ES2935122T3

ES2935122T3 - Biomasa de traustocítridos enriquecida en aceites y en proteínas, procedimiento de cultivo y usos

Info

Publication number: ES2935122T3
Application number: ES16754404T
Authority: ES
Inventors: Olivier Cagnac; Julien Pagliardini; Pierre Calleja; Adeline Lependrie
Original assignee: Fermentalg SA
Current assignee: Fermentalg SA
Priority date: 2015-07-17
Filing date: 2016-07-13
Publication date: 2023-03-01
Anticipated expiration: 2036-07-13
Also published as: CA2992149A1; WO2017012933A1; JP6976926B2; FR3038914A1; CN109072169B; EP3325606A1; EP3325606B1; PH12018500129A1; FR3038914B1; CN109072169A; JP2018521652A; DK3325606T3

Abstract

La invención se sitúa en el campo de los cultivos de microalgas, en particular las traustoquítridas. La invención se refiere a una biomasa rica en proteínas de thraustochytrids que contiene ácidos grasos poliinsaturados tales como DHA, a un método para obtener dicha biomasa, ya los usos de la misma. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Biomasa de traustocítridos enriquecida en aceites y en proteínas, procedimiento de cultivo y usos

Campo de la invención

La invención se encuentra en el campo de los cultivos de microalgas, particularmente de traustocítridos. Tiene por objeto una biomasa de traustocítridos rica en proteínas y en lípidos, y que comprende, eventualmente, carotenoides, su procedimiento de obtención y sus usos en la alimentación.

Estado de la técnica

Se conocen varias fuentes de proteínas y fuentes de lípidos de origen vegetal para su uso en la alimentación humana o animal, directamente o como complementos alimentarios, para aportar a los animales y a los seres humanos aminoácidos necesarios para su metabolismo. Por “fuentes de proteínas” se entienden fuentes de aminoácidos disponibles para los animales o seres humanos, una vez ingeridos los alimentos. Los lípidos, en particular, los ácidos grasos poliinsaturados (“polyunsaturated fatty acids” en inglés, o PUFA), presentan interés como fuente de energía, así como por sus propiedades terapéuticas. Entre los ácidos grasos poliinsaturados, algunos altamente insaturados (AGAI) de la serie de los omega 3 (PUFA-w3), en particular, el ácido eicosapentaenoico (EPA o C20:5 w3) y el ácido docosahexaenoico (DHA o C22:6 w3), y de la serie de los omega 6 (PUFA-w6), en particular, el ácido araquidónico (ARA o AA, o incluso ácido eicosatetraenoico C20:4 w6), tienen una importancia nutricional reconocida y presentan fuertes posibilidades en cuanto a aplicaciones terapéuticas. Por tanto, sería deseable poder proporcionar nuevas fuentes de proteínas y de PUFA para su uso en la alimentación animal y humana. Fuentes que contengan proteínas, así como lípidos, en particular, PUFA, presentarían ventajas considerables.

Como fuentes de proteínas, se conocen la harina de pescado, subproducto de la pesca, relativamente rica en proteínas, pero pobre en lípidos (pueden mencionarse contenidos de aproximadamente el 8 % en materia seca).

La más conocida de las fuentes de proteínas vegetales empleada en la alimentación animal es la soja, generalmente, empleada en forma de tortas, residuo sólido que queda después de la extracción del aceite. No obstante, el empleo de tortas de soja presenta varios inconvenientes asociados a su origen, concretamente, variedades de soja genéticamente modificadas (OGM). Además, la soja, como numerosas fuentes de proteínas vegetales, no es una fuente de lípidos, tales como los PUFA.

Se conocen otras fuentes de proteínas vegetales, concretamente, la espirulina o la clorella, empleadas como complementos alimentarios para el ser humano.

No obstante, la espirulina, como la clorella, presentan el inconveniente de una baja productividad en proteína, lo que no permite el paso a un cultivo en fermentador con alto rendimiento. Su cultivo no permite responder a un objetivo de producción industrial más grande, económicamente viable, de una fuente de proteínas alimentarias cuyas calidades le permitan sustituir a las fuentes habituales, tales como la soja en la alimentación de los animales y del ser humano. Además, la clorella y la espirulina tienen un contenido muy bajo en PUFA.

Como las proteínas y los lípidos, los carotenoides también presentan un interés en las nutriciones animal y humana.

Con frecuencia, la producción de estos pigmentos a gran escala requiere una mano de obra intensa y grandes superficies de producción.

Por otro lado, en la actualidad, ninguna de las fuentes de proteínas ni de ácidos grasos mencionadas contiene cantidades importantes de carotenoides.

Por tanto, deben buscarse nuevas fuentes de carotenoides, concretamente, de luteína, de fucoxantina, de astaxantina, de zeaxantina, de cantaxantina, de equinenona, de beta-carotenos y de fenicoxantina, con el fin de responder a la demanda creciente en el mercado de estas moléculas.

Los protistas conocidos por responder a una capacidad de producción industrial en fermentadores, se emplean desde hace mucho tiempo para la producción de materias grasas ricas en ácidos grasos poliinsaturados, tales como DHA o EPA, por ejemplo, los documentos WO 97/37032, WO 2015/004402 o WO 2012/17027. En determinadas condiciones, algunos protistas pueden producir carotenoides. No obstante, las biomasas obtenidas hasta ahora, incluido tras la extracción de las materias grasas, no contienen contenidos suficientes en proteínas para permitir su uso como fuente de proteínas en la alimentación, por lo menos sin etapas adicionales de enriquecimiento en proteínas económicamente costosas.

Uno de los objetivos que pretende la invención, es proporcionar una nueva fuente de proteínas y de lípidos, en particular, de unos PUFA para la alimentación animal o humana que responda a un objetivo de producción industrial grande, económicamente viable. Esta fuente de proteínas y de PUFA, también puede comprender carotenoides, en particular, carotenos (a, p, £, y, 5 o Z-caroteno, licopeno y fitoeno) y xantofilas (astaxantina, anteraxantina, citranaxantina, criptoxantina, cantaxantina, diadinoxantina, diatoxantina, flavoxantina, fucoxantina, luteína, neoxantina, fenicoxantina, rodoxantina, rubixantina, sifonaxantina, violaxantina, zeaxantina).

La invención muestra que, en determinadas condiciones de cultivo, los traustocítridos, conocidos para su uso en la producción de aceites con grandes contenidos en ácidos grasos poliinsaturados (concretamente, DHA y EPA), son microorganismos adecuados para producir una gran cantidad de proteínas para la alimentación animal, y una fuente proteica de alto valor para la nutrición humana. Los inventores han podido determinar condiciones de cultivo que permiten la obtención de un fuerte contenido en proteínas, al tiempo que se conserva un contenido en lípidos de al menos el 20 % (con respecto a la materia seca), de los cuales un 25-60 % es de PUFA. También han podido determinar condiciones de cultivo que permiten orientar células hacia la producción de los carotenoides, además de las proteínas y de los PUFA.

Descripción de la invención

La invención se refiere a un procedimiento de preparación de una biomasa de traustocítridos, en la que una cantidad sustancialmente mayoritaria no se degrada, que comprende proteínas y ácidos grasos, caracterizado por que comprende, en peso con respecto al peso de la materia seca, al menos el 40 % de proteínas y al menos el 20 % de materia grasa, teniendo la materia grasa un contenido del 25 al 60 % de ácidos grasos poliinsaturados, elegidos de ácido araquidónico (AA), ácido docosahexaenoico (DHA) y ácido eicosapentaenoico (EPA), sin proteínas ni ácidos grasos añadidos, caracterizado por que comprende:

a. una primera etapa de cultivo de los traustocítridos, realizada en modo denominado “discontinuo” , en modo denominado “ semicontinuo” , o en modo continuo, en condiciones de heterotrofía o de mixotrofía, en un medio de cultivo definido que comprende una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, una fuente de fósforo y sales, a una temperatura comprendida entre aproximadamente 24 0C y 35 0C, y en condiciones para favorecer la producción de proteínas, a un contenido de al menos el 40 % de proteínas en peso con respecto al peso de la materia seca,

dividiéndose la etapa a) en dos subetapas, una primera subetapa a1) de crecimiento en el medio de cultivo apropiado, hasta obtener contenidos en fuente de carbono en el medio inferiores a 20 g/l, seguido por una segunda subetapa a2) de producción en la que se añaden al medio de cultivo, de manera simultánea o sucesiva, una o varias disoluciones de enriquecimiento en fuente de carbono, en fuente de nitrógeno y en fuente de fósforo, el contenido en fuente de carbono se mantiene entre 0 y 50 g/l, el contenido en fuente de nitrógeno se mantiene entre 0,5 y 5 g/l, y el contenido en fuente de fósforo se mantiene entre 0,5 y 5 g/l;

b. una segunda etapa de cultivo en condiciones de heterotrofía o de mixotrofía, a una temperatura de entre aproximadamente 18 0C y 25 0C, e inferior a la de la etapa a), en condiciones para favorecer la acumulación de materia grasa hasta al menos el 20 % en peso con respecto al peso de la materia seca, y hasta la obtención de una densidad de cultivo de al menos 40 g/l de materia seca;

c. una tercera etapa de recuperación de la biomasa obtenida en la segunda etapa, mediante separación de dicha biomasa del medio de cultivo (la recogida); y, dado el caso,

d. una cuarta etapa de secado de la biomasa recuperada en la tercera etapa.

La invención también se refiere a una biomasa de traustocítridos que puede comprender, en peso con respecto al peso de la materia seca, al menos el 40 % de proteínas, incluso más del 60 % de proteínas en peso con respecto al peso de la materia seca, y al menos el 20 % de materia grasa, preferiblemente al menos el 30 % de materia grasa, teniendo la materia grasa un contenido del 25 al 60 %, preferiblemente entre el 40 % y el 60 % en ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) elegidos de ácido araquidónico (AA), ácido docosahexaenoico (DHA) y ácido eicosapentaenoico (EPA), sin proteínas ni ácidos grasos añadidos, susceptible de obtenerse mediante el procedimiento según la invención. La biomasa puede contener, de manera general, entre el 40 % y el 65 % de proteínas, en particular, del 45 % al 55 % de proteínas con respecto al peso de la materia seca.

