JP6965274B2

JP6965274B2 - ナトリウム−グルコース結合輸送体阻害剤のアミン溶媒和物、その調製方法およびその適用

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Publication number: JP6965274B2
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Inventors: レイチャン; ユアンワン
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Description

本発明は、薬剤開発の分野に属し、特に、ナトリウム依存性グルコース共輸送体阻害剤のアミン溶媒和物、ならびにその調製方法およびその使用に関する。

糖尿病は、再発性または持続性の高血糖症を伴う代謝性疾患である。異常なレベルの血糖は、心臓血管疾患、慢性腎不全、網膜損傷、神経損傷、微小血管損傷および肥満を含む重篤な慢性合併症に至り得る。

糖尿病治療の初期段階では、食事管理および運動療法が血糖管理の好ましい方法である。血糖管理がこれらの方法では困難な場合は、インスリンまたは経口血糖降下薬が治療に必要である。臨床治療で現在使用されている多種多様な血糖降下薬が存在し、ビグアニド化合物、スルホニルウレア化合物、インスリン抵抗性改善薬、α-グルコシダーゼ阻害薬などが含まれる。しかしながら、これらの薬物は、さまざまな毒性作用のために、長期治療の必要性を満たすことができない。例えば、ビグアニド化合物は、乳酸アシドーシスを引き起こす可能性がある；スルホニルウレア化合物は、低血糖症を引き起こす可能性がある；インスリン抵抗性改善薬は、浮腫および心不全を誘発する可能性がある；α-グルコシダーゼ阻害剤は、腹痛、腹部膨張、下痢などの症状を引き起こす可能性がある。上記の状況を考慮して、糖尿病治療のニーズを満たす、より安全で有効な新規抗糖尿病薬の開発が必要とされている。

細胞におけるグルコース輸送の調節は、グルコース輸送体（GLUT）（受動輸送）およびナトリウム依存性グルコース共輸送体（SGLT）（能動輸送）の2つのタンパク質ファミリーメンバーによって主に達成されることが発見されている。グルコース輸送機能を有するSGLTファミリーメンバーは、主に、小腸および腎臓の近位尿細管などに存在する。したがって、SGLTファミリーメンバーは、腸におけるグルコース吸収および腎臓におけるグルコース再取り込みにおいて重要な役割を果たすと推測することができ、それらは糖尿病を治療するための理想的な潜在的標的の1つとなっている。

特に、ファミリーメンバーのSGLT-1タンパク質は、主に小腸の腸粘膜細胞に局在し、心筋および腎臓での発現が少ない。それは主に、GLUTタンパク質と協働して腸内のグルコース吸収を調節する。別のファミリーメンバーであるSGLT-2タンパク質は、主に、腎臓でのその高レベルの発現に起因して、腎臓におけるグルコース再取り込みの調節に関与しており、言い換えれば、尿中グルコースが糸球体を通過すると、尿細管の上皮細胞に能動的に付着し、SGLT-2によって細胞内に輸送され、再利用される。このプロセス中、SGLT-2は再吸収の90%に関与し、再吸収の残りの10%はSGLT-1によってなされる。SGLT-2の主要輸送体タンパク質としての理論は、動物試験でさらに確認されている。ラット腎皮質細胞におけるSGLT-2のmRNAレベルは、特異的SGLT-2アンチセンスオリゴヌクレオチドによって減少し、それによってラット腎臓におけるグルコースの再取り込みを有意に阻害する。これらの知見に基づいて、SGLT（SGLT-1/SGLT-2）阻害剤が開発されれば、そのグルコース輸送機能の調節により、一方ではグルコースの腸内吸収を制御することができ、他方では、腎臓のグルコースの再取り込みを阻害し、尿からのグルコースの放出を増進し、それによってより体系的な低血糖効果を達成し、糖尿病の治療に理想的な薬物となることが推測できる。

加えて、SGLT阻害剤は、網膜症、神経障害、腎症などの糖尿病関連合併症、グルコース代謝障害に起因するインスリン抵抗性、高インスリン血症、高脂血症、肥満などの治療に有用であり得ることも見出されている。SGLT阻害剤は、スルホンアミド、チアゾリジンジオン、メトホルミン、インスリンなどの既存の治療剤と組み合わせることもでき、有害作用を回避またはその発生を低減させて患者の治療に対するコンプライアンスを改善するように、有効性に影響を与えることなく薬剤の投与量を減少させることができる。

