JP6967968B2 - アルコール飲料を調製するための酵母 - Google Patents

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Description

アルコール飲料は、しばしば、酵母を用いた炭水化物を豊富に含む液体の発酵によって調製される。例えば、ビールは、酵母を用いて麦汁を発酵させることによって調製される。麦汁は、数多くの化合物を含有しており、それらは、酵母によって資化することができる。 例えば、麦汁は、糖類、特に、マルトース、そして、同様に、アミノ酸と小ペプチド類を豊富に含んでいる。従来の酵母は、マルトースを資化することができ、そして、つまりは、従来の酵母は、マルトースを発酵させて、エタノールを産生することができる。しかしながら、麦汁は、マルトース以外にも、他の炭水化物を含んでおり、それらの幾つかは、従来の酵母、特に、ラガー酵母によって資化されることはない。
一般的に、ラガー酵母は、幾つかの点において、エール酵母とは異なる。ラガー酵母は、Ｓ．ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓの種に属している。発酵の間に底に沈むため、ラガー酵母は、しばしば、「下面発酵酵母」とも呼ばれている。さらに、ラガー酵母株は、７〜１５℃の範囲の温度が、使用に最も適している。加えて、ラガー酵母は、メリビオースを唯一の炭素源として使用することができるが、３７℃では成長できない。
これに対して、エール酵母は、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの種に属している。発酵の間に表面に向かって浮き上がることがよくあるため、エール酵母は、しばしば、「上面発酵酵母」とも呼ばれている。さらに、エール酵母株は、１０〜２５℃の範囲の温度が、使用に最も適しているが、幾つかの株は、１２℃を下回ると活発に発酵しなくなってしまう。加えて、エール酵母は、メリビオースを唯一の炭素源として使用することができず、また、３７℃で成長できる。
その他の酵母、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓも、ビール醸造に使用することができる。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓは、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ種のｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ亜種(ｖａｒ．)に属しており、及び、デンプンを唯一の炭素源として酵母が利用できるようにする以下の遺伝子、ＳＬＡ１、ＳＴＡ２またはＳＴＡ３の少なくとも１つでコードされたグルコアミラーゼ酵素活性の特性を有している。一般的に、ＳＬＡ遺伝子は、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＳ．ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓまたは解析をした他のＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種の株では認められないが、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのサブグループである亜種のｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓでは存在している。
ラガービール(例えば、Ｓ．ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ)ならびにエール酵母(例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ)の双方の特性を兼ね備えた改善された酵母株が必要とされている。加えて、可能な限り多くの異なるエネルギー源を利用することができる酵母株も必要とされている。特に、麦汁に含まれるマルトース以外の糖類を資化することができる酵母、及び、アミノ酸及びペプチド類を旺盛に資化することができる酵母が必要とされている。
興味深いことに、本願発明は、ラガー酵母の幾つかの重要な特性を有しつつ、同時に、麦汁に含まれる多くの異なるエネルギー源を利用することができるハイブリッド酵母を提供する。
したがって、少なくとも１つの以下の特性、
Ｉ．イソマルトースを唯一の炭素源として資化することができる、
ＩＩ．パノースを唯一の炭素源として資化することができる、
を有する酵母細胞を提供することが、本願発明の態様である。
上記の特性Ｉ及びＩＩに加えて、本願発明の酵母細胞は、別の特性、例えば、１つ以上の以下の特性、
ＩＩＩ．１つ以上のジペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる、
ＩＶ．１つ以上のトリペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる、
Ｖ．５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、１つ以上のアミノ酸のレベルを、出発濃度の１０％を超えないレベルにまで下げることができる、
ＶＩ．当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、ジアセチルが、所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、プラート当たり、少なくとも４.７プロミルのエタノールを生成することができる、及び/または、
ＶＩＩ．当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、ジアセチルが、所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、少なくとも真正発酵度７０で糖を発酵させることができる、
を有することができる。
以下のうち少なくとも１つの特性、
ＩＩ．パノースを唯一の炭素源として資化することができる、
ＩＩＩ．１つ以上のジペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる、
を有する酵母細胞を提供することも、本願発明の態様である。
以下の特性、
ＩＩ．パノースを唯一の炭素源として資化することができる、
を有する酵母細胞を提供することも、本願発明の態様である。
上記の特性ＩＩ及び/またはＩＩＩに加えて、本願発明の酵母細胞は、さらなる特性、例えば、以下のうち１つ以上の特性、
Ｉ．イソマルトースを唯一の炭素源として資化することができる、
ＩＶ．１つ以上のトリペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる、
Ｖ．５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、１つ以上のアミノ酸のレベルを、出発濃度の１０％を超えないレベルまで下げることができる、
ＶＩ．当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、ジアセチルが、所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、プラート当たり、少なくとも４.７プロミルのエタノールを生成することができる、及び/または、
ＶＩＩ．当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、ジアセチルが、所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、少なくとも真正発酵度７０で糖を発酵させることができる、
を有することができる。
飲料を製造するための方法であって、当該方法が、
Ｉ．出発液体を準備すること、
ＩＩ．本願発明の酵母細胞を準備すること、
ＩＩＩ．当該出発液体を、当該酵母細胞で発酵させること、
のステップを含む方法を提供することも本願発明の態様である。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
少なくとも１つの以下の特性を有する酵母細胞:
ＩＩ．パノースを唯一の炭素源として資化することができる、
ＩＩＩ．１つ以上のジペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる。
（項目２）
前記酵母細胞が、
Ｉ．イソマルトースを唯一の炭素源として資化することができる、
という特性をさらに有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目３）
前記酵母細胞が、前記パノースが、１〜５ｇ/Ｌの範囲内、１〜３ｇ/Ｌの範囲など、例えば、２ｇ/Ｌの濃度で存在している場合に、パノースを唯一の炭素源として資化することができる、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目４）
前記酵母細胞が、麦汁に含まれるパノースの少なくとも４５％を除去することができる、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目５）
前記酵母細胞が、
ＩＩＩ．１つ以上のジペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる、
という特性をさらに有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目６）
前記酵母細胞が、さらにアラントインを唯一の窒素源として資化することができる、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目７）
前記酵母細胞が、
ＩＶ．１つ以上のトリペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる、
という特性をさらに有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目８）
前記酵母細胞が、
Ｖ．５日間、前記酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、１つ以上のアミノ酸のレベルを出発濃度の１０％を超えないレベルにまで下げることができる、
という特性をさらに有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目９）
前記酵母細胞が、
ＶＩ．前記酵母細胞が少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、ジアセチルが所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、プラート度当たり、少なくとも４.７プロミルのエタノールを生成することができる、
という特性をさらに有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目１０）
前記酵母細胞が、
ＶＩＩ．前記酵母細胞が少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、ジアセチルが所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、少なくとも７０など、少なくとも６８の真正発酵度で糖を発酵させることができる、
という特性をさらに有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目１１）
前記酵母細胞が特性ＶＩＩを有し、特性ＶＩＩが、その親株の一つの株のＲＤＦより高い、少なくとも２など、少なくとも１のＲＤＦで糖を発酵させることができる、という特性を有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目１２）
前記酵母細胞が、
ＶＩＩＩ．メリビオースを唯一の炭素源として資化することができる、
という特性をさらに有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目１３）
前記酵母細胞が、
Ｘ．前記酵母細胞が少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、４日間インキュベーションされる場合に、多くとも１,０００万個の細胞/ｍｌなど、多くとも１,２００万個の細胞/ｍｌが懸濁するように、沈降できるようにする、
という特性をさらに有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目１４）
懸濁液での前記細胞数/ｍｌが、前記細胞の成長が許容される条件下で５日間のインキュベーションを行った後、出発細胞数/ｍｌの多くとも８０％、多くとも７０％など、例えば、多くとも６０％、多くとも５０％など、例えば、多くとも４０％である、項目１３に記載の酵母細胞。
（項目１５）
前記酵母細胞が、
ＩＸ．イソマルトース、パノース、及び/または、メリビオースに加えて、１つ以上の二糖及び/または三糖を資化することができる、
という特性をさらに有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目１６）
前記二糖が、コージビオース、ニゲロース、スクロース、ツラノース、ロイクロース、及び、パラチノースからなる群から選択される、項目１５に記載の酵母細胞。
（項目１７）
前記二糖が、コージビオースである、項目１５に記載の酵母細胞。
（項目１８）
前記二糖が、マルツロースである、項目１５に記載の酵母細胞。
（項目１９）
前記酵母細胞が、
ＸＩ．長くとも４日間、例えば、長くとも３日間の一次発酵で麦汁を発酵することができる、
という特性をさらに有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目２０）
前記酵母細胞が、
Ｉ．ＤＡＬ５をコードする遺伝子を含む、
遺伝子型を有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目２１）
前記遺伝子型Ｉが、前記酵母細胞が、ＤＡＬ５をコードする少なくとも１つの対立遺伝子を含むことであって、ＤＡＬ５をコードする前記対立遺伝子が、配列番号６のＤＡＬ５、配列番号３９のＤＡＬ５、配列番号４０のＤＡＬ５、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％などの配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＤＡＬ５をコードする、項目２０に記載の酵母細胞。
（項目２２）
前記酵母細胞が、
ＩＩ．ＰＴＲ２をコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含む、
遺伝子型を有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目２３）
前記遺伝子型ＩＩが、前記酵母細胞がＰＴＲ２をコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含むことであって、それらが個別に、配列番号７のＰＴＲ２、配列番号８のＰＴＲ２、配列番号９のＰＲＴ２、配列番号３７を含むＰＲＴ２、配列番号３８のＰＲＴ２、配列番号４３のＰＲＴ２、配列番号４４のＰＲＴ２、及び少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらの各々の機能的相同体をコードする遺伝子からなる群から選択される、項目２２に記載の酵母細胞。
（項目２４）
前記酵母細胞が、
ＩＩＩ．ＵＢＲ１をコードする遺伝子を含む、
遺伝子型を有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目２５）
前記遺伝子型ＩＩＩが、前記酵母細胞がＵＢＲ１をコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含むことであって、それらが個別に、配列番号１０を含むＵＢＲ１、配列番号１１のＵＢＲ１、配列番号４１を含むＵＢＲ１、配列番号４２のＵＢＲ１、配列番号４５を含むＵＢＲ１、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される、項目２４に記載の酵母細胞。
（項目２６）
前記酵母細胞が、
ＩＶ．ＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも４つなどの少なくとも３つの遺伝子を含む、
遺伝子型を有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目２７）
ＩＶ．ＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも４つなどの少なくとも３つの遺伝子を含む、
遺伝子型を有する酵母細胞。
（項目２８）
前記ＩＭＡ１ｐが、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される、項目２６及び２７のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目２９）
前記遺伝子型ＩＶが、前記酵母細胞がＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも５つの遺伝子を含むことであって、前記遺伝子が個別に、配列番号１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２のＩＭＡ１ｐ、配列番号３のＩＭＡ１ｐ、配列番号４のＩＭＡ１ｐ、配列番号５のＩＭＡ１ｐ、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、配列番号３３のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体をコードする遺伝子からなる群から選択される、項目２６〜２８のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目３０）
前記遺伝子型ＩＶが、前記酵母細胞が、ＩＭＡ１の少なくとも３つの短い対立遺伝子とＩＭＡ１の少なくとも２つの長い対立遺伝子とを含むことであって、
ａ) 前記ＩＭＡ１の３つの短い対立遺伝子が個別に、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２のＩＭＡ１ｐ、配列番号３のＩＭＡ１ｐ、配列番号４のＩＭＡ１ｐ、配列番号５のＩＭＡ１ｐ、及び、配列番号３３のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子であり、及び、
ｂ) 前記ＩＭＡ１の２つの長い対立遺伝子が個別に、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子である、
項目２６〜２９のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目３１）
前記酵母細胞が、
Ｖ．ＩＭＡ５ｐをコードする遺伝子、好ましくはＩＭＡ５ｐをコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含む、
遺伝子型を有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目３２）
ＩＭＡ５ｐが、配列番号１６のＩＭＡ５ｐ、配列番号１７のＩＭＡ５ｐ、配列番号３４のＩＭＡ５ｐ、配列番号３５のＩＭＡ５ｐ、配列番号３６のＩＭＡ５ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される、項目３１に記載の酵母細胞。
（項目３３）
前記酵母細胞が、
ＶＩ．配列番号１８のＡＧＴ１、配列番号１９のＡＧＴ１、配列番号２０のＡＧＴ１、配列番号２６のＡＧＴ１、配列番号２７のＡＧＴ１、配列番号２８のＡＧＴ１、配列番号２９のＡＧＴ１、配列番号３０のＡＧＴ１、配列番号３１のＡＧＴ１、配列番号３２のＡＧＴ１、及び少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＡＧＴ１をコードする少なくとも３つの遺伝子を含む、
遺伝子型を有する、先行項目のいずれか１項に記載の酵母細胞。
（項目３４）
飲料を製造するための方法であって、前記方法が、
ａ. 出発液体を準備すること、
ｂ. 項目１〜３４のいずれか１項に記載の酵母細胞を準備すること、
ｃ. 前記出発液体を、前記酵母細胞で発酵し、それにより、飲料を製造すること、
のステップを含む、方法。
（項目３５）
前記出発液体が、大麦及び/または麦芽の水性エキスを含む、項目３４に記載の方法。
２ｇ/Ｌのパノースを唯一の炭素源として含む規定の培地における様々な酵母株の成長を示す図である。そこで示したデータは、生物学的複製物の典型例である。パネルＡ)は、エール酵母１、ハイブリッド酵母１、ハイブリッド酵母４及びラガー酵母１の成長を示す。パネルＢ)は、エール酵母１、ハイブリッド酵母７及びラガー酵母２の成長を示す。パネルＣ)は、Ｓ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ及びハイブリッド酵母８の成長を示す。 ２ｇ/Ｌのパノースを唯一の炭素源として含む規定の培地における様々な酵母株の成長を示す図である。そこで示したデータは、生物学的複製物の典型例である。パネルＡ)は、エール酵母１、ハイブリッド酵母１、ハイブリッド酵母４及びラガー酵母１の成長を示す。パネルＢ)は、エール酵母１、ハイブリッド酵母７及びラガー酵母２の成長を示す。パネルＣ)は、Ｓ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ及びハイブリッド酵母８の成長を示す。 ２ｇ/Ｌのイソマルトースを唯一の炭素源として含む規定の培地における酵母の成長を示す図である。そこで示したデータは、生物学的複製物の典型例である。パネルＡ)は、エール酵母１、ハイブリッド酵母１、ハイブリッド酵母４及びラガー酵母２の成長を示す。パネルＢ)は、エール酵母１、ハイブリッド酵母７及びラガー酵母１の成長を示す。パネルＣ)は、Ｓ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ及びハイブリッド酵母８の成長を示す。 ２ｇ/Ｌのイソマルトースを唯一の炭素源として含む規定の培地における酵母の成長を示す図である。そこで示したデータは、生物学的複製物の典型例である。パネルＡ)は、エール酵母１、ハイブリッド酵母１、ハイブリッド酵母４及びラガー酵母２の成長を示す。パネルＢ)は、エール酵母１、ハイブリッド酵母７及びラガー酵母１の成長を示す。パネルＣ)は、Ｓ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ及びハイブリッド酵母８の成長を示す。 ２ｇ/Ｌのメリビオースを唯一の炭素源として含む規定の培地におけるＢｉｏｓｃｒｅｅｎ Ｃ ＭＢＲでの酵母細胞の成長を示す図である。パネルＡは、ハイブリッド酵母１及びハイブリッド酵母４の成長を示す。パネルＢは、ハイブリッド酵母７の成長を示す。 最終ビン詰ビール醸造での単糖類のＮＭＲ分析を示しており、ラガー酵母１で製造されたビールとハイブリッド酵母１で製造されたビールが比較されている。 エール酵母１、ラガー酵母１及びハイブリッド酵母１由来のＤＡＬ５のタンパク質配列アラインメントを示す。ハイブリッド酵母１のＤＡＬ５の配列は、Ｓｃ_ＤＡＬ５_Ｈｙｂｒｉｄ_１(配列番号６)と表記してある。 ＵＢＲ１のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＵＢＲ１のタンパク質配列アラインメントであり、ハイブリッド酵母１でのラガー酵母１Ｓｃ対立遺伝子の存在が示されているが、エール酵母１は、一端が欠失されている。 ＵＢＲ１の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＵＢＲ１のタンパク質配列アラインメントであり、ハイブリッド酵母１でのラガー酵母１Ｓｃ対立遺伝子の存在が示されている。 ＩＭＡ１の短い対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのタンパク質配列アラインメントを示す。ハイブリッド酵母１において認められたＩＭＡ１の短い対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐは、それぞれ、ＩＭＡ１_Ｓｃ_ａｌｌｅｌｅ_ｓｈｏｒｔ_Ａ_Ｈｙｂｒｉｄ_１及びＩＭＡ１_Ｓｃ_ａｌｌｅｌｅ_ｓｈｏｒｔ_Ｂ_Ｈｙｂｒｉｄ_１として表示されている。 ＩＭＡ１の長い対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのタンパク質配列アラインメントを示す。図９Ａは、エール酵母１、ラガー酵母１、及び、ハイブリッド酵母１由来の長い対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアラインメントを示す。ハイブリッド酵母１において認められたＩＭＡ１の長い対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐは、それぞれ、ＬＯＮＧ_ＩＭＡ１_Ａ_Ｈｙｂ１_ｐｌ１７及びＬＯＮＧ_ＩＭＡ１_Ｂ_Ｈｙｂ１_ｐｌ１８として表示されている。図９Ｂは、エール酵母１、ラガー酵母２、ハイブリッド酵母４及びハイブリッド酵母７由来の長い対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアラインメントを示す。 ＩＭＡ１の長い対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのタンパク質配列アラインメントを示す。図９Ａは、エール酵母１、ラガー酵母１、及び、ハイブリッド酵母１由来の長い対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアラインメントを示す。ハイブリッド酵母１において認められたＩＭＡ１の長い対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐは、それぞれ、ＬＯＮＧ_ＩＭＡ１_Ａ_Ｈｙｂ１_ｐｌ１７及びＬＯＮＧ_ＩＭＡ１_Ｂ_Ｈｙｂ１_ｐｌ１８として表示されている。図９Ｂは、エール酵母１、ラガー酵母２、ハイブリッド酵母４及びハイブリッド酵母７由来の長い対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアラインメントを示す。 ＩＭＡ５様によってコードされたＩＭＡ５ｐのタンパク質配列アラインメントを示す。ハイブリッド酵母１において認められたＩＭＡ５様によってコードされたＩＭＡ５ｐは、それぞれ、ＳｃＩＭＡ５_Ｈｙｂｒｉｄ１_ｐｌ１及びｎｏｎ−ＳｃＩＭＡ５_Ｈｙｂｒｉｄ１として表示されている。 ＡＧＴ１のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のタンパク質配列アラインメントを示す。図１１Ａは、ラガー酵母１、エール酵母１及びハイブリッド酵母１由来のＡＧＴ１のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアラインメントを示す。ハイブリッド酵母１において認められたＡＧＴ１によってコードされたＡＧＴ１は、それぞれ、Ｓｃ_ＡＧＴ１_Ｈｙｂｒｉｄ１_ｐｌ３７、Ｓｃ_ＡＧＴ１_Ｈｙｂｒｉｄ１_ｐｌ３８、及び、Ｓｃ_ＡＧＴ１_Ｈｙｂｒｉｄ１_ｐｌ３９として表示されている。図１１Ｂは、ラガー酵母２、エール酵母１、ハイブリッド酵母４、及び、ハイブリッド酵母７由来のＡＧＴ１のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアラインメントを示す。 ＡＧＴ１のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のタンパク質配列アラインメントを示す。図１１Ａは、ラガー酵母１、エール酵母１及びハイブリッド酵母１由来のＡＧＴ１のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアラインメントを示す。ハイブリッド酵母１において認められたＡＧＴ１によってコードされたＡＧＴ１は、それぞれ、Ｓｃ_ＡＧＴ１_Ｈｙｂｒｉｄ１_ｐｌ３７、Ｓｃ_ＡＧＴ１_Ｈｙｂｒｉｄ１_ｐｌ３８、及び、Ｓｃ_ＡＧＴ１_Ｈｙｂｒｉｄ１_ｐｌ３９として表示されている。図１１Ｂは、ラガー酵母２、エール酵母１、ハイブリッド酵母４、及び、ハイブリッド酵母７由来のＡＧＴ１のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアラインメントを示す。 ＡＧＴ１の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のタンパク質配列アラインメントを示す。図１２Ａは、ラガー酵母１及びハイブリッド酵母１由来のＡＧＴ１の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアラインメントを示す。ハイブリッド酵母１において認められたＡＧＴ１によってコードされたＡＧＴ１は、Ｎｏｎ−Ｓｃ_ＡＧＴ１_Ｈｙｂｒｉｄ１として表示されている。図１２Ａは、ラガー酵母１、ラガー酵母２、ハイブリッド酵母１、ハイブリッド酵母４、及び、ハイブリッド酵母７由来のＡＧＴ１の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアラインメントを示す。 ＡＧＴ１の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のタンパク質配列アラインメントを示す。図１２Ａは、ラガー酵母１及びハイブリッド酵母１由来のＡＧＴ１の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアラインメントを示す。ハイブリッド酵母１において認められたＡＧＴ１によってコードされたＡＧＴ１は、Ｎｏｎ−Ｓｃ_ＡＧＴ１_Ｈｙｂｒｉｄ１として表示されている。図１２Ａは、ラガー酵母１、ラガー酵母２、ハイブリッド酵母１、ハイブリッド酵母４、及び、ハイブリッド酵母７由来のＡＧＴ１の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアラインメントを示す。 ２ｇ/Ｌのマルトトリオースを唯一の炭素源として含む規定の培地における酵母の成長を示す図である。そこで示したデータは、生物学的複製物の典型例である。 ２ｇ/Ｌのマルツロースを唯一の炭素源として含む規定の培地における酵母の成長を示す図である。そこで示したデータは、生物学的複製物の典型例である。 ２ｇ/Ｌのコージビオースを唯一の炭素源として含む規定の培地における酵母の成長を示す図である。そこで示したデータは、生物学的複製物の典型例である。 ラガー酵母２、ハイブリッド酵母４及びハイブリッド酵母７で、麦汁を発酵している間の時間との関数として外観エキス濃度を示す。
定義
本明細書において使用する「ａ」は、それが使われている文脈に応じて、１つまたはそれ以上のことを意味することができる。
本明細書において使用する「ＡＥ」という用語は、「外観エキス濃度（Ａｐｐａｒｅｎｔ Ｅｘｔｒａｃｔ)」の略語である。この「外観エキス濃度」は、エキスの重量％によるビール麦汁の密度の単位であり、プラートの尺度で表現される。それは、ビール発酵の最後において測定した最終比重または比重のことである。アルコール飲料の関連で使われる比重とは、水と比較して得た液体の相対密度を指す。麦汁に溶解した糖類が増えれば、麦汁の密度も大きくなる。
アミノ酸は、ＩＵＰＡＣの一文字コード及び三文字コードを用いて、本明細書において、命名をすることができる。
本明細書において使用する「ビール」という用語は、麦汁の発酵によって調製された飲料を指す。好ましくは、当該発酵は、酵母によって行われる。
本明細書において使用する「炭素源」という用語は、酵母にエネルギーを供給し、かつ、細胞の生合成のために炭素を供給することができる、任意の有機分子を指す。特に、当該炭素源を、炭水化物とすることができ、及び、より好ましくは、当該炭素源を、単糖及び/または二糖であることができる。
「懸濁液での細胞」という用語は、容器内の液体培地での細胞のインキュベーションとの関連で、本明細書で使用される。「懸濁液での細胞」は、 インキュベーション後に容器の底部に沈殿しておらず、当該液体培地内で自由に浮遊している細胞のことである。懸濁液での細胞は、容器の上部より当該液体培地を採取し、そして、そこに含まれている細胞を計数することによって決定することができる。
「所定のジアセチル」という用語は、ジアセチルのレベルが、所定の閾値よりも低いことを指すものであって、ラガービールにおいて異臭と認められる閾値よりも低いレベルに設定される。好ましくは、当該ジアセチルのレベルが、多くとも３０ｐｐｂにある場合に、当該ジアセチルが、所定のものであると認められる。
「コードする」または「コードされた」は、特定の核酸に関連して、特定のタンパク質への翻訳のための情報を含むことを意味する。タンパク質をコードする核酸またはポリヌクレオチドは、核酸の翻訳領域内に、非翻訳配列、例えば、イントロンを含むことができ、あるいは、例えば、ｃＤＮＡ内の介在性非翻訳配列を欠如することができる。タンパク質がコードされる情報は、コドンの使用によって特定される。
核酸に関連して本明細書において使用する「発現」は、核酸断片から誘導されたセンスｍＲＮＡまたはアンチセンスＲＮＡの転写及び蓄積として理解される。タンパク質に関連して用いられる「発現」は、ｍＲＮＡをポリペプチドへ翻訳することを指す。
「遺伝子」という用語は、ポリペプチド鎖の製造に関与するＤＮＡのセグメントのことを指し、コード領域の前方及び後方の領域(プロモーター及びターミネーター)を含む。さらに、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅゲノムの遺伝子ではわずか５％であるが、幾つかの酵母ではイントロンも含んでいる。ＲＮＡの転写後に、スプライシングによってイントロンは除去され、成熟したメッセンジャーＲＮＡ(ｍＲＮＡ)が生成される。
酵母に関して本明細書において使用する「成長」という用語は、酵母細胞が増殖するプロセスを指す。よって、酵母細胞が成長していると、酵母細胞の数は増大している。酵母細胞の数は、任意の有用な方法によって、例えば、ＯＤ(６２０ｎｍ)を決定することによって、決定をすることができる。ＯＤ(６２０ｎｍ)の増大は、酵母細胞の数の増大に対応している。酵母の成長を許容する条件は、酵母細胞の数の増大を許容する条件のことである。一般的に、かような条件は、適切な栄養、例えば、炭素源と窒素源、ならびに、一般的には、５〜４０℃の範囲の適切な温度の存在を必要とする。
本明細書において使用する「窒素源」という用語は、有機性窒素を含む任意の分子、及び/または、アンモニウムを含む分子を指す。特に、当該窒素源を、有機性窒素源、例えば、ペプチド類、アミノ酸、及び/または、他のアミン類であることができる。当該窒素源を、アンモニウムとすることもできる。よって、Ｎ２は、本明細書では、「窒素源」として認められていない。
「麦芽」という用語は、麦芽処理された穀物粒を指す。麦芽製造は、穀物粒（例えば、大麦粒）の発芽の特別な形態であって、麦芽製造施設のスティープタンクと発芽箱を含むが、それらに限定されない、制御された環境条件下で実施される。一般的に、麦芽製造は、当該穀粒の浸漬が含まれ、発芽がそれに続く。麦芽製造プロセスは、穀物粒(例えば、大麦粒)の乾燥、例えば、乾燥釜乾燥プロセスによって停止することができ、それは、通常は、高温下で実施される。麦芽は、粉砕することで加工することができ、よって、「粉砕麦芽」または「粉末」と称されることとなる。
「糖化」は、粉砕した麦芽を水中でインキュベーションすることである。好ましくは、糖化は、特定の温度で、及び、特定の体積の水を使用して実施される。この温度と水の体積は重要なものであり、これらは、麦芽由来の酵素活性の低下速度に影響を及ぼし、その結果、特に、そこで発生し得るデンプンの加水分解の量に影響が及ぶこととなる。プロテアーゼ作用も重要な場合がある。糖化は、副原料の存在下で行うことができ、副原料は、麦芽以外のあらゆる炭水化物源、例えば、大麦、大麦シロップ、または、トウモロコシ、または、コメなどがあるが、これらに限定されず、全穀粒、または、粗挽き穀物などの加工産物、シロップまたはデンプンのいずれかを含む、ものとして理解される。上記のすべての副原料は、基本的には、糖分量の追加供給源として使用することができる(一般的に、シロップは、麦汁が加熱されている間に加えられる)。醸造における副原料の加工の要件は、使用する副原料の状態とタイプ、特に、デンプンのゲル化または液化の温度によって定まる。このゲル化の温度が、麦芽の通常の糖化温度よりも高い場合には、デンプンは、麦汁への添加前にゲル化及び液化される。
本明細書において使用する「プラート度」という用語は、プラート基準で測定した密度を指す。このプラート基準は、比重計スケールから経験的に導くものであり、ビールまたは麦汁の密度を、エキスの重量％で測定する。このスケールは、糖の重量％として密度を表す。
「麦汁」という用語は、粉砕麦芽、または、緑麦芽、または、粉砕緑麦芽などの麦芽の液体エキスを意味する。大麦の醸造において、モルト化していない大麦のエキスと、大麦成分を加水分解する酵素混合物とをインキュベーションすることによっても、麦汁を調製することができる。当該麦芽または大麦由来のエキスに加えて、当該液体エキスは、麦芽、及び、一部が発酵可能な糖類に変換された追加のデンプン含有物質などの追加成分(例えば、副原料)から調製することができる。一般的に、この麦汁は、糖化により、及び任意でそれに続いて「麦汁ろ過」により、すなわち糖化の後、熱水を用いてビール粕から残留糖類やその他の化合物を抽出するプロセスで取得される。一般的に、麦汁ろ過は、ロータータン、糖化フィルター、または、ビール粕から抽出した水の分離を許容する他の器具において実施される。一般的に、糖化の後に取得される麦汁は、「第１の麦汁」と呼ばれており、一方で、糖類の回収の後に取得される麦汁は、「第２の麦汁」と呼ばれている。特に断りの無い場合、麦汁の用語は、第１の麦汁、第２の麦汁、または、両者の組み合わせであり得る。従来のビール製造の過程では、麦芽は、ホップと一緒に煮沸されるが、本願発明は、麦汁の煮沸を少なくし、あるいは、麦汁の煮沸を回避する方法を提供する。ホップを含まない麦汁は、「甘味麦汁」と呼ぶこともでき、一方で、ホップと一緒に煮沸/加熱した麦汁は、「煮沸麦汁」と呼ぶことができる。
本明細書において使用する「ＸＸを資化することができる酵母細胞」という用語は、ＸＸを取得し、及び、分解することができる酵母細胞を指す。
本明細書において使用する「ＸＸを唯一の炭素源として資化することができる酵母細胞」という用語は、ＸＸを唯一の炭素源として含有している培地で成長することができる酵母細胞を指す。よって、当該培地は、好ましくは、ＸＸ以外のいかなる他の炭水化物をも含んでいない。
酵母細胞
本願発明は、後述の特性Ｉ、ＩＩ、yＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩの少なくとも１つを有する酵母細胞に関する。
特に、好ましくは、当該酵母細胞は、少なくとも後述の特性Ｉ及びＩＩを有する。
また、好ましくは、当該酵母細胞は、少なくとも後述の特性ＩＩを有する。また、好ましくは、当該酵母細胞は、少なくとも後述の特性ＩＩ及びＩＩＩを有する。
特性Ｉは、下記「特性Ｉ」の節で記載する特性Ｉのいずれであってもよい。特に、 特性Ｉは、酵母細胞が、イソマルトースを唯一の炭素源として資化できることである。
特性ＩＩは、下記「特性ＩＩ」の節で記載する特性Ｖのいずれであってもよい。特に、 特性ＩＩは、酵母細胞が、パノースを唯一の炭素源として資化できることである。
特性ＩＩＩは、下記「特性ＩＩＩ」の節で記載する特性ＩＩＩのいずれであってもよい。特に、 特性ＩＩＩは、酵母細胞が、ジペプチド類を唯一の窒素源として資化できることである。
特性ＩＶは、下記「特性ＩＶ」の節で記載する特性ＩＶのいずれであってもよい。特に、 特性ＩＶは、酵母細胞が、トリペプチド類を唯一の窒素源として資化できることである。
特性Ｖは、下記「特性ＩＩＩ」の節で記載する特性Ｖのいずれであってもよい。特に、 特性ＩＩＩは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、１つ以上のアミノ酸のレベルが、出発濃度の１０％を超えないレベルに下げることができることである。
特性ＶＩは、下記「特性ＶＩ」の節で記載する特性ＶＩのいずれであってもよい。特に、 特性ＶＩは、当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラートの糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、ジアセチルが、所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、プラート度当たり、少なくとも４.７プロミルのエタノールを生成することができることである。
特性ＶＩＩは、下記「特性ＶＩＩ」の節で記載する特性ＶＩＩのいずれであってもよい。特に、 特性ＶＩＩは、当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラートの糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、ジアセチルが、所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、少なくとも７０の真性発酵度で糖を発酵させることができることである。
特性ＸＩは、下記「特性ＸＩ」の節で記載する特性ＸＩのいずれであってもよい。特に、特性ＸＩは、当該酵母細胞が、長くとも４日間の一次発酵の折に麦汁を発酵することができることである。
本願発明の酵母細胞は、１つ以上の特性を有することができる。したがって、当該酵母細胞は、少なくとも２つ、好ましくは、少なくとも３つ、より好ましくは、少なくとも４つ、さらにより好ましくは、少なくとも５つ、少なくとも６つなど、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩのすべてなど、を有することができる。当該酵母細胞は、少なくとも２つ、好ましくは、少なくとも３つ、より好ましくは、少なくとも４つ、さらにより好ましくは、 少なくとも５つ、少なくとも６つなど、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩのすべてなど、を有することもできる。
