JP6918005B2 - 細胞内抗原に対して向けられた単一ドメイン抗体 - Google Patents

細胞内抗原に対して向けられた単一ドメイン抗体 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
このＰＣＴ国際特許出願は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１５年１１月２日に提出された米国仮特許出願第６２／２４９８９８号の利益を主張する。
配列表
本出願は、ハードコピーの代わりにテキストフォーマットで配列リストと一緒に提出している。配列表は、２０１６年１０月２７日に作成された「ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」という表題のファイルとして提供され、サイズが５８キロバイトである。配列表の電子フォーマットの情報は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
単一抗原結合タンパク質として、またはより大きいタンパク質もしくはポリペプチド中の抗原結合ドメインとしての単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）の使用は、従来の抗体または抗体フラグメントの使用に対するいくつかの重要な利点を提供する。ｓｄＡｂの利点としては以下が挙げられる：単一ドメインのみが高い親和性および高い選択性で抗原に結合するために必要とされる；ｓｄＡｂは単一遺伝子から発現することができ、翻訳後修飾を必要としない；ｓｄＡｂは変性剤または熱、ｐＨ、およびプロテアーゼを含む条件に対して高度に安定である；ｓｄＡｂは安価に調製することができる；およびｓｄＡｂは、従来の抗体がアクセスできない標的およびエピトープにアクセスすることができる。
ヌクレオチドおよびタンパク質などの異常な細胞内または膜貫通成分によって引き起こされるウイルス感染症またはがんなどのいくつかの疾患または状態が存在する。異常な成分の排除を使用して、疾患または状態を予防または治療することができる。このような疾患の治療に利用可能ないくつかの薬理学的化合物が存在するが、これらの化合物は、非罹患細胞に対して効果がない、送達不能である、または毒性であり得る。
他の治療には、治療薬が細胞膜の受容体によって認識され、治療薬が細胞膜を通過して細胞に侵入することを可能にするように外因性標的化配列を含む治療タンパク質または薬剤の使用が含まれる。いったん治療薬が細胞内に入ると、治療薬は疾患を治療するために標的成分と相互作用することができる。しかしながら、外因性標的化配列の使用は、治療薬によって標的化される細胞型を制限し、治療薬を製造するコストを増加させ得る。
前記の理由から、細胞に侵入するために外因性標的化配列にも化学組成物にも依存せず、体内の罹患細胞のみを標的化とするのに有効である、疾患を治療または予防するための組成物および方法が必要とされている。
本発明は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ｓｄＡｂを含むタンパク質およびポリペプチドに関する。ｓｄＡｂは、状態または疾患を引き起こす標的に対して向けられる。本発明はまた、ｓｄＡｂ、ｓｄＡｂを含むタンパク質およびポリペプチド、ならびに組成物を含む。本発明は、予防、治療または診断目的のための組成物、ｓｄＡｂ、タンパク質またはポリペプチドの使用を含む。本発明は、本発明のｓｄＡｂに対して向けられたモノクローナル抗体の使用も含む。
本発明は、状態または疾患を治療または予防するために使用されるｓｄＡｂに関する。一実施形態は、抗ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１）逆転写酵素単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）に関する。一態様では、抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂが、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む。本発明はまた、有効量の抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与することによって、抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂを用いて、対象の疾患を治療、疾患の発症を予防、または疾患の再発を予防する方法を含む。対象は、ヒトなどの哺乳動物であり得る。抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂは、例えばプロテアーゼ阻害剤などの１種または複数の化合物と組み合わせて投与することができる。有効量の抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与することは、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、直腸投与、経腸投与、非経口投与、眼内投与、皮下投与、経皮投与によることができ、点眼剤として投与され、鼻スプレーとして投与され、吸入または噴霧によって投与され、局所投与され、埋め込み可能な薬物として投与され得る。
別の実施形態では、本発明は、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有する単離されたポリペプチドに関する。別の実施形態では、本発明は、配列番号２７のポリペプチドに対して向けられた抗体を含む。
本発明は、対象由来の試料中の抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂのレベルを測定する方法であって、ａ）配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの１つまたは複数のドメインに対して向けられたマウスモノクローナル抗体を作製するステップと；ｂ）対象から試料を得るステップと；ｃ）マウスモノクローナル抗体および試料を用いて定量的イムノアッセイを行って、対象のｓｄＡｂの量を決定するステップと；こうして対象のｓｄＡｂの量を測定するステップとを含む方法を含む。一態様では、定量的イムノアッセイが、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、特異的分析物標識および再捕捉アッセイ（ＳＡＬＲＡ）、液体クロマトグラフィー、質量分析、蛍光活性化セルソーティングまたはこれらの組み合わせを含む。
本発明の別の実施形態は、抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂに関する。一態様では、抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂが、配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含む。本発明はまた、有効量の抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与することによって、抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂを用いて、対象の疾患を治療、疾患の発症を予防、または疾患の再発を予防する方法を含む。対象は、ヒトなどの哺乳動物であり得る。抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂは、例えばプロテアーゼ阻害剤などの１種または複数の化合物と組み合わせて投与することができる。有効量の抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与することは、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、直腸投与、経腸投与、非経口投与、眼内投与、皮下投与、経皮投与によることができ、点眼剤として投与され、鼻スプレーとして投与され、吸入または噴霧によって投与され、局所投与され、埋め込み可能な薬物として投与され得る。
別の実施形態では、本発明は、配列番号５５に示されるアミノ酸配列を有する単離されたポリペプチドに関する。別の実施形態では、本発明は、配列番号５５のポリペプチドに対して向けられた抗体を含む。
本発明は、対象由来の試料中の抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂのレベルを測定する方法であって、ａ）配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの１つまたは複数のドメインに対して向けられたマウスモノクローナル抗体を作製するステップと；ｂ）対象から試料を得るステップと；ｃ）マウスモノクローナル抗体および試料を用いて定量的イムノアッセイを行って、対象のｓｄＡｂの量を決定するステップと；こうして対象のｓｄＡｂの量を測定するステップとを含む方法を含む。一態様では、定量的イムノアッセイが、ＥＬＩＳＡ、ＳＡＬＲＡ、液体クロマトグラフィー、質量分析、蛍光活性化セルソーティングまたはこれらの組み合わせを含む。
本発明のさらに別の実施形態は、抗アラキドン酸１２−リポキシゲナーゼ（ＡＬＯＸ１２）ｓｄＡｂに関する。一態様では、抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂが、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１または配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含む。本発明はまた、有効量の抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与することによって、抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂを用いて、対象の疾患を治療、疾患の発症を予防、または疾患の再発を予防する方法を含む。対象は、ヒトなどの哺乳動物であり得る。抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂは、１種または複数の化合物と組み合わせて投与することができる。有効量の抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与することは、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、直腸投与、経腸投与、非経口投与、眼内投与、皮下投与、経皮投与によることができ、点眼剤として投与され、鼻スプレーとして投与され、吸入または噴霧によって投与され、局所投与され、埋め込み可能な薬物として投与され得る。
別の実施形態では、本発明は、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１または配列番号５２に示されるアミノ酸配列を有する単離されたポリペプチドに関する。別の実施形態では、本発明は、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１または配列番号５２のポリペプチドに対して向けられた抗体を含む。
本発明は、対象由来の試料中の抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂのレベルを測定する方法であって、ａ）配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの１つまたは複数のドメインに対して向けられたマウスモノクローナル抗体を作製するステップと；ｂ）対象から試料を得るステップと；ｃ）マウスモノクローナル抗体および試料を用いて定量的イムノアッセイを行って、対象のｓｄＡｂの量を決定するステップと；こうして対象のｓｄＡｂの量を測定するステップとを含む方法を含む。一態様では、定量的イムノアッセイが、ＥＬＩＳＡ、ＳＡＬＲＡ、液体クロマトグラフィー、質量分析、蛍光活性化セルソーティングまたはこれらの組み合わせを含む。
本発明のこれらおよび他の特徴、態様および利点は、以下の説明、添付の特許請求の範囲、および付随する図面に関してよりよく理解されるであろう。
他の記載との重複もあるが、本発明を以下に示す。
［発明１］
抗ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１）逆転写酵素単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）。
［発明２］