要約すると、糖尿病を治療するための新規薬物として、SGLT阻害剤は良好な開発見込みを有する。したがって、安全であり、糖尿病および関連代謝障害の治療のための良好な薬物動態学的特性を有する有効化合物を開発することが緊急に必要である。Jiangsu Hansoh Pharmaceuticals Co.、Ltd.によって2015年に出願された特許出願WO2015/032272A1はナトリウム依存性グルコース共輸送体（SGLT）を阻害する一連の化合物を開示しており、最も代表的な式（I）の化合物は以下の通りである：

その化学名は、(1S,2S,3S,4R,5S)-5-(3-((2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン-6-イル)メチル)-4-エチルフェニル)-1-(ヒドロキシメチル)-6,8-ジオキサビシクロ[3.2.1]オクタン-2,3,4-トリオールである。この化合物は、SGLT2に対して非常に有意な阻害効果を有し、SGLT1に対する有意な阻害効果も有するため、SGLT2の単一阻害剤またはSGLT2/SGLT1の二重阻害剤として開発されることが期待される。しかしながら、この一連の化合物は、それらの構造特性のために通常は油または泡沫固体の形態であり、当業者は、薬剤開発のプロセス中で適切な凝集状態を得ることができなかった。特許出願WO2015/032272A1の実施例９は、非晶質形態の式（I）の化合物を開示しているにすぎず、そのX線粉末回折パターンを図８に示す。そこに含まれる不純物も、精製によって除去することが困難である。したがって、臨床研究および市場調査のための医薬製剤の要件を満たすように、薬剤開発に適した凝集形態を開発することが緊急に必要である。

本発明者は、先行技術の欠点を克服するために、詳細な研究の後、式（I）の化合物(1S,2S,3S,4R,5S)-5-(3-((2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン-6-イル)メチル)-4-エチルフェニル)-1-(ヒドロキシメチル)-6,8-ジオキサビシクロ[3.2.1]オクタン-2,3,4-トリオールをアミン試薬と組み合わせることにより、固体形態の式（I）の化合物のアミン溶媒和物、特に結晶形態の式（I）の化合物のアミン溶媒和物が得られることを発見した。得られた式（I）の化合物のアミン溶媒和物は、さらなる薬剤開発の要求を満たすことができる。それは非常に重要な臨床適用価値を有し、SGLT阻害剤の新世代に発展すると期待されている。

一態様では、本発明は、式（I）の化合物(1S,2S,3S,4R,5S)-5-(3-((2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン-6-イル)メチル)-4-エチルフェニル)-1-(ヒドロキシメチル)-6,8-ジオキサビシクロ[3.2.1]オクタン-2,3,4-トリオールのアミン溶媒和物を提供し、アミンは、以下からなる群より選択される：メチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、ジプロピルアミン、トリプロピルアミン、1,2-ジメチルプロピルアミン、シクロプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、トリエチルアミン、n-ブチルアミン、イソブチルアミン、tert-ブチルアミン、sec-ブチルアミン、ジイソブチルアミン、ヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、デシルアミン、ドデシルアミン、トリエタノールアミン、アリルアミン、エタノールアミン、3-プロパノールアミン、イソプロパノールアミン、ジイソプロパノールアミン、トリイソプロパノールアミン、ジメチルエタノールアミン、ジエチルエタノールアミン、エチレンジアミン、1,3-プロパンジアミン、1,4-ブタンジアミン、1,5-ペンタンジアミン、1,6-ヘキサンジアミン、モルホリンおよびピペラジン。

さらに好ましい実施形態では、アミンは、ジエチルアミン、ジイソプロピルアミン、トリエタノールアミン、トリイソプロパノールアミン、エチレンジアミンおよび1,3-プロパンジアミンからなる群より選択される。

さらに好ましい実施形態では、式（I）の化合物のアミン溶媒和物は固体化合物である。

さらにより好ましい実施形態では、式（I）の化合物のアミン溶媒和物は結晶化合物である。

さらに好ましい実施形態では、式（I）の化合物のアミン溶媒和物は、式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物である。

式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物のX線粉末回折パターンは、13.78±0.2°、17.02±0.2°、16.48±0.2°、および12.46±0.2°の回折角（2θ）におけるピークを含む。

さらに好ましい実施形態では、式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物のX線粉末回折パターンは、23.94±0.2°、18.74±0.2°、18.76±0.2°、15.72±0.2°、および20.68±0.2°の回折角（2θ）におけるピークをさらに含む。

