JP6971927B2 - リスペリドンハプテンへの抗体及びその使用 - Google Patents

Description

（関連出願の相互参照）
本願は２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，６１５号の
利益を主張するものである。

（発明の分野）
本発明は、イムノアッセイの分野、具体的には、リスペリドンの検出のためにイムノア
ッセイに使用することができるリスペリドンに結合する抗体に関する。

統合失調症は、慢性かつ消耗性の精神障害であり、世界人口の約０．４５〜１％が罹患
している（ｖａｎ Ｏｓ，Ｊ．；Ｋａｐｕｒ，Ｓ．「Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ」Ｌａ
ｎｃｅｔ ２００９，３７４，６３５〜６４５）。治療の主な目的は、精神病の症状から
持続的寛解を達成し、再発のリスク及び影響を低減し、患者の機能及び全体的な生活の質
を向上することである。統合失調症に罹患している多くの患者は、抗精神病薬の投薬によ
り症状の安定を得ることができるにもかかわらず、投薬の順守不足が、連日投与した経口
投薬による再発の一般的な理由である。非順守の結果を調査するいくつかの研究（Ａｂｄ
ｅｌ−Ｂａｋｉ，Ａ．；Ｏｕｅｌｌｅｔ−Ｐｌａｍｏｎｄｏｎ，Ｃ．；Ｍａｌｌａ，Ａ．
「Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｗｉｔｈ Ｆｉｒｓｔ−Ｅｐｉｓｏｄｅ Ｐｓｙｃｈｏｓｉｓ」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ａｆｆｅｃｔｉｖｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ２０１２，１３８，Ｓ３〜Ｓ１４）は、処方
されたように薬物治療を行わない統合失調症に罹患している患者は再発、入院、及び自殺
の割合がより高く、死亡率が増加することを示している。統合失調症に罹患している患者
の４０〜７５％が連日経口投与のレジメンに従うことが困難であることが推測される（Ｌ
ｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｊ．Ａ．；Ｓｔｒｏｕｐ，Ｔ．Ｓ．；ＭｃＥｖｏｙ，Ｊ．Ｐ．；Ｓｗ
ａｒｔｚ，Ｍ．Ｓ．；Ｒｏｓｅｎｈｅｃｋ，Ｒ．Ａ．；Ｐｅｒｋｉｎｓ，Ｄ．Ｏ．；Ｋｅ
ｅｆｅ，Ｒ．Ｓ．Ｅ．；Ｄａｖｉｓ，Ｓ．Ｍ．；Ｄａｖｉｓ，Ｃ．Ｅ．；Ｌｅｂｏｗｉｔ
ｚ，Ｂ．Ｄ．；Ｓｅｖｅｒｅ，Ｊ．；Ｈｓｉａｏ，Ｊ．Ｋ．「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓ
ｓ ｏｆ Ａｎｔｉｐｙｓｃｈｏｔｉｃ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔ
ｈ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ」Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００５，３５３（１２），１２０９〜１２２３）。

治療薬物モニタリング（ＴＤＭ）は、治療モニタリング及び治療最適化のための、抗精
神病薬を含む薬物の血清又は血漿濃度の定量化である。そのようなモニタリングは、例え
ば、薬物治療レジメンに従わない、治療用量に達していない、治療用量で反応していない
、準最適な忍容性を有する、薬物動態学的な薬物−薬物相互作用を有する、又は不適切な
血漿濃度をもたらす異常代謝を有する、患者の識別を可能にする。抗精神病薬を吸収、分
配、代謝、及び排出する患者の能力において、考慮すべき個人の変動性がある。そのよう
な差は、併発症、年齢、併用薬、又は遺伝的特徴により生じ得る。異なる薬物製剤はまた
、抗精神病薬の代謝にも影響を及ぼし得る。ＴＤＭは、個々の患者に対する用量の最適化
を可能にし、治療結果及び機能結果を向上する。ＴＤＭは、処方する医師が、処方した投
与量の順守及び有効な血清濃度の達成を確実にすることを更に可能にする。

これまで、抗精神病薬の血清又は血漿濃度のレベルを判定するための方法は、紫外線又
は質量分析法検出による液体クロマトグラフィー（ＬＣ）の使用、及びラジオイムノアッ
セイを伴う（例えば、Ｗｏｅｓｔｅｎｂｏｒｇｈｓ ｅｔ ａｌ．，１９９０「Ｏｎ ｔ
ｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｏｍｅ ｒｅｃｅｎｔｌｙ ｄｅｖｅｌｏｐｅ
ｄ ＲＩＡ’ｓ」ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｕｒｖｅｙｓ ｉｎ Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓ ２０：２４１〜２４６．Ａｎａｌｙｓｉ
ｓ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ，Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ａｎｔ
ｉ−ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ Ａｇｅｎｔｓ、Ｈｅｙｋａｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４「
Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ ｉｎ Ｈ
ｕｍａｎｓ：Ａ Ｓｕｍｍａｒｙ」，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ５５／５，
ｓｕｐｐｌ：１３〜１７、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３「Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉ
ｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉ−ｐｓｙｃｈｏｔｉｃ ａｇｅｎｔ
ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌａｃｔｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｕｂｊｅｃｔｓ」，Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ
５４：２５７〜２６８を参照のこと）。ラジオイムノアッセイは、リスペリドン及びパ
リペリドンのうちの１つ又はその両方を検出する。米国特許第８，０８８，５９４号にお
いて、Ｓａｌａｍｏｎｅらは、リスペリドン及びパリペリドンの両方を検出するが、薬理
学的に不活性な代謝産物を検出しない抗体を使用した、リスペリドンに対する競合的イム
ノアッセイを開示する。競合的イムノアッセイに使用される抗体は、特定の免疫原に対し
て開発されている。ＩＤ Ｌａｂｓ Ｉｎｃ．（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎ
ａｄａ）は、別の抗精神病薬であるオランザピンのためのＥＬＩＳＡを市販しており、こ
れもまた、競合形式を使用する。使用説明書は、アッセイがスクリーニングのために設計
され、法医学又は研究での使用を意図するが、特に、治療での使用を意図しないことを示
す。この説明書は、全ての陽性サンプルがガスクロマトグラフィー／質量分析法（ＧＣ−
ＭＳ）で確認されるべきであることを推奨し、使用される抗体がオランザピン及びクロザ
ピンを検出することを示す（ＩＤ Ｌａｂｓ Ｉｎｃ．，「Ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ
Ｆｏｒ Ｕｓｅ Ｄａｔａ Ｓｈｅｅｔ ＩＤＥＬ−Ｆ０８３」，Ｒｅｖ．Ｄａｔｅ Ａ
ｕｇ．８，２０１１を参照のこと）。一部のこれらの方法、即ち、ＨＰＬＣ及びＧＣ／Ｍ
Ｓは、高価かつ労働集約的であり得、一般的に、適切な設備を有する大規模な又は特殊な
研究室内でのみ行われる。

抗精神病薬のレベルを判定するための他の方法、特に、処方する医師の診察室内で行う
ことができ（その結果、個々の患者に対する治療をより迅速に調整することができる）、
及びＬＣ若しくはＧＣ／ＭＳ設備を欠いている、又は迅速な試験結果を必要とする他の医
療機関において行うことができる方法が必要である。

リスペリドンは、

本発明は、リスペリドンに結合し、（ｉ）式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲ
ートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと
同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片に関する。

式中、
Ｒ¹は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ⁴）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−からなる群から選択され、
Ｒ⁴は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基、又は置換若しくは非置換
アリール基であり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは、０又は１であり、
ｒは、１、２、３、４、又は５であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。

本発明の抗体の現在好ましい実施形態は、式ＩＩ及び式ＩＩＩを有する化合物に対して
産生される、５−５及び５−９に指定される抗体、並びに式ＩＶを有する化合物に対して
産生される、２Ａ−５に指定される抗体である。他の好適な免疫原は、式Ｖ及びＶＩを有
する化合物である。

本発明の抗体は、アッセイキット及びアッセイ装置において提供され得、現在好ましい
装置は、ポイントオブケア分析を提供する側方流動アッセイ装置である。

本発明は、リスペリドンに結合する抗体を産生する方法を更に提供し、本方法は、（ｉ
）抗体産生のための宿主細胞を選択すること、及び（ｉｉ）宿主に、式Ｉの化合物と免疫
原性担体とのコンジュゲートを接種することを含み、この宿主が、リスペリドンに結合す
る抗体を産生する。リスペリドンに結合するモノクローナル抗体を産生することができる
ハイブリドーマ細胞株を産生する方法が、更に提供される。本方法は、（ｉ）抗体産生の
ための宿主を選択すること、（ｉｉ）宿主に、式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュ
ゲートを接種すること、（ｉｉｉ）接種された宿主由来の細胞株を、連続的に分裂してい
る細胞と融合させて、リスペリドンに結合するモノクローナル抗体を産生することができ
る融合細胞を作製すること、及び（ｉｖ）ハイブリドーマ細胞株を得るために、融合細胞
をクローニングすることを含む。

本発明は、サンプル中のリスペリドンを検出する方法を更に提供する。本方法は、（ｉ
）サンプルを、検出可能なマーカーで標識された本発明に従う抗体と接触させることであ
って、標識された抗体とサンプル中に存在するリスペリドンとが、標識された複合体を形
成するように、当該接触をさせること、及び（ｉｉ）サンプル中のリスペリドンを検出す
るために、標識された複合体を検出することを含む。

サンプル中のリスペリドンを検出するための競合的イムノアッセイ方法が更に提供され
る。本方法は、（ｉ）サンプルを、本発明に従う抗体と、リスペリドン又はリスペリドン
の競合的結合パートナーとに接触させることであって、抗体及びリスペリドン又はその競
合的結合パートナーのうちの１つが、検出可能なマーカーで標識され、サンプル中のリス
ペリドンが、抗体への結合に対して、リスペリドン又はその競合的結合パートナーと競合
するように、当該接触をさせること、及び（ｉｉ）サンプル中のリスペリドンを検出する
ために、標識を検出することを含む。

本発明の更なる目的、特徴及び利点が、以下の好ましい実施形態の詳細な考察から、当
業者に明白となるであろう。

ハイブリドーマ５−９で生成された競合的ＥＬＩＳＡの結果を示す。 ハイブリドーマ５−９で生成された競合的ＥＬＩＳＡの結果を示す。 リスペリドン／パリペリドンのクローン２Ａ５で生成された競合的ＥＬＩＳＡの結果を示す。 側方流動アッセイ装置において使用される競合的イムノアッセイ形式を示す。 リスペリドン／パリペリドンのクローン５−９で生成された典型的な用量反応曲線を示す。 本発明に従う側方流動アッセイ装置のチップ設計を示す。 抗体５Ｃ７及び標識されたアリピプラゾールの競合的結合パートナーで生成されたアリピプラゾールの陽性対照に対する典型的な用量反応曲線を示す。 抗体４Ｇ９−１及び標識されたオランザピンの競合的結合パートナーで生成されたオランザピンの陽性対照に対する典型的な用量反応曲線を示す。 抗体１１及び標識されたクエチアピンの競合的結合パートナーで生成されたクエチアピンの陽性対照に対する典型的な用量反応曲線を示す。 抗体５−９及び標識されたリスペリドンの競合的結合パートナーで生成されたリスペリドンの陽性対照に対する典型的な用量反応曲線を示す。 標識されたアリピプラゾールの競合的結合パートナーの存在下で、アリピプラゾール抗体５Ｃ７で生成されたアリピプラゾールを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、それぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、オランザピン、クエチアピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。 標識されたオランザピンの競合的結合パートナーの存在下で、オランザピン抗体４Ｇ９−１で生成されたオランザピンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、それぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、クエチアピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。 標識されたクエチアピンの競合的結合パートナーの存在下で、クエチアピン抗体１１で生成されたクエチアピンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、それぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、オランザピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。 標識されたリスペリドンの競合的結合パートナーの存在下で、リスペリドン抗体５−９で生成されたリスペリドンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、それぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、オランザピン、又はクエチアピンに対する用量反応曲線はない。 標識されたアリピプラゾールの競合的結合パートナーの存在下で、アリピプラゾール抗体５Ｃ７で生成されたアリピプラゾールを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、抗体及びそれぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、オランザピン、クエチアピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。 標識されたオランザピンの競合的結合パートナーの存在下で、オランザピン抗体４Ｇ９−１で生成されたオランザピンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、抗体及びそれぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、クエチアピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。 標識されたクエチアピンの競合的結合パートナーの存在下で、クエチアピン抗体１１で生成されたクエチアピンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、抗体及びそれぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、オランザピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。 標識されたリスペリドン競合的結合パートナーの存在下で、リスペリドン抗体５−９で生成されたリスペリドンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、抗体及びそれぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、オランザピン、又はクエチアピンに対する用量反応曲線はない。 多重形式で生成されたアリピプラゾールの用量反応曲線に対する、陽性対照として生成されたアリピプラゾールの用量反応曲線の比較を示す。 多重形式で生成されたオランザピンの用量反応曲線に対する、陽性対照として生成されたオランザピンの用量反応曲線の比較を示す。 多重形式で生成されたクエチアピンの用量反応曲線に対する、陽性対照として生成されたクエチアピンの用量反応曲線の比較を示す。 多重形式で生成されたリスペリドンの用量反応曲線に対する、陽性対照として生成されたリスペリドンの用量反応曲線の比較を示す。

