JP6903188B2 - Bcmaに対するモノクローナル抗体 - Google Patents
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Description
抗体の形態と、二重特異性及び多特異性抗体の形態は、ペプボディ(WO200244215)、新規抗原レセプター(「NAR」)(WO2003014161)、ダイアボディ−ダイアボディ二量体「TandAb」(WO2003048209)、ポリアルキレンオキサイド改変scFv(US7150872)、ヒト化ウサギ抗体(WO2005016950)、合成免疫グロブリンドメイン(WO2006072620)、共有結合型ダイアボディ(WO2006113665)、フレキシボディ(WO2003025018)、ドメイン抗体dAb(WO2004058822)、ワクチボディ(WO2004076489)、新世界霊長類フレームワークを有する抗体(WO2007019620)、切断リンカーを有する抗体−薬物コンジュゲート体(WO2009117531)、ヒンジ領域が除去されたIgG4抗体(WO2010063785)、IgG4様CH3ドメインを有する二重特異性抗体(WO2008119353)、ラクダ抗体(US6838254)、ナノボディ(US7655759)、CATダイアボディ(US5837242)、標的抗原及びCD3に対する二重特異性(scFv)2(US7235641)、)、sIgA pl抗体(US6303341)、ミニボディ(US5837821)、IgNAR(US2009148438)、改変ヒンジ領域及びFc領域を有する抗体(US2008227958、US20080181890)、三機能性抗体(US5273743)、トリオマブ(US6551592)、トロイボディ(US6294654)でもある。
WO2014122143には、抗ヒトBCMA抗体であって、ELISAアッセイで405nmにおけるODとして測定した場合に、前記抗体の結合が、100ng/mlのAPRILによって、APRILの非存在下における前記抗体のヒトBCMAへの結合と比べて20%超低下しないことと、前記抗体が、APRIL単独の場合と比べて、APRIL依存的なNF−κBの活性化を20%超変化させないこと、APRILの非存在下において、前記抗体が、前記抗体の非存在下と比べて、NF−κBの活性化を20%超変化させないことを特徴とする抗体が開示されている。WO2014122144には、ヒトCD3εとヒトBCMAという2つの標的に特異的に結合する二重特異性抗体であって、WO2014122143の抗ヒトBCMA抗体を含む抗体が開示されている。特に、二重特異性T細胞結合剤としての治療上の用途に関して、独自の特性を持つ抗ヒトBCMA抗体は、CDR領域として、配列番号15のCDR1H、配列番号16のCDR2H、配列番号17のCDR3H、配列番号18のCDR1L、配列番号19のCDR3L及び配列番号20のCDR3Lを含むことによって特徴付けられる抗体83A10であり、WO2014122143及びWO2014122144にも開示されている。
b)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域、
c)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域、
d)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、
e)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、ならびに
f)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域の群から選択した、CDR1H領域、CDR2H領域、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むことを特徴とする抗体を含む。
a)配列番号23のCDR1L領域及び配列番号24のCDR2L領域、
b)配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域または
c)配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域
の群から選択した、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせを含むVL領域とを含むことを特徴とする抗体を含む。
a)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域、
b)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域、または
c)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域
の群から選択した、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むことを特徴とする抗体を含む。
b)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域、
c)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域、
d)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、
e)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、ならびに
f)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域
の群から選択した、CDR1H領域、CDR2H領域、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むことを特徴とする抗体に関する。
a)配列番号23のCDR1L領域及び配列番号24のCDR2L領域、
b)配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域または
c)配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域
の群から選択した、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせを含むVL領域(さらには「BCMA VL」ともいう)とを含むことを特徴とする抗体に関する。
a)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域、
b)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域、または
c)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域
の群から選択した、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むことを特徴とする抗体に関する。
a)抗体の軽鎖と重鎖が、前記標的のCD3及びBCMAの1つに特異的に結合し、
b)抗体の軽鎖と重鎖が、前記標的のもう一方に特異的に結合し、可変ドメインのVLとVHまたは定常ドメインのCLとCH1が互いに入れ替わっている。
Fab BCMA−Fc−Fab CD3(二重特異性形態、図1Aまたは1B)、
Fab BCMA−Fc−Fab CD3−Fab BCMA(二重特異性形態、図2Aまたは2B)、
Fab BCMA−Fc−Fab BCMA−Fab CD3(二重特異性形態、図2Cまたは2D)、
Fc−Fab CD3−Fab BCMA(二重特異性形態、図3Aまたは3B)、
Fc−Fab BCMA−Fab CD3(二重特異性形態、図3Cまたは3D)。
a)BCMAに特異的に結合する第1の抗体の第1の軽鎖及び第1の重鎖と、
b)CD3に特異的に結合する第2の抗体の第2の軽鎖及び第2の重鎖であって、第2の抗体の第2の軽鎖の可変ドメインVLと第2の重鎖の可変ドメインVHが、互いに入れ替わっている第2の軽鎖及び第2の重鎖とを含むことを特徴とし、
c)a)の第1の軽鎖の定常ドメインのCLにおいて、124位のアミノ酸が独立して、リシン(K)、アルギニン(R)またはヒスチジン(H)で置換されており(Kabatによる番号付け)、a)の第1の重鎖の定常ドメインのCH1において、147位のアミノ酸と、213位のアミノ酸が独立して、グルタミン酸(E)またはアスパラギン酸(D)で置換されている(Kabatによる番号付け)抗体に関するものである(例えば、図1A、2A、2C、3A、3Cを参照されたい)。
a)BCMAに特異的に結合する第1の抗体の第1の軽鎖及び第1の重鎖と、
b)CD3に特異的に結合する第2の抗体の第2の軽鎖及び第2の重鎖であって、第2の抗体の前記第2の軽鎖の可変ドメインVLと第2の重鎖の可変ドメインVHが、互いに入れ替わっている前記第2の軽鎖及び第2の重鎖とを含むことを特徴とし、
c)b)の前記第2の軽鎖の定常ドメインCLにおいて、124位のアミノ酸が独立して、リシン(K)、アルギニン(R)またはヒスチジン(H)で置換されており(Kabatによる番号付け)、b)の前記第2の重鎖の定常ドメインCH1において、147位のアミノ酸と、213位のアミノ酸が独立して、グルタミン酸(E)またはアスパラギン酸(D)で置換されている(Kabatによる番号付け)前記抗体に関する。
i)配列番号48、配列番号49、配列番号50及び配列番号51(2×)(抗体21のセット1TCB)と、
ii)配列番号48、配列番号52、配列番号53及び配列番号54(2×)(抗体22のセット2TCB)と、
iii)配列番号48、配列番号55、配列番号56及び配列番号57(2×)(抗体42のセット3TCB)と、
のポリペプチドからなる群から選択した、重鎖と軽鎖のセットを含むことを特徴とする抗体に関するものである。
a)その二重特異性抗体において、一方の重鎖のCH3ドメインの元来の界面であって、他方の重鎖のCH3ドメインの元来の界面と交わる界面において、アミノ酸残基が、側鎖体積のより大きいアミノ酸残基で置換されていることによって、一方の重鎖のCH3ドメインの界面内に突起が作られ、その突起が、他方の重鎖のCH3ドメインの界面内の空隙に配置可能になるように、一方の重鎖のCH3ドメインが変更されていることと、b)二重特異性抗体において、第2のCH3ドメインの元来の界面であって、第1のCH3ドメインの元来の界面と交わる界面において、アミノ酸残基が、側鎖体積のより小さいアミノ酸残基で置換されていることによって、第2のCH3ドメインの界面内に空隙が作られ、その空隙の中に、第1のCH3ドメインの界面内の突起が配置可能になるように、他方の重鎖のCH3ドメインが変更されていることと、
を特徴とする。
a)宿主細胞を
b)本発明による抗体の軽鎖と重鎖をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換するステップと、
c)前記抗体分子の合成を可能にする条件で、宿主細胞を培養するステップと、
d)前記抗体分子を前記培養物から回収するステップと、
を含む方法である。
e)宿主細胞を
f)第1の標的に特異的に結合する抗体の軽鎖と重鎖をコードする核酸分子を含むベクターと、
g)第2の標的に特異的に結合する抗体であって、可変ドメインのVLとVHまたは定常ドメインのCLとCH1が互いに入れ替わっている抗体の軽鎖と重鎖をコードする核酸分子を含むベクター
で形質転換するステップと、
h)前記抗体分子の合成を可能にする条件で、宿主細胞を培養するステップと、
i)前記抗体分子を前記培養物から回収するステップと、
を含む方法である。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される:
(項目1)
ヒトB細胞成熟抗原(BCMA)に特異的に結合するモノクローナル抗体であって、配列番号17のCDR3H領域と、配列番号20のCDR3L領域と、
a)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号23のCDR1L領域及び配列番号24のCDR2L領域、
b)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域、
c)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域、
d)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、
e)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、ならびに
f)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、