さらにより好ましい実施形態では、式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物のX線粉末回折パターンは、10.82±0.2°、21.58±0.2°、23.26±0.2°、25.16±0.2°、25.58±0.2°、および24.26±0.2°の回折角（2θ）におけるピークをさらに含む。

最も好ましい実施形態では、式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物のX線粉末回折パターンは、表１に示すように回折角（2θ）において実質的に同じピークを含む。

さらにより好ましい実施形態では、式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物の単位格子は直交系、空間群、P212121、a = 8.2642（4）A、b = 8.3582（4）A、c = 39.994（2）Aであり、単位格子体積は2762.5（2）A³である。

別の態様では、本発明は、以下の工程を含む、式（I）の化合物のアミン溶媒和物を調製する方法を提供する：
工程1）：式（I）の化合物を適切なアミン試薬と接触させる工程；
工程2）：適当な量の貧溶媒を、溶液が濁って見えるまで添加するか、または種晶、もしくはその組み合わせを添加し、次いで結晶を析出させ続ける工程；および
工程3）：固液を分離して式（I）の化合物のアミン溶媒和物を得る工程。

さらに好ましい実施形態では、式（I）の化合物のアミン溶媒和物を調製する方法の工程1）におけるアミン試薬は、純粋な液体アミン試薬、水性アミン試薬またはアミン試薬と有機溶媒との混合物であり、アミン試薬は、以下からなる群より選択される：メチルアミン、ジメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、ジプロピルアミン、トリプロピルアミン、1,2-ジメチルプロピルアミン、シクロプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、トリエチルアミン、n-ブチルアミン、イソブチルアミン、tert-ブチルアミン、sec-ブチルアミン、ジイソブチルアミン、ヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、デシルアミン、ドデシルアミン、トリエタノールアミン、アリルアミン、エタノールアミン、3-プロパノールアミン、イソプロパノールアミン、ジイソプロパノールアミン、トリイソプロパノールアミン、ジメチルエタノールアミン、ジエチルエタノールアミン、エチレンジアミン、1,3-プロパンジアミン、1,4-ブタンジアミン、1,5-ペンタンジアミン、1,6-ヘキサンジアミン、モルホリンおよびピペラジン。

さらに好ましい実施形態では、工程1）における式（I）の化合物と適切なアミン試薬との接触は、式（I）の化合物を適切なアミン試薬に溶解するか、または式（I）の化合物を適当な有機溶媒に溶解し、その後に適当なアミン試薬の添加が続くことによってなされる。

溶解は、当業者に知られている従来の操作を指す。適切に加熱するか、または溶媒の量を増加させることは、通常、材料を溶解させるために、または溶液を透明にするために行うことができる。技術的解決策の修正または同等の置換は、本発明の範囲内に含まれることが意図されている。

さらに好ましい実施形態では、工程2）における貧溶媒は、水、n-ヘプタン、n-ヘキサン、イソオクタン、ペンタン、シクロヘキサン、シクロペンタン、ジエチルエーテルまたはこれらの混合物を含むが、これらに限定されない。

さらにより好ましい実施形態では、式（I）の化合物のアミン溶媒和物を調製する方法に使用される有機溶媒は、以下を含むが、これらに限定されない：メタノール、エタノール、n-プロパノール、イソプロパノール、n-ブタノール、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、N,N-ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ジクロロメタン、トリクロロエタン、四塩化炭素、メチルtert-ブチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ベンゼン、トルエン、キシレンまたはこれらの混合物。

別の態様では、本発明は、治療有効量の式（I）の化合物のアミン溶媒和物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。

別の態様では、本発明は、ナトリウム依存性グルコース共輸送体（SGLT）を阻害するための医薬の調製における、上記の式（I）の化合物のアミン溶媒和物またはそれを含む医薬組成物の使用に関する。

別の態様では、本発明は、SGLT-1タンパク質を阻害するための医薬、SGLT-2タンパク質を阻害するための医薬、またはSGLT-1タンパク質およびSGLT-2タンパク質を二重阻害するための医薬の調製における、上記の式（I）の化合物のアミン溶媒和物またはそれを含む医薬組成物の使用に関する。

別の態様では、本発明は、以下からなる群より選択される疾患の進行もしくは発症を治療または遅延させるための医薬の調製における、式（I）の化合物のアミン溶媒和物またはそれを含む医薬組成物の使用に関する：糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、脂肪酸値またはグリセロール値の上昇、高脂血症、肥満、高トリグリセリド血症、X症候群、糖尿病の合併症、アテローム性動脈硬化症および高血圧症。

