CN102586050B - 粮食与甘蔗汁发酵的蒸馏酒及其工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用粮食和甘蔗汁为原料发酵制备蒸馏酒的方法,其包括:取大米加入α淀粉酶进行液化,加入糖化酶进行糖化,加入具有絮凝优化特性的酵母和发酵助剂进行初步发酵,加入甘蔗汁,密封发酵,过滤后蒸馏,得到蒸馏酒。另外本发明还提供了制备得到的蒸馏酒和酵母以及絮凝蛋白变体和基因。

Description

粮食与甘蔗汁发酵的蒸馏酒及其工艺
技术领域
本发明属于发酵技术和酿酒技术领域,具体而言,本发明涉及用粮食和甘蔗汁为原料发酵的蒸馏酒及其工艺。 
背景技术
以果品为原料发酵酿酒,会带来浓郁的果香等各种私人有好感的香气。例如,本发明人的中国专利200910114150公开了以桂圆和甘蔗汁为原料生产白酒的方法,该酒可以带有桂圆和甘蔗的清香。又如,本发明人的中国专利200910114151公开了以桂圆和甘蔗汁为原料生产白兰地酒的方法,该酒也可以带有桂圆和甘蔗的清香。 
然而,这些酒使用的原料较粮食昂贵,造成成本较高。尽管有些酿酒酵母本身能够给酒带来一些独特的风味,但是这类酵母往往却失酿酒产业中所需的一些优良工艺特性,如絮凝性。以这些酵母出发进行诱变筛选,尽管可以改善工艺特性,但是风味特性往往会在诱变中失去。 
为此,本发明人经过长期而艰苦的研究,开发了新的用粮食和甘蔗汁为原料发酵蒸馏酒的工艺。该工艺制备的酒不但能够保持酿酒酵母所带来的独特风味,从而减少甚至无需较为昂贵的原料的使用,而且具有优良的工艺特性,方便酿造过程,进一步节约了成本。更为令人意外的是,该工艺中所使用的酵母的絮凝性随着发酵酒液中含糖量的变化而变化,而且在含糖量高的时候絮凝率低,有益于充分发酵,而在含糖量低的时候絮凝率高,便于发酵结束后酒液的分离。 
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供新的用粮食和甘蔗汁为原料发酵蒸馏酒的工艺。另外,本发明还提供了用该工艺生产的蒸馏酒以及该工艺中所使用的酵母和基因。 
具体而言,在第一方面,本发明提供了用粮食和甘蔗汁为原料发酵制备蒸馏酒的方法,其包括: 
(1)取大米粉碎后,加水浸泡并煮熟,然后加入α淀粉酶进行液化,得到液化料;
(2)将步骤(1)获得的液化料调节成酸性,加入糖化酶进行糖化,得到糖化液;
(3)向步骤(2)获得的糖化液加入具有絮凝优化特性的酵母和发酵助剂,于23~35℃密封发酵12~60小时,得到初步发酵液;
(4)向步骤(3)获得的初步发酵液加入甘蔗汁,密封发酵至残糖含量<4克/L时,得到酒 液;
(5)过滤步骤(4)获得的酒液的上清液;和
(6)对步骤(5)获得的上清液进行蒸馏,得到蒸馏酒。
在本文中,絮凝优化特性指的是酵母在含糖环境下絮凝率低,而在无糖环境下絮凝率高。这种特性对于酿酒过程是尤其有益的。因为,在发酵初期,发酵液中含糖量高,此时不具有絮凝性质或絮凝率低的酵母,将尽量使其在发酵液中保持悬浮状态,从而使得发酵更为充分,提高发酵效率;在发酵结束时,发酵液中含糖量低,此时具有絮凝性质或絮凝率高的酵母,将容易沉淀到发酵罐底部,便于发酵终止后收集酒体。 
优选在本发明第一方面的方法中,大米和甘蔗汁的重量体积比(kg/L)为1~10∶1~10,优选为3~8∶3∶8,更优选为1∶1。 
在本发明中,大米和甘蔗汁分别在不同的步骤加入。优选在本发明第一方面的方法中,甘蔗汁的糖度为5~20°Bx,优选为10~18°Bx,更优选为15°Bx。甘蔗汁的糖度可以通过新鲜榨出的甘蔗汁加水稀释调节。 
在本发明中,液化和糖化可以按照本领域常规的粮食液化和糖化过程进行。其中所用的试剂,如淀粉酶和糖化酶都已经是很成熟的商品了。优选在本发明第一方面的方法中,液化的条件是:α淀粉酶用量为5~15U/克大米原料,于50~60℃搅拌15~60分钟,然后升温至85~97℃继续搅拌20~60分钟。也优选在本发明第一方面的方法中,糖化的条件是:于50~65℃加入糖化酶100~300U/克大米原料,保温45~120分钟。 
优选在本发明第一方面的方法中,调节成酸性是乳酸调节pH至4.0~4.8,优选调节pH至4.1~4.5,更优选调节pH至4.2。 
优选在本发明第一方面的方法中,具有絮凝优化特性的酵母是包含絮凝蛋白变体基因的酵母,所述絮凝蛋白变体基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。野生型絮凝蛋白的氨基酸序列如GenBank登录号CAA55024.1所示,其能赋予不具有絮凝性质的酵母以絮凝性质。尽管野生型絮凝蛋白给酵母赋予的絮凝性质较强,但是这种性质在含糖环境下也很强,这样造成了发酵过程中酵母也容易沉淀在发酵罐底部,造成发酵效率低下,因此实践中并没有得到推广。本发明人经过长期研究,偶然在我们的发酵中发现了一株具有絮凝优化特性的酵母,经过委托研究,发现其是絮凝蛋白相对于野生型絮凝蛋白发生了至少三处氨基酸位点的突变。将该絮凝蛋白变体基因导入其他现有酵母,如不具有絮凝性质的酵母,能够赋予该酵母絮凝优化特性,而且不改变该酵母原有发酵风味。因此,使得具有发酵风味但不具有絮凝优化特性的现有酵母能够得以重新利用。 
优选在本发明第一方面的方法中,发酵助剂是Fermaid K。这是对酵母发酵很有益的发酵助剂,目前已经商品化。 
在本发明第一方面的方法中,密封发酵至残糖含量<4克/L,通常需要在18~22℃,密封发酵9~12天。 
优选在本发明第一方面的方法中,蒸馏是两次蒸馏。任选蒸馏后,本发明第一方面的方法还可以包括勾兑、过滤、和/或陈酿的步骤。 
在第二方面,本发明提供了本发明第一方面的方法制备的蒸馏酒。这种酒能够保留原有酵母的发酵风味,而且便于酒液的后期纯化,由于酵母主要沉积在发酵罐底部,只需要取酒液的上清,经过简单的过滤即可获得澄清的酒体。 
在第三方面,本发明提供了絮凝蛋白变体,其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。本领域技术人员可以根据絮凝蛋白变体的氨基酸序列推导出其编码核苷酸序列,优选是密码子优化的核苷酸序列,如针对发酵所用的菌密码子使用情况优化的。 
在第四方面,本发明提供了编码本发明第三方面的絮凝蛋白变体的基因。该基因通过常规的DNA重组技术,可以导入质粒和菌体(如,酵母),表达本发明第三方面的絮凝蛋白变体。优选本发明第四方面的基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。该优选的基因核苷酸序列的密码子针对酿酒酵母宿主优化,而且密码子优化表不是根据现有公开的优化表进行的,而是根据我们长期研究发现的,在除了对单个密码子优化之外,还兼顾了CG含量的优化。 