Los porcentajes en peso de proteínas pueden expresarse tanto con respecto a las propias proteínas como con respecto a los aminoácidos contenidos en dichas proteínas. Los porcentajes indicados en este caso se calculan mediante la suma de los aminoácidos totales contenidos en la biomasa (norma ISO 13903: 2005), y no a partir del nitrógeno total. Por ejemplo, puede usarse un analizador de aminoácidos para medir los aminoácidos totales. El triptófano se valora por separado, a continuación, se añade su valor a la suma de los otros aminoácidos para obtener la suma de los aminoácidos totales.

Según una realización de la invención, el DHA puede ser el PUFA preferido.

Según determinadas realizaciones de la invención, dicha biomasa también puede comprender entre 5 y 250 ppm (ng/mg de materia seca), preferiblemente entre 150 y 200 ppm de carotenoides.

El tiempo de cultivo puede estar comprendido, de manera general, entre 40 y 100 horas, preferiblemente entre 65 y 96 horas, por ejemplo, 70, 84 o 96 horas. El método de cultivo objeto de la invención, puede permitir, de manera general, alcanzar una concentración de biomasa superior a 100 g/l, incluso 120 g/l.

En la primera etapa a), pueden cultivarse las células durante aproximadamente 18-30 horas, preferiblemente durante 24 h. Después de esta primera etapa de cultivo, por ejemplo, a partir de aproximadamente 24 h de cultivo, puede reducirse la temperatura a aproximadamente 18-24 0C [para iniciar la etapa b)]. Esta reducción de temperatura puede favorecer la producción de los ácidos grasos y, eventualmente, de los carotenoides. El cultivo a baja temperatura puede continuarse, en general, hasta entre aproximadamente 50 y 70 horas de cultivo, y en cualquier caso, preferiblemente, hasta el final del cultivo.

Eventualmente, puede inducirse la producción de los carotenoides durante el cultivo, preferiblemente, durante la etapa b). Para ello, pueden aplicarse condiciones mixotróficas con una luz, preferiblemente azul, a aproximadamente 435 475 nm, preferiblemente 455 nm. Con estas longitudes de onda pueden producirse carotenoides, tales como astaxantina, cantaxantina, beta-caroteno y fenicoxantina. La luz puede aplicarse, de manera general, durante al menos 18 horas, preferiblemente durante al menos 24 horas.

Según una realización preferida de la invención, la luz puede aplicarse al cultivo a partir de 24 a 50 horas, más preferiblemente a partir de 45 horas de cultivo, y hasta el final del cultivo.

La invención también se refiere al uso de una biomasa tal como la mencionada anteriormente o, a continuación, en los campos de la alimentación humana o animal, concretamente, en acuicultura. La invención también se refiere al uso de una biomasa tal como la mencionada anteriormente o, a continuación, para la mejora del rendimiento de los animales. Dicho rendimiento puede evaluarse mediante la medición del índice de consumo, del aumento de peso o incluso de la “ Feed Conversion Ratio” (razón de conversión de alimentos), todos ellos conocidos por el experto en la técnica.

La invención también se refiere a un alimento que comprende una biomasa de este tipo que permite a la vez aumentar su valor y su densidad nutricional.

La invención también se refiere a la biomasa según la invención, para su uso en terapia, concretamente, en el tratamiento y en la prevención de la desnutrición.

Descripción detallada de la invención

Por “ mutantes” se entiende un organismo derivado de la cepa original, cuyo patrimonio genético se ha modificado o bien mediante un proceso natural o bien mediante métodos fisicoquímicos conocidos por el experto en la técnica, que pueden generar mutaciones aleatorias (UV, etc.), o bien mediante métodos de ingeniería genética.

Por “condiciones de mixotrofía” o por “en modo de mixotrofía” , se entiende un cultivo con un aporte de luz y un aporte de sustrato carbonado orgánico y en la oscuridad.

Por “condiciones de mixotrofía con dominante heterótrofo” se entienden condiciones de iluminación en las que la mayor parte de la energía para el crecimiento de las células se proporciona por una fuente de carbono orgánico, pero en las que la luz tiene un impacto sobre el crecimiento y/o la composición de las células. Esta luz puede proporcionarse o bien de manera continua, con o sin variaciones de intensidad, o bien de manera discontinua con periodos de oscuridad entre los periodos de iluminación, en la medida en que hay un efecto sobre el metabolismo de las células expuestas a dicha iluminación. La periodicidad de la variación de la intensidad o de discontinuidades puede ser regular a lo largo del tiempo o puede modificarse con las diferentes fases del crecimiento celular. La mixotrofía con dominante heterótrofo permite producir moléculas de interés, acoplando a la vez las ventajas de la autotrofía y de la heterotrofía. En estas condiciones, como en la heterotrofía, el sustrato orgánico alimenta a las microalgas, para producir grandes cantidades de biomasa, pero el cloroplasto y los demás orgánulos captores de energía luminosa de la célula, se activan. La luz actúa como señal que puede inducir una respuesta del metabolismo, por ejemplo, la síntesis de pigmentos.

El término “de carotenoide” agrupa los carotenos (a, p, £, ^y, 6 o Z-caroteno, licopeno y fitoeno) y las xantofilas (astaxantina, anteraxantina, citranaxantina, criptoxantina, cantaxantina, diadinoxantina, diatoxantina, flavoxantina, fucoxantina, luteína, neoxantina, rodoxantina, rubixantina, sifonaxantina, violaxantina, zeaxantina).

Por “ biomasa” se entiende, ventajosamente, según la invención, un conjunto de células de traustocítridos producidas mediante el cultivo de dichos protistas, y que presentan contenidos en proteínas, en ácidos grasos y, eventualmente, en carotenoides, descritos en el presente texto, células que pueden haber conservado su integridad física o no.

Por tanto, se entiende que dicha biomasa puede comprender una cantidad de células de traustocítridos degradados, que va del 0 % al 100 %. Por “degradado” se entiende que puede haberse modificado la estructura y/o composición de dichas células de traustocítridos. Por ejemplo, pueden haberse sometido a una etapa de secado o bien a una etapa de recogida de su aceite, siendo lo importante que la biomasa que comprende estas células presente los contenidos en proteínas, en ácidos grasos y, eventualmente, en carotenoides, descritos en el presente texto.

Según una realización preferida de la invención, la biomasa no se ha sometido a tratamientos que modifiquen su composición en aminoácidos, a lo largo o después de la recogida, es decir, que los tratamientos a los que puede someterse esta biomasa después de la recogida, no alteran la composición en aminoácidos. En particular, la biomasa no se ha sometido a ninguna etapa de enriquecimiento en proteínas y en aminoácidos. Estos últimos proceden del crecimiento de células en su medio de cultivo. Se trata de una biomasa denominada “ sin proteínas añadidas” .

Según una realización más preferida de la invención, la biomasa no se ha sometido a tratamientos que modifiquen su composición en aminoácidos y en materia grasa, y, dado el caso, en carotenoides, es decir, que los tratamientos a los que se somete esta biomasa después de la recogida, no alteran la composición en aminoácidos y en materias grasas y, eventualmente, en carotenoides. En particular, la composición relativa de los aminoácidos con respecto a la materia grasa sigue siendo sustancialmente constante. Los ácidos grasos, como las proteínas, proceden únicamente del cultivo de las células en su medio de cultivo. Sin enriquecimiento en ácidos grasos, la biomasa también se denomina “sin ácidos grasos añadidos” .

Se ha observado que, en algunos casos, los traustocítridos no degradados en la biomasa según la invención, pueden presentar propiedades de conservación y de digestibilidad mejores que las de los traustocítridos degradados. Una de las formas preferidas de la invención es una biomasa que comprende una cantidad sustancialmente mayoritaria de traustocítridos que no están degradados.

Por “degradado” se entiende, según la invención, traustocítridos cuya integridad estructural y/o química ha podido alterarse, tales como, por ejemplo, traustocítridos sometidos a lisis, resultantes, por ejemplo, de un procedimiento de homogeneización.

Sigue siendo evidente que, una vez producida, dicha biomasa podrá usarse en bruto, secada o no, o bien someterse a cualquier tratamiento necesario para su uso, concretamente, homogeneizarse.

Según la invención, dicha biomasa puede presentar, en peso con respecto al peso de la materia seca, una tasa de humedad del 1 % al 95 %.

Preferiblemente, según una realización de la invención, dicha biomasa puede presentar, en peso con respecto al peso de la materia seca, una tasa de humedad del 70 % al 90 %, preferiblemente del 80 % al 85 %.

Más preferiblemente, según una segunda realización de la invención, dicha biomasa puede presentar, en peso con respecto al peso de la materia seca, una tasa de humedad del 1 % al 10 %, preferiblemente del 2 % al 7 %.

Según la invención, dichos traustocítridos pueden ser del orden de los Thraustochytriales, preferiblemente de la subclase de los Thraustochytriaceae, aún más preferiblemente de un género que puede elegirse del grupo que comprende los géneros Aurantiochytrium, Aplanochytrium, Botryochytrium, Japonochytrium, Oblongichytrium, Parietichytrium, Schizochytrium, Sicyoidochytrium, Thraustochytrium y Ulkenia.

Los traustocítridos son microorganismos no modificados genéticamente, o también microorganismos genéticamente modificados. En el caso en el que se empleen traustocítridos genéticamente modificados, no contienen ningún gen que codifique para una o varias enzimas que permitan degradar o digerir la biomasa, con vistas a su uso como alimento.