本発明は、リスペリドンに結合する単離された抗体を提供する。本発明は、抗体を含む
アッセイキット及びアッセイ装置を提供する。また、抗体を産生する方法及び抗体を産生
することができるハイブリドーマ細胞株を産生する方法も提供する。競合的イムノアッセ
イ方法を含む、サンプル中のリスペリドンを検出する方法が更に提供される。

一実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物と免
疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体によ
り結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又は
その結合断片を目的とする。

式中、
Ｒ¹は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ⁴）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−からなる群から選択され、
Ｒ⁴は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基、又は置換若しくは非置換
アリール基であり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは、０又は１であり、
ｒは、１、２、３、４、又は５であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。

更なる実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物
と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体
により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体
又はその結合断片を目的とし、式中、
Ｒ¹は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、Ｏであり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは、０又は１であり、
ｒは、１、２、３、４、又は５であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。

更なる実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物
と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体
により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体
又はその結合断片を目的とし、式中、
Ｒ¹は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨであり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは、０又は１であり、
ｒは、１、２、３、４、又は５であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。

更なる実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物
と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体
により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体
又はその結合断片を目的とし、式中、
Ｒ¹は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨであり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは１であり、
ｒは２であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。

更なる実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物
と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体
により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体
又はその結合断片を目的とし、式中、
Ｒ¹は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

又は
Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈであり、
式中、
ｒは２であり、
ｍは、１、２、３、又は４であり、
ｎは、１又は２である。

更なる実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物
と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体
により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体
又はその結合断片を目的とし、式中、
Ｒ¹は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂又は

であり、
式中、ｒは２であり、
ｍは１である。

好ましい実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式ＶＩＩの
化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）
の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離され
た抗体又はその結合断片を目的とする。

好ましい実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式ＶＩＩＩ
の化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ
）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離さ
れた抗体又はその結合断片を目的とする。

好ましい実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、（ｉ）式ＩＸの化合物
と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体
により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体
又はその結合断片を目的とする。

好ましい実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、（ｉ）式Ｘの化合物と
免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体に
より結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又
はその結合断片を目的とする。

好ましくは、本発明の抗体は、式Ｉ、式ＶＩＩ、式ＶＩＩＩ、式ＩＸ、及び式Ｘの化合
物から選択される化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生される。

上記の式により説明される化合物、及び化合物と免疫原性担体により形成されるコンジ
ュゲートの更なる詳細は、以下の「化合物、コンジュゲート、及び免疫原」と題する項に
提供される。

本発明の抗体の更なる詳細は、以下の「抗体」と題する項に提供される。

本発明は、抗体を備えるアッセイキット、及び抗体を備えるアッセイ装置を更に提供す
る。好ましくは、アッセイ装置は、側方流動アッセイ装置である。アッセイキット及びア
ッセイ装置の更なる詳細は、以下の「アッセイキット及び装置」と題する項に提供される
。

本発明は、リスペリドンに結合する抗体を産生する方法を更に提供し、本方法は、（ｉ
）抗体産生のための宿主細胞を選択すること、及び（ｉｉ）宿主に、式Ｉの化合物と免疫
原性担体とのコンジュゲートを接種することを含み、この宿主は、リスペリドンに結合す
る抗体を産生する。更なる実施形態において、本方法において使用されるコンジュゲート
は、式ＶＩＩ、式ＶＩＩＩ、式ＩＸ、及び式Ｘの化合物から選択される化合物と免疫原性
担体とのコンジュゲートであり得る。本発明の抗体の産生における更なる詳細は、以下の
「抗体」と題する項に提供される。

リスペリドンに結合するモノクローナル抗体を産生することができるハイブリドーマ細
胞株を産生する方法が、更に提供される。本方法は、（ｉ）抗体産生のための宿主を選択
すること、（ｉｉ）宿主に、式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートを接種する
こと、（ｉｉｉ）接種された宿主由来の細胞株を、連続的に分裂している細胞と融合させ
て、リスペリドンに結合するモノクローナル抗体を産生することができる融合細胞を作製
すること、及び（ｉｖ）ハイブリドーマ細胞株を得るために、融合細胞をクローニングす
ることを含む。更なる実施形態において、本方法において使用されるコンジュゲートは、
式ＶＩＩ、式ＶＩＩＩ、式ＩＸ、及び式Ｘの化合物から選択される化合物と免疫原性担体
とのコンジュゲートであり得る。本発明に従うハイブリドーマの産生の更なる詳細は、以
下の「抗体」と題する項に提供される。

本発明は、サンプル中のリスペリドンを検出する方法を更に提供する。本方法は、（ｉ
）サンプルを、検出可能なマーカーで標識された本発明に従う抗体と接触させることであ
って、標識された抗体とサンプル中に存在するリスペリドンとが、標識された複合体を形
成するように、当該接触をさせること、及び（ｉｉ）サンプル中のリスペリドンを検出す
るために、標識された複合体を検出することを含む。本発明に従うリスペリドンを検出す
る方法の更なる詳細は、以下の「イムノアッセイ」と題する項に提供される。

サンプル中のリスペリドンを検出するための競合的イムノアッセイ方法が更に提供され
る。本方法は、（ｉ）サンプルを、本発明に従う抗体と、リスペリドン又はリスペリドン
の競合的結合パートナーとに接触させることであって、抗体及びリスペリドン又はその競
合的結合パートナーのうちの１つが、検出可能なマーカーで標識され、サンプル中のリス
ペリドンが、抗体への結合に対して、リスペリドン又はその競合的結合パートナーと競合
するように、当該接触をさせること、及び（ｉｉ）サンプル中のリスペリドンを検出する
ために、標識を検出することを含む。本発明に従うリスペリドンを検出する競合的イムノ
アッセイ方法の更なる詳細は、以下の「イムノアッセイ」と題する項に提供される。

本発明の好ましい実施形態において、リスペリドンの検出は、リスペリドンに加えて１
つ以上の検体の検出を伴う。好ましくは、１つ以上の検体は、リスペリドン以外の抗精神
病薬、より好ましくは、リスペリドン以外の抗精神病薬は、アリピプラゾール、パリペリ
ドン、クエチアピン、オランザピン、及びその代謝産物からなる群から選択される。

上述のように、本発明の抗体は、患者サンプル中の抗精神病薬の存在及び／又はその量
を検出するためのアッセイにおいて使用することができる。そのような検出は、治療薬物
モニタリングが、それらの利益の全てを可能にする。抗精神病薬のレベルの検出は、多く
の目的のために有用であり得、これらのそれぞれは、本発明の別の実施形態を表し、処方
された治療薬の患者の順守又は服薬遵守の判定、患者が経口抗精神病薬レジメンから持続
性のある注入可能な抗精神病薬レジメンに切り替えるべきかどうかを判定するための決定
ツールとしての使用、有効又は安全な薬物レベルの到達又は維持を確実にするために、経
口又は注入可能な抗精神病薬の用量レベル又は投薬間隔を増加させるべきか、又は減少さ
せるべきかどうかを判定するための決定ツールとしての使用、最小のｐＫレベルの到達の
証拠を提供することによる抗精神病薬の開始における補助となるものとしての使用、複数
の製剤中又は複数の源からの抗精神病薬の生物学的同等性を判定するための使用、多剤投
与及び潜在的な薬物−薬物相互作用の影響を評価するための使用、並びに患者が臨床治験
から除外されるべきか、又は含まれるべきかの指標、及び臨床治験の投薬要件の順守のそ
の後のモニタリングにおける補助となるものとしての使用が含まれる。

化合物、コンジュゲート、及び免疫原
化合物、コンジュゲート、及び免疫原に関して、以下の略語が使用される：ＡＭＡＳは
Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル；ＢＴＧはウシサイログロブ
リン；Ｂｕ３Ｎはトリブチルアミン；ＤＣＣはジクロロヘキシルカルボジイミド；ＤＣＭ
はジクロロメタン；ＤＩＥＡはジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド；ＥＤＴＡはエチレンジアミンテトラ酢酸；ＫＬＨはキーホールリンペット
ヘモシアニン；ＳＡＴＡはＮ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート；ＴＥＡは
トリエチルアミン；ＴＨＦはテトラヒドロフラン；ＴＦＡはトリフルオロ酢酸；Ｅｔ３Ｎ
はトリエチルアミン；ＴＢＤＭＳはｔ−ブチルジメチルシリル；ＤＩＣはジイソプロピル
カルボジイミド；ＤＭＡＰはＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン；ＥＤＣは１−エチ
ル−３（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩；ＮＨＳはＮ−ヒドロキシ
スクシンイミド；ＴＦＰはテトラフルオロフェニル；ＰＮＰはｐ−ニトロフェニル；ＴＢ
ＴＵはＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロ
ニウムテトラフルオロボレート；ＨＯＢＴはＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール；ＤＥＰ
ＢＴは３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトラジン−４（３Ｈ）
−オン；ＢＯＰ−Ｃｌはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホン酸クロリド
；ＤＴＴはジチオエリトリトール。

用語「コンジュゲート」は、別々の部分と一緒に接合することで形成される任意の物質
を指す。代表的なコンジュゲートには、式Ｉの化合物等の小分子を、担体又はポリアミン
ポリマー、特にタンパク質等の大分子と一緒に接合することにより形成されるものが含ま
れる。コンジュゲートにおいて、小分子は、大分子上の１つ以上の活性部位で接合するこ
とができる。

用語「ハプテン」は、部分的又は不完全な抗原を指す。ハプテンは、抗体形成を刺激す
ることはできないが、抗体と反応するタンパク質を含まない物質である。抗体は、高分子
量の免疫原性担体にハプテンを結合し、この結合した生成物、即ち、免疫原をヒト又は動
物対象に注射することにより形成される。

用語「免疫原」は、生物体において免疫応答を誘発する、生じる、又は生成し得る物質
を指す。

本明細書で使用される場合、「免疫原性担体」は、免疫原性物質、一般的に、ハプテン
と１つ以上の位置で結合し、それにより、これらのハプテンと結合し得る抗体の産生を可
能にするタンパク質である。免疫原性担体物質の例としては、タンパク質、糖タンパク質
、複合ポリアミノ−多糖類、粒子、及び外来物質として認識され、結果として宿主から免
疫学的な応答を誘発する核酸が挙げられるが、これらに限定されない。ポリアミノ−多糖
類は、この調製に関して知られている従来の手段のいずれかを使用して多糖類から調製さ
れ得る。

アルブミン、血清タンパク質、リポタンパク質等を含むが、これらに限定されない、様
々な型のタンパク質が、免疫原性担体として使用され得る。例示的なタンパク質には、ウ
シ血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、卵オボアルブミン、ウシチログ
ロブリン、第Ｖ画分ヒト血清アルブミン、ウサギアルブミン、カボチャ種子グロブリン、
ジフテリア毒素、テタヌス毒素、ボチリヌス毒素、サクシニル化タンパク質、及びポリリ
シン等の合成ポリ（アミノ酸）が含まれる。

免疫原性担体はまた、ポリアミノ−多糖類を含み得、これらは、単糖類の反復的な縮合
により構築された、高分子量のポリマーである。多糖類の例は、デンプン、グリコーゲン
、セルロース、アラビアガム等の炭水化物ガム、寒天等である。多糖類はまた、ポリ（ア
ミノ酸）残基及び／又は脂質残基も含有する。

免疫原性担体はまた、単独の又は上述のポリ（アミノ酸）又は多糖類のうちの１つにコ
ンジュゲートされているポリ（核酸）であり得る。

免疫原性担体はまた、固体粒子も含むことができる。粒子は、一般に、直径が少なくと
も約０．０２マイクロメートル（μｍ）で約１００μｍ以下、通常、約０．０５μｍ〜１
０μｍである。粒子は、最適には水に近似する密度、一般に約０．７〜１．５ｇ／ｍＬの
、有機又は無機の膨張可能又は非膨張可能な多孔質又は非多孔質の粒子であり得、透明、
部分的透明、又は不透明な材料から構成され得る。粒子は、細胞及び微生物等の生物学的
材料であり得、非限定的な例として、赤血球、白血球、リンパ球、ハイブリドーマ、スト
レプ卜コッカス属、スタヒロコッカスアウレウス、大腸菌、及びウイルス等が挙げられる
。粒子はまた、有機及び無機ポリマー、リポソーム、ラテックス、リン脂質小胞、又はリ
ポタンパク質からも構成され得る。