配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂ。
［発明３］
発明１または２に記載の抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂを用いて、対象の疾患を治療、疾患の発症を予防、または疾患の再発を予防する方法であって、有効量の前記抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
［発明４］
前記対象が哺乳動物である、発明３に記載の方法。
［発明５］
前記哺乳動物がヒトである、発明４に記載の方法。
［発明６］
前記抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂが１種または複数の化合物と組み合わせて投与される、発明３に記載の方法。
［発明７］
前記１種または複数の化合物がプロテアーゼ阻害剤である、発明６に記載の方法。
［発明８］
有効量の前記抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与することが、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、直腸投与、経腸投与、非経口投与、眼内投与、皮下投与、経皮投与、点眼剤として投与、鼻スプレーとして投与、吸入または噴霧によって投与、局所投与および埋め込み可能な薬物として投与を含む、発明３に記載の方法。
［発明９］
配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド。
［発明１０］
発明９に記載のポリペプチドに対して向けられた抗体。
［発明１１］
対象由来の試料中の抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂのレベルを測定する方法であって、
ａ）配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの１つまたは複数のドメインに対して向けられたマウスモノクローナル抗体を作製するステップと；
ｂ）前記対象から試料を得るステップと；
ｃ）前記マウスモノクローナル抗体および前記試料を用いて定量的イムノアッセイを行って、対象のｓｄＡｂの量を決定するステップと；
ｄ）前記対象のｓｄＡｂの量を定量化するステップと
を含む方法。
［発明１２］
前記定量的イムノアッセイが、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、特異的分析物標識および再捕捉アッセイ（ＳＡＬＲＡ）、液体クロマトグラフィー、質量分析、蛍光活性化セルソーティングまたはこれらの組み合わせを含む、発明１１に記載の方法。
［発明１３］
抗エボラＶＰ２４単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）。
［発明１４］
配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含む抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ。
［発明１５］
発明１３または１４に記載の抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂを用いて、対象の疾患を治療、疾患の発症を予防、または疾患の再発を予防する方法であって、有効量の前記抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
［発明１６］
前記対象が哺乳動物である、発明１５に記載の方法。
［発明１７］
前記哺乳動物がヒトである、発明１６に記載の方法。
［発明１８］
前記抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂが１種または複数の化合物と組み合わせて投与される、発明１５に記載の方法。
［発明１９］
前記１種または複数の化合物が抗ウイルス化合物である、発明１８に記載の方法。
［発明２０］
有効量の前記抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与することが、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、直腸投与、経腸投与、非経口投与、眼内投与、皮下投与、経皮投与、点眼剤として投与、鼻スプレーとして投与、吸入または噴霧によって投与、局所投与および埋め込み可能な薬物として投与を含む、発明１４に記載の方法。
［発明２１］
配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド。
［発明２２］
発明２１に記載のポリペプチドに対して向けられた抗体。
［発明２３］
対象由来の試料中の抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂのレベルを測定する方法であって、
ａ）配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの１つまたは複数のドメインに対して向けられたマウスモノクローナル抗体を作製するステップと；
ｂ）前記対象から試料を得るステップと；
ｃ）前記マウスモノクローナル抗体および前記試料を用いて定量的イムノアッセイを行って、対象のｓｄＡｂの量を決定するステップと；
ｄ）前記対象のｓｄＡｂの量を定量化するステップと
を含む方法。
［発明２４］
前記定量的イムノアッセイが、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、特異的分析物標識および再捕捉アッセイ（ＳＡＬＲＡ）、液体クロマトグラフィー、質量分析、蛍光活性化セルソーティングまたはこれらの組み合わせを含む、発明２３に記載の方法。
［発明２５］
抗アラキドン酸１２−リポキシゲナーゼ（ＡＬＯＸ１２）単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）。
［発明２６］
配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１または配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含む抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂ。
［発明２７］
発明２５または２６に記載の抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂを用いて、対象の疾患を治療、疾患の発症を予防、または疾患の再発を予防する方法であって、有効量の前記抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
［発明２８］
前記対象が哺乳動物である、発明２７に記載の方法。
［発明２９］
前記哺乳動物がヒトである、発明２８に記載の方法。
［発明３０］
前記抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂが１種または複数の化合物と組み合わせて投与される、発明２７に記載の方法。
［発明３１］
有効量の前記抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与することが、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、直腸投与、経腸投与、非経口投与、眼内投与、皮下投与、経皮投与、点眼剤として投与、鼻スプレーとして投与、吸入または噴霧によって投与、局所投与および埋め込み可能な薬物として投与を含む、発明２７に記載の方法。
［発明３２］
配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１または配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド。
［発明３３］
発明３２に記載のポリペプチドに対して向けられた抗体。
［発明３４］
対象由来の試料中の抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂのレベルを測定する方法であって、
ａ）配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１または配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの１つまたは複数のドメインに対して向けられたマウスモノクローナル抗体を作製するステップと；
ｂ）前記対象から試料を得るステップと；
ｃ）前記マウスモノクローナル抗体および前記試料を用いて定量的イムノアッセイを行って、対象のｓｄＡｂの量を決定するステップと；
ｄ）前記対象のｓｄＡｂの量を定量化するステップと
を含む方法。
［発明３５］
前記定量的イムノアッセイが、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、特異的分析物標識および再捕捉アッセイ（ＳＡＬＲＡ）、液体クロマトグラフィー、質量分析、蛍光活性化セルソーティングまたはこれらの組み合わせを含む、発明３４に記載の方法。
ＨＩＶ１−９抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂ（配列番号２７）を使用したＥＬＩＳＡの結果を示す図である。 ＨＩＶ１−９抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂ（配列番号２７）を使用したＥＬＩＳＡの結果を示す図である。 ＨＩＶ１−９抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂ（配列番号２７）の希釈系列を使用したＥＬＩＳＡの結果を示す図である。 ＨＩＶ１−９抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂ（配列番号２７）の希釈系列を使用したＥＬＩＳＡの結果を示す図である。 ＶＰ２４−５抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ（配列番号５５）を使用したＥＬＩＳＡの結果を示す図である。 ＶＰ２４−５抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ（配列番号５５）を使用したＥＬＩＳＡの結果を示す図である。 ＶＰ２４−５抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ（配列番号５５）を使用したＥＬＩＳＡの結果を示す図である。 ＶＰ２４−５抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ（配列番号５５）を使用したＥＬＩＳＡの結果を示す図である。 ＶＰ２４−５抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ（配列番号５５）の希釈系列を使用したＥＬＩＳＡの結果を示す図である。 ＶＰ２４−５抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ（配列番号５５）の希釈系列を使用したＥＬＩＳＡの結果を示す図である。
本明細書で使用される場合、以下の用語およびその変形は、このような用語が使用される文脈によって異なる意味が明確に意図されない限り、以下に示される意味を有する。
本明細書で使用される「１つの（ａ、ａｎ）」および「この（ｔｈｅ）」という用語ならびに同様の指示対象は、文脈におけるそれらの使用がそうでないことを示さない限り、単数と複数の両方を包含するものと解釈されるべきである。
「抗原決定基」という用語は、抗原結合分子（本発明のｓｄＡｂまたはポリペプチドなど）によって、より具体的には抗原結合分子の抗原結合部位によって認識される抗原上のエピトープを指す。「抗原決定基」および「エピトープ」という用語はまた、互換的に使用され得る。特定の抗原決定基、エピトープ、抗原またはタンパク質に結合することができる、これらに対して親和性を有する、および／またはこれらに対する特異性を有するアミノ酸配列は、抗原決定基、エピトープ、抗原またはタンパク質に「対する」または「対して向けられる」と言われる。
本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語およびこの用語の変形、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、他の添加剤、成分、整数またはステップを排除することを意図しない。