Ventajosamente, dichos traustocítridos pueden elegirse de las especies Aplanochytrium kerguelense; Aplanochytrium minuta; Aplanochytrium stocchinoi; Aplanochytrium sp. PR24-1; Aurantiochytrium limacinum; Aurantiochytrium limacinum AB022107; Aurantiochytrium limacinum HM042909; Aurantiochytrium limacinum JN986842; Aurantiochytrium limacinum SL1101 JN986842; Aurantiochytrium mangrovei; Aurantiochytrium mangrovei DQ323157; Aurantiochytrium mangrovei DQ356659; Aurantiochytrium mangrovei DQ367049; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/2; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/3; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/4; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/5; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/6; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/1; Aurantiochytrium sp. AB052555; Aurantiochytrium sp. AB073308; Aurantiochytrium sp. ATCC PRA276 DQ836628; Aurantiochytrium sp. BL10 FJ821477; Aurantiochytrium sp. LY 2012 PKU Mn5 JX847361; Aurantiochytrium sp. LY2012 JX847370; Aurantiochytrium sp. N1-27; Aurantiochytrium sp. SD116; Aurantiochytrium sp. SEK209 AB290574; Aurantiochytrium sp. SEK217 AB290572; Aurantiochytrium sp. SEK 218 AB290573; Aurantiochytrium sp. 18W-13a; Botryochytrium radiatum; Botryochytrium radiatum Raghukumar 16; Botryochytrium radiatum SEK353; Botryochytrium sp.; Botryochytrium sp. BUTRB^c143; Botryochytrium sp. Raghukumar 29; Oblongichytrium minutum; Oblongichytrium multirudimentalis; Oblongichytrium sp.; Oblongichytrium sp. SEK347; Parieticytrium sarkarianum; Parieticytrium sarkarianum SEK351; Parieticytrium sarkarianum SEK364; Parieticytrium sp.; Parieticytrium sp. F3-1; Parieticytrium sp. H1-14; Parieticytrium sp. NBRC102984; Phytophthora infestans; Schizochytrium aggregatum DQ323159; Schizochytrium aggregatum DQ356661; Schizochytrium aggregatum; Schizochytrium limacinum; Schizochytrium limacinum OUC166 HM042907; Schizochytrium mangrovei; Schizochytrium mangrovei FBI; Schizochytrium mangrovei FB3; Schizochytrium mangrovei FB5; Schizochytrium minutum; Schizochytrium sp. ATCC20888 DQ367050; Schizochytrium sp. KGS2 KC297137; Schizochytrium sp. SKA10 JQ248009; Schizochytrium sp. ATCC 20111; Schizochytrium sp. ATCC 20888; Schizochytrium sp. ATc C 20111 DQ323158*; Schizochytrium sp. ATCC 20888 DQ356660; Schizochytrium sp. ATCC 20889; Schizochytrium sp. ATCC 26185; Schizochytrium sp. BR2.1.2; Schizochytrium sp. BUCAAA 032; Schizochytrium sp. BUCAAA 093; Schizochytrium sp. BUCACD 152; Schizochytrium sp. BUCARA 021; Schizochytrium sp. BUc Ha O 113; Schizochytrium sp. BURABQ 133; Schizochytrium sp. Bu Ra RM 801; Schizochytrium sp. BURARM 802; Schizochytrium sp. CCAP 4087/3; Schizochytrium sp. CCAP 4087/1; Schizochytrium sp. Cc A p 4087/4; Schizochytrium sp. CCAP 4087/5; Schizochytrium sp. FJU-512; Schizochytrium sp. KH105; Schizochytrium sp. KK17-3; Schizochytrium sp. KR-5; Schizochytrium sp. PJ10.4; Schizochytrium sp. SEK 210; Schizochytrium sp. SEK 345; Schizochytrium sp. SEK 346; Schizochytrium sp. SR21; Schizochytrium sp. TIO01; Sicyoidochytrium minutum SEK354; Sicyoidochytrium minutum NBRC 102975; Sicyoidochytrium minutum NBRC 102979; Thraustochytriidae sp. BURABG162 DQ100295; Thraustochytriidae sp. CG9; Thraustochytriidae sp. LY2012 JX847378; Thraustochytriidae sp. MBIC11093 AB183664; Thraustochytriidae sp. NIOS1 AY705769; Thraustochytriidae sp. n.° 32 DQ323161; Thraustochytriidae sp. n.° 32 DQ356663; Thraustochytriidae sp. RT49 DQ323167; Thraustochytriidae sp. RT49 DQ356669; Thraustochytriidae sp. RT49; Thraustochytriidae sp. Thel2 DQ323162; Thraustochytriidae sp. Thel2; Thraustochytrium aggregatum; Thraustochytrium aggregatum DQ356662; Thraustochytrium aureum; Thraustochytrium aureum DQ356666; Thraustochytrium gaertnerium; Thraustochytrium kinnei; Thraustochytrium kinnei DQ323165; Thraustochytrium motivum; Thraustochytrium multirudimentale; Thraustochytrium pachydermum; Thraustochytrium roseum; Thraustochytrium sp. 13A4.1; Thraustochytrium sp. ATCC 26185; Thraustochytrium sp. BL13; Thraustochytrium sp. BL14; Thraustochytrium sp. BL2; Thraustochytrium sp. BL3; Thraustochytrium sp. BL4; Thraustochytrium sp. BL5; Thraustochytrium sp. BL6; Thraustochytrium sp. BL7; Thraustochytrium sp. BL8; Thraustochytrium sp. BL9; Thraustochytrium sp. BP3.2.2; Thraustochytrium sp. BP3.3.3; Thraustochytrium sp. caudivorum; Thraustochytrium sp. CHN-1; Thraustochytrium sp. FJN-10; Thraustochytrium sp. HK1; Thraustochytrium sp. HK10; Thraustochytrium sp. HK5; Thraustochytrium sp. HK8; Thraustochytrium sp. HK8a; Thraustochytrium sp. KK17-3; Thraustochytrium sp. KL1; Thraustochytrium sp. KL2; Thraustochytrium sp. KL2a; Thraustochytrium sp. ONC-T18; Thraustochytrium sp. PJA10.2; Thraustochytrium sp. TR1.4; Thraustochytrium sp. TRR2; Thraustochytrium striatum; Thraustochytrium striatum ATCC24473; Thraustochytrium striatum DQ323163; Thraustochytrium striatum DQ356665; Thraustochytrium visurgense; Ulkenia amoeboidea SEK 214; Ulkenia profunda; Ulkenia profunda BUTRBG 111; Ulkenia sp; Ulkenia sp. ATCC 28207; Ulkenia visurgensis; Ulkenia visurgensis BURAAA 141; Ulkenia visurgensis ATCC 28208.

Preferiblemente, según la invención, los traustocítridos pueden elegirse de los géneros Aurantiochytrium y Schyzochitrium, preferiblemente, de las especies

Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/2, depositada el 20 de mayo de 2014 en la CCAP,

Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/3, depositada el 20 de mayo de 2014 en la CCAP,

Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/4, depositada el 20 de mayo de 2014 en la CCAP,

Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/5, depositada el 20 de mayo de 2014 en la CCAP,

Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/6, depositada el 20 de mayo de 2014 en la CCAP,

Aurantiochytrium CCAP 4062/1, depositada el 21 de junio de 2013 en la CCAP,

Schizochytrium sp. CCAP 4087/3, depositada el 20 de mayo de 2014 en la CCAP,

Schizochytrium sp. CCAP 4087/1, depositada el 28 de febrero de 2012 en la CCAP,

Schizochytrium sp. CCAP 4087/4, depositada el 20 de mayo de 2014 en la CCAP, y

Schizochytrium sp. CCAP 4087/5, depositada el 20 de mayo de 2014 en la CCAP.

Todos los depósitos se realizaron en la CCAP [CULTURE COLLECTION OF ALGAE AND PROTOZOA (CCAP), SAMS Research Services Ltd., Scottish Marine Institute, OBAN, Argyl PA37 1QA, Reino Unido], según las disposiciones del tratado de Budapest.

Según realizaciones preferidas de la invención, la biomasa puede tener un contenido en proteínas, en peso con respecto al peso de la materia seca, de al menos el 40 %, muy preferiblemente del 35 % al 55 %. Según realizaciones preferidas de la invención, la biomasa puede tener un contenido en proteínas, en peso con respecto al peso de la materia seca, comprendido entre el 40 % y el 65 %.

Según realizaciones preferidas de la invención, la biomasa puede tener un contenido en materia grasa, en peso con respecto al peso de la materia seca, de al menos el 20 %, preferiblemente de al menos el 30 %, de los cuales del 25 % al 60 %, preferiblemente del 40 % al 60 % de PUFA. En particular, la razón de DHA:proteínas (en peso con respecto al peso de la materia seca) puede estar comprendida entre 1:1,5 y 1:9, preferiblemente entre 1:2 y 1:7, más preferiblemente entre 1:5 y 1:6.

Según algunas de las realizaciones preferidas de la invención, la biomasa puede tener, eventualmente, un contenido en carotenoides comprendido entre 5 y 250 ppm con respecto al peso de la materia seca, preferiblemente entre 150 y 200 ppm. El contenido en carotenoides puede depender de las condiciones de iluminación, pero también del medio de cultivo y de la realización del procedimiento. Por consiguiente, una misma cepa de microalgas puede conducir a cantidades de pigmentos diferentes, en función de las condiciones de cultivo.

Según realizaciones preferidas de la invención, dicha biomasa susceptible de obtenerse mediante el procedimiento según la invención, puede ser una biomasa:

- de traustocítridos que pueden elegirse de los géneros Aurantiochytrium y Schizochytrium, preferiblemente de las especies Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/2; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/3; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/4; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/5; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/6; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/1; Schizochytrium sp. CCAP 4087/3; Schizochytrium sp. CCAP 4087/1; Schizochytrium sp. CCAP 4087/4; Schizochytrium sp. CCAP 4087/5; y que pueden presentar:

- un contenido en proteínas, en peso con respecto al peso de la materia seca, de al menos el 35 %, preferiblemente de al menos el 40 %, muy preferiblemente del 35 % al 55 %, o del 45 % al 55 %;

- un contenido en materia grasa, en peso con respecto al peso de la materia seca, de al menos el 20 %, preferiblemente de al menos el 30 %, de los cuales del 25 al 60 %, preferiblemente del 40 al 60 % de PUFA;

- eventualmente, un contenido en carotenoides comprendido entre 5 y 250 ppm con respecto al peso de la materia seca, preferiblemente entre 150 y 200 ppm; y

- una tasa de humedad, antes del secado, comprendida entre el 70 % y el 90 %, preferiblemente entre el 80 % y el 85 %, o una tasa de humedad, después del secado, comprendida entre el 1 % y el 10 %, preferiblemente entre el 2 % y el 7 %.