在第五方面,本发明提供了本发明第四方面的基因在发酵制备蒸馏酒的方法中的应用。该基因可以赋予酵母以絮凝优化特性,因而对发酵制备蒸馏酒而言是非常有益的。优选在本发明第五方面的应用中,所述方法是本发明第一方面的方法。 
本发明具有下列优点和效果:在发酵初期发酵液中含糖量高时,酵母将尽量使其在发酵液中保持悬浮状态,从而使得发酵更为充分,提高发酵效率;在发酵结束发酵液中含糖量低时,酵母将容易沉淀到发酵罐底部,便于发酵终止后收集酒体;能够赋予酵母以絮凝优化特性,从而可以利用原有发酵特性优良而絮凝性质不佳的酵母,充分利用目前发酵厂和酒厂的酵母资源;本发明的酒带有甘蔗清香并能继承原有发酵特性优良的酵母的特性,香味吸引人,能够达到与加入唱本昂贵的原料相似的效果;本发明的酒使用了粮食作为发酵原料,降低了生产成本。 
为了便于理解,以下将通过具体的实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是,具体实例仅是为了说明,并不构成对本发明范围的限制。显然本领域的普通技术人员可 以根据本文说明,在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变,这些修正和改变也纳入本发明的范围内。另外,本发明引用了公开文献,这些文献也是为了更清楚地描述本发明,它们的全文内容均纳入本发明进行参考,就好像它们的全文已经在本发明说明书中重复叙述过一样。 
具体实施方式
以下本文将通过具体的实施例来描述发明。如未特别指明之处,可根据本领域技术人员所熟悉的酿酒技术和基因重组技术手册以及本文所引用的参考文献中所列的方法来实施。另外,实施例中所使用的材料和设备均可从市场上购买。 
实施例1絮凝性质优化的酵母的获得 
根据我们设计的基因序列(SEQ ID No:1,其编码的蛋白变体的氨基酸序列为SEQ ID No:2),通过商业途径委托广东暨大基因药物工程研究中心有限公司合成我们发现的絮凝蛋白变体基因并构建入酿酒酵母中。克隆过程参照《分子克隆实验指南》以及所用商品化试剂的操作指南进行,简要过程如下:
通过DNA自动合成仪,合成絮凝蛋白变体基因的核酸片段,用T4多核苷酸激酶(购自TaKaRa公司)将这些核酸片段的5’端进行磷酸化,然后等摩尔比混合这些核酸片段后于75℃变性5分钟,然后退火降温至12℃,加入T4DNA连接酶(购自TaKaRa公司)连接12小时。然后,取1μL上述连接产物在50μL反应体积中进行PCR扩增,其中正向引物如序列表的SEQ ID No:3所示(引入了EcoR I内切酶位点)、反向引物如序列表的SEQ ID No:4所示(引入了Xba I内切酶位点),反应条件为:以94℃变性2分钟,然后以94℃变性30秒、63℃退火60秒并72℃延伸90秒进行30个循环,最后以72℃延伸12分钟并降温至4℃。
琼脂糖凝胶电泳上述PCR产物,回收约4.5kb大小的片段,用EcoR I和Xba I双酶切该片段,并与经这两个内切酶酶切的pYESS2/CT质粒(可购自Invitrogen公司)用T4DNA连接酶进行连接,电转化法将pYESS-fln质粒转入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)QN732株(购自广西易多收生物科技有限公司,其为非凝絮性酵母,但是发酵产生的酒中有淡淡巧克力香味)中,涂布在选择性培养基上培养,取生长出的酵母提取总DNA后,用上述正向引物和反向引物PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳发现有约4.5kb大小的片段,表明已经将如序列表的SEQ ID No:1所示的基因导入了酿酒酵母中了。同时,将pYESS2/CT空质粒和克隆有野生型絮凝蛋白基因的pYESS2/CT质粒电转化入该非凝絮性酵母,分别作为阴性对照和阳性对照。 
我们将20mL絮凝检测液(50mmol/L柠檬酸钠,5mmol/LEDTA,20mmol/L CaCl2, pH 4.5;并分别加入以下终浓度的物质:不加入(无糖),1M葡萄糖)置于50mL摇瓶中,分别加入上述各酵母细胞1克(湿重),以30℃、100r/min振荡培养2小时。然后,取5mL细胞悬浮液至10mL试管中,立刻在液面取样200μL,垂直静置5分钟,然后在液面取样200μL,分别测定垂直静置前后的OD600值,计算絮凝率(絮凝率=(1-垂直静置后的OD600值/垂直静置前的OD600值)*100%)。结果如表1所示,酿酒酵母QN732基本不具有絮凝性质;克隆了野生型絮凝蛋白基因后,无论在无糖还是在含糖环境下,酵母都将具有絮凝性质;本发明的絮凝蛋白变体基因转入的酵母在含糖环境下不具有絮凝性质,将保持悬浮状态发酵,而在无糖环境下将具有絮凝性质,容易沉淀到发酵罐底部,便于发酵终止后收集。 
表1各酵母在含糖或不含糖条件下的絮凝率 
Figure DEST_PATH_GDA0000145680250000051
实施例2蒸馏酒的制备
将500克大米磨碎,加700克水浸泡1小时,然后煮熟,加2公斤水和α淀粉酶(可购自南宁赛华发酵制品有限公司)10U/克大米原料,于55℃搅拌30分钟,然后升温至95℃继续搅拌30分钟,使大米液化。然后加入乳酸调节pH至4.2,于58℃加入糖化酶(可购自南宁赛华发酵制品有限公司)150U/克大米原料,保温90分钟,去除糟渣后得到糖化液。
将上述糖化液装入灭菌的发酵罐,加入实施例1的克隆有絮凝蛋白变体基因的酵母2克(干重)和发酵助剂Fermaid K(可购自上海杰兔工贸有限公司)5克,于28℃发酵48小时,然后加入0.5L 15°Bx的甘蔗汁(新榨甘蔗汁用水稀释到15°Bx,然后高温灭菌,即成),温度控制在18~22℃,密封发酵9~12天。当残糖<4克/L时,发酵结束,由于此时酵母基本沉积在罐底,因此将上清液部分简单过滤即可取得澄清的酒体。 
加热酒体至沸腾,进行蒸馏,收集酒精含量为28%(vol)的馏出液,作为初馏原酒。将初馏原酒进行复蒸,弃去蒸馏初始酒精含量1%的头液,收集此后的馏出液,当收集的馏出液酒精含量达到55%(vol)时,停止收集。将收集的馏出液盛装入橡木桶或在其中浸泡橡木制品,陈酿3个月或以上。 
多批次酿造后,经检测,各批次酒理化指标稳定(见表2),符合国家酒类的标准;该酒香味中带有甘蔗汁的清香和巧克力的清香,口感丰满、醇和。 
表2理化指标 
  项目  酒精含量%(vol)   甲醇含量/(g/L)   铜含量(mg/L)
  指标   55   ≤2.0   ≤6.0
序列表
<110>长东,叶
<120>粮食与甘蔗汁发酵的蒸馏酒及其工艺
<130>CN
