CN108699094B - 一种钠依赖性葡萄糖共转运蛋白抑制剂的胺溶剂合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

钠依赖性葡萄糖共转运蛋白抑制剂的胺溶剂合物及其制备方法和应用，所述钠依赖性葡萄糖共转运蛋白抑制剂为(1S,2S,3S,4R,5S)‑5‑(3‑((2,3‑二氢苯并[b][1,4]二噁英‑6‑基)甲基)‑4‑乙基苯基)‑1‑(羟甲基)‑6,8‑二氧杂二环[3.2.1]辛烷‑2,3,4‑三醇。还公开了所述胺溶剂合物的结晶型化合物、包含其的药物组合物及其在制备抑制钠依赖性葡萄糖共转运蛋白(SGLTs)的药物中的用途。

Description

一种钠依赖性葡萄糖共转运蛋白抑制剂的胺溶剂合物及其制 备方法和应用

技术领域

本发明属于药物开发技术领域，具体涉及一种钠依赖性葡萄糖共转运蛋白抑制剂的胺溶剂合物及其制备方法和应用。

背景技术

糖尿病是一种代谢紊乱，复发性或持续性的高血糖症。血糖水平异常可导致严重的长期并发症，包括心血管疾病、慢性肾功能衰竭、视网膜损伤、神经损伤、微血管损伤和肥胖。

在糖尿病治疗的早期阶段，饮食控制和运动疗法是首选的血糖控制方案。当这些方法难以实现对血糖的控制时，则需要使用胰岛素或者口服降糖类药物进行治疗。目前己有多种降糖药物用于临床治疗，包括双胍类化合物，磺酰脲类化合物，胰岛素耐受改善剂以及α-葡萄糖苷酶抑制剂等。但上述药物由于各自不同的副作用，均无法满足长期治疗的需要。例如，双胍类化合物易引起乳酸性酸中毒；磺酰脲类化合物会导致低血糖症状；胰岛素耐受改善剂易诱发水肿及心脏衰竭，而α-葡萄糖苷酶抑制剂会引起腹痛、腹胀、腹泻等症状。鉴于上述情况，人们迫切希望开发出一种更为安全有效的新型降糖药物用以满足糖尿病的治疗需要。

研究发现，细胞对葡萄糖转运过程的调节主要通过促葡萄糖转运蛋白(GLUTs)(被动转运)和钠依赖性葡萄糖共转运蛋白(SGLTs)(主动转运)这两个蛋白家族成员来实现。其中SGLTs家族中具有葡萄糖转运功能的成员主要分布于肠道和肾脏的近端小管等部位，进而推断其在肠葡萄糖的吸收和肾脏葡萄糖的重摄取等过程中均发挥着关键作用，因而使其成为治疗糖尿病的理想潜在靶点之一。

具体而言，家族成员SGLT-1蛋白主要分布于小肠的肠道粘膜细胞，在心肌和肾脏中也有少量表达。它主要协同GLUTs蛋白调节葡萄糖的肠道吸收过程。而另一成员SGLT-2，因其在肾脏中的高水平表达，主要负责葡萄糖肾脏重摄取过程的调节，即尿液中的葡萄糖在经过肾小球过滤时可主动附着于肾小管上皮细胞并通过SGLT-2蛋白转运进胞内被重新利用。在这一过程中，SGLT-2负责了90％的重吸收过程，剩余的10％则由SGLT-1完成。SGLT-2作为主要转运蛋白这一理论在动物试验中也得到了进一步证实。通过使用特异性SGLT-2反义寡聚核苷酸抑制大鼠肾皮质细胞中的SGLT-2 mRNA水平，可以明显抑制大鼠的肾葡萄糖重摄取过程。基于这些研究发现可以推断，如果开发出一种SGLTs(SGLT-1/SGLT-2)抑制剂，就有可能通过调节其葡萄糖转运功能，一方面能实现控制肠道葡萄糖的吸收，另一方面则能抑制肾脏葡萄糖的重摄取，加强葡萄糖从尿液中的排出，发挥较为系统性的降糖作用，从而成为治疗糖尿病的理想药物。