Los contenidos y tipos de carotenoides obtenidos pueden controlarse mediante la elección de la longitud de onda de la luz incidente, así como mediante las condiciones de iluminación. Los carotenoides, tales como luteína, fucoxantina, astaxantina, zeaxantina, cantaxantina, equinenona, beta-caroteno y fenicoxantina, pueden producirse según realizaciones de la invención. Para inducir la producción de los carotenoides elegidos de astaxantina, cantaxantina, beta-caroteno y fenicoxantina, se expone el cultivo a una luz azul (aproximadamente 435-475 mn, preferiblemente 455 nm). Según una realización, los carotenoides pueden tener un contenido, con respecto a la materia grasa, en astaxantina de entre el 5 % y el 30 %, un contenido en fenicoxantina de entre el 15 % y el 30 %, y un contenido en beta-carotenos de entre el 0 % y el 30 %.

La invención tiene por objeto un procedimiento de producción de una biomasa, tal como se describió anteriormente, que comprende:

a. una primera etapa de cultivo en heterotrofía o en mixotrofía de traustocítridos, en un medio de cultivo definido, que comprende una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, una fuente de fósforo y sales, a una temperatura comprendida entre aproximadamente 24 °C y 35 °C, y en condiciones que pueden favorecer la producción de proteínas, a un contenido de al menos el 40 % de proteínas en peso con respecto al peso de la materia seca,

dividiéndose la etapa a) en dos subetapas, una primera subetapa a1) de crecimiento en el medio de cultivo apropiado, hasta obtener contenidos en fuente de carbono en el medio inferiores a 20 g/l, seguido por una segunda subetapa a2) de producción, en la que se añaden al medio de cultivo, de manera simultánea o sucesiva, una o varias disoluciones de enriquecimiento en fuente de carbono, en fuente de nitrógeno y en fuente de fósforo, el contenido en fuente de carbono se mantiene entre 0 y 50 g/l, el contenido en fuente de nitrógeno se mantiene entre 0,5 y 5 g/l, y el contenido en fuente de fósforo se mantiene entre 0,5 y 5 g/l;

b. una segunda etapa de cultivo en heterotrofía o en mixotrofía, a una temperatura de entre aproximadamente 18 0C y 25 0C, e inferior a la de la etapa a), en condiciones que pueden favorecer la acumulación de materia grasa hasta al menos el 20 % en peso con respecto al peso de la materia seca, preferiblemente al menos el 30 %, y que pueden favorecer la acumulación de los ácidos grasos poliinsaturados (PUFA), preferiblemente, de DHA y/o de EPA y/o de ARA, en el interior de la materia grasa, hasta al menos el 25 %, preferiblemente al menos el 35 % de la materia grasa, y, eventualmente, que favorecen la producción de carotenoides, hasta la obtención de una densidad de cultivo de al menos 40 g/l en materia seca, preferiblemente al menos 60 g/l, más preferiblemente al menos 80 g/l;

d. una cuarta etapa de secado de la biomasa recuperada en la tercera etapa.

De manera preferible, la etapa a) de cultivo de los traustocítridos puede ponerse en práctica en un medio de cultivo y en condiciones apropiadas para favorecer la producción de proteínas.

De manera general, dicho medio de cultivo es un medio de cultivo químicamente definido, que comprende una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, una fuente de fósforo y sales, conocido por el experto en la técnica para el cultivo de los traustocítridos, adaptándolo para las células que no se encuentran en carencia de nitrógeno durante la etapa a). Como ejemplo, pueden mencionarse los medios a base de sales marinas, complementados con una fuente de carbono. Puede mencionarse, por ejemplo, el medio de tipo Verduyn modificado (sales marinas, 15 g/l; (NH4)2SÜ4, 3 g/l; KH2PO4, 1 g/l; MgSÜ47 H2O, 0,5 g/l; Na2EDTA, 24 mg/l; ZnSO4-7H2O, 3 mg/l; MnCl2-2H2Ü, 3 mg/l; Na2MoÜ4.2H2O, 0,04 mg/l; FeSO4-7H2O, 10 mg/l; pantotenato, 3,2 mg/l; clorhidrato de tiamina, 9,5 mg/l; vitamina B12, 0,15 mg/l). También pueden mencionarse los medios de cultivo de tipo ATCC790 MB2216, o F/2.

Por “ medio de cultivo químicamente definido” se entiende, según la invención, un medio de cultivo en el que se conoce el contenido de cada elemento. De manera precisa, la invención se refiere a un medio que puede no comprender materias orgánicas ricas o complejas. Por materias orgánicas ricas o complejas, se entienden materias orgánicas no purificadas, que se presentan en forma de mezclas para las que la composición exacta y las concentraciones de los diversos componentes de la mezcla, no se conocen con exactitud, no se controlan y pueden presentar una variabilidad significativa de un lote a otro. Como ejemplo de materia orgánica rica o compleja, pueden mencionarse los extractos de levadura o las peptonas, que son productos de una reacción de hidrólisis de proteínas, o incluso las materias minerales ricas, tales como, por ejemplo, las sales minerales marinas u otros agentes de crecimiento complejos, que no tienen una concentración fija de cada uno de sus componentes.

Según la invención, dicho medio definido puede comprender sales elegidas de las sales de calcio, de cobalto, de manganeso, de magnesio, de cinc, de níquel, de cobre, de potasio, de hierro, de sodio, y sus mezclas.

Ventajosamente, dichas sales pueden elegirse de cloruro de calcio, cloruro de cobalto, cloruro de manganeso, sulfato de magnesio, sulfato de cinc, sulfato de níquel, sulfato de cobre, sulfato de potasio, sulfato ferroso, sulfato de potasio, molibdato de sodio, selenito de sodio, cloruro de sodio, y sus mezclas.

Según una realización de la invención, y según las cepas empleadas, el medio también puede comprender cloruro de sodio (NaCl), concretamente, para determinadas cepas de origen marino.

Según esta realización, pueden mencionarse, a modo de ejemplo, cepas marinas que pueden admitir un medio de cultivo que puede comprender cloruro de sodio, cepas de Schizochytrium sp., en particular, Schizochytrium sp. CCAP 4062/3 y CCAP4087/4.

Según otra realización de la invención, y según las cepas empleadas, el medio puede no comprender cloruro de sodio (NaCl), por lo menos comprender una cantidad de cloruro de sodio muy baja, que tenga menos de 3,5 g/l, preferiblemente menos de 1 g/l, más preferiblemente menos de 10 mg/l de iones de sodio y menos de 1 g/l, preferiblemente menos de 500 mg/l, más preferiblemente 200 mg/l de iones de cloruro.

Según esta realización, pueden mencionarse, a modo de ejemplo, cepas que pueden admitir un medio de cultivo que puede no comprender cloruro de sodio (NaCl), por lo menos comprender una cantidad de cloruro de sodio muy baja, cepas de Aurantiochytrium mangrovei, en particular, cepas Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/4, y CCAP 4062/1.

Según una realización de la invención, la fuente de carbono de dicho medio definido puede ser un (o varios) glúcido(s), un (o varios) acetato(s), un (o varios) alcohol(es), una (o varias) molécula(s) compleja(s), o cualquier mezcla, en cualquier proporción, de al menos dos de estas fuentes.

Por cualquier mezcla, en cualquier proporción de al menos dos de estas fuentes, se entiende al menos una de las siguientes mezclas, en cualquier proporción: un (o varios) glúcido(s) y un (o varios) acetato(s), un (o varios) glúcido(s) y un (o varios) alcohol(es), un (o varios) glúcido(s) y una (o varias) molécula(s) compleja(s), un (o varios) acetato(s) y un (o varios) alcohol(es), un (o varios) acetato(s) y una (o varias) molécula(s) compleja(s) y un (o varios) alcohol(es) y una (o varias) molécula(s) compleja(s), un (o varios) glúcido(s) y un (o varios) acetato(s) y un (o varios) alcohol(es), un (o varios) glúcido(s) y un (o varios) acetato(s) y una (o varias) molécula(s) compleja(s), un (o varios) glúcido(s) y un (o varios) acetato(s) y un (o varios) alcohol(es) y una (o varias) molécula(s) compleja(s).

Según la invención, dicha fuente de nitrógeno de dicho medio definido puede elegirse de una (o varias) sal(es) de nitrato, una (o varias) sal(es) de glutamato, una (o varias) sal(es) de amonio, urea, amoniaco, o cualquier mezcla, en cualquier proporción, de al menos dos de estas fuentes.