<160>4
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>4614
<212>DNA
<213>酿酒酵母
<400>1
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<210>2
<211>1537
<212>PRT
<213>酿酒酵母
<400>2
Met Thr Met Pro His Arg Tyr Met Phe Leu Ala Val Phe Thr Leu Leu
1                 5                       10                     15
Ala Leu Thr Ser Val Ala Ser Gly Ala Thr Glu Ala Cys Leu Pro Ala
            20                       25                       30
Gly Gln Arg Lys Ser Gly Met Asn Ile Asn Phe Tyr Gln Tyr Ser Leu
    35                          40                       45
Lys Asp Ser Ser Thr Ser Ser Asn Ala Ala Tyr Met Ala Tyr Gly Tyr
    50                      55                       60
Ala Ser Lys Thr Lys Leu Gly Asn Val Gly Gly Gln Thr Asp Ile Ser
65                       70                    75                       80
Ile Asp Tyr Asn Ile Pro Cys Val Ser Ser Ser Gly Thr Phe Pro Cys
                    85                       90                       95
Pro Gln Glu Asp Ser Tyr Gly Asn Trp Gly Cys Lys Gly Met Gly Ala
            100                       105                       110
Cys Ser Asn Ser Gln Gly Ile Ala Tyr Trp Ser Thr Asp Leu Phe Gly
         115                     120                     125
Phe Tyr Thr Thr Pro Thr Asn Val Thr Leu Glu Met Thr Gly Tyr Phe
    130                      135                     140
Leu Pro Pro Gln Thr Gly Ser Tyr Thr Phe Lys Phe Ala Thr Val Asp 
145                     150                     155                       160
Asp Ser Ala Ile Leu Ser Val Gly Gly Ala Thr Ala Phe Asn Cys Cys
                    165                     170                     175
Ala Gln Gln Gln Pro Pro Ile Thr Ser Thr Asn Phe Thr Ile Asp Gly
              180                      185                     190
Ile Lys Pro Trp Gly Gly Ser Leu Pro Pro Asn Ile Glu Gly Thr Val
            195                     200                     205
Tyr Met Tyr Ala Gly Tyr Tyr Tyr Pro Met Lys Val Val Tyr Ser Asn
    210                     215                     220
Ala Val Ser Trp Gly Thr Leu Pro Ile Ser Val Thr Leu Pro Asp Gly
225                     230                     235                     240
Thr Thr Val Ser Asp Asp Phe Glu Gly Tyr Val Tyr Ser Phe Asp Asp
                    245                    250                     255
Asp Leu Ser Gln Ser Asn Cys Thr Val Pro Asp Pro Ser Asn His Ala
             260                     265                     270
Val Ser Thr Thr Thr Thr Thr Thr Glu Pro Trp Thr Gly Thr Phe Thr
         275                     280                     285
Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Val Pro
    290                     295                     300
Thr Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Ser Thr
305                     310                     315                     320
Ile Ile Thr Thr Thr Glu Pro Trp Asn Ser Thr Leu Thr Ser Thr Ser