此外，研究还发现SGLTs抑制剂可以用于糖尿病相关并发症的治疗，如视网膜病变、神经病、肾病、葡萄糖代谢紊乱造成的胰岛素耐受、高胰岛素血症、高血脂、肥胖等。同时SGLTs抑制剂亦可与现有的治疗药物联合使用，如磺酰胺、噻唑烷二酮、二甲双胍和胰岛素等，在不影响药效的情况下，降低用药剂量，从而避免或减轻了不良反应的发生，提高了患者对治疗的顺应性。

综上所述，作为新型的糖尿病治疗药物，SGLTs抑制剂有着良好的开发前景。因此，急需开发出一种疗效、药代性质良好，安全性高的化合物用于糖尿病及相关代谢紊乱疾病的治疗。2015年，江苏豪森药业集团有限公司在专利申请WO2015/032272A1中公开了一系列具有抑制钠依赖性葡萄糖共转运蛋白(SGLT)的化合物，其中最有代表性的式(I)化合物结构如下：

其化学名称为：(1S，2S，3S，4R，5S)-5-(3-((2，3-二氢苯并[b][1，4]二噁英-6-基)甲基)-4-乙基苯基)-1-(羟甲基)-6，8-二氧杂二环[3.2.1]辛烷-2，3，4-三醇，该化合物对SGLT2的具有非常明显的抑制作用，同时对SGLT1也具有明显的抑制作用，有望开发成SGLT2单独抑制剂或SGLT2/SGLT1双重抑制剂。但是鉴于该系列化合物的结构特点，技术人员在医药开发时并没能研究出合适的聚集状态，一般都成油状物或泡沫状固体，在专利申请WO2015/032272A1实施例9中也只是公开了其无定形的式(I)化合物，其X射线粉末衍射图见图8，所含杂质也难以纯化除去。因此，迫切需要研发出一种能够适合药物开发的聚集形态来，从而满足临床研究以及上市药物制剂的需要。

发明内容

为了解决现有技术存在的缺陷，发明人在深入研究以后发现式(I)化合物(1S，2S，3S，4R，5S)-5-(3-((2，3-二氢苯并[b][1，4]二噁英-6-基)甲基)-4-乙基苯基)-1-(羟甲基)-6，8-二氧杂二环[3.2.1]辛烷-2，3，4-三醇能够和胺类试剂结合，从而得到固体形态的式(I)化合物的胺溶剂合物，尤其是结晶形态的式(I)化合物的胺溶剂合物。所得到的式(I)化合物的胺溶剂合物能够满足进一步药物开发的需要，具有非常重要的临床应用价值，有望开发成新一代SGLT抑制剂。

本发明一方面提供了式(I)化合物(1S，2S，3S，4R，5S)-5-(3-((2，3-二氢苯并[b][1，4]二噁英-6-基)甲基)-4-乙基苯基)-1-(羟甲基)-6，8-二氧杂二环[3.2.1]辛烷-2，3，4-三醇的胺溶剂合物，所述胺选自甲胺、二甲胺、乙胺、二乙胺、丙胺、二丙胺、三丙胺、1，2-二甲基丙胺、环丙基胺、二异丙胺、三乙胺、正丁胺、异丁胺、叔丁胺、仲丁胺、二异丁胺、己胺、二环己基胺、癸胺、十二胺、三乙醇胺、2-丙烯胺、乙醇胺、3-丙醇胺、异丙醇胺、二异丙醇胺、三异丙醇胺、二甲基乙醇胺、二乙基乙醇胺、乙二胺、1，3-丙二胺、1，4-丁二胺、1，5-戊二胺、1，6-己二胺、吗啉和哌嗪。

