CN108064270A - 用于制备酒精饮品的酵母 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具备有用特征的酵母细胞，所述特征包括能够利用潘糖作为唯一碳源和/或能够利用一种或多种二肽作为唯一氮源。本发明还涉及具备可用基因型的酵母细胞，所述基因型包括包含至少4个编码IMA1p的等位基因和/或至少两个编码IMA5p的等位基因。

Description

用于制备酒精饮品的酵母
发明背景
酒精饮料往往通过用酵母发酵富糖液体来制备。例如，啤酒是通过用酵母发酵麦汁制备的。麦芽汁含有可以被酵母利用的多种化合物。例如，麦芽汁富含糖尤其麦芽糖以及富含氨基酸和小肽。传统酵母可以利用麦芽糖并且因此常规酵母可以发酵麦芽糖以产生乙醇。但是，除麦芽糖之外，麦芽汁还含有其他糖，其中某些不能被常规酵母利用，并且尤其不能被拉格酵母(lager yeast)利用。
拉格酵母通常在几个方面不同于爱尔酵母(ale yeast)。拉格酵母属于巴斯德酵母(S.pastorianus)种。往往，拉格酵母也称作“底部发酵酵母”，因为它们在发酵期间停留在底部。另外，拉格酵母株在范围从7至15℃的温度使用最佳。此外，拉格酵母能够使用蜜二糖作为唯一碳源并且不能在37℃生长。
与之相比，爱尔酵母属于酿酒酵母(S.cerevisiae)种。往往，爱尔酵母也称作“顶部发酵酵母”，因为它们在发酵期间经常升至表面。另外，拉格酵母株在范围从10至25℃的温度使用最佳，尽管低于12℃某些菌株将不活跃地发酵。此外，爱尔酵母不能够使用蜜二糖作为唯一碳源但可以在37℃生长。
在啤酒酿造中也可以使用其他酵母，例如糖化酵母(Saccharomycesdiastaticus)。糖化酵母属于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)种淀粉酶变种(var.)并且具有以下特殊性：具有由STA1、STA2或STA3中至少一个基因编码的葡糖淀粉酶酶活性，这使得该酵母能够利用淀粉作为唯一碳源。STA基因通常不存在于酿酒酵母或巴斯德酵母或所分析的其他酵母属(Saccharomyces)菌种的菌株中，但存在于酿酒酵母淀粉酶变种亚群中
发明简述
需要改进的酵母株，所述酵母株具有拉格酵母(例如巴斯德酵母)以及爱尔酵母(例如酿酒酵母)二者的特征。此外，需要可以利用尽可能多种不同的能量源的酵母株。特别地，需要可以利用麦芽汁中存在的糖(不是麦芽糖)的酵母和可以高程度利用氨基酸和肽的酵母。
有意义的是，本发明提供了杂合酵母(或杂交酵母)，所述杂合酵母具有几种重要的拉格酵母特征，但是同时可以利用麦芽汁中存在的许多不同能量源。
因此，本发明的一个方面是提供一种具有至少一个以下特征的酵母细胞：
I.能够利用异麦芽糖作为唯一碳源；
II.能够利用潘糖作为唯一碳源。
除上述特征I和II之外，本发明的酵母细胞还可以具有额外的特征，例如以下一个或多个特征：
III.能够利用一种或多种二肽作为唯一氮源。
IV.能够利用一种或多种三肽作为唯一氮源；
V.能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后，将一种或多种氨基酸的水平降低到不多于10％的起始浓度。
VI.当添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范(spec)内时，能够产生每柏拉图度至少4.7千分比乙醇；和/或
VII.当添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范内时，能够以至少70的真实发酵度发酵糖。
本发明的一个方面是提供一种具有至少一个以下特征的酵母细胞：
II.能够利用潘糖作为唯一碳源；
III.能够利用一种或多种二肽作为唯一氮源。
本发明的一个方面是提供具有以下特征的酵母细胞：
II.能够利用潘糖作为唯一碳源；
除上述特征II和/或III之外，本发明的酵母细胞还可以具有额外的特征，例如以下一个或多个特征：
I.够利用异麦芽糖作为唯一碳源；
IV.够利用一种或多种三肽作为唯一氮源；
V.在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后，将一种或多种氨基酸的水平降低到不多于10％的起始浓度；
VI.酵母细胞添加至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范内时，能够产生每柏拉图度至少4.7千分比乙醇；和/或
VII.母细胞添加至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范内时，能够以至少70的真实发酵度发酵糖。
本发明的一个方面是提供用于生产饮品的方法，所述方法包括步骤
I.提供起始液体
II.提供本发明的酵母细胞
III.用所述酵母细胞发酵所述起始液体。
附图简述
图1显示多种酵母株在2g/L潘糖作为唯一碳源的确定成分培养基(definedmedium)中的生长。显示的数据是多个生物学重复的代表。小图A)显示爱尔酵母1、杂合酵母1、杂合酵母4和拉格酵母1的生长。小图B)显示爱尔酵母1、杂合酵母7和拉格酵母2的生长。小图C)显示糖化酵母和杂合酵母8的生长。
图2显示酵母在2g/L异麦芽糖作为唯一碳源的确定成分培养基中的生长。显示的数据是多个生物学重复的代表。小图A)显示爱尔酵母1、杂合酵母1、杂合酵母4和拉格酵母2的生长。小图B)显示爱尔酵母1、杂合酵母7和拉格酵母1的生长。小图C)显示糖化酵母和杂合酵母8的生长。
图3显示酵母细胞在2g/L蜜二糖作为唯一碳源的Bioscreen C MBR中的生长。小图A显示杂合酵母1和杂合酵母4的生长。小图B显示杂合酵母7的生长。
图4显示最终瓶装酿造啤酒中单一糖的NMR分析，用于比较用拉格酵母1和杂合酵母1产生的啤酒。
图5显示来自爱尔酵母1、拉格酵母1和杂合酵母1的DAL5的蛋白质比对结果。杂合酵母1的DAL5的序列指Sc_DAL5_Hybrid_1(SEQ ID NO:6)。
图6显示由UBR1的Sc等位基因编码的UBR1的蛋白质比对结果，说明拉格酵母1Sc等位基因存在于杂合酵母1中，而爱尔酵母1是截短的。仅显示部分比对；黑色阴影中的残基与杂合酵母1序列不同。
图7显示由UBR1的nonSc等位基因编码的UBR1的蛋白质比对结果，说明拉格酵母1Sc等位基因存在于杂合酵母1中。
图8显示由IMA1短等位基因编码的IMA1p的蛋白质比对结果。由杂合酵母1中存在的IMA1短等位基因编码的IMA1p分别指IMA1_Sc_等位基因_短_A_杂合_1和IMA1_Sc_等位基因_短_B_杂合_1。
图9显示由IMA1长等位基因编码的IMA1p的蛋白质比对结果。图9A显示由来自爱尔酵母1、拉格酵母1和杂合酵母1的长等位基因编码的IMA1p的比对结果。由杂合酵母1中存在的IMA1长等位基因编码的IMA1p分别指LONG_IMA1_A_Hyb1_pl17和LONG_IMA1_B_Hyb1_pl18。图9B显示由来自爱尔酵母1、拉格酵母2、杂合酵母4和杂合酵母7的长等位基因编码的IMA1p的比对结果。
图10显示由IMA5-like编码的IMA5p的蛋白质比对结果。由杂合酵母1中存在的IMA5-like编码的IMA5p分别指ScIMA5_杂合1_pl1和non-ScIMA5_杂合1。
图11显示由AGT1的Sc等位基因编码的AGT1的蛋白质比对结果。图11A显示由来自拉格酵母1、爱尔酵母1和杂合酵母1的AGT1的Sc等位基因编码的AGT1的比对结果。由杂合酵母1中存在的AGT1编码的AGT1分别指Sc_AGT1_杂合1_pl37、Sc_AGT1_杂合1_pl38和Sc_AGT1_杂合1_pl39。图11B显示由来自拉格酵母2、爱尔酵母1、杂合酵母4和杂合酵母7的AGT1的Sc等位基因编码的AGT1的比对结果。
图12显示由AGT1的non-Sc等位基因编码的AGT1的蛋白质比对结果。图12A显示由来自拉格酵母1和杂合酵母1的AGT1的non-Sc等位基因编码的AGT1的比对结果。由杂合酵母1中存在的AGT1编码的AGT1指non-Sc_AGT1_杂合1。图12A显示由来自拉格酵母1、拉格酵母2、杂合酵母1、杂合酵母4和杂合酵母7的AGT1的non-Sc等位基因编码的AGT1的比对结果。
图13显示酵母在2g/L麦芽三糖作为唯一碳源的确定成分培养基中的生长。显示的数据是多个生物学重复的代表。
图14显示酵母在2g/L麦芽酮糖作为唯一碳源的确定成分培养基中的生长。显示的数据是多个生物学重复的代表。
图15显示酵母在2g/L曲二糖作为唯一碳源的确定成分培养基中的生长。显示的数据是多个生物学重复的代表。
图16显示采用拉格酵母2、杂合酵母4和杂合酵母7发酵麦芽汁期间随时间变化而变化的表观提取率(apparent extract)。
发明详述
定义
如本文所用，“a”可以意指一个或多个，这取决于使用该冠词的上下文。
如本文所用的术语“AE”是“表观提取率”的缩写。“表观提取率”是根据提取物重量百分数的啤酒麦芽汁密度的计量并且以柏拉图标度(Plato scale)表述。它是啤酒发酵结束时测量的最终重量(final gravity)或比重(specific gravity)。在酒精饮品上下文中的重量指液体与水相比的相对密度。麦芽汁中溶解的糖越多，麦芽汁密度越高。
氨基酸可以在本文中使用IUPAC单字母代码和三字母代码命名。
如本文所用的术语“啤酒”指通过发酵麦芽汁所制备的饮品。优选地，通过酵母进行所述发酵。
如本文所用的术语“碳源”指可以向酵母提供能量并向细胞生物合成提供碳的任何有机分子。特别地，所述碳源可以是糖，并且更优选地，碳源可以是单糖和/或二糖。
术语“悬浮的细胞”在本文中的使用与容器内的液态培养基中温育细胞有关。“悬浮的细胞”是在温育后尚未沉降到容器底部，反而在液态培养基中自由漂浮的细胞。悬浮的细胞可以通过从容器上部分采集液态培养基并计数其中的细胞而测定。
术语“规范内二酰基”指二酰基水平低于预定阈值，所述预定阈值被设定为低于认定拉格啤酒中变味的阈值以下的水平。优选地，当二酰基的水平最多是30ppb时，认为二酰基的水平处于规范内。
在所指定核酸的语境下，“编码”或“编码”意指包含用于翻译成所指定蛋白质的信息。编码蛋白质的核酸或多核苷酸可以包含在核酸的已翻译区域内部的非翻译序列，例如内含子，或可以缺少这类插入性非翻译序列，例如在cDNA中。通过利用密码子特定化编码蛋白质的信息。
如本文所用，“表达”在核酸的语境下理解为转录和蓄积衍生自核酸片段的有义mRNA或反义RNA。在蛋白质的语境下所用的“表达”指mRNA翻译成多肽。
术语“基因”意指参与产生多肽链的DNA区段；它包含编码区之前和之后的区域(启动子和终止子)。另外，一些酵母基因还包含内含子，不过酿酒酵母基因组仅5％基因包含内含子。在转录成RNA后，通过剪接作用移除内含子以产生成熟信使RNA(mRNA)。
如本文相对于酵母所用，术语“生长”指酵母细胞增殖的过程。因此，当酵母细胞生长时，酵母细胞的数目增加。可以通过任何可用方法，例如通过测定OD(620nm)，测定酵母细胞的数目。OD(620nm)增加对应于酵母细胞的数目增加。允许酵母生长的条件是允许酵母细胞数目增加的条件。这类条件通常要求存在足够养分，例如碳源和氮源，以及足够的温度，其一般处于5至40℃范围内。
如本文所用的术语“氮源”指任何含氮的有机分子和/或指含铵的分子。特别地，所述氮源可以是有机氮源，例如肽、氨基酸、和/或其他胺。氮源也可以是铵。因此本文中，N2不视为“氮源”。
术语“麦芽”指已经麦芽化的谷物籽实。制麦芽是谷粒(例如大麦粒)在受控环境条件下发生的具体形式的发芽，所述受控环境条件包括但不限于麦芽厂的浸麦槽和发芽箱。通常，制麦芽包括浸泡所述谷粒，随后发芽。可以通过干燥谷粒(例如大麦谷粒)，例如，在窑式干燥过程中干燥(这通常在升高的温度进行)，终止制麦芽过程。麦芽可以例如通过磨碎而加工，并且因此称作“磨碎的麦芽”或“粉”。
“糖化”是在水中温育磨碎的麦芽。糖化优选地在特定温度和在特定体积的水中进行。温度和水量重要，因为这些影响从麦芽衍生的酶活性下降的速率并且因此尤其影响可能发生的淀粉水解的量；蛋白酶作用也可能是重要的。糖化可以在辅料存在下发生，所述辅料理解为包括除麦芽之外的任何糖源，如，但不限于大麦、大麦浆或玉米或稻，或者作为完整籽粒或加工产物如磨粒(grit)、糖浆或淀粉。前述全部辅料可以原则上作为额外的提取物来源使用(糖浆一般在麦芽汁加热期间给予)。啤酒厂中对辅料加工的要求取决于所用辅料的状态和类型并尤其取决于淀粉糊化温度或液化温度。如果糊化温度高于正常麦芽糖化的温度，则淀粉在添加至麦芽醪之前糊化并液化。
如本文所用的术语“柏拉图度”指如根据柏拉图标度测量的密度。柏拉图标度是根据提取物重量百分数测量啤酒密度或麦芽汁密度的经验推算的波美比重计标度。该标度将密度表述为糖的重量百分数。
术语“麦芽汁”意指麦芽(如磨碎的麦芽或绿麦芽或磨碎的绿麦芽)的液体提取物。在大麦酿造中，也可以通过将非麦芽化大麦的提取物与水解大麦组分的酶混合物温育，制备麦芽汁。除所述麦芽或大麦衍生的提取物之外，液体提取物可以从麦芽和额外组分(例如辅料)制备，如部分转化成可发酵糖的含有淀粉的额外物质。麦芽汁通常通过糖化，任选地之后是“淋洗(sparging)”(在用热水糖化后从酒糟提取残余糖和其他化合物的过程中)而获得。淋洗一般在引起提取的水与酒糟分离的滤桶、麦芽醪滤器或另一台设备中实施。糖化后获得的麦芽汁一般称作“第一麦芽汁”，而淋洗后获得的麦芽汁一般称作”第二麦芽汁”。如果不指定，术语“麦芽汁”可以是第一麦芽汁、第二麦芽汁或二者的组合。在常规啤酒生产期间，将麦芽汁与酒花一起煮沸，然而本发明提供用于减少麦芽汁沸腾或避免其沸腾的方法。无酒花的麦芽汁也可以称作“甜麦芽汁”，而随酒花煮沸/加热的麦芽汁可以称作“煮沸的麦芽汁”。
如本文所用，术语“能够利用XX的酵母细胞”指可以摄取并降解XX的酵母细胞。
如本文所用，术语“能够利用XX作为唯一碳源的酵母细胞”指可以在含有XX作为唯一碳源的培养基上生长的酵母细胞。因此，所述培养基优选地不含有除XX之外的任何其他糖。
酵母细胞
本发明涉及具有下文描述的特征I、II、III、IV、V、VI、VII和XI中至少之一的酵母细胞。
尤其，优选所述酵母细胞至少具有下文描述的特征I和II。
还优选所述酵母细胞至少具有下文描述的特征II。还优选酵母细胞至少具有下文描述的特征II和III。
特征I可以是下文在“特征I”部分中描述的任何特征I。尤其，特征I可以是酵母细胞能够利用异麦芽糖作为唯一碳源。
特征II可以是下文在“特征II”部分中描述的任何特征II。尤其，特征II可以是酵母细胞能够利用潘糖作为唯一碳源。
特征III可以是下文在“特征III”部分中描述的任何特征III。尤其，特征III可以是酵母细胞能够利用二肽作为唯一氮源。
特征IV可以是下文在“特征IV”部分中描述的任何特征IV。尤其，特征IV可以是酵母细胞能够利用三肽作为唯一氮源。
特征V可以是下文在“特征V”部分中描述的任何特征V。特别地，特征V可以是，酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低一种或多种氨基酸的水平到不多于10％的起始浓度。
特征VI可以是下文在“特征VI”部分中描述的任何特征VI。尤其，特征VI可以是，在添加酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范内时，所述酵母细胞能够产生每柏拉图度至少4.7千分比乙醇。
特征VII可以是下文在“特征VII”部分中描述的任何特征VII。尤其，特征VII可以是，当添加酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范内时，所述酵母细胞能够以至少70的真实发酵度发酵糖。
特征XI可以是下文在“特征XI”部分中描述的任何特征XI。尤其，特征性XI可以是酵母细胞能够以最多4天的初级发酵时间发酵麦芽汁。
本发明的酵母细胞可以具有一个或多个特征。因此，酵母细胞可以具有特征I、II、III、IV、V、VI和VII中的至少两个、优选地至少三个、更优选地至少四个、然而更优选地至少五个特征，如至少6个特征，如全部特征。酵母细胞还可以具有特征I、II、III、IV、V、VI、VII和XI中的至少两个、优选地至少三个、更优选地至少四个、然而更优选地至少五个特征，如至少6个特征，如全部特征。
因此，本发明的酵母细胞可以具有特征I和II。本发明的酵母细胞还可以具有特征I和III。本发明的酵母细胞还可以具有特征I和IV。本发明的酵母细胞还可以具有特征I和V。本发明的酵母细胞还可以具有特征I和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征I、II和III。本发明的酵母细胞还可以具有特征I、II和IV。本发明的酵母细胞还可以具有特征I、II和V。本发明的酵母细胞还可以具有特征I、II和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I、II和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、II和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征I、II、III和IV。本发明的酵母细胞还可以具有特征I、II、III和V。本发明的酵母细胞还可以具有特征I、II、III和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I、II、III和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、II、III和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征I、II、III、IV和V。本发明的酵母细胞还可以具有特征I、II、III、IV和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I、II、III、IV和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、II、III、IV和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征I、II、III、IV、V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I、II、III、IV、V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、II、III、IV、V和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、II、III、IV、V、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、II、III、IV、V、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、III和IV。所述酵母细胞还可以具有特征I、III和V。所述酵母细胞还可以具有特征I、III和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I、III和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、III和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、IV和V。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、IV和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、IV和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、IV和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、IV、V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、IV、V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、IV、V和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、IV、V、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、V和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、III、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV和V。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV、V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV、V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV、V和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV、V、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV、V、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、IV、V、VI、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征I、V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、V和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、V、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、V、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、V、VI、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征I、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、VI、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征I、VII和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征II和III。本发明的酵母细胞还可以具有特征II和IV。本发明的酵母细胞还可以具有特征II和V。本发明的酵母细胞还可以具有特征II和VI。所述酵母细胞还可以具有特征II和VII。所述酵母细胞还可以具有特征II和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征II、III和IV。本发明的酵母细胞还可以具有特征II、III和V。本发明的酵母细胞还可以具有特征II、III和VI。所述酵母细胞还可以具有特征II、III和VII。所述酵母细胞还可以具有特征II、III和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征II、III、IV和V。本发明的酵母细胞还可以具有特征II、III、IV和VI。所述酵母细胞还可以具有特征II、III、IV和VII。所述酵母细胞还可以具有特征II、III、IV和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征II、III、IV、V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征II、III、IV、V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征II、III、IV、V和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、III、IV、V、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征II、III、IV、V、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、III、IV、V、VI、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、IV和V。所述酵母细胞还可以具有特征II、IV和VI。所述酵母细胞还可以具有特征II、IV和VII。所述酵母细胞还可以具有特征II、IV和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、IV、V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征II、IV、V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征II、IV、V和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、IV、V、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征II、IV、V、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、IV、V、VI、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征II、V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征II、V和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、V、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征II、V、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、V、VI、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征II、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、VI、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征II、VII和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征III和IV。本发明的酵母细胞还可以具有特征III和V。本发明的酵母细胞还可以具有特征III和VI。所述酵母细胞还可以具有特征III和VII。所述酵母细胞还可以具有特征III和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征III、IV和V。本发明的酵母细胞还可以具有特征III、IV和VI。所述酵母细胞还可以具有特征III、IV和VII。所述酵母细胞还可以具有特征III、IV和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征III、IV、V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征III、IV、V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征III、IV、V和XI。所述酵母细胞还可以具有特征III、IV、V、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征III、IV、V、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征III、IV、V、VI、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征III、V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征III、V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征III、V和XI。所述酵母细胞还可以具有特征III、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征III、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征III、VI、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征III、VII和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征IV和V。本发明的酵母细胞还可以具有特征IV和VI。所述酵母细胞还可以具有特征IV和VII。本发明的酵母细胞还可以具有特征IV、V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征IV、V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征IV、V、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征IV、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征IV、VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征IV、VI、VII和XI。本发明的酵母细胞还可以具有特征V和VI。所述酵母细胞还可以具有特征V和VII。所述酵母细胞还可以具有特征V和XI。所述酵母细胞还可以具有特征V、VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征V、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征VI和VII。所述酵母细胞还可以具有特征VI和XI。所述酵母细胞还可以具有特征VI、VII和XI。所述酵母细胞还可以具有特征VII和XI。
在本发明的一个优选实施方案中，酵母细胞具有特征I、II、III、IV、V、VI和VII的全部。在本发明的一个优选实施方案中，酵母细胞具有特征I、II、III、IV、V、VI、VII和XI的全部。
除上文所概述的特征之，本发明的酵母细胞可以具有一个或多个额外的特征。
因此，除特征I、II、III、IV、V、VI、VII和/或XI中一者或多者之外，则酵母细胞还可以具有特征VIII。特征VIII可以是下文在“特征VIII”部分中描述的任何特征VIII。尤其，特征VIII可以是酵母细胞能够利用蜜二糖作为唯一碳源。