よって、本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ及びＩＩを有することができる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ及びＩＩＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及び ＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ及びＩＶを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ及びＶを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、Ｖ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、Ｖ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＶ及びＶを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＶ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＶ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＶ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＶ、Ｖ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞 は、特性Ｉ、ＩＶ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＶ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、Ｖ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、Ｖ及び ＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、Ｖ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＶI、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩ及びＩＩＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ及び ＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＶ及びＶを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＶ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＶ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＶ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞 は、特性ＩＩ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、Ｖ及び ＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、Ｖ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、Ｖ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩＩ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩＩ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩＩ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、Ｖ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、Ｖ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＶ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＶ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＶ及びＶＩＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性ＩＶ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＶ、Ｖ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＶ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＶ、ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＩＶ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、特性Ｖ 及びＶＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｖ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｖ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性Ｖ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＶＩ及びＶＩＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＶＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。当該酵母細胞は、特性ＶＩＩ及びＸＩを有することもできる。
本願発明の好適な実施形態において、当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩのすべてを有する。本願発明の好適な実施形態において、当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＸＩのすべてを有する。
上記のように概説した特性に加えて、本願発明の酵母細胞は、１つ以上のさらなる特性を有することができる。
よって、１つ以上の特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及び/またはＸＩに加えて、そこで、当該酵母細胞は、特性ＶＩＩＩを有することもできる。特性ＶＩＩＩは、下記「特性ＶＩＩＩ」の節で記載する特性ＶＩＩＩのいずれであってもよい。特に、 特性ＶＩＩＩは、酵母細胞が、メリビオースを唯一の炭素源として資化できることであり得る。
特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ及び/またはＸＩの１つ以上に加えて、そこで、当該酵母細胞は、特性ＩＸを有することもできる。特性ＩＸは、下記「特性ＩＸ」の節で記載する特性ＩＸのいずれであってもよい。特に、 特性ＩＸは、酵母細胞が、二糖及び/または三糖を唯一の炭素源として資化できることにあり得る。
特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ及び/またはＸＩの１つ以上に加えて、次いで、当該酵母細胞は、特性Ｘを有することもできる。特性Ｘは、下記「特性Ｘ」の節で記載する特性Ｘのいずれであってもよい。特に、 特性Ｘは、酵母細胞が、懸濁液に僅かな数の細胞しか有していないことであり得る。
本願発明の好適な実施形態において、当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ及びＸＩのすべてを有することができる。
当該酵母細胞は、任意の適切な種の酵母細胞であることができる。本願発明の好適な実施形態において、当該酵母細胞は、Ｓ．ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ種の酵母細胞とＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ種の酵母細胞との間のハイブリッドである。
特性Ｉ
本願発明の酵母細胞は、特性Ｉを有することができ、特性Ｉは、当該酵母細胞が、イソマルトースを資化することができることである。よって、イソマルトースを含有する培地においてインキュベーションすれば、当該酵母細胞は、当該イソマルトースの少なくとも一部を除去することができる。
より好ましくは、当該特性Ｉは、当該酵母細胞が、イソマルトースを唯一の炭素源として資化することができることである。よって、当該酵母細胞は、イソマルトースを唯一の炭素源として含有する培地において成長することができる。そのような培地は、好ましくは、イソマルトース以外のいかなる単糖類及び/または二糖類をも含んでおらず、及び、より好ましくは、そのような培地は、イソマルトース以外のいかなる炭水化物も含んでいない。
酵母細胞が、イソマルトースを発酵できる場合であっても、このことは、当該酵母細胞が、イソマルトースを唯一の炭素源として資化できることを必ずしも意味するものではない。よって、当該酵母細胞が、イソマルトースを資化すること、及び、イソマルトースを唯一の炭素源として資化することの双方ができることが好ましい。
特に、特性Ｉは、当該酵母細胞が、１〜５ｇ/Ｌの範囲内、例えば、１〜３ｇ/Ｌの範囲、２ｇ/Ｌなどのイソマルトースを唯一の炭素源として含有する培地で成長することができる、であることができる。そのような培地は、好ましくは、当該濃度のイソマルトース以外のいかなる炭水化物も含んでいない。
酵母細胞が、イソマルトースを唯一の炭素源として資化できるかどうかを決定するための有用な１つの方法が、後出の実施例５において記載されている。
特性Ｉを有する酵母細胞は、好ましくは、遺伝子型ＩＶ、Ｖ及びＶＩの１つ以上も有しており、より好ましくは、後述のように、遺伝子型ＩＶ、Ｖ及びＶＩのすべても有する。
特性ＩＩ
本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩを有することができ、特性ＩＩは、当該酵母細胞が、パノースを資化することができることである。よって、パノースを含有する培地においてインキュベーションすれば、次いで、当該酵母細胞は、当該パノースの少なくとも一部を除去することができる。好ましくは、当該酵母細胞は、当該培地に含まれるパノースの少なくとも４５％、少なくとも５０％など、例えば、少なくとも６０％を除去することができる(例えば、発酵することができる)。特に、当該培地は、麦汁であることができる。好ましくは、ジアセチルが、所定のレベルになるまで、例えば、４〜６日間、例えば、５日間、インキュベーションされる場合に、当該酵母細胞は、上記の量のパノースを除去することができる。例えば、インキュベーションは、１６〜１８℃で行うことができる。よって、後出の実施例５に記載にしたがって麦汁を発酵して決定した場合に、当該酵母細胞は、麦汁に含まれるパノースの少なくとも４５％、少なくとも５０％など、例えば、少なくとも６０％を除去することができる。
より好ましくは、当該特性ＩＩは、当該酵母細胞が、パノースを唯一の炭素源として資化することができることである。よって、当該酵母細胞は、パノースを唯一の炭素源として含有する培地において成長することができる。そのような培地は、好ましくは、パノース以外のあらゆる単糖類及び/または二糖類を含んでおらず、及び、より好ましくは、このような培地は、パノース以外のいかなる炭水化物も含んでいない。
酵母細胞が、パノースを発酵できる場合であっても、このことは、当該酵母細胞が、パノースを唯一の炭素源として資化できることを必ずしも意味するものではない。1つの実施形態において、当該酵母細胞は、パノースを資化すること、及び、パノースを唯一の炭素源として資化することの双方ができる。
特に、特性ＩＩは、当該酵母細胞が、１〜５ｇ/Ｌの範囲内、例えば、１〜３ｇ/Ｌの範囲、２ｇ/Ｌなどのパノースを唯一の炭素源として含有する培地で成長することができることであることができる。そのような培地は、好ましくは、当該濃度のパノース以外のいかなる炭水化物も含んでいない。
酵母細胞が、パノースを唯一の炭素源として資化できるかどうかを決定するための有用な１つの方法が、後出の実施例５において記載されている。
特性ＩＩを有する酵母細胞は、好ましくは、遺伝子型ＩＶ、Ｖ及びＶＩの１つ以上も有しており、より好ましくは、後述のように、遺伝子型ＩＶ、Ｖ及びＶＩのすべても有する。
特性ＩＩＩ
本願発明の酵母細胞は、特性ＩＩＩを有することができ、特性ＩＩＩは、当該酵母細胞が、ジペプチド類を資化することができることである。よって、ジペプチド類を含有する培地においてインキュベーションすれば、当該酵母細胞は、当該ジペプチド類の少なくとも一部を除去することができる。
より好ましくは、当該特性ＩＩＩは、当該酵母細胞が、ジペプチド類を唯一の窒素源として資化することができることである。よって、当該酵母細胞は、ジペプチド類を唯一の窒素源として含有する培地において成長することができる。そのような培地は、好ましくは、ジペプチド類以外のいかなるアミノ酸及びペプチド類も含んでおらず、及び、より好ましくは、そのような培地は、ジペプチド類以外のいかなるアミノ酸、ペプチド類、及び、アンモニウムも含んでいない。
特性ＩＩＩは、当該酵母細胞が、任意のジペプチドを唯一の窒素源として資化することができることである。しかしながら、当該酵母は、１つ以上の特定のジペプチド類だけを唯一の窒素源として資化することができる、ということも可能である。
特性ＩＩＩは、当該酵母細胞が、以下のジペプチド類の少なくとも１つ、少なくとも２つなど、例えば、少なくとも３つ、少なくとも４つなど、例えば、少なくとも５つ、すべてなどを利用することができる、とすることが好ましい：
Ｍｅｔ−Ｔｙｒ
Ｌｅｕ−Ｔｙｒ
Ｖａｌ−Ｍｅｔ
Ｐｈｅ−Ｔｙｒ
Ｉｌｅ−Ｌｅｕ
Ｉｌｅ−Ａｓｎ。
１つの実施形態において、、当該特性ＩＩＩは、当該酵母細胞が、以下のジペプチド類の少なくとも１つ、少なくとも３つなど、例えば、少なくとも５つ、少なくとも７つなど、例えば、少なくとも９つ、すべてなどを利用することができることである：
Ｇｌｙ−Ａｒｇ
Ｉｌｅ−Ａｓｎ
Ｌｙｓ−Ｔｙｒ
Ｍｅｔ−Ｌｙｓ
Ｖａｌ−Ａｌａ
Ｖａｌ−Ａｓｎ
Ｖａｌ−Ｇｌｙ
Ｖａｌ−Ｇｌｎ
Ｖａｌ−Ｍｅｔ
Ｖａｌ−Ｓｅｒ。
特性ＩＩＩは、当該酵母細胞が、式Ｖａｌ−Ｘａａの１つ以上のジペプチド類を資化することができることであり得、式中、Ｘａａは、任意のアミノ酸を表す。例えば、当該特性ＩＩＩは、当該酵母細胞が、式Ｖａｌ−Ｘａａのジペプチド類の少なくとも３つ、少なくとも４つなど、例えば、少なくとも６つの異なるジペプチド類を資化できることであることができる。特に、Ｘａａは、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｍｅｔ及びＳｅｒからなる群から選択されるアミノ酸であり得る。
特性ＩＩＩは、当該酵母細胞が、式Ａｌａ−Ｘａａの１つ以上のジペプチド類を資化することができることであり得、式中、Ｘａａは、任意のアミノ酸を表す。特に、Ｘａａは、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ及びＴｈｒからなる群から選択されるアミノ酸であり得る。式Ａｌａ−Ｘａａのジペプチドを資化する能力は、アラントイン異化の中間体であるアラントイン酸を資化する能力と関係していることが往々にしてある。よって、当該酵母細胞が、さらに、アラントインを唯一の窒素源として資化することができることが好ましい。
特性ＩＩＩは、当該酵母細胞が、以下のジペプチド類の１つ以上、例えば、以下のジペプチド類の少なくとも３つ、以下のジペプチド類の少なくとも５つなど、以下のジペプチド類のすべて、などを資化することができる、とすることもできる
Ｍｅｔ−Ｔｙｒ
Ｌｅｕ−Ｔｙｒ
Ｖａｌ−Ｍｅｔ
Ｐｈｅ−Ｔｙｒ
Ｉｌｅ−Ｌｅｕ
Ｉｌｅ−Ａｓｎ
Ａｌａ−Ｘａａ
（式中、Ｘａａは、任意のアミノ酸であり、及び、好ましくは、Ｘａａは、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、ＨｉｓまたはＴｈｒである）。
酵母細胞が、ジペプチド類を唯一の窒素源として資化できるかどうかを決定するための有用な１つの方法が、後出の実施例６において記載されている。実施例６に記載の方法が、そこで試験をしたジペプチド類を交換することで、任意のジペプチドが、唯一の窒素源として資化可能かどうかを検証するために使用できることは、当業者であれば理解できるであろう。
特性ＩＩＩを有する酵母細胞は、好ましくは、遺伝子型Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの１つ以上も有しており、より好ましくは、後述のように、遺伝子型Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩのすべても有する。
特性ＩＶ
本願発明の酵母細胞は、特性ＩＶを有することができ、特性ＩＶは、当該酵母細胞が、トリペプチド類を資化することができることである。よって、トリペプチド類を含有する培地においてインキュベーションすれば、次いで、当該酵母細胞は、当該トリペプチド類の少なくとも一部を除去することができる。
より好ましくは、当該特性ＩＶは、当該酵母細胞が、トリペプチド類を唯一の窒素源として資化することができることである。よって、当該酵母細胞は、トリペプチド類を唯一の窒素源として含有する培地において成長することができる。そのような培地は、好ましくは、トリペプチド類以外のいかなるアミノ酸及びペプチド類を含んでおらず、及び、より好ましくは、そのような培地は、トリペプチド類以外のいかなるアミノ酸、ペプチド類、及び、アンモニウムも含んでいない。
特性ＩＶは、当該酵母細胞が、任意のトリペプチドを唯一の窒素源として資化することができることである。しかしながら、当該酵母は、１つ以上の特定のトリペプチド類だけを唯一の窒素源として資化することができる、ということも可能である。
特性ＩＶは、トリペプチドＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙを唯一の窒素源として資化することができる、とすることが好ましい。
酵母細胞が、トリペプチド類を唯一の窒素源として資化できるかどうかを決定するための有用な１つの方法が、後出の実施例６において記載されている。実施例６に記載の方法が、そこで試験をしたトリペプチド類を交換することで、任意のトリペプチドが、唯一の窒素源として資化可能かどうかを検証するために使用できることは、当業者であれば理解できるであろう。
特性ＩＶを有する酵母細胞は、好ましくは、遺伝子型Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの１つ以上も有しており、より好ましくは、後述するように、遺伝子型ＩＩ及びＩＩＩのすべても有する。
特性Ｖ
本願発明の酵母細胞は、特性Ｖを有することができ、特性Ｖは、アミノ酸の資化度が高いことである。
一般的に、本願発明の酵母細胞は、アミノ酸を高い程度で資化できることが好ましい。このことは、アミノ酸に蓄えられたエネルギーが利用できること、ならびに、発酵後に低レベルのアミノ酸が確保することの双方を確実なものにする。よって、当該酵母が、ビールの調製のために用いられる場合、最終ビールは、低レベルのアミノ酸を有することになる。ストレッカーアルデヒドは、ビールの「熟成した」風味の重要な成分であり、その一部は、ビン詰めされたビールそれ自体のアミノ酸から発生するものである。知覚閾値の低いストレッカーアルデヒドの形成への関与が示されているアミノ酸として、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、及び、フェニルアラニンがある(表２)。ストレッカーアルデヒドの形成は、その濃度が増大することで、「熟成風味」の知覚度が高まるので、重要な役割を果たす。
したがって、当該酵母細胞が、従来のラガー酵母及びエール酵母の双方よりも高い程度でアミノ酸を資化できるということは、本願発明の酵母にとって有利なことである。
よって、本願発明の酵母細胞が、特性Ｖを有することが好ましく、当該特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、１つ以上のアミノ酸のレベルが、出発濃度の１０％を超えないレベルに下げることができるということである。特に、特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、少なくとも１２、少なくとも１３など、例えば、少なくとも １４の異なるアミノ酸のレベルが、出発濃度の１０％未満にまで下げることができることであることができる。例えば、当該酵母細胞は、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、１２〜２０の範囲、１４〜２０の範囲のアミノなどを、出発濃度の１０％を超えない濃度にまで下げることができる。
当該特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、総アミノ酸レベルを、出発濃度の３０％を超えない、２５％を超えないレベルなどにまで下げることもできる、とすることもできる。
当該特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、１つ以上のアミノ酸のレベルを、出発濃度の５％を超えないレベルにまで下げることができる、とすることもできる。特に、特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、少なくとも１０、少なくとも１１など、例えば、少なくとも１３の異なるアミノ酸のレベルを、出発濃度の５％を超えないレベルにまで下げることができることであることができる。
当該特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、１つ以上のアミノ酸のレベルを、出発濃度の１％を超えないレベルまで下げることができる、とすることもできる。特に、特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、少なくとも５、少なくとも６など、例えば、少なくとも７の異なるアミノ酸のレベルを、出発濃度の１％を超えないレベルにまで下げることができることであることができる。
当該特性Ｖは、当該酵母細胞が、ストレッカーアルデヒドを形成する１つ以上のアミノ酸のレベルを下げることができる、とすることもできる。よって、特性Ｖを、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、メチオニン(Ｍｅｔ)のレベルを、出発濃度の１０％未満、好ましくは５％未満、さらにいっそう好ましくは多くとも２％、さらにより好ましくは１％未満にまで下げることができることであることができる。特に、当該酵母細胞は、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、ほぼすべてのメチオニンを除去することができる。特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、バリン(Ｖａｌ)のレベルを、出発濃度の１０％未満、好ましくは５％未満、さらにいっそう好ましくは多くとも２％にまで下げることができることであることができる。当該特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、イソロイシン(Ｉｌｅ)のレベルを、出発濃度の１０％未満、好ましくは５％未満、さらにいっそう好ましくは多くとも２％、さらにより好ましくは１％未満にまで下げることができることであることができる。特に、当該酵母細胞は、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、ほぼすべてのイソロイシンを除去することができる。当該特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、ロイシン(Ｌｅｕ)のレベルを、出発濃度の１０％未満、好ましくは５％未満、さらにいっそう好ましくは多くとも２％にまで下げることができることであることができる。当該特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、フェニルアラニン(Ｐｈｅ)のレベルを、出発濃度の１０％未満、好ましくは５％未満、さらにいっそう好ましくは多くとも２％、さらにより好ましくは１％未満にまで下げることができることであることができる。特に、当該酵母細胞は、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、ほぼすべてのフェニルアラニンを除去することができる。
本明細書で使用される「ほぼすべてを除去する」という用語は、ＵＰＬＣによって検出が行われた際に、アミノ酸が、検出レベルに満たないレベルにまでアミノ酸が除去されている、ことを指すものである。
特性Ｖを、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、アミノ酸メチオニン(Ｍｅｔ)、バリン(Ｖａｌ)、イソロイシン(Ｉｌｅ)、ロイシン(Ｌｅｕ)、及び、フェニルアラニン(Ｐｈｅ)の少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも４つ、よりいっそう好ましくはすべてのレベルを、出発濃度の１０％未満、好ましくは５％未満、さらにいっそう好ましくは多くとも２％にまで下げることができる、ものも本願発明に含まれる。
当該特性Ｖを、当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラートの糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、ジアセチルが、所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、当該酵母細胞が、アミノ酸メチオニン(Ｍｅｔ)、バリン(Ｖａｌ)、イソロイシン(Ｉｌｅ)、ロイシン(Ｌｅｕ)、及び、フェニルアラニン(Ｐｈｅ)の少なくとも１つの少なくとも８０％を資化することができる、とすることもできる。
本願発明の酵母細胞が、特性Ｖを有しており、当該特性Ｖが、当該酵母細胞を、６日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、メチオニン(Ｍｅｔ)、バリン(Ｖａｌ)、イソロイシン(Ｉｌｅ)、ロイシン(Ｌｅｕ)、及び/または、フェニルアラニン(Ｐｈｅ)の総アミノ酸レベルを、多くとも４００ｍｇ/Ｌ、多くとも１００ｍｇ/Ｌなど、多くとも５０ｍｇ/Ｌなど、例えば、１０ｍｇ/Ｌにまで低減することができる、とすることも好ましい。
当該特性Ｖは、本節において記載した上記特性Ｖの任意の特性の組み合わせとすることもできる。よって、例えば、当該特性Ｖを、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、少なくとも１２、少なくとも１３など、例えば、少なくとも１４の異なるアミノ酸のレベルを、出発濃度の１０％未満にまで下げることができ、かつ、総アミノ酸レベルを、出発濃度の３０％未満、２５％未満などにまで下げることができることであることができる。当該特性Ｖは、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、少なくとも１０のアミノ酸のレベルを、出発濃度の５％未満にまで下げることができ、かつ、総アミノ酸レベルを、出発濃度の３０％未満、２５％未満などにまで下げることができることであることもできる。当該特性Ｖを、当該酵母細胞が、５日間、当該酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、少なくとも５つのアミノ酸のレベルを、出発濃度の１％未満にまで下げることができ、かつ、総アミノ酸レベルを、出発濃度の３０％未満、２５％未満などにまで下げることができる、とすることもできる。当該酵母細胞の成長を許容する条件は、本節の「飲料を製造するための方法」の節で下に記載されている。当該条件は、その節において記載する発酵条件のいずれでもよい。例えば、当該条件は、麦汁において、１０〜２０℃の温度で行うインキュベーションであることができる。アミノ酸のレベルは、任意の有用な方法、例えば、ＨＰＬＣまたはＵＰＬＣによって決定することができる。酵母細胞でのアミノ酸の資化度が高いかどうかを決定するための有用な方法が、後出の実施例４及び９において記載されている。
特性ＶＩ
本願発明の酵母細胞は、特性ＶＩを有することができ、特性ＶＩは、高いアルコール産生のことである。所定の酵母細胞によって産生されるアルコールの量は、出発物質の影響を強く受けるので、特性Ｉを、プラート度当たり、少なくとも４.７プロミルのエタノールを生成することができる、ことにするのが好ましい。プラート度は、液体の密度の大きさを示すものであり、よって、糖類と他の発酵可能な栄養素のレベルを示すものである。
特に、当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、ジアセチルが、所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、プラート度当たり、少なくとも４.７プロミルのエタノールを生成することができる、ことにするのが好ましい。
好ましくは、当該ジアセチルのレベルが、多くとも３０ｐｐｂにある場合に、当該ジアセチルが、所定のものであると認められる。
特性ＶＩＩ
本願発明の酵母細胞は、特性ＶＩＩを有することができ、特性ＶＩＩは、高い真正発酵度(ＲＤＦ)である。
ＲＤＦは、出発液体に含まれている糖が、アルコールへと発酵された程度を測定するものである。よって、この出発液体が麦汁であれば、ＲＤＦは、麦汁に含まれている糖が、得られたビールの中でどの程度アルコールへと発酵されたかを測定する。
本願発明の酵母細胞が、特性ＶＩＩを有しており、特性ＶＩＩは、当該酵母細胞が、少なくとも６８％、少なくとも６９％など、例えば、少なくとも７０％のＲＤＦ、及び、より好ましくは少なくとも７１％のＲＤＦで糖を発酵できることである。
特に、当該酵母細胞が、少なくとも１つの親株のＲＤＦよりも大きなＲＤＦで糖を発酵することができることが好ましい。よって、本願発明の酵母細胞は、親株の１つのＲＤＦよりも少なくとも１％、例えば、少なくとも２％も大きいＲＤＦで糖を発酵することができる、ハイブリッド酵母細胞であることができる。特に、本願発明の酵母細胞は、親のＳ．ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ株と親のＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株との間のハイブリッドであることができる。かような実施形態において、当該酵母細胞は、親のＳ．ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ株のＲＤＦよりも少なくとも１だけ大きなＲＤＦで糖を発酵することができる。本願発明の酵母細胞を、親のＳ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ株と親のＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株との間のハイブリッドであることができる。かような実施形態において、当該酵母細胞は、親のＳ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ株のＲＤＦよりも少なくとも１％大きい、好ましくは、少なくとも２％大きいＲＤＦで糖を発酵することができる。
特性ＶＩＩＩ
本願発明の酵母細胞は、特性ＶＩＩＩを有することができ、特性ＶＩＩＩは、当該酵母細胞が、メリビオースを資化することができることである。よって、メリビオースを含有する培地においてインキュベーションすれば、当該酵母細胞は、当該メリビオースの少なくとも一部を除去することができる。
より好ましくは、当該特性ＶＩＩＩは、当該酵母細胞が、メリビオースを唯一の炭素源として資化することができることである。よって、当該酵母細胞は、メリビオースを唯一の炭素源として含有している培地で成長することができる。そのような培地は、好ましくは、メリビオース以外のいかなる単糖類及び/または二糖類も含んでおらず、及び、より好ましくは、このような培地は、メリビオース以外のいかなる炭水化物も含んでいない。
酵母細胞が、メリビオースを唯一の炭素源として資化できるかどうかを決定するための有用な１つの方法が、後出の実施例７において記載されている。
特性ＩＸ
本願発明の酵母細胞は、特性ＩＸを有することができ、特性ＩＸは、当該酵母細胞が、二糖類及び/または三糖類を資化することができることである。よって、二糖類及び/または三糖類を含有する培地においてインキュベーションすれば、当該酵母細胞は、当該二糖類及び/または三糖類の少なくとも一部を除去することができる。
より好ましくは、当該特性ＩＸは、当該酵母細胞が、二糖類及び/または三糖類を唯一の炭素源として資化することができることである。よって、当該酵母細胞は、二糖類及び/または三糖類を唯一の炭素源として含有している培地で成長することができる。そのような培地は、好ましくは、二糖類及び/または三糖類以外のいかなる糖類も含んでいない。
当該特性ＩＸは、当該酵母細胞が、任意の二糖及び三糖を唯一の炭素源として資化することができることであり得る。しかしながら、当該酵母が、１つ以上の特定の二糖類及び/三糖類だけを唯一の炭素源として資化することもできる。上記のように、当該酵母細胞が、イソマルトース(特性Ｉ)、パノース(特性ＩＩ)、及び/または、メリビオース(特性ＶＩＩＩ)を資化できることが好ましい。
よって、当該特性ＩＸは、好ましくは、当該酵母細胞が、イソマルトース、パノース、または、メリビオースではない、１つ以上の二糖及び/または三糖を資化することができる、ことである。よって、当該特性ＩＸは、当該酵母細胞が、イソマルトース、パノース、または、メリビオースに加えて、１つ以上の二糖類及び/または三糖類を資化することができることであり得る。よって、当該酵母細胞は、イソマルトース、パノース、または、メリビオースではない、１つ以上の二糖及び/または三糖を唯一の炭素源として資化することができ得、加えて、当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩまたはＶＩＩＩの１つ以上を有することができ得る。
特性ＩＸが、当該酵母細胞が、コージビオース、ニゲロース、スクロース、ツラノース、ロイクロース、及び、パラチノースからなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つなど、例えば、少なくとも３つ、少なくとも４つなど、例えば、少なくとも５つ、それらすべての二糖類を唯一の炭素源として資化できることであるのが好ましい。
特性ＩＸが、当該酵母細胞が、マルトトリオース及び/またはイソマルトトリオースを唯一の炭素源として資化できることであるのも好ましい。
よって、当該酵母細胞は、マルトトリオースを唯一の炭素源として資化することができ得る。よって、当該酵母細胞は、マルトトリオースを唯一の炭素源として含有している培地で成長することができ得る。そのような培地は、好ましくは、マルトトリオース以外のいかなる単糖類及び/または二糖類及び/または三糖類も含んでおらず、及び、より好ましくは、このような培地は、マルトトリオース以外のいかなる炭水化物も含んでいない。
特に、特性ＩＸは、当該酵母細胞が、１〜５ｇ/Ｌの範囲、例えば、１〜３ｇ/Ｌの範囲、２ｇ/Ｌなどのマルトトリオースを唯一の炭素源として含有している培地で成長することができる、としてもよい。そのような培地は、好ましくは、上記の濃度のマルトトリオース以外のいかなる炭水化物も含んでいない。
多くの酵母細胞、例えば、多くのラガー酵母細胞は、マルトトリオースを唯一の炭素源として資化することができず、特に、マルトトリオースが低レベルでのみ存在している場合には、多くのラガー酵母細胞は、マルトトリオースを唯一の炭素源として資化することができない。
当該酵母細胞は、マルツロースを唯一の炭素源として資化することができ得る。よって、当該酵母細胞は、マルツロースを唯一の炭素源として含有している培地で成長することができ得る。そのような培地は、好ましくは、マルツロース以外のいかなる単糖類及び/または二糖類も含んでおらず、及び、より好ましくは、このような培地は、マルツロース以外のいかなる炭水化物も含んでいない。
特に、特性ＩＸは、当該酵母細胞が、１〜５ｇ/Ｌの範囲、例えば、１〜３ｇ/Ｌの範囲、２ｇ/Ｌなどのマルツロースを唯一の炭素源として含有している培地で成長することができることであり得る。そのような培地は、好ましくは、上記の濃度のマルツロース以外のあらゆる炭水化物を含んでいない。
多くの酵母細胞、例えば、多くのラガー酵母細胞は、マルツロースを唯一の炭素源として資化することができない。
当該酵母細胞は、コージビオースを唯一の炭素源として資化することができ得る。よって、当該酵母細胞は、コージビオースを唯一の炭素源として含有している培地で成長することができ得る。そのような培地は、好ましくは、コージビオース以外のいかなる単糖類及び/または二糖類も含んでおらず、及び、より好ましくは、このような培地は、コージビオース以外のいかなる炭水化物も含んでいない。
特に、特性ＩＸは、当該酵母細胞が、１〜５ｇ/Ｌの範囲、例えば、１〜３ｇ/Ｌの範囲、２ｇ/Ｌなどのコージビオースを唯一の炭素源として含有している培地で成長することができるとしてもよい。そのような培地は、好ましくは、上記の濃度のコージビオース以外のいかなる炭水化物を含んでいない。
多くの酵母細胞、例えば、多くのラガー酵母細胞は、コージビオースを唯一の炭素源として資化することはできない。
よって、本願発明の酵母細胞は、表１３に記載の１つ以上の二糖類及び/または三糖類を資化することができ得る。
Figure 0006967968
酵母細胞が、二糖類及び/または三糖類を資化できるかどうかを決定するための有用な方法が、後出の実施例８及び１１において記載されている。酵母細胞が、二糖類及び/または三糖類を唯一の炭素源として資化できるかどうかを決定するための有用な方法が、後出の実施例５において記載されている。実施例５に記載の方法が、そこで試験をしたパノース/イソマルトースを二糖及び/または三糖に交換することで、あらゆる二糖及び/または三糖が、唯一の炭素源として資化可能かどうかを検証するために使用できることは、当業者であれば理解できるであろう。
特性ＩＸを有する酵母細胞は、好ましくは、遺伝子型ＩＶ、Ｖ及びＶＩの１つ以上も有しており、より好ましくは、後述するように、遺伝子型ＩＶ、Ｖ及びＶＩのすべても有する。
特性Ｘ
本願発明の酵母細胞は、当該特性Ｘを有することができ、特性Ｘは、当該酵母細胞が、懸濁液に僅かな数の細胞しか有していないことであり、特に、当該酵母細胞が、容器内の液体培地でインキュベーションした後に、懸濁液に僅かな数の細胞しか有していないことである。当該インキュベーションとは、好ましくは、１〜１４日間、２〜１０日間、例えば、４〜８日間、例えば、４〜６日間のインキュベーションである。
特に、特性Ｘを、当該酵母細胞の成長が許容される条件下で４日間のインキュベーションを行った後に、多くとも１,０００万個の細胞/ｍｌなど、多くとも１,２００万個の細胞/ｍｌが懸濁している、とすることが好ましい。よって、特性Ｘは、当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、４日間、インキュベーションされる場合に、多くとも１,０００万個の細胞/ｍｌなど、多くとも１,２００万個の細胞/ｍｌが懸濁していることであることができる。特性Ｘを、当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、５日間、インキュベーションされる場合に、多くとも１,０００万個の細胞/ｍｌなど、多くとも１,２００万個の細胞/ｍｌが懸濁している、とすることもできる。特性Ｘを、当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、６日間、インキュベーションされる場合に、多くとも１,０００万個の細胞/ｍｌなど、多くとも１,２００万個の細胞/ｍｌが懸濁している、とすることもできる。当該インキュベーションは、例えば、１０〜２０℃の範囲、１０〜１８℃の範囲など、例えば、１６℃または１８℃の温度で行うことができる。酵母細胞の出発濃度を、例えば、１,０００万個〜２,０００万個の細胞/ｍｌの範囲、例えば、１,４００万個〜１,５００万個の細胞/ｍｌであることができる。
特性Ｘを、当該酵母細胞が、１ｍｌの懸濁液につきある数の細胞を含んでおり、それは、当該細胞の成長が許容される条件下で、５日間など、４〜６日間のインキュベーションを行った後の出発細胞数/ｍｌの多くとも８０％、多くとも７０％など、例えば、多くとも６０％、多くとも５０％など、例えば、多くとも４０％である、とすることも好ましくあり得る。
例えば、特性Ｘを、当該酵母細胞が、１ｍｌの懸濁液につきある数の細胞を含んでおり、それは、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物において、５日間など、４〜６日間のインキュベーションを行った後の出発細胞数/ｍｌの多くとも８０％、多くとも７０％など、例えば、多くとも６０％、多くとも５０％など、例えば、多くとも４０％である、とすることもできる。特性Ｘを、当該酵母細胞が、１ｍｌの懸濁液につき多数の細胞を含んでおり、それは、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物において、６日間のインキュベーションを行った後の出発細胞数/ｍｌの多くとも８０％、多くとも７０％など、例えば、多くとも６０％、多くとも５０％など、例えば、多くとも４０％である、とすることもできる。当該インキュベーションは、例えば、１５〜２０℃の範囲、１０〜１８℃の範囲など、例えば、１６℃または１８℃の温度で行うことができる。
１つの実施形態において、特性Ｘは、当該酵母細胞の成長が許容される条件下で７日間のインキュベーションを行った後に、多くとも２,５００万個の細胞/ｍｌ、好ましくは、多くとも２,０００万個の細胞/ｍｌが懸濁していることである。よって、特性Ｘは、当該酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、そして、１８℃で、７日間のインキュベーションを行った場合に、多くとも２,５００万個の細胞/ｍｌ、好ましくは、多くとも２,０００万個の細胞/ｍｌが懸濁している、とすることができる。