作为进一步优选的方案，所述的胺选自二乙胺、二异丙胺、三乙醇胺、三异丙醇胺、乙二胺和1，3-丙二胺。

作为进一步优选的方案，所述式(I)化合物的胺溶剂合物为固态化合物。

作为更进一步优选的方案，所述式(I)化合物的胺溶剂合物为结晶型化合物。

作为进一步优选的方案，所述式(I)化合物的胺溶剂合物为式(I)化合物的二乙胺溶剂合物。

式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的X射线粉末衍射图包括位于13.78±0.2°、17.02±0.2°、16.48±0.2°和12.46±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为进一步优选的方案，所述式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的X射线粉末衍射图进一步还包括位于23.94±0.2°、18.74±0.2°、18.76±0.2°、15.72±0.2°和20.68±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为更进一步优选的方案，所述式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的X射线粉末衍射图进一步还包括位于10.82±0.2°、21.58±0.2°、23.26±0.2°、25.16±0.2°、25.58±0.2°和24.26±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为最优选的方案，所述式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的X射线粉末衍射图包括与表1中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同的峰。

表1

作为更进一步优选的方案，所述式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的晶胞为空间群正交，P212121，

晶胞体积为

本发明另一方面提供了所述的式(I)化合物的胺溶剂合物的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：将式(I)化合物与合适的胺类试剂接触；

步骤2：加入适量反溶剂至溶液出现浑浊或晶种或其结合，继续析晶；

步骤3：固液分离得到式(I)化合物的胺溶剂合物。

作为进一步优选的方案，所述的式(I)化合物的胺溶剂合物的制备方法步骤1)所述的胺类试剂为纯液态胺类试剂、含水胺类试剂或胺类试剂与有机溶剂的混合液的形式，且所述胺类试剂选自甲胺、二甲胺、乙胺、二乙胺、丙胺、二丙胺、三丙胺、1，2-二甲基丙胺、环丙基胺、二异丙胺、三乙胺、正丁胺、异丁胺、叔丁胺、仲丁胺、二异丁胺、己胺、二环己基胺、癸胺、十二胺、三乙醇胺、2-丙烯胺、乙醇胺、3-丙醇胺、异丙醇胺、二异丙醇胺、三异丙醇胺、二甲基乙醇胺、二乙基乙醇胺、乙二胺、1，3-丙二胺、1，4-丁二胺、1，5-戊二胺、1，6-己二胺、吗啉和哌嗪。

作为进一步优选的方案，步骤1)中所述的将式(I)化合物与合适的胺类试剂接触包括将式(I)化合物溶解于合适的胺类试剂或先将式(I)化合物溶解于合适的有机溶剂，然后再加入合适的胺类试剂。

所述的溶解是指本领域的普通技术人员一般的操作，通常可以适当的加热使原料溶解或溶清，或者加大溶剂的用量来使原料溶解或溶清，或者其技术方案进行修改或者等同替换，其均应涵盖在本发明的发明内容之内。

作为进一步优选的方案，步骤2)中所述反溶剂包括但不限于水、正庚烷、正己烷、异辛烷、戊烷、环己烷、环戊烷、乙醚或其混合物。

作为更进一步优选的方案，所述的式(I)化合物的胺溶剂合物的制备方法中所述有机溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氢呋喃、二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳、甲基叔丁基醚、异丙醚、苯、甲苯、二甲苯或其混合物。

本发明另一方面提供了药物组合物，其包含治疗有效剂量的式(I)化合物的胺溶剂合物及可药用的载体。

本发明另一方面提供了前述的式(I)化合物的胺溶剂合物，或包含其的药物组合物在制备抑制钠依赖性葡萄糖共转运蛋白(SGLTs)抑制剂的药物中的用途。

本发明另一方面涉及前述的式(I)化合物的胺溶剂合物，或包含其的药物组合物在制备抑制SGLT-1蛋白的药物、抑制SGLT-2蛋白的药物、双重抑制SGLT-1蛋白和SGLT-2蛋白药物中的用途。