除特征I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII和/或XI中一者或多者之外，则酵母细胞还可以具有特征IX。特征IX可以是下文在“特征IX”部分中描述的任何特征IX。尤其，特征IX可以是酵母细胞能够利用二糖和/或三糖作为唯一碳源。
除特征I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX和/或XI中一者或多者之外，则酵母细胞还可以具有特征X。特征X可以是下文在“特征X”部分中描述的任何特征X。尤其，特征性X可以是酵母细胞仅具有低数目悬浮的细胞。
在本发明的一个优选实施方案中，酵母细胞可以具有特征I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X和XI的全部。
酵母细胞可以是任何合适物种的酵母细胞。在本发明的一个优选实施方案中，酵母细胞是酵母细胞巴斯德酵母种和酵母细胞酿酒酵母种之间的杂合体。
特征I
本发明的酵母细胞可以具有特征I，其中特征I是酵母细胞能够利用异麦芽糖。因此，在含有异麦芽糖的培养基中温育时，则所述酵母细胞能够移除至少部分的所述异麦芽糖。
更优选地，特征I是酵母细胞能够利用异麦芽糖作为唯一碳源。因此，酵母细胞能够在含有异麦芽糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除异麦芽糖之外的任何单糖和/或二糖，并且更优选地，这种培养基不含有除异麦芽糖之外的任何糖。
即便酵母细胞能够发酵异麦芽糖，这并不必然地意指所述酵母细胞能够利用异麦芽糖作为唯一碳源。因此，优选酵母细胞既能够利用异麦芽糖，又能够利用异麦芽糖作为唯一碳源。
尤其，特征I可以是所述酵母细胞能够在含有1至5g/L，例如1至3g/L，如2g/L异麦芽糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除所述浓度的异麦芽糖之外的任何糖。
下文在实施例5中描述一种用于确定酵母细胞是否能够利用异麦芽糖作为唯一碳源的可用方法。
具有特征I的酵母细胞优选地还具有下文描述的基因型IV、V和VI的一者或多者、更优选地具有基因型IV、V和VI的全部。
特征II
本发明的酵母细胞可以具有特征II，其中特征II是酵母细胞能够利用潘糖。因此，在含有潘糖的培养基中温育时，则所述酵母细胞能够移除至少部分的所述潘糖。优选地，所述酵母细胞能够移除(例如能够发酵)所述培养基中的至少45％，如至少50％，例如至少60％潘糖。所述培养基尤其可以是麦芽汁。优选地，在所述麦芽汁中温育直至二酰基处于规范内时，例如温育4至6天，例如5天，所述酵母细胞能够移除前述量的潘糖。温育可以例如是在16至18℃。优选地，如下文实施例5中所述那样发酵麦芽汁时，所述酵母细胞可以有能力移除麦芽汁中存在的至少45％，如至少50％，例如至少60％潘糖。
更优选地，特征II是酵母细胞能够利用潘糖作为唯一碳源。因此，酵母细胞能够在含有潘糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除潘糖之外的任何单糖、二糖和/或三糖，并且更优选地，这种培养基不含有除潘糖之外的任何碳水化合物。
即便酵母细胞能够发酵潘糖，这并不必然地意指所述酵母细胞能够利用潘糖作为唯一碳源。在一个实施方案中，酵母细胞既能够利用潘糖，又能够利用潘糖作为唯一碳源。
尤其，特征II可以是酵母细胞能够在含有1至5g/L，例如1至3g/L，如2g/L潘糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除所述浓度的潘糖之外的任何碳水化合物。
下文在实施例5中描述了一种用于确定酵母细胞是否能够利用潘糖作为唯一碳源的可用方法。
具有特征II的酵母细胞优选地还具有下文描述的基因型IV、V和VI的一者或多者、更优选地基因型IV、V和VI的全部。
特征III
本发明的酵母细胞可以具有特征III，其中特征III是酵母细胞能够利用二肽。因此，在含有二肽的培养基中温育时，则所述酵母细胞能够移除至少部分的所述二肽。
更优选地，特征III是酵母细胞能够利用二肽作为唯一氮源。因此，酵母细胞能够在含有二肽作为唯一氮源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除二肽之外的任何氨基酸和肽，并且更优选地，这种培养基不含有除二肽之外的任何氨基酸、肽和铵。
特征III可以是酵母细胞能够利用任何二肽作为唯一氮源。但是，还可能的是，所述酵母能够利用仅一种或多种特定二肽作为唯一氮源。
优选的是，特征III是酵母细胞能够利用至少一种，如至少两个，例如至少三种，如至少4种，例如至少5种，如全部以下二肽：
Met-Tyr
Leu-Tyr
Val-Met
Phe-Tyr
Ile-Leu
Ile-Asn。
在一个实施方案中，特征III是酵母细胞能够利用至少一种，如至少3种，例如至少5种，如至少7种，例如至少9种，如全部以下二肽：
Gly-Arg
Ile-Asn
Lys-Tyr
Met-Lys
Val-Ala
Val-Asn
Val-Gly
Val-Gln
Val-Met
Val-Ser
特征III也可以是酵母细胞能够利用一种或多种式Val-Xaa的二肽，其中Xaa指任何氨基酸。例如，特征III可以是酵母细胞能够利用至少3种，如至少4种，例如至少6种不同的式Val-Xaa的二肽。特别地，Xaa可以是选自Ala、Asn Gly、Gln、Met和Ser的氨基酸。
特征III也可以是酵母细胞能够利用一种或多种式Ala-Xaa的二肽，其中Xaa指任何氨基酸。特别地，Xaa可以是选自Glu、Gly、His和Thr的氨基酸。通常，利用式Ala-Xaa的二肽的能力与利用尿囊酸的能力相关，尿囊酸是尿囊素分解代谢的中间体。因此，优选的是，酵母细胞还能够利用尿囊素作为唯一氮源。
特征III也可以是酵母细胞能够利用以下一种或多种二肽，例如以下二肽的至少3种，如以下二肽的至少5种，如以下全部二肽：
Met-Tyr
Leu-Tyr
Val-Met
Phe-Tyr
Ile-Leu
Ile-Asn
Ala-Xaa，其中Xaa是任何氨基酸并且优选地，Xaa是Glu、Gly、His或Thr。
下文在实施例6中描述一种用于确定酵母细胞是否能够利用二肽作为唯一氮源的可用方法。本领域普通技术人员将理解，实施例6中描述的方法可以用来通过交换测试的二肽而检验是否可以利用任意二肽作为唯一氮源。
具有特征III的酵母细胞优选地还具有下文描述的基因型I、II和III的一者或多者、更优选地基因型型I、II和II的全部。
特征IV
本发明的酵母细胞可以具有特征IV，其中特征IV是酵母细胞能够利用三肽。因此，在含有三肽的培养基中温育时，则所述酵母细胞能够移除至少部分的所述三肽。
更优选地，特征IV是酵母细胞能够利用三肽作为唯一氮源。因此，酵母细胞能够在含有三肽作为唯一氮源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除三肽之外的任何氨基酸和肽，并且更优选地，这种培养基不含有除三肽之外的任何氨基酸、肽和铵。
特征IV可以是酵母细胞能够利用任何三肽作为唯一氮源。但是，还可能的是，所述酵母能够利用仅一种或多种特定三肽作为唯一氮源。
优选的是，特征IV是酵母细胞能够利用三肽Gly-Gly-Gly作为唯一氮源。
下文在实施例6中描述了一种用于确定酵母细胞是否能够利用三肽作为唯一氮源的可用方法。本领域普通技术人员将理解，实施例6中描述的方法可以用来通过交换测试的三肽而检验是否可以利用任意三肽作为唯一氮源。
酵母细胞具有特征IV，优选地还具有下文描述的基因型I、II和III的一者或多者、更优选地至少基因型II和III。
特征V
本发明的酵母细胞可以具有特征V，其中特征V是高度利用氨基酸。
通常，优选本发明的酵母细胞能够利用氨基酸至高程度。这既确保贮藏在氨基酸中的能量可以利用，又确保发酵后氨基酸水平低。因此，如果所述酵母用于制备啤酒，则成品啤酒将具有低水平的氨基酸。Strecker醛是啤酒中“老熟”风味的重要组分，其部分地源自瓶装啤酒本身的氨基酸。已经显示参与形成感觉阈低的Strecker醛的氨基酸包括缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸和苯丙氨酸(表2)。Strecker醛形成发挥关键作用，因为其浓度增加令“老熟风味”的感官知觉增加。
因此，本发明酵母的优点是酵母细胞能够利用氨基酸到比常规拉格酵母和爱尔酵母均高的程度。
因此，优选本发明的酵母细胞具有特征V，其中特征V是所述酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后将一种或多种氨基酸的水平降低到不多于10％的起始浓度。特别地，特征V可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后将至少12种，如至少13种，例如至少14种不同氨基酸的水平降低到小于10％的起始浓度。例如，酵母细胞可以能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后减少12至20种、如14至20种氨基酸到不多于10％的起始浓度。
特征V也可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后将总氨基酸的水平降低到小于30％，如小于25％的起始浓度。
特征V也可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后将一种或多种氨基酸的水平降低到不多于5％的起始浓度。特别地，特征V可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后将至少10种，如至少11种，例如至少13种不同氨基酸的水平降低到小于5％的起始浓度。
特征V也可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后将一种或多种氨基酸的水平降低到不多于1％的起始浓度。特别地，特征V可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后将至少5种，如至少6种，例如至少7种不同氨基酸的水平降低到小于1％的起始浓度。
特征V也可以是酵母细胞能够降低一种或多种形成Strecker醛的氨基酸的水平。因此，特征V可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后将Met的水平降低到小于10％、优选地小于5％、甚至更优选地到最多2％、然而更优选地到小于1％的起始浓度。特别地，酵母细胞可以有能力在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后移除基本上全部Met。特征V还可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低Met的水平到小于10％、优选地小于5％、甚至更优选地到最多2％起始浓度。特征V也可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低Ile的水平到小于10％、优选地小于5％、甚至更优选地到最多2％、然而更优选地到小于1％的起始浓度。特别地，酵母细胞可以有能力在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后移除基本上全部Ile。特征V还可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低Leu的水平到小于10％、优选地小于5％、甚至更优选地到最多2％起始浓度。特征V也可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低Phe的水平到小于10％、优选地小于5％、甚至更优选地到最多2％、然而更优选地到小于1％的起始浓度。特别地，酵母细胞可以有能力在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后移除基本上全部Phe。
术语“移除基本上全部”在本中用来指通过UPLC进行检测时，移除氨基酸到检测水平以下的水平。
本发明范围内还包括，特征V是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低以下氨基酸：Met、Val、Ile、Leu和Phe中至少2种、优选地至少3种、更优选地至少4种氨基酸、然而更优选地全部氨基酸到小于10％、优选地小于5％、甚至更优选地到最多2％的起始浓度。
尤其，特征V可以是，当添加酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范内时，所述酵母细胞能够利用氨基酸Met、Val、Ile、Leu和Ph氨基酸中至少之一的80％。
因此，还优选本发明的酵母细胞具有特征V，其中特征V是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育6天后降低氨基酸Met、Val、Ile、Leu和/或Phe的总水平到最多400mg/L，如最多100mg/L，如最多50mg/L，例如到最多10mg/L。
特征V也可以是本部分中描述的任何前述特征V的组合。因此例如，特征V可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低至少12种，如至少13种，例如至少14种不同氨基酸的水平到小于10％的起始浓度并且能够降低总氨基酸的水平到小于30％，如小于25％的起始浓度。特征V也可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低至少10种氨基酸的水平到小于5％的起始浓度并且降低总氨基酸的水平到小于30％，如小于25％的起始浓度。特征V也可以是酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低至少5种氨基酸的水平到小于1％的起始浓度并且降低总氨基酸的水平到小于30％，如小于25％的起始浓度。
下文在“用于生产饮品的方法”中描述了允许所述酵母细胞生长的条件。所述条件可以是在该部分中描述的任何发酵条件。例如，所述条件可以在10至20℃范围内的温度于麦芽汁中温育。可以通过任何可用方法，例如使用HPLC或UPLC，测定氨基酸的水平。下文在实施例4和9中描述了用于确定酵母细胞是否高度利用氨基酸的可用方法。
特征VI
本发明的酵母细胞可以具有特征VI，其中特征VI是高度产生乙醇。由于给定酵母细胞产生的乙醇的量受原料高度影响，优选的是，特征VI是酵母细胞能够产生每柏拉图度至少4.7千分比乙醇。柏拉图度是液体密度的计量，并且因此表示糖和其他可发酵养分的水平。
尤其，优选在添加酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范内时，所述酵母细胞能够产生每柏拉图度至少4.7千分比乙醇。
优选地，当二酰基的水平最多是30ppb时，认为二酰基的水平处于规范内。
特征VII
本发明的酵母细胞可以具有特征VII，其中特征VII是高真实发酵度(RDF)。
RDF测量了起始液体中糖已经发酵成乙醇的程度。因此，如果起始液体是麦芽汁，RDF测量了麦芽汁中的糖已经发酵成所得啤酒中醇的程度。
优选的是本发明的酵母细胞具有特征VII，其中特征VII是酵母细胞能够以至少68％，如至少69％，例如至少70％的RDF和更优选地以至少71％的RDF发酵糖。
特别优选的是，酵母细胞能够以高于至少一个亲本株的RDF的RDF发酵糖。因此，本发明的酵母细胞可以是杂合酵母细胞，所述杂合酵母细胞能够以高于一个亲本株的RDF至少1％、例如至少2％的RDF发酵糖。特别地，本发明的酵母细胞可以是亲本巴斯德酵母株和亲本酿酒酵母株之间的杂合体。在这类实施方案中，酵母细胞可以有能力以高于亲本巴斯德酵母株RDF至少1的RDF发酵糖。本发明的酵母细胞也可以是亲本糖化酵母株和亲本酿酒酵母株之间的杂合体。在这类实施方案中，酵母细胞可以有能力以高于亲本巴斯德酵母株RDF至少1％、优选至少2％的RDF发酵糖。
特征VIII
本发明的酵母细胞可以具有特征VIII，其中特征性VIII是酵母细胞能够利用蜜二糖。因此，在含有蜜二糖的培养基中温育时，则所述酵母细胞能够移除至少部分的所述蜜二糖。
更优选地，特征VIII是酵母细胞能够利用蜜二糖作为唯一碳源。因此，酵母细胞能够在含有蜜二糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除蜜二糖之外的任何单糖和/或二糖，并且更优选地，这种培养基不含有除蜜二糖之外的任何碳水化合物。
下文在实施例7中描述了一种用于确定酵母细胞是否能够利用蜜二糖作为唯一碳源的可用方法。
特征IX
本发明的酵母细胞可以具有特征IX，其中特征IX是酵母细胞能够利用二糖和/或三糖。因此，在含有二糖和/或三糖的培养基中温育时，则所述酵母细胞能够移除至少部分的所述二糖和/或三糖。
更优选地，特征IX是酵母细胞能够利用二糖和/或三糖作为唯一碳源。因此，酵母细胞能够在含有二糖和/或三糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除二糖和/或三糖之外的任何碳水化合物。
特征IX可以是酵母细胞能够利用任何二糖和三糖作为唯一碳源。但是，还可能的是，所述酵母能够利用仅一种或多种特定二糖和/三糖作为唯一碳源。如上所述，优选酵母细胞能够利用异麦芽糖(特征I)、潘糖(特征II)和/或蜜二糖(特征VIII)。
因此，特征IX优选地是酵母细胞能够利用一种或多种不是异麦芽糖、潘糖或蜜二糖的二糖和/或三糖。因此，特征IX可以是酵母细胞能够利用一种或多种除异麦芽糖、潘糖或蜜二糖之外的二糖和/或三糖。酵母细胞可以因此能够利用一种或多种不是异麦芽糖、潘糖或蜜二糖的二糖和/或三糖作为唯一碳源，并且此外，所述酵母细胞可以具有特征I、II或VIII的一者或多者。
优选的是，特征IX是酵母细胞能够利用至少一种，如至少两个，例如至少三种，如至少4种，例如至少5种，如全部选自以下的二糖作为唯一碳源：曲二糖、黑曲霉糖、蔗糖、松二糖、麦白糖和帕拉金糖。
还优选的是，特征IX是酵母细胞能够利用麦芽三糖和/或异麦芽三糖作为唯一碳源。
因此，酵母细胞可以有能力利用麦芽三糖作为唯一碳源。因此，酵母细胞可以有能力在含有麦芽三糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除麦芽三糖之外的任何单糖和/或二糖和/或三糖，并且更优选地，这种培养基不含有除麦芽三糖之外的任何糖。
尤其，特征IX可以是酵母细胞能够在含有1至5g/L，例如1至3g/L，如2g/L麦芽三糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除所述浓度的麦芽三糖之外的任何碳水化合物。
许多酵母细胞，例如许多拉格酵母细胞，不能够利用麦芽三糖作为唯一碳源，尤其麦芽三糖仅以低水平存在时，许多拉格酵母细胞不能够利用麦芽三糖作为唯一碳源。
酵母细胞可以有能力利用麦芽酮糖作为唯一碳源。因此，酵母细胞可以有能力在含有麦芽酮糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除麦芽酮糖之外的任何单糖和/或二糖，并且更优选地，这种培养基不含有除麦芽酮糖之外的任何碳水化合物。
尤其，特征IX可以是酵母细胞能够在含有1至5g/L，例如1至3g/L，如2g/L麦芽酮糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除所述浓度的麦芽酮糖之外的任何碳水化合物。
许多酵母细胞，例如许多拉格酵母细胞，不能够利用麦芽酮糖作为唯一碳源。
酵母细胞可以有能力利用曲二糖作为唯一碳源。因此，酵母细胞可以有能力在含有曲二糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除曲二糖之外的任何单糖和/或二糖，并且更优选地，这种培养基不含有除曲二糖之外的任何糖。
尤其，特征IX可以是酵母细胞能够在含有1至5g/L，例如1至3g/L，如2g/L曲二糖作为唯一碳源的培养基中生长。这种培养基优选地不含有除所述浓度的曲二糖之外的任何碳水化合物。
许多酵母细胞，例如许多拉格酵母细胞，不能够利用曲二糖作为唯一碳源。
因此，本发明的酵母细胞可以有能力利用一种或多种在表13中描述的二糖和/或三糖。
表13
下文在实施例8和11中描述用于确定酵母细胞是否能够利用二糖和/或三糖的可用方法。下文在实施例5中描述一种用于确定酵母细胞是否能够利用二糖和/或三糖作为唯一碳源的可用方法。本领域普通技术人员将理解，实施例5中描述的方法可以用来通过将潘糖/异麦芽糖交换为待测试的二糖和/或三糖，检验是否可以利用任何二糖和/或三糖作为唯一碳源。
酵母细胞具有特征IX，优选地还具有下文描述的基因型IV、V和VI的一者或多者、更优选地基因型IV、V和VI的全部。
特征X
本发明的酵母细胞可以具有特征性X，其中特征性X是酵母细胞仅具有低数目悬浮的细胞，尤其在容器内的液态培养基中温育后，酵母细胞具有低数目悬浮的细胞。所述温育优选地是温育1至14天，如2至10天，例如4至8天，例如4至6天。
特别优选的是，特征性X是在允许所述酵母细胞生长条件下温育4天后最多1200万个、如最多1000万个细胞/ml处于悬浮中。因此，特征性X可以是在添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育4天时，最多1200万个如最多1000万个细胞/ml处于悬浮中。特征性X也可以是在添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育5天时，最多1200万个如最多1000万个细胞/ml处于悬浮中。特征性X也可以是在添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育6天时，最多1200万个如最多1000万个细胞/ml处于悬浮中。所述温育可以例如是在10至20℃，如10至18℃范围内(例如16℃或18℃范围内)的温度。酵母细胞的起始浓度可以例如是1000至2000万个细胞/ml，例如1400至1500万个细胞/ml。
也可以优选，特征X可以是在允许所述细胞生长的条件下温育4至6天，如5天后，酵母细胞具有的悬浮细胞数目/ml是初始细胞数目/ml的最多80％，如最多70％，例如最多60％，如最多50％，例如最多40％。
例如，特征X可以是，在具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物中温育4至6天，如5天后，酵母细胞具有的悬浮细胞数目/ml是初始细胞数目/ml的最多80％，如最多70％，例如最多60％，如最多50％，例如最多40％。特征性X也可以是，在具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物中温育6天后，酵母细胞具有的悬浮细胞数目/ml是初始细胞数目/ml的最多80％，如最多70％，例如最多60％，如最多50％，例如最多40％。所述温育可以例如是在15至20℃，如10至18℃范围内，例如16℃或18℃范围内的温度。
在一个实施方案中，特征性X是在允许所述酵母细胞生长条件下温育7天后最多2500万个、优选地最多2000万个细胞/ml处于悬浮中。因此，特征性X可以是在添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且在18℃温育7天时，最多2500万个如最多2000个细胞/ml处于悬浮中。
下文在实施例2中描述一种用于确定悬浮细胞的可用方法。
特征XI
本发明的酵母细胞可以具有特征XI，其中特征XI是酵母细胞能够以最多4天的初级发酵时间发酵麦芽汁。
在本发明的一个优选实施方案中，特征XI是酵母细胞能够以最多3.5天的初级发酵时间发酵麦芽汁。
在本发明的另一个实施方案中，特征XI是酵母细胞能够以最多3天的初级发酵时间发酵麦芽汁。
特征XI也可以是酵母细胞能够以这样的初级发酵时间发酵麦芽汁，所述初级发酵时间比相同条件下至少一个亲本株的初级发酵时间短至少一天。因此，本发明的酵母细胞可以是杂合酵母细胞，所述杂合酵母细胞能够以这样的初级发酵时间发酵麦芽汁，所述初级发酵时间比相同条件下至少一个亲本株的初级发酵时间短至少一天。特别地，本发明的酵母细胞可以是亲本巴斯德酵母株和亲本酿酒酵母株之间的杂合体。在这类实施方案中，酵母细胞可以有能力以这样的初级发酵时间发酵麦芽汁，所述初级发酵时间比相同条件下亲本巴斯德酵母株的初级发酵时间短至少一天。
所述麦芽汁可以是任何标准麦芽汁，但优选地是具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁。因此，所述麦芽汁尤其可以是具有10柏拉图度至20柏拉图度的含糖量的麦芽汁。特别地，所述麦芽汁可以是具有14至16柏拉图度的含糖量的麦芽汁。
术语“初级发酵时间”是用酵母接种麦芽汁直至初级发酵完成的时间。当表观提取率稳定时和/或当不再存在活跃CO2释放时，认为初级发酵完成。当二个量值之间的表观提取率改变不超过+/-15％、优选地通过不超过+/-10％时，认为表观提取率为稳定。
酵母可以按任何可用水平例，如按1000至2000万个活细胞/ml，如1300至1600万个活细胞/ml，例如1400万-1500万个活细胞/ml接种。
可以在酵母细胞能够生长的温度确定初级发酵时间。因此，可以在10至25℃的温度、优选地在12至20℃，例如14至18℃的温度确定初级发酵时间。
下文实施例3中描述一种确定初级发酵时间的方法。
遗传背景
本发明的酵母细胞可以具有上文所述的特征I至XI中的一者或多者。
除所述特征之外，本发明的酵母细胞还可以具有下文描述的基因型I至VI中的一者或多者。所述基因型可以与上文所概述的特征相关联。
在一个实施方案中，本发明的酵母细胞至少具有下文描述的基因型IV。除具有基因型IV之外，所述酵母还可以具有基因型I、II、III、V、VI中的一者或多者和特征I至XI中的一者或多者。
因此，在本发明的一个实施方案中，酵母细胞至少具有下文描述的基因型IV和下文描述的基因型V。除具有基因型IV和V之外，所述酵母还可以具有基因型I、II、III、VI中的一者或多者和特征I至XI中的一者或多者。
因此，本发明的酵母细胞可以具有基因型I和II。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I和III。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I和IV。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I和V。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I、II和III。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I、II和IV。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I、II和V。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I、II和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I、II、III和IV。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I、II、III和V。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I、II、III和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I、II、III、IV和V。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I、II、III、IV和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型I、II、III、IV、V和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型II和III。本发明的酵母细胞还可以具有基因型II和IV。本发明的酵母细胞还可以具有基因型II和V。本发明的酵母细胞还可以具有基因型II和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型II、III和IV。本发明的酵母细胞还可以具有基因型II、III和V。本发明的酵母细胞还可以具有基因型II、III和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型II、III、IV和V。本发明的酵母细胞还可以具有基因型II、III、IV和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型II、III、IV、V和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型III和IV。本发明的酵母细胞还可以具有基因型III和V。本发明的酵母细胞还可以具有基因型III和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型III、IV和V。本发明的酵母细胞还可以具有基因型III、IV和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型III、IV、V和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型IV和V。本发明的酵母细胞还可以具有基因型IV和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型IV、V和VI。本发明的酵母细胞还可以具有基因型V和VI。
在本发明的一个优选实施方案中，酵母细胞具有基因型I、II、III、IV、V和VI中的全部。
在本发明的一个实施方案中，本发明的酵母细胞可以是包含按DDBJ/EMBL/GenBank登录号LOQJ00000000可获得的基因组DNA序列、尤其按DDBJ/EMBL/GenBank登录号LOQJ00000000(版本号LOQJ01000000)可获得的DNA序列的酵母细胞。将这个序列作为基因组Shotgun项目提供并且下文在实施例中提供这个序列的更多详情。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的酵母细胞可以是包含按DDBJ/EMBL/GenBank登录号LOQJ00000000可获得的基因组DNA序列、尤其按DDBJ/EMBL/GenBank登录号LOQJ00000000(版本号LOQJ01000000)可获得的DNA序列的酵母细胞。将这个序列作为基因组Shotgun项目提供并且下文在实施例中提供这个序列的更多详情。