用語「誘導体」は、１つ以上の化学反応により親化合物から作られた化学化合物又は分
子を指す。

化学化合物の用語「類似体」は、炭素原子鎖及び参照化合物と同じ特定の官能基を含有
する化学化合物を指すが、類似体の炭素鎖は、参照化合物の鎖よりも長い又は短い。

「標識」、「検出分子」、「レポーター」、又は「検出可能なマーカー」は、検出可能
なシグナルを生成する又は誘発されて生成することができる任意の分子である。標識は、
検体、免疫原、抗体、受容体等の別の分子、又はリガンド等の受容体に結合することがで
きる分子、特にハプテン又は抗体にコンジュゲートさせることができる。標識は、連結又
は架橋部分により直接的又は間接的に結合させることができる。標識の非限定的な例とし
ては、放射能アイソトープ（例えば、¹²⁵Ｉ）、酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼ、
ペルオキシダーゼ）、酵素断片、酵素基質、酵素阻害剤、コエンザイム、触媒、フルオロ
フォア（例えば、ローダミン、フルオレセインイソチオシアネート、若しくはＦＩＴＣ、
若しくはＤｙｌｉｇｈｔ ６４９）、染料、化学発光物質及び発光物質（例えば、ジオキ
セタン、ルシフェリン）、又は増感剤が挙げられる。

本明細書で使用される場合、「スペーサ」は、官能性連結基を介してハプテン、担体、
免疫原、標識、又は結合パートナー等の２つ以上の部分構造体を接続する化学構造の部分
を指す。これらのスペーサ基は、一般的に存在する原子からなり、有機化合物に一般的に
見られる方法で組み立てられるため、「有機スペーサ基」として称され得る。スペーサを
組み立てるために使用される化学的成分は、本出願において以下に記載される。好ましい
スペーサの中には、直鎖状又は分枝状の飽和又は不飽和炭素鎖がある。これらの炭素鎖は
また、鎖内に１つ以上のヘテロ原子、鎖内に又は鎖の末端で任意の炭素原子の１つ以上の
水素を置き換える１つ以上のヘテロ原子も含み得る。「ヘテロ原子」とは、酸素、窒素、
リン、及び硫黄からなる群から選択される炭素以外の原子を意味し、この窒素、リン、及
び硫黄原子は、任意の酸化状態で存在し得、炭素若しくはそれらに結合する他のヘテロ原
子を有し得る。スペーサはまた、鎖の一部として、又は鎖の中の原子のうちの１つの上の
置き換えとして環式又は芳香族基も含み得る。

スペーサ基の原子の数は、水素以外の原子を計数することにより決定される。スペーサ
基の内部の鎖の原子の数は、接続されている部分構造体の間の最短経路に沿って水素以外
の原子の数を計数することにより決定される。好ましい鎖の長さは、１〜２０個の原子で
ある。

「官能性連結基」とは、ハプテンに存在する反応基を指し、別の部分（標識若しくは担
体等）を用いて、ハプテンのコンジュゲートを生成するために共有化学結合の形成を通し
て、ハプテン部分を別の部分に連結し得る利用可能な反応部位を提供するために使用され
得る。ハプテンは、このようにして、ビオチン等の部分に連結して、競合的結合パートナ
ーを形成し得る。

スペーサ基を使用して、ハプテンを担体に連結し得る。異なる長さのスペーサにより、
抗体形成プロセスの最適化のために免疫化される動物又はヒトの免疫系への提示のために
担体とは異なる距離を有するハプテンを結合させることができる。ハプテン分子中の異な
る位置への結合により、抗体認識に影響を及ぼす免疫系にハプテン上の特定部位を示す機
会を与える。スペーサは、水性培地中でより可溶性であるハプテン誘導体を作製するため
に親和性可溶化基を含み得る。親水性可溶化基の例としては、ポリオキシアルキルオキシ
基、例えば、ポリエチレングリコール鎖、ヒドロキシル基、カルボキシレート基、及びス
ルホネート基が挙げられるが、これらに限定されない。

用語「求核基」又は「求核剤」は、電子対を提供して、反応において化学結合を形成す
る種を指す。用語「求電子性基」又は「求電子剤」は、求電子剤から電子対を受容して、
反応において化学結合を形成する種を指す。

用語「置換」は、親分子上の任意の位置で炭素原子上の水素原子の代わりに、１個の原
子又は原子群の置換を指す。置換基の非限定的な例には、ハロゲン原子、アミノ基、ヒド
ロキシ基、カルボキシ基、アルキル基、アリール基、ヘテロアルキル基、ヘテロアリール
基、シアノ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルデヒド基、及びケトン基が挙げられる。

用語「アルキル」は、別途記載のない限り、最高で１２個の炭素原子の飽和又は不飽和
の直鎖及び分枝鎖ラジカルを指し、具体的には、飽和の任意の程度又はレベルを有するラ
ジカルを含むことが意図される。アルキルとしては、メチル、エチル、プロピル、イソプ
ロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペン
チル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチル
、ノニル、デシル、ウンデシル、及びドデシルが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「シクロアルキル」は、３〜１０個の炭素原子からなる飽和又は部分的に不飽和の
単環式又は二環式の炭化水素環ラジカルを指す。アルキル置換基は、任意に、環上に存在
し得る。例としては、シクロプロピル、１，１−ジメチルシクロブチル、１，２，３−ト
リメチルシクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロヘキセニルが挙げられる。

用語「ヘテロアルキル」は、鎖内に１つ以上のヘテロ原子を含むアルキル基を指し、１
つ以上のヘテロ原子は鎖内又は鎖の末端で任意の炭素原子に１つ以上の水素を置換する。

用語「アミノアルキル」は、アルキル鎖に沿って任意の炭素原子に結合される少なくと
も第１級又は２級アミノ基を指す。

用語「アルコキシ」は、別途記載のない限り、酸素原子に結合される最高で１２個の炭
素原子の直鎖及び分枝鎖ラジカルを指す。例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ
、イソプロポキシ、及びブトキシが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「アルコキシアルキル」は、アルキル鎖に沿って任意の炭素原子に結合される少な
くとも１つのアルコキシ基を指す。

用語「チオアルキル」は、アルキル鎖に沿って任意の炭素原子に結合される少なくとも
１つの硫黄基を指す。硫黄基は、いずれかの酸化状態であり得、スルホキシド、スルホン
、及び硫酸塩を含む。

用語「カルボキシレート基」には、カルボン酸、アルキル、シクロアルキル、アリール
、又はアラルキルカルボキシレートエステルが含まれる。

用語「アルキルカルボニル」は、アルキル鎖に沿って任意の炭素原子に結合されるカル
ボニル基を有する基を指す。

用語「ヘテロアリール」は、５員〜７員の単環式、又は８員〜１０員の二環式芳香環ラ
ジカルを指し、これらの任意の環は、Ｎ、Ｏ、又はＳから選択される１〜４個のヘテロ原
子からなり得、窒素及び硫黄原子は、許容されるいずれかの酸化状態で存在し得る。例と
しては、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル
、フリル、イミダゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、ピラジニ
ル、ピラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリル、キノリニル、チアゾリル、及びチ
エニルが挙げられる。

用語「アリール」は、環内に６〜１２個の炭素を含有する単環式又は二環式芳香環ラジ
カルを指す。アルキル置換基は、任意に、環上に存在し得る。例としては、フェニル、ビ
フェニル、及びナフタレン（napththalene）が挙げられる。

用語「アラルキル」は、アリール置換基を含有するＣ_1〜6アルキル基を指す。例として
は、ベンジル、フェニルエチル、又は２−ナフチルメチルが挙げられる。

用語「アシル」は、基−Ｃ（Ｏ）Ｒ_aを指し、式中、Ｒ_aは、水素、アルキル、シクロア
ルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、及びヘテロアリールである。「アシル
化剤」は、分子に−Ｃ（Ｏ）Ｒ_a基を添加する。

用語「スルホニル」は、基−Ｓ（Ｏ）₂Ｒ_bを指し、式中、Ｒ_bは、水素、アルキル、シ
クロアルキル、ヘテロアルキル、ハロアルキル、アリール、アラルキル、及びヘテロアリ
ールである。「スルホニル化剤」は、分子に−Ｓ（Ｏ）₂Ｒ_a基を添加する。

担体部分へのハプタンの結合のための反応性官能性連結基を担持するスペーサは、様々
な方法により調製され得る。このスペーサは、ハプテンと担体との選択的な逐次反応を可
能にするようにいずれかの末端で基と特異的に官能化されるか又は活性化される分子を使
用して形成され得るが、同じ反応性部分は、両末端でも使用され得る。ハプテンと担体に
結合されるべき官能性連結基との反応のために選択される基は、ハプテンとハプテンが結
合される担体の官能性基の種類により判定される。スペーサ並びにハプテン及び担体への
結合の方法としては、Ｂｒｉｎｋｌｅｙ，Ｍ．，Ａ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈ
ｅｍ．１９９２，３：２〜１３，Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇｒｅｇ Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ
ｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，
Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ，２００８及びＴｈｅｒｍｏ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｃａ
ｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ３７４７ Ｎ Ｍｅｒｉ
ｄｉａｎ Ｒｄ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ ＵＳＡ ６１１０１，ｐｈ ８００−８７４
−３７２３、又はｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｉｅｒｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ／からダウンロー
ド若しくはハードコピーの要求で利用可能、及びその中の参考文献により記載されるもの
が挙げられるが、これらに限定されない。スペーサ基の形成のための多くの特異的に活性
化された分子は、供給メーカー、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから市販
されている。

アミノ基を担持するハプテンについては、ハプテンへのスペーサの結合モードには、ハ
プテン上のアミンとハロゲン化アシル又は活性エステルを担持するスペーサ構築ブロック
との反応が含まれる。「活性エステル」は、安定した連結を形成する緩やかな条件下で、
求核基、例えば、アミノ基との反応を行うエステルとして定義される。安定した連結は、
例えば、その後の合成工程、免疫原としての使用、又は生化学的アッセイにおいて、更な
る使用の条件下で、無傷の状態のままでいるものとして定義される。安定した連結の好ま
しい例は、アミド結合である。活性エステル及び形成の方法は、Ｂｅｎｏｉｔｏｎ，Ｎ．
Ｌ．，ｉｎ Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ，Ｔｈｉｅｍｅ Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｖｏｌ Ｅ２２
ｓｅｃｔｉｏｎ ３．２：４４３及びＢｅｎｏｉｔｏｎ，Ｎ．Ｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔａｙｌｏｒ ａｎｄ Ｆｒａｎｃｉｓ
，ＮＹ，２００６により記載される。好ましい活性エステルとしては、ｐ−ニトロフェニ
ルエステル（ＰＮＰ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）、及びテトラ
フルオロフェニルエステル（ＴＦＰ）が挙げられる。ハロゲン化アシルは、当業者に知ら
れている多くの方法、例えば、カルボン酸と塩化チオニル又は塩化オキサリルとの反応に
より調製され得る、Ｆｉｅｓｅｒ，Ｌ．Ｆ．ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ，Ｍ．Ｒｅａｇｅｎｔ
ｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓ
ｏｎｓ，ＮＹ，１９６７及びその中の参考文献を参照のこと。これらは、Ｗｕ ｅｔ．ａ
ｌ，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００４，６（２４）：４４０７により記載され
る活性二官能性スペーサにも使用され得るｐ−ニトロフェニルエステル（ＰＮＰ）等の他
の活性エステルに変換され得る。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルは、
非プロトン性溶媒中のトリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基の
存在下で、国際公開第ＷＯ２０１２０１２５９５号の実施例３５に記載される無水条件下
で、Ｎ，Ｎ−ジスクシンイミジルカーボネート（ＣＡＳ ７４１２４−７９−１）と化合
物のカルボン酸との反応により、あるいは、無水条件下で、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ド及びジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）又は他の脱水剤を使用することにより
調製され得る。テトラフルオロフェニルエステル（ＴＦＰ）は、非プロトン性溶媒中のト
リエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基の存在下で、Ｗｉｌｂｕｒ
，ｅｔ．ａｌ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２００４，１５（１）：２０３
により報告される無水条件下で、カルボン酸と２，３，５，６−テトラフルオロフェニル
トリフルオロアセテートとの反応により調製され得る。当業者により、とりわけ、表１に
示されるスペーサが、既知の方法を使用して得ることができ、通常の反応条件の最適化の
ために使用するアミノを担持するハプテンに結合させることできることを認識されよう。
これらのスペーサは、担体におけるチオール基へのハプテンの結合を可能にする。