Por cualquier mezcla, en cualquier proporción, de al menos dos de estas fuentes, se entiende, al menos, una de las siguientes mezclas, en cualquier proporción: una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de glutamato y una (o varias) sal(es) de amonio y urea y amoniaco; una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de glutamato y una (o varias) sal(es) de amonio y urea; una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de glutamato y una (o varias) sal(es) de amonio y amoniaco; una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de glutamato y urea y amoniaco; una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de amonio y urea y amoniaco; una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de glutamato y una (o varias) sal(es) de amonio; una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de glutamato y urea; una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de glutamato y amoniaco; una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de amonio y urea; una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de amonio y amoniaco; una (o varias) sal(es) de nitrato y urea y amoniaco; una (o varias) sal(es) de glutamato y una (o varias) sal(es) de amonio y urea y amoniaco; una (o varias) sal(es) de glutamato y una (o varias) sal(es) de amonio y urea; una (o varias) sal(es) de glutamato y una (o varias) sal(es) de amonio y amoniaco; una (o varias) sal(es) de glutamato y urea y amoniaco; una (o varias) sal(es) de amonio y urea y amoniaco; una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de glutamato; una (o varias) sal(es) de nitrato y una (o varias) sal(es) de amonio; una (o varias) sal(es) de nitrato y urea;

Según una realización de la invención, la fuente de fósforo de dicho medio definido puede elegirse de ácido fosfórico, sales de fosfato, ventajosamente, de hidrogenofosfato de sodio (Na2HPO4) o dihidrogenofosfato de sodio (NaH2PO4) o dihidrogenofosfato de potasio (KH2PO4) o hidrogenofosfato de potasio (K2HPO4) o cualquier mezcla, en cualquier proporción, de al menos dos de estas fuentes.

Según una realización de la invención, dicho medio de cultivo podrá comprender cloruro de magnesio, ventajosamente, en forma de tetrahidrato (MgCl24 H2O); cloruro de calcio, ventajosamente, en forma de dihidrato (CaCl22 H2O); cloruro de cobalto hexahidratado (CoCl26H2O); cloruro de manganeso (II) tetrahidratado (MnCl24 H2O); sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4, 7 H2O); sulfato de cinc heptahidratado (ZnSO4, 7 H2O); sulfato de níquel hexahidratado (NiSO46H2O); sulfato de cobre pentahidratado (CuSO45 H2O); sulfato de potasio (K2SO4); sulfato ferroso heptahidratado (FeSO4, 7H2O); ácido bórico (H3BO3); ácido etilendiaminatetraacético en forma disódica dihidratada (Na2EDTA, 2 H2O); molibdato de sodio dihidratado, (Na2MoO4, 2 H2O); selenito de sodio, (Na2SeO3); a modo de vitamina tiamina, cobalamina o vitamina B12, pantotenato o vitamina B5; una fuente de carbono; una fuente de nitrógeno; una fuente de fósforo.

Según una forma preferida de la invención, en dicho medio de cultivo, el cloruro de magnesio puede estar a una concentración comprendida entre 0,008 y 0,012 g/l, ventajosamente, entre 0,009 y 0,011 g/l; el cloruro de calcio puede estar a una concentración comprendida entre 0,40 y 0,70 g/l, ventajosamente, entre 0,50 y 0,60 g/l; el cloruro de cobalto hexahidratado puede estar a una concentración comprendida entre 0,00008 y 0,00013 g/l, ventajosamente, entre 0,00009 y 0,00012 g/l; el cloruro de manganeso (II) tetrahidratado puede estar a una concentración comprendida entre 0,008 y 0,013, ventajosamente, entre 0,009 y 0,012 g/l; el sulfato de magnesio heptahidratado puede estar a una concentración comprendida entre 6 y 10 g/l, ventajosamente, entre 7 y 9 g/l; el sulfato de cinc heptahidratado puede estar a una concentración comprendida entre 0,008 y 0,013, ventajosamente, 0,009 y 0,012 g/l; el sulfato de níquel hexahidratado puede estar a una concentración comprendida entre 0,004 y 0,007 g/l, ventajosamente, 0,005 y 0,006 g/l; el sulfato de cobre pentahidratado puede estar a una concentración comprendida entre 0,005 y 0,009 g/l, ventajosamente, entre 0,006 y 0,008 g/l; el sulfato de potasio puede estar a una concentración comprendida entre 0,5 y 3,5 g/l, ventajosamente, entre 1 y 3 g/l; el sulfato ferroso heptahidratado puede estar a una concentración comprendida entre 0,03 y 0,05 g/l, ventajosamente, entre 0,035 y 0,045 g/l; el ácido bórico puede estar a una concentración comprendida entre 0,0155 y 0,0195 g/l, ventajosamente, entre 0,0165 y 0,0185 g/l; el ácido etilendiaminatetraacético en forma disódica dihidratada puede estar a una concentración comprendida entre 0,10 y 0,14 g/l, ventajosamente, entre 0,11 y 0,13 g/l; el molibdato de sodio dihidratado puede estar a una concentración comprendida entre 0,00001 y 0,0003 g/l, ventajosamente, entre 0,00005 y 0,0002 g/l; el selenito de sodio puede estar a una concentración comprendida entre 0,00000015 y 0,000019 g/l, ventajosamente, entre 0,00000016 y 0,00000018 g/l; la tiamina puede estar a una concentración comprendida entre 0,015 y 0,05 g/l, ventajosamente, entre 0,025 y 0,04 g/l; la cobalamina o vitamina B12 puede estar a una concentración comprendida entre 0,0004 y 0,00065 g/l, ventajosamente, entre 0,00045 y 0,00060 g/l; el pantotenato o vitamina B5 puede estar a una concentración comprendida entre 0,008 y 0,013, ventajosamente, entre 0,009 y 0,012 g/l; la fuente de carbono puede estar a una concentración comprendida entre 45 y 65 g/l, ventajosamente, entre 50 y 60 g/l; la fuente de nitrógeno puede estar a una concentración comprendida entre 7 y 11 g/l, ventajosamente, entre 8 y 10 g/l; la fuente de fósforo puede estar a una concentración comprendida entre 2 y 6 g/l, ventajosamente, entre 3 y 5 g/l.

Muy preferiblemente, según la invención, en dicho medio de cultivo el cloruro de magnesio está a una concentración de 0,0108 g/l, el cloruro de calcio está a una concentración de 0,55 g/l; el cloruro de cobalto hexahidratado (CoCl26H2O) está a una concentración de 0,000108 g/l; el cloruro de manganeso (II) tetrahidratado está a una concentración de 0,0108 g/l; el sulfato de magnesio heptahidratado está a una concentración de 8,01 g/l; el sulfato de cinc heptahidratado está a una concentración de 0,0108 g/l; el sulfato de níquel hexahidratado está a una concentración de 0,0056 g/l; el sulfato de cobre pentahidratado está a una concentración de 0,0072 g/l; el sulfato de potasio está a una concentración de 2,09 g/l; el sulfato ferroso heptahidratado está a una concentración de 0,04 g/l; el ácido bórico está a una concentración comprendida entre 0,0155 y 0,0195 g/l de 0,0175 g/l; el ácido etilendiaminatetraacético en forma disódica dihidratada está a una concentración de 0,12 g/l; el molibdato de sodio dihidratado está a una concentración de 0,000108 g/l; el selenito de sodio está a una concentración de 0,000000173 g/l; la tiamina está a una concentración de 0,032 g/l; la cobalamina o vitamina B12 está a una concentración de 0,00052 g/l; el pantotenato o vitamina B5 está a una concentración de 0,0108 g/l; la fuente de carbono está a una concentración de 55 g/l; la fuente de nitrógeno está a una concentración de 9 g/l; la fuente de fósforo está a una concentración de 4 g/l.

Según la invención, la primera etapa a) de cultivo del procedimiento puede realizarse en modo discontinuo, denominado “ batch” , en modo semicontinuo, denominado “fed batch” , o en modo de alimentación continuo.

Según otra realización, la subetapa a1) de crecimiento se pone en práctica hasta la obtención de una densidad de cultivo de al menos 40 g/l, más preferiblemente al menos 60 g/l, incluso más preferiblemente al menos 80 g/l.

El contenido en fuente de nitrógeno no limitante en la etapa a2) está, ventajosamente, comprendido entre 0,5 y 5 g/l, preferiblemente entre 0,5 y 2 g/l, y el contenido en fuente de fósforo no limitante está, ventajosamente, comprendido entre 0,5 y 5 g/l, preferiblemente 0,5 y 2 g/l. El contenido en fuente de carbono buscado para esta etapa a2) podrá estar comprendido entre 0 y 50 g/l, más preferiblemente entre 0 y 10 g/l.

De manera preferible, el cultivo cuya primera etapa a) se divide en dos subetapas a1) y a2), tal como se definieron anteriormente, se realiza en modo semicontinuo, denominado “fed batch” .

De manera general, las subetapas a1) y a2), se realizan a una temperatura de entre 24 y 35 0C, preferiblemente entre 25 y 30 °C.

La segunda etapa del procedimiento b) comienza, en general, a partir de aproximadamente 24 h después del comienzo del cultivo. En general, se realiza a una temperatura de entre 18 y 25 °C. Esta reducción de temperatura orienta la producción hacia ácidos grasos poliinsaturados cadena larga (PUFA), concretamente, DHA, ARA y EPA, en lugar de las proteínas. El perfil de ácido(s) graso(s) producido(s) depende, generalmente, de la cepa puesta en cultivo.

Durante la etapa b), de manera general, tal como se realiza para la etapa a2), puede añadirse al medio de cultivo, de manera simultánea o sucesiva, una o varias disoluciones de enriquecimiento en fuente de carbono y/o en fuente de nitrógeno y/o en fuente de fósforo, de manera que se mantiene en el medio de cultivo un contenido en fuente de carbono comprendido entre 5 y 200 g/l, preferiblemente entre 10 y 50 g/l, un contenido en fuente de nitrógeno comprendido entre 0,5 y 5 g/l, preferiblemente entre 0,5 y 2 g/l, y un contenido en fuente de fósforo comprendido entre 0,5 y 5 g/l, preferiblemente 0,5 y 2 g/l.

El cultivo se detiene, de manera general, entre 50 y 70 horas después del comienzo del cultivo.