本発明は、SGLT阻害剤、特にSGLT-1阻害剤、SGLT-2阻害剤、SGLT-1およびSGLT-2二重阻害剤としての使用のための、上記の式（I）の化合物のアミン溶媒和物またはそれを含む医薬組成物にも関する。

本発明は、以下の進行もしくは発症の治療または遅延に使用するための、上記の式（I）の化合物のアミン溶媒和物またはそれを含む医薬組成物にも関する：糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、脂肪酸値またはグリセロール値の上昇、高脂血症、肥満、高トリグリセリド血症、X症候群、糖尿病の合併症、アテローム性動脈硬化症または高血圧症。

別の態様では、本発明は、治療有効量の式（I）の化合物のアミン溶媒和物またはそれを含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、SGLTの阻害方法を提供する。

別の態様では、本発明は、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、脂肪酸値またはグリセロール値の上昇、高脂血症、肥満、高トリグリセリド血症、X症候群、糖尿病の合併症、アテローム性動脈硬化症または高血圧症を治療するための方法であって、治療有効量の上記の式（I）の化合物のアミン溶媒和物またはそれを含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与する工程を含む方法を提供する。

結晶形IのX線粉末回折パターンを示す図である；X軸は回折ピーク角2θ（°）を表し、Y軸はピークの強度を表す。結晶形Iの示差走査熱量測定パターンを示す図である；X軸は温度（℃）を表し、Y軸は熱流束（W/G）を表す。結晶形Iの熱重量分析パターンを示す図である；X軸は温度（℃）を表し、Y軸は重量損失の割合（%）を表す。動的吸湿試験の前（上）および後（下）の結晶形IのX線粉末回折パターンを示す図である；X軸は回折ピーク角2θ（°）を表し、Y軸はピークの強度を表す。結晶形Iの単結晶構造図を示す。結晶形Iの単位格子スタッキング図を示す。単結晶模擬粉末回折パターン（下）と結晶形Iの測定粉末回折パターン（上）との比較図を示す。X軸は回折ピーク角2θ（°）を表し、Y軸はピークの強度を表す。式（I）のアモルファス化合物のX線粉末回折パターンを示す図である；X軸は回折ピーク角2θ（°）を表し、Y軸はピークの強度を表す。

（1.用語）
本明細書中で使用する用語「薬学的に許容される」は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題の合併症なしに、ヒトおよび動物の組織との接触に適し、妥当なベネフィット／リスク比に見合った化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。特定の好ましい実施形態では、本発明の化合物の結晶構造は、実質的に純粋な形態である。

本明細書で使用する用語「実質的に純粋な」は、約90%を超える純度、例えば、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%、および約100%を含む純度を有する化合物を意味する。

本明細書で使用する「多形体」は、同じ化学組成を有するが、結晶を形成する分子、原子、および／またはイオンの空間的配置が異なる結晶形態を指す。多形体は同じ化学組成を有するが、充填および幾何学的配置が異なり、融点、形状、色、密度、硬度、変形能、安定性、溶解性、溶解速度などの異なる物理的特性、および類似の特性を示すことができる。それらの温度安定性の相関に応じて、2つの多形体は、モノトロピー性またはエナンチオトロピー性のいずれかであり得る。モノトロピー系の場合、温度が変化しても、2つの固相間の相対的な安定性は変化しない。対照的に、エナンチオトロピー系では、2つの相の安定性が逆転する転移温度が存在する（Theory and Origin of Polymorphism in “Polymorphism in Pharmaceutical Solids” (1999) ISBN:)-8247-0237）。異なる結晶構造に存在する化合物の現象を薬物多形現象という。

本発明の結晶構造の試料は、実質的に純粋な相均一性を備えて提供され得、優勢な量の単結晶構造および任意に少量の1つ以上の他の結晶構造の存在を示す。試料中の本発明の1つより多くの結晶構造の存在は、X線粉末回折（XRPD）または固体核磁気共鳴分光法（SSNMR）などの技術によって判定することができる。例えば、実験的に測定されたXRPDスペクトル（観察された）と疑似XRPDスペクトル（計算された）との比較において、余分なピークの存在は、試料中の複数の結晶構造を示すことができる。疑似XRPDは、単結晶X線データから計算することができる（Smith, D. K., “A FORTRAN Program for Calculating X-Ray Powder Diffraction Patterns,” Lawrence Radiation Laboratory, Livermore, California, UCRL-7196, April 1963を参照；また、Yin. S., Scaringe, R. P., DiMarco, J., Galella, M. and Gougoutas, J. Z., American Pharmaceutical Review, 2003, 6, 2, 80を参照）。好ましくは、結晶構造は、疑似XRPDスペクトルには存在しない余分なピークから、10%未満、好ましくは5%未満、より好ましくは2%未満の実験的に測定されたXRPDスペクトルの全ピーク面積で示されるように、実質的に純粋な相均一性を備える。最も好ましいのは、疑似XRPDスペクトルには存在しない余分なピークから、1%未満の実験的に測定されたXRPDスペクトルの全ピーク面積を有する、実質的に純粋な相均一性を備える本発明の結晶構造である。