本明細書中に記載されるｓｄＡｂ、ポリペプチドおよびタンパク質は、アミノ酸残基が類似の化学構造の別のアミノ酸残基で置き換えられているが、ポリペプチドの機能にも、活性にも他の生物学的特性にもほとんどまたは本質的に全く影響しないアミノ酸置換として一般に記載され得る、いわゆる「保存的」アミノ酸置換を含むことができることが熟慮される。保存的アミノ酸置換は当技術分野で周知である。保存的置換は、以下の群（ａ）〜（ｅ）内の１個のアミノ酸が同じ群内の別のアミノ酸によって置換される置換である：（ａ）小さな脂肪族、非極性またはわずかに極性の残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＰｒｏおよびＧｌｙ；（ｂ）極性の、負に帯電した残基およびそれらの（非帯電）アミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、ＧｌｕおよびＧｌｎ；（ｃ）極性の、正に帯電した残基：Ｈｉｓ、ＡｒｇおよびＬｙｓ；（ｄ）大きな脂肪族、非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＶａｌおよびＣｙｓ；および（ｅ）芳香族残基：Ｐｈｅ、ＴｙｒおよびＴｒｐ。他の保存的置換としては以下が挙げられる：ＡｌａからＧｌｙまたはＳｅｒ；ＡｒｇからＬｙｓ；ＡｓｎからＧｌｎまたはＨｉｓ；ＡｓｐからＧｌｕ；ＣｙｓからＳｅｒ；ＧｌｎからＡｓｎ；ＧｌｕからＡｓｐ；ＧｌｙからＡｌａまたはＰｒｏ；ＨｉｓからＡｓｎまたはＧｌｎ；ＩｌｅからＬｅｕまたはＶａｌ；ＬｅｕからＩｌｅまたはＶａｌ；ＬｙｓからＡｒｇ、ＧｌｎまたはＧｌｕ；ＭｅｔからＬｅｕ、ＴｙｒまたはＩｌｅ；ＰｈｅからＭｅｔ、ＬｅｕまたはＴｙｒ；ＳｅｒからＴｈｒ；ＴｈｒからＳｅｒ；ＴｒｐからＴｙｒ；ＴｙｒからＴｒｐ；および／またはＰｈｅからＶａｌ、ＩｌｅまたはＬｅｕ。
本明細書で使用される「ドメイン」は、一般に、抗体鎖の球状領域、特に重鎖抗体の球状領域、またはこのような球状領域から本質的になるポリペプチドを指す。
ｓｄＡｂのアミノ酸配列および構造は、典型的には、「フレームワーク領域１」または「ＦＲ１」；「フレームワーク領域２」または「ＦＲ２」；「フレームワーク領域３」または「ＦＲ３」；および「フレームワーク領域４」または「ＦＲ４」とそれぞれ呼ばれる４つのフレームワーク領域または「ＦＲ」で構成される。フレームワーク領域は、「相補性決定領域１」または「ＣＤＲ１」；「相補性決定領域２」または「ＣＤＲ２」；および「相補性決定領域３」または「ＣＤＲ３」とそれぞれ呼ばれる３つの相補性決定領域または「ＣＤＲ」によって中断される。
本明細書で使用される場合、「ヒト化ｓｄＡｂ」という用語は、天然ＶＨＨ配列のアミノ酸配列中の１つまたは複数のアミノ酸残基が、ヒト由来の従来の４鎖抗体のＶＨドメイン中の対応する位置で生じるアミノ酸残基の１つまたは複数によって置き換えられたｓｄＡｂを意味する。これは、当技術分野で周知の方法によって行うことができる。例えば、ｓｄＡｂのＦＲをヒト可変ＦＲによって置き換えることができる。
本明細書で使用される場合、「単離された」核酸またはアミノ酸は、その供給源もしくは培地、別の核酸、別のタンパク質／ポリペプチド、別の生物学的成分もしくは巨大分子、または汚染物質、不純物もしくは微量成分などの、それが通常会合しない少なくとも１つの他の成分から分離されている。
「哺乳動物」という用語は、哺乳綱に属する個体として定義され、限定されないが、ヒト、飼育動物および家畜、ならびに動物園、スポーツおよびペット動物、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、イヌおよびネコを含む。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、薬学的投与に適合する任意のおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことが意図される。適切な担体は、この分野の標準的な参考テキストであるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。このような担体または希釈剤の好ましい例としては、それだけに限らないが、水、生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）および５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。リポソーム、カチオン性脂質および非水性ビヒクル（不揮発性油など）も使用することができる。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が上に定義される治療剤と適合しない場合を除いて、本発明の組成物におけるその使用が熟慮される。
「定量的イムノアッセイ」は、抗体を用いて試料中に存在する抗原の量を測定する任意の手段を指す。定量的イムノアッセイを行う方法は、それだけに限らないが、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、特異的分析物標識および再捕捉アッセイ（ＳＡＬＲＡ）、液体クロマトグラフィー、質量分析、蛍光活性化セルソーティングなどを含む。
「溶液」という用語は、溶媒および溶質を含む組成物を指し、真の溶液および懸濁液を含む。溶液の例としては、液体に溶解した固体、液体または気体、および液体に懸濁した粒子またはミセルが挙げられる。
「特異性」という用語は、特定の抗原結合分子または抗原結合タンパク質分子が結合することができる様々な種類の抗原または抗原決定基の数を指す。抗原結合タンパク質の特異性は、親和性および／または結合活性に基づいて決定することができる。抗原と抗原結合タンパク質の解離の平衡定数（ＫＤ）によって表される親和性は、抗原決定基と抗原結合タンパク質上の抗原結合部位との間の結合強度の尺度である：ＫＤの値が低いほど、抗原決定基と抗原結合分子との間の結合強度が強くなる（あるいは、親和性をまた１／ＫＤである親和定数（ＫＡ）として表すこともできる）。当業者に明らかであるように、親和性を、対象となる特異的抗原に応じて決定することができる。結合活性は、抗原結合分子と抗原との間の結合強度の尺度である。結合活性は、抗原決定基と抗原結合分子上の抗原結合部位との間の親和性と抗原結合分子上に存在する関連結合部位の数の両方に関連する。抗原または抗原決定基への抗原結合タンパク質の特異的結合は、例えばＳｃａｔｃｈａｒｄ分析および／または競合結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）およびサンドイッチ競合アッセイなどの任意の公知の様式で決定することができる。
本明細書で使用される場合、「組換え」という用語は、本発明のｓｄＡｂを作製するために使用される遺伝子工学的方法（例えば、クローニングおよび増幅）の使用を指す。
「単一ドメイン抗体」、「ｓｄＡｂ」または「ＶＨＨ」は、一般に、３つの相補性決定領域によって中断された４つのフレームワーク領域で構成されるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはタンパク質と定義することができる。これは、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４として表される。本発明のｓｄＡｂはまた、ｓｄＡｂアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはタンパク質を含む。典型的には、ｓｄＡｂはラマなどのラクダ科動物で産生されるが、当技術分野で周知の技術を用いて合成的に作製することもできる。本明細書で使用される場合、天然重鎖抗体中に存在する可変ドメインを、これらを「ＶＨドメイン」と呼ばれる従来の４鎖抗体中に存在する重鎖可変ドメインおよび「ＶＬドメイン」と呼ばれる従来の４鎖抗体中に存在する軽鎖可変ドメインと識別するために、「ＶＨＨドメイン」とも呼ぶ。「ＶＨＨ」および「ｓｄＡｂ」は、本明細書において互換的に使用される。ｓｄＡｂまたはポリペプチドのアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら（「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、ＵＳ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、出版９１号）によって与えられるＶＨドメインについての一般的な番号付けに従う。この番号付けによると、ｓｄＡｂのＦＲ１は１〜３０位のアミノ酸残基を含み、ｓｄＡｂのＣＤＲ１は３１〜３６位のアミノ酸残基を含み、ｓｄＡｂのＦＲ２は３６〜４９位のアミノ酸を含み、ｓｄＡｂのＣＤＲ２は５０〜６５位のアミノ酸残基を含み、ｓｄＡｂのＦＲ３は６６〜９４位のアミノ酸残基を含み、ｓｄＡｂのＣＤＲ３は９５〜１０２位のアミノ酸残基を含み、ｓｄＡｂのＦＲ４は１０３〜１１３位のアミノ酸残基を含む。
「合成」という用語は、インビトロの化学的または酵素的合成による作製を指す。
本明細書で使用される「標的」という用語は、ｓｄＡｂによって認識される任意の成分、抗原または部分を指す。「細胞内標的」という用語は、細胞内に存在する任意の成分、抗原または部分を指す。「膜貫通標的」は、細胞膜内に位置する成分、抗原または部分である。「細胞外標的」は、細胞の外側に位置する成分、抗原または部分を指す。
本明細書で使用される「治療用組成物」は、医薬組成物、遺伝物質、生物製剤および他の物質などの治療効果を有することが意図される物質を意味する。遺伝物質には、遺伝的ベクター、遺伝子調節要素、遺伝子構造要素、ＤＮＡ、ＲＮＡなどの直接的または間接的遺伝子治療効果を有することが意図された物質が含まれる。生物製剤には、生物である、または治療効果を有することが意図された生物由来の物質が含まれる。
本明細書で使用される場合、「治療上有効量」および「予防上有効量」という句は、疾患または疾患の明白な症状の治療、予防または管理において治療上の利益を提供する量を指す。治療上有効量は、疾患、疾患の症状または疾患の素因を治す、癒す、緩和する、軽減する、変化させる、救済する、寛解させる、改善するまたはこれに影響を及ぼす目的で、疾患もしくは状態、疾患の症状、または疾患の素因を治療することができる。治療上有効な具体的な量は、通常の医師が容易に決定することができ、例えば、疾患のタイプ、患者の病歴および年齢、疾患の段階、ならびに他の治療薬の投与などの当技術分野で公知の因子に応じて変化し得る。
本発明は、ウイルスおよび細胞内成分に対して向けられた単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ならびにｓｄＡｂを含むタンパク質およびポリペプチドとタンパク質およびポリペプチドをコードするヌクレオチドに関する。本発明はまた、細胞内、経細胞および細胞外標的または抗原に対して向けられたｓｄＡｂにも関する。本発明はまた、ｓｄＡｂ、ｓｄＡｂを含むタンパク質およびポリペプチド、ならびに組成物を含む。本発明は、予防、治療または診断目的のための組成物、ｓｄＡｂ、タンパク質またはポリペプチドの使用を含む。
ＳｄＡｂは、ｓｄＡｂを機能的抗原結合ドメインまたはタンパク質として使用するのに非常に有利にするいくつかの独特の構造的特徴および機能的特性を有する。ＳｄＡｂは軽鎖可変ドメインの非存在下で抗原に機能的に結合し、単一の比較的小さな機能的抗原結合構造単位、ドメインまたはタンパク質として機能することができる。このことがｓｄＡｂを、それ自体抗原結合タンパク質またはドメインとして機能せず、抗原に結合するために抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）または一本鎖可変フラグメント（ＳｃＦｖ）などの従来の抗体フラグメントと組み合わせる必要がある従来の抗体のドメインと区別する。
ＳｄＡｂは、当技術分野で周知の方法を用いて得ることができる。例えば、ｓｄＡｂを得る１つの方法は、（ａ）１つまたは複数の抗原でラクダ科動物を免疫化するステップと、（ｂ）免疫化されたラクダ科動物から末梢リンパ球を単離し、全ＲＮＡを得て、対応する相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を合成するステップと、（ｃ）ＶＨＨドメインをコードするｃＤＮＡフラグメントのライブラリーを構築するステップと、（ｄ）ステップ（ｃ）で得られたＶＨＨドメインコードｃＤＮＡを、ＰＣＲを用いてメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に転写し、ｍＲＮＡをリボソームディスプレイフォーマットに変換し、リボソームディスプレイによってＶＨＨドメインを選択するステップと、（ｅ）適切なベクター中でＶＨＨドメインを発現させ、場合により発現したＶＨＨドメインを精製するステップとを含む。