の群から選択した、CDR1H領域、CDR2H領域、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むことを特徴とする前記抗体。
(項目2)
BCMAに特異的に結合するモノクローナル抗体であって、配列番号21のCDR1H領域と、配列番号22のCDR2H領域と、配列番号17のCDR3H領域とを含むVH領域と、配列番号20のCDR3L領域と、
a)配列番号23のCDR1L領域及び配列番号24のCDR2L領域、
b)配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域または
c)配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域
の群から選択した、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせを含むVL領域とを含むことを特徴とする前記抗体。
(項目3)
VH領域として、配列番号10のVH領域を含み、VL領域として、配列番号12、13及び14のVL領域からなる群から選択したVL領域を含むを含むことを特徴とする、項目1または2に記載の抗体。
(項目4)
BCMAとヒトCD3ε(さらには「CD3」ともいう)に特異的に結合する二重特異性抗体であって、配列番号17のCDR3H領域と、配列番号20のCDR3L領域と、a)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号23のCDR1L領域及び配列番号24のCDR2L領域、
b)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域、
c)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域、
d)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、
e)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、ならびに
f)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、
の群から選択した、CDR1H領域、CDR2H領域、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むことを特徴とする前記抗体。
(項目5)
ヒトBCMA(さらには「BCMA」ともいう)とヒトCD3ε(さらには「CD3」ともいう)という細胞外ドメインである2つの標的に特異的に結合する二重特異性抗体であって、配列番号21のCDR1H領域、配列番号22のCDR2H領域及び配列番号17のCDR3H領域を含むVH領域と、配列番号20のCDR3L領域、ならびに
a)配列番号23のCDR1L領域及び配列番号24のCDR2L領域、
b)配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域または
c)配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域
の群から選択した、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせを含むVL領域とを含むことを特徴とする前記抗体。
(項目6)
BCMA VH領域として、配列番号10のVH領域を含み、VL領域として、配列番号12のVL領域を含むか、BCMA VHとして、配列番号10のVH領域を含み、VL領域として、配列番号13のVL領域を含むか、またはBCMA VHとして、配列番号10のVH領域を含み、VL領域として、配列番号14のVL領域を含むことを特徴とする、項目5に記載の二重特異性抗体。
(項目7)
CD3に特異的に結合する抗体の軽鎖と重鎖を含むことを特徴とし、その可変ドメインのVLとVHまたは定常ドメインのCLとCH1が、互いに入れ替わっている、項目4〜6のいずれか1項に記載の二重特異性抗体。
(項目8)
前記抗CD3抗体部分の可変ドメインVH(さらには「CD3 VH」という)が、重鎖CDR1として、配列番号1の重鎖CDRを含み、重鎖CDR2として、配列番号2の重鎖CDRを含み、重鎖CDR3として、配列番号3の重鎖CDRを含み、前記抗CD3抗体部分の可変ドメインVL(さらには「CD3 VL」という)が、軽鎖CDR1として、配列番号4の軽鎖CDRを含み、軽鎖CDR2として、配列番号5の軽鎖CDRを含み、軽鎖CDR3として、配列番号6の軽鎖CDRを含むことを特徴とする、項目4〜7のいずれか1項に記載の二重特異性抗体。
(項目9)
BCMAとCD3に特異的に結合する二重特異性抗体であって、
a)項目1〜3のいずれか1項に記載の第1の抗体の第1の軽鎖及び第1の重鎖と、
b)CD3に特異的に結合する第2の抗体の第2の軽鎖及び第2の重鎖であって、前記第2の抗体の第2の軽鎖の可変ドメインVLと第2の重鎖の可変ドメインVHが、互いに入れ替わっている前記第2の軽鎖及び第2の重鎖とを含むことを特徴とし、
c)a)の前記第1の軽鎖の定常ドメインCLにおいて、124位のアミノ酸が独立して、リシン(K)、アルギニン(R)またはヒスチジン(H)で置換されており(Kabatによる番号付け)、a)の前記第1の重鎖の定常ドメインCH1において、147位のアミノ酸と、213位のアミノ酸が独立して、グルタミン酸(E)またはアスパラギン酸(D)で置換されていることを特徴とする前記抗体。
(項目10)
さらに、前記第1の抗体のFab断片(さらには「BCMA−Fab」ともいう)を含み、前記BCMA−Fabの定常ドメインCLにおいて、124位のアミノ酸が独立して、リシン(K)、アルギニン(R)またはヒスチジン(H)で置換されており(Kabatによる番号付け)、前記BCMA−Fabの定常ドメインCH1において、147位のアミノ酸と、213位のアミノ酸が独立して、グルタミン酸(E)またはアスパラギン酸(D)で置換されている(Kabatによる番号付け)ことを特徴とする(例えば、図2A、2Cを参照されたい)、項目9に具体的に記載の二重特異性抗体。
(項目11)
BCMAとCD3に特異的に結合する二重特異性抗体であって、
a)項目1〜3のいずれか1項に記載の第1の抗体の第1の軽鎖及び第1の重鎖と、
b)CD3に特異的に結合する第2の抗体の第2の軽鎖及び第2の重鎖であって、第2の抗体の前記第2の軽鎖の可変ドメインVLと第2の重鎖の可変ドメインVHが、互いに入れ替わっている前記第2の軽鎖及び第2の重鎖とを含むことを特徴とし、
c)b)の前記第2の軽鎖の定常ドメインCLにおいて、124位のアミノ酸が独立して、リシン(K)、アルギニン(R)またはヒスチジン(H)で置換されており(Kabatによる番号付け)、b)の前記第2の重鎖の定常ドメインCH1において、147位のアミノ酸と、213位のアミノ酸が独立して、グルタミン酸(E)またはアスパラギン酸(D)で置換されている(Kabatによる番号付け)前記抗体。
(項目12)
抗CD3抗体部分のFab断片を1個以下と、抗BCMA抗体部分のFab断片を2個以下と、Fc部分を1個以下含むことを特徴とする、項目4〜11のいずれか1項に記載の二重特異性抗体。
(項目13)
前記CD3抗体Fab断片のC末端と、前記BCMA抗体Fab断片の1つのC末端とに、そのN末端が連結しているFc部分を含むことを特徴とする、項目4〜12のいずれか1項に記載の二重特異性抗体。
(項目14)
前記抗BCMA抗体部分の第2のFab断片であって、前記二重特異性抗体のCD3抗体部分のN末端に、そのC末端が連結されている前記第2のFab断片を含むことを特徴とする、項目4〜13のいずれか1項に記載の二重特異性抗体。
(項目15)
前記抗CD3抗体Fab断片のVLドメインが、前記第2の抗BCMA抗体Fab断片のCH1ドメインに連結されていることを特徴とする、項目14に記載の二重特異性抗体。
(項目16)
BCMAとCD3に特異的に結合する二重特異性抗体であって、
i)配列番号48、配列番号49、配列番号50及び配列番号51(2×)、
ii)配列番号48、配列番号52、配列番号53及び配列番号54(2×)、ならびにiii)配列番号48、配列番号55、配列番号56及び配列番号57(2×)
のポリペプチドからなる群から選択した、重鎖と軽鎖のセットを含むことを特徴とする前記抗体。
(項目17)
項目1〜16のいずれか1項に記載の抗体の調製方法であって、
a)宿主細胞を
b)項目1〜16のいずれか1項に記載の抗体の軽鎖と重鎖をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換するステップと、
c)前記抗体分子の合成を可能にする条件で、前記宿主細胞を培養するステップと、
d)前記抗体分子を前記培養物から回収するステップと、
を含む前記方法。
(項目18)
項目1〜16のいずれか1項に記載の抗体と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
(項目19)
項目1〜16のいずれか1項に記載の抗体を含む医薬組成物であって、医薬として用いるための医薬組成物。
(項目20)
項目1〜16のいずれか1項に記載の抗体を含む医薬組成物であって、形質細胞障害の治療で医薬として用いるための医薬組成物。
(項目21)
項目1〜16のいずれか1項に記載の抗体を含む医薬組成物であって、多発性骨髄腫または全身性ループスエリテマトーデスまたは形質細胞性白血病またはALアミロイドーシスの治療において医薬として用いるための医薬組成物。
(項目22)
BCMAに対する抗原認識部分と、T細胞活性化部分とを含むキメラ抗原レセプター(CAR)であって、前記抗原認識部分が、項目1〜3のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体または抗体断片であることを特徴とする前記CAR。
(項目23)
BCMAに特異的に結合するモノクローナル抗体の生成方法であって、前記モノクローナル抗体は、項目4〜16のいずれか1項に記載の二重特異性抗体として、多発性骨髄腫(MM)骨髄穿刺液中のヒト悪性形質細胞を、10nM以上、1fM以下の濃度の抗BCMA抗体で48時間処理後に少なくとも80%までになる形で除去し、前記方法は、
a)配列番号9の可変重鎖(VH)ファージディスプレイライブラリーを1〜50nMのカニクイザルBCMAで1〜3ラウンドパニングして、配列番号11の可変軽鎖と組み合わせて項目4〜16のいずれか1項に記載の二重特異性抗体にしたときに、上記のようなヒト悪性形質細胞を上記のような形で除去する可変重鎖を選択することと、
c)配列番号11の可変軽鎖(VL)ファージディスプレイライブラリーを1〜50nMのカニクイザルBCMAで1〜3ラウンドパニングして、b)配列番号9の可変重鎖と組み合わせて項目4〜16のいずれか1項に記載の二重特異性抗体にしたときに、上記のようなヒト悪性形質細胞を上記のような形で除去する可変軽鎖を選択することと、
選択した前記可変重鎖と、選択した前記可変軽鎖を組み合わせて、項目4〜16のいずれか1項に記載の二重特異性抗体であって、上記のようなヒト悪性形質細胞を上記のような形で除去する前記抗体にすることとを特徴とする前記方法。
Jul;11(7):843−53及びWolf E.et al.,Drug Discov Today.2005 Sep 15;10(18):1237−44でも言及されている。
92:11980−11984、Jefferis et al.,1995,//77muno/Lett 44:111−117、Lund et al.,1995,Faseb J 9:115−119、Jefferis et al.,1996,Immunol Lett 54:101−104、Lund et al.,1996,J
Immunol 157:4963−4969、Armour et al.,1999,Eur J Immunol 29:2613−2624、Idusogie et
al.,2000,J Immunol 164:4178−4184、Reddy et al.,2000,J Immunol 164:1925−1933、Xu et al.,2000,Cell Immunol 200:16−26、Idusogie et al.,2001,J Immunol 166:2571−2575、Shields et al.,2001,J Biol Chem 276:6591−6604、Jefferis et al.,2002,Immunol Lett 82:57−65、Presta et al.,2002,Biochem Soc Trans 30:487−490、US5624821、US5885573、US6194551、WO200042072、WO199958572で言及されている。このようなFcの改変には、本発明によれば、Fc部分の操作済みグリコフォームも含まれる。「操作済みグリコフォーム」とは、本明細書で使用する場合、Fcポリペプチドに共有結合している糖鎖組成物であって、親Fcポリペプチドの糖鎖組成物とは化学的に異なる前記糖鎖組成物を意味する。操作済みグリコフォームは、いずれかの方法によって、例えば、操作済みまたはバリアント発現株を用いることによって、1つ以上の酵素、例えばD1−4−N−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIII(GnTIII)との共発現によって、Fcポリペプチドを様々な生物もしくは様々な生物由来の細胞株において発現させることによって、またはFcポリペプチドを発現させた後に、糖鎖(複数可)を改変することによって生成してよい。操作済みグリコフォームの生成方法は、当該技術分野において知られており、Umana et al.,1999,Nat Biotechnol 17:176−180、Davies et al.,2001,Biotechnol Bioeng 74:288−294、Shields et al.,2002,J Biol Chem 277:26733−26740、Shinkawa