基于本文中提供的基因组序列，可以制备合成性酵母染色体。例如，这可以如Callaway在2014年Nature(Nature DOI：doi:10.1038/nature.2014.14941)或Annaluru等人,Science 2014年4月4日：第344卷，第6179期第55-58页(DOI：10.1126/science.1249252)描述那样进行。另外，“合成性酵母2.0”提供了如何制备合成性酵母染色体的信息(参见，例如http://syntheticyeast.org/)。可以使用常规重组技术制备包含所述合成性酵母染色体的酵母细胞。
基因型I
本发明的酵母细胞可以具有基因型I，其中基因型I是存在编码DAL5的基因。特别地，优选本发明的酵母细胞包含了编码SEQ ID NO:6的DAL5或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。优选地，基因型I是存在编码SEQ ID NO:6的DAL5的基因。
在本发明的一个实施方案中，基因型I是存在至少一个编码DAL5的等位基因，其中编码DAL5的等位基因编码选自SEQ ID NO:6的DAL5、SEQ ID NO:39的DAL5、SEQ ID NO:40的DAL5中的DAL5及其与前述任任一者共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
在一个实施方案中，基因型I可以是存在以下2个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:39的DAL5或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:40的DAL5或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
DAL5是通过Non-N端规则运输二肽的二肽转运蛋白。在酵母细胞具有特征III、IV和/或VI的本发明实施方案中，尤其当酵母细胞具有特征III时，酵母细胞可以例如具有基因型I。
基因型II
本发明的酵母细胞可以具有基因型II，其中基因型II是存在至少3个编码PTR2的基因。特别地，优选本发明的酵母细胞包含至少3个编码PTR2的基因，其中所述PTR2可以选自SEQ ID NO:7的PTR2、SEQ ID NO:8的PTR2、SEQ ID NO:9的PRT2及前述每者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
因此，基因型II可以是酵母细胞包含3个选自以下的基因：
1)编码SEQ ID NO:7的PRT2或前述每者与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％，如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；
2)编码SEQ ID NO:8的PRT2或前述每者与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％，如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:9的PRT2或前述每者与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％，如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
因此，基因型II可以是酵母细胞包含以下3个基因：
1)编码SEQ ID NO:7的PRT2或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；
2)编码SEQ ID NO:8的PRT2或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:9的PRT2或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
因此，基因型II可以是酵母细胞包含3个选自以下的基因：
1)编码SEQ ID NO:7的PRT2的基因；
2)编码SEQ ID NO:8的PRT2的基因；和
3)编码SEQ ID NO:9的PRT2的基因。
在一个实施方案中，基因型II可以是酵母细胞包含至少2个编码PTR2的等位基因。例如，基因型II可以是酵母细胞包含至少两个编码PTR2的等位基因，所述等位基因单独选自编码SEQ ID NO:7的PTR2、SEQ ID NO:8的PTR2、SEQ ID NO:9的PRT2、SEQ ID NO:37的PRT2、SEQ ID NO:38的PRT2、SEQ ID NO:43的PRT2、SEQ ID NO:44的PRT2及前述每者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个实施方案中，基因型II可以是酵母细胞包含以下2个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:37的PRT2或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；
2)编码SEQ ID NO:38的PRT2或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个实施方案中，基因型II可以是酵母细胞包含以下2个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:43的PRT2或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；
2)编码SEQ ID NO:44的PRT2或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
PRT2是向酵母细胞转运二肽和三肽以及其他肽的转运蛋白。
在其中酵母细胞具有特征III、IV和/或V的本发明实施方案中，如在其中酵母细胞具有特征III和/或IV的实施方案中，酵母细胞可以例如具有基因型II。
基因型III
本发明的酵母细胞可以具有基因型III，其中基因型III是存在编码UBR1的基因。特别地，优选本发明的酵母细胞包含了编码包含SEQ ID NO:10的UBR1或编码SEQ ID NO:11的UBR1或编码前述任何者的与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。优选地，基因型III是存在至少两个编码包含SEQ ID NO:10的UBR1或编码SEQ ID NO:11的UBR1或编码前述任何者的与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
例如，基因型III可以是存在以下2个基因：
1)编码包含SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:45的UBR1或前述任一者的与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:11的UBR1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
特别地，基因型III可以是存在以下2个基因：
1)编码包含SEQ ID NO:10的UBR1的基因；和
2)编码SEQ ID NO:11的UBR1的基因。
在酵母细胞具有特征III和/或IV的本发明实施方案中，酵母细胞可以例如具有基因型III。
在本发明的一个实施方案中，基因型III是酵母细胞包含至少一个编码UBR1的等位基因，所述UBR1选自包含SEQ ID NO:10的UBR1、SEQ ID NO:11的UBR1、包含SEQ ID NO:41的UBR1、SEQ ID NO:42的UBR1、包含SEQ ID NO:45的UBR1及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
在本发明的一个实施方案中，基因型III是酵母细胞包含至少两个编码UBR1的等位基因，所述UBR1单独选自包含SEQ ID NO:10的UBR1、SEQ ID NO:11的UBR1、包含SEQ IDNO:41的UBR1、SEQ ID NO:42的UBR1及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
例如，基因型III可以是存在以下2个基因：
1)编码包含SEQ ID NO:41的UBR1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:42的UBR1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在酵母细胞具有特征III、IV和/或V的本发明实施方案中，如在酵母细胞具有特征III和/或IV的实施方案中，酵母细胞可以例如具有基因型III。
基因型IV
本发明的酵母细胞可以具有基因型IV，其中基因型IV是存在至少3个编码IMA1p的等位基因、优选地至少4个前述等位基因。特别地，优选本发明的酵母细胞包含选自由以下组成的组的至少4个编码IMA1p的等位基因：SEQ ID NO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p、SEQ ID NO:14的IMA1p、SEQ ID NO:15的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物。
IMA1p可以由不同等位基因，例如由IMA1的短等位基因或由IMA1的长等位基因编码。一个酵母细胞可以包含IMA1的长等位基因和短等位基因。在一个实施方案中，可以优选本发明的酵母细胞包含至少3个编码IMA1p的长等位基因。
例如，基因型IV可以是存在至少2个IMA1的短等位基因。所述两个IMA1的短等位基因可以是编码IMA1p的基因，所述IMA1p选自SEQ ID NO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
在一个优选实施方案中，基因型IV可以是存在至少3个IMA1的短等位基因。所述3个IMA1的短等位基因可以是编码选自SEQ ID NO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p、SEQID NO:1的IMA1p、SEQ ID NO:2的IMA1p、SEQ ID NO:3的IMA1p、SEQ ID NO:4的IMA1p、SEQID NO:5的IMA1p、SEQ ID NO:33的IMA1p中的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
例如，基因型IV可以是存在至少2个IMA1的长等位基因。所述二个IMA1的长等位基因可以是编码选自由SEQ ID NO:14的IMA1p、SEQ ID NO:15的IMA1p组成的组的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个实施方案中，基因型IV可以是存在至少3个IMA1的长等位基因。所述3个IMA1的长等位基因可以是编码选自SEQ ID NO:21的IMA1p、SEQ ID NO:22的IMA1p、SEQ IDNO:3的IMA1p、SEQ ID NO:24的IMA1p、SEQ ID NO:25的IMA1p中的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个优选实施方案中，基因型IV可以是存在至少3个IMA1的短等位基因和至少2个IMA1的长等位基因，其中
a)所述3个IMA1的短等位基因各自是编码选自SEQ ID NO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p、SEQ ID NO:1的IMA1p、SEQ ID NO:2的IMA1p、SEQ ID NO:3的IMA1p、SEQ ID NO:4的IMA1p、SEQ ID NO:5的IMA1p、SEQ ID NO:33的IMA1p中的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；并且
b)所述2个IMA1的长等位基因各自是编码选自SEQ ID NO:14的IMA1p、SEQ ID NO:15的IMA1p、SEQ ID NO:21的IMA1p、SEQ ID NO:22的IMA1p、SEQ ID NO:23的IMA1p、SEQ IDNO:24的IMA1p、SEQ ID NO:25的IMA1p中的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个实施方案中，基因型IV可以是酵母细胞包含至少5个编码IMA1p的等位基因，其中所述等位基因各自选自编码SEQ ID NO:1的IMA1p、SEQ ID NO:2的IMA1p、SEQ IDNO:3的IMA1p、SEQ ID NO:4的IMA1p、SEQ ID NO:5的IMA1p、SEQ ID NO:12的IMA1p、SEQ IDNO:13的IMA1p、SEQ ID NO:14的IMA1p、SEQ ID NO:15的IMA1p、SEQ ID NO:21的IMA1p、SEQID NO:22的IMA1p、SEQ ID NO:23的IMA1p、SEQ ID NO:24的IMA1p、SEQ ID NO:25的IMA1p和SEQ ID NO:33的IMA1p的基因。
在一个实施方案中，基因型IV可以是酵母细胞包含以下4个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:12的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:13的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:14的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
4)编码SEQ ID NO:15的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个实施方案中，基因型IV可以是存在以下4个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:12的IMA1p的基因；和
2)编码SEQ ID NO:13的IMA1p的基因；和
3)编码SEQ ID NO:14的IMA1p的基因；和
4)编码SEQ ID NO:15的IMA1p的基因。
在一个实施方案中，基因型IV可以是存在以下3个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:21的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的两个基因；和
2)编码SEQ ID NO:22的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的一个基因。
在一个实施方案中，基因型IV可以是存在以下3个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:23的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:24的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:25的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个实施方案中，基因型IV可以是存在以下5个等位基因：
3)编码SEQ ID NO:12的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
4)编码SEQ ID NO:13的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
5)编码SEQ ID NO:1的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
6)编码SEQ ID NO:14的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
7)编码SEQ ID NO:15的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个实施方案中，基因型IV可以是存在以下6个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:2的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:3的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物至少两个的基因；和
3)编码SEQ ID NO:21的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物至少两个的基因；和
4)编码SEQ ID NO:22的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的一个基因。
在一个实施方案中，基因型IV可以是存在以下6个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:5的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:33的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物至少两个的基因；和
3)编码SEQ ID NO:4的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物至少两个的基因；和
4)编码SEQ ID NO:24的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
5)编码SEQ ID NO:23的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物至少两个的基因；和
6)编码SEQ ID NO:25的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的一个基因。
在其中酵母细胞具有特征I、II、IX和/或XI的本发明实施方案中，酵母细胞可以例如具有基因型IV。
基因型V
本发明的酵母细胞可以具有基因型V，其中基因型V是存在编码IMA5p的基因。基因型V也可以是存在至少两个编码IMA5p的等位基因。特别地，优选本发明的酵母细胞包含至少一个编码IMA5p的等位基因，所述IMA5p选自SEQ ID NO:16的IMA5p、SEQ ID NO:17的IMA5p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。优选地，基因型V是存在至少两个编码SEQ ID NO:16的IMA5p或SEQ ID NO:17的IMA5p或前述任一者与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个实施方案中，酵母细胞包含至少两个编码IMA5p的等位基因，所述等位基因各自选自编码SEQ ID NO:16的IMA5p、SEQ ID NO:17的IMA5p、SEQ ID NO:34的IMA5p、SEQID NO:35的IMA5p、SEQ ID NO:36的IMA5p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的等位基因。
特别地，基因型V可以是酵母细胞包含以下2个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:16的IMA5p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:17的IMA5p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个实施方案中，基因型V可以是酵母细胞包含以下3个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:16的IMA5p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:17的IMA5p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:34的IMA5p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个实施方案中，基因型V可以是酵母细胞包含以下2个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:35的IMA5p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:36的IMA5p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
特别地，基因型V可以是存在以下2个基因：
1)编码SEQ ID NO:16的IMA5p的基因；和
2)编码SEQ ID NO:17的IMA5p的基因。
在酵母细胞具有特征I、II、IX和/或XI的本发明实施方案中，酵母细胞可以例如具有基因型V。
基因型VI
本发明的酵母细胞可以具有基因型VI，其中基因型VI是存在至少3个编码AGT1的等位基因。特别地，优选本发明的酵母细胞包含至少3个编码AGT1的等位基因，所述AGT1选自SEQ ID NO:18的AGT1、SEQ ID NO:19的AGT1、SEQ ID NO:20的AGT1、SEQ ID NO:26的AGT1、SEQ ID NO:27的AGT1、SEQ ID NO:28的AGT1、SEQ ID NO:29的AGT1、SEQ ID NO:30的AGT1、SEQ ID NO:31的AGT1、SEQ ID NO:32的AGT1及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
在一个实施方案中，酵母细胞可以具有基因型VI，其中基因型VI是存在至少2个编码全长AGT1的等位基因。特别地，优选本发明的酵母细胞包含至少2个编码AGT1的等位基因，所述AGT1选自SEQ ID NO:18的AGT1、SEQ ID NO:19的AGT1、SEQ ID NO:20的AGT1、SEQID NO:27的AGT1、SEQ ID NO:28的AGT1、SEQ ID NO:30的AGT1、SEQ ID NO:31的AGT1、SEQID NO:32的AGT1及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
在一个实施方案中，基因型VI可以是酵母细胞包含以下3个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:18的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:19的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:20的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
特别地，基因型VI可以是存在以下3个等位基因：
1)编码SEQ ID NO:18的AGT1的基因；和
2)编码SEQ ID NO:19的AGT1的基因；和
3)编码SEQ ID NO:20的AGT1的基因。
在一个实施方案中，基因型VI可以是酵母细胞包含以下二个编码AGT1的基因：
1)编码SEQ ID NO:27的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:28的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在一个实施方案中，基因型VI可以是酵母细胞包含以下3个编码AGT1的等位基因：
1)编码SEQ ID NO:30的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:31的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:32的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
在酵母细胞具有特征I、II、IX和/或XI的本发明实施方案中，酵母细胞可以例如具有基因型VI。
功能同源物
如本文所用的术语”功能同源物”指与参考多肽共有至少一个生物学功能的多肽。通常，所述功能同源物还与参考多肽共有显著的序列同一性。优选地，参考多肽的功能同源物是这样的多肽，它具有与参考蛋白相同的生物学功能作并且与参考多肽共有高水平的序列同一性。
高水平的序列同一性表示第一序列从第二序列衍生的可能性。氨基酸序列同一性要求两个比对的序列之间相同的氨基酸序列。因此，与参考序列共有80％氨基酸同一性的候选序列要求在比对后，候选序列中80％的氨基酸与参考序列中的相应氨基酸相同。本发明的同一性借助计算机分析确定，如，而不限于，ClustalW计算机比对程序(Higgins D.,Thompson J.,Gibson T.,Thompson J.D.,Higgins D.G.,Gibson T.J.,1994.CLUSTAL W:improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment throughsequence weighting,position-specific gap penalties and weight matrixchoice.Nucleic Acids Res.22:4673-4680)，及其中提出的默认参数。ClustalW软件作为ClustalW WWW Service从欧洲生物信息学研究所http://www.ebi.ac.uk/clustalw可获得。使用这种程序连同其默认设置，比对查询对象和参考多肽的成熟(生物活性物质)部分。计数完全保守的残基数目并除以参考多肽的长度。因此，在参考多肽的整个长度范围内测定序列同一性。
可以优选的是，保守氨基酸留在功能同源物中。可以通过以下方式鉴定保守氨基酸：编制相似多肽的比对结果并使用所述比对结果鉴定多肽之间保守的氨基酸残基。本文在图5-12中显示可用比对结果的例子。
用于生产饮品的方法
本发明的一个方面是提供用于生产饮品的方法，所述方法包括步骤
VIII.提供起始液体
IX.提供本发明的酵母细胞，例如具有上文描述的特征I至X中一者或多者的酵母细胞，
X.用所述酵母细胞发酵所述起始液体，
因而生产饮品。
起始液体尤其可以是谷物提取物，如麦芽汁。如本文在本节中所述，可以例如通过糖化并任选地淋洗而制备麦芽提取物，制备所述起始液体。
麦芽是已经麦芽化的大麦粒。术语“制麦芽(麦芽化)”将理解为浸泡的大麦粒在受控环境条件下发生的过程中发芽，随后是干燥步骤。所述干燥步骤可以优选地是在升高的温度窑式干燥发芽的谷粒。
前述这种制麦芽事件的顺序对合成引起谷粒改性的多种酶重要(主要解聚死胚乳的细胞壁以动员谷粒养分并激活其他解聚酶的过程)。在后续干燥过程中，因化学褐变反应生成风味和颜色。
浸泡可以通过技术人员已知的任何常规方法进行。一个非限制性例子包括在10至25℃的温度下在交替的干条件和湿条件下浸泡。发芽可以通过技术人员已知的任何常规方法进行。一个非限制性例子包括在10至25℃的温度、任选地以1至4小时变换温度发芽。
窑式干燥可以在常规温度如至少75℃，例如80至90℃，如80至85℃进行。因此，可以例如通过Briggs等人(1981)和Hough等人(1982)描述的任何方法产生麦芽。但是，用于产生麦芽的任何其他合适方法也可以随本发明使用，如用于产生特制麦芽的方法，包括但不限于，烘烤麦芽的方法。
可以进一步加工麦芽，例如通过磨碎。优选地，磨碎以干燥状态进行，即麦芽在干燥的情况下磨碎。
可以捣碎麦芽，例如磨碎的麦芽，以制备所述麦芽的水提取物。制备饮品的起始液体可以是麦芽的水提取物，例如通过糖化所制备的麦芽的水提取物。
因此，本发明用于制备饮品的方法可以包括通过糖化麦芽和任选地额外辅料而产生麦芽汁的步骤。所述糖化步骤还可以任选地包括淋洗，并且因此所述糖化步骤可以是包括淋洗步骤的糖化步骤或不包括淋洗步骤的糖化步骤。
通常，通过磨碎麦芽和/或大麦启动麦芽汁生产。如果添加额外的辅料，也可以根据其性质磨碎这些辅料。如果辅料是谷物，可以例如磨碎它，而糖浆、糖等将通常将不磨碎。磨粉将有利于在糖化阶段使水接近谷物颗粒。在糖化期间，制麦芽期间引发的底物的酶促解聚可以继续。
通常，通过将磨碎的麦芽和水合并并温育(即在糖化过程中)制备麦芽汁。在糖化期间，麦芽/液态组合物可以补充额外的富碳水化合物的辅料组合物，例如磨碎的大麦、玉米或稻辅料。非麦芽化的谷物辅料通常含有少量活性酶或不含活性酶，这使得补充麦芽或外源酶以提供多糖解聚作用等必需的酶是重要的。
在糖化期间，将磨碎的麦芽和/或磨碎的大麦-和任选地额外辅料与液体部分(如水)温育。温育温度通常保持恒定(等温糖化)或逐渐地增加，例如按依次方式增加。在任何一种情况下，麦芽/大麦/辅料中的可溶性物质释放入所述液体部分。后续的过滤引起麦芽汁和残余固态颗粒分离，后者也称作“酒糟(spent grain)”。如此获得的麦芽汁也可以称作“第一麦芽汁”。可以在还称作淋洗的过程期间添加额外的液体(如水)至酒糟。在淋洗和过滤后，可以获得“第二麦芽汁”。另外，可以通过重复该方法制备麦芽汁。制备麦芽汁的合适方法的非限制性例子由Briggs等人(上文)和Hough等人(上文)描述。
如上文提到，可以通过糖化非麦芽化的大麦粒，制备麦芽汁组合物。非麦芽化的大麦粒缺少或仅含有限量益于产生麦芽汁的酶，如能够降解细胞壁的酶或能够使淀粉解聚成糖的酶。因此，在非麦芽化大麦用于糖化的本发明实施方案中，优选向麦芽醪添加一种或多种合适的外部酿造酶。合适的酶可以是脂肪酶、淀粉降解酶(例如，淀粉酶)、葡聚糖酶[优选地(1-4)-和/或(1-3,1-4)-β-葡聚糖酶]、和/或木聚糖酶(如阿糖基木聚糖酶)、和/或蛋白酶、或包含一种或多种前述酶的酶混合物，例如Cereflo、Ultraflo、或Ondea Pro(Novozymes)。
也可以通过使用麦芽化和非麦芽化大麦粒的混合物，制备麦芽汁组合物，在这种情况下可以在制备期间添加一种或多种合适的酶。更具体地，本发明的大麦可以与麦芽一起-在具有或没有外部酿造酶的情况下-按任何组合如但不限于大麦:麦芽比例＝大约100:0、或大约75:25、或大约50:50、或大约25:75用于麦芽糖化。
在本发明的其他实施方案中，优选在糖化之前或期间不添加外部酶、尤其不添加外部蛋白酶、和/或不添加外部的纤维素酶和/或不添加外部α-淀粉酶和/或不添加外部β-淀粉酶和/或不添加外部生麦芽糖的α-淀粉酶。
糖化后获得的麦芽汁也可以称作“甜麦芽汁”。在常规方法中，将甜麦芽汁在具有或没有啤酒花的情况下煮沸，此后可以称其为煮沸的麦芽汁。