本発明のｓｄＡｂを得る別の方法は、核酸合成のための技術を用いてｓｄＡｂをコードする核酸を調製し、引き続いてインビボまたはインビトロで核酸を発現させることによる。さらに、本発明のｓｄＡｂ、ポリペプチドおよびタンパク質は、タンパク質、ポリペプチドまたは他のアミノ酸配列を調製するための合成または半合成技術を用いて調製することができる。
本発明のｓｄＡｂは、一般に、標的の全ての天然または合成の類似体、変異体、突然変異体、対立遺伝子、部分および断片に、あるいは少なくとも本発明のｓｄＡｂが野生型標的において結合する抗原決定基またはエピトープと本質的に同じである１つまたは複数の抗原決定基またはエピトープを含む標的の類似体、突然変異体、対立遺伝子、部分および断片に結合する。本発明のｓｄＡｂは、このような類似体、変異体、突然変異体、対立遺伝子、部分および断片に、本発明のｓｄＡｂが野生型標的に結合する親和性および特異性と同じ、またはそれより高いもしくは低い親和性および／または特異性で結合する。本発明のｓｄＡｂが、標的のいくつかの類似体、変異体、突然変異体、対立遺伝子、部分および断片に結合するが、他のものには結合しないことも本発明の範囲内で熟慮される。さらに、本発明のｓｄＡｂはヒト化されていてもよく、一価または多価および／または多特異性であってもよい。さらに、本発明のｓｄＡｂは、標的タンパク質のリン酸化形態ならびに標的タンパク質の非リン酸化形態に結合することができる。ｓｄＡｂは、アルブミンまたは他の巨大分子などの他の分子に連結することができる。
さらに、ｓｄＡｂが多価であること、すなわち、ｓｄＡｂが、標的の２つ以上の異なるエピトープに対して向けられる２つ以上のタンパク質またはポリペプチドを有することができることが本発明の範囲内である。このような多価ｓｄＡｂにおいて、タンパク質またはポリペプチドは、例えば、同じエピトープ、実質的に等価のエピトープ、または異なるエピトープに対して向けられ得る。異なるエピトープは、同じ標的上に位置してもよいし、２つ以上の異なる標的上に存在してもよい。
本発明の１つまたは複数のｓｄＡｂの配列が１つまたは複数のリンカー配列と接続または連結され得ることも熟慮される。リンカーは、例えば、セリン、グリシンおよびアラニンの組み合わせを含むタンパク質配列であり得る。
記載される使用に適している限り、本発明のｓｄＡｂの部分、断片、類似体、突然変異体、変異体、対立遺伝子および／または誘導体を使用することも本発明の範囲内である。
本発明のｓｄＡｂは主として治療的および／または診断的使用を意図しているので、これらは哺乳動物、好ましくはヒトの標的に対して向けられている。しかしながら、本明細書に記載されるｓｄＡｂは、他の種由来の標的、例えば、霊長類または他の動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタまたはイヌ）、特に、標的に関連する疾患に関連する疾患および障害の動物モデルの１つまたは複数種由来の標的と交差反応性であることが可能である。
別の態様では、本発明は、本発明のｓｄＡｂをコードする核酸に関する。このような核酸は、例えば、遺伝子構築物の形態であり得る。
別の態様では、本発明は、本発明のｓｄＡｂを発現するもしくは発現することがでる、および／または本発明のｓｄＡｂをコードする核酸を含む宿主または宿主細胞に関する。ｓｄＡｂの配列は、任意の生物のゲノムに挿入して遺伝子組換え生物（ＧＭＯ）を作製するために使用することができる。例としては、それだけに限らないが、植物、細菌、ウイルスおよび動物が挙げられる。
本発明はさらに、本発明のｓｄＡｂ、ｓｄＡｂをコードする核酸、このようなｓｄＡｂを発現するまたは発現することができる宿主細胞、ｓｄＡｂを含有する製品および組成物を調製または作製する方法に関する。
本発明はさらに、本明細書に記載されるｓｄＡｂ、ｓｄＡｂをコードする核酸、宿主細胞、製品および組成物の適用および使用に関する。このような製品または組成物は、例えば、疾患を治療もしくは予防するための医薬組成物、または診断用途のための製品もしくは組成物であり得る。ｓｄＡｂは、ｓｄＡｂの血清および組織レベルを測定するための種々のアッセイ、例えばＥＬＩＳＡアッセイおよび質量分析アッセイに使用することができる。
別の態様では、本発明の１つまたは複数のｓｄＡｂをコードする核酸を、生物のゲノムに挿入して疾患を治療または予防することができる。
本発明は、一般に、ｓｄＡｂ、ならびに予防、治療および／または診断目的に使用され得るこのようなｓｄＡｂの１つもしくは複数を含むまたは１つもしくは複数から本質的になるタンパク質またはポリペプチドに関する。
本明細書に詳述される方法および組成物を使用して、本明細書に記載される疾患を治療することができ、またこれを本明細書に記載されているまたは当業者に公知の任意の投与量および／または製剤、ならびに本明細書に記載されているまたは当業者に公知の任意の投与経路を用いて使用することができる。
本発明のｓｄＡｂを、ウイルスまたは異常な細胞タンパク質によって引き起こされる疾患の治療および予防に使用することができる。本発明のｓｄＡｂを、疾患の治療および予防に使用することもできる。本発明のｓｄＡｂを使用して、細胞内分子の過剰発現がある場合に疾患を標的化することができる。これらを使用して、感染細胞内の細胞内ウイルスタンパク質を標的とすることによって、ウイルス感染症を治療することもできる。ウイルスタンパク質、例えばＨＩＶ−１逆転写酵素の産生を遮断することで、ウイルスのライフサイクルを遮断することができる。
本発明のｓｄＡｂはまた、エボラＶＰ２４のなどの細胞内ウイルスタンパク質を標的とし、したがってエボラが宿主の抗ウイルス免疫応答を遮断する能力を遮断することもできる。
本発明のｓｄＡｂを１種または複数の化合物と共に使用することができる。例えば、本発明のｓｄＡｂを、例えばクルクミン、レスベラトロール、ククルビタシンＡ、Ｂ、Ｅ、Ｉ、Ｑ、フラボピリドール、デオキシテトランゴマイシン、シクロペンテノン誘導体、Ｎ−アシルホモセリンラクトン、インディルビン誘導体、メイソインジゴ、チロホスチン、白金含有化合物（例えば、ＩＳ３−２９５）、ペプチド模倣薬、アンチセンスオリゴヌクレオチド、Ｓ３Ｉ−２０１、ホスホチロシントリペプチド誘導体、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤（例えば、ネルフィナビル、インジナビル、サキナビルおよびリトルナビル）、ＪＳＩ−１２４、ＸｐＹＬ、Ａｃ−ｐＹＬＰＱＴＶ−ＮＨ２、ＩＳＳ６１０、ＣＪ−１３８３、ピリメタミン、メトホルミン、アチプリモド、Ｓ３Ｉ−Ｍ２００１、ＳＴＸ−０１１９；Ｎ−［２−（１，３，４−オキサジアゾリル）］−４−キノリンカルボキサミド誘導体、Ｓ３Ｉ−１７５７、ＬＹ５；５，８−ジオキソ−６（ピリジン−３−イルアミノ）−５，８，−ジヒドロ−ナフタレン−１−スルホンアミド、ウィサシンスチン（ｗｉｔｈａｃｉｎｓｔｉｎ）、Ｓｔａｔｔｉｃ、ＳＴＡ−２１、ＬＬＬ−３、ＬＬＬ１２、ＸＺＨ−５、ＳＦ−１０６６、ＳＦ−１０８７、１７ｏ、クリプトタンシノン、ＦＬＬ３２、ＦＬＬ６２、Ｃ１８８−９、ＢＰ−１１０８およびＢＰ−１０７５、ガリエララクトン、ＪＱ１、５、１５ＤＰＰ、ＷＰ１０６６、ニクロサミド、ＳＤ１００８、ニフロキサジド、クリプトタンシノン、ＢＢＩキノンおよびルキソリチニブホスフェートなどのＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤と共に使用することができる。１種または複数の化合物は、治療応答を増加させ、本発明のｓｄＡｂの有効性を増強することができる。さらに、ｓｄＡｂの有効性は、これをペプチド、ペプチド模倣薬および他の薬物（例えば、それだけに限らないが、シメチジン、アトルバスタチン、セレコキシブ、メトホルミンおよびシメチジンなど）と組み合わせることによって増加させることができる。
本発明の１つまたは複数のｓｄＡｂを組み合わせることができること、または本発明のｓｄＡｂを他のｓｄＡｂと組み合わせることも熟慮される。
本発明の一定のｓｄＡｂは、ｓｄＡｂ上の追加の標的化タンパク質配列の助けを借りずに、また細胞表面受容体に結合し、細胞膜を通過する外因性化合物の助けを借りずに、細胞膜を通過し、細胞に侵入することができることが熟慮される。
細胞膜を通過した後、これらのｓｄＡｂは、膜貫通型または細胞内の分子または抗原を標的化することができる。これらの標的は、例えば、タンパク質、炭水化物、脂質、核酸、突然変異タンパク質、ウイルスタンパク質およびプリオンであり得る。ｓｄＡｂ標的は、酵素、細胞の構造タンパク質、細胞膜分子の細胞内部分、細胞小器官の膜内の分子、任意のタイプのＲＮＡ分子、ＤＮＡまたは染色体の任意の領域、メチル化または非メチル化核酸、細胞の合成機構内の部分的に組み立てられた分子、セカンドメッセンジャー分子、および細胞シグナル伝達機構内の分子として機能し得る。標的には、細胞質、核、細胞小器官および細胞膜中の全ての分子が含まれ得る。細胞膜における分泌または配置を定められた分子は、細胞を離れる前に細胞質内で標的化され得る。
ｓｄＡｂ標的は、ヒト、動物、植物、真菌、寄生虫、原生生物、細菌、ウイルス、プリオン、原核細胞および真核細胞に存在し得る。本発明のｓｄＡｂによって標的化され得る細胞間および細胞内シグナル伝達分子ならびにタンパク質群のいくつかの例は以下である：発がん遺伝子産物、ホルモン、サイトカイン、成長因子、神経伝達物質、キナーゼ（チロシンキナーゼ、セリンキナーゼおよびスレオニンキナーゼを含む）、ホスファターゼ、ユビキチン、環状ヌクレオチド、シクラーゼ（アデニリルおよびグアニリル）、Ｇタンパク質、ホスホジエステラーゼ、ＧＴＰアーゼスーパーファミリー、免疫グロブリン（抗体、Ｆａｂフラグメント、バインダー、ｓｄＡｂ）、免疫グロブリンスーパーファミリー、イノシトールリン酸脂質、ステロイド受容体、カルモジュリン、ＣＤ群（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２８等）、転写因子、ＴＧＦ−α、ＴＮＦ−αおよびβ、ＴＮＦリガンドスーパーファミリー、ノッチ受容体シグナル伝達分子、ヘッジホッグ受容体シグナル伝達分子、Ｗｎｔ受容体シグナル伝達分子、トール様受容体シグナル伝達分子、カスパーゼ、アクチン、ミオシン、ミオスタチン、１２−リポキシゲナーゼ、１５−リポキシゲナーゼ、リポキシゲナーゼスーパーファミリー、逆転写酵素、ウイルスおよびそれらのタンパク質、アミロイドタンパク質、コラーゲン、Ｇタンパク質共役受容体、突然変異した正常タンパク質、プリオン、Ｒａｓ、Ｒａｆ、Ｍｙｃ、Ｓｒｃ、ＢＣＲ／ＡＢＬ、ＭＥＫ、Ｅｒｋ、Ｍｏｓ、Ｔｐｌ２、ＭＬＫ３、ＴＡＫ、ＤＬＫ、ＭＫＫ、ｐ３８、ＭＡＰＫ、ＭＥＫＫ、ＡＳＫ、ＳＡＰＫ、ＪＮＫ、ＢＭＫ、ＭＡＰ、ＪＡＫ、ＰＩ３Ｋ、シクロオキシゲナーゼ、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、Ｍｙｃ、ｐ５３、ＢＲＡＦ、ＮＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＨＲＡＳおよびケモカイン。
ＨＩＶは、ヒトで後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を引き起こすレトロウイルスである。ＡＩＤＳは、感染した個体の免疫系の進行性の障害をもたらし、これが生命を脅かす日和見感染症およびがんの発症をもたらす。ＨＩＶ感染後の平均生存期間は、治療なしで９〜１１年と推定される。
ＨＩＶは一本鎖、プラス鎖、エンベロープＲＮＡウイルスとして伝達される。標的細胞に侵入すると、ウイルスＲＮＡゲノムは、ウイルス粒子中のウイルスゲノムとともに輸送されるウイルスコード逆転写酵素（ＲＴ）によって二本鎖ＤＮＡに逆転写される。ＲＴはＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼであり、ＲＮアーゼＨ活性も有する。次いで、得られたウイルスＤＮＡが宿主細胞核に導入させ、ウイルスコードインテグラーゼおよび宿主補因子によって細胞ＤＮＡに組み込まれる。いったん組み込まれると、ウイルスは数ヵ月または数年間潜伏する可能性がある。あるいは、ウイルスを転写して、新しいＲＮＡゲノムおよび新しいウイルス粒子として細胞からパッケージングおよび放出されるウイルスタンパク質を産生することができる。
ＨＩＶ−１とＨＩＶ−２という２種類のＨＩＶが特徴付けられている。ＨＩＶ−１は毒性が強く、感染性が強く、世界中のＨＩＶ感染症の大部分の原因である。ＨＩＶ−２は主に西アフリカに限定されている。