Eventualmente, puede inducirse la producción de los carotenoides durante el cultivo, preferiblemente, durante la etapa b), pero también puede realizarse durante la duración del cultivo. Para inducir la producción de los carotenoides, se aplican condiciones mixotróficas con una luz, preferiblemente azul, a aproximadamente 435-475 nm, preferiblemente 455 nm. De este modo, el cultivo está en modo de mixotrofía. Con estas longitudes de onda se producen carotenoides, tales como astaxantina, cantaxantina, beta-carotenos y fenicoxantina. La luz se aplica, de manera general, durante al menos 18 horas, preferiblemente durante al menos 24 horas. Según una realización preferida de la invención, la luz se aplica al cultivo a partir de 24 a 50 horas, más preferiblemente a partir de 45 horas de cultivo. Esta iluminación se continúa, preferiblemente, de manera general, hasta el final del cultivo. También es posible detener la iluminación poco tiempo antes del final del cultivo (por ejemplo, un cuarto de hora, media hora, tres cuartos de hora, o una hora antes del final).

Según determinadas realizaciones de la invención, el cultivo se expone a la luz, en general, durante al menos 18 horas, preferiblemente al menos 24 horas, antes del final del cultivo. Según una realización de la invención, el cultivo se ilumina desde el comienzo, es decir, durante las etapas a) y b) de cultivo. Según una realización preferida de la invención, el cultivo se ilumina a partir del momento en el que comienza la etapa b). Según una realización preferida de la invención, el cultivo se ilumina durante al menos las últimas 18 horas de cultivo, preferiblemente durante al menos las últimas 24 horas de cultivo.

Puede usarse luz blanca, pero los inventores han constatado contenidos en carotenoides más altos usando luz azul, a una longitud de onda de aproximadamente 435-475 nm, preferiblemente 455 nm. En general, el cultivo se expone a la luz a partir de 40 a 50 horas de cultivo (es decir, a partir de 40 a 50 horas tras el comienzo del cultivo), preferiblemente a partir de 45 horas de cultivo y hasta el final del cultivo (entre 50 y 70 horas). En estas condiciones, se obtiene un contenido en carotenoides de aproximadamente 150-250 ppm (ng/mg), preferiblemente de 180 a 200 ppm (materia seca). Según una realización, los carotenoides tienen un contenido en astaxantina de entre el 5 y el 30 %. Según una realización, los carotenoides tienen un contenido en fenicoxantina de entre el 15 y el 30 %. Según una realización, los carotenoides tienen un contenido en beta-carotenos de entre el 0 y el 30 %.

De manera general, las etapas a) y b) del procedimiento pueden realizarse en condiciones heterotróficas y/o en condiciones mixotróficas. Para obtener carotenoides, en la etapa b) el cultivo se realiza en mixotrofía durante al menos 24 horas antes del final del cultivo.

Según una realización de la invención, por ejemplo, cuando no se producen carotenoides, el cultivo se lleva a cabo completamente en condiciones de heterotrofía. En general, el uso de las condiciones de mixotrofía durante el cultivo tiene un efecto positivo sobre la producción de los lípidos, concretamente, de los PUFA, así como sobre la producción de los carotenoides, y permite aumentar el rendimiento en biomasa, en ácidos grasos, concretamente, en PUFA, en particular, en DHA y en carotenoides.

Las etapas a1), a2) y b), pueden realizarse independientemente en condiciones de heterotrofía o en condiciones de mixotrofía. Según una realización de la invención, las etapas a1) y a2), se llevan a cabo en condiciones de heterotrofía, después la etapa b), total o parcialmente, en condiciones de mixotrofía. Según una realización preferida de la invención, la etapa a1) se lleva a cabo en condiciones de heterotrofía, y la etapa a2) en condiciones de mixotrofía.

Según otra realización de la invención, durante la etapa b) el cultivo se expone, en condiciones de mixotrofía, a una luz blanca. Según otra realización de la invención, durante la etapa b) el cultivo se expone, en condiciones de mixotrofía, a una luz blanca, hasta de 40 a 50, preferiblemente 45 horas de cultivo, después el cultivo se expone a una luz azul con una longitud de onda de aproximadamente 435-475 nm, preferiblemente 455 nm, durante al menos 24 horas.

Según una realización de la invención, en la puesta en práctica de un cultivo en modo de mixotrofía, la iluminación es variable y/o discontinua. Una iluminación en forma de destellos es particularmente favorable sobre el desarrollo de los protistas y permite aumentar la productividad de los mismos, concretamente, en cuanto a su producción de lípidos y de carotenoides.

Por “ iluminación discontinua” debe entenderse una iluminación acompañada por periodos de oscuridad. Los periodos de oscuridad pueden ocupar más de la cuarta parte del tiempo, preferiblemente, la mitad del tiempo o más, durante el cual se cultivan las algas.

Según un aspecto preferido de la invención, la iluminación es discontinua y, más preferiblemente, en forma de destellos. Un destello, en el sentido de la invención, es una iluminación luminosa de corta duración, es decir, de menos de 30 minutos. La duración puede ser de menos de 15 minutos, preferiblemente de menos de 5 minutos, o aún más preferiblemente de menos de 1 minuto. Según determinadas realizaciones de la invención, la duración del destello puede ser de menos de un segundo. Por ejemplo, la duración del destello puede ser de 1/10 de segundo, o 2/10 de segundo, o 3/10 de segundo, o 4/10 de segundo, o 5/10 de segundo, o 6/10 de segundo, o 7/10 de segundo, u 8/10 de segundo, o 9/10 de segundo. La iluminación luminosa, o el destello, tiene, generalmente, una duración superior a 15 segundos. Generalmente, está comprendida entre 5 segundos y 10 minutos, preferiblemente entre 10 segundos y 2 minutos, más preferiblemente entre 20 segundos y 1 minuto. Estas duraciones de destello son apropiadas para aportes de luz de “baja frecuencia” .

Según esta última realización, en la que el régimen de iluminación (el aporte de luz) es de “ baja frecuencia” , el número de destellos puede estar comprendido entre aproximadamente 2 y 3600 por hora. Puede estar comprendido, por ejemplo, entre 100 y 3600 destellos por hora. También puede estar comprendido entre 120 y 3000, o entre 400 y 2500, o entre 600 y 2000, o entre 800 y 1500 destellos por hora. También puede estar comprendido entre 2 y 200, preferiblemente entre 10 y 150, más preferiblemente entre 15 y 100, y aún más preferiblemente entre 20 y 50 por hora.

Según una realización, un destello puede tener una duración de entre 1/150000 de segundo y 1/1000 de segundo. Estas duraciones de destello son apropiadas para regímenes de iluminación de “ alta frecuencia” ; es decir, con frecuencias de destello de 150 kHz a 1 kHz, respectivamente.

Según esta realización, en la que el régimen de iluminación (el aporte de luz) es de “alta frecuencia” , los destellos pueden tener lugar entre 3,6 x105 y 5,4 x 109 veces por hora. En este caso, la variación de la luz tiene una frecuencia de entre 1 kHz y 150 kHz, es decir, entre 1000 y 150000 destellos por segundo. El aporte de luz, según esta última realización de la invención, se denomina de “ alta frecuencia” .

El número de destellos por hora puede elegirse en función de la intensidad y de la duración de los destellos (véase, a continuación). En general, la intensidad de la luz aportada en forma de destellos puede estar comprendida entre 5 y 1000 pmol.m-2. s-1, preferiblemente entre 5 y 500 pmol. m-2. s-1, o 50 y 400 gmol. m-2. s-1, y más preferiblemente entre 150 y 300 |umol. m-2. s-1. 1 gmol. m-2. s-1 corresponde a 1 pE m-2. s-1 (Einstein), unidad habitualmente usada en la bibliografía.

Según otra realización de la invención, la iluminación puede ser variable, lo cual significa que la iluminación no se interrumpe por fases de oscuridad, sino que la intensidad luminosa varía a lo largo del tiempo. Esta variación de la intensidad de luz puede ser regular y puede ser periódica o cíclica. Según la invención, también puede procederse a un aporte luminoso que combina fases de iluminación continuas y discontinuas.

Según una realización preferida de la invención, se usan condiciones de mixotrofía con dominante heterótrofo. Los traustocítridos no presentan cloroplastos. Por consiguiente, la mayor parte de la energía usada para el crecimiento procede de la fuente de carbono del medio de cultivo. En este caso, la luz induce determinadas vías metabólicas en la célula, pero no permite fijar el carbono mediante fotosíntesis.

Según una realización preferida, la iluminación de los cultivos puede garantizarse mediante un dispositivo de iluminación interno al fermentador. Por tanto, la eficacia de la iluminación es mejor con respecto a una configuración en la que la luz penetre a través de ventanillas a partir de fuentes dispuestas en el exterior. Los dispositivos de iluminación pueden estar dispuestos sobre el conjunto giratorio dotado de palas, o sobre piezas tubulares sumergidas en la masa que va a tratarse, o incluso en el fondo o techo de la cuba. Según una realización preferida de la invención, el dispositivo de iluminación puede estar situado en las contrapalas en el interior del fermentador. Un dispositivo de este tipo se describe en la solicitud de patente francesa n.° 1353641. Por tanto, el fermentador puede estar dotado de una pluralidad de fuentes de iluminación portadas por contrapalas, teniendo estas últimas la función de impedir la formación de un vórtice en el interior de la biomasa bajo la acción del conjunto giratorio de agitación. Estas fuentes de iluminación están, preferiblemente, encapsuladas, parcial o completamente, en al menos una parte de estas contrapalas, de un material compatible con la biomasa y con un grosor que permite difundir dicha luz hacia el interior de la cuba.

Según la invención, el cultivo puede realizarse mediante cualquier técnica de cultivo conocida, por ejemplo, en viales o en reactor, pero también en fermentadores o incluso en cualquier recipiente adecuado para el crecimiento de protistas, particularmente, traustocítridos, como, por ejemplo, estanques de tipo “ raceway” (canal), con la condición de que dicha técnica permita poner en práctica las condiciones de cultivo requeridas.

De manera preferible, el cultivo puede realizarse en fermentadores, según los métodos conocidos de cultivo de protistas en fermentadores.

Según la invención, la tercera etapa c) del procedimiento que permite la recuperación de dicha biomasa puede realizarse en condiciones apropiadas para obtener una biomasa que puede presentar la tasa de humedad buscada.