                    325                     330                     335
Thr Glu Leu Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Val Arg Thr Asp Glu
                340                  345                     350
Thr Ile Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Ile Thr
            355                     360                     365
Thr Thr Glu Pro Trp Asn Ser Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Leu
    370                     375                     380
Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile
385                     390                     395                     400
Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln
                    405                     410                     415
Pro Trp Asn Asp Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val
              420                     425                     430
Thr Gly Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile Val Ile Arg
    435                         440                     445
Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln Pro Trp Asp
    450                     455                     460
Asp Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr
465                     470                    475                     480
Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr
                   485                      490                     495
Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln Pro Trp Asn Asp Thr Phe
                500                     505                     510
Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Leu
         515                     520                     525
Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr
    530                       535                     540
Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln Pro Trp Asn Asp Thr Phe Thr Ser Thr
545                     550                  555                     560
Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp
                    565                     570                     575
Glu Thr Ile Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Ile
                580                     585                     590
Thr Thr Thr Glu Pro Trp Asn Ser Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu
        595                     600                     605
Leu Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile
    610                     615                     620
Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr 
625                     630                     635                     640
Gln Pro Trp Asn Asp Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr
                    645                     650                     655
Val Thr Gly Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile Val Ile
                660                     665                     670
Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln Pro Trp
         675                     680                     685
Asn Asp Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly
    690                     695                     700
Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile Val Ile Arg Thr Pro
705                     710                     715                     720
Thr Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln Pro Trp Asn Asp Thr
                    725                   730                     735
Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly
               740                     745                     750
Val Pro Thr Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Ser Glu
         755                     760                     765
Gly Leu Ile Ser Thr Thr Thr Glu Pro Trp Thr Gly Thr Phe Thr Ser
    770                     775                     780
Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Gln Pro Thr
785                     790                     795                     800
Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Ser Glu Gly Leu Val
                    805                     810                     815
Thr Thr Thr Thr Glu Pro Trp Thr Gly Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr
              820                     825                     830
Glu Met Thr Thr Ile Thr Gly Thr Asn Gly Val Pro Thr Asp Glu Thr
         835                        840                     845
Val Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Ser Glu Gly Leu Ile Ser Thr Thr
    850                         855                     860
Thr Glu Pro Trp Thr Gly Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr
865                     870                     875                     880
Thr Ile Thr Gly Thr Asn Gly Gln Pro Thr Asp Glu Thr Val Ile Val
                    885                     890                     895
Ile Arg Thr Pro Thr Ser Glu Gly Leu Ile Ser Thr Thr Thr Glu Pro
                900                     905                     910
Trp Thr Gly Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr
          915                     920                     925
Gly Thr Asn Gly Val Pro Thr Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr
    930                     935                     940
Pro Thr Ser Glu Gly Leu Ile Ser Thr Thr Thr Glu Pro Trp Thr Gly
945                     9509                     55                     960
Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Val Thr Thr Ile Thr Gly Thr Asn
                    965                     970                     975
Gly Gln Pro Thr Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Ser
             980                     985                     990