ＨＩＶ−１逆転写酵素を標的化するために抗ＨＩＶ ＲＴ ｓｄＡｂを開発した。抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂは、単独で、または他のレトロウイルス剤と組み合わせてＨＩＶに感染した個体を首尾よく治療することができる。当技術分野で周知の方法を用いて、組換えＨＩＶ−１逆転写酵素タンパク質（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍａｒｔ、Ｓｈｉｒｌｅｙ、ＮＹ）（配列番号１）を使用して、ＨＩＶ−１ ＲＴのエピトープに対して向けられた、またはＨＩＶ−１ ＲＴのエピトープに結合することができるｓｄＡｂを作製した。
組換えＨＩＶ−１逆転写酵素タンパク質のラクダの免疫化に用いたタンパク質配列（配列番号１）はＰＩＳＰＩＥＴＶＰＶＫＬＫＰＧＭＤＧＰＫＶＫＱＷＰＬＴ ＥＥＫＩＫＡＬＶＥＩＣＡＥＬＥＥＥＧＫＩＳＲＩＧＰＥＮＰＹＮＴＰＶＦＡＩＫＫＫＤＳＴＫＷＲＫＬＶＤＦＲＥＬＮＫＲＴＱＤＦＷＥＶＱＬＧＩＰＨＰＡＧＬＫＫＫＫＳＶＴＶＬＤＶＧＤＡＹＦＳＩＰＬＤＥＤＦＲＫＹＴＡＦＴＩＰＳＴＮＮＥＴＰＧＴＲＹＱＹＮＶＬＰＱＧＷＫＧＳＰＡＩＦＱＳＳＭＴＫＩＬＥＰＦＲＫＱＮＰＤＩＶＩＹＱＹＶＤＤＬＹＶＧＳＤＬＥＩＧＱＨＲＴＫＶＥＥＬＲＱＨＬＷＲＷＧＦＹＴＰＤＫＫＨＱＫＥＰＰＦＬＷＭＧＹＥＬＨＰＤＫＷＴＶＱＰＩＶＬＰＥＫＤＳＷＴＶＮＤＩＱＫであった。
免疫化の結果、いくつかのｓｄＡｂが得られ、これをスクリーニングした。抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂのＤＮＡ配列を以下に列挙する：
ＨＩＶ１−１（配列番号２）：５’−ｇａｔｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇｇｔｃ ｔｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｔｔｔａｃａｇｃｔａｃａａｃａｃａａａｃｔｇｃａｔｇｇｇｔｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃａｇｔｔａｔｔｔａｔｇｃｔｇｃｔｇｇｔｇｇａｔｔａａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａｇｇａｇａａｔｇｇｃａａｇａａｔａｃｇｇｔｇｔａｃｃｔｇａｃｇａｔｇａａｃｃｇｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｇｃａａａｇｃｇａｔｇｇｔｇｔａｇｔａｇｃｔｇｇａａｔｃｇｃｇｇｔｇａｇｇａｇｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−２（配列番号３）：５’−ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇａ ｃｔｃｔｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａａａｃａｃｔｇｃｃａｇｔａｇｇｔｔｃｔｃｃａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｇｇｃｔａｔｔｔｃｔｇｃｔｇｇｔｇｇｔａｇｇｃｔｔａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃｇａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｃｔｇｔａｔｃｔｇｇａｃａｔｇａａｃａａｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｃｇｃａａｔｔａｇｔｇａｃｃｇｇａｔｇａｃｔｇｇｔａｔｔｃａｇｇｃｔｃｔｔｇｃｇｇｃｔｃｔａｃｃｃａｇａｃｔｔｃｇｃｃｃａｇａａｇａｃｔａｃｇｇｔａａｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−７（配列番号４）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａ ｇｇｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−８（配列番号５）：５’−ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−６（配列番号６）：５’−ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａａｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１＿２８（配列番号７）：５’−ａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−２１（配列番号８）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−３７（配列番号９）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−３（配列番号１０）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｔｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−５（配列番号１１）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａｇｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｃａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｔａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−１０（配列番号１２）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃａｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１＿２９（配列番号１３）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃａｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１＿３２（配列番号１４）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−９（配列番号１５）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｔｔｔａｃａｇｃｔａｃａａｃａｃａａａｃｔｇｃａｔｇｇｇｔｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃａｇｔｔａｔｔｔａｔｇｃｔｇｃｔｇｇｔｇｇａｔｔａａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａｇｇａｇａａｔｇｇｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｃｃｔｇａｃｇａｔｇａａｃｃｇｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｇｃａａａｇｃｇａｔｇｇｔｇｔａｇｔａｇｃｔｇｇａａｔｃｇｃｇｇｔｇａｇｇａｇｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｔｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−１６（配列番号１６）：５’−ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａａａｃａｃｃｔａｃａｇｔａｇｔａｇｃｔａｃｔｇｃａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇａｃｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｇｃｇｔａｔｔｔｔｃａｃｔｃｇａａｇｔｇｇｔａｃｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｔｔｃｃｃｇｔｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａａｇａｃｇｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｇｃａｇｃｃｃａｇｇｇｇｇｇｔｇｃｃｔｇｃａｔｔｔｃｇｔｔｔａｃｔｔｃｇｔｔｃｇｃｇａａｇａａｔｔｔｃｇｔｇｔａｃｃｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｔｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−１３（配列番号１７）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｔｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１＿３５（配列番号１８）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｔｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−１１（配列番号１９）：５’−ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｔｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１＿２２（配列番号２０）：５’−ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１−４（配列番号２１）：５’−ｃａｔｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１＿３８（配列番号２２）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃａａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔｇａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１＿２３（配列番号２３）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇｇａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＨＩＶ１＿２５（配列番号２４）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｃｔｃｔｔｃａａｃｔｃｔｃｃｔｇｔａａｇｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃａｃｃｔａｃａａｔａｇｔａｇａｇｔｃｇａｔａｔｃａｇａｔｃｔｇｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｔａｔｃｃａｇｇａａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｔａｃｔａｔｔａａｔａｔｔｃｇｔａａｔａｇｔｇｔｃａｃａｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃｇｃｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｔｔｇｔｃａｇａｃａｇａｔｔｃｇｃｇｇｃｇｃａｇｇｔａｃｃｔｇｃｃａｇｇｔａｃｇｇａａｔａｃｇｇｃｃｃｔｃｔｇａｃｔａｔａａｃｔａｃｔｇｇｇｇｔｇａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂのアミノ酸配列を以下に示す：