カップリング剤の存在下で、ハプテン上のアミンとスペーサ構築ブロック上のカルボン
酸官能基の直接カップリングはまた、結合モードとして使用され得る。好ましい試薬は、
ペプチド合成において一般的に使用されるものである。ペプチドカップリング試薬として
は、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニ
ウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ，ＣＡＳ ＃１２５７００−６７−６）（Ｐｒｕ
ｈｓ，Ｓ．，Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．２００６，１０：４４１を参照
のこと）、カルボジイミド脱水剤を含むＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ，
ＣＡＳ ＃２５９２−９５−２）、例えば、Ｎ−Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（
ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、又は１−エチル−３（３−ジメチ
ルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（Ｋｏｎｉｇ Ｗ．，Ｇｅｉｇｅｒ
，Ｒ．Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１９７０，１０３（３）：７８８を参照のこと）、３−（ジ
エトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトラジン−４（３Ｈ）−オン（ＤＥＰ
ＢＴ，ＣＡＳ＃１６５５３４−４３−０）（Ｌｉｕ，Ｈ．ｅｔ．ａｌ．，Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００２，１３（７）：６０１を参照のこと）、
ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホニッククロリド（ＢＯＰ−Ｃｌ，ＣＡ
Ｓ ＃６８６４１−４９−６）（Ｄｉａｇｏ−Ｍｅｓｅｇｕｅｒ，Ｊ ｅｔ．ａｌ．Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ，１９８０，７：５４７〜５１、及びＢｅｎｏｉｔｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃ
ａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００５，Ｃｈａｐｔｅｒ ２により詳述されるもの、Ａｄｖａ
ｎｃｅｄ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ（ａａｐｐｔｅｃ），６３０９ Ｓｈｅｐａｒｄｓｖｉｌｌｅ Ｒｄ．，Ｌｏｕｉ
ｓｖｉｌｌｅ ＫＹ ４０２２８，ｐｈ ８８８ ６９２ ９１１１により提供される技
術告示、ｗｗｗ．ａａｐｐｔｅｃ．ｃｏｍ、及びその中の参考文献を参照のこと）等が挙
げられるが、これらに限定されない。これらの方法は、スペーサにハプテンを結合する安
定したアミド連結を形成する。既知の方法を使用して得ることができ、上に記載及び言及
される方法を利用する通常の反応条件の最適化のために使用するアミノを担持するハプテ
ンに結合させることできるスペーサの例を、表２に示すが、表２中のものに限定されない
。これらのスペーサは、担体におけるチオール基へのハプテンの結合を可能にする。

スペーサはまた、段階的な様式で、ハプテンへの適切な化学基の逐次結合により構成さ
れ得、担体に結合することができる官能性連結基を形成する工程が含まれる。一般的な反
応スキームの下の例示的な例を参照のこと。

更に、ハプテンが求核基、例えば、スペーサの結合〜点になるであろうチオール基、ア
ミノ基、又はヒドロキシル基を有する場合、スペーサはまた、チオール基、アミン基、又
はヒドロキシル基のアルキル化により構成され得る。置換反応を行うことができる部分で
適切に置換される任意のアルキル基、例えば、ハロゲン化アルキル、又はｐ−トルエンス
ルホネート等のスルホン酸エステルは、スペーサを結合させるために使用され得る。アル
キル化反応の多くの例は、当業者には知られており、特定の例は、一般の化学文献におい
て見出され、通常の実験を通して最適化され得る。多くの参考文献によるアルキル化反応
の考察は、Ｃｈａｐｔｅｒ １０ ｏｆ Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａ
ｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．，ａｎｄ Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｊｏ
ｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．ＮＹ，２００１において見出され得る。他の
連結はまた、求核部分、例えば、ハプテン上のアミンと、尿素を形成するためのイソシア
ネートとの反応、又はチオ尿素連結を形成するためのイソチオシアネートとの反応を使用
され得る、Ｌｉ，Ｚ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ，Ｓｕｌｆｕｒ ａｎｄ
Ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，２００３，１７
８（２）：２９３〜２９７を参照のこと。スペーサを、ヒドロキシル基を担持するハプテ
ンに結合させて、イソシアネート基との反応により、カルバメート又はウレタン連結を形
成し得る。スペーサは、ある末端上でイソシアネート官能性基と、担体と反応させること
ができる官能性連結基と特異的に活性化され得る、Ａｎｎｕｎｚｉａｔｏ，Ｍ．Ｅ．，Ｐ
ａｔｅｌ，Ｕ．Ｓ．，Ｒａｎａｄｅ，Ｍ．ａｎｄ Ｐａｌｕｍｂｏ，Ｐ．Ｓ．，Ｂｉｏｃ
ｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，１９９３，４：２１２〜２１８を参照のこと。

カルボン酸基を担持するハプテンについては、ハプテンへのスペーサ部分の結合モード
には、ハロゲン化アルキル若しくは活性エステルとしてカルボン酸基の活性化が含まれ、
この例を表３に示し、この調製は、上述されており、続いて、アミド、ヒドラジド、ジア
シルヒドラジン、若しくはエステル連結を形成するために、スペーサ部分上でのアミノ（
−ＮＨ₂−）、ヒドラジノ（−ＮＨ−ＮＨ₂−）、ヒドラジド（−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ₂
−）、又はヒドロキシル基（−ＯＨ）との反応、あるいはスペーサ部分上での又は上述さ
れるペプチドカップリング試薬及び／若しくはカルボジイミド脱水剤により担体上での直
接的な、アミノ基とのカルボン酸基の直接カップリングが含まれ、これらの例を表４及び
５に示す。活性化エステルの形成及びペプチドカップリング剤の使用のために上に言及さ
れる参考文献に見出される手順は、スペーサ構築ブロックへのカルボンサンを担持するハ
プテン、及び通常の反応条件の最適化のために使用する利用可能なアミノ基とのタンパク
質担体の結合のために使用され得る。

他の求電子基は、スペーサ、例えば、ハロゲン化スルホニル

又は、求電子リン基、例えば、

Ｍａｌａｃｈｏｗｓｋｉ，Ｗｉｌｌｉａｍ Ｐ．，Ｃｏｗａｒｄ，Ｊａｍｅｓ Ｋ．，
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９４，５９（２５）
：７６１６を参照のこと、
又は

である、Ｒ_cは、アルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキルで
ある、スペーサに結合させるために、ハプテン上に存在し得る。

Ａｌｉｏｕａｎｅ，Ｌ．，ｅｔ．ａｌ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２
０１１，５２（２８）：８６８１を参照のこと。

アルデヒド基又はケトン基を担持するハプテンは、アシルヒドラゾンを形成するための
スペーサ上でのヒドラジド基Ｈ₂Ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−との反応が含まれるが、これに限
定されない方法を使用して、スペーサに結合させ得る、Ｃｈａｍｏｗ，Ｓ．Ｍ．，Ｋｏｇ
ａｎ，Ｔ．Ｐ．，Ｐｅｅｒｓ，Ｄ．Ｈ．，Ｈａｓｔｉｎｇｓ，Ｒ．Ｃ．，Ｂｙｒｎ，Ｒ．
Ａ．ａｎｄ Ａｓｋｅｎａｓｚｉ，Ａ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，２６７
（２２）：１５９１６を参照のこと。担体上でのチオール基への結合を可能にする二官能
性ヒドラジドスペーサ基の例を表６に示す。

ハプテンはまた、担体と反応し得るチオール基を含有し得るが、但し、この担体は、チ
オールと反応し得る基を提供するために修飾されるものとする。担体基は、担体上のアミ
ノ基と、Ｎ−スクシンイミジルマレイミドアセテート（ＡＭＡＳ，ＣＡＳ ＃５５７５０
−６１−３）、スクシンイミジルヨードアセテート（ＣＡＳ＃ １５１１９９−８１−４
）との反応、又は担体へのハプテンの結合をもたらす反応を行い得る基を導入するために
、表１に示される二官能性スペーサ基のうちのいずれかによる、マレイミド官能性基を含
有する基の結合が含まれるが、これに限定されない、方法により修飾され得る。

担体との結合を形成することができる官能性連結基は、安定した連結を形成することが
できる任意の基であり得、担体上で多くの異なる基と反応し得る。官能性連結基は、好ま
しくは、担体上でアミノ基、カルボン酸基、若しくはチオール基、又はその誘導体と反応
し得る。官能性連結基の非限定的な例は、カルボン酸基、ハロゲン化アシル、活性エステ
ル（上で定義されるように）、イソシアネート、イソチオシアネート、ハロゲン化アルキ
ル、アミノ基、チオール基、マレイミド基、アクリル酸基（Ｈ₂Ｃ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）−）
、又はビニルスルホン基Ｈ₂Ｃ＝ＣＨ−ＳＯ₂−）である、Ｐａｒｋ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ．ａ
ｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２０１２，２３（３）：３５０を参照の
こと。官能性連結基は、ハプテンと段階的に反応し得る特異的に活性化したスペーサ構築
ブロックの一部として存在し得、得られたハプテン誘導体は、担体と反応し得る。あるい
は、ハプテンは、その後の反応により官能性連結基に形質転換され得る前駆体基を担持す
るスペーサで誘導体化され得る。スペーサ上の官能性連結基がアミン又はカルボン酸基で
あるとき、担体上のカルボン酸基又はアミンとのカップリング反応は、これらの試薬につ
いて上で言及される参考文献の手順に従って、ペプチドカップリング試薬の使用を通して
直接行われ得る。

特定のジスルフィド基、例えば、ピリジルジスルフィドは、スペーサ上で官能性連結基
として使用され得、担体上でチオール基との交換を行い、混合ジスルフィド結合を形成し
得る、Ｇｈｅｔｉｅ，Ｖ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，１
９９０，１：２４〜３１を参照のこと。これらのスペーサは、アミンを担持するハプテン
と、ピリジルジスルフィド基を担持するスペーサに結合される活性エステルとの反応によ
り結合され得、これらの例には、表７に示されるものが含まれるが、これらに限定されな
い。

ほとんどの場合、担体は、タンパク質であり、アミン反応性官能性連結基による反応に
より直接、又はＮ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ、ＣＡＳ
７６９３１−９３−６）若しくはその類似体を含むチオール含有基で誘導体化した後、ヒ
ドロキシルアミンによりアセテート基を開裂し、ハプテン上での官能性連結基との反応の
ためにチオール基を曝露することにより、リシン残基のε−アミノ基が、結合のために使
用され得る。チオール基はまた、２−メルカプトエチルアミン、Ｂｉｌａｈ，Ｍ．，ｅｔ
．ａｌ．，Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１０，８０（１）：４９を参
照のこと、ホスフィン試薬、Ｋｉｒｌｅｙ，Ｔ．Ｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８９，１８０（２）：２３１を参照のこと、又はジチオエリトリ
トール（ＤＴＴ，ＣＡＳ ３４８３−１２−３）Ｃｌｅｌａｎｄ，Ｗ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ，１９６４，３：４８０〜４８２を参照のこと、が含まれるが、これらに限定
されない、緩和な還元試薬を用いて、タンパク質担体内でのジスルフィド結合の還元によ
り担体に導入され得る。

一般的な反応スキーム
本発明に従う抗体を産生するために有用な化合物は、以下に記載される一般的な合成方
法に従って合成することができる。式（Ｉ）の化合物は、当業者に既知の方法により調製
することができる。以下の反応スキームは、本発明の代表的な実施例であるということの
みを意味し、本発明の限定であることは全く意味しない。

リスペリドンの親環構造へのスペーサの結合は、スキーム１に示されるシリル保護され
た出発化合物の使用を通して達成され得、この調製は、実施例１に記載される。Ｎ保護し
たハロアルキル誘導体によるアルキル化もまた、実施例１に記載される。鎖の長さが異な
るＮ保護したハロアルキル誘導体は、市販されているか、又は当業者には知られている標
準的な有機反応により作製され得る。ｒの好ましい値は、１〜５である。実施例１に記載
される脱保護は、更に精緻化して、更なるスペーサ原子を結合させ得るか、又は担体に直
接連結され得る、アミノ化合物を提供し得る。最終生成物においてヒドロキシル基を欠い
ているアミノ化合物の誘導体は、実施例３に記載されるように作製され得る。

リスペリドンのアルキル化はまた、チオール、例えば、３−メルカプトメチルプロピオ
ネートを使用し、Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｌ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ
Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１０，２０：７１５９の方法を使用して達成
され得、これには、スキーム２に示されるように、ＤＭＦ中のＫ₂ＣＯ₃を使用し、続いて
、水性ＴＨＦ中のＮａＯＨにより加水分解して、担体に直接結合させ得るか、又は更に精
緻化して、スペーサ部分を延在させ得るカルボキシ基で終端するチオアルキル連結を担持
するハプテンの類似体を提供し得る。また、米国特許第２０１１０２４５２２４号の中間
体５３５を作製するために使用される方法に従って、スキーム２に示されるように、アミ
ンによるアルキル化を行ってもよい。スキーム２のアミノアルキル又はチオアルキル類似
体（Ｒ１がＯＨ又はＨである）の変形は、熟練した科学者による上述の参考文献に教示さ
れる通常の化学手順の最適化により作製され得る。

スキーム３に示される出発化合物のフェノール性ヒドロキシル基（式中、Ｒ₁はＨ又は
シリル保護アルコールである）は、担体への結合に対して、官能性連結基を担持する基の
導入部位であり得る。フェノール性化合物は、スキーム３に示され、米国特許第２００６
０２５１５９２号に記載されるように、無水コハク酸と直接反応させて、カルボキシを担
持する中間体を得られ得るか、又はスキーム４に示されるように、本開示の他の箇所に提
供されるＡｎｎｕｎｚｉａｔｏの参考文献に従って、イソシアネート二官能性スペーサと
反応させて、チオール反応性官能性リンカーを担持するハプテンを得られ得る。その後の
実施例に記載されるように、Ｒ₁がシリル保護アルコールである場合、脱保護が必要とさ
れる。