如本文所用的术语“大约”意指±10％、优选地±5％、然而更优选地±2％。
麦芽汁可以在它经受本发明酵母发酵之前加热或煮沸。首先，可以将第二和另外的麦芽汁合并，并此后进行加热或煮沸。可以将麦芽汁加热或煮沸任何合适的时间量，例如60分钟至120分钟。
因此，起始液体可以是例如如上述制备的麦芽汁。饮品可以发酵起始液体，例如通过发酵麦芽汁来制备。
在一个优选的实施方案中，饮品可以是麦芽饮品、甚至更优选地发酵饮品，如发酵麦芽饮品、优选地酒精饮品，如啤酒。
饮品可以是无酒精饮品，如无酒精啤酒或其他种类无酒精饮品，如无酒精麦芽饮品，如maltina。
在一个优选的实施方案中，饮品是啤酒，例如，啤酒可以是拉格啤酒或爱尔啤酒。因此，啤酒可以例如选自altbier、琥珀爱尔啤酒(Amber ale)、大麦啤酒(Barley wine)、柏林白啤酒(Berliner weisse)、Bière de Garde、苦味啤酒(Bitter)、金色爱尔啤酒(BlondeAle)、博克啤酒(Bock)、棕色爱尔啤酒(Brown ale)、加利福尼亚大众啤酒(CaliforniaCommon)、奶油爱尔啤酒(Cream Ale)、多特蒙德出口啤酒(Dortmunder Export)、双博克啤酒(Doppelbock)、Dunkel、Dunkelweizen、Eisbock、兰比克果啤酒(Fruit lambic)、黄金爱尔啤酒(Golden Ale)、Gose、Gueuze、Hefeweizen、Helles、印度淡色爱尔啤酒(India paleale)、科隆啤酒拉比克啤酒(Lambic)、淡色啤酒(Light ale)、五月博克啤酒(Maibock)、麦芽酒(Malt liquor)、Mild、老爱尔啤酒(Old ale)、老棕色啤酒(Oud bruin)、淡色爱尔啤酒(Pale ale)、比尔森啤酒(Pilsener)、波特啤酒(Porter)、红色爱尔啤酒(Red ale)、Roggenbier、赛松啤酒(Saison)、苏格兰爱尔啤酒(Scotch ale)、蒸汽啤酒(Steam beer)、司陶特啤酒(Stout)、Schwarzbier、拉格啤酒(lager)、Witbier、Weissbier和Weizenbock。
因此，本发明还涉及生产饮品的方法，所述方法包括步骤：
(i)提供麦芽组合物；
(ii)将所述麦芽组合物加工成饮品。
通常，术语“酒精饮品”-如啤酒-，可以从麦芽化和/或非麦芽化的大麦粒制造。除啤酒花和酵母之外，麦芽也有助于啤酒的风味和颜色。另外，麦芽充当可发酵糖和酶的来源。用于制麦芽和酿造的适合方法的例子的非限制性描述可以例如在Briggs等人(1981)和Hough等人(1982)的出版物中找到。可获得用于分析大麦、麦芽和啤酒产品的众多定期更新的方法，例如，但不限于美国谷物化学师协会(1995)、美国酿造化学家协会(1992)、欧洲酿造协会(1998)和酿造研究所(1997)。认识到许多专用方法用于给定的啤酒厂，最明显的变型涉及本地消费者偏好性。可以随本发明的方法一起使用任何这类生产啤酒的方法。
从麦芽汁生产啤酒的第一步骤优选地包括如本文上述那样加热所述麦芽汁，随后是后续的麦芽汁冷却阶段和任选地漩涡静置。在冷却后，麦芽汁可以转移至含有本发明酵母(即，具有上文描述的特征I至X中一者或多者的酵母)的发酵罐。麦芽汁将被发酵任何合适的时间段，通常1至100天。发酵在任何可用的温度(例如在10至20℃)的温度进行。
在数日长的发酵过程期间，糖转化成乙醇和CO2伴以某些风味物质形成。
随后，啤酒可以进一步加工，例如冰镇。它也可以经过滤和/或窖藏-一个形成惬意芳香和较弱酵母风味的过程。另外，可以添加添加物。另外，可以添加CO2。最后，啤酒可以在包装(例如瓶装或罐装)之前巴氏消毒和/或过滤。
通过用本发明酵母发酵产生的啤酒通常具有优越的惬意滋味。可以分析滋味，例如，由专业啤酒品尝组分析。优选地，所述小组在品尝和描述啤酒风味方面训练有素，特别专注于醛、纸味、老味、酯、高级醇、脂肪酸和硫组分。
通常，品尝组将由3至30名成员，例如5至15名成员、优选地8至12名成员组成。品尝组可以评价多种风味的存在，如纸味、氧化味、老化味和面包异味以及酯、高级醇、硫组分和啤酒酒体的风味。
序列表
SEQ ID NO:1
来自杂合酵母1的SHORT_IMA1的氨基酸序列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTPNEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKFIDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPWEGRIHINE。
SEQ ID NO:2
来自杂合酵母4的SHORT_IMA1的氨基酸序列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTPNEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKFIDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPWEGRIYINE
SEQ ID NO:3
来自杂合酵母4的SHORT_IMA1的氨基酸序列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRLIKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTPNEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKFIDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPWEGRIHINE。
SEQ ID NO:4
来自杂合酵母7的SHORT_IMA1的氨基酸序列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTPNEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKFIDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDVSSRTLKPWEGRIYINE。
SEQ ID NO:5
来自杂合酵母7的SHORT_IMA1的氨基酸序列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTPNEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKFIDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPWEGRIYINE。
SEQ ID NO:6
由来自杂合酵母1的Sc等位基因编码的DAL5的氨基酸序列
MSADASTNSNASLDEKNLNITSEAEIKNEDVTAEPVLSTVLSPNGKIVYISDKVDEAMKLAEEAKEIEVTPEEDRKLRWKIDYCMFPLMCILYAVQFMDKISTSSAAVMGLRTDLKMHGDQYSWVTSAFYFGYLFMNLGPVQFIFQRTSHMSKMLAVFIVIWGMLLALHAAPTVKYPSFIVLRVLLGCAESVVTPCFTIITAQYWKTEEQFTRVSIWFGMNGLGSILINAIAYGVYIHQDSYAIKGWRTLFVITGVITIFIGILIFLWIPDDPSKARFLSKREKLMVVQRIRSNQQGFGNHEIKKYQIIEALKDVRTWLYFLFTVSSNIPNGGISSFMSILLNSDFGYSSKETLLMGLPTGAVELVGCPLFGILAVYAANKKIPFWKYKLSWAIFAAVLALIASCMLGFATNSKKARLAGAYLWYISPVSFICVLSNISANSSGYSKKWTVSSINLVAYAAANLAGPQTFIAKQAPKYHGAKVAMVVCYAVMIVLLSILLIVNLRENKRRDKIAAERGFPEETENLEFSDLTDFENPNFRYTL。
SEQ ID NO:7
由来自爱尔酵母1的Sc等位基因编码的PTR2的氨基酸序列
MLNHPSQGSDDAQDEKQGDFPVIEEEKTQAVMLKDSYVSDDVANSTERYNLSPSPEDEDFEAPTEEEMQTLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPNDSPKGVLSLNSQGATGLSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILFITSIPSVGNRDSAIGGFIAAIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSLSLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWIAVVTLIFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFKVCWILTKNKFDFNAAKPSVHPEKNYPWNDKFVDEIKRALAACKVFIFYPIYWTQYGTMISSFITQASMMELHGIPNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFVYPFIRRYTPLKPITKIFXGFMFGSFAMTWAAVLQSFVYKAGPWYNEPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNAFGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWLCFRKYNDTEEEMNAMDYEEENEFDLNPISAPKANDIEILEPMDSLRSTAKY。
SEQ ID NO:8
由来自拉格酵母1的Sc等位基因编码的PTR2的氨基酸序列
MLNHPSQGSDDAQDEKQGDFPVIEEEKTQAVTLKDSYVSDDVANSTERYNLSPSPEDEDFEAPTEEEMQTLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPNDSPKGVLSLNSQGATGLSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILFITSIPSVGNRDSAIGGFIAAIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSLSLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWIAVVTLIFGKKQYIQRPVGDKVIAKSFKVCWILTKNKFDFNAAKPSVHPEKNYPWNDKFVDEIKRALAACKVFIFYPIYWTQYGTMISSFITQASMMELHGIPNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFVYPFIRRYTPLKPITKIFFGFMFGSFAMTWAAVLQSFVYKAGPWYNEPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNAFGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWLCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLNPISAPKANDIEILEPMESLRSTTKY
SEQ ID NO:9
由来自杂合酵母1的非Sc等位基因编码的PTR2的氨基酸序列
MLNHLSQGSDDIQDEKQGDFPVIEEEKNQTVTLKDSYVSDDAANSTEHYNLSPSLEEDEFEAPTDEELRSLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPKDTPKGVLSLNSQGATGLSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILLITSIPSVGNRDSALGGFIASIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSLSLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWVAVVTLVFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFRVCWILTKNKFDFNAAKPSVHPEKEYPWNDKFVDEIKRALAACKVFVFYPIYWTQYGTMISSFITQAGMMELHGIPNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFIYPFIRRYTPFKPITKIFFGFMFGSLAMTWAAVLQSFVYKAGPWYSAPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNAFGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWFCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLNPISQPKGNDIEILEPMGSLKSTTKY
SEQ ID NO:10
由杂合酵母1的Sc等位基因编码的UBR1的不完整氨基酸序列。
FKEFCKVEGGVLIWQRVQKSNLTKSYSISFKQGLYTVETLLSKVHDPNIPLRPKEIISLLTLCKLFNGAWKIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEYTTSIYSIIQTAEKVSEKSKDSIDSKLFLNAIRIISSFLGNRSLTYKLIYDSHEVIKFSVSHERVAFMNPLQTMLSFLIEKVSLKDAYEALEDCSDFLKISDFSLRSVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQASYYKNNPELGSYSRDIHLNQLAILWERDDIPRIIYNILDRWELLDWFTGEVDYQHTVYEDKISFIIQQFIAFIYQILTERQYFKTFSSLKDRRMDQIKNSIIYNLYMKPLSYSKLLRSVPDYLTEDTTEFDEALEEVSVFVEPKGLADNGVFKLKASLYAKVDPLKLLNLENEFESS
SEQ ID NO:11
由杂合酵母1的非-Sc等位基因编码的UBR1的氨基酸序列
MSFTDNGLGSLKAHIRRTLRSIHNLPYFRFTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFIISNDGENLSTLFTAHPKQKSSNQELAVFPESLEDALDVDKITSQGTFPFYKIDESKIGDVHKHTGRNCGRKFKIGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHVNHHVCTDICSEFTSGICDCGDEEAWNSSLHCKAEEQGNDTSEDPSNFDSTKQKDVWNDPECIALVELVLSEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKLREMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDGTTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEYHNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDGEGRAMLKCSQDLSSVLGGFFAVQTNGLSATLTSWSEYLHQEACKYIILWITHCLNIPNPSFQITFRNMMGKSLCSEYLNATESRDMTPVVEKYFSTKFDKDDPYRYIDLSVLAEGNQIPLGHHKVLPESSTHSLSTLINDVENLTSKEYSNTRLQHILYFDNRYWKRLRKDIQNVIIPTLASSTLYKPIFCQQVVEIFNHITRSVAYMDREPQLTAIRECVVQLFTCPTNTRNIFENQSFLDILWSIIDIFKEFCKVEAGVLIWQRVQKSNLTKSYSLSFKQGLYTVETLLSKVNDPNITIRPKVFISLLTLGKLFNGAWKIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEYTTSIYSIIQTAEKVLEKSHDSLDLNLVLNAIRIVSSFLGNRSLTYKLIYDSHEIIKFSVSHERVAFMNPIQTMLSFLIEKVSLKDAYESLENCPDFLKIADFSLRSVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQASYYKNNPELGSYSRDIHLNQLAIIWERDDLPRVIYNILDRWELLDWFMGEAEYQHTVYEDKISFMIQQFIAFIYQILTERQYFKTFSLLRDRRMDMIKNSIMYNLYMKPLSYSKLLKSVPDYLTDDTTEFDEALEEVSVFVEPKGLADNGVFKLKAALYAKIDPLKLLNLENEFESSATIIKTHLAKNKDEVSKVVLIPQVSTKLLDKGAMNLGEFTRNTVFAKVIYKLLQVCLDMEDSTFLNELLHLVHGIFKDDELINGKDSIPEAYLAKPICNLLLSIANAKSDIFSESIVRKADYLLEKMIMKKPDEIFESLIASFGNQYIDNYKDKKLSQGVNLQETEKERKRRMAKKHQARLLAKFNNQQSKFMKEHESEFDEQDNDVDMDGEKVYESEDFTCALCQDSSSTDFFVIPAYHDHTPIFRPGNIFNPREFMAKWDGFYNDDDKQAYIDDEVLESLKENGTRGSRKVFVSCNHHIHHNCFKRYVQKKRFSSNAFICPLCQTFSNCTLPICPTSRANTGLSLDMFLKSELSLDILSRLFKPFTEDNYRTINSIFSLMVSQCQGFDKVVRKHVNFTHKDVSLVLSVHWANTISMLEVASRLEKPHNISFFRSREQKYKTLKNILICIMLFTFVIGKPSMEFEPYPVESDIICNQNQLFQYIVRKSLFSPASLRETITEALTVFCKQFLDDFVQGLSDAEQVDKLYTEAKKLGDVYNVDESILITLMSITVVKTEGLESRSIYDLAYTSLLKSLLPTIRRCLVMVKVLHELVKDSENETMVIDGFDVEEELEFEGLPGFVDKALKLITDKESFVDLFKTKQAIVPSHPYLERIPYEYCGIVKLIDLSKFLNTYVTQSKEIKLREERSQHMKNADNRLDFKICLTCGVKVHLRADRHEMTKHLNKNCFKSFGAFLMPNSSEVCLHLTQPPSNIFVSAPYLNSHGEVGRNAMRRGDLTTLNLKRYEHLNRLWINNEIPGYISRVMGDEFRVTILSNGFLFAFNREPRPRRVPPTDEDDEDMEEGEEGFFTEENDDMDVDDETGQAANLFGVGAEGIGDGGVRNFFQFFENFRNTLQPQGNDDEDAPQNPPPILQFLGPQFDGATIIRNTNQRNLDEDDSSENDDSDEREIW
SEQ ID NO:12
由来自杂合酵母1的短Sc等位基因编码的IMA1p的氨基酸序列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRLIKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTPNEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKFIDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPWEGRIHINE
SEQ ID NO:13
由来自杂合酵母1的短Sc等位基因编码的IMA1p的氨基酸序列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKGGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRLIKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTPNEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKFIDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPWEGRIHINE
SEQ ID NO:14
由来自杂合酵母1的长Sc等位基因编码的IMA1p的氨基酸序列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPLYDSPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWSFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTPNEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYGYDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSRTLKPWEGRIYISE
SEQ ID NO:15
由来自杂合酵母1的长Sc等位基因编码的IMA1p的氨基酸序列
MTISSAHPEAEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGADAIWISPFYDSPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWLKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKKLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTPMQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYGYDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSRTLKPWEGRIYISE
SEQ ID NO:16
非-Sc IMA5样等位基因编码的来自杂合酵母1的IMA5p的氨基酸序列
MTIIHNPKWWKEATIYQIYPASFKDSNNDGWGDLAGITSKLDYIKELGVDAIWVCPFYDSPQEDMGYDIANYEKVWPRYGTSEDCFQMIEESHKRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESRSSKTNAKRDWFFWKPPKGYEIDGTPIPPNNWRSFFGGSAWKYDENTEEFFLHVFAPGQPDFNWENKECRQAIYDSSVGFWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGLPDASITDPTVPYQDGTDFFVNGPRIHEYHKEMRQYMYTQIPEGKEIMTVGEVGIGNEKDFKDYTSSKEEEFNMMFNFKHTSVGESPEFKYELIPFTLKDFKLALAESFLFIEGTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPEWREISSKMLATLIISLTGTVFIYQGQELGMPNFKNRKIEQIKCVEGTGTYGAIKRDYGEDSEKMKKFYEALALISRDHGRTPFPWSGEKPYAGFSKNAKPWIDINESFVEGINAEAELNDENSVFFFWKRALQVRKEHKNMLVYGDNFQFYDLDNEKLFMFTKDSGDKKMFAVFNFCSDSTEFSVPDNKASYDMFFGNYANSDGKSYTLKPWEGRLYYSN
SEQ ID NO:17
Sc-IMA5样编码的来自杂合酵母1的IMA5p的氨基酸序列
MTIIHNPKWWKEATVYQIYPASNKDSNNDGWGDLAGITSKLDYVKELGVDAIWVCLFYDSPQEDMGYDIANYEKVWPRYGTNEDCFQMIEEAHKRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESKSSKTNPKRDWFFWRPPKGFDEKGNPIPPNNWRSFFGGSAWRYDEKTGEFFLHVFAPGQPDFNWENEECRKAIYDSSVGYWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGLPDAPITDPTVPYQKGTEFFINGSRIHEYHKEMRKYMLSQIPEGKEIMTVGEVGVGNEEDFRDYTSAKEGELNMMFNFKHTSVGESPECKYELIPFTLKDFKLALAESFLFIENTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPKWRAISSKMLATLIISLTGTVFIYQGQELGMSNFKNRRIEQIKCVEGTGTYAAIKRDYGEDSEKMKKFFEALALISRDHGRTPFPWSADEPSAGFSKDAKPRIDMNESFRDGINAEAELKDKNSVFFFWKKALQVRKEHKDILVYGHNFQFIDLDNDKLFMFTKDTDNKKMFAVFNFSSDDTDFSVPDNEASYTMFFGNYANSNGDSRTLQPWEGRLYLLK
SEQ ID NO:18
非Sc等位基因编码的来自杂合酵母1的AGT1的氨基酸序列
MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQLSDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLSALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALSLLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQIFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNRILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGAVLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFIIGGMGFASGSSASNAAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVAEIPSAELRTKTIVLARICYNLMAVFNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKFASTVVDPFGKRGLQNRPQVDNIIDRFSSASQQAL
SEQ ID NO:19
Sc等位基因编码的来自杂合酵母1的AGT1的氨基酸序列
MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQEVFNTENFEEGRKDSAFELDHLEFTINSAQLGDSDEDNENVINETNTTDDANEANSEEKSMTLKQALLIYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLNALYALPVFQRKFGTLNGEGSYEITSQWQIGLNMCVQCGEIIGLQITPYMVEFMGNRYTMITALGLLTAYVFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQIFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSRILSGKGAEKDIQIDLTLKQIELTIEKERLLASKSGSFLDCFKGVNGRRTRLACLTWVAQNTSGACLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSVIQYCLGLAGTLCSWVISGRVGRWTILTYGLAFQMVCLFIIGGMGFGSGSGASNGAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVTEIPSAELRTKTIVLARICYNIMAVINAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTAVTLAWVIIDLPETSGRTFSEINELFNQGVPARKFASTVVDPFGKGKTQHDSLDDESISQSSSIKQRELNAADKC
SEQ ID NO:20
Sc等位基因编码的来自杂合酵母1的AGT1的氨基酸序列
MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQEVFNTENFEEGRKDSAFELDHLEFTINSAQLGDSDEDNENVINETNTTDDANEANSEEKSMTLKQALLIYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLNALYALPVFQRKFGTLNGEGSYEITSQWQIGLNMCVQCGEIIGLQITPYMVEFMGNRYTMITALGLLTAYVFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQIFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSRILSGKGAEKDIQIDLTLKQIELTIEKERLLASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLTWVAQNTSGACLLGYSAYFFERAGMATDKAFTFSVIQYCLGLAGTLCSWVISGRVGRWTILTYGLAFQMVCLFIIGGMGFGSGSGASNGAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVTEIPSAELRTKTIVLARICYNIMAVINAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTAVTLAWVIIDLPETSGRTFSEINELFNQGVPARKFASTVVDPFGKGKTQHDSLDDESISQSSSIKQRELNAADKC