本发明另一方面涉及前述的式(I)化合物的胺溶剂合物，或包含其的药物组合物在制备用于治疗或者延缓下列疾病的发展或发作的药物中的用途，其中所述疾病选白糖尿病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、胰岛素抗性、高血糖、高胰岛素血症、脂肪酸或甘油的升高的水平、高脂血症、肥胖症、高甘油三酯血症、X综合征、糖尿病并发症、动脉粥样硬化和高血压。

本发明还涉及前述的式(I)化合物的胺溶剂合物，或包含其的药物组合物，其用作SGLTs抑制剂，特别是SGLT-1抑制剂、SGLT-2抑制剂、SGLT-1和SGLT-2双重抑制剂。

本发明还涉及前述的式(I)化合物的胺溶剂合物，或包含其的药物组合物，其用于治疗或者延缓下列疾病的发展或发作：糖尿病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、胰岛素抗性、高血糖、高胰岛素血症、脂肪酸或甘油的升高的水平、高脂血症、肥胖症、高甘油三酯血症、X综合征、糖尿病并发症、动脉粥样硬化或高血压。

本发明另一方面提供了一种抑制SGLTs的方法，所述方法包括给予需要治疗的患者有效治疗量的式(I)化合物的胺溶剂合物，或包含其的药物组合物。

本发明另一方面提供了一种治疗糖尿病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、胰岛素抗性、高血糖、高胰岛素血症、脂肪酸或甘油的升高的水平、高脂血症、肥胖症、高甘油三酯血症、X综合征、糖尿病并发症、动脉粥样硬化或高血压疾病的方法，所述方法包括给予需要治疗的患者有效治疗量的前述的式(I)化合物的胺溶剂合物，或包含其的药物组合物。

附图说明

图1为晶型I的X射线粉末衍射图；X轴为衍射峰角度2角(°)，Y轴为峰的强度。

图2为晶型I的差示扫描量热图；X轴为温度(℃)，Y轴为热流(W/G)。

图3为晶型I的热重分析图；X轴为温度(℃)，Y轴为失重百分比(％)。

图4为晶型I动态水分吸附实验检测前(上面)后(下面)的X射线粉末衍射图。X轴为衍射峰角度2角(°)，Y轴为峰的强度。

图5为晶型I单晶结构图。

图6为晶型I晶胞堆积图。

图7为晶型I单晶模拟粉末衍射数据图(下面)与实测粉末衍射图(上面)对比图。X轴为衍射峰角度2角(°)，Y轴为峰的强度。

图8为无定形式(I)化合物的X射线粉末衍射图；X轴为衍射峰角度2角(°)，Y轴为峰的强度。

具体实施方式

1、术语

本文所用的术语″可药用″是指在合理医疗判断的范围内适合与人类和动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其它问题并发症的与合理的受益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。在某些优选实施方案中，本发明化合物结晶结构为基本纯净形式。

本文所用的术语″基本纯净″是指纯度大于大约90％，包括例如大约91％、大约92％、大约93％、大约94％、大约95％、大约96％、大约97％、大约98％、大约99％和大约100％的化合物。

本文所用的″多晶型物″是指具有相同化学组成但构成该晶体的分子、原子和/或离子的不同空间排列的晶型。尽管多晶型物具有相同的化学组成，但它们的堆积和几何排列不同，并可能表现出不同的物理性质，如熔点、形状、颜色、密度、硬度、可形变性、稳定性、溶解度、溶出速率和类似性质。根据他们的温度-稳定性关系，两种多晶型物可以是单变性或互变性的。对于单变性体系，在温度变化时，两种固相之间的相对稳定性保持不变。相反，在互变性体系中，存在一个过渡温度，在此两种相的稳定性转换((Theory and Origin ofPolymorphism in″Polymorphism in Pharmaceutical Solids″(1999)ISBN：)-8247-0237)。这种化合物以不同晶体结构存在的现象被称作药物多晶型现象。