スキーム５は、実施例１及び２等のアルキルアミン基で終端するスペーサを有するハプ
テンが、どのようにしてマレイミド基で更に官能化され得るかを示す。マレイミドは、当
該技術分野において既知の任意の方法により導入され得る。例えば、ジクロロメタン等の
溶媒中のＮ−マレオイル置換アルキルアミノ酸と、ジイソプロピルエチルアミン及びジエ
チルシアノホスホネート等のカップリング試薬との反応により、ハプテン上にマレイミド
で官能化されたスペーサを得る。トリブチルアミン等の塩基の存在下で、室温で約１時間
、リスペリドン由来アミンと、ＤＭＦ等の溶媒中の２，５−ジオキソピロリジン−１−イ
ル２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセテート
等のアルキル−マレイミドで官能化された基との反応により、マレイミドで官能化された
スペーサを有するハプテンを産生する。

スキーム６に示されるように、無水コハク酸又はグルタル酸無水物等の環式無水化合物
との反応により、アルキルアミン基で終端するスペーサを有するハプテンは、精緻化され
得る。ＴＨＦ等の溶媒中、室温で一晩、この反応は行われ得る。

マレイミドで官能化されたハプテンは、スキーム７に示される方法に従ってタンパク質
にコンジュゲートされ得る。Ｎ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴ
Ａ）によるε−窒素のアシル化、続いて、ヒドロキシルアミンによるＳ−アセチル基の加
水分解によるタンパク質リシン残基の活性化により、求核スルフヒドリル基を生成する。
スルフヒドリルで活性化したタンパク質とマレイミドで誘導体化されたハプテン（一般ス
キーム５に記載されるように調製した）とのコンジュゲーションは、マイケル付加反応に
より発生する。好適なタンパク質は、当業者には既知であり、キーホールリンペットヘモ
シアニン、ウシサイログロブリン、及びオボアルブミンが含まれる。

カルボン酸で官能化されたハプテンは、スキーム８に示される方法に従ってタンパク質
にコンジュゲートされ得る。ＤＭＦ等の溶媒中、約２０℃の室温で、約１８時間、Ｎ−ヒ
ドロキシスクシンイミドと、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）等の好適なカッ
プリング剤と、トリブチルアミン等の塩基との反応により、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ド離脱基でカルボン酸を活性化する。次いで、ｐＨ ７．５のリン酸緩衝液等の溶媒中、
約２０℃で、約２．５時間、活性化したスペーサ及びハプテンを、タンパク質にコンジュ
ゲートされ得る。好適なタンパク質は、当業者には既知であり、キーホールリンペットヘ
モシアニン、ウシサイログロブリン、及びオボアルブミンが含まれる。

抗体
本発明は、リスペリドンに結合し、（ｉ）式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲ
ートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体より結合されるエピトープと同
じであるエピトープに対して競合する単離された抗体又はその結合断片を目的とする。用
語「抗体」は、抗原又はその部分に結合することができる（本発明に従って、抗精神病薬
又はその代謝産物に結合することができる）特異的タンパク質を指す。抗体は、注射によ
り、宿主、例えば、動物又はヒトに導入され得る免疫原に応答して産生される。一般的用
語「抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、及び抗体断片が含まれる。

「抗体」又は「抗原結合抗体断片」は、結合に対して無傷抗体と競合する、無傷抗体、
又はその断片を指す。一般的に言えば、抗体又は抗原結合抗体断片は、解離定数が、１μ
Ｍ以下、好ましくは、１００ｎＭ以下、最も好ましくは、１０ｎＭ以下であるときに、抗
原と特異的に結合すると言われている。結合は、当業者に知られている方法により測定す
ることができ、一例は、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）計器の使用である。

抗体断片は、無傷抗体の一部、好ましくは、無傷抗体の抗原結合又は可変領域を含む。
結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）₂、及びＦｖ断片、ダイアボディ、線状
抗体、一本鎖抗体分子、並びに抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。「二
重特異性」又は「二官能性」抗体以外の抗体は、その結合部位のそれぞれが同一であるこ
とが理解される。

本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、免疫グロブリン又はＴ細胞受容体への
特異的結合が可能な任意のタンパク質決定基を含む。エピトープの決定基は通常、アミノ
酸又は糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面基からなり、かつ、通常、特定の三次元構造
特性並びに特定の電荷特性を有する。２つの抗体は、当業者によく知られている方法のう
ちのいずれか（例えば、上で言及されるＢＩＡｃｏｒｅ（商標）方法）により、ある抗体
が競合的結合アッセイにおいて第２の抗体と競合することが示される場合、「同じエピト
ープを結合する」と言われる。ハプテン（リスペリドン又は他の抗精神病薬等）に関して
、抗体は、ハプテンを免疫原性担体にコンジュゲートすることにより非抗原性ハプテン分
子に対して産生され得る。次いで、ハプテンにより定義される「エピトープ」として認識
する抗体が産生される。

抗体の文脈において使用される場合、「単離された」とは、任意の自然状態から「人工
により」変化させる、即ち、それが自然に生じる場合、変化させるか、又はその元の環境
から除去される、又はその両方であることを意味する。例えば、その自然状態で生きてい
る動物に自然に存在する自然発生抗体は、「単離され」ないが、その用語が本明細書に使
用されるように、その自然状態の共存する材料から切り離された同じ抗体が「単離される
」。抗体は、自然発生の組成物ではない、イムノアッセイ試薬等の組成物に生じ得、それ
が本明細書に使用されるように、その用語の意味内で単離された抗体をその中に維持する
。

「交差反応性」とは、抗体と、その抗体を誘発させるために使用されなかった抗原との
反応を指す。

好ましくは、本発明の抗体は、薬物及び任意の所望の薬理学的に活性な代謝産物と結合
するであろう。本発明の化合物への免疫原性担体の結合の位置を変化させることにより、
代謝産物による選択性及び交差反応性は、抗体に改変され得る。リスペリドンについては
、９−ヒドロキシリスペリドン（パリペリドン、抗精神病薬としても投与される）、７−
ヒドロキシリスペリドン、及びＮ−デアルキルリスペリドン等のリスペリドンによる交差
反応性は、望ましい、又は望ましくない場合がある。リスペリドン及びパリペリドンと交
差反応する抗体は、望ましくあり得、７−ヒドロキシリスペリドにもＮ−デアルキルリス
ペリドンにも反応せず、そのため、リスペリドン及びその主な薬理学的に活性な代謝産物
を検出する。あるいは、薬理学的に活性な代謝産物、リスペリドン及びパリペリドンを別
々に検出することが望ましくあり得るが、依然として、不活性な代謝産物、７−ヒドロキ
シリスペリドン及びＮ−デアルキルリスペリドンを検出しない。これらの薬物及び／又は
代謝産物の複数のものを検出する抗体が産生され得るか、それぞれを別々に検出する抗体
が産生され得る（そのため、「特異的な結合」特性を定義する）。抗体は、１つ以上の化
合物の結合が等モル又は実質的に等モルであるとき、１つ以上の化合物を特異的に結合す
る。

そのような抗体を産生する方法は、宿主に本明細書に記載のコンジュゲートを接種する
ことを含む。好適な宿主としては、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、
ニワトリ、ロバ、ウマ、サル、チンパンジー、オランウータン、ゴリラ、ヒト、及び成熟
免疫応答を呈し得る任意の種が挙げられるが、これらに限定されない。免疫化手順は、当
該技術分野で十分に確立されており、多くの専門書及び刊行物、例えば、Ｄａｖｉｄ Ｗ
ｉｌｄにより編集された「Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」，２ｎ
ｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，２０００）及
びそこに引用されている参考文献に記載されている。

好ましくは、本発明の特徴を具現化した免疫原は、アジュバントと組み合わせて、宿主
対象、例えば、動物又はヒト対象に投与される。好適なアジュバントとしては、フロイン
トアジュバント、粉末水酸化アルミニウム（ミョウバン）、百日咳菌と組み合わせた水酸
化アルミニウム、及びモノホスホリルリピドＡ−合成トレハロースジコリノミコレート（
ＭＰＬ−ＴＤＭ）が挙げられるが、これらに限定されない。

典型的には、免疫原又は免疫原とアジュバントとの組み合わせは、１回若しくは複数回
の皮下注射又は腹腔内注射により、哺乳動物宿主に注入される。好ましくは、免疫化計画
は、少なくとも１週間かけて、より好ましくは、２週間以上かけて行う。このようにして
産生されたポリクローナル抗体は、当該技術分野でよく知られている方法を利用して単離
及び精製することができる。

モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎの十分に確立されたハイブ
リドーマ法、例えば、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５〜４９７（１９７５）により産生す
ることができる。ハイブリドーマ法は、典型的には、宿主又は宿主に由来するリンパ球を
免疫化することと、リンパ球を分泌するか又はリンパ球を分泌する能力を有するモノクロ
ーナル抗体を採取することと、不死化細胞にリンパ球を融合させることと、所望のモノク
ローナル抗体を分泌する細胞の選択することと、を含む。

宿主を免疫化することにより、免疫原に特異的な抗体を産生するか、又は産生し得るリ
ンパ球を惹起することができる。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫化することもで
きる。ヒト細胞が望ましい場合、末梢血リンパ球を使用することができるが、他の哺乳動
物源に由来する脾臓細胞又はリンパ球が好ましい。

リンパ球を不死化細胞系に融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成することができ、こ
のプロセスは、融合剤、例えば、ポリエチレングリコールの使用により容易に行うことが
できる。例示として、トランスフォーメーションにより不死化された突然変異型の齧歯動
物、ウシ、又はヒトの骨髄腫細胞を使用することができる。非融合不死化細胞に対して実
質的に純粋なハイブリドーマ細胞集団が好ましい。したがって、融合後、例えば、酵素ヒ
ポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）が欠如している
突然変異骨髄腫細胞を使用することにより、非融合不死化細胞の増殖又は生存を阻害する
好適な培地中で、細胞を増殖させることができる。その場合、ヒポキサンチン、アミノプ
テリン、及びチミジンを、培地（ＨＡＴ培地）に添加して、ハイブリドーマの増殖を可能
にした状態で、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止することができる。

好ましくは、不死化細胞は、効率的に融合し、ＨＡＴのような培地中における選択によ
り混合集団から単離することが可能であり、融合後、安定かつ高レベルの抗体発現を支持
する。好ましい不死化細胞系には、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ
ｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから入手可能な骨髄腫細胞系が含まれる。

ハイブリドーマ細胞は典型的には細胞外に抗体を分泌するため、抗精神病薬に特異的な
モノクローナル抗体の存在について培養培地をアッセイすることができる。免疫沈降アッ
セイ又はインビトロ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結
合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して、モノクローナル抗体の結合特異性を測定す
ることができる。

モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞は、限界希釈手順により単一クロー
ンとして単離し、継代培養することができる。好適な培養培地としては、ダルベッコ変法
イーグル培地、ＲＰＭＩ−１６４０、及び無ポリペプチド培地、低ポリペプチド培地、又
は無血清培地、例えば、Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤか
ら入手可能なＵｌｔｒａ ＤＯＭＡ ＰＦ若しくはＨＬ−１が挙げられるが、これらに限
定されない。あるいは、ハイブリドーマ細胞を腹水としてインビボで増殖させることもで
きる。

モノクローナル抗体は、ポリペプチドＡ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ、ヒドロキシルアパタイ
トクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、硫酸アンモニウム沈澱、及びアフィニティ
クロマトグラフィーが含まれるが、これらに限定されない、従来の免疫グロブリン（Ｉｇ
）精製手順により、培養培地又は腹水から単離及び／又は精製することができる。

モノクローナル抗体はまた、米国特許第４，１６６，４５２号に記載されるような組み
換え法により産生することもできる。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の
手順を使用して、例えば、マウス重鎖及び軽鎖抗体遺伝子に特異的に結合するオリゴヌク
レオチドプローブを使用して、好ましくは、抗精神病薬に特異的な抗体を分泌するモノク
ローナル抗体ハイブリドーマ細胞系から単離されたＤＮＡをプローブするために、単離及
び配列決定することができる。

抗精神病薬に対して特異的な結合部位を含む抗体断片もまた、産生され得る。そのよう
な断片としては、抗体分子のペプシン消化により産生され得るＦ（ａｂ’）₂断片、及び
Ｆ（ａｂ’）₂断片のジスルフィド架橋を還元することにより産生され得るＦａｂ断片が
挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、Ｆａｂ発現ライブラリーを構成して、
所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ容易な特定を可能にし得る（
Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１２７０〜１２８１（１９８９））
。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びＳｃＦｖ抗体断片は全て、大腸菌に発現し、それから分泌し得、多
量のこれらの断片の産生を可能にする。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、大腸菌から直
接回収され、化学的に結合して、Ｆ（ａｂ’）₂断片を形成し得る（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ
ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３〜１６７（１９９２））。抗体断
片の産生のための他の技術は、当業者には既知である。また、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）
も構想される（米国特許第５，７６１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照の
こと）。Ｆｖ及びｓＦｖ断片は、定常領域を欠いている無傷混合部位を有する唯一の種で
あり、そのため、非特異的結合の減少を示す可能性がある。例えば、抗体断片はまた、例
えば、米国特許第５，６４２，８７０号に記載されるような「直鎖抗体」であり得る。そ
のような直鎖抗体断片は、単一特異的であっても、二重特異的であってもよい。