SEQ ID NO:21
由来自杂合酵母4的长IMA1等位基因编码的IMA1p的氨基酸序列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYDSPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTPMQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYGYDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSRTLKPWEGRIYISE。
SEQ ID NO:22
由来自杂合酵母4的长IMA1等位基因编码的IMA1p的氨基酸序列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYDSPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTPMQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYGYDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSRTLKPWEGRIYISE。
SEQ ID NO:23
由来自杂合酵母7的长IMA1等位基因编码的IMA1p的氨基酸序列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYDSPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKKLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTPMQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYGYDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSRTLKPWEGRIYISE。
SEQ ID NO:24
由来自杂合酵母7的长IMA1等位基因编码的IMA1p的氨基酸序列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYDSPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTPMQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYGYDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSRTLKPWEGRIYISE。
SEQ ID NO:25
由来自杂合酵母7的长IMA1等位基因编码的IMA1p的氨基酸序列
MTISSAHPETEPKWWKEATFYQIYPASFKDSNDDGWGDMKGISSKLEYIKELGVDAIWISPFYDSPQDDMGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWIFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRYINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWPVEKYEDVEIRNNYNAIKEEHGENSEEMKKFLEAIALISRDHARTPMQWSREEPNAGFSGPSAKPWFYLNDSFREGINVEDEIKDPNSVLNFWKEALKFRKAHKDITVYGYDFEFIDLDNKKLFSFTKKYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDDSSFKLEFGNYPKKEVDASSRTLKPWEGRIYISE。
SEQ ID NO:26
由来自杂合酵母4的Sc等位基因编码的截短型AGT1的氨基酸序列
MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQEVFNTENFEEGKKDSAFELDHLEFTTNSAQLGDSDEDNENMINEMNATDEANEANSEEKSMTLKQALLKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLNALYALPVFQRKFGTLNGEGSYEITSQWQIGLNMCVQCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALGLLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQIFASGIMKNSQENLGNSDLDYKLPFALQWIWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSRILSGKGAEKDIQVDLTLKQIELTIEKERLLASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLAWVAQNTSGACLLGYSTYFF。
SEQ ID NO:27
由来自杂交酵母4的非Sc等位基因编码的AGT1的氨基酸序列
MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQLSDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLSALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALSLLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQIFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNRILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGAVLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFIIGGMGFASGSSASNAAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVAEIPSAELRTKTIVLARICYNLMAVFNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGDFTALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKFASTVVDPFGKRGLQNRPQVDNIIDRFSSASQQAL。
SEQ ID NO:28
由来自杂交酵母4的非Sc等位基因编码的AGT1的氨基酸序列
MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQLSDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLSALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALSLLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQIFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNRILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGAVLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFIIGGMGFASGSSASNAAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVAEIPSAELRTKTIVLARICYNLMAVFNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKFASTVVDPFGKRGLQNRPQVDNIIDRFSSASQQAL。
SEQ ID NO:29
由来自杂合酵母7的Sc-等位基因编码的截短型AGT1的氨基酸序列
MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQEVFNTENFEEGKKDSAFELDHLEFTTNSAQLGDSDEDNENMINEMNATDEANEANSEEKSMTLKQALLKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLNALYALPVFQRKFGTLNGEGSYEITSQWQIGLNMCVQCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALGLLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQIFASGIMKNSQENLGNSDLDYKLPFALQWIWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSRILSGKGAEKDIQVDLTLKQIELTIEKERLLASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLAWVAQNTSGACLLGYSTYFF。
SEQ ID NO:30
由来自杂合酵母7的Sc等位基因编码的AGT1的氨基酸序列
MKNIISLVSKKKAASKNEDKNISESSRDIVNQQEVFNTENFEEGRKDSAFELDHLEFTINSAQLGDSDEDNENVINETNTTDDANEANSEEKSMTLKQALLIYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLNALYALPVFQRKFGTLNGEGSYEITSQWQIGLNMCVQCGEIIGLQITPYMVEFMGNRYTMITALGLLTAYVFILYYCKSLAMIAVGQVLSAMPWGCFQGLTVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQIFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLMIGIFFAPESPWWLVRKDRVAEARKSLSRILSGKGAEKDIQIDLTLKQIELTIEKERLLASKSGSFFDCFKGVNGRRTRLACLTWVAQNTSGACLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSVIQYCLGLAGTLCSWVISGRVGRWTILTYGLAFQMVCLFIIGGMGFGSGSGASNGAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVTEIPSAELRTKTIVLARICYNIMAVINAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTAVTLAWVIIDLPETSGRTFSEINELFNQGVPARKFASTVVDPFGKGKTQHDSLDDESISQSSSIKQRELNAADKC。
SEQ ID NO:31
由来自杂合酵母7的非-Sc等位基因编码的AGT1的氨基酸序列
MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQLSDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLSALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALSLLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQIFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNRILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGAVLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFIIGGMGFASGSSASNAAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVAEIPSAELRTKTIVLARICYNLMAVFNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTALTLAWVIIDLPETTGRTFSEINELFSQGVPARKFASTVVDPFGKRGLQNRPQVDNIIDRFSSASQQAL。
SEQ ID NO:32
由来自杂合酵母7的非-Sc等位基因编码的AGT1的氨基酸序列
MKNILSLVGRKENTPEDVTANLADTSSTTVMQAKDLVIEDFEERKKNDAFELNHLELTTNATQLSDSDEDKENVIRVAEATDDANEANNEEKSMTLRQALRKYPKAALWSILVSTTLVMEGYDTALLSALYALPVFQRKFGTMNAEGSYEITSQWQIGLNMCVLCGEMIGLQITTYMVEFMGNRYTMITALSLLTAYIFILYYCKSLAMIAVGQILSAMPWGCFQSLAVTYASEVCPLALRYYMTSYSNICWLFGQIFASGIMKNSQENLGNSDLGYKLPFALQWIWPAPLIIGIFFAPESPWWLVRKNKIVEAKKSLNRILSGTVTEKEIQVDITLKQIEMTIEKERLRASKSGSFFSCFKGVDGRRTRLACLTWVAQNSSGAVLLGYSTYFFERAGMATDKAFTFSLIQYCLGLAGTLGSWVISGRVGRWTILTYGLSFQMVCLFIIGGMGFASGSSASNAAGGLLLALSFFYNAGIGAVVYCIVAEIPSAELRTKTIVLARICYNLMAVFNAILTPYMLNVSDWNWGAKTGLYWGGFTALTLAWVIIDLPETTGRTFGEINELFSQGVPARKFASTVVDPFGKRGLQNRPQVDNIIDRFSSASQQAL。
SEQ ID NO:33
来自杂合酵母7的SHORT_IMA1的氨基酸序列
MGYDIANYEKVWPTYGTNEDCFALIEKTHKLGMKFITDLVINHCSSEHEWFKESRSSKTNPKRDWFFWRPPKGYDAEGKPIPPNNWKSYFGGSAWTFDEKTQEFYLRLFCSTQPDLNWENEDCRKAIYESAVGYWLDHGVDGFRIDVGSLYSKVVGLPDAPVVDKNSTWQSSDPYTLNGPRIHEFHQEMNQFIRNRVKDGREIMTVGEMQHASDETKRLYTSASRHELSELFNFSHTDVGTSPLFRYNLVPFELKDWKIALAELFRFINGTDCWSTIYLENHDQPRSITRFGDDSPKNRVISGKLLSVLLSALTGTLYVYQGQELGQINFKNWSVEKYEDVEIRNNYRLIKEECGENSEEMKKFLEGIALVSRDHARTPMPWTPNEPNAGFSGPNTKPWFYLNESFRQGINVEEEQKNSDSVLAFWKKALEFRKNHKDIAVYGFDFKFIDLDNKKLFSFTKRYNNKTLFAALNFSSDATDFKIPNDGSSFKLEFGNYPKNEVDASSRTLKPWEGRIHINE。
SEQ ID NO:34
来自杂合酵母1的IMA5的氨基酸序列
MTIIHNPKWWKEATVYQIYPASNKDSNNDGWGDLAGITSKLDYVKELGVDAIWVCLFYDSPQEDMGYDIANYEKVWPRYGTNEDCFQMIEEAHKRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESKSSKTNPKRDWFFWRPPKGFDEKGNPIPPNNWRSFFGGSAWRYDEKTGEFFLHVFAPGQPDFNWENEECRKAIYDSSVGYWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGLPDAPITDPTVPYQKGTEFFINGPRIHEYHKEMRKYMLSQIPEGKEIMTVGEVGVGNEEDFRDYTSAKEGELNMMFNFKHTSVGESPECKYELIPFTLKDFKLALAESFLFIENTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPKWRAISSKMLATLIISLTGTVFIYQGQELGMSNFKNRRIEQIKCVEGTGTYAAIKRDYGEDSEKMKKFFEALALISRDHGRTPFPWSADEPSAGFSKDAKPWIDMNESFRDGINAEAELKDKNSVFFFWKKALQVRKEHKDILVYGHNFQFIDLDNDKLFMFTKDTDNKKMFAVFNFSSDNTDFSVPDNEASYTMFFGNYANSNGDSRTLQPWEGRLYLLK
SEQ ID NO:35
杂合Sc_IMA5_Hybrid_7等位基因的氨基酸序列
MTIIHNPKWWKEATVYQIYPASNKDSNNDGWGDLAGITSKLDYVKELGVDAIWVCLFYDSPQEDMGYDIANYEKVWPRYGTNEDCFQMIEEAHKRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESKSSKTNPKRDWFFWRPPKGFDEKGNPIPPNNWRSFFGGSAWRYDEKTGEFFLHVFAPGQPDFNWENEKCRKAIYDSSVGYWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGLPDAPITDPTVPYQKGTEFFINGPRIHEYHKEMRKYMLSQIPEGKEIMTVGEVGVGNEEDFRDYTSAKEGELNMMFNFKHTSVGESPECKYELIPFTLKDFKLALAESFLFIENTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPKWRAISSKMLATLIISLTGTVFIYQGQELGMSNFKNRRIEQIKCVEGTGTYAAIKRDYGEDSEKMKKFFEALALISRDHGRTPFPWSADEPSAGFSKDAKPWIDMNESFRDGINAEAELKDKNSVFFFWKKALQVRKEHKDILVYGHNFQFIDLDNDKLFMFTKDTDNKKMFAVFNFSSDNTDFSVPDNEASYTMFFGNYANSNGDSRTLQPWEGRLYLLK。
SEQ ID NO:36
non-Sc_IMA5_Hybrid_7等位基因的氨基酸序列；前6个氨基酸是从基因组序列丢失；
PKWWKEATIYQIYPASFKDSNNDGWGDLAGITSKLDYIKELGVDAIWVCPFYDSPQEDMGYDIANYEKVWPRYGTSEDCFQMIEESHKRGIKVIVDLVINHCSEEHEWFKESRSSKTNAKRDWFFWKPPKGYEIDGTPIPPNNWRSFFGGSAWKYDENTEEFFLHVFAPGQPDFNWENKECRQAIYDSSVGFWLRHNVDGFRIDVGSMYSKVEGLPDASITDPTVPYQDGTDFFVNGPRIHEYHKEMRQYMYTQIPEGKEIMTVGEVGIGNEKDFKDYTSSKEEEFNMMFNFKHTSVGESPEFKYELIPFTLKDFKLALAESFLFIEGTDCWSTIYLENHDQPRSVSRFGSDSPEWREISSKMLATLIISLTGTVFIYQGQELGMPNFKNRKIEQIKCVEGTGTYGAIKRDYGEDSEKMKKFYEALALISRDHGRTPFPWSGEKPYAGFSKNAKPWIDINESFVEGINAEAELNDENSVFFFWKRALQVRKEHKNMLVYGDNFQFYDLDNEKLFMFTKDSGDKKMFAVFNFCSDSTEFSVPDNKASYDMFFGNYANSDGKSYTLKPWEGRLYYSN。
SEQ ID NO:37
由来自杂合酵母7的Sc等位基因编码的PTR2的氨基酸序列(不完整序列)
NSTERYNLSPSPEDEDFEAPTEEEMQTLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPNDSPKGVLSLNSQGATGLSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILFITSIPSVGNRDSAIGGFIAAIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSLSLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWIAVVTLIFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFKVCWILTKNKFDFNAAKPSVHPEKNYPWNDKFVDEIKRALAACKVFIFYPIYWTQYGTMISSFITQASMMELHGIPNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFVYPFIRRYTPLKPITKIFFGFMFGSFAMTWAAVLQSFVYKAGPWYNEPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNAFGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWLCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLNPISAPKANDIEILEPMESLRSTTKY。
SEQ ID NO:38
由杂合酵母7的非-Sc等位基因编码的PTR2的蛋白质序列
MLNHLSQGSDDIQDEKQGDFPVIEEEKNQTVTLKDSYVSDDAANSTEHYNLSPSLEEDEFEAPTDEELRSLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPKDTPKGVLSLNSQGATGLSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILLITSIPSVGNRDSALGGFIASIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSLSLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWVAVVTLVFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFRVCWILTKNKFDFNAAKPSVHPEKEYPWNDKFVDEIKRALAACKVFVFYPIYWTQYGTMISSFITQAGMMELHGIPNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFIYPFIRRYTPFKPITKIFFGFMFGSLAMTWAAVLQSFVYKAGPWYSAPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNAFGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWFCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLNPISQPKGNDIEILEPMGSLKSTTKY。
SEQ ID NO:39
由杂合酵母7的Sc等位基因编码的DAL5的氨基酸序列。
MSADASTNSNASLDEKNLNITSEAEIKNEDVTAEPVLSTVLSPNGKIVYISDKVDEAMKLAEEAKEIEVTPEEDRKLRWKIDYCMFPLMCILYAVQFMDKISTSSAAVMGLRTDLKMHGDQYSWVTSAFYFGYLFMNLGPVQFIFQRTSHMSKMLAVFIVIWGMLLALHAAPTVKYPSFIVLRVLLGCAESVVTPCFTIITAQYWKTEEQFTRVSIWFGMNGLGSILINAIAYGVYIHQDSYAIKGWRTLFVITGVITIFIGILIFLWIPDDPSKARFLSKREKLMVVQRIRSNQQGFGNHEIKKYQIIEALKDVRTWLYFLFTVSSNIPNGGISSFMSILLNSDFGYSSKETLLMGLPTGAVELVGCPLFGILAVYAANKKIPFWKYKLSWAIFAAVLALIASCMLGFATNSKKARLAGAYLWYISPVSFICVLSNISANSSGYSKKWTVSSINLVAYAAANLAGPQTFIAKQAPKYHGAKVAMVVCYAVMIVLLSILLIVNLRENKRRDKIAAERGFPEETENLEFSDLTDFENPNFRYTL。
SEQ ID NO:40
由来自杂合酵母7的非Sc等位基因编码的DAL5的氨基酸序列
MSGGASTNSNASIDEKNLNITSEAEIKNEDVYAEPVLSTVLSPNGKVVYISDKVDEAMKLADEAKEIEVTPEEDRKLRWKIDYCMFPLMCILYAVQFMDKISTSSAAVMGLRTDLKMHGDQYSWVTSAFYFGYLFMNLGPVQLIFQKSKHMSKMLAIFIIVWGLLLALHAVPSVKYSSFIALRVLLGCAESVVTPCFTIITAQYWKTEEQFTRISIWFGMNGLGSILINAIAYGVYIHQESYAIKGWRALFVITGVITIFVGALIFLWIPDDPSKARFLSKREKLMVVQRIRSNQQGFGNHEIKKYQIVEALKDVRTWLYFLFTVSSNIPNGGISSFMSILLNSDFGYLSKDTLLMGLPTGAVELVGCPLFGILAVYAANKKIPFWKYKLAWAIFAAVLALIASCMLGFATSSKKARLAGAYLWYISPVSFICVLSNISANSSGYSKKWTVSSINLAAYAAANLAGPQTFIAKQAPKYHGAKVAMVVCYAVMIVLLSALLLINMRENKRRDKIAAERGYPEETANLEFSDLTDFENPNFRYTL。
SEQ ID NO:41
由来自杂合酵母7的Sc等位基因编码的UBR1的氨基酸序列(不完整序列)
MSVADDDLGSLQGHIRRTLRSIHNLPYFRYTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFVISNSGENLPTLFNAHPKQKLSNPELTVFPDSLEDAVDIDKITSQQTIPFYKIDESRIGDVHKHTGRNCGRKFKIGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHVNHHVCTDICTEFTSGICDCGDEEAWNSPLHCKAEEQENDISEDPATNADIKEEDVWNDSVNIALVELVLAEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKLREMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDGTTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEYHNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDGEGRAMLKCSQDSSSVLGGFFAVQTNGLSATLTSWSEYLHQETCKYIILWITHCLNIPNSSFQTTFRNMMGKTLCSEYLNATECRDMTPVVEKYFSNKFDKNDPYRYIDLSILADGNQIPLGHHKILPESSTHSLSPLINDVETPTSRTYSNTRLQHILYFDNRYWKRLRKDIQNVIIPTLASSNLYKPIFCQQVVEIFNHITRSVAYMDREPQLTAIRECVVQLFTCPTNAKNIFENQSFLDIVWSIIDIFKEFCKVEGGVLIWQRVQKSNLTKSYSISFKQGLYTVETLLSKVHDPNIPLRPKEIISLLTLCKLFNGAWKIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEYTTSIYSIIQTAEKVSEKSKDSIDSKLFLNAIRIISSFLGNRSLTYKLIYDSHEVIKFSVSHERVAFMNPLQTMLSFLIEKVSLKDAYEALEDCSDFLKISDFSLRSVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQASYYKNNP
SEQ ID NO:42
由来自杂合酵母7的非Sc等位基因编码的UBR1的氨基酸序列