Glu Gly Leu Ile Ser Thr Thr Thr  Glu Pro Trp Thr Gly  Thr Phe Thr
          995                     1000                     1005
Ser Thr  Ser Thr Glu Met Thr  Thr Val Thr Gly Thr  Asn Gly Gln
    1010                     1015                     1020
Pro Thr  Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr Pro  Thr Ser Glu
    1025                     1030                     1035
Gly Leu Val Thr Thr Thr Thr  Glu Pro Trp Thr Gly  Thr Phe Thr
    1040                     1045                     1050
Ser Thr  Ser Thr Glu Met Ser  Thr Val Thr Gly Thr  Asn GlyLeu
    1055                     1060                     1065
Pro Thr  Asp Glu Thr Val Ile Val Val Lys Thr Pro  Thr Thr Ala
    1070                     1075                     1080
Ile Ser  Ser Ser Leu Ser Ser  Ser Ser Ser GlyGln  Ile Thr Ser
    1085                     1090                     1095
Ser Ile  Thr Ser Ser Arg Pro  Ile Ile Thr Pro Phe Tyr Pro Ser 
    1100                     1105                     1110
Asn Gly  Thr Ser Val Ile Ser  Ser Ser Val Ile Ser  Ser Ser Val
    1115                     11201                     125
Thr Ser  Ser Leu Phe Thr Ser  Ser Pro Val Ile Ser  Ser Ser Val
    1130                     1135                     1140
Ile Ser  Ser Ser Thr Thr Thr  Ser Thr Ser Ile Phe  Ser Glu Ser
    1145                     1150                     1155
Ser Lys  Ser Ser Val Ile Pro  Thr Ser Ser Ser Thr  Ser Gly Ser
    1160                     1165                     1170
Ser Glu  Ser Glu Thr Ser Ser  Ala Gly Ser Val Ser  Ser Ser Ser
    1175                     1180                     1185
Phe Ile  Ser Ser Glu Ser Ser  Lys Ser Pro Thr Tyr  Ser Ser Ser
    1190                     1195                     1200
Ser Leu  Pro Leu Val Thr Ser  Ala Thr Thr Ser Gln  Glu Thr Ala
    1205                     1210                     1215
Ser Ser  Leu Pro Pro Ala Thr  Thr Thr Lys Thr Ser  Glu Gln Thr
    1220                     1225                     1230
Thr Leu  Val Thr Val Thr Ser  Cys Glu Ser His Val  Cys Thr Glu
    1235                     1240                     1245
Ser Ile  Ser Pro Ala Ile Val  Ser Thr Ala Thr Val  Thr Val Ser
    1250                     1255                     1260
Gly Val  Thr Thr Glu Tyr Thr  Thr Trp Cys Pro Ile  Ser Thr Thr
    1265                     1270                     1275
Glu Thr  Thr Lys Gln Thr Lys  Gly Thr Thr Glu Gln  Thr Thr Glu
    1280                     1285                     1290
Thr Thr  Lys Gln Thr Thr Val  Val Thr Ile Ser Ser  Cys Glu Ser
    1295                     1300                     1305
Asp Val  Cys Ser Lys Thr Ala  Ser Pro Ala Ile Val  Ser Thr Ser
    1310                     1315                     1320
Thr Ala  Thr Ile Asn Gly Val  Thr Thr Glu Tyr Thr  Thr Trp Cys
    1325                     1330                     1335
Pro Ile  Ser Thr Thr Glu Ser  Arg Gln Gln Thr Thr  Leu Val Thr