アッセイキット及び装置
上述の抗体を含むアッセイキット（試薬キットとも称される）もまた、提供され得る。
代表的な試薬キットは、抗精神病薬、リスペリドンに結合する抗体、標識部分に結合され
る抗精神病薬の類似体若しくはその誘導体を含む複合体を含み得、任意に、既知の量の抗
精神病薬若しくは関連標準を含む１つ以上の較正器も含み得る。

句「アッセイキット」は、アッセイを行う際に使用される材料及び試薬のアセンブリを
指す。試薬は、それらの交差反応性及び安定性に応じて、同一又は別箇の容器にて、液体
又は凍結乾燥形態で、パッケージ化された組み合わせで提供することができる。キットで
提供される試薬の量及び割合を、特定の用途に対する最適な結果をもたらすように選択す
ることができる。本発明の特徴を具現化するアッセイキットは、リスペリドンに結合する
抗体を含む。キットは、リスペリドンの競合的結合パートナー、並びに較正及び対照材料
を更に含み得る。

句「較正及び対照材料」は、既知の量の検体を含有する任意の標準又は対照材料を指す
。検体及び対応する較正材料を含有する疑いがあるサンプルは、同様の条件下でアッセイ
される。検体の濃度は、未知の被検物について得られた結果と、標準について得られた結
果とを比較することによって計算される。これは、一般には、較正曲線を作成することに
よって行われる。

本発明の特徴を具現化する抗体は、キット、容器、パック、又はディスペンサー内に、
それらの利用についての取扱説明書と共に含まれ得る。抗体がキット内に供給される場合
、イムノアッセイの異なる成分は、別箇の容器内にパッケージ化され得るか、又は使用前
に混合され得る。成分のそのようなパッケージ化は、活性成分の機能を実質的に低下させ
ることなく、長期間保存を可能にし得る。更に、試薬は、不活性環境下で、例えば、窒素
ガス、アルゴンガス等の正圧下でパッケージ化することができ、これは、空気及び／又は
水分に敏感な試薬に特に好ましい。

本発明の特徴を具現化するキット内に含まれる試薬は、異なる成分の活性が実質的に保
持されるが、成分自体が容器の材料により実質的に吸着又は改変されないように、全ての
方式の容器内に供給することができる。好適な容器としては、アンプル、ボトル、試験管
、バイアル、フラスコ、シリンジ、エンベロープ（例えば、ホイルでライニングされた）
等が挙げられるが、これらに限定されない。容器は、ガラス、有機ポリマー（例えば、ポ
リカーボネート、ポリスチレン、ポリエチレン等）、セラミック、金属（例えば、アルミ
ニウム）、金属合金（例えば、スチール）、コルク等が挙げられるが、これらに限定され
ない任意の好適な材料で構成され得る。加えて、容器は、セプタムにより提供され得るよ
うな、例えば、針によりアクセスするための１つ以上の滅菌アクセスポートを備え得る。
セプタムの好ましい材料には、ゴム及びＤｕＰｏｎｔ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）に
より商品名ＴＥＦＬＯＮ（登録商標）として販売されているタイプのポリテトラフルオロ
エチレンが挙げられる。加えて、容器は、成分を混合できるように取り外すことができる
パーティション又は膜により仕切られた２つ以上のコンパートメントを備え得る。

本発明の特徴を具現化する試薬キットはまた、取扱説明書と共に供給され得る。取扱説
明書は、例えば、紙面上等に印刷されたもの及び／又は電子可読媒体として供給されたも
のであってもよい。あるいは、取扱説明書は、例えば、キットの製造業者若しくは販売業
者により指定されたインターネットウェブサイトにユーザーを案内することにより、及び
／又は電子メールを介して、提供され得る。

抗体はまた、アッセイ装置の一部として提供され得る。そのようなアッセイ装置は、側
方流動アッセイ装置を含む。一般的な種類の使い捨て側方流動アッセイ装置は、液体サン
プルを受ける区画又は領域、コンジュゲート区画、及び反応区画を含む。これらのアッセ
イ装置は一般に、側方流動試験ストリップとして既知である。これらは、毛管流を支持し
得る、流体流の経路を画定する多孔質材料、例えば、ニトロセルロースを利用する。例と
しては、米国特許第５，５５９，０４１号、同第５，７１４，３８９号、同第５，１２０
，６４３号、及び同第６，２２８，６６０号に示されるものが挙げられ、これらは本明細
書において参照によりその全体が組み込まれる。

アッセイ装置の別の種類は、毛管流を誘発させるように突起部を有する非多孔質アッセ
イ装置である。このようなアッセイ装置の例としては、ＰＣＴ国際公開第２００３／１０
３８３５号、同第２００５／０８９０８２号、同第２００５／１１８１３９号、及び同第
２００６／１３７７８５号に開示される、開いた側方流動装置が挙げられ、これらは全て
、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。

非多孔質アッセイ装置において、アッセイ装置は、一般的に、少なくとも１つのサンプ
ル添加区画、少なくとも１つのコンジュゲート区画、少なくとも１つの反応区画、及び少
なくとも１つの吸上区画を有する。区画は、サンプル添加区画から吸上区画までサンプル
が流れる流路を形成する。任意で装置に堆積される（例えば、コーティングにより）検体
に結合することができる、反応区画内の抗体等の捕捉要素、及びコンジュゲート区画内で
装置に堆積される検体の濃度の判定を可能にする反応に関与することができる標識された
コンジュゲート材料も含み、この場合、標識されたコンジュゲート材料は反応区画内の検
出のための標識を有する。サンプルがコンジュゲート区画を通って流れる際に、コンジュ
ゲート材料は溶解して、反応区画へと下流に流れる溶解した標識されたコンジュゲート材
料及びサンプルのコンジュゲートプルームを形成する。コンジュゲートプルームが反応区
画へと流れると、コンジュゲート材料が、例えば、コンジュゲート材料と検体の複合体を
介して（「サンドイッチ」アッセイにおいて）、又は直接的に（「競合」アッセイにおい
て）捕捉要素により捕捉される。拘束されない溶解したコンジュゲート材料は、反応区画
を通過して少なくとも１つの吸上区画へと流される。そのような装置は、流路において、
突起部又はマイクロ柱を含み得る。

米国特許出願公開第２００６０２８９７８７Ａ１号、及び同第２００７０２３１８８３
Ａ１号、並びに米国特許第７，４１６，７００号、及び同第６，１３９，８００号（これ
らは全て、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる）は、反応区画内におい
て結合したコンジュゲート材料を検出することができる。一般的な標識としては、蛍光染
料を励起し、蛍光染料を検出することができる検出器を組み込む器具により検出され得る
、蛍光染料が挙げられる。

イムノアッセイ
このようにして産生された抗体は、抗精神病薬を認識／結合するためにイムノアッセイ
に使用され、それにより、患者サンプル中の薬物の存在及び／又は量を検出することがで
きる。好ましくは、アッセイ形式は、競合的イムノアッセイ形式である。そのようなアッ
セイ形式及び他のアッセイは、Ｈａｍｐｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＡＰＳ Ｐｒｅｓｓ，Ｓ
ｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ １９９０）及びＭａｄｄｏｘ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ
．１５８：１２１１１，１９８３）における他の箇所において記載されている。

用語「検体」は、任意の物質又は物質の群を指し、これらの存在又は量は判定されるべ
きである。代表的な抗精神病薬検体としては、リスペリドン、パリペリドン、オランザピ
ン、アリピプラゾール、及びクエチアピンが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「競合的結合パートナー」は、抗体への結合親和性に関して検体と同様に挙動する
、競合的イムノアッセイに使用され得るような物質、又は物質の群を指す。代表的な競合
的結合パートナーとしては、抗精神病薬誘導体等が挙げられるが、これに限定されない。

検体と共に使用される場合、用語「検出すること」は、任意の定量的、半定量的、又は
定質的方法、並びに一般に、検体、とりわけ、抗精神病薬を判定するための全ての他の方
法を指す。例えば、サンプル中の抗精神病薬の存在又は非存在を単に検出する方法は本発
明の範囲内にあり、また、サンプル中の抗精神病薬の量又は濃度についてのデータを提供
する方法もある。用語「検出すること」、「判定すること」、及び「特定すること」等は
、本明細書で同意語として使用され、全てが本発明の範囲内にある。

本発明の好ましい実施形態は、競合的イムノアッセイであり、抗精神病薬に結合する抗
体、又は薬物若しくはその競合的結合パートナーは、それぞれ、固体支持体（側方流動ア
ッセイ装置内の反応区画等）、及び標識された薬物若しくはその競合的結合パートナー、
又は標識された抗体に結合し、宿主由来のサンプルは、固体支持体の上を通過し、固体支
持体に結合した検出された標識の量は、サンプル中のある量の薬物に相関させることがで
きる。

検体、例えば、抗精神病薬を含有する疑いがある任意のサンプルは、本発明の好ましい
実施形態の方法に従って分析することができる。サンプルは、必要に応じて前処理するこ
とができ、アッセイを妨げない任意の好都合な培地中に調製することができる。好ましく
は、サンプルは、宿主由来の体液、最も好ましくは、血漿又は血清等の水性培地を含む。

抗体を使用するイムノアッセイの全ての様式が本発明の好ましい実施形態に従って使用
するために企図され、これには、抗体が固相に結合されるアッセイ、及び抗体が液体培地
中にあるアッセイが含まれる。本発明の特徴を具現化する抗体を使用する検体を検出する
ために使用することができるイムノアッセイの方法としては、サンプル中の標識された検
体（検体類似体）及び検体が、抗体に対して競合する競合的（試薬を限定した）アッセイ
、及び抗体が検出される一部位イムノメトリックアッセイ等が挙げられるが、これらに限
定されない。

本発明を以下の実施例により更に説明する。本実施例は、特定の実施形態を参照するこ
とにより本発明を単に例示するためだけに提供される。本発明のある特定の態様を示すが
、これらの例示は、開示される本発明の範囲を限定せず、又は制限しない。

詳述されることを除いて、当業者によく知られ、常用である標準技術を使用する全ての
実施例が実施される。以下の実施例の常用の分子生物学技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ
ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）等の標準実験室
的なマニュアルに記載されるように、実施することができる。

同時係属出願の表題「Ｈａｐｔｅｎｓ ｏｆ Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ」（代理人整
理番号ＰＲＤ３２６５ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第
６１／６９１，４５０号）、「Ｈａｐｔｅｎｓ ｏｆ Ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ」（代理人
整理番号ＰＲＤ３２６６ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願
第６１／６９１，４５４号）、「Ｈａｐｔｅｎｓ ｏｆ Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ」（
代理人整理番号ＰＲＤ３２６７ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特
許出願第６１／６９１，４５９号）、「Ｈａｐｔｅｎｓ ｏｆ Ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ」
（代理人整理番号ＰＲＤ３２６８ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮
特許出願第６１／６９１，４６２号）、「Ｈａｐｔｅｎｓ ｏｆ Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎ
ｅ ａｎｄ Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ」（代理人整理番号ＰＲＤ３２６９ＵＳＰＳＰ、
２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，４６９号）、「Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ Ｈａｐｔｅｎｓ ａｎｄ Ｕｓｅ
Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１２８ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日
に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，５４４号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔ
ｏ Ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ Ｈａｐｔｅｎｓ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理
人整理番号ＣＤＳ５１３２ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出
願第６１／６９１，５７２号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏ
ｎｅ Ｈａｐｔｅｎｓ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１
２６ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，６
３４号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ Ｈａｐｔｅｎｓ ａ
ｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１３４ＵＳＰＳＰ、２０１２
年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，５９８号）、「Ａｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ ｔｏ Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理
人整理番号ＣＤＳ５１２９ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出
願第６１／６９１，５２２号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ
ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１３３ＵＳＰＳＰ、２０
１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，６４５号）、「Ａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（
代理人整理番号ＣＤＳ５１２７ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特
許出願第６１／６９１，６９２号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｑｕｅｔｉａｐｉ
ｎｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１３５ＵＳＰＳＰ、
２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，６５９号）、「Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」
（代理人整理番号ＣＤＳ５１３１ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮
特許出願第６１／６９１，６７５号）、及び「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｒｉｓｐｅ
ｒｉｄｏｎｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１４５ＵＳ
ＰＳＰ、２０１３年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／７９０，８８０号）
は全て、参照することによりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

（実施例１）
工程Ａ
９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−クロロエチル）−２
−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４
−オン