懸濁液での細胞を決定するための有用な方法が、後出の実施例２において記載されている。
特性ＸＩ
本願発明の酵母細胞は、特性ＸＩを有することができ、特性ＸＩは、当該酵母細胞が、長くとも４日間の一次発酵の時間で、麦汁を発酵することができることである。
本願発明の好適な実施形態において、当該特性ＸＩは、当該酵母細胞が、長くとも３.５日の間の一次発酵で、麦汁を発酵することができることである。
本願発明の別の実施形態において、当該特性ＸＩは、当該酵母細胞が、長くとも３日間一次発酵で、麦汁を発酵することができることである。
当該特性ＸＩは、当該酵母細胞が、少なくとも１つの親株による同じ条件下での一次発酵の時間よりも少なくとも１日短い一次発酵の時間で、麦汁を発酵することができることとすることもできる。よって、本願発明の酵母細胞は、少なくとも１つの親株による同じ条件下での一次発酵の時間よりも少なくとも１日短い一次発酵の時間で、麦汁を発酵することができるハイブリッド酵母細胞であり得る。特に、本願発明の酵母細胞は、親のＳ．ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ株と親のＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株との間のハイブリッドとすることができる。かような実施形態において、当該酵母細胞は、少なくとも１つの親のＳ．ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ株による同じ条件下での一次発酵の時間よりも少なくとも１日短い一次発酵の時間で、麦汁を発酵することができ得る。
当該麦汁は、任意の標準的な麦汁でもよいが、好ましくは、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁である。よって、当該麦汁は、特に、１０度のプラート〜２０度のプラートの範囲の糖含量を有する麦汁であり得る。特に、当該麦汁は、１４〜１６度のプラート糖含量を有する麦汁であり得る。
「一次発酵の時間」という用語は、酵母で麦汁をピッチングしてから、一次発酵が完了するまでの時間のことである。外観エキス濃度が安定した時、及び/または、活発な二酸化炭素(ＣＯ２)の放出が認められなくなった時に、一次発酵が完了したものとみなされる。二つの測定の間で、外観エキス濃度が、±１５％を超えて、好ましくは、±１０％を超えて変化を示さない場合に、外観エキス濃度が安定しているとみなされる。
酵母は、任意の有用なレベル、例えば、１,０００万個〜２,０００万個の生細胞/ｍｌ、１,３００万個〜１,６００万個の生細胞/ｍｌなど、例えば、１,４００万個〜１,５００万個の生細胞/ｍｌでピッチングすることができる。
一次発酵の時間は、当該酵母細胞が成長できる温度で決定することができる。よって、一次発酵の時期は、１０〜２５℃の範囲の温度、好ましくは、１２〜２０℃の範囲の温度、例えば、１４〜１８℃の範囲で決定することができる。
一次発酵の時間を決定するための有用な１つの方法が、後出の実施例３において記載されている。
遺伝的背景
本願発明の酵母細胞は、上記の特性Ｉ〜ＸＩの１つ以上を有することができる。
当該特性に加えて、本願発明の酵母細胞は、後述する遺伝子型Ｉ〜ＶＩの１つ以上を有することができる。当該遺伝子型は、先に概説した当該特性と関連付けてもよい。
１つの実施形態において、本願発明の酵母細胞は、少なくとも後述の遺伝子型ＩＶを有することができる。遺伝子型ＩＶを有することに加えて、当該酵母は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｖ、ＶＩの１つ以上と、当該特性Ｉ〜ＸＩの１つ以上とを有することもできる。
よって、本願発明の１つの実施形態において、当該酵母細胞は、少なくとも下記の遺伝子型ＩＶと下記の遺伝子型Ｖとを有する。遺伝子型ＩＶ及びＶを有することに加えて、当該酵母は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＶＩの１つ以上と、当該特性Ｉ〜ＸＩの１つ以上とを有することもできる。
よって、本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ及びＩＩを有することができる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ及びＩＩＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩ及びＩＩＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩ、ＩＩＩ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩ、ＩＩＩ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩＩ及びＩＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩＩ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩＩ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩＩ、ＩＶ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩＩ、ＩＶ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＶ及びＶを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＶ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＶ、Ｖ及びＶＩを有することもできる。本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｖ及びＶＩを有することもできる。
本願発明の好適な実施形態において、当該酵母細胞は、遺伝子型Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩのすべてを有する。
本願発明の１つの実施形態において、本願発明の酵母細胞は、ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＬＯＱＪ００００００００で入手可能なゲノムＤＮＡ配列、特に、ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＬＯＱＪ００００００００、バージョンＬＯＱＪ０１００００００で入手可能なＤＮＡ配列を含む酵母細胞であることができる。この配列は、ホールゲノムショットガンプロジェクトとして提供されており、この配列に関する詳細は、後出の実施例に提供されている。
本願発明の別つの実施形態において、本願発明の酵母細胞は、ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＬＯＱＪ００００００００で入手可能なゲノムＤＮＡ配列、特に、ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＬＯＱＪ００００００００、バージョンＬＯＱＪ０１００００００で入手可能なＤＮＡ配列を含む酵母細胞であることができる。この配列は、ホールゲノムショットガンプロジェクトとして提供されており、この配列に関する詳細は、後出の実施例に提供されている。
本明細書で示したゲノム配列に基づいて、合成酵母染色体を調製することができる。このことは、例えば、２０１４年のＮａｔｕｒｅでのＣａｌｌａｗａｙ(Ｎａｔｕｒｅ ＤＯＩ: ｄｏｉ:１０.１０３８/ｎａｔｕｒｅ.２０１４.１４９４１)、またはＡｎｎａｌｕｒｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１４年４月４日: Ｖｏｌ.３４４ ｎｏ.６１７９ ｐｐ.５５-５８ (ＤＯＩ: １０.１１２６/ｓｃｉｅｎｃｅ.１２４９２５２)で記載されたようにして、実施することができる。また、「Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｙｅａｓｔ ２.０」は、合成酵母染色体を調製するための手法に関する情報を提供している(例えば、http://syntheticyeast.org/を参照されたい)。当該合成酵母染色体を含む酵母細胞は、従来の組換え技術を用いて調製することができる。
遺伝子型Ｉ
本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｉを有することができ、当該遺伝子型Ｉは、ＤＡＬ５をコードする遺伝子の存在である。特に、本願発明の酵母細胞が、配列番号６のＤＡＬ５、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体ををコードする遺伝子を含むことが好ましい。好ましくは、当該遺伝子型Ｉは、配列番号６のＤＡＬ５をコードする遺伝子の存在のことである。
本願発明の１つの実施形態において, 当該遺伝子型Ｉは、ＤＡＬ５をコードする少なくとも１つの対立遺伝子の存在であり、ＤＡＬ５をコードする当該対立遺伝子は、配列番号６のＤＡＬ５、配列番号３９のＤＡＬ５、配列番号４０のＤＡＬ５、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記の配列と共有する、それらの機能的相同体からなる群から選択されるＤＡＬ５をコードする。
１つの実施形態において、当該遺伝子型Ｉは、以下の２つの対立遺伝子の存在であることができる：
１) 配列番号３９のＤＡＬ５、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号４０のＤＡＬ５、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子。
ＤＡＬ５は、非Ｎ末端則によってジペプチド類を輸送するジペプチド輸送体である。当該酵母細胞は、例えば、本願発明の実施形態において、遺伝子型Ｉを有することができ、そこで当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ及び/またはＶＩを有し、特に、当該酵母細胞は、特性ＩＩＩを有している。
遺伝子型ＩＩ
本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩを有することができ、当該遺伝子型ＩＩは、ＰＴＲ２をコードする少なくとも３つの遺伝子の存在である。特に、本願発明の酵母細胞は、ＰＴＲ２をコードする少なくとも３つの遺伝子を含むことが好ましく、ＰＲＴ２は、配列番号７のＰＴＲ２、配列番号８のＰＴＲ２、配列番号９のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらの各々の機能的相同体からなる群から選択される。
よって、当該遺伝子型ＩＩＩは、当該酵母細胞が、以下からなる群から選択される３つの遺伝子を含むことであり得る：
１) 配列番号７のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を各当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子、
２) 配列番号８のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を各当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号９のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を各当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子。
よって、当該遺伝子型ＩＩは、当該酵母細胞が、以下の群から選択される３つの遺伝子を含むことであり得る：
１) 配列番号７のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を各当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子、
２) 配列番号８のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を各当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号９のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を各当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子。
よって、当該遺伝子型ＩＩＩは、当該酵母細胞が、
１) 配列番号７のＰＲＴ２をコードする遺伝子、
２) 配列番号８のＰＲＴ２をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号９のＰＲＴ２をコードする遺伝子、
からなる群から選択される３つの遺伝子を含むことであり得る。
１つの実施形態において、遺伝子型ＩＩは、当該酵母細胞が、ＰＴＲ２をコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含むことであることができる。例えば、遺伝子型ＩＩは、当該酵母細胞が、配列番号７のＰＴＲ２、配列番号８のＰＴＲ２、配列番号９のＰＲＴ２、配列番号３７のＰＲＴ２、配列番号３８のＰＲＴ２、配列番号４３のＰＲＴ２、配列番号４４のＰＲＴ２、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、上記の各々の機能的相同体、からなる群から選択されるＰＴＲ２を各々がコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含むことであることができる。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＩＩは、当該酵母細胞が、以下の２つの対立遺伝子を含むであることができる：
１) 配列番号３７のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子、
２) 配列番号３８のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＩＩは、当該酵母細胞が、以下の２つの対立遺伝子を含むことであることができる：
１) 配列番号４３のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子、
２) 配列番号４４のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子。
ＰＲＴ２は、ジペプチド類及びトリペプチド類ならびに他のペプチド類を、当該酵母細胞へ届けるための輸送体である。
当該酵母細胞は、例えば、本願発明の実施形態において遺伝子型ＩＩを有することができ、当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ、ＩＶ及び/またはＶを有しており、当該酵母細胞が、特性ＩＩＩ及び/またはＩＶを有している実施形態においてなどである。
遺伝子型ＩＩＩ
本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＩＩを有することができ、当該遺伝子型ＩＩＩは、ＵＢＲ１をコードする遺伝子の存在である。特に、本願発明の酵母細胞が、配列番号１０を含むＵＢＲ１、または、配列番号１１のＵＢＲ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記の配列と共有する、それらの機能的相同体をコードする遺伝子を含む、ことが好ましい。好ましくは、当該遺伝子型ＩＩＩは、配列番号１０を含むＵＢＲ１、または、配列番号１１のＵＢＲ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体をコードする少なくとも２つの遺伝子の存在である。
例えば、当該遺伝子型ＩＩＩは、以下の２つの遺伝子の存在であることができる：
１) 配列番号１０、または、配列番号４５、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体を含むＵＢＲ１をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、それらの機能的相同体のＵＢＲ１をコードする遺伝子。
特に、当該遺伝子型ＩＩＩは、以下の２つの遺伝子の存在であることができる：
１) 配列番号１０を含むＵＢＲ１をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１１のＵＢＲ１をコードする遺伝子。
当該酵母細胞は、例えば、本願発明の実施形態において遺伝子型ＩＩＩを有することができ、当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ及び/またはＩＶを有している。
本願発明の１つの実施形態において、遺伝子型ＩＩＩは、当該酵母細胞が、配列番号１０を含むＵＢＲ１、配列番号１１のＵＢＲ１、配列番号４１を含むＵＢＲ１、配列番号４２のＵＢＲ１、配列番号４５を含むＵＢＲ１、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、それらの機能的相同体からなる群から選択されるＵＢＲ１をコードする少なくとも１つの対立遺伝子を含むことである。
本願発明の１つの実施形態において、遺伝子型ＩＩＩは、当該酵母細胞が、配列番号１０を含むＵＢＲ１、配列番号１１のＵＢＲ１、配列番号４１を含むＵＢＲ１、配列番号４２のＵＢＲ１、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、それらの機能的相同体からなる群から選択されるＵＢＲ１を各々がコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含むことである。
例えば、当該遺伝子型ＩＩＩは、以下の２つの遺伝子の存在であることができる：
１) 配列番号４１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、それらの機能的相同体を含むＵＢＲ１をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号４２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、それらの機能的相同体のＵＢＲ１をコードする遺伝子。
当該酵母細胞は、例えば、本願発明の実施形態において遺伝子型ＩＩＩを有することができ、当該酵母細胞は、特性ＩＩＩ及び/またはＩＶを有しており、当該酵母細胞が、特性ＩＩＩ、ＩＶ及び/またはＶを有している実施形態においてなどである。
遺伝子型ＩＶ
本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＩＶを有することができ、当該遺伝子型ＩＶは、ＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも３つの対立遺伝子、好ましくは、少なくとも４つの対立遺伝子の存在である。特に、本願発明の酵母細胞は、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも４つの対立遺伝子を含む、ことが好ましい。
ＩＭＡ１ｐは、異なる対立遺伝子によって、例えば、ＩＭＡ１の短い対立遺伝子によって、あるいは、ＩＭＡ１の長い対立遺伝子によってコードされることができる。１つの酵母細胞が、ＩＭＡ１の長い対立遺伝子と短い対立遺伝子の双方を含むことができる。 １つの実施形態において、本願発明の酵母細胞は、ＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも３つの長い対立遺伝子を含むことが、好ましくあり得る。
例えば、当該遺伝子型ＩＶは、ＩＭＡ１の少なくとも２つの短い対立遺伝子の存在であることができる。ＩＭＡ１の２つの当該短い対立遺伝子は、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子であることができる。
好ましい実施形態において、当該遺伝子型ＩＶは、ＩＭＡ１の少なくとも３つの短い対立遺伝子の存在であることができる。ＩＭＡ１の３つの当該短い対立遺伝子は、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２のＩＭＡ１ｐ、配列番号３のＩＭＡ１ｐ、配列番号４のＩＭＡ１ｐ、配列番号５のＩＭＡ１ｐ、配列番号３３のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする対立遺伝子であることができる。
例えば、当該遺伝子型ＩＶは、ＩＭＡ１の少なくとも２つの長い対立遺伝子の存在であることができる。ＩＭＡ１の２つの当該長い対立遺伝子は、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子であることができる。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＩＶは、ＩＭＡ１の少なくとも３つの長い対立遺伝子の存在であることができる。ＩＭＡ１の３つの当該長い対立遺伝子は、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子であることができる。
好ましい実施形態において、当該遺伝子型ＩＶは、ＩＭＡＩの少なくとも３つの短い対立遺伝子とＩＭＡ１の少なくとも２つの長い対立遺伝子の存在であることができ、ここで、
ａ) ＩＭＡ１の３つの当該短い対立遺伝子は、個別に、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２のＩＭＡ１ｐ、配列番号３のＩＭＡ１ｐ、配列番号４のＩＭＡ１ｐ、配列番号５のＩＭＡ１ｐ、配列番号３３のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子であり、及び、
ｂ) ＩＭＡ１の２つの当該長い対立遺伝子は、個別に、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子である。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＩＶは、当該酵母細胞が、ＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも５つの対立遺伝子を含み、当該対立遺伝子が、個別に、配列番号１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２のＩＭＡ１ｐ、配列番号３のＩＭＡ１ｐ、配列番号４のＩＭＡ１ｐ、配列番号５のＩＭＡ１ｐ、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、配列番号３３のＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子からなる群から選択されることであることができる。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＩＶは、当該酵母細胞が、以下の４つの対立遺伝子を含むことであることができる：
１) 配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
４) 配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＩＶは、以下の４つの対立遺伝子の存在であることができる：
１) 配列番号１２のＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１３のＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子、及び
３) 配列番号１４のＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子、及び
４) 配列番号１５のＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＩＶは、以下の３つの対立遺伝子の存在であることができる：
１) 配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体の双方をコードする２つの遺伝子、及び
２) 配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＩＶは、以下の３つの対立遺伝子の存在であることができる：
１) 配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＩＶは、以下の５つの対立遺伝子の存在であることができる：
３) 配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
４) 配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
５) 配列番号１のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
６) 配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
７) 配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＩＶは、以下の６つの対立遺伝子の存在であることができる：
１) 配列番号２のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号３のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする少なくとも２つの遺伝子、及び
３) 配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする少なくとも２つの遺伝子、及び
４) 配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＩＶは、以下の６つの対立遺伝子の存在であることができる：
１) 配列番号５のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号３３のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする少なくとも２つの遺伝子、及び
３) 配列番号４のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする少なくとも２つの遺伝子、及び
４) 配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
５) 配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする少なくとも２つの遺伝子、及び
６) 配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
当該酵母細胞は、例えば、本願発明の実施形態において遺伝子型ＩＶを有することができ、当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＸ及び/またはＸＩを有する。
遺伝子型Ｖ
本願発明の酵母細胞は、遺伝子型Ｖを有することができ、当該遺伝子型Ｖは、ＩＭＡ５ｐをコードする遺伝子の存在である。当該遺伝子型Ｖは、ＩＭＡ５ｐをコードする少なくとも２つの対立遺伝子の存在であることもできる。特に、本願発明の酵母細胞が、配列番号１６のＩＭＡ５ｐ、配列番号１７のＩＭＡ５ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ５ｐをコードする少なくとも１つの対立遺伝子を含むことが好ましい。好ましくは、当該遺伝子型Ｖは、配列番号１６のＩＭＡ５ｐ、配列番号１７のＩＭＡ５ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ５ｐをコードする少なくとも２つの遺伝子の存在であることもできる。
１つの実施形態において、当該酵母細胞は、配列番号１６のＩＭＡ５ｐ、配列番号１７のＩＭＡ５ｐ、配列番号３４のＩＭＡ５ｐ、配列番号３５のＩＭＡ５ｐ、配列番号３６のＩＭＡ５ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体をコードする対立遺伝子からなる群から個別に選択される、ＩＭＡ５ｐをコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含む。
特に、当該遺伝子型Ｖは、当該酵母細胞が、以下の２つの対立遺伝子を含むことであることができる：
１) 配列番号１６のＩＭＡ５ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１７のＩＭＡ５ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
１つの実施形態において、当該遺伝子型Ｖは、当該酵母細胞が、以下の３つの対立遺伝子
を含むことであることができる：
１) 配列番号１６のＩＭＡ５ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１７のＩＭＡ５ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号３４のＩＭＡ５ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
１つの実施形態において、当該遺伝子型Ｖは、当該酵母細胞が、以下の２つの対立遺伝子を含むことであることができる：
１) 配列番号３５のＩＭＡ５ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号３６のＩＭＡ５ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
特に、当該遺伝子型Ｖを、以下の２つの遺伝子の存在であることができる：
１) 配列番号１６のＩＭＡ５ｐをコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１７のＩＭＡ５ｐをコードする遺伝子。
当該酵母細胞は、例えば、本願発明の実施形態において遺伝子型Ｖを有することができ、当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＸ及び/またはＸＩを有する。
遺伝子型ＶＩ
本願発明の酵母細胞は、遺伝子型ＶＩを有することができ、当該遺伝子型ＶＩは、ＡＧＴ１をコードする少なくとも３つの対立遺伝子の存在である。特に、本願発明の酵母細胞が、配列番号１８のＡＧＴ１、配列番号１９のＡＧＴ１、配列番号２０のＡＧＴ１、配列番号２６のＡＧＴ１、配列番号２７のＡＧＴ１、配列番号２８のＡＧＴ１、配列番号２９のＡＧＴ１、配列番号３０のＡＧＴ１、配列番号３１のＡＧＴ１、配列番号３２のＡＧＴ１、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＡＧＴ１をコードする少なくとも３つの対立遺伝子を含むことが好ましい。
１つの実施形態において、当該酵母細胞は、当該遺伝子型ＶＩを有することができ、ここで当該遺伝子型ＶＩは、全長ＡＧＴ１をコードする少なくとも２つの対立遺伝子の存在である。特に、本願発明の酵母細胞は、配列番号１８のＡＧＴ１、配列番号１９のＡＧＴ１、配列番号２０のＡＧＴ１、配列番号２７のＡＧＴ１、配列番号２８のＡＧＴ１、配列番号３０のＡＧＴ１、配列番号３１のＡＧＴ１、配列番号３２のＡＧＴ１、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＡＧＴ１をコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含むことが好ましい。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＶＩは、当該酵母細胞が、以下の３つの対立遺伝子を含むことであることができる：
１) 配列番号１８のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１９のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号２０のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
特に、当該遺伝子型ＶＩは、以下の３つの遺伝子の存在であることができる：
１) 配列番号１８のＡＧＴ１をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１９のＡＧＴ１をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号２０のＡＧＴ１をコードする遺伝子。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＶＩは、当該酵母細胞が、以下の２つの遺伝子を含むことであることができる：
１) 配列番号２７のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号２８のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
１つの実施形態において、当該遺伝子型ＶＩは、当該酵母細胞が、ＡＧＴ１をコードする以下の３つの対立遺伝子を含むことであることができる：
１) 配列番号３０のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号３１のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号３２のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を当該配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
当該酵母細胞は、例えば、本願発明の実施形態において遺伝子型ＶＩを有することができ、当該酵母細胞は、特性Ｉ、ＩＩ、ＩＸ及び/またはＸＩを有する。
機能的相同体
本明細書において使用する「機能的相同体」という用語は、参照ポリペプチドと少なくとも１つの生物学的機能を共有するポリペプチド類のことを指す。一般的に、当該機能的相同体は、参照ポリペプチドと有意の配列同一性も共有する。好ましくは、参照ポリペプチドの機能的相同体は、参照タンパク質と同じ生物学的機能を有し、かつ、参照ポリペプチドと高レベルでの配列同一性を共有するポリペプチドである。
高レベルでの配列同一性は、第１の配列が第２の配列から誘導される可能性の高さを示す。アミノ酸配列の同一性は、整列した２つの配列の間において同じアミノ酸配列を必要とする。よって、参照配列と８０％アミノ酸同一性を共有する候補配列は、アライメントに続いて、当該候補配列でのアミノ酸の８０％が、本願発明による参照配列同一性における対応するアミノ酸と同一であることが、ＣｌｕｓｔａｌＷコンピューターアライメントプログラム(Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ., Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｊ., Ｇｉｂｓｏｎ Ｔ., Ｔｈｏｍｐｓｏｎ Ｊ.Ｄ., Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ.Ｇ., Ｇｉｂｓｏｎ Ｔ.Ｊ., １９９４. ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗ: ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ, ｐｏｓｉｔｉｏｎ-ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｉｅｓ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ ｍａｔｒｉｘ ｃｈｏｉｃｅ. Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ. ２２:４６７３-４６８０)や、そこで示唆されたデフォルトパラメーターなどであるが限定されないコンピューター分析の助けを借りて決定される。このＣｌｕｓｔａｌＷソフトウェアは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＣｌｕｓｔａｌＷ ＷＷＷサービス ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｃｌｕｓｔａｌｗ から入手できる。このプログラムを、そのデフォルト設定と共に用いることで、クエリーの成熟(生物学的活性)箇所及び参照ポリペプチドが整列される。完全に保存されている残基の数が計数され、そして、当該参照ポリペプチドの長さで割られる。よって、配列同一性は、当該参照ポリペプチドの全長にわたって決定される。
保存されたアミノ酸は、当該機能的相同体に保持されていることが好ましくあり得る。同様のポリペプチドのアライメントを用意し、及び、当該ポリペプチド類の間で保存されているアミノ酸残基を特定する当該アライメントを使用することによって、保存されたアミノ酸を特定することができる。有用なアライメントの実施例は、本願の図５〜１２に示されている。
飲料を製造するための方法
飲料を製造するための方法を提供することが本願発明の一態様であり、当該方法は、
ＶＩＩＩ．出発液体を準備すること、
ＩＸ．本願発明の酵母細胞、例えば、上記の特性Ｉ〜Ｘの１つ以上を有する酵母細胞を準備すること、
Ｘ．当該出発液体を、当該酵母細胞で発酵し、それにより、飲料を製造すること、
のステップを含む。
特に、当該出発液体は、麦汁などの穀類エキスであることができる。当該出発液体は、例えば、本節で説明するように、糖化、及び任意に麦汁ろ過を行うことによって、麦芽のエキスを調製することによって調製することができる。
麦芽とは、麦芽処理された大麦粒のことである。「麦芽製造」という用語は、制御された環境条件下で進行するプロセスにおいて、浸漬した大麦粒が発芽し、乾燥ステップが続くことと理解される。当該乾燥ステップは、好ましくは、発芽した穀粒を、昇温下で、乾燥釜で乾燥する。
上記の麦芽製造の一連の流れは、穀粒改質をもたらす無数の酵素の合成、主に死滅した内胚乳の細胞壁を分解して穀粒の栄養分を固定するプロセス、及び、他の分解酵素を活性化する上で重要である。後続の乾燥プロセスにおいて、化学的褐変反応によって、風味と色調が生成される。
浸漬は、当業者に周知の任意の従来の方法で実施することができる。１つの非限定例では、１０〜２５℃の範囲の温度で、乾燥及び湿潤の条件を交互に与える浸漬を含む。発芽は、当業者に周知の任意の従来の方法で実施することができる。１つの非限定例では、１０〜２５℃の範囲の温度で、任意に、１〜４時間の範囲で温度を変化させる発芽を含む。
乾燥釜を用いた乾燥は、少なくとも７５℃、例えば、８０〜９０℃の範囲、８０〜８５℃の範囲などの従来の温度で実施することができる。よって、麦芽は、例えば、Ｂｒｉｇｇｓ ｅｔ ａｌ.(１９８１)及びＨｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ.(１９８２)に記載された任意の方法で製造することができる。しかしながら、麦芽を製造するためのいかなる他の適切な方法も、本願発明で使用することができ、限定されないが、麦芽を焙煎する方法を含む、特別な麦芽を製造するための方法などがある。
麦芽を、例えば、粉砕してさらに加工することができる。好ましくは、粉砕は、乾燥状態で行われ、すなわち、当該麦芽は乾燥状態である間に粉砕される。
麦芽、例えば、粉砕麦芽は、糖化して、当該麦芽の水性エキスを調製することができる。飲料を調製するための当該出発液体を、麦芽の水性エキス、例えば、糖化によって調製された麦芽の水性エキスであることができる。
よって、本願発明の飲料を調製するための方法は、麦芽及び任意で別の副原料を糖化して麦汁を製造するステップを含むことができる。当該糖化ステップは、任意に、麦汁ろ過を含むことができ、したがって、当該糖化ステップは、麦汁ろ過ステップを含む糖化ステップ、または、麦汁ろ過ステップを除外した糖化ステップであることができる。
一般的に、麦汁の製造は、麦芽及び/または大麦の粉砕から開始される。別の副原料が加えられる場合には、これらは、それらの性質に応じて粉砕することもできる。副原料が穀類である場合には、例えば、粉砕をすることができるが、シロップ、糖類などの場合には、一般的には、粉砕は行われない。粉砕をすることで、糖化段階での穀粒と水との接触が良好になる。麦芽製造の間に始まった基質の酵素分解を、糖化をおこなっている間に、継続することができる。
一般的に、麦汁は、粉砕麦芽と水とを混合して、かつ、インキュベーションをすることによって、すなわち、糖化プロセスにおいて、製造される。糖化を行っている間は、当該麦芽/液体組成物に、炭水化物が豊富な別の副原料組成物、例えば、粉砕した副原料の大麦、トウモロコシ、または、コメを補充することができる。麦芽処理されていない穀類副原料は、通常は、活性酵素をほとんど含んでおらず、あるいは、全く含んでいないので、麦芽または外因性酵素を補充して、多糖解重合などに必須の酵素を提供することが重要となる。
糖化の間、粉砕麦芽及び/または粉砕大麦、及び、任意に、さらなる副原料が、液体画分、水などと共に、インキュベーションされる。インキュベーション温度は、一般的には、一定温度を保つ(定温糖化)か、あるいは、徐々に昇温する、例えば、逐次的方法で昇温するかのいずれかである。いずれの事例でも、麦芽/大麦/副原料に含まれる可溶性物質は、当該液体画分へと遊離される。それに続くろ過は、麦汁と残留固形粒子との分離をもたらし、後者は、「ビール粕」とも呼ばれている。このようにして得られた麦汁は、「第１の麦汁」とも呼ばれることがある。さらなる液体、水などを、麦汁ろ過とも称されているプロセスの間に、当該ビール粕に対して加えることができる。麦汁ろ過を終えると、「第２の麦汁」を取得することができる。この手順を繰り返すことによって、さらなる麦汁を調製することができる。麦汁の調製のための適切な手順の例は、Ｂｒｉｇｇｓ ｅｔ ａｌ.(前出)及びＨｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ.(前出)に記載されているが、これらに限定されない。