ＨＩＶ１−１（配列番号２５）：ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＶＹＳＹＮＴＮＣ ＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＶＩＹＡＡＧＧＬＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＥＮＧＫＮＴＶＹＬＴＭＮＲＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＫＲＷＣＳＳＷＮＲＧＥＥＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−２（配列番号２６）：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＤＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＮＴＡＳＲＦＳＭ ＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＡＩＳＡＧＧＲＬＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＤＭＮＮＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＩＳＤＲＭＴＧＩＱＡＬＡＡＬＰＲＬＲＰＥＤＹＧＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−９（配列番号２７）：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＶＹＳＹＮＴＮＣＭ ＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＶＩＹＡＡＧＧＬＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＥＮＧＫＮＴＶＹＬＴＭＮＲＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＫＲＷＣＳＳＷＮＲＧＥＥＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−１６（配列番号２８）：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＮＴＹＳＳＳＹ ＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＤＲＥＧＶＡＲＩＦＴＲＳＧＴＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＡＡＭＹＹＣＡＡＡＱＧＧＡＣＩＳＦＴＳＦＡＫＮＦＶＹＲＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−２７（配列番号２９）：ＥＶＱＬＧＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＶＹＳＹＴＴＮＣＭ ＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＶＩＹＳＡＧＧＬＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＧＫＮＴＶＹＬＴＭＮＲＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＫＲＷＣＳＳＷＮＲＧＥＥＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−３０（配列番号３０）：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＶＹＳＹＮＴＮ ＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＡＡＶＩＹＡＡＧＧＬＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＥＮＧＫＮＴＶＹＬＴＭＮＲＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＫＲＷＣＳＳＷＮＲＧＥＥＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−２１（配列番号３１）：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲ ＶＤＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＥＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−４（配列番号３２）：ＨＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲ ＶＤＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＥＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−６（配列番号３３）：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤ ＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−７（配列番号３４）：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤ ＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＥＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−８（配列番号３５）：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤ ＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−１１（配列番号３６）：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤ ＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＥＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−１３（配列番号３７）：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤ ＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＳＳＤＹＮＹＷＧＥＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−２３（配列番号３８）：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤ ＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＤＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＥＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−２４（配列番号３９）：ＨＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤ ＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＧＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−２５（配列番号４０）：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤ ＩＲＳＶＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＥＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−３１（配列番号４１）：ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤ ＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＥＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−３８（配列番号４２）：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤ ＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＮＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＤＹＷＧＥＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＩＶ１−３９（配列番号４３）：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＱＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤ ＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＴＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
本発明の抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂの１つまたは複数のドメインに対する１つまたは複数のマウスモノクローナル抗体を作製することができる。マウスモノクローナル抗体は、当業者に知られている方法によって作製することができ、例えば、マウスモノクローナル抗体は、マウスハイブリドーマによって作製することができる。マウスモノクローナル抗体は、診断アッセイに使用することができ、例えば、抗体を、患者由来の試料中に存在する抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂの量を測定するために、ＥＬＩＳＡまたは質量分析アッセイなどのイムノアッセイに使用することができる。
ＳｄＡｂを、組換えアラキドン酸１２−リポキシゲナーゼ（ＡＬＯＸ１２）に対しても作製した。ＡＬＯＸ１２は、血小板型１２−リポキシゲナーゼ、アラキドン酸酸素１２−酸化還元酵素、δ１２−リポキシゲナーゼ、１２δ−リポキシゲナーゼ、Ｃ−１２リポキシゲナーゼ、ロイコトリエンＡ４シンターゼおよびＬＴＡ４シンターゼとしても知られている。ＡＬＯＸ１２は、アラキドン酸代謝に関与するリポキシゲナーゼ型酵素である。ＡＬＯＸ１２は、食事誘発型および／または遺伝子誘発型糖尿病、脂肪細胞／組織機能不全および肥満の発症および合併症に関与している。ＡＬＯＸ１２はまた、血管収縮、拡張、圧力、リモデリングおよび血管新生を調節すると考えられている。ＡＬＯＸ１２の阻害は、血管形成の発達を防止し、したがってＡＬＯＸ１２は、粥状動脈硬化、脂肪性肝炎ならびに他の関節炎およびがん疾患を促進する血管新生を低減するための標的である。ＡＬＯＸ１２の量の増加は、アルツハイマー病の発症に寄与し得る。
本発明は、ＡＬＯＸ１２タンパク質に対して向けられたｓｄＡｂ、タンパク質およびポリペプチドを提供する。
本発明の抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂおよびポリペプチドを、糖尿病、脂肪細胞機能不全、肥満、粥状動脈硬化、脂肪性肝炎、関節炎およびがんなどのＡＬＯＸ１２に関連するおよび／またはＡＬＯＸ１２によって媒介される疾患および障害の予防および／または治療に使用することができることが熟慮される。
組換えヒトＡＬＯＸ１２タンパク質を使用して、ＡＬＯＸ１２のエピトープに対して向けられた、またはこれに結合することができるｓｄＡｂを作製した。抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂを作製するために、組換えヒトＡＬＯＸ１２を大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）で発現させ、標的抗原として使用した。
ラクダの免疫化に使用した組換えＡＬＯＸ１２タンパク質配列（配列番号４４）は：
ＭＧＲＹＲＩＲＶＡＴＧＡＷＬＦＳＧＳＹＮＲＶＱＬＷＬＶＧＴＲＧＥＡＥＬＥＬＱＬＲＰＡＲＧＥＥＥＥＦＤＨＤＶＡＥＤＬＧＬＬＱＦＶＲＬＲＫＨＨＷＬＶＤＤＡＷＦＣＤＲＩＴＶＱＧＰＧＡＣＡＥＶＡＦＰＣＹＲＷＶＱＧＥＤＩＬＳＬＰＥＧＴＡＲＬＰＧＤＮＡＬＤＭＦＱＫＨＲＥＫＥＬＫＤＲＱＱＩＹＣＷＡＴＷＫＥＧＬＰＬＴＩＡＡＤＲＫＤＤＬＰＰＮＭＲＦＨＥＥＫＲＬＤＦＥＷＴＬＫＡＧＡＬＥＭＡＬＫＲＶＹＴＬＬＳＳＷＮＣＬＥＤＦＤＱＩＦＷＧＱＫＳＡＬＡＥＫＶＲＱＣＷＱＤＤＥＬＦＳＹＱＦＬＮＧＡＮＰＭＬＬＲＲＳＴＳＬＰＳＲＬＶＬＰＳＧＭＥＥＬＱＡＱＬＥＫＥＬＱＮＧＳＬＦＥＡＤＦＩＬＬＤＧＩＰＡＮＶＩＲＧＥＫＱＹＬＡＡＰＬＶＭＬＫＭＥＰＮＧＫＬＱＰＭＶＩＱＩＱＰＰＮＰＳＳＰＴＰＴＬＦＬＰＳＤＰＰＬＡＷＬＬＡＫＳＷＶＲＮＳＤＦＱＬＨＥＩＱＹＨＬＬＮＴＨＬＶＡＥＶＩＡＶＡＴＭＲＣＬＰＧＬＨＰＩＦＫＦＬＩＰＨＩＲＹＴＭＥＩＮＴＲＡＲＴＱＬＩＳＤＧＧＩＦＤＫＡＶＳＴＧＧＧＧＨＶＱＬＬＲＲＡＡＡＱＬＴＹＣＳＬＣＰＰＤＤＬＡＤＲＧＬＬＧＬＰＧＡＬＹＡＨＤＡＬＲＬＷＥＩＩＡＲＹＶＥＧＩＶＨＬＦＹＱＲＤＤＩＶＫＧＤＰＥＬＱＡＷＣＲＥＩＴＥＶＧＬＣＱＡＱＤＲＧＦＰＶＳＦＱＳＱＳＱＬＣＨＦＬＴＭＣＶＦＴＣＴＡＱＨＡＡＩＮＱＧＱＬＤＷＹＡＷＶＰＮＡＰＣＴＭＲＭＰＰＰＴＴＫＥＤＶＴＭＡＴＶＭＧＳＬＰＤＶＲＱＡＣＬＱＭＡＩＳＷＨＬＳＲＲＱＰＤＭＶＰＬＧＨＨＫＥＫＹＦＳＧＰＫＰＫＡＶＬＮＱＦＲＴＤＬＥＫＬＥＫＥＩＴＡＲＮＥＱＬＤＷＰＹＥＹＬＫＰＳＣＩＥＮＳＶＴＩ