MSFTDNGLGSLKAHIRRTLRSIHNLPYFRFTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFIISNDGENLSTLFTAHPKQKSSNQELAVFPESLEDALDVDKITSQGTFPFYKIDESKIGDVHKHTGRNCGRKFKIGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHINHHVCTDICSEFTSGICDCGDEEAWNSSLHCKAEEQGNDTSEDPSNFDSTKQKDVWNDPECIALVELVLSEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKLREMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDGTTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEYHNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDGEGRAMLKCSQDLSSVLGGFFAVQTNGLSATLTSWSEYLHQEACKYIILWITHCLNIPNPSFQITFRNMMGKSLCSEYLNATESRDMTPVVEKYFSTKFDKDDPYRYIDLSVLAEGNQIPLGHHKVLPESSTHSLSTLINDVENLTSKEYSNTRLQHILYFDNRYWKRLRKDIQNVIIPTLASSTLYKPIFCQQVVEIFNHITRSVAYMDREPQLTAIRECVVQLFTCPTNTRNIFENQSFLDILWSIIDIFKEFCKVEAGVLIWQRVQKSNLTKSYSLSFKQGLYTVETLLSKVNDPNITIRPKVFISLLTLGKLFNGAWKIKRKEGEHVLHEDQNFISYLEYTTSIYSIIQTAEKVLEKSHDSLDLNLVLNAIRIVSSFLGNRSLTYKLIYDSHEIIKFSVSHERVAFMNPIQTMLSFLIEKVSLKDAYESLENCPDFLKIADFSLRSVVLCSQIDVGFWVRNGMSVLHQASYYKNNPELGSYSRDIHLNQLAIIWERDDLPRVIYNILDRWELLDWFMGEAEYQHTVYEDKISFMIQQFIAFIYQILTERQYFKTFSLLRDRRMDMIKNSIMYNLYMKPLSYSKLLKSVPDYLTDDTTEFDEALEEVSVFVEPKGLADNGVFKLKAALYAKIDPLKLLNLENEFESSATIIKTHLAKNKDEVSKVVLIPQVSTKLLDKGAMNLGEFTRNTVFAKVIYKLLQVCLDMEDSTFLNELLHLVHGIFKDDELINGKDSIPEAYLAKPICNLLLSIANAKSDIFSESIVRKADYLLEKMIMKKPDEIFESLIASFGNQYIDNYKDKKLSQGVNLQETEKERKRRMAKKHQARLLAKFNNQQSKFMKEHESEFDEQDNDVDMDGEKVYESEDFTCALCQDSSSTDFFVIPAYHDHTPIFRPGNIFNPREFMAKWDGFYNDDDKQAYIDDEVLESLKENGTRGSRKVFVSCNHHIHHNCFKRYVQKKRFSSNAFICPLCQTFSNCTLPICPTSRANTGLSLDMFLKSELSLDILSRLFKPFTEDNYRTINSIFSLMVSQCQGFDKVVRKHVNFTHKDVSLVLSVHWANTISMLEVASRLEKPHNISFFRSREQKYKTLKNILICIMLFTFVIGKPSMEFEPYPVESDIICNQNQLFQYIVRKSLFSPASLRETITEALTVFCKQFLDDFVQGLSDAEQVDKLYTEAKKLGDVYNVDESILITLMSITVVKTEGLESRSIYDLAYTSLLKSLLPTIRRCLVMVKVLHELVKDSENETMVIDGFDVEEELEFEGLPGFVDKALKLITDKESFVDLFKTKQAIVPSHPYLERIPYEYCGIVKLIDLSKFLNTYVTQSKEIKLREERSQHMKNADNRLDFKICLTCGVKVHLRADRHEMTKHLNKNCFKSFGAFLMPNSSEVCLHLTQPPSNIFVSAPYLNSHGEVGRNAMRRGDLTTLNLKRYEHLNRLWINNEIPGYISRVMGDEFRVTILSNGFLFAFNREPRPRRVPPTDEDDEDMEEGEEGFFTEENDDMDVDDETGQAANLFGVGAEGIGDGGVRNFFQFFENFRNTLQPQGNDDEDAPQNPPPILQFLGPQFDGATIIRNTNQRNLDEDDSSENDDSDEREIW。
SEQ ID NO:43
由杂合酵母1的Sc等位基因编码的PTR2的氨基酸序列。
MLNHPSQGSDDAQDEKQGDFPVIEEEKTQAVMLKDSYVSDDVANSTERYNLSPSPEDEDFEAPTEEEMQTLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPNDSPKGVLSLNSQGATGLSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILFITSIPSVGNRDSAIGGFIAAIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSLSLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWIAVVTLIFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFKVCWILTKNKFDFNAAKPSVHPEKNYPWNDKFVDEIKRALAACKVFIFYPIYWTQYGTMISSFITQASMMELHGIPNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFVYPFIRRYTPLKPITKIFVGFMFGSFAMTWAAVLQSFVYKAGPWYNEPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNAFGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWLCFRKYNDTEEEMNAMDYEEENEFDLNPISAPKANDIEILEPMDSLRSTTKY。
SEQ ID NO:44
由杂合酵母1的非Sc等位基因编码的PTR2的氨基酸序列。
MLNHLSQGSDDIQDEKQGDFPVIEEEKNQTVTLKDSYVSDDAANSTEHYNLSPSLEEDEFEAPTDEELRSLRHVGGKIPMRCWLIAIVELSERFSYYGLSAPFQNYMEYGPKDTPKGVLSLNSQGATGLSYFFQFWCYVTPVFGGYVADTFWGKYNTICCGTAIYIAGIFILLITSIPSVGNRDSALGGFIASIILIGIATGMIKANLSVLIADQLPKRKPSIKVLKSGERVIVDSNITLQNVFMFFYFMINVGSLSLMATTELEYHKGFWAAYLLPFCFFWVAVVTLVFGKKQYIQRPIGDKVIAKSFRVCWILTKNKFDFNAAKPSVHPEKEYPWNDKFVDEIKRALAACKVFVFYPIYWTQYGTMISSFITQAGMMELHGIPNDFLQAFDSIALIIFIPIFEKFIYPFIRRYTPFKPITKIFFGFMFGSLAMTWAAVLQSFVYKAGPWYSAPLGHNTPNHVHVCWQIPAYVLISFSEIFASITGLEYAYSKAPASMKSFIMSIFLLTNAFGSAIGCALSPVTVDPKFTWLFTGLAVACFISGCLFWFCFRKYNDTEEEMNAMDYEEEDEFDLNPISQPKGNDIEILEPMGSLKSTTKY。
SEQ ID NO:45
由杂合酵母1的Sc等位基因编码的UBR1的部分氨基酸序列。
MSVADDDLGSLQGHIRRTLRSIHNLPYFRYTRGPTERADMSRALKEFIYRYLYFVISNSGENLPTLFNAHPKQKLSNPELTVFPDSLEDAVDIDKITSQQTIPFYKIDESRIGDVHKHTGRNCGRKFKIGEPLYRCHECGCDDTCVLCIHCFNPKDHVNHHVCTDICTEFTSGICDCGDEEAWNSPLHCKAEEQENDISEDPATNADIKEEDVWNDSVNIALVELVLAEVFDYFIDVFNQNIEPLPTIQKDITIKLREMTQQGKMYERAQFLNDLKYENDYMFDGTTTAKTSPSNSPEASPSLAKIDPENYTVIIYNDEYHNYSQATTALRQGVPDNVHIDLLTSRIDGEGRAMLKCSQDL。
项
本发明还可以由以下项确定：
1.一种酵母细胞，具有至少一个以下特征：
II.能够利用潘糖作为唯一碳源；
III.能够利用一种或多种二肽作为唯一氮源。
2.根据1项的酵母细胞，具有特征II和III。
3.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
I.能够利用异麦芽糖作为唯一碳源；
4.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中当所述异麦芽糖以范围内1g/L至5g/L，如1g/L至3g/L范围内，例如2g/L的浓度存在时，所述酵母细胞能够利用异麦芽糖作为唯一碳源。
5.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中当所述潘糖以范围内1g/L至5g/L，如1g/L至3g/L范围内，例如2g/L的浓度存在时，所述酵母细胞能够利用潘糖作为唯一碳源。
6.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞能够移除存在于麦芽汁中的至少45％潘糖。
7.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞能够在16℃温育5天后移除存在于麦芽汁中的至少50％潘糖。
8.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
III.能够利用一种或多种二肽作为唯一氮源。
9.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中一种或多种所述二肽选自由以下组成的组：Met-Tyr、Leu-Tyr、Val-Met、Phe-Tyr、Ile-Leu和Ile-Asn。
10.根据项1至8中任一项的酵母细胞，其中一种或多种所述二肽是式Ala-Xaa的二肽，其中Xaa指任何氨基酸。
11.根据项10的酵母细胞，其中Xaa是选自由Glu、Gly、His和Thr组成的组中的氨基酸。
12.根据项1至8中任一项的酵母细胞，其中一种或多种所述二肽选自由以下组成的组：Gly-Arg、Ile-Asn、Lys-Tyr、Met-Lys、Val-Ala、Val-Asn、Val-Gly、Val-Gln、Val-Met和Val-Ser。
13.根据项1至8中任一项的酵母细胞，其中一种或多种所述二肽是式Val-Xaa的二肽，其中Xaa指任何氨基酸。
14.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还能够利用尿囊素作为唯一氮源。
15.根据前述项中任一项的酵母细胞，其所述中酵母细胞还具有特征：
IV.能够利用一种或多种三肽作为唯一氮源。
16.根据项15的酵母细胞，其中一个所述三肽是Gly-Gly-Gly。
17.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
V.能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低一种或多种氨基酸的水平到不大于10％的起始浓度。
18.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中手术酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低至少12种，如至少13种，例如至少14种不同氨基酸的水平到小于10％的起始浓度。
19.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低氨基酸的总水平到小于30％，如小于25％的起始浓度。
20.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后降低全部氨基酸Met、Val、Ile、Leu和Phe的水平到小于10％、优选地小于5％、甚至更优选地最多2％的起始浓度。
21.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育6天后降低全部氨基酸Met、Val、Ile、Leu和/或Phe的总水平到最多400mg/L，如最多100mg/L，如最多50mg/L，例如到最多10mg/L。
22.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
VI.当添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范内时，能够产生每柏拉图度至少4.7千分比乙醇。
23.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
VII.当添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范内时，能够以至少68如至少70的真实发酵度发酵糖。
24.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有特征VII，其中特征VII是所述酵母细胞能够以高于其亲本株之一至少1的RDF发酵糖。
25.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
VIII.能够利用蜜二糖作为唯一碳源。
26.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
X.能够如此沉降，从而当添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育4天时，最多1200万个，如最多1000万个细胞/ml处于悬浮中。
27.根据项26的酵母细胞，其中在允许所述细胞生长的条件下温育5天后，悬浮中的细胞数目/ml是初始细胞数目/ml的最多80％，如最多70％，例如最多60％，如最多50％，例如最多40％。
28.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
IX.能够利用除异麦芽糖、潘糖和/或蜜二糖之外的一种或多种二糖和/或三糖。
29.根据项28的酵母细胞，其中所述二糖选自由以下组成的组：曲二糖、黑曲霉糖、蔗糖、松二糖、麦白糖和帕拉金糖。
30.根据项28的酵母细胞，其中所述二糖是曲二糖。
31.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中当所述曲二糖以1g/L至5g/L范围内，如1g/L至3g/L范围内，例如2g/L的浓度存在时，所述酵母细胞能够利用曲二糖作为唯一碳源。
32.根据项28的酵母细胞，其中所述二糖是麦芽酮糖。
33.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中当所述麦芽酮糖以1g/L至5g/L范围内，如1g/L至3g/L范围内，例如2g/L的浓度存在时，所述酵母细胞能够利用麦芽酮糖作为唯一碳源。
34.根据项28的酵母细胞，其中所述三糖选自由麦芽三糖和异麦芽三糖组成的组。
35.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中当所述麦芽三糖以1g/L至5g/L范围内，如1g/L至3g/L范围内，例如2g/L的浓度存在时，所述酵母细胞能够利用麦芽三糖作为唯一碳源。
36.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征性
XI：能够以最多4天，例如最多3天的初级发酵时间发酵麦芽汁。
37.根据项36的酵母细胞，其中用1000至2000万个活细胞/ml接种含糖量为10柏拉图度至20柏拉图度的麦芽汁后，测定所述初级发酵时间。
38.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有：
I.包含编码DAL5的基因的基因型。
39.酵母细胞，其具有：
I.包含编码DAL5的基因的基因型。
40.根据项38至39中任一项的酵母细胞，其中所述基因型I是所述酵母细胞包含至少一个编码DAL5的等位基因，其中编码DAL5的等位基因编码选自SEQ ID No:6的DAL5、SEQID NO:39的DAL5、SEQ ID NO:40的DAL5中的DAL5及其与前述任任一者共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
41.根据项38至40中任一项的酵母细胞，其中所述基因型I是所述酵母细胞包含至少一个编码SEQ ID NO:6的DAL5或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物的等位基因。
42.根据项38至41中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征III，例如，项8至14中任一项所限定的特征III。
43.根据项38至42中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征IV，例如，项15至16中任一项所限定的特征IV。
44.根据项38至43中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征V，例如项17至21中任一项所限定的特征V。
45.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有：
II.包含至少2个编码PTR2的等位基因的基因型。
46.酵母细胞，其具有：
II.包含至少2个编码PTR2的等位基因的基因型。
47.根据项45至46中任一项的酵母细胞，其中所述PTR2可以选自由以下组成的组：SEQ ID NO:7的PTR2、SEQ ID NO:8的PTR2、SEQ ID NO:9的PRT2及前述每者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
48.根据项45至47中任一项的酵母细胞，其中所述基因型II是所述酵母细胞包含至少两个编码PTR2的等位基因，所述等位基因各自选自由以下组成组：编码SEQ ID NO:7的PTR2、SEQ ID NO:8的PTR2、SEQ ID NO:9的PRT2、包含SEQ ID NO:37的PRT2、SEQ ID NO:38的PRT2、SEQ ID NO:43的PRT2、SEQ ID NO:44的PRT2以及前述每者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
49.根据项45至48中任一项的酵母细胞，其中所述基因型II是所述酵母细胞包含以下3个基因：
1)编码SEQ ID NO:7的PRT2或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；
2)编码SEQ ID NO:8的PRT2或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:9的PRT2或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
50.根据项45至49中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型I，如项39至41中任一项所限定的基因型I。
51.根据项45至50中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征III，例如项8至14中任一项所限定的特征III。
52.根据项45至51中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征IV，例如项15至16中任一项所限定的特征IV。
53.根据项45至52中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征V，例如项17至21中任一项所限定的特征V。
54.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有：
III.包含编码UBR1的基因的基因型。
55.酵母细胞，其具有：
III.包含编码UBR1的基因的基因型。
56.根据项54至55中任一项的酵母细胞，其中基因型III是所述酵母细胞包含至少两个编码UBR1的等位基因，所述UBR1各自选自包含SEQ ID NO:10的UBR1、SEQ ID NO:11的UBR1、包含SEQ ID NO:41的UBR1、SEQ ID NO:42的UBR1、包含SEQ ID NO:45的UBR1及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物。
57.根据项54至56中任一项的酵母细胞，其中基因型III是所述酵母细胞包含编码UBR1的基因，所述UBR1选自包含SEQ ID NO:10的UBR1、SEQ ID NO:11的UBR1及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％、如至少98％序列同一性的功能同源物。
58.根据项54至57中任一项的酵母细胞，其中基因型III是酵母细胞包含以下2个基因：
1)编码包含SEQ ID NO:10的UBR1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；
2)编码SEQ ID NO:11的UBR2或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
59.根据项54至58中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型I，例如，项39至41中任一项所限定的基因型I。
60.根据项55至59中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型II，如项46和49中任一项所限定的基因型II。
61.根据项55至60中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征III，例如项8至14中任一项所限定的特征III。
62.根据项55至61中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征IV，例如项15至16中任一项所限定的特征IV。
63.根据项55至62中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征V，例如项17至21中任一项所限定的特征V。
64.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有：
IV.包含编码IMA1p的至少3个基因，如至少4个基因的基因型。
65.酵母细胞，其具有：
IV.包含编码IMA1p的至少3个基因，如至少4个基因的基因型。
66.根据项64和65中任一项的酵母细胞，其中IMA1p选自SEQ ID NO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p、SEQ ID NO:14的IMA1p、SEQ ID NO:15的IMA1p、SEQ ID NO:21的IMA1p、SEQ ID NO:22的IMA1p、SEQ ID NO:23的IMA1p、SEQ ID NO:24的IMA1p、SEQ ID NO:25的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
67.根据项64至66中任一项的酵母细胞，其中所述基因型IV是酵母细胞包含至少2个IMA1短等位基因，所述两个IMA1短等位基因编码选自由以下组成的组的IMA1p：SEQ IDNO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p中的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
68.根据项64至67中任一项的酵母细胞，其中所述基因型IV是所述酵母细胞包含至少3个IMA1短等位基因，所述短等位基因各自是编码选自由以下组成组的IMA1p的基因：SEQ ID NO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p、SEQ ID NO:1的IMA1p、SEQ ID NO:2的IMA1p、SEQ ID NO:3的IMA1p、SEQ ID NO:4的IMA1p、SEQ ID NO:5的IMA1p、SEQ ID NO:33的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
69.根据项64至68中任一项的酵母细胞，其中所述基因型IV是所述酵母细胞包含至少2个IMA1长等位基因，所述两个IMA1长等位基因编码选自由以下组成组的IMA1p的基因：SEQ ID NO:14的IMA1p、SEQ ID NO:15的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
70.根据项64至69中任一项的酵母细胞，其中所述基因型IV是所述酵母细胞包含至少3个IMA1短等位基因和至少2个IMA1长等位基因，其中
a)所述3个IMA1短等位基因各自是编码选自由以下组成组的IMA1p的基因：SEQ IDNO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p、SEQ ID NO:1的IMA1p、SEQ ID NO:2的IMA1p、SEQ IDNO:3的IMA1p、SEQ ID NO:4的IMA1p、SEQ ID NO:5的IMA1p、SEQ ID NO:33的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物；并且
b)所述2个IMA1长等位基因各自是编码选自由以下组成组的IMA1p的基因：SEQ IDNO:14的IMA1p、SEQ ID NO:15的IMA1p、SEQ ID NO:21的IMA1p、SEQ ID NO:22的IMA1p、SEQID NO:23的IMA1p、SEQ ID NO:24的IMA1p、SEQ ID NO:25的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
71.根据项64至70中任一项的酵母细胞，其中所述基因型IV是所述酵母细胞包含编码IMA1p的至少5个基因，其中所述基因各自选自编码由以下组成组的IMA1p的基因：SEQID NO:1的IMA1p、SEQ ID NO:2的IMA1p、SEQ ID NO:3的IMA1p、SEQ ID NO:4的IMA1p、SEQID NO:5的IMA1p、SEQ ID NO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p、SEQ ID NO:14的IMA1p、SEQ ID NO:15的IMA1p、SEQ ID NO:21的IMA1p、SEQ ID NO:22的IMA1p、SEQ ID NO:23的IMA1p、SEQ ID NO:24的IMA1p、SEQ ID NO:25的IMA1p和SEQ ID NO:33的IMA1p。
72.根据项64至71中任一项的酵母细胞，其中所述基因型IV是所述酵母细胞包含以下4个基因：
1)编码SEQ ID NO:12的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:13的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:14的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
4)编码SEQ ID NO:15的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
73.根据项64至72中任一项的酵母细胞，其中所述基因型IV是存在至少3个编码IMA1p的IMA1长等位基因，所述IMA1p选自由以下组成的组：SEQ ID NO:21的IMA1p、SEQ IDNO:22的IMA1p、SEQ ID NO:3的IMA1p、SEQ ID NO:24的IMA1p、SEQ ID NO:25的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
74.根据项64至73中任一项的酵母细胞，其中所述基因型IV是酵母细胞包含以下3个基因：
1)编码SEQ ID NO:21的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的两个基因；和
2)编码SEQ ID NO:22的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的一个基因。
75.根据项64至74中任一项的酵母细胞，其中所述基因型IV是所述酵母细胞包含以下3个基因：
1)编码SEQ ID NO:23的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:24的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:25的IMA1p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
76.根据项64至75中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型I，例如，项39至41中任一项所限定的基因型I。
77.根据项64至76中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型II，例如，项46和49中任一项所限定的基因型II。
78.根据项64至77中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型III，例如，项55和58中任一项所限定的基因型III。
79.根据项64至78中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征I，例如，项3至4中任一项所限定的特征I。
80.根据项64至79中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征II，例如，项1和5至7中任一项所限定的特征II。
81.根据项64至80中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征IX，例如，项28至35中任一项所限定的特征IX。
82.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有
V.包括编码IMA5p的基因的基因型。
83.酵母细胞，其具有：
II.包括编码IMA5p的基因的基因型。
84.根据项82和83中任一项的酵母细胞，其中IMA5p选自由以下组成的组：SEQ IDNO:16的IMA5p、SEQ ID NO:17的IMA5p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
