質の重量に対して、重量で、25%〜60%、好ましくは40%〜60%のPUFAを含む、少なくとも20%、好ましくは少なくとも30%の脂質含量;
− 場合により、乾燥物質の重量に対して、5ppm〜250ppm、好ましくは150〜200ppmのカロテノイド含量;および
− 70%〜90%、好ましくは80%〜85%の乾燥前の水分含量、または1%〜10%、好ましくは2%〜7%の乾燥後の水分含量;を有していてもよい、
バイオマスであってもよい。
a.適切な培養液中、約24℃〜35℃の間の範囲の温度で、かつ乾燥物質の重量に対して、重量で、少なくとも35%のタンパク質のレベルでタンパク質の産生を促進することができる条件下での、スラウストキトリッドの従属栄養性または混合栄養性の培養の第一工程;
b.少なくとも40g/L乾燥物質、好ましくは少なくとも60g/L、より好ましくは少なくとも80g/Lの培養密度が得られるまで、工程a)より低い約18℃〜25℃の間の温度で、少なくとも20%まで、好ましくは少なくとも30%までの脂質の蓄積を促進することができ、かつ少なくとも25%まで、好ましくは少なくとも35%までの脂質内に、多価不飽和脂肪酸(PUFA)、好ましくはDHAおよび/またはEPAおよび/またはARAの蓄積を促進することができ、かつ場合により、カロテノイドの産生を促進する条件下での、従属栄養性または混合栄養性の培養の第二工程;
c.第二工程で得られたバイオマスを、培養液から、前記バイオマスを分離することによって回収する第三工程(採取);ならびに、必要により、
d.第三工程で回収されたバイオマスを乾燥する第四工程;
を含む、前記記載のバイオマスを製造するための方法も含む。
− 技術的添加剤:例えば、保存剤、抗酸化剤、乳化剤、安定剤、酸味調整剤およびサイレージ添加剤;
− 知覚的添加剤:例えば、香味剤、染料;
− 栄養添加剤:例えば、ビタミン、アミノ酸および微量元素;
− 畜産学的添加剤:例えば、プロバイオティクスおよびプレバイオティクスなどの、消化性増強剤、腸内フローラ安定剤;
− 抗コクシジウム剤および抗ヒストモナス剤(殺虫剤)。
オーランチオキトリウム(Aurantiochytrium)CCAP4062/1の培養を、コンピュータ制御の自動システムを使用するための、1〜2Lの発酵槽(バイオリアクター)中で、準備した。系のpHを、塩基(NH4OH)を添加することにより調整した。培養温度を、25℃に設定し、次いで、培養24時間で、18℃に低下させた。溶存酸素圧を、培養中にわたって、振とう速度(220〜1200rpm)、空気流速(0.6〜2vvm)または酸素流速(0〜2vvm)により、培養液中で調整した。制御装置に組み入れられた調整パラメーターは、5%〜30%の一定pO2を維持することを可能にした。培養時間は、72時間であった。
総バイオマス濃度を、乾燥質量(GF/Fフィルター(Whatman)上でのろ過、次いで、重量測定の前に少なくとも24時間105℃でオーブン乾燥)を測定することによってモニターした。バイオマスは、明るいベージュ色の外観である。
オーランチオキトリウム(Aurantiochytrium)CCAP4062/4の培養を、コンピュータ制御の自動システムを使用するための、1〜2Lの発酵槽(バイオリアクター)中で、準備した。系を、塩基(NH4OH)を添加することにより、pH6に調整した。培養温度を、30℃に設定し、次いで、培養24時間で、18℃に低下させた。溶存酸素圧を、培養中にわたって、振とう速度(220〜1200rpm)、空気流速(0.3〜1vvm)または酸素流速(0〜1vvm)により、培養液中で調整した。制御装置に組み入れられた調整パラメーターは、5%〜30%の一定pO2を維持することを可能にした。培養時間は、40〜100時間であった(試験A:69時間、試験B:51時間)。
総バイオマス濃度を、乾燥質量(GF/Fフィルター(Whatman)上でのろ過、次いで、重量測定の前に少なくとも24時間105℃でオーブン乾燥)を測定することによってモニターした。バイオマスは、明るいベージュ色の外観である。
オーランチオキトリウム(Aurantiochytrium)CCAP4062/4の培養を、コンピュータ制御の自動システムを使用するための、5Lの発酵槽(バイオリアクター)中で、準備した。系を、塩基(NaOH)を添加することにより、pH5に調整した。培養温度を、30℃に設定し、次いで、培養24時間で、18℃に低下させた。制御装置に組み入れられた調整パラメーターは、5%〜30%の一定pO2を維持することを可能にした。培養時間は、70時間であった。培養物を、培養の45時間の時点で、青色光(455nmの波長)に曝露した。光源(LED)を、バイオリアクターの内部の二つのバッフル上に取り付けた。
総バイオマス濃度を、乾燥質量(GF/Fフィルター(Whatman)上でのろ過、次いで、重量測定の前に少なくとも24時間105℃のオーブン乾燥)を測定することによってモニターした。
Claims (24)