であった。
免疫化の結果、いくつかのｓｄＡｂが得られ、これをスクリーニングした。ｓｄＡｂのＤＮＡ配列を以下に列挙する：
ＡＬＯＸ＿２１（配列番号４５）：５’−ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｔｔｃｇｇｔｇｃａｇｇ ｃｔｇｇａｇｇｇｔｃｔｃｔｇａｇｇａｔｃｔｃｃｔｇｔａｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｃａｃｔｔｔｔｇａｔｇａｃａｃｔｇａｃａｔｇｇｇｃｔｇｇｔａｃｃｇｃｃａｇａｃｔｃｔａｇｇａａａｔｇｇｇｔｇｃｇａｇｔｔｇｇｔｔｔｃｔｃａｇａｔｔａｇｔａａｔｇａｔｇｇｔａｇｔａｃａｔｔｃｔａｔａｇａｇａｔｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｔｇｇｇａｃｃｇｃｇｔｃａａｃａａｃａｃｇｇｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａｇｃｇｃｃｃｔｇａｇａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｃａｔｇｔａｔｔａｃｔｇｃａａｔａｔｃａａｃｇｇｇｔｇｔａｇｇａｇａｃｃｃｔｃｇｔａｃａａｔｃｔｔｃａｃｔｔｇａａｃｇｃａｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃａｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＡＬＯＸ＿４１（配列番号４６）：５’−ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇ ｃｔｇｇａｇｇｇｔｃｔｃｔｇａｃａｃｔｇｔｃｃｔｇｔｇｔａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔａｃｇｇｃｔａｃａｇｔｇｃｃａｃｇｔｇｃａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｃｇｔｃｔａｔｔｔｃａｃｃｔｔａｔｇｇｔｇｔｔａｇａａｃｃｔｔｃｔａｔｇｃｃｇａｃｔｃｃｇｃｇａａａｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｃｇａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｃｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｇｇａｃａｃｇｔｃｃｇｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｃｇｇｃｃｇｇｔｔｃｇｇｇｃｇｔｔｇｇｔｇｔｔｔｇｔｔｃａｃｔｔｔｃｇｔａｔｃｃａｔａｃａｃｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＡＬＯＸ＿４３（配列番号４７）：５’−ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｃｇｇｔｇｃｇｇ ｇｃｔｇｇａｇａｇｔｃｔｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｔａｇｃｃｔｃｔａｇａｔｃｃａｔｃｔａｔｇｔｔｔｇｇｔａｃｔｇｃａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｇｃａｇｇｇａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｇｇｇｔｃｇｇａａｇｔａｔｇｔｔｃｇｔｔｇｇｔｇｇｃｇｇｔａｇｇａｃａｔａｔｔａｔｇａｃｇａｃｔｃｃｇｔｃａａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｇｇｃｃａａｇａａｃａｃｇｃｔｇｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇｇａｃａａｃｃｔｇｇｃａｃｃｔｇａａｇａｃａｃｔｇｃｃａｔｇｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇｇｃｔｇｇｇｃｇｃｔｇｃｇｇｔｇｇｃａａｃｔｇｇｃｔｇａｇａａｇｃａａｔｇｃｔｔｔｃｇａｃａａａｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃａｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
ＡＬＯＸ＿４６（配列番号４８）：５’−ｇａｔｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｃｇｇｔｇｃａｇｇ ｃｔｇｇａｇｇｇｔｃｔｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃａｃｔｇｇａａａｃａｃｃｔａｃａｔｔａｇｃｃｇｃｔｇｃａｔｇｇｇｃｔｇｇｔｔｃｃｇｃｃａｇｃｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇａｇｃｇｃｇａｇｇｔｇｇｔｃｇｃａｃｇｔａｔｔｔａｔａｃｃｇａｃｔｃｔｇｇｔａａｔａｃａｔａｃｔａｔｃｃｃｇａｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｇｇｃｃｇａｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃａａｇａｃａａｃｇｃｃａａｇａａｃａｃｇａｔａｔａｔｃｔｇｃａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇａａａｃｃｔｇａｃｇａｃａｃｃｇｃｃｇｔｇｔａｃｔａｃｔｇｔｇｔｇｃｔｃｔｃａｇａｇｇｃｃｇｔｃｔｇｔａｃａａａａｇａａｃｃｔｇｇｇｇａｃｔｔｔｃｇｔｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｇａｃｃｃａｇｇｔｃａｃｔｇｔｃｔｃｃｔｃａ−３’
作製した抗ＡＬＯＸ ｓｄＡｂのタンパク質配列は以下の通りである：
ＡＬＯＸ＿２１（配列番号４９）：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＩＳＣＴＡＳ ＧＦＴＦＤＤＴＤＭＧＷＹＲＱＴＬＧＮＧＣＥＬＶＳＱＩＳＮＤＧＳＴＦＹＲＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＷＤＲＶＮＮＴＶＹＬＱＭＳＡＬＲＰＥＤＴＡＭＹＹＣＮＩＮＧＣＲＲＰＳＹＮＬＨＬＮＡＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＡＬＯＸ＿４１（配列番号５０）：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＴＬＳＣＶＡＳ ＧＹＧＹＳＡＴＣＭＧＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＳＩＳＰＹＧＶＲＴＦＹＡＤＳＡＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＳＶＹＹＣＡＡＧＳＧＶＧＶＣＳＬＳＹＰＹＴＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
ＡＬＯＸ＿４３（配列番号５１）：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＲＡＧＥＳＬＲＬＳＣＶＡＳ ＲＳＩＹＶＷＹＣＭＧＷＦＲＱＡＡＧＫＥＲＥＧＶＧＳＭＦＶＧＧＧＲＴＹＹＤＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＫＡＫＮＴＬＹＬＱＭＤＮＬＡＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＡＧＲＣＧＧＮＷＬＲＳＮＡＦＤＫＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＡＬＯＸ＿４６（配列番号５２）：ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＴ ＧＮＴＹＩＳＲＣＭＧＷＦＲＱＰＰＧＫＥＲＥＶＶＡＲＩＹＴＤＳＧＮＴＹＹＰＤＡＶＥＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＩＹＬＱＭＮＳＬＫＰＤＤＴＡＶＹＹＣＶＬＳＥＡＶＣＴＫＥＰＧＤＦＲＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ
本発明の抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂの１つまたは複数のドメインに対する１つまたは複数のマウスモノクローナル抗体を作製することができる。マウスモノクローナル抗体は、当業者に知られている方法によって作製することができ、例えば、マウスモノクローナル抗体は、マウスハイブリドーマによって作製することができる。マウスモノクローナル抗体は、診断アッセイに使用することができ、例えば、抗体を、患者由来の試料中に存在する抗ＡＬＯＸ１２ ｓｄＡｂの量を測定するために、ＥＬＩＳＡまたは質量分析アッセイなどのイムノアッセイに使用することができる。
エボラウイルス疾患（ＥＶＤ）およびエボラ出血熱（ＥＨＦ）としても知られているエボラは、エボラウイルスによって引き起こされるヒトおよび他の霊長類のウイルス性出血熱である。この疾患は死亡リスクが高く、感染した人の２５〜９０％が、典型的には症状が現れてから６〜１６日で死亡する。
エボラは、感染した個体の先天免疫系の適切な機能を妨害する。エボラタンパク質は、インターフェロン−α、インターフェロン−βおよびインターフェロンγなどのインターフェロンタンパク質を産生してこれに応答する細胞の能力を妨害することによって、ウイルス感染症に対する免疫系の応答を弱める。エボラの構造タンパク質、ＶＰ２４およびＶＰ３５が、この妨害において重要な役割を果たす。Ｖ２４タンパク質は、宿主細胞の抗ウイルスタンパク質の産生を遮断する。宿主の免疫応答を阻害することにより、エボラは身体全体に急速に広がる。
本明細書に記載されるように、抗ＶＰ２４ ｓｄＡｂをエボラのＶＰ２４タンパク質を標的化するために開発した。抗ＶＰ２４ ｓｄＡｂは、単独で、または他のレトロウイルス剤と組み合わせてエボラに感染した個体を首尾よく治療することができる。当技術分野で周知の方法を用いて、組換えＶＰ２４タンパク質（配列番号５３）を使用して、ＶＰ２４のエピトープに対して向けられた、またはＶＰ２４のエピトープに結合することができるｓｄＡｂを作製した。
ラクダの免疫化に使用したタンパク質配列組換えＶＰ２４タンパク質（配列番号５３）は、
ＡＫＡＴＧＲＹＮＬＩＳＰＫＫＤＬＥＫＧＶＶＬＳＤＬＣＮＦＬＶＳＱＴＩＱＧＷＫＶＹＷＡＧＩＥＦＤＶＴＨＫＧＭＡＬＬＨＲＬＫＴＮＤＦＡＰＡＷＳＭＴＲＮＬＦＰＨＬＦＱＮＰＮＳＴＩＥＳＰＬＷＡＬＲＶＩＬＡＡＧＩＱＤＱＬＩＤＱＳＬＩＥＰＬＡＧＡＬＧＬＩＳＤＷＬＬＴＴＮＴＮＨＦＮＭＲＴＱＲＶＫＥＱＬＳＬＫＭＬＳＬＩＲＳＮＩＬＫＦＩＮＫＬＤＡＬＨＶＶＮＹＮＧＬＬＳＳＩＥＩ ＩＬＥＦＮＳＳＬＡＩ
であった。
免疫化の結果として、１つの抗ＶＰ２４ ｓｄＡｂ、ＶＰ２４＿５が得られ、これをＶＰ２４との結合についてスクリーニングした。ＶＰ２４＿５のＤＮＡ配列（配列番号５４）は：