Dicha recuperación de los protistas puede realizarse mediante cualquier técnica que permita la recuperación de la biomasa, concretamente, los métodos de filtración, gravimétrica o a presión reducida, de centrifugación, de decantación, o incluso métodos de precipitación, seguida por una filtración gravimétrica.

La invención también tiene por objeto una biomasa susceptible de obtenerse mediante el procedimiento según la invención tal como se describió anteriormente en todas sus variantes.

La invención tiene, además, por objeto el uso de una biomasa tal como se describió anteriormente en los sectores cosmético, farmacéutico, alimentario (alimentación humana o animal).

Podrá distinguirse, en la alimentación animal, la alimentación de los animales de ganadería, en particular, en ganadería industrial, y la de los animales domésticos o incluso animales de compañía o animales denominados “de recreación” , tales como peces de acuario o aves de pajarera o en jaula.

Por “animal de ganadería” se entienden, concretamente, los animales de pastoreo (concretamente, los bovinos criados para la producción de carne, leche, queso y piel; los ovinos criados para la producción de carne, lana y queso; los caprinos), los porcinos, los conejos, las aves de corral (los pollos, las gallinas, los pavos, los patos, las ocas y otros), los équidos (ponis, caballos, potros), destinados a soportar actividades humanas (transporte, recreativas) o su alimentación, los animales acuáticos (por ejemplo, los peces, las gambas, las ostras y los mejillones). No obstante, podrá distinguirse la alimentación de los peces hasta el estadio de alevines, y la de los peces criados, incluyendo los alimentos y las composiciones alimentarias destinadas a los mismos.

Se distinguirán animales domésticos, animales de compañía o animales de recreación. También comprenden mamíferos, rumiantes o no, aves y peces. Comprenden, en particular, los perros y los gatos.

La invención también tiene por objeto un alimento, o composición alimentaria, para el ser humano o los animales, que pueda comprender una biomasa según la invención tal como se describió anteriormente. Por “ alimento” se entiende cualquier composición que pueda servir para la alimentación del ser humano o de los animales, en particular, los animales de ganadería.

Según una realización de la invención, el alimento puede estar constituido por la biomasa, secada o no, transformada o no, o por la biomasa, secada o no, transformada o no, mezclada con cualquier otro aditivo, vehículo o soporte, usado en el campo de la alimentación humana o animal. Puede mencionarse como ejemplo de aditivos, los conservantes alimentarios, los colorantes, los potenciadores del sabor, los reguladores del pH, las cargas, los agentes espesantes, texturizantes o los agentes aglutinantes. También pueden mencionarse vitaminas, probióticos y prebióticos, o incluso aditivos farmacéuticos, tales como, por ejemplo, hormonas del crecimiento, antibióticos.

Según una realización de la invención, la biomasa, secada o no, transformada o no, puede usarse por sí misma como vehículo o soporte, aditivo, conservante alimentario, colorante, potenciador del sabor, carga, agente espesante, texturizante o agente aglutinante, en un producto destinado a la alimentación humana o animal.

La presente invención se refiere, en particular, a alimentos para animales y, más particularmente, para los animales de ganadería. Estos alimentos pueden presentarse habitualmente en forma de mezclas simples, de harinas, de gránulos, de sopa o de forrajes (forraje fresco, ensilaje, heno...), en los que pueda incorporarse la biomasa según la invención. Estos alimentos pueden realizarse por el propio ganadero, o fabricarse por un profesional de la alimentación animal. Por “ alimento” se entiende todo lo que puede servir para la alimentación de los animales.

Para la ganadería intensiva de los animales, los alimentos pueden comprender, además de la biomasa de algas, una base nutricional y aditivos nutricionales. La parte esencial de la ración alimentaria del animal puede estar constituida, entonces, por la “base nutricional” y la biomasa de algas. Esta base puede estar constituida, a modo de ejemplo, por una mezcla de cereales, de proteínas y de materias grasas, de origen animal y/o vegetal.

Las bases nutricionales para animales están adaptadas a la alimentación de estos animales y las conoce bien el experto en la técnica. En el contexto de la presente invención, estas bases nutricionales pueden comprender, por ejemplo, harina de pescado, derivados del maíz, del trigo, de los guisantes y de la soja, y otros granos. Estas bases nutricionales pueden estar adaptadas para las necesidades de las diferentes especies de animales a las que están destinadas. Estas bases nutricionales pueden contener ya aditivos nutricionales, tales como vitaminas, sales minerales y aminoácidos.

Los aditivos usados en alimentación animal pueden añadirse a la base nutricionales o a la biomasa de algas. Estos aditivos pueden añadirse para mejorar determinadas características de los alimentos, por ejemplo, para aumentar el sabor, para hacer que las materias primas de los alimentos sean más digeribles para los animales, conservar más eficazmente los alimentos, o proteger a los animales. Se usan con frecuencia en ganaderías intensivas de gran envergadura.

Los aditivos que pueden usarse en la alimentación animal se dividen, concretamente, en las siguientes categorías secundarias (fuente EFSA):

- aditivos tecnológicos: por ejemplo, conservantes, antioxidantes, emulsionantes, estabilizadores, reguladores de la acidez y aditivos para el ensilaje;

- aditivos sensoriales: por ejemplo, aromas, colorantes,

- aditivos nutricionales: por ejemplo, vitaminas, aminoácidos, oligoelementos;

- aditivos zootécnicos: por ejemplo, mejoradores de la digestibilidad, estabilizadores de la flora intestinal, tales como probióticos y prebióticos;

- coccidiostáticos e histomonostáticos (antiparasitarios).

En una realización, la invención se refiere a alimentos para animales de ganadería, que pueden comprender entre el 1 % y el 60 %, preferiblemente entre el 1 y el 20 %, de manera totalmente preferible entre el 3 % y el 8 %, de una biomasa secada u obtenida mediante el procedimiento según la invención.

En otra realización, la invención se refiere a alimentos para animales de ganadería, que pueden comprender entre el 1 % y el 40 %, preferiblemente entre el 5 y el 10 %, de una biomasa no secada obtenida mediante el procedimiento de la invención.

Según una realización particular de la invención, el alimento puede estar destinado a los animales de ganadería, en particular, los bovinos, los ovinos, los porcinos, los conejos, las aves de corral y los équidos.

Según otra realización particular de la invención, el alimento puede estar destinado a los animales acuáticos, en particular, los peces, al menos hasta el estadio de alevines, incluso incluyendo los peces de piscicultura. El uso de una biomasa rica en proteínas y PUFA, y que comprende pigmentos al final de la fase de crecimiento, permite mejorar la calidad de la carne (gracias a la presencia de los PUFA y de los pigmentos).

Según otra realización particular de la invención, el alimento puede estar destinado a los animales domésticos, a los animales de compañía y/o a los animales de recreación.

Finalmente, según otra realización de la invención, la composición alimentaria puede estar destinada al ser humano, en particular, la composición puede estar adaptada para niños, adolescentes, adultos o personas ancianas.

La invención también tiene por objeto el uso de la biomasa tal como se describió anteriormente, en terapia, por ejemplo, en la prevención y el tratamiento de la desnutrición. Se conoce que, en el tratamiento de la desnutrición, la carencia de proteína es la más perjudicial y costosa de tratar. La biomasa, según una realización de la invención, puede constituir una solución completa de elección, para prevenir y/o tratar la desnutrición, concretamente, de los niños y las personas ancianas. Puede constituir una fuente proteica equilibrada y digestible (la carencia de proteína es la más perjudicial y costosa). Su fracción proteica puede estar asociada a una fuente de lípidos de alta calidad nutricional, necesarios para un correcto desarrollo sano de los niños. La biomasa según la invención, también puede estar adaptada para su uso por personas ancianas, para la prevención y/o el tratamiento de la desnutrición y otras enfermedades asociadas al envejecimiento. En este contexto, el aporte de carotenoides de la biomasa según la invención, también puede ser muy beneficioso para la salud de estas poblaciones, al ser las personas ancianas propensas a enfermedades tales como DMAE.

Por tanto, la biomasa puede incorporarse en un alimento completo (en forma húmeda, o de polvo, destinado a rehidratarse), un alimento de aperitivo, tal como barras de cereales, biscotes, pasteles secos o no, dulces, productos de cocción, tales como cremas, polvos en mezcla, productos lácteos, cereales o bebidas. La biomasa puede estar presente en suplementos alimentarios, por ejemplo, en forma de polvo, pasta para untar o salsas para añadir a la alimentación diaria.

Ejemplos

Otros aspectos y características de la invención, podrán desprenderse de la lectura de los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1: Procedimiento de cultivo a 25 0C

Se realizaron cultivos de Aurantiochytrium CCAP4062/1 en fermentadores (biorreactores) de 1 a 2 l útiles, con autómatas dedicados y supervisión mediante estación informática. Se reguló el pH del sistema mediante la adición de una base (NH4OH,). Se fijó la temperatura de cultivo a 25 °C, y después se redujo a 18 0C a las 24 h de cultivo. Se reguló la presión de oxígeno disuelto en el medio, a lo largo de todo el cultivo, mediante la velocidad de agitación (220 1200 rpm), el caudal de aire (0,6-2 vvm), incluso el caudal de oxígeno (0-2 vvm). Los parámetros de regulación, integrados en el autómata de supervisión, permitieron mantener una pO2 constante, comprendida entre el 5 % y el 30 %. El tiempo de cultivo fue de 72 horas.

La composición del medio de cultivo usado durante el cultivo se facilita en la tabla:

Se realizaron adiciones de glucosas en forma de disoluciones de enriquecimiento, que tenían una razón molar de carbono con respecto a fósforo (C:P), de 530:1.

Se realizaron cultivos previos sobre una mesa de agitación (140 rpm), en un recinto a temperatura controlada (26 °C), primero uno de 24 h, y después uno de 70 h.