本発明のさまざまな結晶構造は、当業者に知られているさまざまな分析技術の使用によって、互いから区別することができる。そのような技術には、X線粉末回折（XRPD）、示差走査熱量測定（DSC）、および／または熱重量分析（TGA）が含まれるが、これらに限定されない。

本発明の結晶構造は、例えば、適切な溶媒からの結晶化または再結晶化、昇華、溶融物からの成長、別の相からの固体状態変換、超臨界流体からの結晶化、およびジェットスプレーを含むさまざまな方法によって調製することができる。溶媒混合物からの結晶構造の結晶化または再結晶化の技術には、例えば、溶媒を蒸発させる、溶媒混合物の温度を下げる、分子および／または塩の過飽和溶媒混合物に種晶する、溶媒混合物を凍結乾燥させる、ならびに貧溶媒（カウンター溶媒）を溶媒混合物に添加することが挙げられる。ハイスループット結晶化技術を用いて、多形を含む結晶構造を調製することができる。多形を含む薬物結晶、薬物結晶の調製方法および特性評価は、Solid-State Chemistry of Drugs, S. R. Byrn, R. R. Pfeiffer, and J. G. Stowell, 2nd Edition, SSCI, West Lafayette, Indiana, 1999に開示されている。

種晶は、任意の結晶化混合物に添加し、結晶化を促進することができる。当業者にとって明らかなように、種晶は、特定の結晶構造の成長を制御する手段として、または結晶生成物の粒径分布を制御する手段として使用される。したがって、必要とされる種晶の量の計算は、“Programmed cooling of batch crystallizers,” J. W. Mullin and J. Nyvlt, Chemical Engineering Science, 1971, 26, 369-377に記載されているように、利用可能な種晶のサイズおよび平均生成物粒子の所望のサイズに依存する。一般に、バッチ内の結晶の成長を効果的に制御するためには、小サイズの種が必要である。小サイズの種晶は、より大きな結晶のふるい分け、粉砕、もしくは微粉化、または溶液の微結晶化によって製造することができる。結晶の粉砕または微粉化は、所望の結晶構造の結晶化度のいかなる変化（すなわち、非晶質または他の多形への変化）ももたらさないことに留意すべきである。

本明細書で使用される用語「室温」または「RT」は、20〜25℃（68〜77°F）の周囲温度を指す。

以下に記載され、特許請求される結晶構造と同等の結晶構造は、試験条件、純度、装置および当業者に知られている他の一般的な変数に依存して、妥当な誤差範囲内で類似しているが同一でない分析特性を示し得る。したがって、本発明の範囲および主旨から逸脱することなく、本発明にさまざまな修正および変更を加えることができることは、当業者には明らかであろう。本発明の他の実施形態は、本明細書に開示された本発明の明細書の考察および実施に基づいて、当業者には明らかであろう。出願人は、明細書および実施例が例示であるとみなされるが、その範囲を限定するものではないことを意図する。

（2.実験材料）
本発明の実施例において使用される試薬は、市販の工業グレードまたは分析グレードの試薬である。化合物は、Jiangsu Hansoh Pharmaceuticals Co., Ltd.により出願された特許出願WO2015032272A1の実施例９に従って調製され、液体クロマトグラフィーにより測定された純度は95.1%である。

（3.分析方法）
（3.1.X線粉末回折）
当業者は、使用される測定条件に応じて決まる測定誤差でX線粉末回折スペクトルを得ることができることを認識するであろう。特に、X線粉末回折パターンにおける強度は、使用される測定条件に応じて変動し得ることが一般的に知られている。相対強度も実験条件に応じて変化する可能性があり、したがって、正確な強度を考慮に入れるべきではないことがさらに理解されるべきである。また、従来のX線粉末回折角度の測定誤差は、通常約5%以下であり、そのような測定誤差は上記回折角に属するとみなされるべきである。したがって、本発明の結晶構造は、本明細書に開示の図に示されるX線粉末回折パターンと全く同じX線粉末回折パターンを提供する結晶構造に限定されないことを理解されたい。図に開示されたものと実質的に同じX線粉末回折パターンを提供する任意の結晶構造は、本発明の範囲内にある。X線粉末回折パターンの実質的な同一性を決定する能力は、当業者の知識の範囲内である。他の適切な標準較正は、当業者に知られている。しかし、相対強度は、結晶のサイズおよび形状に応じて変化し得る。