et al.,2003,J Biol Chem 278:3466−3473)、US6602684、WO200061739、WO200129246、WO200231140、WO200230954、Potelligent(商標)の技術(ニュージャージー州プリンストンのBiowa,Inc.)、グリコシル化操作技術のGlycoMAb(商標)(スイス、チューリッヒのGLYCART biotechnology AG))で言及されている。操作済みグリコフォームとは典型的には、親Fcポリペプチドとは異なる糖鎖またはオリゴ糖組成物を指す。
al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81(1984)6851−6855、米国特許第5,202,238号及び同第5,204,244号を参照されたい。
Winkel,J.G.,Curr.Opin.Chem.Biol.5(2001)368−374)。ヒト抗体は、免疫によって、内因性免疫グロブリンを産生することなく、ヒト抗体の完全なレパートリーまたは選択部分を産生できるトランスジェニック動物(例えばマウス)で産生させることもできる。このような生殖系列変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入はヒト抗体の生成をもたらす(例えば、Jakobovits,A.,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(1993)2551−2555、Jakobovits,A.,et al.,Nature 362(1993)255−258、Bruggemann,M.,et al.,Year Immunol.7(1993)33−40を参照されたい)。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーで生成することもできる(Hoogenboom,H.R.,and Winter,G.,J.MoI.Biol.227(1992)381−388、Marks,J.D.,et al.,J.MoI.Biol.222(1991)581−597)。Coleら及びBoernerらの技法も、ヒトモノクローナル抗体の調製に使用可能である(Cole et al.,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,p.77(1985)及びBoerner,P.,et al.,J.Immunol.147(1991)86−95)。本発明によるキメラ抗体とヒト化抗体に関してすでに述べたように、「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、本発明による特性、特に、C1qの結合及び/またはFcRの結合に関する特性をもたらすために、例えば、Fc部分の「クラススイッチ」、すなわち、変更または変異(例えば、IgG1からIgG4への変更及び/またはIgG1/IgG4変異)によって、定常領域において改変されている抗体も含む。
of Proteins of Immunological Interest,5th ed.,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)の標準的な定義によって定められる。「CDR1H、CDR2H及びCDR3H」という用語は、本明細書で使用する場合、可変ドメインVHに位置する、重鎖の各CDRを指す。「CDR1L、CDR2L及びCDR3L」という用語は、本明細書で使用する場合、可変ドメインVLに位置する、軽鎖の各CDRを指す。
(i)B細胞成熟抗原(BCMA)認識部分と、
(ii)スペーサードメインと、
(ii)膜貫通ドメインと、
(iii)細胞内T細胞シグナル伝達ドメインと、
を含み、そのBCMA認識部分が、BCMAに特異的に結合するモノクローナル抗体であることを特徴とし、そのモノクローナル抗体が、配列番号17のCDR3H領域と、配列番号20のCDR3L領域と、
a)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号23のCDR1L領域及び配列番号24のCDR2L領域、
b)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域、
c)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域、
d)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、
e)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、ならびに
f)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域
の群から選択した、CDR1H領域、CDR2H領域、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むことを特徴とするキメラ抗原レセプター(CAR)を含む。
2011)。低用量のTCBは、患者において高い有効性を発揮し得るので、本発明による抗体では、皮下投与が可能であるとともに、皮下投与は、臨床現場において好ましい(好ましくは、0.1〜2.5、好ましくは25mg/m2/週、好ましくは250mg/m2/週の用量範囲である)ことが想定されている。これらの低い濃度/用量/レセプター占有度でも、TCBは、かなりの有害イベントを引き起こし得る(Klinger et al.,Blood 2012)。したがって、腫瘍細胞の占有度/被覆度を制御するのが重要である。血清中のAPRILとBAFFのレベルが高いとともに、変化し得る患者(例えば多発性骨髄腫患者、Moreaux et al.2004;Blood 103(8):3148−3157)では、腫瘍細胞受容体に結合するTCBの数と、腫瘍細胞占有度はそれぞれ、APRIL/BAFFからかなりの影響を受け得る。しかし、本発明の前記抗体、腫瘍細胞占有度、有効性/安全性をそれぞれ用いることによって、本発明による抗体の用量を増やす必要がないこともある。前記抗体は、APRIL/BAFFのリガンドの競合による影響を受けないと見られるからである。本発明による抗体の別の利点は、Fc部分を含むことに基づくものであり、これにより、Fc部分を含まないTCBであって、患者の携行するポンプを用いて静脈内持続投与を必要とするTCB(例えばブリナツモマブ)と比べて、排泄半減期が約4〜12日まで長くなり、週に少なくとも1回または2回の投与が可能になる。
83A10−TCBcv:45、46、47(×2)、48(図2A)
21−TCBcv:48、49、50、51(×2)(図2A)
22−TCBcv:48、52、53、54(×2)(図2A)
42−TCBcv:48、55、56、57(×2)(図2A)
a)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号23のCDR1L領域及び配列番号24のCDR2L領域、
b)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域、
c)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域、
d)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、
e)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、ならびに
f)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域
の群から選択した、CDR1H領域、CDR2H領域、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むことを特徴とする前記抗体。
a)配列番号23のCDR1L領域及び配列番号24のCDR2L領域、
b)配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域または
c)配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域
の群から選択した、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むVL領域とを含むことを特徴とする前記抗体。
a)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域、
b)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域、または
c)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域
の群から選択した、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むことを特徴とする前記抗体。
a)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号23のCDR1L領域及び配列番号24のCDR2L領域、
b)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域、
c)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域、
d)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、
e)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、ならびに
f)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域
の群から選択した、CDR1H領域、CDR2H領域、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせを含むことを特徴とする前記二重特異性抗体。
b)配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域または
c)配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域
の群から選択した、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせを含むVL領域とを含むことを特徴とする前記抗体。
a)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域、
b)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域、または
c)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域
の群から選択した、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むことを特徴とする前記抗体。
a)実施形態1〜7のいずれか1つに記載の抗体の軽鎖と重鎖と、
b)CD3に特異的に結合する抗体の軽鎖と重鎖であり、可変ドメインのVLとVH、または定常ドメインのCLとCH1が互いに入れ替わっている、実施形態15〜25のいずれか1つに記載の二重特異性抗体。
a)請求項1〜7のいずれか1項に記載の第1の抗体の第1の軽鎖と第1の重鎖と、
b)CD3に特異的に結合する第2の抗体の第2の軽鎖及び第2の重鎖であって、前記第2の抗体の第2の軽鎖の可変ドメインVLと第2の重鎖の可変ドメインVHが、互いに入れ替わっている第2の軽鎖及び第2の重鎖とを含むことを特徴とし、