本发明的结晶结构的样品可以以基本纯净的相均一性提供，意味着存在主导量的单一结晶结构和任选次要量的一种或多种其它结晶结构。样品中多于一种的本发明的结晶结构的存在可以通过如X射线粉末衍射(XRPD)或因态核磁共振能谱法(SSNMR)之类的技术测定。例如，在实验测得的XRPD图(观察的)与模拟的XRPD图(计算的)的比较中，额外峰的存在可以表明样品中多于一种的结晶结构。模拟XRPD可以由单晶X-射线数据计算(参看Smith，D.K.，″A FORTRAN Program for Calculating X-Ray Powder DiffractionPatterns，″Lawrence Radiation Laboratory，Livermore，California，UCRL-7196，1963年4月；也参看Yin.S.，Scaringe，R.P.，DiMarco，J.，Galella，M和Gougoutas，J.Z.，AmericanPharmceutical Review.2003.6.2.80)。优选地，该结晶结构具有如在实验测得的XRPD图中由模拟XRPD图中不存在的额外峰产生的为总峰面积的小于10％，优选小于5％，更优选小于2％所示的基本纯净的相均一性。最优选的是在实验测得的XRPD图中由模拟XRPD图中不存在的额外峰产生的小于总峰面积的1％的具有基本纯净的相均一性的本发明的结晶结构。

本发明的各种结晶结构可以使用本领域普通技术人员已知的各种分析技术彼此区分。这类技术包括但不限于，X射线粉末衍射(XRPD)、差示扫描量热法(DSC)和/或热重分析法(TGA)。

本发明的结晶结构可以通过各种方法制备，包括，例如，从合适的溶剂中结晶或重结品、升华、从熔融体中生长、从另一相固态转化、从超临界流体中结晶、和射流喷雾。结晶结构从溶剂混合物中结晶或重结晶的技术包括，例如，溶剂蒸发、降低溶剂混合物的温度、该分子和/或盐的过饱和溶剂混合物的引晶、冻干溶剂混合物、向溶剂混合物中加入抗溶剂(反萃溶剂)。可以使用高生产量的结晶技术制备结晶结构，包括多晶型物。药物晶体，包括多晶型物，药物晶体的制备方法和表征公开在Solid-State Chemistry of Drugs，S.R.Byrn，R.R.Pfeiffer和J.G.Stowell，第2版，SSCI，West Lafayette，Indiana，1999中。可以在任何结晶混合物中加入晶种以促进结晶。如技术人员清楚的那样，使用晶种作为控制特定结晶结构生长的方式或作为控制结晶产物的粒度分布的方式。相应地，如″Programmed cooling of batch crystallizers，″J.W.Mullin和J.Nyvlt，ChemicalEngineering Science，1971，26，369-377中所述，所需晶种量的计算取决于可得晶种的尺寸和平均产物粒子的所需尺寸。一般而言，需要小尺寸的品种以有效控制该批中晶体的生长。小尺寸晶种可以通过较大晶体的筛分、研磨或微粉化或通过溶液的微结晶产生应该注意，晶体的研磨或微粉化不能造成所需晶体结构的结晶度的任何改变(即变成无定形或变成另一多晶型)。

本文所用的术语″室温″或″RT″是指20至25℃(68-770F)的环境温度。

与下述和本文要求保护的晶体结构对等的晶体结构可能根据试验条件、纯度、设备和本领域技术人员已知的其它常几变量在合理误差范围内表现出类似但不完全相同的分析特性。相应地，本领域技术人员显而易见的是，可以在不背离本发明的范围和精神的情况下在本发明内作出各种修改和变动。在考虑本文公开的本发明的说明书和实践的基础上，本发明的其它实施方案是本领域技术人员显而易见的。申请人期望该说明书和实施例被视为示例性的，而非限制其范围。

2、实验材料

本发明实施例中所用试剂为市售工业级或分析级试剂，所选化合物原料为根据江苏豪森药业集团有限公司专利申请WO2015032272A1实施例9制备得到的，液相纯度为95.1％。