- タンパク質および脂肪酸を含むスラウストキトリッドのバイオマスであって、前記ストラウストキトリッドが、オーランチオキトリウム(Aurantiochytrium)属であり、前記バイオマスが、乾燥物質の重量に対して、重量で、少なくとも35%のタンパク質および少なくとも20%の脂質を含んでなり、前記バイオマスが、添加されたタンパク質または脂肪酸を含まないバイオマスであることを特徴とする、スラウストキトリッドバイオマス。
- 少なくとも45%のタンパク質を含んでなる、請求項1に記載のスラウストキトリッドバイオマス。
- 少なくとも30%の脂質を含んでなる、請求項1または2に記載のスラウストキトリッドバイオマス。
- 前記脂質が、25%〜60%の多価不飽和脂肪酸の含量を有する、請求項1〜3のいずれか一項に記載のバイオマス。
- 5〜250ppmのカロテノイドを含んでなる、請求項1〜4のいずれか一項に記載のバイオマス。
- 150〜200ppmのカロテノイドを含んでなる、請求項1〜4のいずれか一項に記載のバイオマス。
- カロテノイドが、脂質の重量に対して、5〜30%のアスタキサンチン含量、15%〜30%のフェニコキサンチン含量、および0〜30%のβ−カロテン含量を有する、請求項1に記載のバイオマス。
- 請求項1〜7のいずれか一項に定義されるバイオマスの製造方法であって、
a.炭素源、窒素源、リン源および塩を含む、所定の培養液中、24℃〜35℃の間の範囲の温度で、従属栄養性または混合栄養性の条件下、かつ乾燥物質の重量に対して、重量で、少なくとも35%のタンパク質のレベルでタンパク質の産生を促進することができる条件下において、オーランチオキトリウム(Aurantiochytrium)属であるスラウストキトリッドを培養する第一工程と、
b.前記工程a)より低い18℃〜25℃の間の温度で、従属栄養性または混合栄養性の条件下、少なくとも40g/L乾燥物質の培養密度が得られるまで、乾燥物質の重量に対して、重量で、少なくとも20%までの脂質の蓄積を促進することができる条件下での第二の培養工程と、
c.前記第二工程で得られたバイオマスを、培養液から、前記バイオマスを分離することによって回収・採取する第三工程と、そして、必要に応じて、
d.前記第三工程で回収されたバイオマスを乾燥する第四工程と
を含んでなることを特徴とする、方法。 - 前記培養において、435nm〜475nmの波長を有する光の照明がなされる、請求項8に記載の方法。
- 前記培養において、少なくとも培養の最後の18時間の間、照明がなされる、請求項9に記載の方法。
- 前記培養において、培養の24〜50時間の時点、および培養の最後まで、照明がなされる、請求項10に記載の方法。
- 前記第一の培養工程a)が、いわゆる「バッチ式」方式、いわゆる「フェッドバッチ式」方式、または連続方式で行われる、請求項8〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記培養が、a1)適切な培養液中、培養液中で20g/L未満の炭素源の含量が得られるまでの第一の増殖のサブ工程、続いて、a2)一つまたは複数の炭素源、窒素源およびリン源の濃縮溶液を、同時にまたは連続して、培養液に添加する、第二の産生のサブ工程の、二つのサブ工程に分けられる第一工程a)を含んでなる、請求項12に記載の方法。
- 前記工程a2)において、炭素源の含量が0g/L超50g/L未満の間で維持され、窒素源の含量が0.5〜5g/Lの間で維持され、リン源の含量が0.5〜5g/Lの間で維持される、請求項13に記載の方法。
- 前記照明が、点滅の形態で不連続になされる、請求項8〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項8〜15のいずれか一項に記載の方法によって得られ得る、バイオマス。
- ヒトまたは動物の化粧品および食品の分野における、請求項1〜7または16のいずれか一項に記載のバイオマスの使用。
- 食物摂取指標、体重増加、または飼料要求率の測定によって評価される、動物の能力を向上させるための、請求項1〜7または16のいずれか一項に記載のスラウストキトリッドバイオマスの使用であって、前記ストラウストキトリッドが、オーランチオキトリウム(Aurantiochytrium)属であることを特徴とする、使用。
- 請求項1〜7または16のいずれか一項に記載のバイオマスを含んでなる、ヒトまたは動物のための化粧品または医薬組成物。
- 請求項1〜7または16のいずれか一項に記載のバイオマスを含んでなる、食品。
- ヒトの摂取用とされた、請求項20に記載の食品。
- 請求項1〜7または16のいずれか一項に記載のバイオマスを、1%〜60%含んでなる、家畜類の飼料。
- 治療において用いられる、請求項1〜7または16のいずれか一項に記載のバイオマス。
- 請求項1〜7または16のいずれか一項に記載のバイオマスを、1%〜60%含んでなる、水産養殖用飼料。
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