85.根据项82和83中任一项的酵母细胞，其中IMA5p选自由以下组成的组：SEQ IDNO:34的IMA5p、SEQ ID NO:35的IMA5p、SEQ ID NO:36的IMA5p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
86.根据项82至85中任一项的酵母细胞，其中基因型V是所述酵母细胞包含至少两个编码SEQ ID NO:16的IMA5p或SEQ ID NO:17的IMA5p或前述任一者与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
87.根据项82至86中任一项的酵母细胞，其中基因型V是所述酵母细胞包含至少两个编码IMA5p的等位基因，所述等位基因各自选自编码SEQ ID NO:16的IMA5p、SEQ ID NO:17的IMA5p、SEQ ID NO:34的IMA5p、SEQ ID NO:35的IMA5p、SEQ ID NO:36的IMA5p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的等位基因。
88.根据项82至87中任一项的酵母细胞，其中基因型V是所述酵母细胞包含以下2个基因：
1)编码SEQ ID NO:16的IMA5p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:17的IMA5p或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
89.根据项82至88中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型I，例如，项39至41中任一项所限定的基因型I。
90.根据项82至89中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型II，例如，项46和49中任一项所限定的基因型II。
91.根据项82至90中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型III，例如，项55和58中任一项所限定的基因型III。
92.根据项82至91中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型IV，例如，项64至75中任一项所限定的基因型IV。
93.根据项82至92中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征I，例如，项3至4中任一项所限定的特征I。
94.根据项82至93中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征II，例如，项1和5至7中任一项所限定的特征II。
95.根据项82至94中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征IX，例如，项28至35中任一项所限定的特征IX。
96.根据前述项中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有；
III.包含至少3个编码AGT1的基因的基因型，所述AGT1选自由以下组成的组：SEQID NO:18的AGT1、SEQ ID NO:19的AGT1、SEQ ID NO:20的AGT1、SEQ ID NO:26的AGT1、SEQID NO:27的AGT1、SEQ ID NO:28的AGT1、SEQ ID NO:29的AGT1、SEQ ID NO:30的AGT1、SEQID NO:31的AGT1、SEQ ID NO:32的AGT1及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
97.酵母细胞，具有：
VI.包含至少3个编码AGT1的基因的基因型，所述AGT1选自由以下组成的组：SEQID NO:18的AGT1、SEQ ID NO:19的AGT1、SEQ ID NO:20的AGT1、SEQ ID NO:26的AGT1、SEQID NO:27的AGT1、SEQ ID NO:28的AGT1、SEQ ID NO:29的AGT1、SEQ ID NO:30的AGT1、SEQID NO:31的AGT1、SEQ ID NO:32的AGT1及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
98.根据项96至97中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞包含至少两个编码全长AGT1的基因，所述全长AGT1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:18的AGT1、SEQ ID NO:19的AGT1、SEQ ID NO:20的AGT1、SEQ ID NO:27的AGT1、SEQ ID NO:28的AGT1、SEQ ID NO:30的AGT1、SEQ ID NO:31的AGT1、SEQ ID NO:32的AGT1及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
99.根据项96至98中任一项的酵母细胞，其中基因型VI是所述酵母细胞包含以下3个基因：
1)编码SEQ ID NO:18的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:19的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:20的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
100.根据项96至99中任一项的酵母细胞，其中基因型VI是所述酵母细胞包含以下2个基因：
1)编码SEQ ID NO:27的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:28的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
101.根据项96至100中任一项的酵母细胞，其中基因型VI是所述酵母细胞包含以下3个基因：
1)编码SEQ ID NO:30的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
2)编码SEQ ID NO:31的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因；和
3)编码SEQ ID NO:32的AGT1或其与之共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物的基因。
102.根据项96至101中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型I，例如，项39至41中任一项所限定的基因型I。
103.根据项96至102中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型II，例如，项46和49中任一项所限定的基因型II。
104.根据项96至103中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型III，例如，项55和58中任一项所限定的基因型III。
105.根据项96至104中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型IV，例如，项64至75中任一项所限定的基因型IV。
106.根据项96至105中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有基因型V，例如，项82至88中任一项所限定的基因型V。
107.根据项96至106中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征I，例如，项3至4中任一项所限定的特征I。
108.根据项96至107中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征II，例如，项1和5至7中任一项所限定的特征II。
109.根据项96至108中任一项的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征IX，例如，项28至35中任一项所限定的特征IX。
110.用于生产饮品的方法，所述方法包括步骤
a.提供起始液体
b.提供根据项1至109中任一项的酵母细胞
c.用所述酵母细胞发酵所述起始液体，
因而生产饮品
111.根据项110的方法，其中所述起始液体包含大麦的水提取物。
112.根据项110至111中任一项的方法，其中所述起始液体包含麦芽的水提取物。
113.根据项110至112中任一项的方法，其中所述起始液体是麦芽汁。
114.根据项110至113中任一项的方法，其中所述发酵在10至20℃范围内的温度进行。
实施例
本发明由以下实施例进一步说明，然而这些实施例不应当解释为限制本发明。
在实施例中，使用以下酵母株：
将杂合酵母1的基因组序列作为SEQ ID NO:1在作为优先权的丹麦专利申请PA2014 70825中提供。PA 2014 70825的SEQ ID NO:1显示来自杂合体1的基因组序列的已装配支架的序列。序列以fasta格式提供。如这种情形下使用的术语“支架”指从重叠的重叠群中重构的基因组序列的一部分。术语“重叠群”指源自短DNA片段的再装配的连续重叠序列。
PA 2014 70825的SEQ ID NO:1提供总计1629个支架(编号从数字0至1628)的序列。在PA 2014 70825的SEQ ID NO:1中，提供由术语“>支架_X”分隔的每个支架的序列，其中X表示具有以下序列的支架的编号。
因此，杂合酵母1的基因组优选地包含分布于多个染色体的支架0至1628的全部。
杂合酵母1的基因组序列还按DDBJ/EMBL/GenBank登录号LOQJ00000000而获得。因此，关于杂合酵母1的全基因组Shotgun项目已经按登录号LOQJ00000000保藏于DDBJ/EMBL/GenBank。本专利中描述的版本是版本LOQJ01000000。
提交的数据如下：
SUBID BioProject BioSample 登录号
SUB1207553 PRJNA304272 SAMN04297180 LOQJ00000000
全基因组Shotgun项目显示来自杂合体酵母1的基因组序列的装配支架的序列。如这种情形下使用的术语“支架”指从重叠的重叠群重构的基因组序列的一部分。术语“重叠群”指源自短DNA片段的再装配的连续重叠序列。DDBJ/EMBL/GenBank登录号LOQJ00000000版本LOQJ01000000提供了总计8919个支架的序列。因此，杂合酵母1的基因组优选地包含分布于多个染色体的支架0至8919的全部。因此，本发明的酵母细胞还可以包含分布于多个染色体的支架0至8919的全部。
杂合酵母7的基因组序列还按DDBJ/EMBL/GenBank登录号LOQK00000000而获得。
因此，关于杂合酵母7的全基因组Shotgun项目已经按登录号LOQK00000000保藏于DBJ/EMBL/GenBank。本专利中描述的版本是版本LOQK01000000。
提交的数据如下：
SUBID BioProject BioSample 登录号
SUB1208131 PRJNA304273 SAMN04297181 LOQK00000000
全基因组Shotgun项目显示来自杂合体酵母7的基因组序列的装配支架的序列。如这种情形下使用的术语“支架”指从重叠的重叠群中重构的基因组序列的一部分。术语“重叠群”指源自短DNA片段再装配的连续重叠序列。DDBJ/EMBL/GenBank登录号LOQK00000000版本LOQK01000000提供了总计9492个支架的序列。因此，杂合酵母7的基因组优选地包含分布于多个染色体的支架0至9492的全部。因此，本发明的酵母细胞还可以包含分布于多个染色体的支架0至9492的全部。
实施例1
通过以下方式制备10hl啤酒：以1000万个活细胞/ml将酵母接种至Soufflet供应的基于麦芽的商业麦芽汁(16柏拉图度)，随后在17℃发酵直至二酰基低于预定的阈值，所述阈值设定在认为拉格啤酒有变味的阈值以下的水平。在本实施例中，二酰基阈值设定成30ppb。
在拉格啤酒中，邻位二酮类如二酰基和2,3-戊二酮如果高于阈值浓度存在，则产生不期望的异味(off-flavour)。二酰基和2,3-戊二酮均具有奶油硬糖味，但是二酰基的阈值低10倍。发酵管理部分旨在确保完成的啤酒含有低于其阈值的邻位二酮类，尤其二酰基。
酵母细胞在用来得到啤酒的第1代细胞接种物的槽(9hl规模)中增殖，之后是啤酒的第2代(每个10hl规模)。增殖的目的是产生数量足以接种酵母供真实的啤酒发酵的健康的酵母纯培养物。啤酒发酵以连续发酵进行，并且酵母一般在5至10次连续发酵后更换；然而向啤酒厂引入新增殖的酵母的频率单独决定。连续发酵物充当后续啤酒发酵的细胞接种物，并且经常仅增殖槽提供酵母细胞接种物供第一啤酒发酵(所谓啤酒的第1代)。在第1代后产生的啤酒发酵物称作第2代，依此等等。大部分啤酒发酵用来自先前啤酒发酵物而非增殖槽的酵母实施。啤酒发酵的细胞接种物一般是107个酵母细胞/ml。
该实施例中使用3个不同的酵母株。使用相同的麦芽汁和发酵条件。
爱尔酵母1
拉格酵母1
杂合酵母1
爱尔酵母1是酿酒酵母种的酵母。拉格酵母1是巴斯德酵母种的酵母。爱尔酵母1和拉格酵母1杂交，并且选择杂合株之一，命名为杂合酵母1。
表1显示最终柏拉图值，表2显示％乙醇(％v/v)，表3显示最终啤酒RDF、具有低于预定阈值的二酰基的天数和自啤酒第1和第2代的初级发酵的天数，其是在槽增殖结束(9hl)时使用3个酵母株制备的啤酒中和/或在啤酒第1代和第2代中。
杂合株1具有在37℃生长的能力(数据未显示)并且在较低温度如16℃也良好发酵(参见表1至表3)。
表1柏拉图值
表2乙醇％(％v/v)
乙醇％(％v/v) 拉格酵母1 杂合酵母1 爱尔酵母1
第1代，16℃ 7.51 7.64 7.58
第2代，18℃ 7.33 7.61 7.19
第1+2代平均 7.42 7.625 7.38
表3
接种率是作为细胞接种物添加以启动发酵的活酵母/mL的量。如与两个亲本株(拉格酵母1和爱尔酵母1)相比，杂合酵母1具有2％的RDF改善(参见表3)。杂合酵母1还具有较低水平的最终柏拉图值。
如与两个亲本株相比，杂合酵母1具有0.2％乙醇或更多的乙醇产率改善。杂合酵母1在温度16℃和18℃均具有改善的发酵性能。如与爱尔酵母1相比，杂合体1已经改善从而需要较短时间使二酰基水平低于阈值(至DA处于规范内的天数)。
杂合酵母1几乎与拉格酵母1相同的速率发酵(参见表3中至初级发酵的天数)，但是它需要较长时间使二酰基低于阈值(参见至DA处于规范内的天数)。
实施例2
来自冷冻贮存物的酵母细胞在YPD板上划线，用来接种在含20ml巴氏消毒的常规麦芽麦芽汁的50ml瓶中，并且在22℃温度培育。来自20ml培养物的细胞培养物用来将细胞再接种至含200ml体积麦芽汁的500ml瓶中并在22℃培育。从200ml体积麦芽汁，接种1.8L增殖槽，旨在接种1400-1500万个活细胞/ml并在16℃或18℃温度(同发酵温度)生长。用来制备麦芽汁的麦芽购自丹麦DMG。
用NucleoCounter测量总细胞和活细胞的数目。还从增殖槽测量活细胞的数目。1400-1500万个活细胞用来接种含糖量为15柏拉图度的2L麦芽汁，这允许所述麦芽汁在16℃(杂合酵母2、3和4及其相应的对照)或18℃(杂合酵母1及其相应的对照)发酵6天以获得所谓的啤酒第1代。在第1代结束时，1400-1500万个活细胞用来接种啤酒第2代。在温育第4天，测定悬浮细胞的数目。表4中显示由来自第2代的啤酒所得到的细胞数目。悬浮细胞的数目不反映总体细胞生长，而反映絮凝和/或沉降。悬浮细胞的数目通常优选在发酵晚期尽可能地低，这表示增加的絮凝和/或沉降。如果絮凝在过程中增加太早，这可以导致过早絮凝，从而导致该过程结束时发酵缓慢。
表4a.按2L规模产生的啤酒第2代。所示结果来自同一实验的生物学重复。
杂合酵母1产生比拉格酵母1更多的生物量(通过收获酵母的克数测量)，但杂合体1仍具有较少的悬浮细胞。
表4b
如上文显示，杂合酵母2、3和4的悬浮细胞比拉格酵母少，虽然它们产生略多的生物量(按发酵结束时收获的细胞克数计)。
在不同试验中，发现发酵6天后，杂合酵母2具有700万个/ml的悬浮细胞，而在发酵6天后，爱尔酵母1具有仅400万个/ml的悬浮细胞并且拉格酵母2具有3900万个/ml的悬浮细胞。因此，在这项试验中与拉格酵母相比，杂合酵母还具有低得多的悬浮细胞水平。
从爱尔酵母1和拉格酵母1(杂合酵母1)或拉格酵母2(杂合酵母2、3、4和7)产生的杂合体具有比两个亲本株爱尔酵母1和任一拉格株(拉格酵母1或2)更少的悬浮细胞。从而，杂合体具有改善的细胞沉降。这在酿造中具有酵母细胞糊的避免下游加工的意义，所述酵母细胞糊应当收集并用于啤酒过程的下一代的细胞再接种。
表4c中显示来自又一个试验的结果。实验设置如上文所述，例外是测试所示的酵母细胞。
表4c
实施例3
通过以下方式制备50L啤酒：将基于麦芽的常规麦芽汁(18柏拉图度)以1000万个活细胞/ml接种酵母，随后在18℃发酵。用来制备麦芽汁的麦芽购自丹麦DMG。
使用2个不同的酵母株。使用相同的麦芽汁和发酵条件。
拉格酵母1
杂合酵母1
表5a显示2个菌株的啤酒AE最终值，在来自用第1代和第2代产生的啤酒的50L规模槽中比较。
如本文所用的AE是“表观提取率”，其是根据提取物重量百分数的啤酒麦芽汁密度的计量并且以柏拉图标度表述。
表5a
与拉格酵母1相比，杂合酵母1的AE改善0.5％。
用拉格酵母2、杂合酵母4、杂合酵母7、杂合酵母8和糖化酵母进行相似的试验。表5b中显示在接种后第7天的AE和RDF。实验设置如上文在实验2中所述，同时测试所示的酵母细胞。
表5b
RDF以％提供。
还测定拉格酵母2、杂合酵母4和杂合酵母7的发酵速率。实验设置如上文在实验2中所述，例外是在发酵期间的几个时间点测定表观提取率并且在18℃温育。图16显示在接种麦芽汁后随时间推移的表观提取率(柏拉图度)。使用的麦芽汁具有15柏拉图度的起始含糖量。如所显示，杂合酵母4和杂合酵母7的初级发酵时间是约3天，而拉格酵母2的初级发酵时间是约4天。
实施例4
通过HPLC用荧光检测器测定根据实施例1中所述产生的起始麦芽汁和啤酒的氨基酸含量。
表6a显示成品啤酒中的氨基酸浓度。
表6a
杂合酵母1在成品啤酒中具有少得多的剩余氨基酸，这就啤酒老化和啤酒稳定性而言是有益。采用杂合体1发酵的啤酒将产生由那些氨基酸形成的较少量的strecker醛。
Strecker醛是啤酒中“老熟”风味的重要组分，其部分源自瓶装啤酒本身的氨基酸。已经显示参与形成感觉阈低的Strecker醛的氨基酸包括缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸和苯丙氨酸(表2)。Strecker醛形成发挥关键作用，因为其浓度增加令“老熟风味”的感官知觉增加。采用杂合酵母1发酵的啤酒将随后具有较少的老化风味，原因在于氨基酸消耗得更多。
表2.在异味strecker醛类形成中充当前体的氨基酸。
氨基酸 Strecker醛
甲硫氨酸 甲硫基丙醛
亮氨酸 3-甲基丁醛
缬氨酸 2-甲基丙醛
异亮氨酸 2-甲基丁醛
苯丙氨酸 苯乙醛、苯甲醛
采用拉格酵母2、杂合酵母4或杂合酵母7制备另一发酵，并且测定在发酵第7天“新啤酒(green beer)”中的氨基酸浓度。表6b中显示结果。实验设置如实施例2中所描述并且如实施例9中所述那样进行氨基酸分析。杂合体，尤其杂合酵母7，具有比拉格酵母2更少的留在“新啤酒”中的氨基酸；它表示存在更少形成啤酒中老化化合物的前体；
表6b
(na)-不适用；
参考文献
Baert,J.J.,J.De Clippeleer,P.S.Hughes,L.De Cooman和G.Aerts(2012)."Onthe Origin of Free and Bound Staling Aldehydes in Beer."Journal of Agricultural and Food Chemistry 60(46):11449-11472.
Clapperton,J.F.和I.C.MacWilliam(1971)."Fermentation of minor wortcarbohydrates by brewing yeasts."Journal of the Institute of Brewing 77(6):519-522.
Deng,X.,M.Petitjean,M.A.Teste,W.Kooli,S.Tranier,J.M.Francois和J.L.Parrou(2014)."Similarities and differences in the biochemical andenzymological properties of the four isomaltases from Saccharomycescerevisiae."FEBS Open Bio 4:200-212.
Teste,M.A.,J.M.Francois和J.L.Parrou(2010)."Characterization of a newmultigene family encoding isomaltases in the yeast Saccharomyces cerevisiae,the IMA family."J Biol Chem 285(35):26815-26824.
实施例5
如实施例3中具体说明那样，通过接种从二个不同种类的麦芽制备的基于麦芽的常规麦芽汁(16柏拉图度)，制备50L啤酒。
将基于麦芽的常规麦芽汁用1000个活细胞/ml酵母接种，随后在16℃发酵直至二酰基低于实施例1中具体说明的啤酒中阈值。
将另一种麦芽汁用1500个活细胞/ml酵母接种，随后对于拉格酵母1在16℃发酵，并且对于杂合酵母1在18℃发酵，直至二酰基低于实施例1中具体说明的啤酒中阈值。
使用2种不同酵母株和由2种不同麦芽制备的二种不同麦芽汁。使用相同的麦芽汁和发酵条件以平行比较2个菌株。
拉格酵母1
杂合酵母1
通过HPLC测定啤酒中异麦芽糖和潘糖的水平。表7中显示结果。
表7
潘糖和异麦芽糖的起始浓度具有麦芽汁依赖性，但是已经公开它是0.5至1g/L异麦芽糖和0.4至0.8g/L潘糖(Clapperton等人,1971)。因此，认为杂合酵母1利用60％至93％的潘糖。
通过测量不同酵母在含有2g/L潘糖或2g/L异麦芽糖作为唯一碳源的确定成分培养基中的生长，获得利用潘糖和异麦芽糖的定量数据：
来自冷冻贮存物的酵母细胞在YPD平板(1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖和2％琼脂-琼脂)上划线，并且将生长的细胞接种入液体YPD(1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖)。
3μL过夜液体YPD培养物接种入100μL YNB培养物(6.7g/L)，所述培养物无氨基酸，但含有硫酸铵，并用磷酸氢钾邻苯二甲酸盐缓冲至pH5.5(Hahn-B.等人,2005)并且以2g/L潘糖或2g/L异麦芽糖作为唯一碳源。通过使用Bioscreen C MBR(Oy GrowthCurves Ab Ltd，芬兰)在600nm测量光密度，伴以连续搅拌和在温度20℃温育，跟踪细胞生长。
选定的具有改善发酵性能的杂合拉格和爱尔酵母株已经获得利用潘糖(图1A)和异麦芽糖(图2)的能力。这种糖利用改善以图1A和图2A中的两种杂合体例举。
使用以2g/L潘糖作为唯一碳源的确定成分培养基，用爱尔酵母1、拉格酵母2和杂合酵母7以及用糖化酵母和杂合酵母8进行类似的实验。结果分别在图1B和1C中显示，这是生物学重复的代表。可以见到，拉格酵母1、拉格酵母2、糖化酵母均不能够利用潘糖作为唯一碳源。
还使用以2g/L异麦芽糖作为唯一碳源的确定成分培养基，用爱尔酵母1、拉格酵母2和杂合酵母7进行类似的实验。结果在图2B中显示，这是生物学重复的代表。可以见到，拉格酵母1、拉格酵母2、糖化酵母均不能够利用异麦芽糖作为唯一碳源。
参考文献
Clapperton J F,MacWilliam I C(1971)Fermentation of minor wortcarbohydrates by brewing yeasts.Journal of the Institute of Brewing 77,6:519-522.
Hahn-B,Karhumaa K,Larsson CU,Gorwa-Grauslund M,J,vanZyl WH.(2005).Role of cultivation media in the development of yeast strainsfor large scale industrial use.Microbial Cell Factories 10:4-31.
实施例6
来自冷冻贮存物的酵母细胞在YPD板上划线。将它们用来接种3ml液体YPD并且在搅拌下在22℃在15ml管中培育过夜。将3ml培育培养物离心，抛弃上清液并且将细胞溶解于水中。将管再次离心，抛弃上清液并溶解于3ml水中。
测量光密度(OD620nm)并且对于Biolog Inc.technology(Hayward CA,USA)商业提供的96孔平板的各孔的全部菌株和溶液，调节至始于OD＝0.2。指定Biolog板的全部溶液用于酿酒酵母和其他酵母的方法。在22℃温育96孔平板4.5天。
Biolog系统使得在单个实验中定量分析数千个细胞表型的水平成为可能。测试的每个孔设计成检验一个独立表型。Biolog使用氧化还原化学作为整体报道分子系统用以分析细胞呼吸。它具有四唑鎓染料，所述染料在细胞可能消耗孔中存在的该化合物时或在这个特定孔中存在该化合物情况下还原，显色。
比较三个酵母株，2个亲本株(拉格酵母1和爱尔酵母1)和所得到的杂合体(杂合酵母1)。实施例1中提供关于酵母株的详情。在某些条件下，3个菌株显示表型差异。杂合株1能够获得新的表型特征，例如利用几种二肽和某些三肽的能力(参见表8a)。
表8a
肽 拉格酵母1 爱尔酵母1 杂合酵母1
MET-TYR - - +
LEU-TYR - - +
VAL-MET - - +
PHE-TYR - - +
ILE-LEU - - +
ILE-ASN - - +
GLY-GLY-GLY - - +
+表示在含有所述肽作为唯一氮源的培养基上生长
-表示在含有所述肽作为唯一氮源的培养基上不生长
在类似的实验中比较了6个酵母株，即，酵母株拉格酵母1、拉格酵母2、爱尔酵母1、杂合酵母1、杂合酵母4和杂合酵母7。下文在表8b中显示结果。如所见，杂合体具有亲本中观察不到的新特性。在这个实验中，拉格酵母1显示在Ile-Asn上的少量生长，即便在先前实验中观察不到生长。但是，拉格酵母1的生长仍显著地低于杂合酵母1的生长。
表8b
杂合酵母4和杂合酵母7在Met-Tyr、Leu-Tyr、Phe-Tyr、Ile-Leu或GLy-Gly-Gly作为唯一氮源时不显示任何明显生长。
杂合酵母1也获得了在拉格酵母1中不存在的几种表型，例如在几种具有式Ala-Xaa的二肽上生长的能力，其中Xaa可以是任何氨基酸。这种能力经常与利用杂合酵母所能利用的尿囊素的能力关联(参见表9a)。
表9a
肽 拉格酵母1 爱尔酵母1 杂合酵母1
Ala-Glu - + +
Ala-Gly - + +
Ala-His -/+ + +
Ala-Thr -/+ + +
尿囊素 - + +
+表示在含有所述肽作为唯一氮源的培养基上生长
-表示在含有所述肽作为唯一氮源的培养基上不生长
-/+意指延迟的生长或伴以延迟阶段的生长
另外，杂合酵母4和7能够利用Ala-Xaa二肽作为唯一氮源，如表9b中所示。
表9b
肽 拉格酵母2 杂合酵母4 杂合酵母7
Ala-Glu - -/+ +
Ala-Gly - -/+ +
Ala-Thr -/+ + +
二肽和三肽是FAN的组成部分。FAN是游离氨基氮，它是麦芽汁或啤酒含氮量的度量。FAN由氨基酸、铵离子和小肽构成，它们存在于麦芽汁中并且它们确保合乎需要的酵母发酵性能(Lekkas C等人,2009)。可以在麦芽汁中找到许多不同的二肽组合。
杂合酵母1可以利用可能在麦芽汁存在的几种不同的受测二肽/三肽，并且因此具有更高范围的来自FAN的底物，所述底物可能是细胞生物量的前体、碳源或风味的前体。
参考文献
Lekkas C,Hill AE,Taidi B,Hodgson J,Stewart GG(2009).The role of smallwort peptides in brewing fermentations.J.Inst.Brew.115(2),134-139.
实施例7
通过以下方式取得蜜二糖利用的定性数据：将96孔平板中培育的酵母的YPD液体培养物重复铺种入含有50μg/ml x-α-gal(Clontech，Mountain View，US)的YPGalactose平板(1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％半乳糖和2％琼脂-琼脂)并且将平板在22℃温育5天。X-αgal是生色的蜜二糖类似物并且如果酵母能够利用蜜二糖则酵母菌落将变蓝，如果酵母不能利用蜜二糖则酵母菌落将为白色。
结果显示(表9)，测试的全部拉格酵母均呈蜜二糖利用阳性(菌落蓝色)，测试的全部爱尔酵母均呈蜜二糖利用阴性(菌落白色)，并且杂合体呈蜜二糖利用阳性或阴性(菌落蓝色或白色)，这取决于它们具有何种遗传性。
表9
酵母 酵母菌落的颜色
拉格酵母1、2、3和4 蓝色
爱尔酵母1、2、3、4和5 白色
杂合酵母1 白色
杂合酵母4 蓝色
杂合酵母5 蓝色
杂合酵母6 蓝色
通过测量酵母在2g/L曲二糖作为唯一碳源的确定成分培养基中的生长，获得蜜二糖的定量数据：
来自冷冻贮存物的酵母细胞在YPD平板上划线，并且将生长的细胞接种入液体YPD。
3μL过夜液体YPD培养物接种入100μL YNB培养物(6.7g/L)，所述培养物无氨基酸，但含有硫酸铵，用磷酸氢钾邻苯二甲酸盐缓冲至pH5.5(Hahn-B.等人,2005)并且以2g/L蜜二糖作为碳源。通过使用Bioscreen C MBR(Oy Growth Curves Ab Ltd，芬兰)在600nm测量光密度，伴以连续搅拌和在温度20℃温育，跟踪细胞生长。拉格和爱尔的杂合体获得了利用蜜二糖的能力，但并非全部杂合体均有这种能力(这以图3中的三个杂合体例举)。
参考文献：
Hahn-B,Karhumaa K,Larsson CU,Gorwa-Grauslund M,J,vanZyl WH.(2005).Role of cultivation media in the development of yeast strainsfor large scale industrial use.Microbial Cell Factories 10:4-31.