ＤＭＦ（５ｍＬ）中の３−（２−クロロエチル）−９−ヒドロキシ−２−メチル−６，
７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１．０
ｇ、４．１２ｍｍｏｌ）の溶液を、１Ｈ−イミダゾール（７０１．２４ｍｇ、６４．６６
ｍｍｏｌ）で処理し、続いて、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のｔ−ブチルジメチルクロロシラン（
６８３．１２ｍｇ、４．５３ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。室温で１８時間撹拌した後、
この溶媒を真空下で除去し、炭酸カリウムをスパチュラで添加して、残渣をジクロロメタ
ン／水（１０ｍＬ／１０ｍＬ）中に取り込んだ。水層をジクロロメタン（１０ｍＬで３回
）で抽出した。合わせた有機画分をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、この溶媒を真空下で
除去した。粗混合物を更なる精製を行わずに次の工程で使用した。（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋
１）３５７）。

工程Ｂ
９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−（４−（６−ヒドロ
キシベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−
メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−
オン

メタノール（２５ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（７３２．８３μＬ、４．２
０ｍｍｏｌ）中の、上述の工程に記載されるように調製した９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジ
メチルシリル）オキシ）−３−（２−クロロエチル）−２−メチル−６，７，８，９−テ
トラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（０．５ｇ、１．４０ｍ
ｍｏｌ）の溶液を、３−（ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−
オール塩酸塩（３７４．６２ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）で処理し、反応混合物をアルゴン
下、６０℃で１７時間撹拌した。ジイソプロピルエチルアミン（７３２．８３μＬ、４．
２０ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を、６０℃で４時間更に撹拌した。反応混合物を真
空下で蒸発させ、残渣を水（２５ｍＬ）中に取り込み、クロロホルム（３×２５ｍＬ）で
抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、この溶媒を真空下で除去し
た。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール（９８／２）で
溶出）により精製して、表題化合物を得た（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）５３９）。

工程Ｃ
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（３−（１−（２−（９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシ
リル）オキシ）−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリ
ド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］
イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）カルバミン酸塩

アセトン（０．５ｍＬ）及びＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の、上述の工程に記載されるよう
に調製した９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−（４−（６
−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル
）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジ
ン−４−オン（５０ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）の溶液を、炭酸カリウム（３３．３ｍｇ
、０．２４ｍｍｏｌ）及びＮ−Ｂｏｃ−２−ブロモアミノエタン（２７ｍｇ、０．１２ｍ
ｍｏｌ）で処理し、反応混合物をアルゴン下、６０℃で１７時間撹拌した。反応混合物を
減圧下で、４０℃で蒸発させ、水（１０ｍＬ）中に溶解し、ジクロロメタン（３×１０ｍ
Ｌ）で抽出した。有機層を合わせて、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、この溶媒を蒸発さ
せて、粗表題化合物を得た。（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）６８２）。

工程Ｄ
３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−
イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−９−ヒドロキシ−２−メチル−６，７，８，９
−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

ＨＣｌ／イソプロパノール（１０ｍＬ，５Ｎ）中の、上述の工程に記載されるように調
製したｔｅｒｔ−ブチル（２−（（３−（１−（２−（９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチ
ルシリル）オキシ）−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−
ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［
ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）カルバミン酸塩（７０ｍｇ、０．１
０３ｍｍｏｌ）の溶液を、６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で、４０℃で蒸
発させ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）中に慎重に溶解し、ジクロロメタン（３
×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、減圧下で、
４０℃で蒸発させた。水層はなお、生成物を含有したため、減圧下で、４０℃で水層を蒸
発乾固させることにより回収した。水層から得られた残渣を水中に再溶解し、調整済みの
Ｗａｔｅｒｓ Ｏａｓｉｓ ＳＰＥ（６ｃｃ）カラムに取り込み、その後、メタノールで
溶出した。メタノール溶出画分をジクロロメタン抽出物の残渣と合わせ、減圧下で、４０
℃で蒸発乾固して、副生成物とともに、表題化合物を得（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）４６８
、副生成物は、５％ ９−ヒドロキシ−３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］
イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，
８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンであった（Ｍ
＋１）４２５）。この混合物を、更なる精製を行わずに次の工程に使用した。

（実施例２）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２
−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−
テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン
−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド

２１５μＬのＤＭＦ及び４．３μＬのトリブチルアミン中の、実施例１に記載されるよ
うに調製した３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾ
ール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−９−ヒドロキシ−２−メチル−６，
７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（４．０
ｍｇ、８．５μモル）の溶液に、２１４μＬのＮ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシ
ンイミドエステルのＤＭＦ溶液（ＡＭＡＳ、１０ｍｇ／ｍＬ、２．１ｍｇ、８．５μモル
）を添加した。得られた溶液を２０℃で６０分間撹拌し、次いで、チオール活性化タンパ
ク質による抱合反応においてそのまま使用した。

（実施例３）
工程Ａ
３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリ
ジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド
［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の３−（２−クロロエチル）−２−メチル−６，７，８，９−
テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１４．４ｇ、０．０
５ｍｍｏｌ）、３−（ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−オー
ル（１４．０ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１６．０ｇ、０．１５ｍｍｏｌ
）、及びヨウ化カリウム（スパチュラポイント）の溶液を、８０℃で５時間撹拌した。こ
の混合物を室温まで冷却し、水を添加した。沈殿物を濾過により除去し、濾液をクロロホ
ルム（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、
濃縮した。残渣をイソプロピルアルコール（７０ｍＬ）で結晶化し、濾過し、イソプロパ
ノール／ジイソプロピルエーテル５０／５０の混合物（１０ｍＬ）で洗浄した。残渣を１
００℃で一晩乾燥させ、表題化合物を得、更なる精製を行わずに次の工程で使用した。

工程Ｂ
３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−
イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−
４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

ＤＭＦ（５０ｍＬ）及びアセトン（５０ｍＬ）中の、上述の工程に記載されるように調
製した３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピ
ペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピ
リド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（６．６ｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）の溶液を、
炭酸カリウム（３．０ｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及びエチル（２−ブロモエチル）カルバミ
ン酸塩（２．４ｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）で処理した。６０℃で一晩撹拌した後、反応混
合物を水（１５０ｍＬ）中に注ぎ入れ、クロロホルム（３×１００ｍＬ）で抽出した。合
わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー
（ジクロロメタン／メタノール（９０／１０）で溶出により精製した。合わせた画分をＨ
Ｂｒ（１５０ｍＬ、４８％）で処理し、３０分間加熱還流した。この混合物を室温まで冷
却し、水酸化アンモニウム（Ｈ₂Ｏ中２８％ ＮＨ₃）を用いて塩基性にし、クロロホルム
（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、濃縮
し、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール（９０／１０〜５０／
５０）で勾配溶出により精製して、固体を得、これをイソプロパノール（５０ｍＬ）中に
溶解し、イソプロパノール／ＨＣｌで処理した。沈殿物を濾過により除去し、ｉＰｒＯＨ
／ジイソプロピルエーテル（５０／５０、３×２０ｍＬ）で洗浄した。沈殿物を真空下で
乾燥させて、表題化合物を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）４５２。¹Ｈ ＮＭＲ（３６０
ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）・ｐｐｍ １．７６〜１．８５（ｍ，１Ｈ）１．８７〜１．９
６（ｍ，１Ｈ）２．１９（ｄ，Ｊ＝１２．８１Ｈｚ，１Ｈ）２．３７〜２．４８（ｍ，４
Ｈ）２．９８〜３．１０（ｍ，３Ｈ）３．１０〜３．２８（ｍ，５Ｈ）３．３７〜３．４
６（ｍ，３Ｈ）３．７２（ｄ，Ｊ＝１１．３４Ｈｚ，３Ｈ）３．７９〜３．８５（ｍ，２
Ｈ）４．３１（ｔ，Ｊ＝４．９４Ｈｚ，１Ｈ）７．０５（ｄｄ，Ｊ＝８．７８，１．８３
Ｈｚ，１Ｈ）７．３５〜７．３９（ｍ，１Ｈ）８．０８（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，１Ｈ）
。

（実施例４）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２
−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４
Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベン
ゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド

１８５μＬのＤＭＦ及び３．７μＬのトリブチルアミン中の、実施例３に記載されるよ
うに調製した３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾ
ール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テト
ラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（３．４ｍｇ、７．５８μ
モル）の溶液に、１９０μＬのＮ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステ
ル（ＡＭＡＳ、１０ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ、７．５８μモル）のＤＭＦ溶液に添加した
。得られた溶液を２０℃で９０分間撹拌し、次いで、チオール活性化タンパク質による抱
合反応においてそのまま使用した。

（実施例５）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２
−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−
テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン
−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド
−キーホールリンペットヘモシアニン−コンジュゲート

工程Ａ
１００ｍＭリン酸緩衝液、０．４６Ｍ塩化ナトリウム中の４．２２ｍＬのキーホールリ
ンペットヘモシアニン（ＫＬＨ、１８．０ｍｇ、０．１８μモル）の溶液に、ｐＨ ７．
４で、８３．２μＬのＮ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテオートのＤＭＦ溶
液（ＳＡＴＡ、２５ｍｇ／ｍＬ、２．１ｍｇ、９．０μモル）を添加した。得られた溶液
を、ローラーミキサー上で２０℃で１時間インキュベートした。１００ｍＭリン酸緩衝液
、０．４６Ｍ塩化ナトリウム、５ｍＭ ＥＤＴＡを使用して、この反応物を、ｐＨ ６．
０で、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラム上で精製した。

工程Ｂ
工程Ａに記載されるように調製した９．３７ｍＬのＫＬＨ−ＳＡＴＡ溶液（１７．１ｍ
ｇ、０．１７１μモル）に、ｐＨ ７．０で、９３７μＬの２．５Ｍヒドロキシルアミン
、５０ｍＭ ＥＤＴＡを添加した。得られた溶液を、ローラーミキサー上で、２０℃で４
０分間インキュベートした。この反応物をマレイミド活性化ハプテンによる抱合反応にお
いてそのまま使用した。

工程Ｃ
工程Ｂに記載されるように調製した一分量の得られたＫＬＨ−ＳＨ溶液（３．４ｍＬ、
０．０５８μモル）に、実施例２に記載されるように調製した一分量の２−（２，５−ジ
オキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（
２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ
−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ
［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液（２８２．８μ
Ｌ、５．０μモル）を添加した。得られた混濁混合物を、ローラーミキサー上で２０℃で
３時間インキュベートした。この反応物を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過
し、次いで、ｐＨ７．４で、１００ｍＭリン酸緩衝液、０．４６Ｍ塩化ナトリウムを使用
して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラム上で精製した。

（実施例６）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２
−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−
テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン
−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド
−ウシサイログロブリン−コンジュゲート

工程Ａ
１００ｍＭリン酸緩衝液中の１．０ｍＬのウシサイログロブリン（ＢＴＧ、９．３ｍｇ
、０．０１４μモル）の溶液に、ｐＨ ７．５で、１３２μＬのＮ−スクシンイミジル−
Ｓ−アセチルチオアセテオートのＤＭＦ溶液（ＳＡＴＡ、２５ｍｇ／ｍＬ、３．３ｍｇ、
１４．１μモル）を添加した。得られた溶液を、ローラーミキサー上で２０℃で１時間イ
ンキュベートした。１００ｍＭリン酸緩衝液、５ｍＭ ＥＤＴＡを使用して、この反応物
を、ｐＨ ６．０で、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラム上で精製した。

工程Ｂ
工程Ａに記載される調製した２．１１ｍＬのＢＴＧ−ＳＡＴＡ溶液（７．４ｍｇ、０．
０１１μモル）に、ｐＨ ７．０で、２１１μＬの２．５Ｍヒドロキシルアミン、５０ｍ
Ｍ ＥＤＴＡを添加した。得られた溶液を、ローラーミキサー上で２０℃で６０分間イン
キュベートした。この反応物をマレイミド活性化ハプテンによる抱合反応においてそのま
ま使用した。

工程Ｃ
工程Ｂに記載されるように調製した一分量の得られたＢＴＧ−ＳＨ溶液（２．３ｍＬ、
０．０１１μモル）に、実施例２に記載されるように調製した一分量の２−（２，５−ジ
オキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（
２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ
−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ
［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液（２８０．４μ
Ｌ、５．５μモル）を添加した。得られた混濁混合物を、ローラーミキサー上で２０℃で
２．５時間インキュベートした。この反応物を、０．２μｍシリンジフィルターを通して
濾過し、次いで、ｐＨ ７．４で、１００ｍＭリン酸緩衝液、０．１４Ｍ塩化ナトリウム
を使用して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラム上で精製した。

（実施例７）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２
−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４
Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベン
ゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−キーホールリン
ペットヘモシアニン−コンジュゲート

実施例５の工程Ｂに記載されるように調製した一分量のＫＬＨ−ＳＨ溶液（１．５ｍＬ
、０．０２５μモル）に、実施例４に記載されるように調製した一分量の２−（２，５−
ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−
（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，
２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキ
サゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液（１１３μＬ、２．２６μモル
）を添加した。得られた混濁混合物を、ローラーミキサー上で２０℃で２．５時間インキ
ュベートした。この反応物を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過し、次いで、
ｐＨ ７．４で、１００ｍＭリン酸緩衝液、０．４６Ｍ塩化ナトリウムを使用して、Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラム上で精製した。