本発明の化合物の結晶形を、それらのX線粉末回折パターンによって特性評価した。したがって、塩のX線粉末回折パターンを、Cu Kα線（1.54A）を使用するGADDS（一般領域検出器回折システム）CSを備えるBruker D8 Discover X線粉末回折計によって、反射モードで収集した。走査の管電圧および電流量を、それぞれ40kVおよび40mAに設定した。3.0°〜40°の2θ範囲では、試料を60秒間走査した。2θで表されるピーク位置について、コランダム標準を用いて回折計を較正した。全ての分析を、通常20℃〜30℃で実施した。WNTソフトウェアバージョン4.1.14Tを使用して、GADDSによってデータを収集し、統合した。回折パターンを、2003年に出版されたバージョン9.0.0.2 Evaを用い、DiffracPlusソフトウェアによって分析した。XRPDの試料を、以下のように調製した：試料を単結晶シリコンウエハー上に置き、次いで確実に試料の表面が平らで、適切な高さになるように、試料粉末をガラスシートまたは等価物によってプレスした。次いで、試料ホルダーをBruker XRPD装置に置き、X線粉末回折パターンを上述の装置パラメーターを用いて収集した。X線粉末回折の分析結果に関連する測定差異は、以下を含む様々な要因によって生じた：（a）試料調製の誤差（例えば、試料の高さ）、（b）装置の誤差、（c）較正誤差、（d）操作者誤差（ピーク位置の決定に生じる誤差を含む）、および（e）物質の特性（例えば、好ましい配向の誤差）。較正誤差および試料高さの誤差は、多くの場合、全てのピークの同じ方向へのシフトにつながる。一般に、較正係数は、測定ピーク位置を、予想ピーク位置と、予想2θ値±0.2°の範囲内で一致させる。

（3.2.示差走査熱量測定（DSC））
示差走査熱量測定（DSC）試験を、TA Instruments（商標）モデルQ2000で実施した。試料（約1〜6mg）をアルミニウムパンに秤量し、正確に100分の1ミリグラムとして記録し、DSC装置に移した。装置を50ml/分の窒素でパージした。データを、室温〜350℃までの10℃/分の加熱速度で収集した。吸熱ピークが下向きのときにパターンをプロットした。しかしながら、当業者であれば、DSC測定では、加熱速度、結晶形状、純度、および他の測定パラメーターに応じて、測定開始温度および最高温度がある程度変化することに気付くであろう。

（3.3.熱重量分析（TGA））
熱重量分析（TGA）試験を、TA Instruments（商標）モデルQ500で実施した。試料（約10〜30mg）を予め計量した白金パン上に置いた。試料を装置によって正確に秤量し、1000分の1ミリグラムとして記録した。炉を100ml/分の窒素でパージした。データを、室温〜300℃までの10℃/分の加熱速度で収集した。

本発明を、図および以下の実施例によりさらに説明するが、これらは本発明の特定の実施形態を説明することが意図され、決して本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

（実施例１）
式（I）の化合物20mgを4.0mLガラスバイアルに入れ、次いで陽性溶媒としてジエチルアミン1mLを添加し、混合液を撹拌して透明にした。貧溶媒として水4.0mLをゆっくりと加え、混合液をマグネチックスターラーにより室温（20〜25℃）で24時間撹拌した。式（I）の化合物の結晶性ジエチルアミン溶媒和物（本明細書では結晶形Iと称する）を、固液分離によって得た。結晶形のX線粉末回折パターンを図１に示す。

（実施例２）
式（I）の化合物50mgを10.0mLガラスバイアルに入れ、次いで陽性溶媒としてジエチルアミン5mLを加え、混合液を撹拌して透明にした。実施例１で得た結晶5mgを加え、混合液をマグネチックスターラーにより室温（20〜25℃）で24時間撹拌した。式（I）の化合物の結晶性ジエチルアミン溶媒和物を、固液分離によって得た。結晶形のX線粉末回折パターンは、図１と実質的に同じである。