实施例8
改善的二糖和三糖利用
如实施例3中具体说明那样，通过用1500万个活细胞/ml接种基于麦芽的麦芽汁，随后发酵直至二酰基低于30ppb，制备50L啤酒。从常规的麦芽化大麦或从null-LOX大麦制备麦芽。
使用2个不同的酵母株：拉格酵母1和杂合酵母1。使用相同的麦芽汁和发酵条件以平行比较2个菌株，例外是拉格酵母1发酵在18℃实施，而杂合酵母1发酵在16℃实施。存在用相同菌株制备的三份独立的酿造物并且通过NMR测定不同糖的水平。图4中显示在最终瓶装啤酒中不同的特定糖的水平的代表性结果。
NMR结果显示，杂合酵母1对异麦芽糖、潘糖、黑曲霉糖、曲二糖和其他未识别糖的利用改善(图4)。但是，拉格酵母1不能够利用这些糖。
二糖异麦芽糖、麦芽酮糖和三糖潘糖和麦芽三糖是用于酿造啤酒的麦芽汁介质中的少数糖(Clapperton和MacWilliam 1971)。我们的结果显示，拉格酵母1酿造的啤酒中还存其他二糖如黑曲霉糖、曲二糖和海藻糖(图4)。改善少量存在的那些糖的糖利用可归结于杂合酵母1更好的总糖利用和乙醇产率的改善。
实施例9
通过以下方式制备自第1代的50L啤酒：将制备自全部麦芽的基于麦芽的常规麦芽汁(13.6柏拉图度)用1500万个酵母活细胞/ml作为接种物接种，随后在18℃发酵5天并在14℃发酵2天。细胞接种物从先前的增殖槽获得。用来制备麦芽汁的麦芽购自丹麦DMG。在第6天，采集发酵麦芽汁样品(与“新啤酒”样品相对应)并离心，并且将上清液冷冻在-20℃直至分析(表10)。基本上如供应商所描述，使用来自Waters的AccQ-Tag Ultra衍生化试剂盒，通过具有Photo二极管阵列检测的UPLC测定游离氨基酸的浓度。根据生产商的说明(Waters)，使用预混的洗脱剂A和B，在Waters AccQ-Tag Ultra氨基酸分析柱进行分离。用来发酵的原始麦芽汁的样品也与已经发酵的样品比较。，比较全部新啤酒样品和原始麦芽汁的样品的氨基酸浓度(表10)。
在杂合酵母发酵的新啤酒中残余氨基酸的水平比拉格酵母1发酵的新啤酒低得多，这就啤酒老化和啤酒稳定性而言是有益的。认为在采用杂合酵母制作的啤酒中，储存期间将从这些氨基酸形成较少的strecker醛。Strecker醛是啤酒中“老熟”风味的重要组分，该风味部分地源自瓶装啤酒本身的氨基酸。已经显示形成感觉阈低的Strecker醛的氨基酸包括缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸和苯丙氨酸(Baert,De Clippeleer等人,2012)。Strecker醛的形成发挥关键作用，因为其浓度增加令“老熟风味”的感官知觉增加。采用杂合酵母1和4酿造的啤酒将具有较少的老化风味，原因在于氨基酸消耗得更多，并且这种作用将在浓醪发酵或具有较高浓度的FAN来源的麦芽汁麦芽中更明显。
新啤酒中，氨基酸脯氨酸还被杂合酵母1和4利用，但是不被拉格酵母利用。氨基酸脯氨酸是麦芽汁中的主要氨基酸组分，不过它最难以吸收，从而脯氨酸利用改善的杂合酵母将具有利用拉格酵母不能利用的这种氮源的额外能力。
表10.按天数的新啤酒的氨基酸分析(mg/L)
Baert,J.J.,J.De Clippeleer,P.S.Hughes,L.De Cooman和G.Aerts(2012)."Onthe Origin of Free and Bound Staling Aldehydes in Beer."Journal of Agricultural and Food Chemistry 60(46):11449-11472.
实施例10
实施例1中描述的杂合酵母1的基因组序列如下测定。
基因组DNA提取和全基因组测序和基因组装配由LGC Genomics GmbH(柏林，德国)进行。对于基因的额外单独测序，通过MasterPure TM Yeast DNA纯化试剂盒(Epicentre,Ilumina Denmark ApS,哥本哈根,丹麦)进行菌株的基因组DNA提取。用高保真PCR酶混合物或具有低PCR循环数的Dream Taq聚合酶(二者均来自Thermo Fisher Scientific BalticsUAB(Vilnius，立陶宛))进行自基因组DNA的PCR扩增。PCR产物由NucleoSpin PCR Clean-up(Macherey-Nagel,Düren,德国)纯化。用试剂盒实施PCR产物的克隆并且在补充有β-X-半乳糖的LB氨苄青霉素平板上选择。用来自Thermo Fisher ScientificBaltics UAB(Vilnius,立陶宛)的GeneJET质粒微量制备试剂盒纯化质粒。在EurofinsGenomics(Ebersberg,德国)进行质粒测序。
使用装配的基因组序列和/或PCR产物的序列，对杂合酵母1、拉格酵母1和爱尔酵母1分析选择的多个基因。使用遗传密码，从基因序列或从PCR产物的序列推断蛋白质序列。
使用PCR产物的序列，对杂合酵母4、杂合酵母7和拉格酵母2分析选择的多个基因。通过用高保真PCR酶PCR扩增获得序列，随后如适用则克隆并测序各个PCR克隆。通过PCR、克隆和测序鉴定杂合酵母4和杂合酵母7的等位基因。通过PCR和测序(IMA1)鉴定拉格酵母2的等位基因或从基因组序列(AGT1)装配出来。使用遗传密码，从PCR产物的序列推断蛋白质序列。
本文中展现的LONG-IMA1等位基因由3氨基酸组合限定：位置165处的I(异亮氨酸)或T(苏氨酸)、位置287处的R(精氨酸)或K(赖氨酸)和位置336处的Y(酪氨酸)或F(苯丙氨酸)。爱尔1LONG_IMA1等位基因的氨基酸特征标识基序是I-R-F和I-K-F。拉格酵母1和拉格酵母2具有T-R-Y基序。杂合酵母1含有I-K-F等位基因和T-R-Y等位基因。杂合酵母4含有I-R-F基序。杂合酵母4还含有具有特征标识基序I-R-Y的新杂合体等位基因。杂合酵母7含有I-K-F等位基因和T-R-Y等位基因。杂合酵母7还含有具有I-R-Y基序的新杂合体等位基因，所述基序与杂合酵母_4编码的蛋白质相同。
表11a总结了拉格酵母1、爱尔酵母1和杂合酵母1中参与二肽利用的各种基因的状态。
表11a
*DAL5是杂合酵母1从亲本爱尔酵母1遗传的基因的例子。与DAL5有关的术语Sc指SEQ ID NO:6的酿酒酵母DAL5蛋白。图5中显示DAL5蛋白序列的比对结果。
**PTR2是杂合酵母1具有增加的拷贝数的例子。因此，杂合酵母1具有从拉格酵母1遗传的nonSc(非Sc)等位基因和来自其两个亲本的至少2个Sc等位基因。仅研究杂合酵母1的PTR2等位基因的片段。
***UBR1是杂合酵母1中具有互补活性的基因例子。爱尔酵母1编码一种截短的蛋白质(900aa而非1951aa)，所述蛋白质导致负责Cup9p降解活化的结构域缺失并因此导致PTR2表达阻遏；杂合酵母1具有从拉格酵母1遗传的Sc等位基因和非Sc等位基因，因此补足Ubr1p针对Cup9p降解的活性，并且因此补足进一步激活PTR2表达的能力。图6中显示来自爱尔酵母1、杂合酵母1和拉格酵母1的PTR2的Sc等位基因的比对结果，并且图7中显示拉格酵母1和杂合酵母1的非Sc等位基因的比对结果。
进一步研究杂合酵母1和杂合酵母7的基因组序列并且表11b中总结了结果。这些分析分别基于按DDBJ/EMBL/GenBank登录号LOQJ00000000(版本LOQJ01000000)和DDBJ/EMBL/GenBank登录号LOQK00000000(版本LOQK01000000TPTR2)可获得的基因组序列。
基于基因组序列(参见上文登录号)进行等位变异的PTR2分析。杂合酵母1和杂合酵母7均保留了非Sc_PTR2拷贝。在表11a中，展现杂合酵母1的片段化Sc_拷贝。表11b显示杂合酵母1中基因组序列内Sc_PTR2的完好拷贝。杂合酵母1可能含有3个编码PTR2的等位基因，如表11a中所示。杂合酵母7也具有Sc_PTR2。在两种杂合体中，Sc_PTR2蛋白质序列显示在Sc_PTR2爱尔酵母1和Sc_PTR2拉格酵母1拷贝和2拷贝之间的杂交。
基于基因组序列(参见上文登录号)进行等位变异的DAL5分析。杂合酵母1和杂合酵母7均保留了来自爱尔酵母1的Sc_DAL5。杂合酵母7也保留非Sc_DAL5。
基于基因组序列(参见上文登录号)进行等位变异的UBR1分析。两个拉格亲本酵母具有被不同截短的Sc_拷贝。先前，拉格1基因组数据检索仅产生不允许确定早期终止密码子的片段化序列。两种杂合酵母都保留了来自拉格亲本的非Sc_UBR1。在两个杂合体中检出的Sc_拷贝从爱尔1亲本遗传。
表11b
表12a总结了拉格酵母1、爱尔酵母1和杂合酵母1中参与利用糖的各种基因的状态。
表12b总结了拉格酵母2、杂合酵母4和杂合酵母7中参与利用糖的各种基因的状态。
几种因可能参与利用异麦芽糖。这包括Agt1p，其为可以转运异麦芽糖的糖转运蛋白。另外，存在5个不同的异麦芽糖酶，它们是α-1,6-葡糖苷酶，但还具有其他葡糖苷酶活性。
基于基因组序列信息，在拉格酵母1中未鉴定到具有完整编码序列的IMA1基因，并且在NCBI数据库中找得到的其他巴斯德酵母株也没有酿酒酵母IMA1基因的拷贝。有趣地，杂合酵母1含有具备二种不同长度的IMA1基因的4个不同等位基因。
拉格酵母1的基因组中存在IMA5-样(IMA5-like)序列。在杂合酵母1中，存在2个等位基因：一个与拉格酵母1相同的非酿酒酵母拷贝和一个与爱尔1酵母中存在的序列十分相似，但具有3个氨基酸变化的酿酒酵母拷贝。
已经显示基因AGT1编码的高亲和力α-葡糖苷转运蛋白促进麦芽三糖和异麦芽糖的运输。这种转运蛋白具有宽泛底物特异性。
我们在拉格酵母1中仅找到非酿酒酵母源AGT1转运蛋白的一个完整拷贝，酿酒酵母拷贝是截短的。相反，杂合酵母1具有AGT1基因的3个完整拷贝：一个与拉格酵母1中存在的非酿酒酵母拷贝相同，和两个与爱尔1酵母中存在的AGT1基因十分相似但各自具有一个氨基酸变化的酿酒酵母等位基因。
在杂合酵母4中，鉴定到非酿酒酵母AGT1的2全长拷贝，同时一个拷贝携带1个氨基酸变化。在杂合酵母7中，鉴定到3个全长拷贝：一个与爱尔酵母1AGT1完全相同，和非酿酒酵母AGT1的2个等位基因，其中一个拷贝携带1个氨基酸变化。
除研究如上文所述的基因组序列之外，通过使用如上文所述的爱尔酵母1的IMA1_短基因座特异性引物克隆和测序，获得了关于拉格酵母1和拉格酵母2中以及杂合酵母1、杂合酵母4和杂合酵母7中IMA1短的额外信息。基于基因组序列信息，拉格1酵母和拉格2酵母基因组序列中未找到IMA1_短基因。但是，来自两个拉格酵母亲本的IMA1-短的克隆和测序显示，存在一个基因，但是它编码与相应的爱尔酵母1IMA1短蛋白质差异6个氨基酸的蛋白质。下表12c中总结了数据。
在杂合酵母1中，克隆和测序鉴定出3个IMA1短等位基因：二个上文所述的等位基因和一个具有杂合本质的额外等位基因(基于核苷酸序列并且还基于蛋白质水平，蛋白质序列作为SEQ ID NO:1提供)。杂合酵母4和杂合酵母7保留了来自两个亲本的IMA1_短，但是克隆还鉴定出两个杂合体中具有独有氨基酸变化的额外等位基因。因此，全部三个杂合株均含有3个IMA1短等位基因。
基于基因组序列中可获得的序列，进行IMA5等位变异分析。除上文在表12a中描述的等位基因之外，杂合酵母1还含有一个额外的等位基因。因此，杂合酵母1和杂合酵母7均保留了Sc_IMA5拷贝和非Sc_IMA5拷贝。杂合酵母7具有因爱尔酵母1和拉格酵母2之间Sc_IMA5基因座处重组产生的独特杂合Sc_IMA5等位基因。杂交从核苷酸序列显而易见，并且在蛋白质序列上可见。
表12c
实施例11
通过测量不同酵母在含有2g/L麦芽酮糖或2g/L麦芽三糖或2g/L曲二糖作为唯一碳源的确定成分培养基中的生长，获得利用麦芽酮糖、麦芽三糖和曲二糖的数据：
来自冷冻贮存物的酵母细胞在YPD平板(1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖和2％琼脂-琼脂)上划线，并且将生长的细胞接种入液体YPD(1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖)。
3μL过夜液体YPD培养物接种入100μL YNB培养物(6.7g/L)，所述培养物无氨基酸，但含有硫酸铵，用磷酸氢钾邻苯二甲酸盐缓冲至pH5.5(Hahn-B.等人,2005)，并且以2g/L麦芽酮糖或2g/L麦芽三糖或2g/L曲二糖作为唯一碳源。
通过使用Bioscreen C MBR(Oy Growth Curves Ab Ltd，芬兰)在600nm测量光密度，伴以连续搅拌和在温度20℃温育，跟踪细胞生长。
测试爱尔酵母1、杂合酵母1、杂合酵母4和杂合酵母7是否能够利用麦芽三糖作为唯一碳源。图13中显示结果。
还测试爱尔酵母1、杂合酵母1、杂合酵母4、杂合酵母7、糖化酵母和杂合酵母8是否能够利用麦芽酮糖作为唯一碳源。图14中显示结果。
还测试爱尔酵母1、拉格酵母1、拉格酵母2、糖化酵母、杂合酵母1、杂合酵母4、杂合酵母7和杂合酵母8是否能够利用曲二糖作为唯一碳源。图15中显示结果。可以见到，拉格酵母1和拉格酵母2均不能利用曲二糖作为唯一碳源，而糖化酵母仅可以非常差地利用曲二糖唯一碳源。
实施例12
为了进一步研究使用杂合酵母7发酵时获得的真实发酵度，进行大规模试验。在不同地点用拉格酵母2或用杂合酵母7发酵以大规模从不同混合物制备的麦芽汁直至二酰基处于规范内。测定真实发酵度(RDF)。表13显示与拉格酵母2发酵后获得的RDF相比，用杂合酵母7发酵后获得的RDF％的绝对增量。
通过糖化不同比率的麦芽、大麦(即非麦芽化大麦粒)和稻，制备麦芽汁。此外，添加不同量的葡萄糖浆。表13中还显示用于制备不同麦芽汁的麦芽:大麦:葡萄糖浆:稻的比率。
表13
缩写
RDF–真实发酵度
YPD-(1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖)
YPD平板(1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％葡萄糖和2％琼脂-琼脂)
YNB(酵母氮源)
OD：光密度
HPLC：高效液相色谱法
YPGalactose平板(1％酵母提取物，2％蛋白胨，2％半乳糖和2％琼脂-琼脂)。

Claims (35)

1.一种酵母细胞，其具有至少一个以下特征：
II.能够利用潘糖作为唯一碳源；
III.能够利用一种或多种二肽作为唯一氮源。
2.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
I.能够利用异麦芽糖作为唯一碳源。
3.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中当所述潘糖以1g/L至5g/L范围内，如1g/L至3g/L范围内，例如2g/L的浓度存在时，所述酵母细胞能够利用潘糖作为唯一碳源。
4.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞能够移除至少45％存在于麦芽汁中的潘糖。
5.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
III.能够利用一种或多种二肽作为唯一氮源。
6.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞还能够利用尿囊素作为唯一氮源。
7.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
IV.能够利用一种或多种三肽作为唯一氮源。
8.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
V.能够在允许所述酵母细胞生长的条件下温育5天后，将一种或多种氨基酸的水平降低到不多于10％的起始浓度。
9.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
VI.当添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范内时，能够产生每柏拉图度至少4.7千分比乙醇。
10.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
VII.当添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育直至二酰基的水平处于规范内时，能够以至少68如至少70的真实发酵度发酵糖。
11.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有特征VII，其中特征VII是所述酵母细胞能够以高于其亲本株之一至少1如至少2的RDF发酵糖。
12.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
VIII.能够利用蜜二糖作为唯一碳源。
13.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
X.能够如此沉降，从而当添加所述酵母细胞至具有至少10柏拉图度的含糖量的麦芽汁组合物并且温育4天时，最多1200万个如最多1000万个细胞/ml处于悬浮中。
14.根据权利要求13所述的酵母细胞，其中在允许所述细胞生长的条件下温育5天后，悬浮中的细胞数目/ml是初始细胞数目/ml的最多80％，如最多70％，例如最多60％，如最多50％，例如最多40％。
15.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征：
IX.能够利用除异麦芽糖、潘糖和/或蜜二糖之外的一种或多种二糖和/或三糖。
16.根据权利要求15所述的酵母细胞，其中所述二糖选自曲二糖、黑曲霉糖、蔗糖、松二糖、麦白糖和帕拉金糖。
17.根据权利要求15所述的酵母细胞，其中所述二糖是曲二糖。
18.根据权利要求15所述的酵母细胞，其中所述二糖是麦芽酮糖。
19.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞还具有特征
XI：能够以最多4天，例如最多3天的初级发酵时间发酵麦芽汁。
20.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有：
I.包含编码DAL5的基因的基因型。
21.根据权利要求20所述的酵母细胞，其中基因型I是所述酵母细胞包含至少一个编码DAL5的等位基因，其中编码DAL5的所述等位基因编码选自由以下组成的组的DAL5：SEQ IDNO:6的DAL5、SEQ ID NO:39的DAL5、SEQ ID NO:40的DAL5中的DAL5及其与前述任任一者共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
22.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有：
II.包含至少2个编码PTR2的等位基因的基因型。
23.根据权利要求22所述的酵母细胞，其中基因型II是所述酵母细胞包含至少两个编码PTR2的等位基因，所述等位基因各自选自编码由以下组成组的基因：SEQ ID NO:7的PTR2、SEQ ID NO:8的PTR2、SEQ ID NO:9的PRT2、包含SEQ ID NO:37的PRT2、SEQ ID NO:38的PRT2、SEQ ID NO:43的PRT2、SEQ ID NO:44的PRT2及前述每者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
24.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有：
III.包含编码UBR1的基因的基因型。
25.根据权利要求24所述的酵母细胞，其中基因型III是所述酵母细胞包含至少两个编码UBR1的等位基因，所述UBR1各自选自由以下组成的组：包含SEQ ID NO:10的UBR1、SEQ IDNO:11的UBR1、包含SEQ ID NO:41的UBR1、SEQ ID NO:42的UBR1、包含SEQ ID NO:45的UBR1及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
26.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有：
IV.包含编码IMA1p的至少3个基因，如至少4个基因的基因型。
27.酵母细胞，其具有：
IV.包含编码IMA1p的至少3个基因，如至少4个基因的基因型。
28.根据权利要求26和27中任一项所述的酵母细胞，其中IMA1p选自由以下组成的组：SEQ ID NO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p、SEQ ID NO:14的IMA1p、SEQ ID NO:15的IMA1p、SEQ ID NO:21的IMA1p、SEQ ID NO:22的IMA1p、SEQ ID NO:23的IMA1p、SEQ ID NO:24的IMA1p、SEQ ID NO:25的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
29.根据权利要求26至28中任一项所述的酵母细胞，其中基因型IV是所述酵母细胞包含编码IMA1p的至少5个基因，其中所述基因各自选自编码由以下组成组的基因：SEQ IDNO:1的IMA1p、SEQ ID NO:2的IMA1p、SEQ ID NO:3的IMA1p、SEQ ID NO:4的IMA1p、SEQ IDNO:5的IMA1p、SEQ ID NO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p、SEQ ID NO:14的IMA1p、SEQID NO:15的IMA1p、SEQ ID NO:21的IMA1p、SEQ ID NO:22的IMA1p、SEQ ID NO:23的IMA1p、SEQ ID NO:24的IMA1p、SEQ ID NO:25的IMA1p和SEQ ID NO:33的IMA1p及前述任一者的功能同源物与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
30.根据权利要求26至29中任一项所述的酵母细胞，其中基因型IV是所述酵母细胞包含至少3个IMA1短等位基因和至少2个IMA1长等位基因，其中
a)所述3个IMA1短等位基因各自是编码选自由以下组成组的IMA1p的基因：SEQ ID NO:12的IMA1p、SEQ ID NO:13的IMA1p、SEQ ID NO:1的IMA1p、SEQ ID NO:2的IMA1p、SEQ IDNO:3的IMA1p、SEQ ID NO:4的IMA1p、SEQ ID NO:5的IMA1p、SEQ ID NO:33的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物；并且
b)所述2个IMA1长等位基因各自是编码选自由以下组成组的IMA1p的基因：SEQ ID NO:14的IMA1p、SEQ ID NO:15的IMA1p、SEQ ID NO:21的IMA1p、SEQ ID NO:22的IMA1p、SEQ IDNO:23的IMA1p、SEQ ID NO:24的IMA1p、SEQ ID NO:25的IMA1p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
31.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有
V.包含编码IMA5p的基因，优选地至少两个编码IMA5p的等位基因的基因型。
32.根据权利要求31所述的酵母细胞，其中IMA5p选自由以下组成的组：SEQ ID NO:16的IMA5p、SEQ ID NO:17的IMA5p、SEQ ID NO:34的IMA5p、SEQ ID NO:35的IMA5p、SEQ IDNO:36的IMA5p及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
33.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞具有基因型；
VI.包含至少3个编码AGT1的基因，所述AGT1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:18的AGT1、SEQ ID NO:19的AGT1、SEQ ID NO:20的AGT1、SEQ ID NO:26的AGT1、SEQ ID NO:27的AGT1、SEQ ID NO:28的AGT1、SEQ ID NO:29的AGT1、SEQ ID NO:30的AGT1、SEQ ID NO:31的AGT1、SEQ ID NO:32的AGT1及前述任一者的与其共有至少80％、优选地至少90％、然而更优选地至少95％如至少98％序列同一性的功能同源物。
34.用于生产饮品的方法，所述方法包括步骤
a.提供起始液体
b.提供权利要求1至34中任一项所述的酵母细胞
c.用所述酵母细胞发酵所述起始液体，
因而生产饮品。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述起始液体包含大麦和/或麦芽的水提取物。
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