3、分析方法

3.1、X射线粉末衍射

本领域普通技术人员会认识到，X射线粉末衍射图可以在测量误差下获得，该测量误差取决于所用测量条件。特别地，通常己知的是，X射线粉末衍射图中的强度可能随所用材料条件波动。应该进一步理解，相对强度也可能随实验条件而变，并相应地，确切强度不应该被计入考虑。另外，传统的X射线粉末衍射角的测量误差通常为大约5％或更低，且这种测量误差度应该被视为属于上述衍射角。因此，要理解的是，本发明的晶体结构不限于提供与本文公开的附图中所示的X射线粉末衍射图完全相同的X-射线粉末衍射图的晶体结构。提供与附图基本相同的X射线粉末衍射图的任何晶体结构都落在本发明的范围内。确定X射线粉末衍射图基本相同的能力在本领域普通技术人员的能力范围内。本领域技术人员已知的其它合适的标准校准。但是，相对强度可能随晶体大小和形状而变。

本发明的化合物的晶型由它们的X射线粉末衍射图表征。因此，在具有使用Cu Kα辐射

以反射方式操作的GADDS(一般面积衍射检测器系统)CS的Bruker D8Discover X射线粉末衍射仪上采集所述盐的X射线粉末衍射图。管电压和电流量分别设置为40kV和40mA采集扫描。在3.0°至40°的2θ范围内扫描样品60秒的时期。针对2θ表示的峰位置，使用刚玉标准品校准衍射仪。在通常是20℃-30℃下实施所有分析。使用用于4.1.14T版WNT软件的GADDS，采集和积分数据。使用2003年发行的具有9.0.0.2版Eva的DiffracPlus软件，分析衍射图。XRPD样品的制备，通过是将样品至于单晶硅片上，用玻璃片或等效物压样品粉末以确保样品的表面平坦并有适当的高度。然后将样品支架放入Bruker XRPD仪器，并使用上文描述的仪器参数采集X射线粉末衍射图。由包括以下的多种因素产生与这类X射线粉末衍射分析结果相关的测量差异：(a)样品制备物(例如样品高度)中的误差，(b)仪器误差，(c)校准差异，(d)操作人员误差(包括在测定峰位置时出现的那些误差)，和(e)物质的性质(例如优选的定向误差)。校准误差和样品高度误差经常导致所有峰在相同方向中的位移。一般地说，这个校准因子将使测量的峰位置与预期的峰位置一致并且可以在预期的2θ值±0.2°的范围中。

3.2、差示扫描量热法(DSC)

差示扫描量热法(DSC)实验在TA Instruments^TM模型Q2000中进行。将样品(大约1-6毫克)在铝盘中称重并精确记录至百分之一毫克，并转移到DSC中。将该仪器用氮气以50毫升/分钟吹扫。在室温至350℃之间以10℃/分钟加热速率收集数据。在吸热峰朝下的情况下绘图。但是，本领域技术人员会注意到，在DSC测量中，根据加热速率、晶体形状和纯度和其它测量参数，实测的开始温度和最高温度具有一定程度的可变性。

3.3、热重分析(TGA)

热重分析(TGA)实验在TA Instruments^TM型号Q500中进行。将样品(大约10-30毫克)装在预先称皮重的铂盘中。通过仪器精确测量样品重量并记录至千分之一毫克(athousand of a milligram)。将该炉用氮气以100毫升/分钟吹扫。在室温至300℃之间以10℃/分钟加热速率收集数据。

通过附图和以下实施例进一步描述本发明，其仅用于阐明本发明的特定实施方案的目的而不应被解读为以任何方式限制本发明的范围。

实施例1

称取20mg式(I)化合物置于4.0mL玻璃瓶中，然后加入1mL正溶剂二乙胺，搅拌溶清，缓慢加入4.0mL反溶剂水，室温下(20-25℃)磁力搅拌24小时，固液分离得到结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物(在本文中称为晶型I)，其X射线粉末衍射如图1所示。