上記のように、当該麦汁組成物は、麦芽処理されていない大麦粒を糖化することによって、調製することができる。麦芽処理されていない大麦粒は、細胞壁を分解することができる酵素、または、デンプンを糖類へと解重合することができる酵素など、麦汁の生産に有用な酵素を含んでいないか、あるいは、ごくわずかな量しか含んでいない。よって、糖化のために麦芽処理されていない大麦が使用される本願発明の実施形態において、１つ以上の適切な外部醸造用酵素が、糖化液に加えられることが好ましい。適切な酵素として、リパーゼ、デンプン分解酵素(例えば、アミラーゼ)、グルカナーゼ[好ましくは、(１-４)-及び/もしくは(１-３,１-４)-β-グルカナーゼ]、ならびに/または、キシラナーゼ(アラビノキシラナーゼなど)、ならびに/もしくは、プロテアーゼ、または、上記の酵素の１つ以上、例えば、Ｃｅｒｅｆｌｏ、Ｕｌｔｒａｆｌｏ、または、Ｏｎｄｅａ Ｐｒｏ(Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ)を含む酵素混合物、などがある。
この麦汁組成物は、麦芽処理された大麦粒と麦芽処理されていない大麦粒の混合物を用いて調製することもでき、その場合、調製を行っている間に、１つ以上の適切な酵素を加えることができる。より具体的には、本願発明の大麦は、麦芽と一緒に、外部醸造用酵素と共に、または外部醸造用酵素無しで、糖化のために任意の組み合わせで使用することができ、大麦:麦芽の比率として、約１００：０、または、約７５：２５、または、約５０：５０、または、約２５：７５などがあるが、これらに限定されない。
本願発明の他の実施形態において、外部酵素、特に、外部プロテアーゼ、及び/または、外部セルラーゼ、及び/または、外部α-アミラーゼ、及び/または、外部β-アミラーゼ、及び/または、外部マルトース生成α-アミラーゼを、糖化の前またはその間に加えないことが好ましい。
糖化を終えて取得した麦汁は、「甘味麦汁」と称されることもある。従来の方法では、この甘味麦汁を、ホップと共に、あるいは、ホップを使わずに、煮沸が行われており、煮沸を終えたものは、煮沸麦汁と称されることもある。
本明細書において使用する「約」という用語は、±１０％、好ましくは、±５％、もっとより好ましくは、±２％のことを意味する。
麦汁は、本願発明の酵母を用いて発酵に供する前に、加熱または煮沸することができる。第１、第２、及び、さらなる麦汁を組み合わせることができ、そうした後に、加熱または煮沸に供することができる。この麦汁は、任意の適切な時間、例えば、６０分〜１２０分の範囲内の時間をかけて加熱または煮沸することができる。
よって、当該出発液体は、例えば、上記のように調製した麦汁であることができる。この飲料は、当該出発液体の発酵、例えば、麦汁の発酵によって調製することができる。
当該飲料は、好ましい一実施形態において、麦芽飲料、さらにいっそう好ましくは、発酵飲料、発酵した麦芽飲料など、好ましくは、アルコール飲料、ビールなどであることができる。
当該飲料は、ノンアルコール飲料、ノンアルコールビールなど、あるいは、他の種類のノンアルコール飲料、ノンアルコール麦芽飲料など、マルチナ(ｍａｌｔｉｎａ)などであることができる。
好ましい一実施形態において、当該飲料は、ビールであり、例えば、当該ビールは、ラガービールまたはエールビールであることができる。よって、当該ビールは、例えば、アルトビール、アンバーエール、バーレーワイン、ベルリーナーバイセ、ビエールドギャルド、ビター、ブロンドエール、ボック、ブラウンエール、カリフォルニアコモン、クリームエール、ドルトムンダーエクスポート、ドッペルボック、ダンケル、デュンケルバイツェン、アイスボック、フルートアイアムビック、ゴールデンエール、ゴーゼ、グーズ、ヘーフェバイツェン、ヘレス、インディアペールエール、ケルシュ、ランビック、ライトエール、メイボック、モルトリカー、マイルド、メルツェンビア、オールドエール、オードブライン、ペールエール、ピルスナー、ポーター、レッドエール、ロッゲンビア、セゾン、スコッチエール、スチームビール、スタウト、シュバルツビア、ラガー、ビィットビア、バイスビア、及びバイツェンボックからなる群から選択することができる。
よって、本願発明は、
(ｉ) 麦芽組成物を提供すること、
(ｉｉ) 当該麦芽組成物を飲料に加工すること、
のステップを含む、飲料を製造するための方法も提供する。
一般的には、ビールなどのアルコール飲料は、麦芽処理された、及び/または麦芽処理されていない大麦粒から製造され得る。麦芽は、ホップと酵母に加えて、ビールの風味と色彩に寄与する。さらに、麦芽は、発酵可能な糖及び酵素の供給源として機能する。麦芽製造と醸造のための非限定の適切な方法の例は、Ｂｒｉｇｇｓｅｔ ａｌ.(１９８１)及びＨｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ.(１９８２)の文献に見出される。大麦、麦芽、及びビール製品の分析のための多数の定期的に更新された方法を使用することができ、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｒｅａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ(１９９５)、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｂｒｅｗｉｎｇ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ (１９９２)、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｒｅｗｅｒｙ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ(１９９８)、及びＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｒｅｗｉｎｇ(１９９７)などがあるが、これらに限定されない。地域の消費者の好みに関する多大な変更を含めて所定の醸造を行うために、多くの特別な手順が利用されることが認識される。ビールを製造するためのそのような任意の方法を、本願発明で使用することができる。
麦汁からビールを製造するための第１のステップには、好ましくは、本明細書において前述のように、当該麦汁を加熱することが含まれ、その後に、麦汁の冷却の段階、及び任意に、ワールプールでの放置が続く。冷却を終えた後に、当該麦汁は、本願発明の酵母、すなわち、上述の特性Ｉ〜Ｘの１つ以上を有する酵母が投入されている発酵タンクへと移される。当該麦汁は、任意の適切な期間、一般的には、１〜１００日間の範囲で発酵されることとなる。この発酵は、任意の適切な温度、例えば、１０２０℃の範囲で実施される。
数日間の発酵プロセスを行っている間に、糖は、アルコール及びＣＯ２(二酸化炭素)へと変換され、それに付随して、幾つかの風味物質も発生する。
それに続いて、当該ビールを、さらなる加工処理、例えば、冷蔵することができる。良い香りを作り出し、かつ、酵母臭を除くプロセスである、ろ過及び/または低温発酵を行うこともできる。添加剤を加えることもできる。さらに、ＣＯ２を加えることもできる。最後に、ビールは、梱包(例えば、ビン詰めまたは缶充填)をする前に、低温殺菌、及び/または、ろ過することができる。
一般的に、本願発明の酵母を用いて製造したビールは、他にはない良好な食味を呈する。例えば、専門職のビール食味検査パネルによって、食味を分析することができる。好ましくは、当該パネルは、ビールの風味、とりわけ、アルデヒド、紙様の味、古めかしい味、エステル類、高級アルコール類、脂肪酸類、及び、硫黄成分に特化して試験及び表現する訓練を受けている。
一般的に、食味検査パネルは、３〜３０名の範囲、例えば、５〜１５名の範囲、好ましくは、８〜１２名の範囲の人員で構成される。この食味検査パネルは、紙質臭、酸化臭、熟成臭、及び、パンのような異臭、ならびに、エステル類、高級アルコール類、硫黄成分といった風味などの存在、そして、ビールのコクなどの様々な風味を評価することができる。
配列表
Figure 0006967968
Figure 0006967968
配列番号１
ハイブリッド酵母１由来の短いＩＭＡ１のアミノ酸配列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD
WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY
ESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQF
IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD
WKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY
QGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF
IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW
EGRIHINE.
配列番号２
ハイブリッド酵母４由来の短いＩＭＡ１のアミノ酸配列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD
WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY
ESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQF
IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD
WKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY
QGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP
NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF
IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW
EGRIYINE
配列番号３
ハイブリッド酵母４由来の短いＩＭＡ１のアミノ酸配列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD
WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY
ESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQF
IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD
WKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY
QGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRLIKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP
NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF
IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW
EGRIHINE.
配列番号４
ハイブリッド酵母７由来の短いＩＭＡ１のアミノ酸配列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD
WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY
ESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQF
IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD
WKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY
QGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP
NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF
IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDVSSRTLKPW
EGRIYINE.
配列番号５
ハイブリッド酵母７由来の短いＩＭＡ１のアミノ酸配列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD
WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY
ESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQF
IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD
WKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY
QGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP
NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF
IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW
EGRIYINE.
配列番号６
ハイブリッド酵母１由来のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＤＡＬ５のアミノ酸配列
MSADASTNSNASLDEKNLNITSEAEIKNEDVTAEPVLSTVLSPNGKIVYISDKVDEAMKLAEEA
KEIEVTPEEDRKLRWKIDYCMFPLMCILYAVQFMDKISTSSAAVMGLRTDLKMHGDQYSWVTSA
FYFGYLFMNLGPVQFIFQRTSHMSKMLAVFIVIWGMLLALHAAPTVKYPSFIVLRVLLGCAESV
VTPCFTIITAQYWKTEEQFTRVSIWFGMNGLGSILINAIAYGVYIHQDSYAIKGWRTLFVITGV
ITIFIGILIFLWIPDDPSKARFLSKREKLMVVQRIRSNQQGFGNHEIKKYQIIEALKDVRTWLY
FLFTVSSNIPNGGISSFMSILLNSDFGYSSKETLLMGLPTGAVELVGCPLFGILAVYAANKKIP
FWKYKLSWAIFAAVLALIASCMLGFATNSKKARLAGAYLWYISPVSFICVLSNISANSSGYSKK
WTVSSINLVAYAAANLAGPQTFIAKQAPKYHGAKVAMVVCYAVMIVLLSILLIVNLRENKRRDK
IAAERGFPEETENLEFSDLTDFENPNFRYTL.
配列番号７
エール酵母１由来のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＰＴＲ２のアミノ酸配列
MLNHPSQGSDDAQDEKQGDFPVIEEEKTQAVMLKDSYVSDDVANSTERYNLSPSPEDEDFEAPT
EEEMQTLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPNDSPKGVLSLNSQGATG
LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILFITSIPSVGNRDSAIGGFIA
AIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSL
SLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWIAVVTLIFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFKVCWILTKNKF
DFNAAKPSVHPEKNYPWNDKFVDEIKRALAACKVFIFYPIYWTQYGTMISSFITQASMMELHGI
PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFVYPFIRRYTPLKPITKIFXGFMFGSFAMTWAAVLQSFVYKA
GPWYNEPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNA
FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWLCFRKYNDTEEEMNAMDYEEENEFDLN
PISAPKANDIEILEPMDSLRSTAKY.
配列番号８
ラガー酵母１由来のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＰＴＲ２のアミノ酸配列
MLNHPSQGSDDAQDEKQGDFPVIEEEKTQAVTLKDSYVSDDVANSTERYNLSPSPEDEDFEAPT
EEEMQTLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPNDSPKGVLSLNSQGATG
LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILFITSIPSVGNRDSAIGGFIA
AIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSL
SLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWIAVVTLIFGKKQYIQRPVGDKVIAKSFKVCWILTKNKF
DFNAAKPSVHPEKNYPWNDKFVDEIKRALAACKVFIFYPIYWTQYGTMISSFITQASMMELHGI
PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFVYPFIRRYTPLKPITKIFFGFMFGSFAMTWAAVLQSFVYKA
GPWYNEPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNA
FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWLCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLN
PISAPKANDIEILEPMESLRSTTKY
配列番号９
ハイブリッド酵母１由来の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＰＴＲ２のアミノ酸配列
MLNHLSQGSDDIQDEKQGDFPVIEEEKNQTVTLKDSYVSDDAANSTEHYNLSPSLEEDEFEAPT
DEELRSLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPKDTPKGVLSLNSQGATG
LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILLITSIPSVGNRDSALGGFIA
SIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSL
SLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWVAVVTLVFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFRVCWILTKNKF
DFNAAKPSVHPEKEYPWNDKFVDEIKRALAACKVFVFYPIYWTQYGTMISSFITQAGMMELHGI
PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFIYPFIRRYTPFKPITKIFFGFMFGSLAMTWAAVLQSFVYKA
GPWYSAPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNA
FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWFCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLN
PISQPKGNDIEILEPMGSLKSTTKY
配列番号１０
ハイブリッド酵母１のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＵＢＲ１の不完全アミノ酸配列
FKEFCKVEGGVLIWQRVQKSNLTKSYSISFKQGLYTVETLLSKVHDPNIPLRPKEIISLLTLCK
LFNGAWKIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEYTTSIYSIIQTAEKVSEKSKDSIDSKLFLNAIRIIS
SFLGNRSLTYKLIYDSHEVIKFSVSHERVAFMNPLQTMLSFLIEKVSLKDAYEALEDCSDFLKI
SDFSLRSVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQASYYKNNPELGSYSRDIHLNQLAILWERDDIPRII
YNILDRWELLDWFTGEVDYQHTVYEDKISFIIQQFIAFIYQILTERQYFKTFSSLKDRRMDQIK
NSIIYNLYMKPLSYSKLLRSVPDYLTEDTTEFDEALEEVSVFVEPKGLADNGVFKLKASLYAKV
DPLKLLNLENEFESS
配列番号１１
ハイブリッド酵母１の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＵＢＲ１のアミノ酸配列
MSFTDNGLGSLKAHIRRTLRSIHNLPYFRFTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFIISNDGENLS
TLFTAHPKQKSSNQELAVFPESLEDALDVDKITSQGTFPFYKIDESKIGDVHKHTGRNCGRKFK
IGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHVNHHVCTDICSEFTSGICDCGDEEAWNSSLHCKAE
EQGNDTSEDPSNFDSTKQKDVWNDPECIALVELVLSEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKL
REMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDGTTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEY
HNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDGEGRAMLKCSQDLSSVLGGFFAVQTNGLSATLTSWS
EYLHQEACKYIILWITHCLNIPNPSFQITFRNMMGKSLCSEYLNATESRDMTPVVEKYFSTKFD
KDDPYRYIDLSVLAEGNQIPLGHHKVLPESSTHSLSTLINDVENLTSKEYSNTRLQHILYFDNR
YWKRLRKDIQNVIIPTLASSTLYKPIFCQQVVEIFNHITRSVAYMDREPQLTAIRECVVQLFTC
PTNTRNIFENQSFLDILWSIIDIFKEFCKVEAGVLIWQRVQKSNLTKSYSLSFKQGLYTVETLL
SKVNDPNITIRPKVFISLLTLGKLFNGAWKIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEYTTSIYSIIQTAE
KVLEKSHDSLDLNLVLNAIRIVSSFLGNRSLTYKLIYDSHEIIKFSVSHERVAFMNPIQTMLSF
LIEKVSLKDAYESLENCPDFLKIADFSLRSVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQASYYKNNPELGS
YSRDIHLNQLAIIWERDDLPRVIYNILDRWELLDWFMGEAEYQHTVYEDKISFMIQQFIAFIYQ
ILTERQYFKTFSLLRDRRMDMIKNSIMYNLYMKPLSYSKLLKSVPDYLTDDTTEFDEALEEVSV
FVEPKGLADNGVFKLKAALYAKIDPLKLLNLENEFESSATIIKTHLAKNKDEVSKVVLIPQVST
KLLDKGAMNLGEFTRNTVFAKVIYKLLQVCLDMEDSTFLNELLHLVHGIFKDDELINGKDSIPE
AYLAKPICNLLLSIANAKSDIFSESIVRKADYLLEKMIMKKPDEIFESLIASFGNQYIDNYKDK
KLSQGVNLQETEKERKRRMAKKHQARLLAKFNNQQSKFMKEHESEFDEQDNDVDMDGEKVYESE
DFTCALCQDSSSTDFFVIPAYHDHTPIFRPGNIFNPREFMAKWDGFYNDDDKQAYIDDEVLESL
KENGTRGSRKVFVSCNHHIHHNCFKRYVQKKRFSSNAFICPLCQTFSNCTLPICPTSRANTGLS
LDMFLKSELSLDILSRLFKPFTEDNYRTINSIFSLMVSQCQGFDKVVRKHVNFTHKDVSLVLSV
HWANTISMLEVASRLEKPHNISFFRSREQKYKTLKNILICIMLFTFVIGKPSMEFEPYPVESDI
ICNQNQLFQYIVRKSLFSPASLRETITEALTVFCKQFLDDFVQGLSDAEQVDKLYTEAKKLGDV
YNVDESILITLMSITVVKTEGLESRSIYDLAYTSLLKSLLPTIRRCLVMVKVLHELVKDSENET
MVIDGFDVEEELEFEGLPGFVDKALKLITDKESFVDLFKTKQAIVPSHPYLERIPYEYCGIVKL
IDLSKFLNTYVTQSKEIKLREERSQHMKNADNRLDFKICLTCGVKVHLRADRHEMTKHLNKNCF
KSFGAFLMPNSSEVCLHLTQPPSNIFVSAPYLNSHGEVGRNAMRRGDLTTLNLKRYEHLNRLWI
NNEIPGYISRVMGDEFRVTILSNGFLFAFNREPRPRRVPPTDEDDEDMEEGEEGFFTEENDDMD
VDDETGQAANLFGVGAEGIGDGGVRNFFQFFENFRNTLQPQGNDDEDAPQNPPPILQFLGPQFD
GATIIRNTNQRNLDEDDSSENDDSDEREIW
配列番号１２
ハイブリッド酵母１由来の短いＳｃ対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアミノ酸配列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD
WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY
ESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQF
IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD
WKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY
QGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRLIKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP
NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF
IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW
EGRIHINE
配列番号１３
ハイブリッド酵母１由来の短いＳｃ対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアミノ酸配列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD
WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY
ESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQF
IRNRVKGGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD
WKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY
QGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRLIKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP
NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF
IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW
EGRIHINE
配列番号１４
ハイブリッド酵母１由来の長いＳｃ対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアミノ酸配列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPLYD
SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT
NPKRDWSFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC
RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ
EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP
FELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG
TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTP
MPWTPNEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG
YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR
TLKPWEGRIYISE
配列番号１５
ハイブリッド酵母１由来の長いＳｃ対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアミノ酸配列
MTISSAHPEAEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGADAIWISPFYD
SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWLKESRSSKT
NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC
RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ
EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKKLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP
FELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG
TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTP
MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG
YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR
TLKPWEGRIYISE
配列番号１６
非Ｓｃ ＩＭＡ５様対立遺伝子によってコードされたハイブリッド酵母１由来のＩＭＡ５ｐのアミノ酸配列
MTIIHNPKWWKEATIYQIYPASFKDSNNDGWGDLAGITSKLDYIKELGVDAIWVCPFYDSPQED
MGYDIANYEKVWPRYGTSEDCFQMIEESHKRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESRSSKTNAKRD
WFFWKPPKGYEIDGTPIPPNNWRSFFGGSAWKYDENTEEFFLHVFAPGQPDFNWENKECRQAIY
DSSVGFWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGLPDASITDPTVPYQDGTDFFVNGPRIHEYHKEMRQY
MYTQIPEGKEIMTVGEVGIGNEKDFKDYTSSKEEEFNMMFNFKHTSVGESPEFKYELIPFTLKD
FKLALAESFLFIEGTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPEWREISSKMLATLIISLTGTVFIY
QGQELGMPNFKNRKIEQIKCVEGTGTYGAIKRDYGEDSEKMKKFYEALALISRDHGRTPFPWSG
EKPYAGFSKNAKPWIDINESFVEGINAEAELNDENSVFFFWKRALQVRKEHKNMLVYGDNFQFY
DLDNEKLFMFTKDSGDKKMFAVFNFCSDSTEFSVPDNKASYDMFFGNYANSDGKSYTLKPWEGR
LYYSN
配列番号１７
Ｓｃ-ＩＭＡ５様によってコードされたハイブリッド酵母１由来のＩＭＡ５ｐのアミノ酸配列
MTIIHNPKWWKEATVYQIYPASNKDSNNDGWGDLAGITSKLDYVKELGVDAIWVCLFYDSPQED
MGYDIANYEKVWPRYGTNEDCFQMIEEAHKRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESKSSKTNPKRD
WFFWRPPKGFDEKGNPIPPNNWRSFFGGSAWRYDEKTGEFFLHVFAPGQPDFNWENEECRKAIY
DSSVGYWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGLPDAPITDPTVPYQKGTEFFINGSRIHEYHKEMRKY
MLSQIPEGKEIMTVGEVGVGNEEDFRDYTSAKEGELNMMFNFKHTSVGESPECKYELIPFTLKD
FKLALAESFLFIENTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPKWRAISSKMLATLIISLTGTVFIY
QGQELGMSNFKNRRIEQIKCVEGTGTYAAIKRDYGEDSEKMKKFFEALALISRDHGRTPFPWSA
DEPSAGFSKDAKPRIDMNESFRDGINAEAELKDKNSVFFFWKKALQVRKEHKDILVYGHNFQFI
DLDNDKLFMFTKDTDNKKMFAVFNFSSDDTDFSVPDNEASYTMFFGNYANSNGDSRTLQPWEGR
LYLLK
配列番号１８
非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたハイブリッド酵母１由来のＡＧＴ１のアミノ酸配列
MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQL
SDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLS
ALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALS
LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ
IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNR
ILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGA
VLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFI
IGGMGFASGSSASNAAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVAEIPSAELRTKTIVLARICYNLMAV
FNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKF
ASTVVDPFGKRGLQNRPQVDNIIDRFSSASQQAL
配列番号１９
Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたハイブリッド酵母１由来のＡＧＴ１のアミノ酸配列
MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQEVFNTENFEEGRKDSAFELDHLEFTINSAQL
GDSDEDNENVINETNTTDDANEANSEEKSMTLKQALLIYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLN
ALYALPVFQRKFGTLNGEGSYEITSQWQIGLNMCVQCGEIIGLQITPYMVEFMGNRYTMITALG
LLTAYVFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ
IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSR
ILSGKGAEKDIQIDLTLKQIELTIEKERLLASKSGSFLDCFKGVNGRRTRLACLTWVAQNTSGA
CLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSVIQYCLGLAGTLCSWVISGRVGRWTILTYGLAFQMVCLFI
IGGMGFGSGSGASNGAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVTEIPSAELRTKTIVLARICYNIMAV
INAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTAVTLAWVIIDLPETSGRTFSEINELFNQGVPARKF
ASTVVDPFGKGKTQHDSLDDESISQSSSIKQRELNAADKC
配列番号２０
Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたハイブリッド酵母１由来のＡＧＴ１のアミノ酸配列
MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQEVFNTENFEEGRKDSAFELDHLEFTINSAQL
GDSDEDNENVINETNTTDDANEANSEEKSMTLKQALLIYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLN
ALYALPVFQRKFGTLNGEGSYEITSQWQIGLNMCVQCGEIIGLQITPYMVEFMGNRYTMITALG
LLTAYVFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ
IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSR
ILSGKGAEKDIQIDLTLKQIELTIEKERLLASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLTWVAQNTSGA
CLLGYSAYFFERAGMATDKAFTFSVIQYCLGLAGTLCSWVISGRVGRWTILTYGLAFQMVCLFI
IGGMGFGSGSGASNGAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVTEIPSAELRTKTIVLARICYNIMAV
INAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTAVTLAWVIIDLPETSGRTFSEINELFNQGVPARKF
ASTVVDPFGKGKTQHDSLDDESISQSSSIKQRELNAADKC
配列番号２１
ハイブリッド酵母４由来の長いＩＭＡ１対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアミノ酸配列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYD
SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT
NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC
RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ
EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP
FELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG
TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTP
MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG
YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR
TLKPWEGRIYISE.