c)a)の第1の軽鎖の定常ドメインCLにおいて、124位のアミノ酸が独立して、リシン(K)、アルギニン(R)またはヒスチジン(H)で置換されており(Kabatによる番号付け)、a)の第1の重鎖の定常ドメインCH1において、147位のアミノ酸と、213位のアミノ酸が独立して、グルタミン酸(E)またはアスパラギン酸(D)で置換されている(Kabatによる番号付け)(例えば、図1A、2A、2C、3A、3Cを参照されたい)ことを特徴とする前記抗体。
a)請求項1〜7のいずれか1項に記載の第1の抗体の第1の軽鎖と第1の重鎖と、
b)CD3に特異的に結合する第2の抗体の第2の軽鎖及び第2の重鎖であって、第2の抗体の前記第2の軽鎖の可変ドメインVLと第2の重鎖の可変ドメインVHが、互いに入れ替わっている前記第2の軽鎖及び第2の重鎖とを含むことを特徴とし、
c)b)の前記第2の軽鎖の定常ドメインCLにおいて、124位のアミノ酸が独立して、リシン(K)、アルギニン(R)またはヒスチジン(H)で置換されており(Kabatによる番号付け)、b)の前記第2の重鎖の定常ドメインCH1において、147位のアミノ酸と、213位のアミノ酸が独立して、グルタミン酸(E)またはアスパラギン酸(D)で置換されている(Kabatによる番号付け)前記抗体。
i)配列番号48、配列番号49、配列番号50及び配列番号51(2×)(抗体21のセット1TCB)と、
ii)配列番号48、配列番号52、配列番号53及び配列番号54(2×)(抗体22のセット2TCB)と、
iii)配列番号48、配列番号55、配列番号56及び配列番号57(2×)(抗体42のセット3TCB)と、
のポリペプチドからなる群から選択した、重鎖と軽鎖のセットを含むことを特徴とする前記抗体。
a)宿主細胞を
b)請求項1〜36のいずれか1項に記載の抗体の軽鎖と重鎖をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換するステップと、
c)前記抗体分子の合成を可能にする条件で、前記宿主細胞を培養するステップと、
d)前記抗体分子を前記培養物から回収するステップと、
を含む方法。
(ii)スペーサードメインと、
(ii)膜貫通ドメインと、
(iii)細胞内T細胞シグナル伝達ドメインと、
を含むことを特徴とする、実施形態45によるキメラ抗原レセプター(CAR)。
a)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号23のCDR1L領域及び配列番号24のCDR2L領域、
b)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号25のCDR1L領域及び配列番号26のCDR2L領域、
c)配列番号21のCDR1H領域及び配列番号22のCDR2H領域と、配列番号27のCDR1L領域及び配列番号28のCDR2L領域、
d)配列番号29のCDR1H領域及び配列番号30のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、
e)配列番号34のCDR1H領域及び配列番号35のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域、ならびに
f)配列番号36のCDR1H領域及び配列番号37のCDR2H領域と、配列番号31のCDR1L領域及び配列番号32のCDR2L領域
の群から選択した、CDR1H領域、CDR2H領域、CDR1L領域及びCDR2L領域の組み合わせとを含むことを特徴とする、実施形態45または46に記載のキメラ抗原レセプター(CAR)。
a)配列番号9の可変重鎖(VH)ファージディスプレイライブラリーを1〜50nMのカニクイザルBCMAで1〜3ラウンドパニングし、配列番号11の可変軽鎖と組み合わせて、実施形態15〜36のいずれか1つに記載の二重特異性抗体にしたときに、上記のようなヒト悪性形質細胞を上記のような形で除去する可変重鎖を選択することと、
c)配列番号11の可変軽鎖(VL)ファージディスプレイライブラリーを1〜50nMのカニクイザルBCMAで1〜3ラウンドパニングし、b)配列番号9の可変重鎖と組み合わせて、実施形態15〜36のいずれか1つに記載の二重特異性抗体にしたときに、上記のようなヒト悪性形質細胞を上記のような形で除去する可変軽鎖を選択することと、
選択した前記可変重鎖と、選択した前記可変軽鎖を組み合わせて、実施形態4〜16のいずれか1つに記載の二重特異性抗体であって、上記のようなヒト悪性形質細胞を上記のような形で除去する前記抗体にすることと、
を特徴とする前記方法。
組み換えDNA技法
Sambrook,J.et al.,Molecular cloning:A laboratory manual;Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York,1989で説明されているように、標準的な方法を用いて、DNAを操作した。分子生物学的な試薬は、メーカーの指示に従って用いた。ヒト免疫グロブリンの軽鎖と重鎖のヌクレオチド配列に関する一般的な情報は、Kabat,E.A.et al.,(1991)Sequences of Proteins of Immunological
Interest,5th ed.,NIH Publication No.91−3242に示されている。抗体鎖のアミノ酸は、Kabat,E.A.,et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th ed.,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,(1991)に従って、番号付けと言及を行った。
a)化学合成によって作製したオリゴヌクレオチドから、所望の遺伝子セグメントを調製した。PCR増幅を含め、オリゴヌクレオチドをアニーリング及びライゲーションすることによって、特有の制限エンドヌクレアーゼ切断サイトに挟まれた長さ600〜1800bpの遺伝子セグメントをアセンブリーしてから、示されている制限部位、例えばKpnl/SadまたはAscl/PaCLを介して、pPCRScript(Stratagene)ベースのpGA4クローニングベクターにクローニングした。サブクローニングした遺伝子断片のDNA配列をDNAシークエンシングによって確認した。遺伝子合成断片は、所定の仕様によって、Geneart(ドイツ、レーゲンスブルク)に依頼した。
DNA配列は、両鎖シークエンシングによって決定した。
配列のマッピング、解析、アノテーション及び例示には、Clone Manager(Scientific & Educational Software)ソフトウェアパッケージバージョン9.2を用いた。
a)下に説明されているように、記載されている抗体鎖を含む融合遺伝子をPCR及び/または遺伝子合成によって生成し、既知の組み換え方法及び組み換え技法を用いて、該当する核酸セグメントを連結することによって、例えば、それぞれのベクターにおける独特の制限部位を用いてアセンブルした。サブクローニングした核酸配列をDNAシークエンシングによって検証した。一過性トランスフェクションのために、形質転換E.coli培養物から調製したプラスミドによって、大量のプラスミドを調製する(Nucleobond AX、Macherey−Nagel)。
Current Protocols in Cell Biology(2000),Bonifacino,J.S.,Dasso,M.,Harford,J.B.,Lippincott−Schwartz,J.and Yamada,K.M.(eds.),John Wiley & Sons,Incで説明されているような標準的な細胞培養技法を使用する。
それぞれの哺乳動物発現ベクターをHEK293−EBNA細胞に一過性にコトランスフェクションし、ポリマーベースの溶液を用いて、その細胞を懸濁液で培養することによって二重特異性抗体を発現させた。6mMのL−グルタミンを添加したEx−Cell培地に、トランスフェクションの前日に、HEK293−EBNA細胞を1mL当たり150万個の生存細胞で播種した。最終産物の体積1mLごとに、200万個の生存細胞を遠心分離した(5分、210×g)。その上清を吸引除去し、その細胞を100μLのCD
CHO培地に再懸濁した。100μLのCD CHO培地において1μgのDNA(重鎖:改変重鎖:軽鎖:改変軽鎖の比=1:1:2:1)を混合することによって、最終産物の体積1mLごとのDNAを調製した。ポリマーベースの溶液(1mg/mL)を0.27μL加えた後、その混合物を15秒ボルテックスし、室温で10分静置した。10分後、再懸濁した細胞とDNA/ポリマーベースの溶液の混合物を合わせてから、適切な容器に移し、その容器を振とう装置(37℃、5%CO2)に入れた。3時間のインキュベート時間の後、6mMのL−グルタミンと、1.25mMのバルプロ酸と、12.5%のPepsoy(50g/L)とを添加したEx−Cell培地800μLを、最終産物の体積1mLごとに加えた。24時間後、フィード液70μLを最終産物の体積1mLごとに加えた。7日後、または細胞の生存率が70%以下になったら、細胞を上清から遠心分離及び滅菌ろ過によって分離した。親和性工程と1回または2回のポリッシング工程(陽イオン交換クロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィーであった)によって、抗体を精製した。必要なときには、追加のポリッシング工程を用いた。組み換え抗BCMAヒト抗体と二重特異性抗体は、ポリマーベースの溶液を用いて、HEK293−EBNA細胞に哺乳動物発現ベクターをコトランスフェクションすることによって、懸濁液中で作製した。この細胞には、形態に応じて、2つまたは4つのベクターをトランスフェクションした。ヒトIgG1の場合には、一方のプラスミドが重鎖をコードし、もう一方のプラスミドが軽鎖をコードした。二重特異性抗体の場合には、4つのプラスミドをコトランスフェクションした。これらのうちの2つは、2つの異なる重鎖をコードし、残りの2つは、2つの異なる軽鎖をコードした。6mMのL−グルタミンを添加したF17培地に、トランスフェクションの前日に、HEK293−EBNA細胞を1mL当たり150万個の生存細胞で播種した。
抗体の0.1%溶液の吸光度の理論値を用いて、280nmにおける吸光度を測定することによって、抗体濃度の定量を行った。この値は、アミノ酸配列をベースとし、GPMAWというソフトウェア(Lighthouse data)によって計算した。
NuPAGE(登録商標)Pre−Castというゲル系(Invitrogen)をメーカーの指示に従って使用する。具体的には、10%または4〜12%のNuPAGE(登録商標)Novex(登録商標)Bis−TRIS Pre−Castゲル(pH6.4)と、NuPAGE(登録商標)MES(還元ゲル、NuPAGE(登録商標)Antioxidantランニングバッファー添加剤を含む)またはMOPS(非還元ゲル)ランニングバッファーを使用する。
プロテインAアフィニティクロマトグラフィーによる精製
親和性工程では、6CVの20mMのリン酸ナトリウム、20mMのクエン酸ナトリウム(pH7.5)で平衡化したプロテインAカラム(HiTrap Protein A
FF、5mL、GE Healthcare)に上清を充填した。同じバッファーによる洗浄工程後、20mMのリン酸ナトリウム、100mMの塩化ナトリウム、100mMのグリシン(pH3.0)による溶出工程によって、抗体をカラムから溶出させた。所望の抗体を含む画分を0.5Mのリン酸ナトリウム(pH8.0)によってすぐに中和し(1:10)、プールし、遠心分離によって濃縮した。この濃縮物を滅菌ろ過し、陽イオン交換クロマトグラフィー及び/またはサイズ排除クロマトグラフィーによってさらに処理した。
陽イオン交換クロマトグラフィー工程では、濃縮したタンパク質を、親和性工程で用いた溶出バッファーによって1:10で希釈し、陽イオン交換カラム(Poros 50HS、Applied Biosystems)に充填した。平衡化バッファー(20mMのリン酸ナトリウム、20mMのクエン酸ナトリウム、20mMのトリス(pH5.0))と洗浄バッファー(20mMのリン酸ナトリウム、20mMのクエン酸ナトリウム、20mMのトリス、100mMの塩化ナトリウム(pH5.0))での2回の洗浄工程の後、20mMのリン酸ナトリウム、20mMのクエン酸ナトリウム、20mMのトリス、100mMの塩化ナトリウム(pH8.5)を用いたグラジエントでタンパク質を溶出させた。所望の抗体を含む画分をプールし、遠心分離によって濃縮し、滅菌ろ過し、サイズ排除工程でさらに処理した。
サイズ排除工程では、濃縮したタンパク質をXK16/60 HiLoad Superdex200カラム(GE Healthcare)と、処方バッファーとしてのTween20を含むかまたは含まない20mMのヒスチジン、140mMの塩化ナトリウム(pH6.0)に注入した。単量体を含む画分をプールし、遠心分離によって濃縮し、滅菌バイアルに滅菌ろ過した。
最終的なタンパク質調製物の純度は、CE−SDS(Caliper LabChip