实施例2

称取50mg式(I)化合物置于10.0mL玻璃瓶中，然后加入5mL正溶剂二乙胺，搅拌溶清，加入5mg实施例1中得到的晶体，室温下(20-25℃)磁力搅拌24小时，固液分离得到结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物，其X射线粉末衍射图基本与图1一致。

实施例3

称取500mg式(I)化合物置于100.0mL圆底烧瓶瓶中，然后加入25mL正溶剂二乙胺，搅拌溶清，缓慢加入50mL反溶剂水，再加入20mg实施例1中得到的晶体，再缓慢加入50mL反溶剂水，室温下(20-25℃)磁力搅拌24小时，固液分离得到结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物，其X射线粉末衍射图基本与图1一致。

所得样品经高效液相色谱测定，液相纯度为99.5％，相对于其结晶原料的液相纯度95.1％(根据江苏豪森药业集团有限公司专利申请WO2015032272A1实施例9制备得到)有实质性提高，能够符合临床开发需求，解决了现有技术中采用反复多次将无定形固体溶解、脱溶剂，还是得到得到无定形固体，所得产品纯度仍然很低的技术缺陷。由此可见，本发明通过将无定形的原料制备成二乙胺溶剂合物，不但能够得到固体形式尤其是结晶形式的化合物，而且能够显著提高样品纯度，达到临床药用级别。

实施例1-3所得晶型I的DSC分析结果显示，在102.8±2℃有一个特征吸热峰，如图2所示。

实施例1-3所得晶型I的TGA分析结果显示加热至93.5℃样品的失重为1.02％，如图3所示，初步研究表明为表面吸附水，可忽略不计。

由动态水分吸附实验可知，晶型I样品在25℃的条件下，在0％RH-80％RH之间随着湿度的增加吸水量也在增加，重量变化为0.286％，根据《中华人民共和国药典》2010年版药物引湿性试验指导原则，该样品略有引湿性。在正常储存条件(即25℃湿度60％)，吸水约0％；在加速试验条件(即湿度75％)，吸水约0.191％；在极端条件(即湿度90％)，吸水约1.049％。图4是在动态水分吸附实验检测前后的XRPD对比图，可以看出样品在测定动态水分吸附实验前后晶型未发生转变。

实施例4

称取5mg式(I)化合物置于2.0mL玻璃瓶中，然后加入0.2mL正溶剂二乙胺，搅拌溶清，缓慢加入1.0mL反溶剂水，室温下(20-25℃)静置1周，固液分离得到式(I)化合物的二乙胺溶剂合物单晶。

在Bruker Apex II单晶测试系统上使用Mokα辐射

收集单晶数据。测得的强度数据的标定(indexing)和加工用HKL2000软件包在收集(Collect)程序纽上进行。晶体在数据收集过程中温度为296K。

晶型I的结构图如图5所示，晶型I结构堆积图如图6所示。晶型I的单晶模拟粉末衍射数据图与实测粉末衍射图对比图如图7所示，实验证明实施例1所得到的粉末晶体基本上是纯净的。晶型I的晶胞参数如表2所示：

表2

实施例5

进行式(I)化合物的二乙胺溶剂合物与无定形式(I)化合物的物理稳定性和化学稳定性的加速试验。将实施例3中得到的式(I)化合物的二乙胺溶剂合物与无定形式(I)化合物分别置于小瓶玻璃瓶中，每种样品固体准备两份，每份约10mg，将这些稳定性样品置于80℃恒温箱中，放置一周。放置一周后，一份样品用于化学纯度分析，分析方法用HPLC法。另一份样品用于晶型表征，用XRPD进行分析。两种固体的物理和化学的稳定性如表3所示。

表3

由上述加速稳定性试验可知，式(I)化合物的二乙胺溶剂合物较无定形式(I)化合物在物理稳定性和化学稳定性方面具有明显优势，式(I)化合物的二乙胺溶剂合物样品在高温放置都不降解、化学纯度基本不变，晶型也基本保持一致，而无定形式(I)化合物在高温放置后会马上发生变化，且发生降解，使得产品质量难以得到保证。众所周知，在药物开发领域，化合物的物理稳定性和化学稳定性对于样品生产、储存、运输、制剂工艺、药品有效期等都至关重要。因此，本发明所开发的式(I)化合物的二乙胺溶剂合物比无定形式(I)化合物更符合临床研究需要，更有利于药学开发。