配列番号２２
ハイブリッド酵母４由来の長いＩＭＡ１対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアミノ酸配列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYD
SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT
NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC
RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ
EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP
FELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG
TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTP
MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG
YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR
TLKPWEGRIYISE.
配列番号２３
ハイブリッド酵母７由来の長いＩＭＡ１対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアミノ酸配列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYD
SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT
NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC
RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ
EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKKLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP
FELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG
TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTP
MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG
YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR
TLKPWEGRIYISE.
配列番号２４
ハイブリッド酵母７由来の長いＩＭＡ１対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアミノ酸配列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYD
SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT
NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC
RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ
EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP
FELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG
TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTP
MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG
YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR
TLKPWEGRIYISE.
配列番号２５
ハイブリッド酵母７由来の長いＩＭＡ１対立遺伝子によってコードされたＩＭＡ１ｐのアミノ酸配列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYD
SPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKT
NPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDC
RKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQ
EMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVP
FELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTG
TLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTP
MQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYG
YDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSR
TLKPWEGRIYISE.
配列番号２６
ハイブリッド酵母４由来のＳｃ対立遺伝子によってコードされた一端が欠失されているＡＧＴ１のアミノ酸配列
MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQEVFNTENFEEGKKDSAFELDHLEFTTNSAQL
GDSDEDNENMINEMNATDEANEANSEEKSMTLKQALLKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLN
ALYALPVFQRKFGTLNGEGSYEITSQWQIGLNMCVQCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALG
LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ
IFASGIMKNSQENLGNSDLDYKLPFALQWIWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSR
ILSGKGAEKDIQVDLTLKQIELTIEKERLLASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLAWVAQNTSGA
CLLGYSTYFF.
配列番号２７
ハイブリッド酵母４由来の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアミノ酸配列
MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQL
SDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLS
ALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALS
LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ
IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNR
ILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGA
VLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFI
IGGMGFASGSSASNAAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVAEIPSAELRTKTIVLARICYNLMAV
FNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGDFTALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKF
ASTVVDPFGKRGLQNRPQVDNIIDRFSSASQQAL.
配列番号２８
ハイブリッド酵母４由来の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアミノ酸配列
MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQL
SDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLS
ALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALS
LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ
IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNR
ILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGA
VLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFI
IGGMGFASGSSASNAAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVAEIPSAELRTKTIVLARICYNLMAV
FNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKF
ASTVVDPFGKRGLQNRPQVDNIIDRFSSASQQAL.
配列番号２９
ハイブリッド酵母７由来のＳｃ対立遺伝子によってコードされた一端が欠失されているＡＧＴ１のアミノ酸配列
MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQEVFNTENFEEGKKDSAFELDHLEFTTNSAQL
GDSDEDNENMINEMNATDEANEANSEEKSMTLKQALLKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLN
ALYALPVFQRKFGTLNGEGSYEITSQWQIGLNMCVQCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALG
LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ
IFASGIMKNSQENLGNSDLDYKLPFALQWIWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSR
ILSGKGAEKDIQVDLTLKQIELTIEKERLLASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLAWVAQNTSGA
CLLGYSTYFF.
配列番号３０
ハイブリッド酵母７由来のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアミノ酸配列
MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQEVFNTENFEEGRKDSAFELDHLEFTINSAQL
GDSDEDNENVINETNTTDDANEANSEEKSMTLKQALLIYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLN
ALYALPVFQRKFGTLNGEGSYEITSQWQIGLNMCVQCGEIIGLQITPYMVEFMGNRYTMITALG
LLTAYVFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ
IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSR
ILSGKGAEKDIQIDLTLKQIELTIEKERLLASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLTWVAQNTSGA
CLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSVIQYCLGLAGTLCSWVISGRVGRWTILTYGLAFQMVCLFI
IGGMGFGSGSGASNGAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVTEIPSAELRTKTIVLARICYNIMAV
INAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTAVTLAWVIIDLPETSGRTFSEINELFNQGVPARKF
ASTVVDPFGKGKTQHDSLDDESISQSSSIKQRELNAADKC.
配列番号３１
ハイブリッド酵母７由来の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアミノ酸配列
MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQL
SDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLS
ALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALS
LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ
IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNR
ILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGA
VLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFI
IGGMGFASGSSASNAAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVAEIPSAELRTKTIVLARICYNLMAV
FNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKF
ASTVVDPFGKRGLQNRPQVDNIIDRFSSASQQAL.
配列番号３２
ハイブリッド酵母７由来の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＡＧＴ１のアミノ酸配列
MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQL
SDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLS
ALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALS
LLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQ
IFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNR
ILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGA
VLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFI
IGGMGFASGSSASNAAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVAEIPSAELRTKTIVLARICYNLMAV
FNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTALTLAWVIIDLPETTGRTFGEINELFSQGVPARKF
ASTVVDPFGKRGLQNRPQVDNIIDRFSSASQQAL.
配列番号３３
ハイブリッド酵母７由来の短いＩＭＡ１のアミノ酸配列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRD
WFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIY
ESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQF
IRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKD
WKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVY
QGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRLIKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTP
NEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKF
IDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPW
EGRIHINE.
配列番号３４
ハイブリッド酵母１由来のＩＭＡ５のアミノ酸配列
MTIIHNPKWWKEATVYQIYPASNKDSNNDGWGDLAGITSKLDYVKELGVDAIWVCLFYDSPQED
MGYDIANYEKVWPRYGTNEDCFQMIEEAHKRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESKSSKTNPKRD
WFFWRPPKGFDEKGNPIPPNNWRSFFGGSAWRYDEKTGEFFLHVFAPGQPDFNWENEECRKAIY
DSSVGYWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGLPDAPITDPTVPYQKGTEFFINGPRIHEYHKEMRKY
MLSQIPEGKEIMTVGEVGVGNEEDFRDYTSAKEGELNMMFNFKHTSVGESPECKYELIPFTLKD
FKLALAESFLFIENTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPKWRAISSKMLATLIISLTGTVFIY
QGQELGMSNFKNRRIEQIKCVEGTGTYAAIKRDYGEDSEKMKKFFEALALISRDHGRTPFPWSA
DEPSAGFSKDAKPWIDMNESFRDGINAEAELKDKNSVFFFWKKALQVRKEHKDILVYGHNFQFI
DLDNDKLFMFTKDTDNKKMFAVFNFSSDNTDFSVPDNEASYTMFFGNYANSNGDSRTLQPWEGR
LYLLK
配列番号３５
ハイブリッドＳｃ ＩＭＡ５ハイブリッド７対立遺伝子のアミノ酸配列
MTIIHNPKWWKEATVYQIYPASNKDSNNDGWGDLAGITSKLDYVKELGVDAIWVCLFYDSPQED
MGYDIANYEKVWPRYGTNEDCFQMIEEAHKRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESKSSKTNPKRD
WFFWRPPKGFDEKGNPIPPNNWRSFFGGSAWRYDEKTGEFFLHVFAPGQPDFNWENEKCRKAIY
DSSVGYWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGLPDAPITDPTVPYQKGTEFFINGPRIHEYHKEMRKY
MLSQIPEGKEIMTVGEVGVGNEEDFRDYTSAKEGELNMMFNFKHTSVGESPECKYELIPFTLKD
FKLALAESFLFIENTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPKWRAISSKMLATLIISLTGTVFIY
QGQELGMSNFKNRRIEQIKCVEGTGTYAAIKRDYGEDSEKMKKFFEALALISRDHGRTPFPWSA
DEPSAGFSKDAKPWIDMNESFRDGINAEAELKDKNSVFFFWKKALQVRKEHKDILVYGHNFQFI
DLDNDKLFMFTKDTDNKKMFAVFNFSSDNTDFSVPDNEASYTMFFGNYANSNGDSRTLQPWEGR
LYLLK.
配列番号３６
非Ｓｃ ＩＭＡ５ハイブリッド７対立遺伝子のアミノ酸配列
ゲノム配列から最初の６つのアミノ酸が喪失している。
PKWWKEATIYQIYPASFKDSNNDGWGDLAGITSKLDYIKELGVDAIWVCPFYDSPQEDMGYDIA
NYEKVWPRYGTSEDCFQMIEESHKRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESRSSKTNAKRDWFFWKP
PKGYEIDGTPIPPNNWRSFFGGSAWKYDENTEEFFLHVFAPGQPDFNWENKECRQAIYDSSVGF
WLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGLPDASITDPTVPYQDGTDFFVNGPRIHEYHKEMRQYMYTQIP
EGKEIMTVGEVGIGNEKDFKDYTSSKEEEFNMMFNFKHTSVGESPEFKYELIPFTLKDFKLALA
ESFLFIEGTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPEWREISSKMLATLIISLTGTVFIYQGQELG
MPNFKNRKIEQIKCVEGTGTYGAIKRDYGEDSEKMKKFYEALALISRDHGRTPFPWSGEKPYAG
FSKNAKPWIDINESFVEGINAEAELNDENSVFFFWKRALQVRKEHKNMLVYGDNFQFYDLDNEK
LFMFTKDSGDKKMFAVFNFCSDSTEFSVPDNKASYDMFFGNYANSDGKSYTLKPWEGRLYYSN.
配列番号３７
ハイブリッド酵母７のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＰＴＲ２のアミノ酸配列(不完全配列)
NSTERYNLSPSPEDEDFEAPTEEEMQTLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYM
EYGPNDSPKGVLSLNSQGATGLSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFI
LFITSIPSVGNRDSAIGGFIAAIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVD
SNITLQNVFMFFYFMINVGSLSLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWIAVVTLIFGKKQYIQRP
IGDKVIAKSFKVCWILTKNKFDFNAAKPSVHPEKNYPWNDKFVDEIKRALAACKVFIFYPIYWT
QYGTMISSFITQASMMELHGIPNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFVYPFIRRYTPLKPITKIFFG
FMFGSFAMTWAAVLQSFVYKAGPWYNEPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYA
YSKAPASMKSFIMSIFLLTNAFGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWLCFRKY
NDTEEEMNAMDYEEEDEFDLNPISAPKANDIEILEPMESLRSTTKY.
配列番号３８
ハイブリッド酵母７の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＰＴＲ２のタンパク質配列
MLNHLSQGSDDIQDEKQGDFPVIEEEKNQTVTLKDSYVSDDAANSTEHYNLSPSLEEDEFEAPT
DEELRSLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPKDTPKGVLSLNSQGATG
LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILLITSIPSVGNRDSALGGFIA
SIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSL
SLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWVAVVTLVFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFRVCWILTKNKF
DFNAAKPSVHPEKEYPWNDKFVDEIKRALAACKVFVFYPIYWTQYGTMISSFITQAGMMELHGI
PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFIYPFIRRYTPFKPITKIFFGFMFGSLAMTWAAVLQSFVYKA
GPWYSAPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNA
FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWFCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLN
PISQPKGNDIEILEPMGSLKSTTKY.
配列番号３９
ハイブリッド酵母７のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＤＡＬ５のアミノ酸配列
MSADASTNSNASLDEKNLNITSEAEIKNEDVTAEPVLSTVLSPNGKIVYISDKVDEAMKLAEEA
KEIEVTPEEDRKLRWKIDYCMFPLMCILYAVQFMDKISTSSAAVMGLRTDLKMHGDQYSWVTSA
FYFGYLFMNLGPVQFIFQRTSHMSKMLAVFIVIWGMLLALHAAPTVKYPSFIVLRVLLGCAESV
VTPCFTIITAQYWKTEEQFTRVSIWFGMNGLGSILINAIAYGVYIHQDSYAIKGWRTLFVITGV
ITIFIGILIFLWIPDDPSKARFLSKREKLMVVQRIRSNQQGFGNHEIKKYQIIEALKDVRTWLY
FLFTVSSNIPNGGISSFMSILLNSDFGYSSKETLLMGLPTGAVELVGCPLFGILAVYAANKKIP
FWKYKLSWAIFAAVLALIASCMLGFATNSKKARLAGAYLWYISPVSFICVLSNISANSSGYSKK
WTVSSINLVAYAAANLAGPQTFIAKQAPKYHGAKVAMVVCYAVMIVLLSILLIVNLRENKRRDK
IAAERGFPEETENLEFSDLTDFENPNFRYTL.
配列番号４０
ハイブリッド酵母７の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＤＡＬ５のアミノ酸配列
MSGGASTNSNASIDEKNLNITSEAEIKNEDVYAEPVLSTVLSPNGKVVYISDKVDEAMKLADEA
KEIEVTPEEDRKLRWKIDYCMFPLMCILYAVQFMDKISTSSAAVMGLRTDLKMHGDQYSWVTSA
FYFGYLFMNLGPVQLIFQKSKHMSKMLAIFIIVWGLLLALHAVPSVKYSSFIALRVLLGCAESV
VTPCFTIITAQYWKTEEQFTRISIWFGMNGLGSILINAIAYGVYIHQESYAIKGWRALFVITGV
ITIFVGALIFLWIPDDPSKARFLSKREKLMVVQRIRSNQQGFGNHEIKKYQIVEALKDVRTWLY
FLFTVSSNIPNGGISSFMSILLNSDFGYLSKDTLLMGLPTGAVELVGCPLFGILAVYAANKKIP
FWKYKLAWAIFAAVLALIASCMLGFATSSKKARLAGAYLWYISPVSFICVLSNISANSSGYSKK
WTVSSINLAAYAAANLAGPQTFIAKQAPKYHGAKVAMVVCYAVMIVLLSALLLINMRENKRRDK
IAAERGYPEETANLEFSDLTDFENPNFRYTL.
配列番号４１
ハイブリッド酵母７のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＵＢＲ１のアミノ酸配列(不完全配列)
MSVADDDLGSLQGHIRRTLRSIHNLPYFRYTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFVISNSGENLP
TLFNAHPKQKLSNPELTVFPDSLEDAVDIDKITSQQTIPFYKIDESRIGDVHKHTGRNCGRKFK
IGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHVNHHVCTDICTEFTSGICDCGDEEAWNSPLHCKAE
EQENDISEDPATNADIKEEDVWNDSVNIALVELVLAEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKL
REMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDGTTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEY
HNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDGEGRAMLKCSQDSSSVLGGFFAVQTNGLSATLTSWS
EYLHQETCKYIILWITHCLNIPNSSFQTTFRNMMGKTLCSEYLNATECRDMTPVVEKYFSNKFD
KNDPYRYIDLSILADGNQIPLGHHKILPESSTHSLSPLINDVETPTSRTYSNTRLQHILYFDNR
YWKRLRKDIQNVIIPTLASSNLYKPIFCQQVVEIFNHITRSVAYMDREPQLTAIRECVVQLFTC
PTNAKNIFENQSFLDIVWSIIDIFKEFCKVEGGVLIWQRVQKSNLTKSYSISFKQGLYTVETLL
SKVHDPNIPLRPKEIISLLTLCKLFNGAWKIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEYTTSIYSIIQTAE
KVSEKSKDSIDSKLFLNAIRIISSFLGNRSLTYKLIYDSHEVIKFSVSHERVAFMNPLQTMLSF
LIEKVSLKDAYEALEDCSDFLKISDFSLRSVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQASYYKNNP
配列番号４２
ハイブリッド酵母７の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＵＢＲ１のアミノ酸配列
MSFTDNGLGSLKAHIRRTLRSIHNLPYFRFTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFIISNDGENLS
TLFTAHPKQKSSNQELAVFPESLEDALDVDKITSQGTFPFYKIDESKIGDVHKHTGRNCGRKFK
IGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHINHHVCTDICSEFTSGICDCGDEEAWNSSLHCKAE
EQGNDTSEDPSNFDSTKQKDVWNDPECIALVELVLSEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKL
REMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDGTTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEY
HNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDGEGRAMLKCSQDLSSVLGGFFAVQTNGLSATLTSWS
EYLHQEACKYIILWITHCLNIPNPSFQITFRNMMGKSLCSEYLNATESRDMTPVVEKYFSTKFD
KDDPYRYIDLSVLAEGNQIPLGHHKVLPESSTHSLSTLINDVENLTSKEYSNTRLQHILYFDNR
YWKRLRKDIQNVIIPTLASSTLYKPIFCQQVVEIFNHITRSVAYMDREPQLTAIRECVVQLFTC
PTNTRNIFENQSFLDILWSIIDIFKEFCKVEAGVLIWQRVQKSNLTKSYSLSFKQGLYTVETLL
SKVNDPNITIRPKVFISLLTLGKLFNGAWKIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEYTTSIYSIIQTAE
KVLEKSHDSLDLNLVLNAIRIVSSFLGNRSLTYKLIYDSHEIIKFSVSHERVAFMNPIQTMLSF
LIEKVSLKDAYESLENCPDFLKIADFSLRSVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQASYYKNNPELGS
YSRDIHLNQLAIIWERDDLPRVIYNILDRWELLDWFMGEAEYQHTVYEDKISFMIQQFIAFIYQ
ILTERQYFKTFSLLRDRRMDMIKNSIMYNLYMKPLSYSKLLKSVPDYLTDDTTEFDEALEEVSV
FVEPKGLADNGVFKLKAALYAKIDPLKLLNLENEFESSATIIKTHLAKNKDEVSKVVLIPQVST
KLLDKGAMNLGEFTRNTVFAKVIYKLLQVCLDMEDSTFLNELLHLVHGIFKDDELINGKDSIPE
AYLAKPICNLLLSIANAKSDIFSESIVRKADYLLEKMIMKKPDEIFESLIASFGNQYIDNYKDK
KLSQGVNLQETEKERKRRMAKKHQARLLAKFNNQQSKFMKEHESEFDEQDNDVDMDGEKVYESE
DFTCALCQDSSSTDFFVIPAYHDHTPIFRPGNIFNPREFMAKWDGFYNDDDKQAYIDDEVLESL
KENGTRGSRKVFVSCNHHIHHNCFKRYVQKKRFSSNAFICPLCQTFSNCTLPICPTSRANTGLS
LDMFLKSELSLDILSRLFKPFTEDNYRTINSIFSLMVSQCQGFDKVVRKHVNFTHKDVSLVLSV
HWANTISMLEVASRLEKPHNISFFRSREQKYKTLKNILICIMLFTFVIGKPSMEFEPYPVESDI
ICNQNQLFQYIVRKSLFSPASLRETITEALTVFCKQFLDDFVQGLSDAEQVDKLYTEAKKLGDV
YNVDESILITLMSITVVKTEGLESRSIYDLAYTSLLKSLLPTIRRCLVMVKVLHELVKDSENET
MVIDGFDVEEELEFEGLPGFVDKALKLITDKESFVDLFKTKQAIVPSHPYLERIPYEYCGIVKL
IDLSKFLNTYVTQSKEIKLREERSQHMKNADNRLDFKICLTCGVKVHLRADRHEMTKHLNKNCF
KSFGAFLMPNSSEVCLHLTQPPSNIFVSAPYLNSHGEVGRNAMRRGDLTTLNLKRYEHLNRLWI
NNEIPGYISRVMGDEFRVTILSNGFLFAFNREPRPRRVPPTDEDDEDMEEGEEGFFTEENDDMD
VDDETGQAANLFGVGAEGIGDGGVRNFFQFFENFRNTLQPQGNDDEDAPQNPPPILQFLGPQFD
GATIIRNTNQRNLDEDDSSENDDSDEREIW.
配列番号４３
ハイブリッド酵母１のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＰＴＲ２のアミノ酸配列
MLNHPSQGSDDAQDEKQGDFPVIEEEKTQAVMLKDSYVSDDVANSTERYNLSPSPEDEDFEAPT
EEEMQTLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPNDSPKGVLSLNSQGATG
LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILFITSIPSVGNRDSAIGGFIA
AIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSL
SLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWIAVVTLIFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFKVCWILTKNKF
DFNAAKPSVHPEKNYPWNDKFVDEIKRALAACKVFIFYPIYWTQYGTMISSFITQASMMELHGI
PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFVYPFIRRYTPLKPITKIFVGFMFGSFAMTWAAVLQSFVYKA
GPWYNEPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNA
FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWLCFRKYNDTEEEMNAMDYEEENEFDLN
PISAPKANDIEILEPMDSLRSTTKY.
配列番号４４
ハイブリッド酵母１の非Ｓｃ対立遺伝子によってコードされたＰＴＲ２のアミノ酸配列
MLNHLSQGSDDIQDEKQGDFPVIEEEKNQTVTLKDSYVSDDAANSTEHYNLSPSLEEDEFEAPT
DEELRSLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPKDTPKGVLSLNSQGATG
LSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILLITSIPSVGNRDSALGGFIA
SIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSL
SLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWVAVVTLVFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFRVCWILTKNKF
DFNAAKPSVHPEKEYPWNDKFVDEIKRALAACKVFVFYPIYWTQYGTMISSFITQAGMMELHGI
PNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFIYPFIRRYTPFKPITKIFFGFMFGSLAMTWAAVLQSFVYKA
GPWYSAPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNA
FGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWFCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLN
PISQPKGNDIEILEPMGSLKSTTKY.
配列番号４５
ハイブリッド酵母１のＳｃ対立遺伝子によってコードされたＵＢＲ１の部分アミノ酸配列
MSVADDDLGSLQGHIRRTLRSIHNLPYFRYTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFVISNSGENLP
TLFNAHPKQKLSNPELTVFPDSLEDAVDIDKITSQQTIPFYKIDESRIGDVHKHTGRNCGRKFK
IGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHVNHHVCTDICTEFTSGICDCGDEEAWNSPLHCKAE
EQENDISEDPATNADIKEEDVWNDSVNIALVELVLAEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKL
REMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDGTTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEY
HNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDGEGRAMLKCSQDL.
条項
本願発明は、以下の条項によって、さらに定義をすることができる。
１．以下の特性のうち少なくとも１つを有する酵母細胞：
ＩＩ．パノースを唯一の炭素源として資化することができる、
ＩＩＩ．１つ以上のジペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる。
２．特性ＩＩ及びＩＩＩの両方を有する条項１に記載の酵母細胞。
３．酵母細胞が、
Ｉ．イソマルトースを唯一の炭素源として資化することができる、
という特性をさらに有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
４．前記酵母細胞が、イソマルトースを、前記イソマルトースが１〜５ｇ/Ｌの範囲内、１〜３ｇ/Ｌの範囲など、例えば、２ｇ/Ｌの濃度で存在している場合に、唯一の炭素源として資化することができる先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
５．前記酵母細胞が、パノースを、前記パノースが１〜５ｇ/Ｌの範囲内、１〜３ｇ/Ｌの範囲など、例えば、２ｇ/Ｌの濃度で存在している場合に、唯一の炭素源として資化することができる先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
６．前記酵母細胞が、麦汁に含まれる少なくとも４５％のパノースを除去することができる先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
７．前記酵母細胞が、１６℃で、５日間のインキュベーションした後、麦汁に含まれる少なくとも５０％のパノースを除去することができる先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
８．前記酵母細胞が、
ＩＩＩ．１つ以上のジペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる、
という特性をさらに有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
９．１つ以上の前記ジペプチド類が、Ｍｅｔ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｍｅｔ、Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ及びＩｌｅ−Ａｓｎからなる群から選択される先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１０．１つ以上の前記ジペプチド類が、式Ａｌａ−Ｘａａのジペプチド類であり、Ｘａａが任意のアミノ酸を示す条項１〜８のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１１．Ｘａａが、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ及びＴｈｒからなる群から選択されるアミノ酸である条項１０に記載の酵母細胞。
１２．１つ以上の前記ジペプチド類が、Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ｉｌｅ−Ａｓｎ、Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｓｎ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｇｌｎ、Ｖａｌ−Ｍｅｔ及びＶａｌ−Ｓｅｒからなる群から選択される条項１〜８のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１３．１つ以上の前記ジペプチド類が、式Ｖａｌ−Ｘａａのジペプチド類であり、Ｘａａが任意のアミノ酸を示す条項１〜８のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１４．酵母細胞が、さらに、アラントインを唯一の窒素源として資化することができる先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１５．酵母細胞が、
ＩＶ．１つ以上のトリペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる、
という特性をさらに有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１６．前記トリペプチド類の一つが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙである条項１５に記載の酵母細胞。
１７．酵母細胞が、
Ｖ．５日間、前記酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、１つ以上のアミノ酸のレベルを、出発濃度の１０％をこえないレベルにまで下げることができる、
という特性をさらに有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１８．酵母細胞が、５日間、前記酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、少なくとも１２、少なくとも１３など、例えば、少なくとも１４の異なるアミノ酸のレベルを、出発濃度の１０％未満にまで下げることができる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１９．酵母細胞が、５日間、前記酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、総アミノ酸レベルを、出発濃度の３０％未満、２５％未満などにまで下げることができる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
２０．酵母細胞が、５日間、前記酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ及びＰｈｅのすべてのアミノ酸のレベルを、出発濃度の１０％未満、好ましくは５％未満、さらにいっそう好ましくは多くとも２％にまで下げることができる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
２１．酵母細胞が、６日間、前記酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ及びＰｈｅの総アミノ酸レベルを、多くとも４００ｍｇ／Ｌ、多くとも１００ｍｇ／Ｌなど、多くとも５０ｍｇ／Ｌなど、例えば、多くとも１０ｍｇ／Ｌにまで下げることができる、先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
２２．酵母細胞が、
ＶＩ．前記酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、ジアセチルが、所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、プラート度当たり、少なくとも４.７プロミルのエタノールを生成することができる、
という特性をさらに有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
２３．前記酵母細胞が、
ＶＩＩ．前記酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、ジアセチルが、所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、少なくとも７０など、少なくとも６８の真正発酵度で糖を発酵させることができる、
という特性をさらに有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
２４．酵母細胞が、特性ＶＩＩを有し、特性ＶＩＩは、酵母細胞は、その親株のうちの１つのＲＤＦより少なくとも１だけ高いＲＤＦで糖を発酵させることができることである先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
２５．酵母細胞が、
ＶＩＩＩ．メリビオースを唯一の炭素源として資化することができる、
という特性をさらに有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
２６．酵母細胞が、
Ｘ．前記酵母細胞が、少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、４日間、インキュベーションされる場合に、多くとも１,０００万個の細胞/ｍｌなど、多くとも１,２００万個の細胞/ｍｌが懸濁して、沈降できる、
という特性をさらに有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
２７．懸濁液での細胞数/ｍｌが、前記細胞の成長が許容される条件下で５日間のインキュベーションを行った後の出発細胞数/ｍｌの多くとも８０％、多くとも７０％など、例えば、多くとも６０％、多くとも５０％など、例えば、多くとも４０％である条項２６に記載の酵母細胞。
２８．酵母細胞が、
ＩＸ．イソマルトース、パノース、及び/または、メリビオースに加えて、１つ以上の二糖及び/または三糖を資化することができる、
という特性をさらに有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
２９．二糖が、コージビオース、ニゲロース、スクロース、ツラノース、ロイクロース、及び、パラチノースからなる群から選択される条項２８に記載の酵母細胞。
３０．前記二糖が、コージビオースである条項２８に記載の酵母細胞。
３１．前記酵母細胞が、コージビオースを、前記コージビオースが、１〜５ｇ/Ｌの範囲、１〜３ｇ/Ｌの範囲など、例えば、２ｇ/Ｌの濃度で存在している場合、唯一の炭素源として資化することができる先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
３２．前記二糖が、マルツロースである条項２８に記載の酵母細胞。
３３．前記酵母細胞が、マルツロースを、前記マルツロースが、１〜５ｇ/Ｌの範囲、１〜３ｇ/Ｌの範囲など、例えば、２ｇ/Ｌの濃度で存在している場合、唯一の炭素源として資化することができる先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
３４．三糖が、マルトトリオース及びイソマルトトリオースからなる群から選択される条項２８に記載の酵母細胞。
３５．酵母細胞が、マルトトリオースを、前記マルトトリオースが、１〜５ｇ/Ｌの範囲、１〜３ｇ/Ｌの範囲など、例えば、２ｇ/Ｌの濃度で存在している場合、唯一の炭素源として資化することができる先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
３６．酵母細胞が、
ＸＩ．長くとも４日間、例えば、長くとも３日間の一次発酵で麦汁を発酵することができる、
という特性をさらに有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
３７．前記一次発酵の時期が、１,０００万〜２,０００万個の生存細胞/ｍｌの範囲で、１０度のプラート〜２０度のプラート糖含量を有する麦汁にピッチングした後に決定される条項３６に記載の酵母細胞。
３８．酵母細胞が、
Ｉ．ＤＡＬ５をコードする遺伝子を含む、
遺伝子型を有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
３９．Ｉ．ＤＡＬ５をコードする遺伝子を含む、遺伝子型を有する酵母細胞。
４０．遺伝子型Ｉが、前記酵母細胞が、ＤＡＬ５をコードする少なくとも１つの対立遺伝子を含むものであって、ＤＡＬ５をコードする前記対立遺伝子が、配列番号６のＤＡＬ５、配列番号３９のＤＡＬ５、配列番号４０のＤＡＬ５、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＤＡＬ５をコードすることである条項３８〜３９のいずれか１項に記載の酵母細胞。
４１．遺伝子型Ｉが、前記酵母細胞が、配列番号６のＤＡＬ５をコードする少なくとも１つの対立遺伝子、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記の配列と共有する、それらの機能的相同体を含むことである条項３８〜４０のいずれか１項に記載の酵母細胞。
４２．酵母細胞が、特性ＩＩＩ、例えば、条項８〜１４のいずれか１項で定義される特性ＩＩＩをさらに有する条項３８〜４１のいずれか１項に記載の酵母細胞。
４３．酵母細胞が、特性ＩＶ、例えば、条項１５〜１６のいずれか１項で定義される特性ＩＶをさらに有する条項３８〜４２のいずれか１項に記載の酵母細胞。
４４．酵母細胞が、特性Ｖ、例えば、条項１７〜２１のいずれか１項で定義される特性Ｖをさらに有する条項３８〜４３のいずれか１項に記載の酵母細胞。
４５．酵母細胞が、
ＩＩ．ＰＴＲ２をコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含む、
遺伝子型を有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
４６．ＩＩ．ＰＴＲ２をコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含む遺伝子型を有する酵母細胞。
４７．前記ＰＴＲ２が、配列番号７のＰＴＲ２、配列番号８のＰＴＲ２、配列番号９のＰＴＲ２、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらの各々の機能的相同体からなる群から選択することができる条項４５〜４６のいずれか１項に記載の酵母細胞。
４８．前記遺伝子型Ｉ Iが、前記酵母細胞が、配列番号７のＰＴＲ２、配列番号８のＰＴＲ２、配列番号９のＰＲＴ２、配列番号３７を含むＰＲＴ２、配列番号３８のＰＲＴ２、配列番号４３のＰＲＴ２、配列番号４４のＰＲＴ２、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらの各々の機能的相同体をコードする遺伝子からなる群から個別に選択されるＰＴＲ２をコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含むことである条項４５〜４７のいずれか１項に記載の酵母細胞。
４９．遺伝子型Ｉ Iが、前記酵母細胞が、以下の３つの遺伝子を含むことである条項４５〜４８のいずれか１項に記載の酵母細胞：
１) 配列番号７のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、
２) 配列番号８のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、
３) 配列番号９のＰＲＴ２、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
５０．酵母細胞が、遺伝子型Ｉ、例えば、条項３９〜４１のいずれか１項で定義される遺伝子型Ｉをさらに有する条項４５〜４９のいずれか１項に記載の酵母細胞。
５１．酵母細胞が、特性ＩＩＩ、例えば、条項８〜１４のいずれか１項で定義される特性ＩＩＩをさらに有する条項４５〜５０のいずれか１項に記載の酵母細胞。
５２．前記酵母細胞が、特性ＩＶ、例えば、条項１５〜１６のいずれか１項で定義される特性ＩＶをさらに有する条項４５〜５１のいずれか１項に記載の酵母細胞。
５３．前記酵母細胞が、特性Ｖ、例えば、条項１７〜２１のいずれか１項で定義される特性Ｖをさらに有する条項４５〜５２のいずれか１項に記載の酵母細胞。
５４．酵母細胞が、
ＩＩＩ．ＵＢＲ１をコードする遺伝子を含む、
遺伝子型を有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
５５．ＩＩＩ．ＵＢＲ１をコードする遺伝子を含む遺伝子型を有する酵母細胞。
５６．遺伝子型ＩＩＩが、前記酵母細胞が、配列番号１０を含むＵＢＲ１、配列番号１１のＵＢＲ１、配列番号４１を含むＵＢＲ１、配列番号４２のＵＢＲ１、配列番号４５を含むＵＢＲ１、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体をコードする遺伝子からなる群から個別に選択されるＵＢＲ１をコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含むことである条項５４〜５５のいずれか１項に記載の酵母細胞。
５７．遺伝子型ＩＩＩが、前記酵母細胞が、配列番号１０を含むＵＢＲ１、配列番号１１のＵＢＲ１、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体をコードする遺伝子からなる群から選択されるＵＢＲ１をコードする遺伝子を含むことである条項５４〜５６のいずれか１項に記載の酵母細胞。
５８．遺伝子型ＩＩＩが、酵母細胞が、以下の２つの遺伝子を含むことである、条項５４〜５７のいずれか１項に記載の酵母細胞：
１) 配列番号１０のＵＢＲ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、
２) 配列番号１１のＵＢＲ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
５９．酵母細胞が、遺伝子型Ｉ、例えば、条項３９〜４１のいずれか１項で定義される遺伝子型Ｉをさらに有する条項５４〜５８のいずれか１項に記載の酵母細胞。
６０．酵母細胞が、遺伝子型ＩＩ、例えば、条項４６及び４９のいずれか１項で定義される遺伝子型ＩＩをさらに有する条項５５〜５９のいずれか１項に記載の酵母細胞。
６１．酵母細胞が、特性ＩＩＩ、例えば、条項８〜１４のいずれか１項で定義される特性ＩＩＩをさらに有する条項５５〜６０のいずれか１項に記載の酵母細胞。
６２．酵母細胞が、特性ＩＶ、例えば、条項１５〜１６のいずれか１項で定義される特性ＩＶをさらに有する条項５５〜６１のいずれか１項に記載の酵母細胞。
６３．酵母細胞が、特性Ｖ、例えば、条項１７〜２１のいずれか１項で定義される特性Ｖをさらに有する条項５５〜６２のいずれか１項に記載の酵母細胞。
６４．酵母細胞が、
ＩＶ．ＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも４つなどの少なくとも３つの遺伝子を含む、
遺伝子型を有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
６５．ＩＶ．ＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも４つなどの少なくとも３つの遺伝子を含む、 遺伝子型を有する酵母細胞。
６６．ＩＭＡ１ｐが、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される条項６４及び６５のいずれか１項に記載の酵母細胞。
６７．遺伝子型ＩＶが、酵母細胞が、ＩＭＡ１の少なくとも２つの短い対立遺伝子を含み、ＩＭＡ１の前記２つの短い対立遺伝子が、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする条項６４〜６６のいずれか１項に記載の酵母細胞。
６８．遺伝子型ＩＶが、前記酵母細胞が、ＩＭＡ１の少なくとも３つの短い対立遺伝子を含むことであり、それらが、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２のＩＭＡ１ｐ、配列番号３のＩＭＡ１ｐ、配列番号４のＩＭＡ１ｐ、配列番号５のＩＭＡ１ｐ、配列番号３３のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から個別に選択されるＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子である条項６４〜６７のいずれか１項に記載の酵母細胞。個々の遺伝子
６９．遺伝子型ＩＶが、酵母細胞が、ＩＭＡ１の少なくとも２つの長い対立遺伝子を含むことであり、ＩＭＡ１の前記２つの長い対立遺伝子が、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする条項６４〜６８のいずれか１項に記載の酵母細胞。
７０．遺伝子型ＩＶが、前記酵母細胞が、ＩＭＡ１の少なくとも３つの短い対立遺伝子及びＩＭＡ１の少なくとも２つの長い対立遺伝子を含むことであり、
ａ) ＩＭＡ１の前記３つの短い対立遺伝子が、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２のＩＭＡ１ｐ、配列番号３のＩＭＡ１ｐ、配列番号４のＩＭＡ１ｐ、配列番号５のＩＭＡ１ｐ、配列番号３３のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐを個々にコードする遺伝子であり、及び
ｂ) ＩＭＡ１の前記２つの長い対立遺伝子が、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐを個々にコードする遺伝子である、
条項６４〜６９のいずれか１項に記載の酵母細胞。
７１．遺伝子型ＩＶが、酵母細胞が、ＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも５つの遺伝子を含むことであり、前記遺伝子が、配列番号１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２のＩＭＡ１ｐ、配列番号３のＩＭＡ１ｐ、配列番号４のＩＭＡ１ｐ、配列番号５のＩＭＡ１ｐ、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、配列番号３３のＩＭＡ１ｐをコードする遺伝子からなる群から個別に選択される条項６４〜７０のいずれか１項に記載の酵母細胞。
７２．遺伝子型ＩＶが、酵母細胞が、以下の４つの遺伝子を含むことである、条項６４〜７１のいずれか１項に記載の酵母細胞：
１) 配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
４) 配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
７３．遺伝子型ＩＶが、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも３つの長い対立遺伝子の存在である条項６４〜７２のいずれか１項に記載の酵母細胞。
７４．遺伝子型ＩＶが、酵母細胞が、以下の３つの遺伝子を含むことである条項６４〜７３のいずれか１項に記載の酵母細胞：
１) 配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体の双方をコードする２つの遺伝子、及び
２) 配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
７５．遺伝子型ＩＶが、酵母細胞が、以下の３つの遺伝子を含むことである条項６４〜７４のいずれか１項に記載の酵母細胞：
１) 配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体の双方をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体の双方をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体の双方をコードする遺伝子。
７６．酵母細胞が、遺伝子型Ｉ、例えば、条項３９〜４１のいずれか１項で定義される遺伝子型Ｉをさらに有する条項６４〜７５のいずれか１項に記載の酵母細胞。
７７．酵母細胞が、遺伝子型ＩＩ、例えば、条項４６〜４９のいずれか１項で定義される遺伝子型ＩＩをさらに有する条項６４〜７６のいずれか１項に記載の酵母細胞。
７８．酵母細胞が、遺伝子型ＩＩＩ、例えば、条項５５及び５８のいずれか１項で定義される遺伝子型ＩＩＩをさらに有する条項６４〜７７のいずれか１項に記載の酵母細胞。
７９．酵母細胞が、特性Ｉ、例えば、条項３〜４のいずれか１項で定義される特性Ｉをさらに有する条項６４〜７８のいずれか１項に記載の酵母細胞。
８０．酵母細胞が、特性ＩＩ、例えば、条項１及び５〜７のいずれか１項で定義される特性ＩＩをさらに有する条項６４〜７９のいずれか１項に記載の酵母細胞。
８１．酵母細胞が、特性ＩＸ、例えば、条項２８〜３５のいずれか１項で定義される特性ＩＸをさらに有する条項６４〜８０のいずれか１項に記載の酵母細胞。
８２．酵母細胞が、
Ｖ．ＩＭＡ５ｐをコードする遺伝子を含む、
遺伝子型を有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
８３．Ｖ．ＩＭＡ５ｐをコードする遺伝子を含む遺伝子型を有する酵母細胞。
８４．ＩＭＡ５ｐが、配列番号１６のＩＭＡ５ｐ、配列番号１７のＩＭＡ５ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される条項８２及び８３のいずれか１項に記載の酵母細胞。
８５．ＩＭＡ５ｐが、配列番号３４のＩＭＡ５ｐ、配列番号３５のＩＭＡ５ｐ、配列番号３６のＩＭＡ５ｐ、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される条項８２及び８３のいずれか１項に記載の酵母細胞。
８６．遺伝子型Ｖが、酵母細胞が、配列番号１６のＩＭＡ５ｐ、または、配列番号１７のＩＭＡ５ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体をコードする少なくとも２つの遺伝子を含むことである条項８２〜８５のいずれか１項に記載の酵母細胞。
８７．遺伝子型Ｖが、酵母細胞が、配列番号１６のＩＭＡ５ｐ、または、配列番号１７のＩＭＡ５ｐ、配列番号３４のＩＭＡ５ｐ、または、配列番号３５のＩＭＡ５ｐ、配列番号３６のＩＭＡ５ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体をコードする対立遺伝子から個別に選択されるＩＭＡ５ｐをコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含む条項８２〜８６のいずれか１項に記載の酵母細胞。
８８．遺伝子型Ｖが、酵母細胞が、以下の２つの遺伝子を含むことである条項８２〜８７のいずれか１項に記載の酵母細胞：
１) 配列番号１６のＩＭＡ５ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１７のＩＭＡ５ｐ、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
８９．酵母細胞が、遺伝子型Ｉ、例えば、条項３９〜４１のいずれか１項で定義される遺伝子型Ｉをさらに有する条項８２〜８８のいずれか１項に記載の酵母細胞。
９０．酵母細胞が、遺伝子型ＩＩ、例えば、条項４６及び４９のいずれか１項で定義される遺伝子型ＩＩをさらに有する条項８２〜８９のいずれか１項に記載の酵母細胞。
９１．酵母細胞が、遺伝子型ＩＩＩ、例えば、条項５５及び５８のいずれか１項で定義される遺伝子型ＩＩＩをさらに有する条項８２〜９０のいずれか１項に記載の酵母細胞。
９２．酵母細胞が、遺伝子型ＩＶ、例えば、条項６４〜７５のいずれか１項で定義される遺伝子型ＩＶをさらに有する条項８２〜９１のいずれか１項に記載の酵母細胞。
９３．酵母細胞が、特性Ｉ、例えば、条項３〜４のいずれか１項で定義される特性Ｉをさらに有する条項８２〜９２のいずれか１項に記載の酵母細胞。
９４．酵母細胞が、特性ＩＩ、例えば、条項１及び５〜７のいずれか１項で定義される特性ＩＩをさらに有する条項８２〜９３のいずれか１項に記載の酵母細胞。
９５．酵母細胞が、特性ＩＸ、例えば、条項２８〜３５のいずれか１項で定義される特性ＩＸをさらに有する条項８２〜９４のいずれか１項に記載の酵母細胞。
９６．酵母細胞が、
ＶＩ．配列番号１８のＡＧＴ１、配列番号１９のＡＧＴ１、配列番号２０のＡＧＴ１、配列番号２６のＡＧＴ１、配列番号２７のＡＧＴ１、配列番号２８のＡＧＴ１、配列番号２９のＡＧＴ１、配列番号３０のＡＧＴ１、配列番号３１のＡＧＴ１、配列番号３２のＡＧＴ１、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＡＧＴ１をコードする少なくとも３つの遺伝子を含む、
遺伝子型を有する先行条項のいずれか１項に記載の酵母細胞。
９７．ＶＩ．配列番号１８のＡＧＴ１、配列番号１９のＡＧＴ１、配列番号２０のＡＧＴ１、配列番号２６のＡＧＴ１、配列番号２７のＡＧＴ１、配列番号２８のＡＧＴ１、配列番号２９のＡＧＴ１、配列番号３０のＡＧＴ１、配列番号３１のＡＧＴ１、配列番号３２のＡＧＴ１、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＡＧＴ１をコードする少なくとも３つの遺伝子を含む、遺伝子型を有する酵母細胞。
９８．酵母細胞が、配列番号１８のＡＧＴ１、配列番号１９のＡＧＴ１、配列番号２０のＡＧＴ１、配列番号２７のＡＧＴ１、配列番号２８のＡＧＴ１、配列番号３０のＡＧＴ１、配列番号３１のＡＧＴ１、配列番号３２のＡＧＴ１、及び、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性を上記配列と共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される全長ＡＧＴ１をコードする少なくとも２つの遺伝子を含む、条項９６〜９７のいずれか１項に記載の酵母細胞。
９９．遺伝子型ＶＩが、酵母細胞が、以下の３つの遺伝子を含むことである条項９６〜９８のいずれか１項に記載の酵母細胞：
１) 配列番号１８のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号１９のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号２０のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
１００．遺伝子型ＶＩが、酵母細胞が、以下の２つの遺伝子含むことである条項９６〜９９のいずれか１項に記載の酵母細胞、
１) 配列番号２７のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号２８のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
１０１．遺伝子型ＶＩが、酵母細胞が、以下の３つの遺伝子を含むことである条項９６〜１００のいずれか１項に記載の酵母細胞、
１) 配列番号３０のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
２) 配列番号３１のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子、及び
３) 配列番号３２のＡＧＴ１、または、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、少なくとも９８％など、の配列同一性をその配列と共有する、その機能的相同体をコードする遺伝子。
１０２．酵母細胞が、遺伝子型Ｉ、例えば、条項３９〜４１のいずれか１項で定義される遺伝子型Ｉをさらに有する条項９６〜１０１のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１０３．酵母細胞が、遺伝子型ＩＩ、例えば、条項４６及び４９のいずれか１項で定義される遺伝子型ＩＩをさらに有する条項９６〜１０２のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１０４．酵母細胞が、遺伝子型ＩＩＩ、例えば、条項５５及び５８のいずれか１項で定義される遺伝子型ＩＩＩをさらに有する条項９６〜１０３のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１０５．酵母細胞が、遺伝子型ＩＶ、例えば、条項６４〜７５のいずれか１項で定義される遺伝子型ＩＶをさらに有する条項９６〜１０４のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１０６．酵母細胞が、遺伝子型Ｖ、例えば、条項８２〜８８のいずれか１項で定義される遺伝子型Ｖをさらに有する条項９６〜１０５のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１０７．酵母細胞が、特性Ｉ、例えば、条項３〜４のいずれか１項で定義される特性Ｉをさらに有する条項９６〜１０６のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１０８．前記酵母細胞が、特性ＩＩ、例えば、条項１及び５〜７のいずれか１項で定義される特性ＩＩをさらに有する条項９６〜１０７のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１０９．前記酵母細胞が、特性ＩＸ、例えば、条項２８〜３５のいずれか１項で定義される特性ＩＸをさらに有する条項９６〜１０８のいずれか１項に記載の酵母細胞。
１１０．飲料を製造するための方法であって、前記方法が、
ａ．出発液体を準備すること、
ｂ．条項１〜１０９のいずれか１項に記載の酵母細胞を準備すること、
ｃ．前記出発液体を、前記酵母細胞で発酵し、それにより、飲料を製造すること、
のステップを含む、方法。
１１１．出発液体が、大麦の水性エキスを含む条項１１０に記載の方法。
１１２．出発液体が、麦芽の水性エキスを含む条項１１０〜１１１のいずれか１項に記載の方法。
１１３．出発液体が、麦汁である条項１１０〜１１２のいずれか１項に記載の方法。
１１４．発酵が、１０〜２０℃の範囲の温度で実施される条項１１０〜１１３のいずれか１項に記載の方法。
本願発明は、以下の実施例によって、さらに例証されているが、本願発明の限定的解釈の根拠とすべきではない。
以下の実施例では、次の酵母株が使用される。
Figure 0006967968