GXIIシステム(Caliper Life Sciences))によって、単量体含有率は、HPLC(TSKgel G3000 SW XLという解析用サイズ排除カラム(Tosoh))によって、25mMのリン酸カリウム、125mMの塩化ナトリウム、200mMのL−アルギニン一塩酸塩、0.02%(w/v)アジ化ナトリウムのpH6.7のバッファーにおいて割り出した。
糖鎖除去
分子の均一な調製を確認するために、最終的なタンパク質溶液をLC−MS解析によって解析した。糖鎖によって付与される不均一性を取り除くために、コンストラクトをPNGaseF(ProZyme)で処理した。したがって、2Mのトリス2μlを濃度0.5mg/mlのタンパク質20μgに加えることによって、タンパク質溶液のpHをpH7.0に調整した。PNGaseFを0.8μg加えて、12時間、37℃でインキュベートした。
TOF6441という質量分析計(Agilent)に接続したAgilent HPLC1200で、LC−MS法を行った。Macherey Nagel Polystereneカラム、PR1000−8(粒径8μm、4.6×250mm、カタログ番号719510)で、クロマトグラフィーによる分離を行った。溶離液Aは、水中の5%のアセトニトリルと0.05%(v/v)のギ酸、溶離液Bは、95%のアセトニトリルと、5%の水と、0.05%のギ酸であった。流速は1ml/分であり、分離は、40℃で、上記のような処理によって得たタンパク質試料6μg(15μl)によって行った。
末梢血単核球(PBMC)は、地元の血液バンクまたは健常なヒトドナーの新鮮な血液から得た濃縮リンパ球調製物(バフィーコート)から、Histopaqueによる密度遠心分離によって調製した。簡潔に述べると、血液を滅菌PBSで希釈し、Histopaqueグラジエント(Sigma、H8889)上に慎重に重層した。30分、450×gにて室温で遠心分離後(ブレーキはオフにした)、界面相を含め、PBMC上の血漿部分を破棄した。PBMCを新たな50mlのファルコンチューブに移し、そのチューブにPBSを充填して、総体積を50mlにした。この混合物を室温で10分、400×gで遠心分離した(ブレーキはオンにした)。上清を破棄し、PBMCペレットを滅菌PBSで2回洗浄した(4℃、10分間、350×gでの遠心分離工程)。得られたPBMC集団を自動(ViCell)で計数し、アッセイを開始するまで、インキュベーターにおいて、10%のFCSと1%のL−アラニル−L−グルタミン(Biochrom、K0302)とを含むRPMI1640培地中で、37℃において、5% CO2で保存した。
下記のように、健常なカニクイザルドナーの新鮮な血液から、密度遠心分離によって、末梢血単核球(PBMC)を調製した。ヘパリン処理血液を滅菌PBSによって1:3で希釈し、Lymphoprep培地(Axon Lab#1114545)を滅菌PBSで90%まで希釈した。2倍量の希釈血液を1倍量の希釈密度グラジエント上で重層し、PBMC画分を遠心分離によって30分、520×gで、ブレーキなしで、室温で分離した。PBMCバンドを新たな50mlのファルコンチューブに移し、滅菌PBSで遠心分離によって10分、400×gにおいて4℃で洗浄した。低速遠心分離を1回行って、血小板を除去し(15分、150×g、4℃)、得られたPBMC集団を自動で計数し(ViCell)、すぐにさらなるアッセイで使用した。
実施例1.1:抗原とツール試薬の作製
実施例1.1.1:組み換え可溶性ヒトBCMA細胞外ドメイン
ファージディスプレイ選択の際に抗原として用いるヒト、カニクイザル及びマウスBCMAの細胞外ドメインをN末端単量体Fc融合体として、HEK EBNA細胞で一過性に発現させ、ビオチンリガーゼBirAの共発現を介して、レセプター鎖(Fcノブ鎖)を有するFc部分のC末端にあるaviタグ認識配列において、インビボで部位特異的にビオチン化した。ヒトの細胞外ドメインは、4位のメチオニンから53位のアスパラギンまで、カニクイザルBCMAの細胞外ドメインは、4位のメチオニンから52位のアスパラギンまでを含んでいた。これらをN末端でヒトIgG1のヒンジに融合して、knobs−into−holes技法によって、未融合のヒトIgG1 Fc部分(ホール鎖)とヘテロ二量化するのを可能にした。
1.1.1A.1 ライブラリーと選択
83A10抗体に基づき、2つのライブラリーを構築した。これらのライブラリーを軽鎖(83A10L1/L2)のCDR1及びCDR2または重鎖(83A10H1/H2)のCDR1及びCDR2のいずれかにおいてランダム化する。これらの各ライブラリーは、増幅とアセンブルという続く2つの工程によって構築した。最終的なアセンブル産物は、クローン83A10のプラスミド調製に基づき、同様に処理したアクセプターベクターとともに、83A10L1/L2ライブラリーではNcoI/BsiWI、83A10H1/H2ライブラリーではMunI及びNheIで消化した。それぞれのライブラリーのために、消化済みランダム化(部分的)Vドメインと、消化済みアクセプターベクター(複数可)を、a.m.83A10 L1/L2ライブラリー(3/10)、83A10
H1/H2ライブラリー(3/10)という量(vドメインの量(μg)/ベクターの量(μg))でライゲーションし、83A10 L1/L2ライブラリーと83A10 H1/H2ライブラリーの精製済みライゲーション体をプールして、2つの各ライブラリーにおいて、E.coli TG1細胞の15個の形質転換体に用いて、83A10 L1/L2ライブラリーでは、2.44×1010個、a.m.83A10 H1/H2ライブラリーでは、1.4×1010個という最終的なライブラリーサイズを得た。これらのFabライブラリーを提示するファージミド粒子をレスキューし、精製した。
選択は、Fcとaviタグの上流にクローニングしたヒトまたはcyno B細胞成熟抗原(BCMA)の細胞外ドメインに対して行った。選択前に、Fc除去物質をニュートラアビジンプレートに、500nMの濃度でコーティングした。選択は、下記のパターンに従って行った。
ストリームライン2(ラウンド1では、50nMのhuBCMA、ラウンド2では、10nMのhuBCMA、ラウンド3では、2nMのhuBCMA)、
ストリームライン3(ラウンド1では、50nMのhuBCMA、ラウンド2では、25nMのhuBCMA、ラウンド3では、10nMのcynoBCMA)、
ストリームライン4(ラウンド1では、50nMのhuBCMA、ラウンド2では、25nMのcynoBCMA、ラウンド3では、10nMのcynoBCMA)、
ストリームライン5(ラウンド1では、50nMのcynoBCMA、ラウンド2では、25nMのcynoBCMA、ラウンド3では、10nMのcynoBCMA)。
個々のクローンを1mlの培養物として、96ウェルの形態において細菌で発現させ、上清に対してELISAによるスクリーニングを行った。特異的結合剤は、ヒトBCMA及びcynoBCMAにおいては、5×バックグラウンドよりもシグナルが高く、Fc除去物質においては、3×バックグラウンドよりもシグナルが低いものとして定めた。ニュートラアビジン96ウェルストリッププレートを10nMのhuBCMA、10nMのcyBCMAまたは50nMのFc除去物質でコーティングしてから、Fab含有細菌上清を加え、二次抗体の抗Flag/HRPを用いることによって、Flagタグを介して、特異的に結合したFabを検出した。ELISA陽性クローンを1mlの培養物として、96ウェルの形態において、細菌で発現させ、上清に対して、動態スクリーニング実験のProteOnを行った。500個の陽性クローンが同定され、その大半の親和性は同程度であった。
70個のクローンをさらにSPRによって試験した。すべての実験は、25℃で、ランニングバッファーとしてのPBST(10mMのPBS(pH7.4)及び0.005%(v/v)のTween(登録商標)20)を用いて行った。GLC及びGLMセンサーチップを備えたProteOn XPR36バイオセンサーと、カップリング試薬(10mMの酢酸ナトリウム(pH4.5)、スルホ−N−ヒロドキシスクシンイミド、1−エチル−3−(3−ジメチルアミンプロピル)−カルボジイミドヒドロクロライド[EDC]及びエタノールアミン)は、Biorad Inc.(カリフォルニア州ハーキュリーズ)から購入した。固定化は、30μl/分で、GLMチップ上に行った。下記の標準的なアミンカップリング手順を用いて、pAb(ヤギ)抗hu IgG F(ab)2特異的Ab(Jackson)を垂直方向にカップリングした。6個のすべてのリガンドチャネルを5分間、EDC(200mM)とスルホ−NHS(50mM)の混合物で活性化した。表面が活性化したらすぐに、pAb(ヤギ)抗hu IgG F(ab)2特異的抗体(50μg/ml、10mMの酢酸ナトリウム、pH5)を6個のすべてのチャネルにわたって5分間注入した。そして、1Mのエタノールアミン−HCl(pH8.5)を5分注射することによって、チャネルをブロックした。最終的な固定化レベルは、すべてのチャネルにおいて同程度で、11000〜11500RUの範囲であった。5つの別個の水平チャネル全体に沿って(30μl/分で)5分間同時に注入することによって、Fabバリアントをe.coli上清から捕捉して、上清中のFabの濃度に応じて、200〜900RUの範囲のレベルを得て、馴化培地を6個目のチャネルに沿って注入して、二重参照目的で『インライン』ブランクを用意した。ヒトBCMA、cynoBCMA及びマウスBCMAの希釈系列を3分間、垂直チャネルに沿って注入することによって(50nM/分、10nM/分、2nM/分、0.4nM/分、0.08nM/分、0nM/分、50μl/分)、1ショットの動態測定を行った。解離を5分間モニタリングした。ProteOn Manager v.2.1で動態データを解析した。反応スポットデータの処理には、インラインバッファーブランクを用いて、インタースポットリファレンスとダブルリファレンスステップを適用することを含めた(Myszka,1999)。マストランスポートなしに、1ショットの注入を繰り返して得た処理データを単純1:1ラングミュア結合モデルに当てはめた(O’Shannessy et al.,1993)。
本発明者は、経験から、huBCMA、cynoBCMA、マウスBCMAへの結合特性と比率(異なるアッセイで測定したもの)に基づき、これらの70個のクローンから、さらなる27個のクローンを選択した。これらのクローンから、4個のVHクローンと、9個のVLクローンを選択し、それにより、VH/VLの組み合わせは34個得られた。HEK−huBCMA細胞での結合親和性を測定した(図18及び表2E)。HEK細胞上のhuBCMAへの抗体Mab21、Mab22、Mab27、Mab39及びMab42の結合性は、Mab83A10のhuBCMA−HEK細胞への結合性よりも有意には高くないことが分かった。しかしながら、huBCMA、cynoBCMAへの親和性、二重特異性抗体としてのBCMA陽性多発性骨髄腫細胞株H929、L363及びRPMI−8226への結合(フローサイトメトリーによるもの)、骨髄腫細胞H929、L363及びRPMI−8226と、患者骨髄穿刺液から得た生存骨髄腫形質細胞の殺傷効能、ならびにカニクイザルにおける薬物動態(PK))及び薬力(BCMA陽性細胞の殺傷)データのような全体的な特性により、Mab21、Mab22、Mab27、Mab33、Mab39及びMab42を選択した。
実施例1.2.1:BCMAを表面上に発現するヒト骨髄腫細胞株と、細胞表面上のBCMAレセプター数の定量化
DSMZ−German collection of microorganisms and cell cultures、DSMZ番号ACC49)は、85%のRPMI1640と15%の熱不活化FCSで培養した。JJN−3細胞株(DSMZ番号ACC541)は、40%のダルベッコMEM+40%のイスコブMDM+20%の熱不活化FBSで培養した。簡潔に述べると、細胞を回収し、洗浄し、生存数について計数し、96ウェル丸底プレートの1ウェル当たりに50,000個の細胞で再懸濁し、10μg/mlの抗ヒトBCMA抗体(Abcam、#ab54834、マウスIgG1)とともに、30分、4℃で(インターナリゼーションを防ぐため)インキュベートした。マウスIgG1をアイソタイプ対照として用いた(BD Biosciences、#554121)。続いて、細胞を遠心分離し(350×gで5分)、2回洗浄し、FITCコンジュゲート抗マウス二次抗体とともに、30分、4℃でインキュベートした。インキュベート時間の終わりに、細胞を遠心分離し(350×gで5分)、FACSバッファーで2回洗浄し、100ulのFACSバッファーに再懸濁し、FACS Divaというソフトウェアを実行しているCantoIIという装置で解析した。骨髄腫細胞株H929、RPMI−8226及びU266B1の表面膜上でのBCMAレセプターの相対的定量数をQIFIKIT解析(Dako、#K0078、メーカーの指示に従った)によって評価した。H929細胞は、最も高い密度でヒトBCMAを発現し、他の骨髄腫細胞株よりも最大で5〜6倍高かった。BCMAの発現が中程度/低い骨髄腫細胞であるU266及びL363と、BCMAの発現が低い骨髄腫細胞であるRPMI−8226と、BCMAの発現が非常に低い骨髄腫細胞であるJJN−3と比べて、H929は、BCMAの発現が高い骨髄腫細胞株と考えられる。表3には、各実験(n=5)当たりにおける、ヒト多発性骨髄腫細胞株の細胞表面上の相対的なBCMAレセプター数がまとめられている。