综上所述，相对于无定形聚集状态来说，本发明所研究出来的式(I)化合物的胺溶剂合物在物理性质和化学性质上更加稳定，尤其是实施例得到的晶型I产品纯度高、稳定强、吸湿性较小，使得药物在生产、运输和贮存中更加方便；工艺上提纯、脱色、过滤以及其他纯化的单元操作也是简单易行，具有明显优势。因此，本发明的式(I)化合物的胺溶剂合物较之前的无定形式(I)化合物具有重大的改进意义，符合临床药物开发的需要。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制本发明，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。

Claims (15)

1.结晶型式(I)化合物

的二乙胺溶剂合物，其特征在于，所述结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的X射线粉末衍射图包括位于13.78±0.2°、17.02±0.2°、16.48±0.2°和12.46±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

2.根据权利要求1所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物，其特征在于，所述结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的X射线粉末衍射图进一步还包括位于23.94±0.2°、18.74±0.2°、15.72±0.2°和20.68±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

3.根据权利要求2所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物，其特征在于，所述结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的X射线粉末衍射图进一步还包括位于10.82±0.2°、21.58±0.2°、23.26±0.2°、25.16±0.2°、25.58±0.2°和24.26±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

4.根据权利要求1所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物，其特征在于，所述结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的X射线粉末衍射图包括与表1中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同的峰，

表1

5.根据权利要求1所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物，其特征在于，所述结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的晶胞为空间群正交，P212121，

晶胞体积为

6.根据权利要求1-5中任一所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1)：将式(I)化合物与二乙胺接触；

步骤2)：加入水至溶液出现浑浊，或加入晶种，或其结合，继续析晶；

步骤3)：固液分离得到结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物。

7.根据权利要求6所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述的二乙胺为纯液态二乙胺、含水二乙胺或二乙胺与有机溶剂的混合液的形式。

8.根据权利要求6所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的制备方法，其特征在于，步骤1)中将式(I)化合物溶解于二乙胺或先将式(I)化合物溶解于有机溶剂，然后再加入二乙胺。

9.根据权利要求7或8所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氢呋喃、二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳、甲基叔丁基醚、异丙醚、苯、甲苯、二甲苯和其混合物。

10.药物组合物，其包含治疗有效剂量的根据权利要求1-5中任一项所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物及可药用的载体。

11.根据权利要求1-5中任一项所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物或根据权利要求10所述的药物组合物在制备抑制钠依赖性葡萄糖共转运蛋白(SGLTs)的药物中的用途。

12.根据权利要求1-5中任一项所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物或根据权利要求10所述的药物组合物在制备抑制SGLT-1蛋白的药物、抑制SGLT-2蛋白的药物、双重抑制SGLT-1蛋白和SGLT-2蛋白的药物中的用途。

13.根据权利要求1-5中任一项所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物或根据权利要求10所述的药物组合物在制备用于治疗或者延缓下列疾病的发展或发作的药物中的用途，其中所述疾病选自糖尿病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、胰岛素抗性、高血糖、高胰岛素血症、高脂血症、肥胖症、X综合征、动脉粥样硬化和高血压。

14.根据权利要求1-5中任一项所述的结晶型式(I)化合物的二乙胺溶剂合物或根据权利要求10所述的药物组合物在制备用于治疗或者延缓疾病的发展或发作的药物中的用途，其中所述疾病为糖尿病并发症。

15.根据权利要求14所述的的用途，其中所述的糖尿病并发症选自视网膜病变、神经病、肾病、葡萄糖代谢紊乱造成的胰岛素耐受、高胰岛素血症、高血脂、和肥胖。

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