    1340                     1345                     1350
Val Thr  Ser Cys Glu Ser Gly  Val Cys Ser Glu Thr  Ala Ser Pro
    1355                     1360                     1365
Ala Ile  Val Ser Thr Ala Thr  Ala Thr Val Asn Asp  Val Val Thr
    1370                     1375                     1380
Val Tyr  Pro Thr Trp Arg Pro  Gln Thr Ala Asn Glu  Glu Ser Val
    1385                     1390                     1395
Ser Ser  Lys Met Asn Ser Ala  Thr Gly Glu Thr Thr  Thr Asn Thr
    1400                     1405                     1410
Leu Ala  Ala Glu Thr Thr Thr  Asn Thr Val Ala Ala  Glu Thr Ile
    1415                     1420                     1425
Thr Asn  Thr Gly Ala Ala Glu  Thr Lys Thr Val Val  Thr Ser Ser
    1430                     1435                     1440
Leu Ser  Arg Ser Asn His Ala  Glu Thr Gln Thr Ala  Ser Ala Thr
    1445                     1450                     1455
Asp Val  Ile Gly His Ser Ser  Ser Val Val Ser Val  Ser Glu Thr
    1460                     1465                     1470
Gly Asn  Thr Lys Ser Leu Thr  Ser Ser Gly Leu Ser  Thr Met Ser
    1475                     1480                     1485
Gln Gln  Pro Arg Ser Thr Pro  Ala Ser Ser Met Val  Gly Tyr Ser
    1490                     1495                     1500
Thr Ala  Ser Leu Glu Ile Ser  Thr Tyr Ala Gly Ser  Ala Asn Ser
    1505                     1510                     1515
Leu Leu  Ala Gly Ser Gly Leu  Ser Val Phe Ile Ala  Ser Leu Leu
    1520                     1525                     1530
Leu Ala  Ile Ile
    1535 
<210>3
<211>25
<212>DNA
<213>Artificial
<220>
<223>正向引物
<400>3
cgaattcgat gaccatgccg catcg                                                   25
<210>4
<211>29
<212>DNA
<213>Artificial
<220>
<223>反向引物
<400>4
ctctagagtt aaataatcgc cagcagcag                                                29 

Claims (14)

1.用粮食和甘蔗汁为原料发酵制备蒸馏酒的方法,其包括:
(1)取大米粉碎后,加水浸泡并煮熟,然后加入α淀粉酶进行液化,得到液化料;
(2)将步骤(1)获得的液化料调节成酸性,加入糖化酶进行糖化,得到糖化液;
(3)向步骤(2)获得的糖化液加入具有絮凝优化特性的酵母和发酵助剂,于23~35℃密封发酵12~60小时,得到初步发酵液,其中具有絮凝优化特性的酵母是包含絮凝蛋白变体基因的酵母,所述絮凝蛋白变体基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示,其中发酵助剂是Fermaid K;
(4)向步骤(3)获得的初步发酵液加入甘蔗汁,密封发酵至残糖含量<4克/L时,得到酒液; 
(5)过滤步骤(4)获得的酒液的上清液;和
(6)对步骤(5)获得的上清液进行蒸馏,得到蒸馏酒。
2.权利要求1所述的方法,其中大米和甘蔗汁的重量体积比(kg/L)为1~10:1~10。
3.权利要求2所述的方法,其中大米和甘蔗汁的重量体积比(kg/L)为3~8:3~8。
4.权利要求3所述的方法,其中大米和甘蔗汁的重量体积比(kg/L)为1:1。
5.权利要求1所述的方法,其中甘蔗汁的糖度为5~20°Bx。
6.权利要求5所述的方法,其中甘蔗汁的糖度为10~18°Bx。
7.权利要求6所述的方法,其中甘蔗汁的糖度为15°Bx。
8.权利要求1所述的方法,其中调节成酸性是乳酸调节pH至4.0~4.8。
9.权利要求8所述的方法,其中调节成酸性是乳酸调节pH至4.1~4.5。
10.权利要求9所述的方法,其中调节成酸性是乳酸调节pH至4.2。
11.权利要求1~10之任一所述的方法制备的蒸馏酒。
12.编码絮凝蛋白变体的基因在发酵制备蒸馏酒的方法中的应用,所述絮凝蛋白变体的氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。
13.权利要求12所述的应用,其中所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。
14.权利要求12所述的应用,其中所述方法是权利要求1~10之任一所述的方法。
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