抗BCMA抗体の組み換えBCMAへの結合の表面プラズモン共鳴(SPR)による評価は、以下のとおりである。すべてのSPR実験は、Biacore T200において、25℃で、HBS−EP(0.01MのHEPES(pH7.4)、0.15MのNaCl、3mMのEDTA、0.005%のSurfactant P20、フライブルク/ドイツのBiacore)をランニングバッファーとして用いて行った。抗BCMA抗体と組み換えBCMA Fc(kih)(ヒト及びカニクイザル)との相互作用の結合活性を割り出した。説明に従って、ビオチン化組み換えヒト及びカニクイザルBCMA Fc(kih)をSAチップ上に直接カップリングした(フライブルク/ドイツのBiacore)。固定化レベルは、200〜700RUの範囲であった。抗BCMA抗体を2倍の濃度範囲(1.95〜500nM)で、30μL/分の流量で、フローセルに120秒にわたって流した。解離を180秒間モニタリングした。バルク屈折率差は、参照フローセルで得られた応答を減じることによって補正した。この実施例では、標準的なアミンカップリングキットで説明されているように、事前に活性化及び不活性化した空の表面上に抗BCMA抗体を流した。Biacore T200 Evaluation Software(vAA、ウプサラ/スウェーデンのBiacore AB)を用いて、見かけ動態定数を導き、相互作用の二価性にかかわらず、比較目的で、速度式を1:1ラングミュア結合で数値積分によって当てはめを行った。抗BCMA抗体と組み換えヒトBCMA
Fc(kih)との相互作用の親和性も割り出した。標準的なアミンカップリングキット(フライブルク/ドイツのBiacore)を用いて、抗ヒトFab抗体(GE Healthcare)をCM5チップにpH5.0で直接カップリングした。固定化レベルは、約6500RUであった。抗BCMA抗体を90秒、25nMで捕捉させた。組み換えヒトBCMA Fc(kih)を4倍の濃度範囲(1.95〜500nM)で、30μL/分の流量で、フローセルに120秒にわたって流した。解離を120秒間モニタリングした。バルク屈折率差は、参照フローセルで得られた応答を減じることによって補正した。その際、抗ヒトFab抗体が固定化されている表面(ただし、抗BCMA抗体ではなく、HBS−EPを注入した表面)の上に、組み換えBCMAを流した。Biacore
T100 Evaluation Software(vAA、ウプサラ/スウェーデンのBiacore AB)を用いて、動態定数を導き、速度式を1:1ラングミュア結合で数値積分によって当てはめを行った(表4)。
実施例2に記載されている親和性の値に基づき、抗BCMA抗体のヒトBCMAに対する親和性とカニクイザルBCMAに対する親和性を比較し、cyno/hu親和性比(ギャップ)の値を算出した(表5)。親和性cyno/huギャップは、抗体のカニクイザルBCMAへの親和性をヒトBCMAへの親和性で除した値として計算したものであり、BCMA抗体が、カニクイザルBCMAのx倍の結合親和性でヒトBCMAに結合することを意味し、x=cyno/huギャップ値である。結果は表5に示されている。
WO2014/122144(参照により援用する)に従って、抗BCMA/抗CD3
T細胞二重特異性抗体を作製した。
「CD3εまたはCD3」という用語は、本明細書で使用する場合、UniProt P07766(CD3E_HUMAN)で説明されているヒトCD3εに関するものである。「CD3に対する抗体、抗CD3抗体」という用語は、CD3εに結合する抗体に関するものである。好ましくは、この抗体は、重鎖CDR1として、配列番号1の重鎖CDRを含み、重鎖CDR2として、配列番号2の重鎖CDRを含み、重鎖CDR3として配列番号3の重鎖CDRを含む可変ドメインVHと、軽鎖CDR1として、配列番号4の軽鎖CDRを含み、軽鎖CDR2として、配列番号5の軽鎖CDRを含み、軽鎖CDR3として、配列番号6の軽鎖CDRを含む可変ドメインVLとを含む。好ましくは、この抗体は、配列番号7(VH)と配列番号8(VL)の可変ドメインを含む。上記のような抗CD3抗体を用いて、下記の実施例で用いたT細胞二重特異性抗体を作製した。
対応する抗BCMA IgG1抗体の完全な重鎖と軽鎖をコードするcDNAと、抗CD3 VH及びVL cDNAを出発物質として使用した。それぞれの二重特異性抗体において、対応する抗BCMA抗体の重鎖及び軽鎖と、上記の抗CD3抗体の重鎖及び軽鎖を含む4本のタンパク質鎖が関与した。重鎖のミスペアリング、例えば、抗CD3抗体の2本の重鎖のミスペアリングによる副生物の形成を最小限に抑えるために、WO2009080251とWO2009080252に説明されているように、「knob−into−hole変異」と、操作されたジスルフィド結合とを有する変異ヘテロ二量体Fc領域を用いる。軽鎖のミスペアリング、例えば、抗BCMA抗体の2本の軽鎖のミスペアリングによる副生物の形成を最小限に抑えるために、WO2009080251とWO2009080252で説明されている手法を用いて、抗CD3抗体の重鎖及び軽鎖に、CH1×定常カッパの交叉を適用する。
Life Sciences)のように、ヒトカッパ軽鎖定常領域に結合する樹脂を詰めたアフィニティクロマトグラフィーカラムを用いて行う。加えて、ジスルフィドを加えて、安定性と収量を高めるとともに、イオン架橋を形成する追加の残基を加えて、ヘテロ二量化の発生を高めることができる(EP1870459A1)。
抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体BCMA50−sc(Fv)2(BCMA50−BiTE(登録商標)としても知られている)の作製と使用したアミノ酸配列は、WO2013072406とWO2013072415によるものであった。
WO2014/122144(参照により援用する)に従って、抗BCMA/抗CD3
T細胞二重特異性抗体を作製及び精製した。
FF、5mL、GE Healthcare)に上清を充填した。同じバッファーによる洗浄工程後、20mMのリン酸ナトリウム、100mMの塩化ナトリウム、100mMのグリシン(pH3.0)による溶出工程によって、抗体をカラムから溶出させた。所望の抗体を含む画分を0.5Mのリン酸ナトリウム(pH8.0)によってすぐに中和し(1:10)、プールし、遠心分離によって濃縮した。この濃縮物を滅菌ろ過し、陽イオン交換クロマトグラフィー及び/またはサイズ排除クロマトグラフィーによってさらに処理した。
GXIIシステム(Caliper Life Sciences))によって、単量体含有率は、HPLC(TSKgel G3000 SW XLという解析用サイズ排除カラム(Tosoh))によって、25mMのリン酸カリウム、125mMの塩化ナトリウム、200mMのL−アルギニン一塩酸塩、0.02%(w/v)アジ化ナトリウムのpH6.7のバッファーにおいて割り出した。
抗BCMA/抗CD3 TCB抗体(21−TCBcv、22−TCBcv、42−TCBcv、83A10−TCBcv)の、BCMA発現細胞H929、L363及びRPMI−8226のヒトBCMAへの結合について、フローサイトメトリーによって解析した。MKN45(BCMAを発現しないヒト胃腺癌細胞株)をネガティブ対照として使用した。簡潔に述べると、培養した細胞を回収及び計数し、ViCellを用いて、細胞の生存率を評価した。続いて、生存細胞をBSA含有FACS Stain Buffer(BD Biosciences)において、1ml当たり2×106個の細胞に調整した。さらに、この細胞懸濁液100μlを丸底96ウェルプレートの各ウェルに分け、抗BCMA抗体または対応するIgG対照30μlとともに30分、4℃でインキュベートした。すべての抗BCMA/抗CD3 TCB抗体(及びTCB対照)を滴定し、1〜300nMの終濃度範囲で解析した。続いて、細胞を遠心分離し(5分、350×g)、120μl/ウェルのFACS Stain Buffer(BD Biosciences)で洗浄し、再懸濁し、さらに30分、4℃で、蛍光色素コンジュゲートPEコンジュゲートAffiniPure F(ab’)2 Fragment goat anti−human IgG Fc Fragment Specific(Jackson Immuno Reseach Lab、109−116−170)とともにインキュベートした。続いて、細胞をStain Buffer(BD Biosciences)で2回洗浄し、BD Fixationバッファー(#BD Biosciences、554655)を1ウェル当たり100ul用いて、4℃で20分間固定し、FACSバッファー120μlに再懸濁し、BD FACS CantoIIを用いて解析した。該当する場合には、Prism GraphPad(米国カリフォルニア州ラホヤ)を用いてEC50を算出し、表8には、抗BCMA/抗CD3 TCB抗体のH929細胞への結合に関して、表9には、抗BCMA/抗CD3 TCB抗体のL363細胞への結合に関して、表10には、抗BCMA/抗CD3 TCB抗体のRPMI−8226細胞への結合に関して、最大結合の50%に達するのに必要な抗体濃度を示すEC50値がまとめられている。アスタリスクは、Prismというソフトウェアによって推定及び算出された推定EC50値を示している。21−TCBcvのL363細胞への結合と、22−TCBcvのRPMI−8226細胞へのEC50値は、推定できなかった。
ヒトBCMAを発現するヒト骨髄腫細胞(RPMI−8226、JJN−3)の存在または非存在下で、抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体が、デノボのT細胞媒介性サイトカイン産生を誘導する能力について解析した。簡潔に述べると、ヒトPBMCをバフィーコートから単離し、1ウェル当たり30万個の細胞を丸底96ウェルプレートに播種した。あるいは、健常なドナーから得た全血280μlをディープウェル96ウェルプレートの各ウェルに播種した。BCMA陽性腫瘍標的細胞を加えて、最終的なE:T比を10:1とした。終濃度が0.1pM〜10nMになるように、抗BCMA/抗CD3
TCB抗体と対照を加える。最長で24時間、37℃、5%CO2でインキュベート後、アッセイプレートを5分間、350×gで遠心分離し、次の解析のために、上清を新たなディープウェル96ウェルプレートに移す。CBA解析をFACS CantoIIで、メーカーの指示に従って、Human Thl/Th2 Cytokine Kit II(BD#551809)、またはヒトグランザイムB(BD#560304)、ヒトIFN−γFlex Set(BD#558269)、ヒトTNF−αFlex Set(BD#558273)、ヒトIL−10 Flex Set(BD#558274)、ヒトIL− 6 Flex Set(BD#558276)、ヒトIL−4 Flex Set(BD#558272)、ヒトIL−2 Flex Set(BD#558270)というCBA Flex Setを組み合わせたもののいずれかを用いて行った。表13には、83A10−TCBcvが、サイトカインの産生と、セリンプロテアーゼのグランザイムB(細胞障害性T細胞機能のマーカー)の濃度依存的な増加を誘導したことが示されている。表11には、それぞれの抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体濃度において分泌されたサイトカイン/プロテアーゼのEC50値と量が示されている。