（実施例３）
式（I）の化合物500mgを100.0mL丸底フラスコに入れ、次いで陽性溶媒としてジエチルアミン25mLを加え、混合液を撹拌して透明にした。貧溶媒として水50mLをゆっくりと加えた後、実施例１で得た結晶20mgを加えた。貧溶媒としてさらに50mLの水をゆっくりと加え、混合液をマグネチックスターラーにより室温（20〜25℃）で24時間撹拌した。式（I）の化合物の結晶性ジエチルアミン溶媒和物を、固液分離によって得た。結晶形のX線粉末回折パターンは、図１と実質的に同じである。

得られた試料の純度は、高速液体クロマトグラフィーによる測定で99.5%であり、これは結晶化用の材料（Jiangsu Hansoh Pharmaceuticals Co., Ltd.により出願された特許出願WO2015032272A1の実施例９に従って調製される）の純度（95.1%、液体クロマトグラフィーによる測定）と比較して、実質的に改善している。これは、臨床開発の要件を満たすことができ、非晶質固体の溶解および溶媒除去を繰り返し行っても低純度の非晶質固体が依然として得られる従来技術の技術的欠陥を克服する。本発明の非晶質材料からのジエチルアミン溶媒和物の調製は、固体形態、特に結晶形態の化合物を提供することができるだけでなく、試料の純度を著しく向上させ、臨床使用のレベルに達することがうかがえる。

実施例１〜３で得た結晶形IのDSC分析結果は、図２に示すように、102.8±2℃で特徴的な吸熱ピークがあることを示した。

実施例１〜３で得た結晶形IのTGA分析結果は、図３に示すように、試料を93.5℃に加熱すると、試料の重量損失が1.02%であったことを示した。予備試験では、これは水の表面吸着であり、無視できるものであったことが示された。

結晶形Iの試料の動的吸湿試験によれば、25℃の条件下で0%RH〜80%RHの湿度の増加とともに吸水量が増加し、重量変化は0.286%である。「中華人民共和国薬局方（2010年版）」に記載されている薬物吸湿性試験の指針によれば、この試料はわずかに吸湿性がある。通常の貯蔵条件下（すなわち、25℃、湿度60%）では、吸水量は約0%であった；促進試験条件下（すなわち、75%湿度）では、吸水量は約0.191%であった；極限条件下（すなわち90%湿度）では、吸水量は約1.049%であった。図４は、動的吸湿試験前後のXRPDパターンの比較図を示す。動的吸湿試験の前後で試料の結晶形は変化していないことが分かる。

（実施例４）
式（I）の化合物5mgを2.0mLガラスバイアルに入れ、次いで陽性溶媒としてジエチルアミン0.2mLを添加し、混合液を撹拌して透明にした。貧溶媒として水1.0mLをゆっくりと加え、混合液を室温（20〜25℃）で1週間放置した。式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物の単結晶を、固液分離によって得た。

単結晶データを、Mokα線（λ=0.71073A）を用いたBruker Apex II単結晶試験システムで収集した。測定された強度データのインデックス化および処理は、HKL2000ソフトウェアパッケージのCollectプログラムボタンで実行した。結晶データ収集のプロセス中で、温度は296Kであった。

図５は、結晶形Iの構造図を示し、図６は、結晶形Iの構造スタッキング図を示す。図７は、単結晶模擬粉末回折パターンと結晶形Iの測定粉末回折パターンとの比較図を示す。実験では、実施例１で得た粉末結晶が実質的に純粋であることが示された。結晶形Iの単位格子パラメーターを表２に示す。

（実施例５）
式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物および式（I）の非晶質化合物の物理的安定性および化学的安定性に関する応力研究を行った。実施例３で得た式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物および式（I）の非晶質化合物を、ガラスバイアルにそれぞれ2連で、各試料約10mgで入れた。これらの安定性試験試料を80℃のインキュベーターに1週間入れた。1週間置いた後、HPLC法による化学純度分析用に1つの試料を使用した。他の試料は、XRPDによる結晶特性評価用に使用した。2つの固体の物理的安定性および化学的安定性を表３に示す。