（実施例８）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２
−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４
Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベン
ゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−ウシサイログロ
ブリン−コンジュゲート

実施例６の工程Ｂに記載されるように調製した一分量のＢＴＧ−ＳＨ溶液（０．６３ｍ
Ｌ、０．００３３μモル）に、実施例４に記載されるように調製した一分量の２−（２，
５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（
１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［
１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソ
オキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液（８０μＬ、１．６μモル
）を添加した。得られた混濁混合物を、ローラーミキサー上で２０℃で２．５時間インキ
ュベートした。この反応物を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過し、次いで、
ｐＨ ７．４で、１００ｍＭリン酸緩衝液、０．１４Ｍ塩化ナトリウムを使用して、Ｓｅ
ｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラム上で精製した。

（実施例９）
リスペリドン／パリペリドンにおける競合的イムノアッセイ、並びにアリピプラゾール
、オランザピン、クエチアピン、及びリスペリドン／パリペリドンにおけるマルチプレッ
クス競合的イムノアッセイ

パリペリドン／リスペリドン免疫原を用いた一連の免疫付与後、マウス尾出血を、ＥＬ
ＩＳＡを使用して、反応性について試験した。ハイブリドーマ上清もまた試験し、下の表
８及び９に示されるＥＬＩＳＡデータは、いくつかのハイブリドーマの反応性を示す（融
合パートナーはＮＳＯ細胞であった）。表９に示されるように、ハイブリドーマ２Ａ５及
び５Ｇ１１の反応性が見られた。

ＥＬＩＳＡ反応性によりクローンが特定された後、競合ＥＬＩＳＡは、類似の化合物に
近い親和性及び交差反応性に達した。図１及び２は、ハイブリドーマサブクローンサブク
ローン５＿９からのＥＬＩＳＡの交差反応性の結果を示す。データは、リスペリドン、並
びにその代謝産物のパリペリドン及び７−ヒドロキシリスペリドンへの反応性を示す。

上清はまた、このシグナルがリスペリドン又はパリペリドンのいずれかに対して特異的
であるかどうかを判定するために、競合ＥＬＩＳＡにより試験された。図３は、ハイブリ
ドーマサブクローン２Ａ５からの結果を示す。データは、リスペリドン及びパリペリドン
の両方への反応性を示す。

図４は、側方流動アッセイ装置に使用される競合的イムノアッセイ形式を示し、捕捉抗
体であるリスペリドン／パリペリドンクローン５−９を、フルオロフォアにコンジュゲー
トされたリスペリドンからなる検出コンジュゲートと共にチップ上に堆積させた。図４に
示されるようなこの競合的形式において、低レベルの検体（パリペリドン）は、高いシグ
ナルを生じ、一方、高レベルの検体（パリペリドン）は、低いシグナルを生じる。サンプ
ル中のパリペリドンの量は、薬物が存在しない対照サンプルと比較して、蛍光の消失から
計算することができる。リスペリドン／パリペリドンクローン５−９により生成された典
型的な用量反応曲線を図５に示す。

図６は、本発明の一実施形態に従う側方流動アッセイ装置のチップ設計を示す。装置は
、サンプルを受容するための区画又は領域、コンジュゲート区画（所望の標識された競合
的結合パートナー（複数を含む）を含む）、及び反応区画（反応区画内の８つの領域を示
す、それぞれの領域は、別々の所望の抗体を含むことができる）を含む。サンプルは、コ
ンジュゲート区画を通ってサンプル区画から反応区画に流れる。

図７〜１０は、反応区画２内に堆積した抗体５Ｃ７及びコンジュゲート区画内の標識さ
れたアリピプラゾール競合的結合パートナーで生成されたアリピプラゾール陽性対照（ア
リピプラゾールを含有するサンプル）（図７）、反応区画４内に堆積した抗体４Ｇ９−１
及びコンジュゲート区画内の標識されたオランザピン競合的結合パートナーで生成された
オランザピン陽性対照（オランザピンを含有するサンプル）（図８）、反応区画６内に堆
積した抗体１１及びコンジュゲート区画内の標識されたクエチアピン競合的結合パートナ
ーで生成されたクエチアピン陽性対照（クエチアピンを含有するサンプル）（図９）、並
びに反応区画８内に堆積した抗体５−９及びコンジュゲート区画内の標識されたリスペリ
ドン競合的結合パートナーで生成されたリスペリドン陽性対照（リスペリドンを含有する
サンプル）（図１０）についての典型的な用量反応曲線を示す。コンジュゲート区画内の
標識された競合的結合パートナーは、抗体への結合に対して、サンプル中に存在する薬物
と競合する。標識の量を検出し、サンプル中に存在する薬物の量の指標である（シグナル
の量はサンプル中の薬物の量に反比例する−図４を参照のこと）。

標識された競合的結合パートナーのコンジュゲートは反応区画内に堆積した抗体に結合
しないことを確認するために、陰性対照は、薬物を含有しないサンプルを使用することに
より行われた。表１０を参照すると、アリピプラゾールを含有しないサンプルは、サンプ
ル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたオランザ
ピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有するが、標識された
アリピプラゾールは含有しない）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２
内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ７）を再度含有する。下の表１０は、結果を示し、用量
反応がなく、毛管現象により反応区画を通って移動するオランザピン、クエチアピン、及
びリスペリドンのコンジュゲートがアリピプラゾール抗体に結合しないことを確認する。

表１１を参照すると、オランザピンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積さ
れ、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識さ
れたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有するが、標識されたオランザピン
は含有しない）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画４内にオランザピン
抗体（４Ｇ９−１）を再度含有する。下の表１１は、結果を示し、用量反応がなく、毛管
現象により反応区画を通って移動するアリピプラゾール、クエチアピン、及びリスペリド
ンのコンジュゲートがオランザピン抗体に結合しないことを確認する。

表１２を参照すると、クエチアピンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積さ
れ、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識さ
れたオランザピン、及び標識されたリスペリドンを含有するが、標識されたクエチアピン
は含有しない）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画６内にクエチアピン
抗体（１１）を再度含有する。下の表１２は、結果を示し、用量反応がなく、毛管現象に
より反応区画を通って移動するアリピプラゾール、オランザピン、及びリスペリドンのコ
ンジュゲートがクエチアピン抗体に結合しないことを確認する。

表１３を参照すると、リスペリドンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積さ
れ、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識さ
れたオランザピン、及び標識されたクエチアピンを含有するが、標識されたリスペリドン
は含有しない）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画８内にリスペリドン
抗体（５−９）を再度含有する。以下の表１３は、結果を示し、用量反応がなく、毛管現
象により反応区画を通って移動するアリピプラゾール、オランザピン、及びクエチアピン
のコンジュゲートがリスペリドン抗体に結合しないことを確認する。

標識された競合的結合パートナーのコンジュゲートが反応区画内に堆積されたそれらの
それぞれの抗体にのみ結合することを確認するために、更なる陰性対照は、薬物を含有し
ないサンプルを再度使用することにより行った。表１４を参照すると、アリピプラゾール
を含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区
画（この時、標識されたアリピプラゾールを含有する）を通って反応区画に移動する。反
応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ７）、並びに反応区画４内にオラ
ンザピン抗体（４Ｇ９−１）、反応区画６内にクエチアピン抗体（１１）、及び反応区画
８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度含有する。以下の表１４は、結果を示し、アリ
ピプラゾール抗体５Ｃ７（反応区画２内）を除いては、用量反応がないことを確認する。

表１５を参照すると、オランザピンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積さ
れ、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたオランザピンを含有する）
を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ
７）、並びに反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）、反応区画６内にクエチア
ピン抗体（１１）、及び反応区画８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度含有する。下
の表１５は、結果を示し、オランザピン抗体４Ｇ９−１（反応区画４内）を除いては、用
量反応がないことを確認する。

表１６を参照すると、クエチアピンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積さ
れ、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたクエチアピンを含有する）
を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ
７）、並びに反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）、反応区画６内にクエチア
ピン抗体（１１）、及び反応区画８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度含有する。下
の表１６は、結果を示し、クエチアピン抗体１１（反応区画６内）を除いては、用量反応
がないことを確認する。

表１７を参照すると、リスペリドンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積さ
れ、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたリスペリドンを含有する）
を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ
７）、並びに反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）、反応区画６内にクエチア
ピン抗体（１１）、及び反応区画８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度含有する。下
の表１７は、結果を示し、リスペリドン抗体５−９（反応区画８内）を除いては、用量反
応がないことを確認する。

上に示される結果は、標識された競合的結合パートナーのコンジュゲートが反応区画内
のそれらのそれぞれの抗体にのみ結合することを確認する。

図１１〜１４は、特定の抗体反応区画内の典型的な用量反応曲線、及び他のコンジュゲ
ートの存在下で、それぞれの特定のアッセイについて低／高濃度の用量反応の証拠を示す
。図１１において、アリピプラゾールを含有するサンプルは、サンプル区画内に堆積され
、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識され
たオランザピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有する）を
通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ７
）を再度含有する。オランザピン、クエチアピン、又はリスペリドンについてではなく、
アリピプラゾールのみについて図１１に示されるように、典型的な用量反応曲線を生成し
た。

図１２において、オランザピンを含有するサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛
管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識されたオ
ランザピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有する）を通っ
て反応区画に移動する。反応区画は、反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）を
再度含有する。アリピプラゾール、クエチアピン、又はリスペリドンについてではなく、
オランザピンのみについて図１２に示されるように、典型的な用量反応曲線を生成した。

図１３において、クエチアピンを含有するサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛
管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識されたオ
ランザピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有する）を通っ
て反応区画に移動する。反応区画は、反応区画６内にクエチアピン抗体（１１）を再度含
有する。アリピプラゾール、オランザピン、又はリスペリドンについてではなく、クエチ
アピンのみについて図１３に示されるように、典型的な用量反応曲線を生成した。

図１４において、リスペリドンを含有するサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛
管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識されたオ
ランザピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有する）を通っ
て反応区画に移動する。反応区画は、反応区画８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度
含有する。アリピプラゾール、オランザピン、又はクエチアピンについてではなく、リス
ペリドンのみについて図１４に示されるように、典型的な用量反応曲線を生成した。

図１５〜１８は、他のコンジュゲート及び抗体の存在下で、それぞれのアッセイについ
て典型的な用量反応曲線を示す。図１５において、アリピプラゾールを含有するサンプル
は、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（標識されたアリピ
プラゾール、標識されたオランザピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペ
リドンを再度含有する）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリ
ピプラゾール抗体（５Ｃ７）、並びに反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）、
反応区画６内にクエチアピン抗体（１１）、及び反応区画８内にリスペリドン抗体（５−
９）を再度含有する。図１５に示されるように、アリピプラゾールについて典型的な用量
反応曲線を生成した。オランザピンを含有するサンプルがこのチップのサンプル区画内に
堆積した場合、図１６に示されるように、オランザピンについて典型的な用量反応曲線を
生成した。クエチアピンを含有するサンプルがこのチップのサンプル区画内に堆積した場
合、図１７に示されるように、クエチアピンについて典型的な用量反応曲線を生成した。
リスペリドンを含有するサンプルがこのチップのサンプル区画内に堆積した場合、図１８
に示されるように、リスペリドンについて典型的な用量反応曲線を生成した。

図１９〜２２は、多重形式で生成された用量反応曲線（図１５〜１８）に対する陽性対
照として生成された用量反応曲線（図７〜１０）の比較を示す。アリピプラゾールについ
ての比較を図１９に、オランザピンについては図２０に、クエチアピンについては図２１
に、リスペリドンについては図２２に示す。これらの図は、陽性対照曲線が多重曲線に類
似していることを示す。

これらのデータは、本発明の側方流動アッセイ装置を使用し、ある携帯型のポイントオ
ブケア装置において患者からの単一サンプルを使用して、複数の抗精神病薬を検出するこ
とができることを示す。

Claims (8)

1. 単離されたモノクローナル抗体又はその結合断片であって、
   リスペリドン、パリペリドン、及び７−ヒドロキシリスペリドンに結合し、かつ
   式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生される、
   前記抗体又はその結合断片。
   

   

   （式中、
   Ｒ¹は、Ｈ又はＯＨであり、
   Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、
   

   

   又はＯ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈであり、
   ｒは、１、２、３、４、又は５であり、
   ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
   ｎは、１、２、３、４、又は５である。）
2. 前記抗体断片が、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ミニボディ、及びダイアボディ断片からなる断片の群から選択される、請求項１に記載の抗体又はその結合断片。
3. 請求項１又は２に記載の抗体又はその結合断片を含む、アッセイキット。
4. 請求項１又は２に記載の抗体又はその結合断片を含む、アッセイ装置。
5. 前記装置が、側方流動アッセイ装置である、請求項４に記載のアッセイ装置。
6. サンプル中のリスペリドンを検出するためのアッセイを行うための、請求項１又は２に記載の抗体又はその結合断片の使用。
7. 前記アッセイが競合的イムノアッセイである、請求項６に記載の使用。
8. 前記アッセイが、側方流動アッセイ装置において行われる、請求項６又は７に記載の使用。

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