抗BCMA/抗CD3 TCB抗体が、BCMA高発現MM細胞において、細胞上のBCMAへの抗原結合部分の結合を介してコンストラクトを架橋したときに、T細胞媒介性アポトーシスを誘導する可能性を解析した。簡潔に述べると、ヒトBCMA高発現H929多発性骨髄腫標的細胞をCell Dissociation Bufferで回収し、洗浄し、10%ウシ胎仔血清を添加したRPMI(Invitrogen)に再懸濁した。おおむね、1ウェル当たり30,000個の細胞を丸底96ウェルプレートに播種し、それぞれのコンストラクト希釈液を所望の終濃度で加え(トリプリケート)、終濃度は0.1pM〜10nMであった。適切な比較のために、すべてのTCBコンストラクト及び対照を同じモル濃度に調整した。ヒトPBMC(エフェクター細胞)をウェルに加えて、最終的なE:T比を10:1(1個の腫瘍標的細胞に約3〜5個のT細胞というE:T比に相当)とした。ネガティブ対照群は、エフェクター細胞または標的細胞のみによって表した。正規化のために、標的細胞を終濃度1%のTriton X−100とともにインキュベートして、細胞死を誘導することによって、H929MM標的細胞の最大溶解状態(=100%)を求めた。最小溶解状態(=0%)は、エフェクター細胞のみ、すなわち、いずれのT細胞二重特異性抗体も加えずにコインキュベートした標的細胞によって表した。続いて、37℃、5%CO2でのインキュベートから20〜24時間または48時間後に、LDH検出キット(Roche Applied Science)をメーカーの指示に従って用いて、アポトーシス/壊死を起こしたMM標的細胞から上清に放出されたLDHを測定した。LDH放出率を抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体の濃度に対して濃度応答曲線でプロットした。Prismというソフトウェア(GraphPad)を用いてEC50値を測定し、最大LDH放出率の50%をもたらすTCB抗体濃度として割り出した。図4に示されているように、すべての抗BCMA/抗CD3 TCB抗体(21−TCBcv、22−TCBcv、42−TCBcv及び83A10−TCBcv)が、BCMA陽性H929骨髄腫細胞の濃度依存的な殺傷(LDHの放出によって測定)を誘導した。H929細胞の溶解は、特異的であった。BCMA陽性標的細胞には結合せず、T細胞上のCD3のみに結合する対照TCB抗体は、試験した濃度のうちの最高濃度においても、LDHの放出を誘導しなかったからである。表12には、抗BCMA/抗CD3 TCB抗体によって誘導された、BCMA高発現H929細胞のリダイレクトT細胞による殺傷のEC50値がまとめられている。
抗BCMA/抗CD3 TCB抗体が、BCMA中/低発現MM細胞において、細胞上のBCMAへの抗原結合部分の結合を介してコンストラクトを架橋したときに、T細胞媒介性アポトーシスを誘導する能力も解析した。簡潔に述べると、ヒトBCMA中/低発現L363多発性骨髄腫標的細胞をCell Dissociation Bufferで回収し、洗浄し、10%ウシ胎仔血清を添加したRPMI(Invitrogen)に再懸濁した。およそ、1ウェル当たり30,000個の細胞を丸底96ウェルプレートに播種し、それぞれのコンストラクト希釈液を所望の終濃度で加え(トリプリケート)、終濃度は、0.1pM〜10nMである。適切な比較のために、すべてのTCBコンストラクト及び対照を同じモル濃度に調整する。ヒトPBMC(エフェクター細胞)をウェルに加えて、最終的なE:T比を10:1(1個の腫瘍標的細胞に約3〜5個のT細胞というE:T比に相当)とした。ネガティブ対照群は、エフェクター細胞または標的細胞のみによって表した。正規化のために、標的細胞を終濃度1%のTriton X−100とともにインキュベートして、細胞死を誘導することによって、MM標的細胞の最大溶解状態(=100%)を求めた。最小溶解状態(=0%)は、エフェクター細胞のみ、すなわち、いずれのT細胞二重特異性抗体も加えずにコインキュベートした標的細胞によって表した。続いて、37℃、5%CO2でのインキュベートから20〜24時間後に、LDH検出キット(Roche Applied Science)をメーカーの指示に従って用いて、アポトーシス/壊死を起こしたMM標的細胞から上清に放出されたLDHを測定した。LDH放出率を抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体の濃度に対して濃度応答曲線でプロットした。Prismというソフトウェア(GraphPad)を用いてEC50値を測定し、最大LDH放出率の50%をもたらすTCB抗体濃度として割り出した。図5に示されているように、すべての抗BCMA/抗CD3 TCB抗体(21−TCBcv、22−TCBcv、42−TCBcv及び83A10−TCBcv)が、BCMA陽性L363骨髄腫細胞の濃度依存的な殺傷(LDHの放出によって測定)を誘導した。L363細胞の溶解は、特異的であった。BCMA陽性標的細胞には結合せず、T細胞上のCD3のみに結合する対照TCB抗体は、試験した濃度のうちの最高濃度においても、LDHの放出を誘導しなかったからである。表13には、抗BCMA/抗CD3 TCB抗体によって誘導された、BCMA中/低発現L363細胞のリダイレクトT細胞による殺傷のEC50値がまとめられている。
抗BCMA/抗CD3 TCB抗体が、BCMA中/低発現MM細胞において、細胞上のBCMAへの抗原結合部分の結合を介してコンストラクトを架橋したときに、T細胞媒介性アポトーシスを誘導する能力を解析した。簡潔に述べると、ヒトBCMA中/低発現L363多発性骨髄腫標的細胞をCell Dissociation Bufferで回収し、洗浄し、10%ウシ胎仔血清を添加したRPMI(Invitrogen)に再懸濁した。およそ、1ウェル当たり30,000個の細胞を丸底96ウェルプレートに播種し、それぞれのコンストラクト希釈液を所望の終濃度で加え(トリプリケート)、終濃度は、0.1pM〜10nMである。適切な比較のために、すべてのTCBコンストラクト及び対照を同じモル濃度に調整する。ヒトPBMC(エフェクター細胞)をウェルに加えて、最終的なE:T比を10:1(1個の腫瘍標的細胞に約3〜5個のT細胞というE:T比に相当)とした。ネガティブ対照群は、エフェクター細胞または標的細胞のみによって表した。正規化のために、標的細胞を終濃度1%のTriton X−100とともにインキュベートして、細胞死を誘導することによって、MM標的細胞の最大溶解状態(=100%)を求めた。最小溶解状態(=0%)は、エフェクター細胞のみ、すなわち、いずれのT細胞二重特異性抗体も加えずにコインキュベートした標的細胞によって表した。続いて、37℃、5%CO2でのインキュベートから20〜24時間後に、LDH検出キット(Roche Applied Science)をメーカーの指示に従って用いて、アポトーシス/壊死を起こしたMM標的細胞から上清に放出されたLDHを測定した。LDH放出率を抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体の濃度に対して濃度応答曲線でプロットした。Prismというソフトウェア(GraphPad)を用いてEC50値を測定し、最大LDH放出率の50%をもたらすTCB抗体濃度として割り出した。図6に示されているように、すべての抗BCMA/抗CD3 TCB抗体(21−TCBcv、22−TCBcv、42−TCBcv及び83A10−TCBcv)が、BCMA陽性RPMI−8226骨髄腫細胞の濃度依存的な殺傷(LDHの放出によって測定)を誘導した。RPMI−8226細胞の溶解は、特異的であった。BCMA陽性標的細胞には結合せず、T細胞上のCD3のみに結合する対照TCB抗体は、試験した濃度のうちの最高濃度においても、LDHの放出を誘導しなかったからである。表13には、抗BCMA/抗CD3 TCB抗体によって誘導された、BCMA中/低発現RPMI−8226細胞のリダイレクトT細胞による殺傷のEC50値がまとめられている。
抗BCMA/抗CD3 TCB抗体が、BCMA低発現MM細胞において、細胞上のBCMAへの抗原結合部分の結合を介してコンストラクトを架橋したときに、T細胞媒介性アポトーシスを誘導する能力を解析した。簡潔に述べると、ヒトBCMA低発現JJN−3多発性骨髄腫標的細胞をCell Dissociation Bufferで回収し、洗浄し、10%ウシ胎仔血清を添加したRPMI(Invitrogen)に再懸濁した。およそ、1ウェル当たり30,000個の細胞を丸底96ウェルプレートに播種し、それぞれのコンストラクト希釈液を所望の終濃度で加え(トリプリケート)、終濃度は、0.1pM〜10nMである。適切な比較のために、すべてのTCBコンストラクト及び対照を同じモル濃度に調整する。ヒトPBMC(エフェクター細胞)をウェルに加えて、最終的なE:T比を10:1(1個の腫瘍標的細胞に約3〜5個のT細胞というE:T比に相当)とした。ネガティブ対照群は、エフェクター細胞または標的細胞のみによって表した。正規化のために、標的細胞を終濃度1%のTriton X−100とともにインキュベートして、細胞死を誘導することによって、MM標的細胞の最大溶解状態(=100%)を求めた。最小溶解状態(=0%)は、エフェクター細胞のみ、すなわち、いずれのT細胞二重特異性抗体も加えずにコインキュベートした標的細胞によって表した。i)37℃、5%CO2でのインキュベートから48時間後に、培養した骨髄腫細胞を回収し、洗浄し、アポトーシスを起こした骨髄腫細胞を割り出すために、蛍光色素コンジュゲート抗体とアネキシンVで染色した。染色パネルには、CD138−APCC750/CD38−FITC/CD5−BV510/CD56−PE/CD19−PerCP−Cy7/CD45−V450/アネキシンV−PerCP−Cy5.5が含まれていた。用いた蛍光色素標識抗体は、BD Biosciences(カリフォルニア州サンノゼ)とCaltag Laboratories(カリフォルニア州サンフランシスコ)から購入した。取得は、マルチカラーフローサイトメーターと、インストールされたソフトウェア(例えば、FACS Divaというソフトウェアを実行しているCantoIIという装置、またはCellQUESTというソフトウェアを使用するFACSCaliburというフローサイトメーター)を用いて行った。データ解析には、Paint−A−Gate Proというプログラム(BD Biosciences)を用いた。JJN−3細胞でアネキシンVを測定し、アネキシンV陽性JJN−3細胞の割合を抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体の濃度に対してプロットした。所定のTCB濃度におけるアネキシンV陰性JJN−3細胞の絶対数を測定して、TCBを含めなかった場合のアネキシンV陰性JJN−3細胞の絶対数から減じて、TCBを含めなかった場合のアネキシンV陰性JJN−3細胞の絶対数で除することによって、特定濃度の抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体によって誘導された、JJN−3細胞の溶解率も割り出した。図7には、抗BCMA/抗CD3 TCB抗体(22−TCBcv、42−TCBcv及び83A10−TCBcv)が、BCMA低発現JJN−3骨髄腫細胞の濃度依存的な殺傷(フローサイトメトリーによって測定)を誘導したことが示されている。JJN−3細胞の溶解は、特異的であった。BCMA陽性標的細胞には結合せず、T細胞上のCD3のみに結合する対照TCB抗体は、試験した濃度のうちの最高濃度においても、アネキシンV陽性JJN−3細胞の増加またはJJN−3細胞の溶解を誘導しなかったからである。表14には、抗BCMA/抗CD3 TCB抗体によって誘導されたアネキシンV陽性JJN−3細胞の割合が、表15には、抗BCMA/抗CD3 TCB抗体によって誘導された、JJN−3細胞の溶解率がまとめられている。
対象とする腫瘍標的を発現するヒト細胞株は、非常に有用であり、T細胞の存在下で腫瘍細胞への細胞障害性を誘導するTCB抗体能を測定して、EC50値を割り出すため、かつTCB分子をランク付けするための実用的なツールである。しかしながら、容易に入手可能で実用的であるにもかかわらず、ヒト骨髄腫細胞株には、分子レベルのばらつきが非常に大きいことによって特徴付けられる非常に複雑な疾患である多発性骨髄腫の不均一性を示さないという注意点がある。加えて、骨髄腫細胞株の一部の細胞は、他の細胞よりもBCMAを強く発現する(例えば、H929細胞とRPMI−8226細胞を比べた場合)ので、骨髄腫細胞株は、同じ強度及び密度ではBCMAレセプターを発現せず、細胞レベルでのこのような不均一性は、異なる患者間でも観察され得る。多発性骨髄腫分野における重要なオピニオンリーダーとの学究的な協力を通じて、患者試料におけるBCMAの発現と密度の判定と、臨床患者試料による抗BCMA/抗CD3 TCB抗体の評価について検討している。地元の倫理委員会のガイドラインとヘルシンキ宣言に従って、インフォームドコンセントを行ってから、血液と骨髄穿刺液を多発性骨髄腫患者から採取する。