ハイブリッド酵母１のゲノム配列は、優先権デンマーク特許出願第ＰＡ２０１４７０８２５号での配列番号１として示されている。第ＰＡ２０１４７０８２５号での配列番号１は、ハイブリッド１のゲノム配列由来のアセンブリ足場の配列を示す。これらの配列は、ＦＡＳＴＡフォーマットで提供されている。この関係で使用される「足場」という用語は、重複したコンティグから再構築したゲノム配列の一部分を指す。この「コンティグ」という用語は、短いＤＮＡ断片の再構築に端を発する隣接して重複する配列を指す。
第ＰＡ２０１４７０８２５号での配列番号１は、全部で１,６２９個の足場の配列を示しており、０〜１,６２８の番号付けがされている。第ＰＡ２０１４７０８２５号での配列番号１において、各足場での配列は、用語「＞Ｓｃａｆｆｏｌｄ＿Ｘ」で分離表示されており、式中のＸは、以下の配列を有する足場の数を表している。
よって、ハイブリッド酵母１のゲノムは、好ましくは、複数の染色体に及ぶように分布した足場０〜１６２８のすべてを含む。
ハイブリッド酵母１のゲノム配列は、ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋの受託番号 ＬＯＱＪ００００００００のもとで入手可能である。よって、ハイブリッド酵母１に関するホールゲノムショットガンプロジェクトは、ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋに、受託番号 ＬＯＱＪ００００００００として寄託されているのである。本明細書に記載のバージョンは、バージョンＬＯＱＪ０１００００００である。
提出にかかるデータは、以下の通りであった。
Figure 0006967968
ホールゲノムショットガンプロジェクトは、ハイブリッド酵母１のゲノム配列に由来するアセンブリ足場の配列を示す。この関係で使用される「足場」は、重複したコンティグから再構築したゲノム配列の一部分を指す。「コンティグ」という用語は、短いＤＮＡ断片の再構築に端を発する隣接して重複する配列を指す。ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋの受託番号 ＬＯＱＪ００００００００、バージョンＬＯＱＪ０１００００００は、全部で８９１９個の足場の配列を示す。よって、ハイブリッド酵母１のゲノムは、好ましくは、複数の染色体に及ぶように分布した足場０〜８９１９のすべてを含む。したがって、本願発明の酵母細胞も、複数の染色体に及ぶように分布した足場０〜８９１９のすべてを含むことができる。
ハイブリッド酵母７のゲノム配列は、ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋの受託番号 ＬＯＱＫ００００００００から入手可能である。
よって、ハイブリッド酵母７に関するホールゲノムショットガンプロジェクトは、ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋに、受託番号 ＬＯＱＫ００００００００として寄託されているのである。本明細書に記載のバージョンは、バージョンＬＯＱＫ０１００００００である。
提出にかかるデータは、以下の通りであった。
Figure 0006967968
このホールゲノムショットガンプロジェクトは、ハイブリッド酵母７のゲノム配列に由来するアセンブリ足場の配列を示す。この関係で使用される「足場」という用語は、重複したコンティグから再構築したゲノム配列の一部分を指す。「コンティグ」という用語は、短いＤＮＡ断片の再構築に端を発する隣接して重複する配列を指す。ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋの受託番号 ＬＯＱＫ００００００００、バージョンＬＯＱＫ０１００００００は、全部で９４９２個の足場の配列を示す。よって、ハイブリッド酵母７のゲノムは、好ましくは、複数の染色体に及ぶように分布した足場０〜９４９２のすべてを含む。したがって、本願発明の酵母細胞も、複数の染色体に及ぶように分布した足場０〜９４９２のすべてを含む。
実施例１
１０ｈｌのビールを、Ｓｏｕｆｆｌｅｔが提供する市販の麦芽を主成分とする麦汁(１６度のプラート)に対して、１,０００万個の生細胞/ｍｌの酵母を接種し、次いで、１７℃で、ジアセチルが、ラガービールで異臭の発生を招く閾値に満たないレベルに設定される所定の閾値に到達するまで発酵を行うことによって調製された。本実施例において、ジアセチル閾値は、３０ｐｐｂに設定された。
ラガービールにおいて、ジアセチルや２,３-ペンタンジオンなどの隣接ジケトン類は、閾値濃度を超えて存在すると、好ましくない異臭が発生する。ジアセチル及び２,３-ペンタンジオンは、共に、バタースコッチの芳香を有するが、ジアセチルの閾値は１０倍低い。発酵管理作業の一部は、最終ビールでの隣接ジケトン類、特に、ジアセチルが、閾値に到達しないように確認することである。
当該酵母細胞は、１つのタンク(９ｈＬ規模)で増殖されて、第１の世代のビール、次いで、第２の世代のビール(各々１０ｈＬ 規模)の細胞接種材料を得るために使用された。この増殖の目的は、十分な量の健常で真正のな酵母培養物を生産して、実際のビール発酵のための酵母を接種することにある。ビール発酵は、連続発酵で行われ、通常、５〜１０回の発酵後に、酵母は交換されるが、新たに増殖した酵母の醸造に向けた導入の頻度は、個々の判断による。この連続発酵は、以後のビール発酵のための細胞接種としての役割を果たすものであり、また、この増殖タンクだけが、第１のビール発酵、所謂、第１の世代のビールのための酵母細胞の接種材料を提供することがしばしばある。第１の世代の後に行われたビール発酵は、第２の世代などのように呼ばれる。たいていのビール発酵は、増殖タンク由来の酵母ではなく、先行するビール発酵から得た酵母を用いて実施される。このビール発酵のための細胞接種は、通常、１０７個の酵母細胞/ｍｌである。
本実施例では、３つの異なる酵母株を使用した。同じ麦汁と発酵条件を利用した。
エール酵母１
ラガー酵母１
ハイブリッド酵母１
エール酵母１は、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ種の酵母である。ラガー酵母１は、Ｓ．ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ種の酵母である。エール酵母１及びラガー酵母１は、ハイブリダイズされ、そして、ハイブリッド株の１つを選択して、それをハイブリッド酵母１と命名した。
表１は、プラートの最終数値を示しており、表２は、％エタノールの％(％ ｖ/ｖ)を示しており、及び、表３は、増殖タンク(９ｈＬ )の最終段階で３つの酵母株を用いて調製されたビール、及び/または、第１世代及び第２世代のビールに関する、最終ビールのＲＤＦ、所定の閾値に満たないジアセチルを有していた日数、第１世代のビール及び第２世代のビールに由来する一次発酵の日数を示す。
ハイブリッド株１は、３７℃で成長する能力があり(データ示さず)、及び、１６℃などの低温でも旺盛に発酵する(表１〜３を参照されたい)。
Figure 0006967968
Figure 0006967968
Figure 0006967968
ピッチング率は、発酵を開始するために細胞接種物として添加された生酵母の量/ｍｌである。ハイブリッド酵母１は、２つの親株(ラガー酵母１及びエール酵母１)と比較して、ＲＤＦが２％改善されていた。ハイブリッド酵母１も、低レベルの最終プラートを有していた。
ハイブリッド酵母１は、２つの親株と比較して、エタノール収率が、０.２％エタノール以上の改善を示した。ハイブリッド酵母１は、１６℃及び１８℃の両方の温度で、改善された発酵性能を有する。ハイブリッド酵母１は、閾値に満たないジアセチルレベルに到達するまでの短い期間(所定のＤＡに至る日数)に関して、エール酵母１と比較して、改善が認められた。
ハイブリッド酵母１は、ラガー酵母１と同じ速度でほとんどの発酵を進めているが(表３の一次発酵の日数を参照されたい)、閾値に満たないジアセチル有する時間が少し長かった(所定のＤＡに至る日数を参照されたい)。
実施例２
凍結ストックからの酵母細胞を、ＹＰＤプレートに画線した。それらは、５０ｍｌのびんに入った２０ｍｌの従来の殺菌済麦芽麦汁に接種するために使用し、２２℃の温度で成長させた。２０ｍｌの培養物からの細胞培養物は、５００ｍｌのびんに入った２００ｍｌの体積の麦汁に対する細胞の再ピッチングのために使用し、２２℃で成長させた。２００ｍｌの体積の麦汁から、１.８Ｌの増殖タンクへと接種し、１,４００万〜１,５００万個の生細胞/ｍｌの接種と、１６または１８℃の温度(発酵温度と同じ)で成長させることを目的とした。麦汁を調製するために使用した麦芽は、デンマークのＤＭＧから購入した。
全細胞数と生細胞数を、ＮｕｃｌｅｏＣｏｕｎｔｅｒで計数した。増殖タンクから生細胞の数も計数した。１,４００万〜１,５００万個の生細胞が、１５度のプラート糖含量を有する２Ｌの麦汁に接種するために使用され、６日間、１６℃(ハイブリッド酵母２、３及び４と、それらの個別の対照物)または１８℃(ハイブリッド酵母１と、その個別の対照物)で発酵させ、所謂、第１世代のビールを得た。第１世代の最後に、１,４００万〜１,５００万個の生細胞を、第２世代のビールを接種するために使用した。インキュベーション４日目に、懸濁液に含まれる細胞の数を決定した。第２世代由来のビールで得られた細胞の数を表４に示す。懸濁液に含まれる細胞の数は、細胞の全体的成長を反映するものではないが、むしろ、凝集及び/または沈降を反映している。懸濁液中の細胞の数は、一般的には、発酵の後期では、できる限り少ない方が好ましく、そのことは、凝集及び/または沈降の増大を示す。プロセスのあまりにも早い段階で凝集が増大すれば、早発凝集を招いてしまい、プロセスの終わる頃には緩慢な発酵となってしまう。
Figure 0006967968
ハイブリッド酵母１は、ラガー酵母１よりもバイオマスを多く生成した(採集した酵母のグラム数で測定した)が、ハイブリッド１は、懸濁液に含まれる細胞は依然として少なかった。
Figure 0006967968
上に示すように、ハイブリッド酵母２、３及び４は、やや多めのバイオマスを生成した(発酵の最後で採集した細胞のグラム数)が、ラガー酵母よりも、懸濁液に含まれる細胞の数は少なかった。
別の試験において、ハイブリッド酵母２は、６日間の発酵後に、懸濁液に７００万/ｍｌの細胞を有したのに対して、エール酵母１では、６日間の発酵後に、懸濁液に４００万/ｍｌの細胞しか有さず、そして、ラガー酵母２では、懸濁液に３,９００万/ｍｌの細胞を有した、ことが見出された。よって、この試験においても、ラガー酵母と比較して、ハイブリッド酵母は、懸濁液に遥かに低レベルの細胞を有していた。
エール酵母１及びラガー酵母１(ハイブリッド酵母１)またはラガー酵母２(ハイブリッド酵母２、３、４及び７)から作出したハイブリッドは、２つの親株、すなわち、エール酵母１といずれかのラガー株(ラガー酵母１または２)よりも、懸濁液に含まれる細胞の数は少なかった。よって、ハイブリッドは、細胞の沈降を改善した。このことは、ビールプロセスの次世代の細胞の再接種のために回収及び使用されるべき当該酵母細胞ペーストの下流プロセスを回避するために、醸造において興味深いことである。
さらに別の試験から得た結果が、表４ｃに示されている。明示した酵母細胞が試験された以外は、上記の実験設定にしたがった。
Figure 0006967968
実施例３
５０Ｌのビールを、従来の麦芽をベースとする麦汁(１８度のプラート)に対して、１,０００万個の生細胞/ｍｌの酵母を接種し、次いで、１８℃で、発酵を行うことによって調製した。麦汁を調製するために使用した麦芽は、デンマークのＤＭＧから購入した。
２つの異なる酵母株を使用した。同じ麦汁と発酵条件を使用した。
ラガー酵母１
ハイブリッド酵母１
表５ａは、２つの株についてのビールＡＥの最終値を示しており、５０Ｌ規模タンクにおいて第１の世代と第２の世代を用いて作られたビールと比較した。
本明細書において使用するＡＥは、「外観エキス濃度」のことであり、糖分量の重量％に関したビール麦汁の密度の指標であり、プラート尺度で表現される。
Figure 0006967968
ハイブリッド酵母１では、ラガー酵母１と比較しての０.５％である、０.５％ＡＥが改善された。
同様の試験を、ラガー酵母２、ハイブリッド酵母４、ハイブリッド酵母７、ハイブリッド酵母８、及び、Ｓ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓを用いて行なった。接種をして７日後のＡＥとＲＤＦが、表５ｂに示されている。実験２において上で記載した実験設定で、示した酵母細胞を試験した。
Figure 0006967968
 ＲＤＦは％で示されている。
ラガー酵母２、ハイブリッド酵母４及び７について、発酵速度も決定した。実験設定は、発酵の過程で幾つかの時点で外観エキス濃度が決定され、そして、１８℃でインキュベーションした以外は、実験２で本明細書に記載した通りであった。図１６は、麦汁を投入後の経時的なプラート度で表した外観エキス濃度を示す。使用した麦汁は、１５度のプラートの出発糖含量であった。そこに示したように、ハイブリッド酵母４及び７の一次発酵の時間は、約３日間であるのに対して、ラガー酵母２の一次発酵の時間は、約４日間である。
実施例４
出発麦汁及び実施例１で記載の製造されたビールでのアミノ酸含量を、蛍光検出器を備えたＨＰＬＣで決定した。
表６ａは、最終ビールでのアミノ酸濃度を示す。
Figure 0006967968
ハイブリッド酵母１は、最終ビールに残存しているアミノ酸がかなり少なく、このことは、ビールの熟成及びビールの安定性の点において有利である。ハイブリッド１を用いて発酵したビールは、それらのアミノ酸から形成されるストレッカーアルデヒドを、より少ない量生成する。
ストレッカーアルデヒドは、ビールの「熟成」風味の重要な成分であり、その一部は、びん詰めビールそれ自体のアミノ酸に起因している。知覚閾値が小さいストレッカーアルデヒドの形成に関与することが示されているアミノ酸として、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、及び、フェニアルアラニンがある(表２)。ストレッカーアルデヒドの形成は、その濃度が大きくなると、「熟成した風味」の知覚が容易になるので、重要な役割を果たす。ハイブリッド酵母１を用いて発酵したビールは、よって、アミノ酸の旺盛な消費が故に、熟成した風味はより少ない。
Figure 0006967968
ラガー酵母２、ハイブリッド酵母４、または、ハイブリッド酵母７を用いて別の発酵を行ない、発酵の７日目に、「グリーンビール」でのアミノ酸濃度を決定した。その結果を、表６ｂに示す。実験設定は、実施例２での記載のとおりであり、アミノ酸分析を、実施例９の記載にのとおりに行った。ハイブリッド、特に、ハイブリッド酵母７は、ラガー酵母２よりも、「グリーンビール」に残存しているアミノ酸が少なく、このことは、熟成化合物の形成のための前駆体がビールにより少ないことを意味している。
Figure 0006967968
 (na) 該当なし;
参照文献
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実施例５
５０Ｌのビールを、実施例３での記載にしたがって、種類の異なる２つの麦芽から調製された従来の麦芽をベースとする麦汁(１６度のプラート)を接種することによって調製した。
従来の麦芽をベースとする麦汁に対して、１,０００万個の生細胞/ｍｌの酵母を接種し、次いで、１６℃で、ジアセチルが、実施例１に記載のビールでの閾値を下回るまで発酵を行った。
他の麦芽が、１,５００万個の生細胞/ｍｌの酵母と共に接種され、次いで、ラガー酵母１については１６℃で、そして、ハイブリッド酵母１については１８℃で、ジアセチルが、実施例１に記載のビールでの閾値を下回るまで発酵を行った。
２つの異なる酵母株及び２つの異なる麦芽から作った２つの異なる麦汁が使用された。２つの株を並行してに比較するために、同じ麦汁と発酵条件を使用した。
ラガー酵母１
ハイブリッド酵母１
ビールに含まれるイソマルトース及びパノースのレベルを、ＨＰＬＣによって決定した。それらの結果を表７に示す。
Figure 0006967968
パノース及びイソマルトースの出発濃度は、麦汁に依存するが、文献によれば、０.５〜１ｇ/Ｌの範囲のイソマルトース及び０.４〜０.８ｇ/Ｌの範囲のパノースとされている(Ｃｌａｐｐｅｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ. １９７１)。よって、ハイブリッド酵母１は、６０％〜９３％の範囲のパノースを資化するものと考えられる。
パノース及びイソマルトースの資化の定量データを、２ｇ/Ｌのパノースまたは２ｇ/Ｌのイソマルトースを唯一の炭素源として含む所定の培地での異なる酵母の成長を測定することによって取得した。
凍結ストックからの酵母細胞を、ＹＰＤプレート(１％酵母エキス、２％ペプトン、２％グルコース及び２％寒天)に画線し、そして、成長している細胞を、液体ＹＰＤ(１％酵母エキス、２％ペプトン、２％グルコース)に接種した。
３μｌの終夜液体ＹＰＤ培養物を、アミノ酸を含まずに、硫酸アンモニウムを含み、フタル酸水素カリウムでｐＨ５.５にまで緩衝され(Ｈａｈｎ-Ｈａｇｅｒｄａｌ Ｂ, ｅｔ ａｌ．２００５)、２ｇ/Ｌのパノースまたは２ｇ/Ｌのイソマルトースを唯一の炭素源として含む、ＹＮＢ(６.７ｇ/Ｌ)の１００μｌ培養物へ接種した。細胞の成長は、撹拌を継続しながら、６００ｎｍでの光学密度を測定し、Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ Ｃ ＭＢＲ(Ｏｙ Ｇｒｏｗｔｈ Ｃｕｒｖｅｓ Ａｂ Ｌｔｄ、フィンランド)を用いて、２０℃の温度でインキュベーションすることによって、観察が行われた。改善された発酵特性を示したラガー及びエールの選択されたハイブリッド酵母株は、パノース(図１Ａ)及びイソマルトース(図２)を資化する能力を獲得した。この糖資化の改善は、図１Ａ及び図２Ａでの２つのハイブリッドで例示される。
同様の実験を、２ｇ/Ｌのパノースを唯一の炭素源として含む所定の培地を用いて、エール酵母１、ラガー酵母２、及び、ハイブリッド酵母７、ならびに、Ｓ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ及びハイブリッド酵母８について行われた。それらの結果は、図１Ｂ及び図１Ｃにそれぞれ示されており、生物学的再現性を表している。そこから見てとれるように、ラガー酵母１、ラガー酵母２、Ｓ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓのいずれもが、パノースを唯一の炭素源として資化することはできない。
同様の実験を、２ｇ/Ｌのイソマルトースを唯一の炭素源として含む所定の培地を用いて、エール酵母１、ラガー酵母２、及びハイブリッド酵母７についても行なった。それらの結果は、図２Ｂに示されており、生物学的再現性を表している。そこから見てとれるように、ラガー酵母１、ラガー酵母２、Ｓ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓのいずれもが、イソマルトースを唯一の炭素源として資化することはできない。
参照文献
Ｃｌａｐｐｅｒｔｏｎ, Ｊ. Ｆ. ａｎｄ Ｉ. Ｃ. ＭａｃＷｉｌｌｉａｍ (１９７１). "Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｎｏｒ ｗｏｒｔ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ｂｙ ｂｒｅｗｉｎｇ ｙｅａｓｔｓ." Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｒｅｗｉｎｇ ７７,６: ５１９-５２２.
Ｈａｈｎ-Ｈａｇｅｒｄａｌ Ｂ, Ｋａｒｈｕｍａａ Ｋ, Ｌａｒｓｓｏｎ ＣＵ, Ｇｏｒｗａ-Ｇｒａｕｓｌｕｎｄ Ｍ, Ｇｏｒｇｅｎｓ Ｊ, ｖａｎ Ｚｙｌ ＷＨ. (２００５). Ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｙｅａｓｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｆｏｒ ｌａｒｇｅ ｓｃａｌｅ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｕｓｅ. Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓ １０: ４-３１.
実施例６
凍結ストックからの酵母細胞を、ＹＰＤプレートに画線した。それらは、３ｍｌの液体ＹＰＤに接種するために用いられ、２２℃で、１５ｍｌの試験管内で、撹拌しながら、終夜、成長させた。３ｍｌの成長培養物を遠心分離し、上清は廃棄し、細胞を水に溶解した。当該試験管を再び遠心分離し、上清は廃棄し、３ｍｌの水に溶解した。
光学密度(ＯＤ６２０ｎｍ)を測定し、Ｂｉｏｌｏｇ Ｉｎｃ. ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ(Ｈａｙｗａｒｄ ＣＡ、米国)から市販されている９６ウェルプレートのウェルのすべての株及び溶液について、ＯＤ=０.２で開始するように調整が行われた。Ｂｉｏｌｏｇプレートのすべての溶液を、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ及び他の酵母のための手順にのために特定した。９６ウェルプレートを、２２℃で、４.５日間、インキュベーションした。
Ｂｉｏｌｏｇシステムは、単一の実験で、何千もの細胞表現型のレベルを定量的にアッセイすることを可能とする。アッセイの各ウェルは、一個体の表現型を試験するために設計されている。Ｂｉｏｌｏｇは、細胞呼吸を分析するための汎用レポーターシステムとして、酸化還元化学を使用する。それは還元されたテトラゾリウム染料有し、当該細胞が、ウェル内に存在する化合物を呼吸できる場合、あるいは、その特定のウェルにある当該化合物の存在下で呼吸できる場合、に発色する。
３つの酵母株、すなわち２つの親株(ラガー酵母１及びエール酵母１)、及びそれらから得たハイブリッド(ハイブリッド酵母１)を比較した。それら酵母株の詳細は、実施例１に記載されている。幾つかの条件下で、これら３つの株は、表現型において相違が認められた。ハイブリッド株１は、新しい表現型の特性、例えば、数種類のジペプチド類と幾つかのトリペプチド類を資化する能力を獲得することができた(表８ａを参照されたい)。
Figure 0006967968
 ＋ 表示したペプチド類を唯一の窒素源として含む培地での成長を示す。
− 表示したペプチド類を唯一の窒素源として含む培地での成長がないことを示す。
同様の実験において、６つの酵母株、すなわち、ラガー酵母１、ラガー酵母２、エール酵母１、ハイブリッド酵母１、ハイブリッド酵母４、及びハイブリッド酵母７の酵母株を比較した。それらの結果を、以下の表８ｂに示す。そこから見てとれるように、ハイブリッドは、親株では見られなかった新しい特性を有している。ラガー酵母１は、先の実験では全く成長が認められなかったが、この実験では、Ｉｌｅ−Ａｓｎにで若干の成長を示した。しかしながら、ラガー酵母１の成長は、ハイブリッド酵母１の成長と比べて、有意に低いものであった。
Figure 0006967968
 ハイブリッド酵母４及び７は、Ｍｅｔ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｔｙｒ、Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−ＬｅｕまたはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙを唯一の窒素源として有意に成長することはなかった。
ハイブリッド酵母１も、ラガー酵母１では認められない幾つかの表現型、例えば、式Ａｌａ−Ｘａａ（式中、Ｘａａは任意のアミノ酸である）の式で表される数種類のジペプチド類で成長する特性を獲得した。この能力は、ハイブリッド酵母が同様に資化することができるアラントインを資化する能力としばしば関連付けられている(表９ａを参照されたい)。
Figure 0006967968
 ＋ 表示したペプチド類を唯一の窒素源として含む培地での成長を示す。
− 表示したペプチド類を唯一の窒素源として含む培地での成長がないことを示す。
−/＋ 増殖遅延または遅滞期での成長を意味する。
また、表９ｂに示すように、ハイブリッド酵母４及び７は、Ａｌａ−Ｘａａジペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる。
Figure 0006967968
ジペプチド類及びトリペプチド類は、ＦＡＮの一部である。ＦＡＮは、遊離アミノ窒素であり、麦汁またはビールの窒素含量の評価基準である。 ＦＡＮは、麦汁に含まれるアミノ酸、アンモニウムイオン、及び小ペプチド類から形成され、酵母にとって望ましい発酵性能を確保する(Ｌｅｋｋａｓ Ｃ, ｅｔ ａｌ. ２００９)。多くの異なるジペプチドの組み合わせが、麦汁に認められ得る。
ハイブリッド酵母１は、麦汁に含まれ得る数種類の異なる試験をしたジペプチド類/トリペプチド類を資化することができ、及び、それ故に、細胞バイオマスの前駆体、炭素源、または、風味の前駆体となり得るＦＡＮ由来のより広範囲の基質を有する。
参照文献
Ｌｅｋｋａｓ Ｃ, Ｈｉｌｌ ＡＥ, Ｔａｉｄｉ Ｂ, Ｈｏｄｇｓｏｎ Ｊ, Ｓｔｅｗａｒｔ ＧＧ (２００９). Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｗｏｒｔ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ ｂｒｅｗｉｎｇ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ. Ｊ. Ｉｎｓｔ. Ｂｒｅｗ. １１５ (２), １３４-１３９.
実施例７
メリビオース資化性の定性データは、９６ウェルプレートで成長した酵母のＹＰＤ液体培養物を、５０μｇ/ｍｌのＸ-アルファゲル(ｃｌｏｎｔｅｃｈ, Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ, 米国)を含むＹＰＧａｌａｃｔｏｓｅプレート(１％酵母エキス、２％ペプトン、２％グルコース及び２％寒天)へとレプリカプレーティングし、それらプレートを、５日間、２２℃で、インキュベーションすることによって行われた。Ｘ-アルファゲルは、メリビオースの発色類似体であり、酵母がメリビオースを資化できる場合には、酵母コロニーは青色となり、また、酵母がメリビオースを資化できない場合には、酵母コロニーは白色となる。
結果は（表９）、試験をしたすべてのラガー酵母が、メリビオース資化性が陽性(青のコロニー色)であり、試験をしたすべてのエール酵母は、メリビオース資化性が陰性(白のコロニー色)であり、ハイブリッドは、遺伝で受け継いだものに応じて、メリビオース資化性が陽性または陰性(青または白のコロニー色)であったことを示す。
Figure 0006967968
メリビオースの定量データは、２ｇ/Ｌのメリビオースを唯一の炭素源として含む所定の培地での酵母の成長を測定することによって行われた。
凍結ストックからの酵母細胞を、ＹＰＤプレートに画線し、そして、成長している細胞を、液体ＹＰＤに接種した。
３μｌの終夜液体ＹＰＤ培養物を、アミノ酸を含まずに、硫酸アンモニウムを含み、フタル酸水素カリウムでｐＨ５.５にまで緩衝され(Ｈａｈｎ-Ｈａｇｅｒｄａｌ Ｂ． ｅｔ ａｌ．２００５)、２ｇ/Ｌのメリビオースを唯一の炭素源として含む、ＹＮＢ(６.７ｇ/Ｌ)の１００μｌ培養物へ接種した。細胞の成長は、撹拌を継続しながら、６００ｎｍでの光学密度を測定し、Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ Ｃ ＭＢＲ(Ｏｙ Ｇｒｏｗｔｈ Ｃｕｒｖｅｓ Ａｂ Ｌｔｄ、フィンランド)を用いて、２０℃の温度でインキュベーションすることによって、観察が行われた。ラガー及びエールのハイブリッドは、メリビオースを資化する能力を獲得したが、すべてのハイブリッドについて言えるわけではない(このことは、図３の３つのハイブリッドを用いて例示される)。
参照文献:
Ｈａｈｎ-Ｈａｇｅｒｄａｌ Ｂ, Ｋａｒｈｕｍａａ Ｋ, Ｌａｒｓｓｏｎ ＣＵ, Ｇｏｒｗａ-Ｇｒａｕｓｌｕｎｄ Ｍ, Ｇｏｒｇｅｎｓ Ｊ, ｖａｎ Ｚｙｌ ＷＨ. (２００５). Ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｙｅａｓｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｆｏｒ ｌａｒｇｅ ｓｃａｌｅ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｕｓｅ. Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓ １０: ４-３１.
実施例８
改善された二糖及び三糖の資化
５０Ｌのビールを、実施例３での特定されるように、麦芽ベースの麦汁を、１,５００万個の生細胞/ｍｌで接種し、次いで、ジアセチルが、３０ｐｐｂを下回るまで発酵を行うことによって調製された。麦芽は、従来の麦芽製造用の大麦、または、ヌルＬＯＸ大麦から調製した。
２つの異なる酵母株、すなわちラガー酵母１及びハイブリッド酵母１を使用した。ラガー酵母１を用いた発酵が１８℃で行われたのに対して、ハイブリッド酵母１を用いた発酵が１６℃で行われたこと以外は、２つの株を並行して比較するために、同じ麦汁と発酵条件を使用した。同じ株を用いて調製された３つの別々の醸造物が造られ、そして、異なる糖類のレベルを、ＮＭＲによって決定した。代表的な結果が図４に示されており、びん詰めされた最終ビールにおけるものとは異なる特定の糖類のレベルに関する。
ＮＭＲの結果は、ハイブリッド酵母１が、イソマルトース、パノース、ニゲロース、コージビオース、及び、その他の未同定の炭水化物の改善された資化を有していたことを示す(図４)。しかしながら、ラガー酵母１は、これらの糖類を資化することはできない。
二糖のイソマルトースやマルツロース、及び三糖類のパノースやマルトトリオースは、ビール醸造に使用される麦汁培地において副次的な糖類である(Ｃｌａｐｐｅｒｔｏｎ ａｎｄ ＭａｃＷｉｌｌｉａｍ １９７１)。我々の結果は、ラガー酵母１で醸造したビールに認められたニゲロース、コージビオース、及び、トレハロースなどのその他の二糖類も存在していることを示す(図４)。低い量で存在するこれらの糖類の糖資化の改善は、ハイブリッド酵母１による良好な糖全般の資化及びエタノール収率産生の改善の主要因となりえる。
実施例９
第１の世代に由来する５０Ｌのビールを、すべての麦芽から調製された従来の麦芽ベースの麦汁(１３.６度のプラート)に対して、接種物として１,５００万個の酵母生細胞/ｍｌを接種し、次いで、１８℃で、５日間、そして、１４℃で、２日間、発酵を行うことによって調製した。細胞接種物は、前の増殖タンクから取得された。麦汁を調製するために使用された麦芽は、デンマークのＤＭＧから購入した。６日目に、「グリーンビール」の試料に相当する発酵した麦汁の試料を取得し、遠心分離し、分析に供されるまで、上清を−２０℃で凍結した(表１０)。遊離アミノ酸の濃度を、実質的に製造業者の指示書にしたがって、ＷａｔｅｒｓのＡｃｃＱ-Ｔａｇ Ｕｌｔｒａ誘導体化キットを使用して、Ｐｈｏｔｏ Ｄｉｏｄｅ Ａｒｒａｙ検出を備えたＵＰＬＣによって決定した。予め混合された溶離剤Ａ及びＢを使用して、Ｗａｔｅｒｓ ＡｃｃＱ-Ｔａｇ Ｕｌｔｒａアミノ酸分析用カラムで、製造業者(Ｗａｔｅｒｓ)の指示書にしたがって、分離を行なった。発酵を行うために使用した当初の麦汁の試料も、すでに発酵した試料との比較に供した。すいべてのグリーンビール試料と当初の麦汁の試料との間でアミノ酸濃度の比較が行われた(表１０)。
ハイブリッド酵母で発酵したグリーンビールでの残存アミノ酸のレベルは、ラガー酵母１で発酵したグリーンビールと比較して、遥かに低く、このことは、ビールの熟成とビールの安定性に関して有利である。ハイブリッド酵母で造られたビールにおいて、貯蔵している間に、より少ないストレッカーアルデヒドが、それらのアミノ酸から形成されるものと考えられる。ストレッカーアルデヒドは、ビールの「熟成した」風味の重要な成分であり、その一部は、びん詰めされたビールそれ自体のアミノ酸から発生するものである。知覚閾値の低いストレッカーアルデヒドの形成への関与が示されているアミノ酸として、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、及びフェニルアラニンがある(Ｂａｅｒｔ, Ｄｅ Ｃｌｉｐｐｅｌｅｅｒ ｅｔ ａｌ. ２０１２)。ストレッカーアルデヒドの形成は、その濃度が増大することで、「熟成風味」の知覚度が高まるので、重要な役割を果たす。ハイブリッド酵母１及び４を用いて醸造したビールは、アミノ酸の旺盛な消費に起因して、熟成した風味はより少なく、この効果は、高比重発酵または高濃度のＦＡＮ供給源を含む麦汁麦芽において、さらに顕著になるであろう。
ハイブリッド酵母１及び４によって、アミノ酸プロリンも資化されたが、 グリーンビールでのラガー酵母では資化されなかった。アミノ酸プロリンは、取り込みが最も困難なアミノ酸であるにもかかわらず、麦汁での主要なアミノ酸構成成分であり、したがって改善されたプロリン資化性を有するハイブリッド酵母は、ラガー酵母が資化できない、この窒素源を資化する追加の能力を有することとなる。
Figure 0006967968
Figure 0006967968
Ｂａｅｒｔ, Ｊ. Ｊ., Ｊ. Ｄｅ Ｃｌｉｐｐｅｌｅｅｒ, Ｐ. Ｓ. Ｈｕｇｈｅｓ, Ｌ. Ｄｅ Ｃｏｏｍａｎ ａｎｄ Ｇ. Ａｅｒｔｓ (２０１２). "Ｏｎ ｔｈｅ Ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ Ｆｒｅｅ ａｎｄ Ｂｏｕｎｄ Ｓｔａｌｉｎｇ Ａｌｄｅｈｙｄｅｓ ｉｎ Ｂｅｅｒ." Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６０(４６): １１４４９-１１４７２.