５’−ＡＴＧＧＧＴＧＡＴ ＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴ ＧＧＧＧＧＡＧＡＣ ＴＣＧＧＴＧＣＧＧ ＧＣＴＧＧＡＧＧＧ ＴＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡＴ ＧＴＧＣＡＧＣＴＧ ＧＴＧＧＡＧＴＣＴ ＧＧＧＧＧＡＧＡＣ ＴＣＧＧＴＧＣＧＧＧＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＴＴＣＡＡ ＣＴＣＴＣＣＴＧＴ ＡＡＡＧＣＣＴＣＴ ＧＧＡＴＡＣＡＣＣ ＴＡＣＡＡＴＡＧＴＡＧＡＧＴＣＧＡＴＡＴＣＡＧＡＴＣＴ ＡＴＧＧＧＣＴＧＧ ＴＴＣＣＧＣＣＡＧ ＴＡＴＣＣＡＧＧＡ ＡＡＧＧＡＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＧＴＣＧＣＴＡＣＴＡＴＴ ＡＡＴＡＴＴＣＧＴ ＡＡＴＡＧＴＧＴＣ ＡＣＡＴＡＣＴＡＴ ＧＣＣＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣ ＡＴＣＴＣＣＣＡＡ ＧＡＣＡＡＣＧＣＣ ＡＡＧＡＡＣＡＣＧ ＧＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＧＣＣＣＴＧＡＡＡ ＣＣＴＧＡＧＧＡＣ ＡＣＴＧＣＣＡＴＧ ＴＡＣＴＡＣＴＧＴ ＧＣＧＴＴＧＴＣＡＧＡＣＡＧＡＴＴＣＧＣＧＧＣＧＣＡＧ ＧＴＡＣＣＴＧＣＣ ＡＧＧＴＡＣＧＧＡ ＡＴＡＣＧＧＣＣＣ ＴＣＴＧＡＣＴＡＴ ＡＡＣＴＡＣＴＧＧ ＧＧＴＧＡＧＧＧＧ ＡＣＣＣＴＧＧＴＣ ＡＣＣＧＴＣＴＣＣ ＴＣＡＡＧＣＴＣＴ ＧＧＴＣＴＣＧＡＧ−３’
である。
ＶＰ２４＿５ ｓｄＡｂのアミノ酸配列（配列番号５５）を以下に示し、ＣＤＲに下線を付した：
ＭＧＤＶＱＬＶＥＳＧＧＤＳＶＲＡＧＧＳＬＱＬＳＣＫＡＳＧＹＴＹＮＳＲＶＤＩＲＳＭＧＷＦＲＱＹＰＧＫＥＲＥＧＶＡＴＩＮＩＲＮＳＶＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＱＤＮＡＫＮＴＶＹＬＱＭＮＡＬＫＰＥＤＴＡＭＹＹＣＡＬＳＤＲＦＡＡＱＶＰＡＲＹＧＩＲＰＳＤＹＮＹＷＧＥＧＴＬＶＴＶＳＳＳＳＧＬＥ
本発明の抗ＶＰ２４ ｓｄＡｂの１つまたは複数のドメインに対する１つまたは複数のマウスモノクローナル抗体を作製することができる。マウスモノクローナル抗体は、当業者に知られている方法によって作製することができ、例えば、マウスモノクローナル抗体は、マウスハイブリドーマによって作製することができる。マウスモノクローナル抗体は、診断アッセイに使用することができ、例えば、抗体を、患者由来の試料中に存在する抗ＶＰ２４ ｓｄＡｂの量を測定するために、ＥＬＩＳＡまたは質量分析アッセイなどのイムノアッセイに使用することができる。
実施例１：ＳＤＡＢの作製
ＡＬＯＸ１２（配列番号４４）、ＶＰ２４（配列番号５３）およびＨＩＶ−１逆転写酵素（配列番号１）を含むいくつかのタンパク質で免疫したラクダからＳｄＡｂを作製した。
標準的な技術を用いて、ｐＣＤｉｓｐｌａｙ−３Ｍベクター（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｇｅｎｅ、Ｓｈｉｒｌｅｙ、ＮＹ）およびＭ１３Ｋ０７ヘルパーファージ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）を用いてファージディスプレイライブラリーを構築した。ｓｄＡｂの単一クローンをＥＬＩＳＡによって確認し、標準的な方法を用いてＤＮＡおよびタンパク質配列を決定した。
実施例２：ＨＩＶ１−９（配列番号２７）ＳＤＡＢは、ＨＩＶ−１逆転写酵素およびＥＢＯＬＡ ＶＰ−２４に結合する
Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ、ＣＴ）上２５℃でタンパク質結合実験を行った。アッセイ緩衝液は、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ２０を含んでいた。再生緩衝液は１０ｍＭグリシンＨＣｌ ｐＨ１．７５を含んでおり、固定化緩衝液は１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０を含んでいた。リガンドを捕捉するために使用した流量は５ｕｌ／分であった。動態解析に使用した流量は３０ｕｌ／分であった。
タンパク質結合実験に使用したリガンドはＨＩＶ１−９（配列番号２７）およびＳＴＡＴ３−ＶＨＨ１４（配列番号５６）であった。ＣＭ５センサーチップのそれぞれフローセル２および４に１２００および５５０の応答単位（ＲＵ）でアミンカップリング（ＥＤＣ／ＮＨＳ）によってリガンドを直接固定化した。フローセル１をブランクで保ち、バックグラウンド除去に使用した。ＣＭ５チップ上の占有されていない部位を１Ｍエタノールアミンでブロックした。結合分析のために、分析物ｒＨＩＶ−１（配列番号１）をセンサーチップ上に流した。分析物とリガンドの結合をリアルタイムで監視した。表１に示されるように、観察された解離速度（ｋｄ）の結合速度（ｋａ）から親和定数（ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ）を計算した。
タンパク質結合実験の陰性対照は抗ＳＴＡＴ３ ｓｄＡｂであった、ＶＨＨ１４（配列番号５６）：ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＳＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＴＹＴＧＣＭＧＷＦＲＱ ＡＰＧＫＥＲＥＧＶＡＡＬＳＳＲＧＦＡＧＨＹＴＤＳＶＫＧＲＦＳＩＳＲＤＹＶＫＮＡＶＹＬＱＭＮＴＶＫＰＥＤＡＡＭＹＹＣＡＡＲＥＧＷＥＣＧＥＴＷＬＤＲＴＡＧＧＨＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
実際のセンサーグラムとＢＩＡｎａｌｙｓｉｓソフトウェアから作成されたセンサーグラムとの間でカイ二乗（χ２）分析を行い、分析の精度を決定した。１〜２以内のχ２値は正確であると考えられ、１未満は非常に正確である。
Figure 0006918005
最高分析物濃度の２倍系列希釈の表２に示される分析物濃度で完全な速度論的分析を行った。ＨＩＶ１−９抗ＲＴ ｓｄＡｂは、ＨＩＶ−１とエボラＶＰ２４分析物の両方に結合した。
Figure 0006918005
実施例３：ＨＩＶ１−９（配列番号２７）ＳＤＡＢはＥＬＩＳＡでＨＩＶ−１逆転写酵素に結合する
ＨＩＶ１−９抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂ（配列番号２７）の２つの異なる試料を、ＥＬＩＳＡにおいて、コーティング抗原、二次抗体およびＨＲＰ濃度のチェッカーボードに対して１μｇ／ｍＬで評価した。コーティング抗原は、１ウェル当たり０．５、０．０２５および０．１２５μｇ／ｍＬの組換えＨＩＶ−１ ＲＴ（Ｃｒｅａｔｉｖｅ ＢｉｏＭａｒｔ）（配列番号１）であった。二次抗体は１：５０００および１：１００００で希釈したビオチン化ウサギ抗ラマで、ＨＲＰは１：２５０００および１：５００００で希釈した。シグナル対ノイズ比＞２０が濃度のいくつかで見られた。ＥＬＩＳＡの結果を図１および図２に示す。
ＨＩＶ１−９抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂ（配列番号２７）の希釈系列（１μｇ／ｍＬ〜０．０００１μｇ／ｍＬ）を評価するために、３つの組み合わせを選択した。
Figure 0006918005
結果を図３および図４に示す。使用した２つのＨＩＶ１−９抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂ（配列番号２７）調製物は、非常に類似の結果を有する。０．５μｇ／ｍＬコーティング、２°抗体の１：５０００希釈およびＨＲＰの１：５００００希釈を用いた結果は、最高の信号対雑音比とわずかに低いブランク値で、ＨＩＶ１−ＲＴ（配列番号１）に対するＨＩＶ１−９抗ＨＩＶ−１ ＲＴ ｓｄＡｂ（配列番号２７）の結合を示した。
実施例４：ＶＰ２４−５（配列番号５５）ＳＤＡＢはＶＰ２４に結合する
タンパク質結合実験を実施例２に記載されるように行った。タンパク質結合に使用したリガンドはＶＰ２４−５（配列番号５５）およびＳＴＡＴ３−ＶＨＨ１４（配列番号５６）であった。ＣＭ５センサーチップのそれぞれフローセル２および４に４２７および５５０の応答単位（ＲＵ）でアミンカップリング（ＥＤＣ／ＮＨＳ）によってリガンドを直接固定化した。フローセル１をブランクで保ち、バックグラウンド除去に使用した。ＣＭ５チップ上の占有されていない部位を１Ｍエタノールアミンでブロックした。結合分析のために、分析物ＶＰ２４（配列番号５３）をセンサーチップ上に流し、リアルタイムで監視した。表３に示されるように、観察された解離速度（ｋｄ）の結合速度（ｋａ）から親和定数（ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ）を計算した。
Figure 0006918005
表４に示されるように、最高分析物濃度の２倍系列希釈の異なる分析物濃度で完全な速度論的分析を行った。
Figure 0006918005
実施例５：ＶＰ２４−５（配列番号５５）ＳＤＡＢはＥＬＩＳＡにおいてエボラＶＰ２４標的に結合する
ＶＰ２４−５抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ（配列番号５５）の２つの異なる試料を、ＥＬＩＳＡにおいて、コーティング抗原、二次抗体およびＨＲＰ濃度のチェッカーボードに対して１μｇ／ｍＬで評価した。コーティング抗原は、１ウェル当たり０．５、０．０２５および０．１２５μｇ／ｍＬの組換えエボラＶＰ２４（Ｃｒｅａｔｉｖｅ ＢｉｏＭａｒｔ）（配列番号５３）であった。二次抗体は１：５０００および１：１００００で希釈したビオチン化ウサギ抗ラマであった。ＨＲＰを１：１００００および１：２５０００の希釈で使用した。ＥＬＩＳＡの結果を図５および図６に示す。シグナル対ノイズ比は低く、分析を高濃度で繰り返した。
１および０．５μｇ／ｍＬのＶＰ２４−５抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ（配列番号５５）を用いてＥＬＩＳＡを繰り返した。組換えＶＰ２４（配列番号５３）を１ウェル当たり０．５または１μｇ／ｍＬのいずれかで使用した。二次抗体は１：１０００、１：４０００、１：１００００および１：１００００で希釈したビオチン化ウサギ抗ラマであった。ＨＲＰを１：２５０００および１：５００００の希釈で使用した。ＥＬＩＳＡの結果を図７および８に示す。
ＶＰ２４−５抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ（配列番号５５）の希釈系列（１μｇ／ｍＬ〜０．０００１μｇ／ｍＬ）を評価するために、３つの組み合わせを選択した。
Figure 0006918005
結果を図９および図１０に示す。使用した２つのＶＰ２４−５抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ（配列番号５５）調製物は非常に類似の結果を有し、ＶＰ２４−５抗エボラＶＰ２４ ｓｄＡｂ（配列番号５５）と組換えＶＰ２４（配列番号５３）の結合を示す。
本発明を、一定の好ましい実施形態を参照してかなり詳細に記載してきたが、他の実施形態も可能である。例えば、本方法について開示されるステップは、限定することを意図するものでもなく、各ステップが本方法にとって必ずしも必須であることを示すことを意図するものではなく、単なる例示的なステップにすぎない。そのため、添付の特許請求の範囲の範囲は、本開示に含まれる好ましい実施形態の説明に限定されるべきではない。本明細書に引用される全ての参考文献は、全体が参照により組み込まれる。
配列表２〜４３ ＜２２３＞ラクダ科動物
配列表４５〜５２ ＜２２３＞ラクダ科動物
配列表５４〜５６ ＜２２３＞ラクダ科動物

Claims (8)

  1. 配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
  2. 請求項１のポリペプチドを含む抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂ。
  3. 請求項２に記載の抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂを含む医薬組成物。
  4. 哺乳動物に投与される、請求項３に記載の医薬組成物。
  5. 前記哺乳動物がヒトである、請求項４に記載の医薬組成物。
  6. １種または複数の化合物と組み合わせて投与される、請求項３に記載の医薬組成物。
  7. 前記１種または複数の化合物がプロテアーゼ阻害剤である、請求項６に記載の医薬組成物。
  8. 有効量の前記抗ＨＩＶ−１逆転写酵素ｓｄＡｂを、それを必要とする対象に投与することが、静脈内投与、筋肉内投与、経口投与、直腸投与、経腸投与、非経口投与、眼内投与、皮下投与、経皮投与、点眼剤として投与、鼻スプレーとして投与、吸入または噴霧によって投与、局所投与および埋め込み可能な薬物として投与を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
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