Seguimiento de los cultivos:

Se realizó un seguimiento de la concentración en biomasa total mediante una medición de la masa seca (filtración sobre un filtro GF/F, Whatman, después secado en estufa, a 105 °C, durante 24 h como mínimo, antes de pesarse). El aspecto de la biomasa es de color beis claro.

Los análisis de contenidos lipídicos totales y de los ácidos grasos, se realizaron según los métodos habitualmente descritos en la bibliografía [Folch J, y col., A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues. J Biol Chem., mayo de 1957; 226(1):497-509].

Resultados:

Ejemplo 2: Procedimiento de cultivo con la etapa a) a 30 0C

Se realizaron cultivos de Aurantiochytrium CCAP4062/4 en fermentadores (biorreactores) de 1 a 2 l útiles, con autómatas dedicados y supervisión mediante estación informática. Se reguló el sistema a pH 6 mediante la adición de una base (NH4OH). Se fijó la temperatura de cultivo a 30 0C, y después se redujo a 18 °C a las 24 h de cultivo. Se reguló la presión de oxígeno disuelto en el medio, a lo largo de todo el cultivo, mediante la velocidad de agitación (220 1200 rpm), el caudal de aire (0,3-1 vvm), incluso el caudal de oxígeno (0-1 vvm). Los parámetros de regulación, integrados en el autómata de supervisión, permitieron mantener una pO2 constante comprendida entre el 5 % y el 30 %. El tiempo de cultivo estaba comprendido entre 40 y 100 horas (ensayo A: 69 horas, ensayo B: 51 horas). El medio de cultivo es el mismo que el del Ejemplo 1.

Se realizaron adiciones de glucosa en forma de una disolución de enriquecimiento que tenía una razón molar de carbono:nitrógeno:fósforo (CNP) de 190,5:95,3:1, para el ensayo A. Para el ensayo B, la disolución de enriquecimiento tenía una razón molar CNP de 95,3:3,2:1

Se realizó un encadenamiento de cultivos previos sobre una mesa de agitación (140 rpm), en un recinto a temperatura controlada (26 0C), uno primero de 24 h, y después uno de 70 h.

Seguimiento de los cultivos:

Se realizó un seguimiento de la concentración en biomasa total mediante una medición de la masa seca (filtración sobre un filtro GF/F, Whatman, después secado en estufa, a 105 0C, durante 24 h como mínimo, antes de pesarse). El aspecto de la biomasa es de color beis claro.

Ejemplo 3: Procedimiento de cultivo con iluminación con luz azul durante las últimas 25 horas de la etapa b)

Se realizaron cultivos de Aurantiochytrium CCAP4062/4 en fermentadores (biorreactores) de 5 l útiles, con autómatas dedicados y supervisión mediante estación informática. Se reguló el sistema a pH 5 mediante la adición de una base (NaOH). Se fijó la temperatura de cultivo a 30 0C, y después se redujo a 18 0C a las 24 h de cultivo. Los parámetros de regulación, integrados en el autómata de supervisión, permitieron mantener una pO2 constante, comprendida entre el 5 % y el 30 %. El tiempo de cultivo fue de 70 horas. Se expuso el cultivo a luz azul (longitud de onda de 455 nm) a partir de las 45 h de cultivo. Las fuentes de luz fueron en forma de LED (o DEL en español, por diodo electroluminiscente), que se montaron sobre dos contrapalas en el biorreactor.

El medio de cultivo es el mismo que el del Ejemplo 1.

Se realizaron adiciones de glucosa en forma de una disolución de enriquecimiento, con una razón molar CNP de 37:4:1.

Se realizó un encadenamiento de cultivos previos sobre una mesa de agitación (140 rpm), en un recinto a temperatura controlada (26 0C), primero uno de 24 h, y después uno de 70 h. A esto lo siguió un cultivo previo en fermentador de 24 h.

Seguimiento de los cultivos:

Se realizó un seguimiento de la concentración en biomasa total mediante una medición de la masa seca (filtración sobre un filtro GF/F, Whatman, después secado en estufa, a 105 0C, durante 24 h como mínimo, antes de pesarse).

Los análisis de contenidos lipídicos totales se realizaron según los métodos habitualmente descritos en la bibliografía [Folch J, y col., A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues. J Biol Chem., mayo de 1957; 226(1):497-509].

El aspecto de la biomasa es de color amarillo/naranja. La diferencia de color con respecto a los Ejemplos 1 y 2, que proporcionaron una biomasa de color blanco/crema claro, se debe a la presencia de carotenoides (principalmente, beta-carotenos, cantaxantina, fenicoxantina y astaxantina) en el matraz de la izquierda.

Carotenoides medidos en el ensayo A: 199 ppm.

Claims

REIVINDICACIONES

i. Procedimiento de preparación de una biomasa de traustocítridos, en la que una cantidad sustancialmente mayoritaria no se degrada, que comprende proteínas y ácidos grasos, caracterizado por que comprende, en peso con respecto al peso de la materia seca, al menos el 40 % de proteínas y al menos el 20 % de materia grasa, teniendo la materia grasa un contenido del 25 al 60 % de ácidos grasos poliinsaturados, elegidos de ácido araquidónico (AA), ácido docosahexaenoico (DHA) y ácido eicosapentaenoico (EPA), sin proteínas ni ácidos grasos añadidos, caracterizado por que comprende:

a. una primera etapa de cultivo de los traustocítridos, realizada en modo denominado “discontinuo” , en modo denominado “semicontinuo” , o en modo continuo, en condiciones de heterotrofía o de mixotrofía, en un medio de cultivo definido que comprende una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, una fuente de fósforo y sales, a una temperatura comprendida entre aproximadamente 24 0C y 35 0C, y en condiciones para favorecer la producción de proteínas, a un contenido de al menos el 40 % de proteínas en peso con respecto al peso de la materia seca,

dividiéndose la etapa a) en dos subetapas, una primera subetapa a i ) de crecimiento en el medio de cultivo apropiado, hasta obtener contenidos en fuente de carbono en el medio inferiores a 20 g/l, seguido por una segunda subetapa a2) de producción en la que se añaden al medio de cultivo, de manera simultánea o sucesiva, una o varias disoluciones de enriquecimiento en fuente de carbono, en fuente de nitrógeno y en fuente de fósforo, el contenido en fuente de carbono se mantiene entre 0 y 50 g/l, el contenido en fuente de nitrógeno se mantiene entre 0,5 y 5 g/l, y el contenido en fuente de fósforo se mantiene entre 0,5 y 5 g/l;

b. una segunda etapa de cultivo en condiciones de heterotrofía o de mixotrofía, a una temperatura de entre aproximadamente 18 0C y 25 0C, e inferior a la de la etapa a), en condiciones para favorecer la acumulación de materia grasa hasta al menos el 20 % en peso con respecto al peso de la materia seca, y hasta la obtención de una densidad de cultivo de al menos 40 g/l de materia seca;

c. una tercera etapa de recuperación de la biomasa obtenida en la segunda etapa, mediante la separación de dicha biomasa del medio de cultivo (la recogida); y, dado el caso,

d. una cuarta etapa de secado de la biomasa recuperada en la tercera etapa.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por que se ilumina el cultivo con una luz con una longitud de onda de entre 435 y 475 nm.
3. Procedimiento según la reivindicación 2, caracterizado por que se ilumina el cultivo durante al menos las últimas 18 horas de cultivo.
4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que la biomasa comprende al menos el 45 % de proteínas.
5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que comprende al menos el 30 % de materia grasa.
6. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que dichos traustocítridos son de un género elegido del grupo que comprende Aurantiochytrium, Aplanochytrium, Botryochytrium, Japonochytrium, Oblongichytrium, Parietichytrium, Schizochytrium, Sicyoidochytrium, Thraustochytrium y Ulkenia.
7. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque dichos traustocítridos se eligen de las especies Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/2; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/3; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/4; Aurantiochytrium mangrovei, CCAP 4062/5; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/6; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/1; Schizochytrium sp. 4087/3; Schizochytrium sp. CCAP 4087/1; Schizochytrium sp. CCAP 4087/4; Schizochytrium sp. CCAP 4087/5.
8. Biomasa de traustocítridos, que comprende, en peso con respecto al peso de la materia seca, al menos el 40 % de proteínas y al menos el 20 % de materia grasa, teniendo la materia grasa un contenido del 25 al 60 % de ácidos grasos poliinsaturados, elegidos de ácido araquidónico (AA), ácido docosahexaenoico (DHA) y ácido eicosapentaenoico (EPA), sin proteínas ni ácidos grasos añadidos, susceptible de obtenerse mediante el procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 7, con la exclusión de una biomasa de las cepas CNCM I-4469 y CNCM I-4702, depositadas en la colección nacional de cultivos de microorganismos del Instituto Pasteur.
9. Biomasa según la reivindicación 8, caracterizada por que comprende al menos el 45 % de proteínas.
10. Biomasa según una de las reivindicaciones 8 o 9, caracterizada por que comprende al menos el 30 % de materia grasa.
11. Biomasa según una de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizada por que comprende entre 5 y 250 ppm de carotenoides.
12. Biomasa según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizada por que dichos traustocítridos son de un género elegido del grupo que comprende Aurantiochytrium, Aplanochytrium, Botryochytrium, Japonochytrium, Oblongichytrium, Parietichytrium, Schizochytrium, Sicyoidochytrium, Thraustochytrium y Ulkenia.
13. Biomasa según la reivindicación 11, caracterizada por que dichos traustocítridos se eligen de las especies Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/2; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/3; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/4; Aurantiochytrium mangrovei, CCAP 4062/5; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/6; Aurantiochytrium mangrovei CCAP 4062/1; Schizochytrium sp. 4087/3; Schizochytrium sp. CCAP 4087/1; Schizochytrium sp. CCAP 4087/4; Schizochytrium sp. CCAP 4087/5.
14. Uso de una biomasa según una de las reivindicaciones 8 a 13, u obtenida mediante el procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la alimentación humana o animal.
15. Biomasa según una de las reivindicaciones 8 a 13, u obtenida mediante el procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para su uso en terapia.