実施例１０
実施例１に記載のハイブリッド酵母１のゲノム配列を、以下のようにして決定した。
ゲノムＤＮＡの抽出、及び、全ゲノム配列決定、及び、ゲノムの組み立ては、ＬＧＣ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ＧｍｂＨ(ベルリン、ドイツ)によって行われた。追加の個々の遺伝子の配列決定のために、それらの株のゲノムＤＮＡ抽出を、ＭａｓｔｅｒＰｕｒｅ(商標)酵母ＤＮＡ精製キット(Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ, Ｉｌｕｍｉｎａ Ｄｅｎｍａｒｋ ＡｐＳ, コペンハーゲン、デンマーク)によって行なった。ゲノムＤＮＡからのＰＣＲ増幅を、ハイフィディリティＰＣＲ用酵素ミックス、または、Ｄｒｅａｍ Ｔａｑポリメラーゼを用いて、低い数のＰＣＲサイクルで行い、それら双方は共に、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｂａｌｔｉｃｓ ＵＡＢ(Ｖｉｌｎｉｕｓ, リトアニア)のものである。ＰＣＲ産物は、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ ＰＣＲ Ｃｌｅａｎ-ｕｐ(Ｍａｃｈｅｒｅｙ-Ｎａｇｅｌ, Ｄｕｒｅｎ, ドイツ)によって精製した。ＰＣＲ産物のクローニングを、配列決定用ＴＯＰＯ(登録商標)ＴＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ(登録商標)キットを用いて実施し、β-Ｘ-ガラクトースが加えられたＬＢアンピシリンプレートで選択された。プラスミドを、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｂａｌｔｉｃｓ ＵＡＢ(Ｖｉｌｎｉｕｓ, リトアニア)のＧｅｎｅＪＥＴ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｍｉｎｉｐｒｅｐキットで精製した。プラスミドの配列決定は、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ(Ｅｄｅｒｓｂｅｒｇ, ドイツ)で行われた。
ハイブリッド酵母１、ラガー酵母１、及び、エール酵母１を、組み立てたゲノム配列、及び/または、ＰＣＲ産物の配列のいずれかを用いて、様々な選択した遺伝子について分析した。タンパク質配列を、遺伝コードを用いて、遺伝子配列、または、ＰＣＲ産物の配列から推定した。
ハイブリッド酵母４、ハイブリッド酵母７、及びラガー酵母２を、ＰＣＲ産物の配列を用いて、様々な選択した遺伝子について分析した。ハイフィディリティＰＣＲ用酵素を用いたＰＣＲ増幅によって配列が取得され、次いで、適用可能であれば、各々のＰＣＲクローンのクローニング及び配列決定が行われた。ハイブリッド酵母４及びハイブリッド酵母７の対立遺伝子をＰＣＲ、クローニング、及び配列決定によって同定した。ラガー酵母２の対立遺伝子は、ＰＣＲ及び配列決定(ＩＭＡ１)によって同定されるか、あるいは、ゲノム配列(ＡＧＴ１)から組み立てられた。タンパク質配列は、遺伝コードを用いて、ＰＣＲ産物の配列から推定された。
本明細書に記載の長いＩＭＡ１対立遺伝子は、３つのアミノ酸の組み合わせ、すなわち第１６５位のＩ(イソロイシン)またはＴ(トレオニン)、第２８７位のＲ(アルギニン)またはＫ(リジン)、及び第３３６位のＹ(チロシン)またはＦ(フェニアルアラニン)の組み合わせによって定義される。エール１ＬＯＮＧ_ＩＭＡ１対立遺伝子についてのアミノ酸シグネチャーモチーフは、Ｉ-Ｒ-Ｆ及びＩ-Ｋ-Ｆである。ラガー酵母１及びラガー酵母２は、Ｔ-Ｒ-Ｙモチーフを有している。ハイブリッド酵母１は、Ｉ-Ｋ-Ｆ対立遺伝子及びＴ-Ｒ-Ｙ対立遺伝子を含む。ハイブリッド酵母４は、Ｉ-Ｒ-Ｆモチーフを含む。ハイブリッド酵母４は、Ｉ-Ｒ-Ｙのシグネチャーモチーフを有する新規のハイブリッド対立遺伝子も含む。ハイブリッド酵母７は、Ｉ-Ｋ-Ｆ対立遺伝子及びＴ-Ｒ-Ｙ対立遺伝子を含む。ハイブリッド酵母７は、ハイブリッド酵母４によってコードされるタンパク質と同一であるＩ-Ｒ-Ｙモチーフを有する新規のハイブリッド対立遺伝子も含む。
表１１aには、ラガー酵母１、エール酵母１、及びハイブリッド酵母１でのジペプチド資化性に関係した様々な遺伝子の状態をまとめてある。
Figure 0006967968
 *ＤＡＬ５は、親のエール酵母１からハイブリッド酵母１が受け継ぐ遺伝子の一例である。ＤＡＬ５に関連するＳｃという用語は、配列番号６のＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＤＡＬ５ タンパク質を指す。ＤＡＬ５タンパク質配列のアライメントを図５に示す。
**ＰＴＲ２は、ハイブリッド酵母１が増大したコピー数を有している一例である。よって、ハイブリッド酵母１は、ラガー酵母１から非Ｓｃ対立遺伝子を、そして、その双方の親株から少なくとも２つのＳｃ対立遺伝子を受け継いでいる。ハイブリッド酵母１のＰＴＲ２対立遺伝子の断片だけを調べた。
***ＵＢＲ１は、ハイブリッド酵母１において活性相補を有する遺伝子の一例である。エール酵母１は、一端が欠失されているタンパク質(１９５１個のアミノ酸の代わりに９００個のアミノ酸)をコードし、このことは、Ｃｕｐ９ｐ分解活性の要因であり、対応してＰＴＲ２発現の抑制の要因であるドメインの欠落をもたらし、ハイブリッド酵母１は、ラガー酵母１由来のＳｃ対立遺伝子と非Ｓｃ対立遺伝子の双方を受け継いでおり、よって、Ｃｕｐ９ｐ分解に向かうＵｂｒ１ｐ活性を相補し、対応してさらにＰＴＲ２の能力が活性化される。エール酵母１、ハイブリッド酵母１、及び、ラガー酵母１に由来するＰＴＲ２のＳｃ対立遺伝子のアライメントが図６に示されており、また、ラガー酵母１、及びハイブリッド酵母１の非Ｓｃ対立遺伝子のアライメントはが図７に示されている。
ハイブリッド酵母１及びハイブリッド酵母７のゲノム配列を、さらに研究し、その結果が、表１１ｂに示されている。これらの分析は、ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＬＯＱＪ００００００００、バージョンＬＯＱＪ０１００００００、及び、ＤＤＢＪ/ＥＭＢＬ/ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＬＯＱＫ００００００００、バージョンＬＯＱＫ０１００００００ＴＰＴＲ２、それぞれ、で入手可能なゲノム配列に基づくものである。
対立遺伝子変異のＰＴＲ２分析を、当該ゲノム配列(上記の受託番号を参照されたい)に基づいて行なった。ハイブリッド酵母１及びハイブリッド酵母７の双方は、非Ｓｃ_ＰＴＲ２コピーを保持していた。表１１ａにおいて、ハイブリッド酵母１の断片化したＳｃ_コピーが示されている。表１１ｂは、当該ゲノム配列でのハイブリッド酵母１のＳｃ_ＰＴＲ２の無傷のコピーを示す。表１１ａで示すように、ハイブリッド酵母１が、ＰＴＲ２をコードする３つの対立遺伝子を含むことは可能である。同様に、ハイブリッド酵母７も、Ｓｃ_ＰＴＲ２を有している。双方のハイブリッドにおいて、Ｓｃ_ＰＴＲ２タンパク質配列は、Ｓｃ_ＰＴＲ２エール酵母１とＳｃ_ＰＴＲ２ラガー酵母１及び２コピーとの間でのハイブリダイゼーションを示す。
対立遺伝子変異のＤＡＬ５分析を、当該ゲノム配列(上記の受託番号を参照されたい)に基づいて行なった。ハイブリッド酵母１及びハイブリッド酵母７は、エール酵母１由来のＳｃ_ＤＡＬ５を保持していた。同様に、ハイブリッド酵母７は、非Ｓｃ_ＤＡＬ５を保持していた。
対立遺伝子変異のＵＢＲ１分析を、当該ゲノム配列(上記の受託番号を参照されたい)に基づいて行なった。双方のラガー親酵母は、一端が異なって欠失されているＳｃ_コピーを有している。以前に行ったラガー１ゲノムデータ検索では、断片化した配列しか得られず、早期終止コドンを決定するには至らなかった。双方のハイブリッド酵母は、ラガーの親に由来する非Ｓｃ_ＵＢＲ１を保持していた。双方のハイブリッドで検出されたＳｃ_コピーは、エール１の親から受け継がれた。
Figure 0006967968
表１２ａには、ラガー酵母１、エール酵母１、及び、ハイブリッド酵母１での糖資化に関係した様々な遺伝子の状態をまとめてある。
Figure 0006967968
表１２ｂには、ラガー酵母２、ハイブリッド酵母４、及び、ハイブリッド酵母７での糖資化に関係した様々な遺伝子の状態をまとめてある。
Figure 0006967968
数種類の遺伝子が、イソマルトースの資化に関係し得る。これには、糖輸送体で、イソマルトースを輸送することができるＡｇｔ１ｐを含む。さらに、α-１,６-グルコシダーゼである５つの異なるイソマルターゼがあるが、それらは、他のグルコシダーゼ活性も有する。
ゲノム配列情報に基づいて、ラガー酵母１と同定された完全コード配列を有するＩＭＡ１遺伝子は皆無であり、ＮＣＢＩデータベースで認められた他のＳ．ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ株も、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＩＭＡ１遺伝子のコピーを有していなかった。興味深いことに、ハイブリッド酵母１は、異なる２つの長さのＩＭＡ１遺伝子の４つの異なる対立遺伝子を含む。
ＩＭＡ５様配列が、ラガー酵母１のゲノムに存在する。ハイブリッド酵母１には、２つの対立遺伝子があり、１つは、ラガー酵母１と同一の非Ｓ.ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅコピーであり、及び、１つは、エール１酵母で認められた配列と非常に類似しているが、３つのアミノ酸が改変されているＳ.ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅコピーである。
マルトトリオース及びイソマルトースの輸送は、遺伝子ＡＧＴ１によってコードされる高親和性α-グルコシド輸送体によって促されることが示された。この輸送体は、広範な基質特異性を有している。
我々は、ラガー酵母１において、Ｓ.ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅを起源としないＡＧＴ１輸送体の完全コピーを１つだけ見出し、Ｓ.ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅコピーの一端が欠失されていた。これに対して、ハイブリッド酵母１は、ＡＧＴ１遺伝子の３つの完全コピーを有しており、１つはラガー酵母１で見出される非Ｓ.ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅコピーと同一であり、２つのＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ対立遺伝子は、エール酵母１で見出されるＡＧＴ１遺伝子と非常に類似しているが、１つのアミノ酸が改変されている。
ハイブリッド酵母４において、１つのコピーが１つのアミノ酸の変化を持つ、非Ｓ.ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＡＧＴ１の２つの全長コピーが同定された。ハイブリッド酵母７において、３つの全長コピーが同定され、エール酵母１ ＡＧＴ１と完全に同一である１つと、非Ｓ.ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＡＧＴ１の２つの対立遺伝子であり、１つのコピーがアミノ酸の変化を有していた。
上記のゲノム配列の研究に加えて、上記のエール酵母１のＩＭＡ１_ショート遺伝子座に特異なプライマーを使用して、クローニングと配列決定を行うことによって、ラガー酵母１、及び、ラガー酵母２、ならびに、ハイブリッド酵母１、ハイブリッド酵母４、及び、ハイブリッド酵母７でのＩＭＡ１ショートに関する別の情報が取得された。ゲノム配列 情報に基づくと、ＩＭＡ１_ショート遺伝子は、ラガー１及びラガー２酵母ゲノム配列には認められなかった。しかしながら、双方のラガー酵母親由来のＩＭＡ１_ショートのクローニングと配列決定により、１つの遺伝子の存在を示したが、対応するエール酵母１ ＩＭＡ１ショートタンパク質とは６つのアミノ酸が相違しているタンパク質をコードしている。このデータは、以下の表１２ｃにまとめられている。
ハイブリッド酵母１において、クローニングと配列決定により、３つのＩＭＡ１ショート対立遺伝子が同定され、２つの対立遺伝子は、本明細書において上記のものであり、さらなる対立遺伝子は、ヌクレオチド配列とタンパク質レベル(配列番号１に示したタンパク質配列)からも基づいて、ハイブリッド特性を有している。ハイブリッド酵母４及び７は、双方の親に由来するＩＭＡ１_ショートを保持していたが、クローニングにより、双方のハイブリッドにおいて固有のアミノ酸の改変を有する別の対立遺伝子も同定された。よって、３つすべてのハイブリッド株は、３つのＩＭＡ１ショート対立遺伝子を含んでいた。
対立遺伝子変異のＩＭＡ５分析は、当該ゲノム配列で入手可能な配列に基づいて行われた。表１２ａにおいて上記の対立遺伝子に加えて、ハイブリッド酵母１は、さらなる１つの対立遺伝子を含んでいた。よって、ハイブリッド酵母１及びハイブリッド酵母７の双方は、Ｓｃ_ＩＭＡ５及び非Ｓｃ_ＩＭＡ５コピーを保持していた。ハイブリッド酵母７は、Ｓｃ_ＩＭＡ５遺伝子座でのエール酵母１とラガー酵母２との間の組み換えに起因する固有のハイブリッドＳｃ_ＩＭＡ５対立遺伝子を有している。ヌクレオチド配列から、ハイブリダイゼーションは明らかであり、また、タンパク質配列で見て取ることができる。
Figure 0006967968
Figure 0006967968
実施例１１
マルツロース、マルトトリオース、及び、コージビオースの資化のデータは、２ｇ/Ｌのマルツロースまたは２ｇ/Ｌのマルトトリオースまたは２ｇ/Ｌのコージビオースを唯一の炭素源として含む所定の培地での異なる酵母の成長を測定することによって取得された。
凍結ストックからの酵母細胞を、ＹＰＤプレート(１％酵母エキス、２％ペプトン、２％グルコース及び２％寒天)に画線し、成長している細胞を、液体ＹＰＤ(１％酵母エキス、２％ペプトン、２％グルコース)に接種した。
３μｌの終夜液体ＹＰＤ培養物を、アミノ酸を含まずに、硫酸アンモニウムを含み、フタル酸水素カリウムでｐＨ５.５にまで緩衝され(Ｈａｈｎ-Ｈａｇｅｒｄａｌ Ｂ． ｅｔ ａｌ．２００５)、２ｇ/Ｌのマルツロースまたは２ｇ/Ｌのマルトトリオースまたは２ｇ/Ｌのコージビオースを唯一の炭素源として含む、ＹＮＢ(６.７ｇ/Ｌ)の１００μｌ培養物へ接種した。
細胞の成長を、撹拌を継続しながら、６００ｎｍでの光学密度を測定し、Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ Ｃ ＭＢＲ(Ｏｙ Ｇｒｏｗｔｈ Ｃｕｒｖｅｓ Ａｂ Ｌｔｄ、フィンランド)を用いて、２０℃の温度でインキュベーションすることによって、観察が行われた。
エール酵母１、ハイブリッド酵母１、ハイブリッド酵母４、及び、ハイブリッド酵母７が、マルトトリオースを唯一の炭素源として資化できるかどうかについても試験を行った。その結果を図１３に示す。
エール酵母１、ハイブリッド酵母１、ハイブリッド酵母４、ハイブリッド酵母７、Ｓ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ、及び、ハイブリッド酵母８が、マルツロースを唯一の炭素源として資化できるかどうかについても試験を行った。その結果を図１４に示す。
エール酵母１、ラガー酵母１、ラガー酵母２、Ｓ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ、ハイブリッド酵母１、ハイブリッド酵母４、ハイブリッド酵母７、及びハイブリッド酵母８が、コージビオースを唯一の炭素源として資化できるかどうかについても試験を行った。その結果を図１５に示す。示されるように、ラガー酵母１とラガー酵母２はいずれも、コージビオースを唯一の炭素源として資化できないが、Ｓ. ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓだけが、ほんの僅かコージビオースを唯一の炭素源として資化できる。
実施例１２
ハイブリッド酵母７を用いて発酵をした場合に得られる真正発酵度をさらに検証するために、大規模試験が行われた。異なる混合物から大規模に調製した麦汁を、ラガー酵母２またはハイブリッド酵母７のいずれかを用いて、ジアセチルが所定値になるまで、異なる場所で発酵させた。真正発酵度(ＲＤＦ)が、決定された。表１３は、ラガー酵母２を用いて発酵させた後に得たＲＤＦと比較して、ハイブリッド酵母７を用いて発酵させた後に得たＲＤＦ％の絶対的増加を示す。
麦芽、大麦(すなわち、麦芽にしていない大麦粒)及び米を異なる比率で糖化させることによって、麦汁を調製した。加えて、様々な量のグルコースシロッを添加した。異なる麦汁を調製するために用いた麦芽:大麦:グルコースシロップ:米の比率も、表１３に示す。
Figure 0006967968
略語
ＲＤＦ - 真正発酵度
ＹＰＤ - (１％酵母エキス、２％ペプトン、２％グルコース)
ＹＰＤプレート (１％酵母エキス、２％ペプトン、２％グルコース及び２％寒天)
ＹＮＢ (酵母用ニトロゲンベース)
ＯＤ: 光学密度
ＨＰＬＣ: 高速液体クロマトグラフィー
ＹＰガラクトースプレート (１％酵母エキス、２％ペプトン、２％ガラクトース及び２％寒天)

Claims (21)

  1. 以下の特性および遺伝子型を有する酵母細胞:
    特性ＩＩ．パノースを唯一の炭素源として資化することができ、以下の遺伝子型を有する、
    遺伝子型ＩＶ：ＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも３つの遺伝子を含み、ＩＭＡ１ｐをコードする前記少なくとも３つの遺伝子が、個別に、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも９０％の配列同一性を上記配列と共有し、ＩＭＡ１ｐと生物学的機能を共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される、および
    遺伝子型ＶＩ：ＡＧＴ１をコードする少なくとも２つの遺伝子を含み、ＡＧＴ１をコードする前記少なくとも２つの遺伝子が、個別に、配列番号１８のＡＧＴ１、配列番号１９のＡＧＴ１、配列番号２０のＡＧＴ１、配列番号２６のＡＧＴ１、配列番号２７のＡＧＴ１、配列番号２８のＡＧＴ１、配列番号２９のＡＧＴ１、配列番号３０のＡＧＴ１、配列番号３１のＡＧＴ１、配列番号３２のＡＧＴ１、及び少なくとも９０％の配列同一性を上記配列と共有し、ＡＧＴ１と生物学的機能を共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される、ならびに
    特性ＶＩＩＩ．メリビオースを唯一の炭素源として資化することができる。
  2. 前記酵母細胞が、
    特性Ｉ：イソマルトースを唯一の炭素源として資化することができる、
    という特性をさらに有する、請求項１に記載の酵母細胞。
  3. 前記酵母細胞が、前記パノースが、１〜５ｇ/Ｌの範囲内の濃度で存在している場合に
    、パノースを唯一の炭素源として資化することができる、請求項１に記載の酵母細胞。
  4. 前記酵母細胞が、
    特性ＩＩＩ：１つ以上のジペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる、
    という特性をさらに有する、請求項１〜３のいずれか一１項に記載の酵母細胞。
  5. 前記ジペプチドが、Ｍｅｔ−Ｔｙｒ、Ｌｅｕ−Ｔｙｒ、Ｖａｌ−Ｍｅｔ、Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｓｎ、Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ｌｙｓ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｓｎ、Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｖａｌ−Ｇｌｎ、Ｖａｌ−ＳｅｒまたはＡｌａ−Ｘａａからなる群から選択され、Ｘａａが任意のアミノ酸である、請求項４に記載の酵母細胞。
  6. 前記酵母細胞が、
    特性ＩＶ：１つ以上のトリペプチド類を唯一の窒素源として資化することができる、
    という特性をさらに有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  7. 前記酵母細胞が、
    特性Ｖ：５日間、前記酵母細胞の成長を許容する条件下で、インキュベーションした後に、１つ以上のアミノ酸のレベルを出発濃度の１０％を超えないレベルにまで下げることができる、
    という特性をさらに有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  8. 前記酵母細胞が、
    特性ＶＩ：前記酵母細胞が少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、ジアセチルが所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、プラート度当たり、少なくとも４.７プロミルのエタノールを生成することができる、
    という特性をさらに有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  9. 前記酵母細胞が、
    特性ＶＩＩ：前記酵母細胞が少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、ジアセチルが所定のレベルになるまでインキュベーションされる場合に、少なくとも６８の真正発酵度で糖を発酵させることができる、
    という特性をさらに有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  10. 前記酵母細胞が特性ＶＩＩを有し、特性ＶＩＩが、前記酵母細胞がその親株の一つの株の真正発酵度（ＲＤＦ）より高い、少なくとも１のＲＤＦで糖を発酵させることができることである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  11. 前記酵母細胞が、
    特性Ｘ：前記酵母細胞が少なくとも１０度のプラート糖含量を有する麦汁組成物に対して添加され、及び、４日間インキュベーションされる場合に、多くとも１,２００万個の
    細胞/ｍｌが懸濁するように、沈降することができる、
    という特性をさらに有する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  12. 前記酵母細胞が、
    特性ＩＸ：イソマルトース、パノース、及び/または、メリビオースに加えて、１つ以
    上の二糖及び/または三糖を資化することができる、
    という特性をさらに有する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  13. 前記二糖が、コージビオース、ニゲロース、スクロース、ツラノース、ロイクロース、及び、パラチノースからなる群から選択される、請求項１２に記載の酵母細胞。
  14. 前記酵母細胞が、
    特性ＸＩ：長くとも４日間、例えば、長くとも３日間の一次発酵で麦汁を発酵することができる、
    という特性をさらに有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  15. 前記酵母細胞が、
    遺伝子型Ｉ：ＤＡＬ５をコードする遺伝子を含み、ＤＡＬ５をコードする対立遺伝子が、配列番号６のＤＡＬ５、配列番号３９のＤＡＬ５、配列番号４０のＤＡＬ５、及び、少なくとも９０％の配列同一性を上記配列と共有し、ＤＡＬ５と生物学的機能を共有する、それらの機能的相同体からなる群から選択される、遺伝子型および／または
    遺伝子型ＩＩ：ＰＴＲ２をコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含み、ＰＴＲ２をコードする前記少なくとも２つの対立遺伝子が、個別に、配列番号７のＰＴＲ２、配列番号８のＰＴＲ２、配列番号９のＰＲＴ２、配列番号３７を含むＰＲＴ２、配列番号３８のＰＲＴ２、配列番号４３のＰＲＴ２、配列番号４４のＰＲＴ２、及び少なくとも９０％の配列同一性を上記配列と共有し、ＰＴＲ２と生物学的機能を共有する、それらの各々の機能的相同体をコードする遺伝子からなる群から選択される、遺伝子型
    を有する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  16. 前記酵母細胞が、
    遺伝子型ＩＩＩ：ＵＢＲ１をコードする遺伝子を含む、
    遺伝子型を有し、ＵＢＲ１が、配列番号１０を含むＵＢＲ１、配列番号１１のＵＢＲ１、配列番号４１を含むＵＢＲ１、配列番号４２のＵＢＲ１、配列番号４５を含むＵＢＲ１、及び、少なくとも９０％の配列同一性を上記配列と共有し、ＵＢＲ１と生物学的機能を共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  17. 前記酵母細胞が、
    遺伝子型ＩＶ：ＩＭＡ１ｐをコードする少なくとも４つの遺伝子を含む、
    遺伝子型を有し、前記ＩＭＡ１ｐをコードする前記少なくとも４つの遺伝子が、個別に、配列番号１２のＩＭＡ１ｐ、配列番号１３のＩＭＡ１ｐ、配列番号１４のＩＭＡ１ｐ、配列番号１５のＩＭＡ１ｐ、配列番号２１のＩＭＡ１ｐ、配列番号２２のＩＭＡ１ｐ、配列番号２３のＩＭＡ１ｐ、配列番号２４のＩＭＡ１ｐ、配列番号２５のＩＭＡ１ｐ、及び、少なくとも９０％の配列同一性を上記配列と共有し、ＩＭＡ１ｐと生物学的機能を共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  18. 前記酵母細胞が、
    遺伝子型Ｖ：ＩＭＡ５ｐをコードする遺伝子、好ましくはＩＭＡ５ｐをコードする少なくとも２つの対立遺伝子を含む、
    遺伝子型を有し、ＩＭＡ５ｐをコードする前記少なくとも２つの遺伝子が、個別に、配列番号１６のＩＭＡ５ｐ、配列番号１７のＩＭＡ５ｐ、配列番号３４のＩＭＡ５ｐ、配列番号３５のＩＭＡ５ｐ、配列番号３６のＩＭＡ５ｐ、及び、少なくとも９０％の配列同一性を上記配列と共有し、ＩＭＡ５ｐと生物学的機能を共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  19. 前記酵母細胞が、
    遺伝子型ＶＩ：配列番号１８のＡＧＴ１、配列番号１９のＡＧＴ１、配列番号２０のＡＧＴ１、配列番号２６のＡＧＴ１、配列番号２７のＡＧＴ１、配列番号２８のＡＧＴ１、配列番号２９のＡＧＴ１、配列番号３０のＡＧＴ１、配列番号３１のＡＧＴ１、配列番号３２のＡＧＴ１、及び少なくとも９０％の配列同一性を上記配列と共有し、ＡＧＴ１と生物学的機能を共有する、それらのいずれかの機能的相同体からなる群から選択されるＡＧＴ１をコードする少なくとも３つの遺伝子を含む、
    遺伝子型を有する、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の酵母細胞。
  20. 飲料を製造するための方法であって、前記方法が、
    ａ. 出発液体を準備すること、
    ｂ. 請求項１〜１９のいずれか１項に記載の酵母細胞を準備すること、
    ｃ. 前記出発液体を、前記酵母細胞で発酵し、それにより、飲料を製造すること、
    のステップを含む、方法。
  21. 前記出発液体が、大麦及び/または麦芽の水性エキスを含む、請求項２０に記載の方法
    。
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