上記応力安定性試験によれば、式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物は、式（I）の非晶質化合物と比較して、物理的安定性および化学的安定性において明らかな利点を有していた。式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物の試料は、高温で分解せず、化学純度は実質的に変化せず、結晶形態も実質的に同じままであった。しかしながら、式（I）の非晶質化合物は、高温に置かれた直後に変質して劣化し、生成物の品質を確保することを困難にした。薬剤開発の分野では、化合物の物理的安定性および化学的安定性が、製造、貯蔵、輸送、製剤プロセス、薬物の有効期間などにとって重要であることが知られている。したがって、式（I）の非晶質化合物と比較して、本発明によって開発された式（I）の化合物のジエチルアミン溶媒和物は、臨床研究のニーズに一層適合し、医薬品開発にとってより有利である。

要約すると、本発明によって開発された式（I）の化合物のアミン溶媒和物は、アモルファス凝集状態と比較してより高い物理的安定性および化学的安定性を有する。特に、実施例で得た結晶形Iの生成物は、高純度、高安定性および低吸湿性を有し、薬物の製造、輸送および貯蔵を容易にする。精製、脱色、濾過などのプロセス中の単位操作も簡単で容易に実施できるため、明白な利点がある。したがって、本発明の式（I）の化合物のアミン溶媒和物は、従来の式（I）の非晶質化合物と比較して顕著な改善を示し、臨床薬剤開発の要件を満たす。

最後に、上記の実施例は、本発明の技術的解決策を説明するためだけに用いられているが、本発明の範囲を限定するものではないことに留意すべきである。本発明を、好ましい実施例を参照して詳細に説明したが、当業者であれば、本発明の主旨および範囲から逸脱することなく、本発明の技術的解決策を修正または同等に変更することができ、そのような修正および変更は、本発明の請求項に含まれるべきであることを理解するであろう。

Claims

式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物であって、

式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物のX線粉末回折パターンが、13.78±0.2°、17.02±0.2°、16.48±0.2°、および12.46±0.2°の回折角（2θ）におけるピークを含むことを特徴とする、式(I)の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物。
式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物のX線粉末回折パターンが、13.78±0.2°、17.02±0.2°、16.48±0.2°、12.46±0.2°、15.72±0.2°、18.74±0.2°、18.76±0.2°、20.68±0.2°、および23.94±0.2°の回折角（2θ）におけるピークを含むことを特徴とする、請求項１に記載の式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物。
式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物のX線粉末回折パターンが、10.82±0.2°、13.78±0.2°、17.02±0.2°、16.48±0.2°、12.46±0.2°、15.72±0.2°、18.74±0.2°、18.76±0.2°、20.68±0.2°、21.58±0.2°、23.26±0.2°、23.94±0.2°、25.16±0.2°、25.58±0.2°、および24.26±0.2°の回折角（2θ）におけるピークを含むことを特徴とする、請求項１に記載の式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物。
式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物のX線粉末回折パターンが、8.80°、10.82°、12.46°、13.78°、15.72°、16.48°、17.02°、18.74°、20.10°、20.68°、21.58°、22.12°、23.26°、23.94°、24.26°、25.16°、25.58°、26.48°、及び28.82°の回折角（2θ）におけるピークを含むことを特徴とする、請求項１に記載の式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物。
式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物の単位格子が直交系、空間群、P212121、a = 8.2642（4）A、b = 8.3582（4）A、c = 39.994（2）Aであり、単位格子体積が2762.5（2）A³であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物。
以下の工程を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物を調製する方法：
工程1）：式（I）の化合物を純粋な液体ジエチルアミンと接触させる工程；
工程2）：水を、該溶液が濁って見えるまで添加するか、または種晶、もしくはその組み合わせを添加し、次いで結晶を析出させ続ける工程；および
工程3）：固液を分離して式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物を得る工程。
治療有効量の請求項１〜５のいずれか一項に記載の式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物と薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
ナトリウム依存性グルコース共輸送体（SGLT）を阻害するための医薬の調製における、請求項１〜５のいずれか一項に記載の式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物または請求項７に記載の医薬組成物の使用。
SGLT-1タンパク質を阻害するための医薬、SGLT-2タンパク質を阻害するための医薬、またはSGLT-1タンパク質およびSGLT-2タンパク質を二重阻害するための医薬の調製における、請求項１〜５のいずれか一項に記載の式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物または請求項７に記載の医薬組成物の使用。
以下からなる群より選択される疾患の進行もしくは発症を治療または遅延させるための医薬の調製における、請求項１〜５のいずれか一項に記載の式（I）の化合物の結晶のジエチルアミン溶媒和物または請求項７に記載の医薬組成物の使用：糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、脂肪酸値またはグリセロール値の上昇、高脂血症、肥満、高トリグリセリド血症、X症候群、糖尿病の合併症、アテローム性動脈硬化症および高血圧症。