骨髄腫細胞でのBCMAレセプターの発現を割り出すために、新たに単離した全骨髄穿刺液を用いて、免疫表現型の解析を行った。免疫表現型の解析には、赤血球溶解K3−EDTA(エチレンジアミン四酢酸)で抗凝固処理した全骨髄試料を用いた。直接免疫蛍光技法とマルチカラー染色(CD138+ CD38+ CD45+ CD19− CD56+として同定された悪性形質細胞の特異的同定と、免疫表現型の特徴付けを目的としたもの)を用いて、1つのチューブ当たり合計2×106個の細胞を染色、溶解してから、洗浄した。続いて、少なくともCD38−FITC/CD56−PE/CD19−PerCP−Cy7/CD45−V450/BCMA−APCを含む蛍光色素コンジュゲート抗体のパネルを用いて、細胞を染色した。用いた蛍光色素標識抗体は、BD Biosciences(カリフォルニア州サンノゼ)とCaltag Laboratories(カリフォルニア州サンフランシスコ)から購入する。自家作製のAPCコンジュゲート抗ヒトBCMA抗体を免疫表現型の解析で使用した。取得は、マルチカラーフローサイトメーターと、インストールされたソフトウェア(例えば、FACS Divaというソフトウェアを実行しているCantoIIという装置、またはCellQUESTというソフトウェアを使用するFACSCaliburというフローサイトメーター)を用いて行った。データ解析には、Paint−A−Gate Proというプログラム(BD Biosciences)を用いた。悪性形質細胞集団にゲーティングを行って、BCMAの発現を測定し、平均蛍光強度(MFI)値を割り出し、骨髄腫患者間で比較した。
Qifikit(Dako)の方法を用いて、患者骨髄腫形質細胞の細胞表面での、BCMAに特異的な抗原結合能(SABC)を定量化した。FACSバッファー(PBS、0.1%BSA)で終濃度25μg/ml(または飽和濃度)まで希釈した50μlのマウス抗ヒトBCMA IgG(BioLegend#357502)またはマウスIgG2aアイソタイプ対照(BioLegend#401501)で、全骨髄穿刺液から単離した骨髄腫形質細胞を染色し、染色は、30分、4℃で遮光下において行った。次に、個々のウェルと細胞にセットアップビーズまたはキャリブレーションビーズ100μlを加え、それらのビーズをFACSバッファーで2回洗浄した。フルオレセインコンジュゲート抗マウス二次抗体を(飽和濃度で)含む25μlのFACSバッファー(Qifikitによって供給されているもの)に、細胞とビーズを再懸濁した。細胞とビーズは、45分、4℃で遮光下において染色した。細胞を1回洗浄し、すべての試料を100μlのFACSバッファーに再懸濁した。マルチカラーフローサイトメーターと、インストールされているソフトウェア(例えばFACS Divaというソフトウェアを実行しているCantoIIという装置、またはCellQUESTというソフトウェアを使用するFACSCaliburというフローサイトメーター)で、試料をすぐに解析した。
多発性骨髄腫に対する候補TCB抗体の前臨床評価の際、インビトロでの最も有意義かつ重大な特徴付けの1つは、そのTCB分子が、患者のT細胞を活性化して、患者の骨髄由来の一次骨髄腫形質細胞のリダイレクトT細胞による殺傷を誘導できたかである。抗BCMA/抗CD3 TCB抗体が、骨髄腫形質細胞のリダイレクトT細胞による殺傷を誘導する作用を評価するために、全骨髄穿刺液を多発性骨髄腫患者からEDTAコーティングチューブ内に採取し、すぐに細胞培養アッセイに用いた。フローサイトメトリーによって、エフェクター細胞と、全骨髄試料に存在する腫瘍細胞との比率(E:T比)を判定及び測定した。簡潔に述べると、200μlの骨髄試料を96ディープウェルプレートに移した。抗BCMA/抗CD3 TCB抗体と対照抗体の希釈液を滅菌培地において調製し、その調製物10μlを各ウェルに、0.1pM〜30nMの範囲の終濃度になるように加えた。骨髄−抗体懸濁液をゆっくり振とうすることによって混合してから、37℃、5%CO2で48時間インキュベートし、パラフィンフィルムで密封する。インキュベーション期間の経過後、CD138−APCC750/CD38−FITC/CD5−BV510/CD56−PE/CD19−PerCP−Cy7/CD45−V450/BCMA−APC/アネキシンV−PerCP−Cy5.5を含む抗体パネルに基づき調製した対応するFACS抗体溶液20μlを96U底プレートに加えた。蛍光色素標識抗体をBD
Biosciences(カリフォルニア州サンノゼ)及びCaltag Laboratories(カリフォルニア州サンフランシスコ)から購入したとともに、自家作製のAPCコンジュゲート抗ヒトBCMA抗体を使用した。続いて、試料を15分間、遮光下で室温においてインキュベートし、回収し、マルチカラーフローサイトメーターを用いて解析した。CD138+ CD38+ CD45+ CD19− CD56+ 骨髄腫細胞集団にゲーティングを行ったアネキシンV陽性発現を評価することによって、骨髄腫細胞の細胞死を判定した。続いて、骨髄腫細胞死の割合を割り出した。所定のTCB濃度におけるアネキシンV陰性骨髄腫形質細胞の絶対数を測定し、TCBを含めなかった場合のアネキシンV陰性骨髄腫形質細胞の絶対数からその値を減じて、TCBを含めなかった場合のアネキシンV陰性骨髄腫形質細胞の絶対数で除することによって、特定濃度の抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体によって誘導された、患者骨髄腫形質細胞の溶解率も割り出した。抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体の特異性を確認するために、T細胞、B細胞及びNK細胞のような他のタイプの骨髄細胞におけるアネキシンVの発現も測定した。図8に示されているように、患者骨髄腫形質細胞では、濃度依存的な特異的溶解が見られたが、T細胞、B細胞及びNK細胞の溶解は観察されなかった。加えて、CD3のみに結合し、BCMAには結合しない対照TCBは、最も高いTCB抗体濃度において、骨髄腫形質細胞の細胞死を誘導しなかった。表18に示されているように、最高濃度(30nM)におけるアネキシンV陽性患者骨髄骨髄腫細胞の割合は、42−TCBcvでは52.54%、22−TCBcvでは55.72%までに達したのに対して、83A10−TCBcvでは29.31%であったことから、患者骨髄腫形質細胞の殺傷を誘導するには、42−TCBcvと22−TCBcvの方が、83A10−TCBcvよりも強力であると結論付けられた。
抗BCMA/抗CD3 TCB抗体が、骨髄腫患者のCD4+及びCD8+T細胞(すなわち、骨髄浸潤T細胞(MIL))の活性化を誘導するかを評価するために、48時間のインキュベート後のそれぞれの処置群、未処置群及び対照群由来の試料も、CD8/CD69/TIM−3/CD16/CD25/CD4/HLA−DR/PD−1という8個のマーカーを含む抗体パネルに基づき調製したFACS抗体溶液で染色した。続いて、試料を15分間、遮光下で室温においてインキュベートし、回収し、マルチカラーフローサイトメーターを用いて解析した。CD4+及びCD8+T細胞集団にゲーティングを行ったCD25、CD69及び/またはHLA−DR陽性発現を評価することによって、T細胞の活性化を割り出した。続いて、T細胞の活性化の割合を測定した。図11には、多発性骨髄腫患者由来の骨髄浸潤CD4+及びCD8+T細胞でのCD69及びCD25の濃度依存的なアップレギュレーションが示されている。表22には、抗BCMA/抗CD3
TCB抗体によって誘導された、CD4+及びCD8+T細胞でのCD69及びCD25の発現の増大(1人の患者から得たデータ)がまとめられている。
抗BCMA/抗CD3 TCB抗体(83A10−TCBcv、22−TCBcv及び42−TCBcv)が、骨髄腫患者の骨髄浸潤CD4+及びCD8+T細胞のT細胞活性化と機能の向上を誘導するかを評価するために、48時間のインキュベート後のそれぞれの処置群、未処置群及び対照群の培養物から上清を回収し、サイトカインとセリンプロテアーゼの含有量を測定した。サイトカインビーズアレイ(CBA)解析をマルチカラーフローサイトメーターで、メーカーの指示に従って、Human Thl/Th2 Cytokine Kit II(BD#551809)、またはヒトグランザイムB(BD#560304)、ヒトIFN−γ Flex Set(BD#558269)、ヒトTNF−α Flex Set(BD#558273)、ヒトIL−10 Flex Set(BD#558274)、ヒトIL−6 Flex Set(BD#558276)、ヒトIL−4 Flex Set(BD#558272)、ヒトIL−2 Flex Set(BD#558270)というCBA Flex Setを組み合わせたもののいずれかを用いて行う。
抗BCMA/抗CD3 TCBcv抗体の利点のうち、その他の二重特異性抗体((scFv)2(例えば、WO2013072415及びWO2013072406に記載されているようなBCMA×CD3二重特異性T細胞エンゲージャーBiTE(登録商標))など)を上回ることができた明白な利点は、患者の携行するポンプを介して、数週間から数カ月間投与する治療を必要とする(scFv)2の非常に短い排泄半減期(例えば1〜4時間)に比べて、インビボにおいて、排泄半減期がかなり長いこと/クリアランスが低いことであり、これにより、1週間に2回または1回のIVまたはSC投与が可能になり得る(Topp et al.J Clin Oncol 2011;29(18):2493−8)。週に2回または1回の投与により、患者にとっての利便性が大きく向上し、リスク(例えば、ポンプの不具合、カテーテルによる問題など)も大きく低下する。
Fc含有抗BCMA/抗CD3 TCBcv抗体は、排泄半減期が長いことにより、等モル用量で、週に1回のスケジュールで投与した(scFv)2ベースの二重特異性抗体(BCMA50−BiTE(登録商標)など)よりも有効と見られた。PBMC−ヒト化NOGマウスにおいて、H929ヒト骨髄腫異種移植モデルで、83A10−TCBcvとBCMA50−BiTE(登録商標)(WO2013072415及びWO2013072406に記載されているようなもの)のインビボ作用を比較及び評価した。NOGマウスは、ヒト化マウスモデルに適する。常在NK細胞集団を含む免疫細胞を完全に欠損しているので、ヒト異種細胞の腫瘍の生着への許容性が高いからである(Ito et al.Curr Top Microbiol Immunol 2008;324:53−76)。簡潔に述べると、調査の0日目(d0)に、50:50でマトリゲル(フランスのBD Biosciences)を含む100μlのRPMI 1640 培地中の5×106個のヒト骨髄腫細胞株NCI−H929(NCI−H929、ATCC(登録商標)CRL−9068(商標))を、8〜10週齢の免疫不全NOD/Shi−scid IL2rγ(null)(NOG)雌マウス(デンマーク、リユのTaconic)の右側の背側腹側部に皮下(SC)注射した。H929腫瘍細胞のSC移植の24時間〜72時間前に、すべてのマウスに、γ源(1.44Gy、60Co、フランス、ブルトゥニエールのBioMep)で全身照射を行った。15日目(d15)に、NOGマウスに、2×107個のヒトPBMC(500μlのPBS1×(pH7.4)中)を1回腹腔内(IP)注射した。ヒトPBMCの特徴付けは、免疫表現型分析(フローサイトメトリー)によって行った。続いて、Vivo manager(登録商標)というソフトウェア(フランス、クテルノンのBiosystems)を用いて、マウスを慎重に、種々の処置群と対照群(n=9匹/群)に無作為に分け、統計的検定(分散分析)を行って、群間の均質性について検定した。19日目(d19)、すなわち、H929腫瘍細胞をSC注射してから19日後であって、すべてのマウスにおいて、腫瘍体積が少なくとも100〜150mm3に達した時点(ビヒクルで処置した対照群では、平均腫瘍体積が300±161mm3、2.6nM/kgの対照TCBで処置した群では、315±148mm3、2.6nM/kgの83A10−TCBcv群では、293±135mm3、2.6nM/kgのBCMA50−(scFv)2(BCMA50−BiTE(登録商標))群では、307±138mm3)に、抗体による処置を開始した。TCB抗体による処置スケジュールは、83A10−TCBcvですでに得た薬物動態の結果に基づくもので、3週間まで、週に1回IV投与すること(すなわち、TCB抗体を合わせて3回注射すること)から構成されていた。宿主マウスをヒトPBMCで再構成(d19)してから4日後に、1回目の抗BCMA/抗CD3 83A10−TCBcv抗体(それぞれ、2.6nM/kg、0.5mg/kg)を尾静脈注射した。83A10−TCBcv及び対照TCBcvで処置したすべての群のマウスにおいて、各処置の1時間前、2回目の処置の2時間前及び最後に、血液試料を頚静脈/下顎静脈穿刺(麻酔下)によって採取した。凝固活性化剤の入ったチューブ(T MGチューブ、チェリーレッドのキャップ、Capiject(登録商標)、Terumo(登録商標))に、血液試料をすぐに移した。チューブを室温で30分置いて、凝固させた。続いて、クロット/血清の分離のために、チューブを1,300gで5分間遠心分離した。血清アリコートを調製し、液体窒素で急速冷凍し、さらなる解析を行うまで、−80℃で保存した。調査中に、腫瘍体積(TV)をノギスによって測定し、TVの群間比較によって進行を評価した。腫瘍成長率(TG(%)として定義した)は、TG(%)=100×(解析群のTV中央値)/(対照ビヒクル処置群のTV中央値)によって割り出した。倫理的な理由から、TVが少なくとも2000mm3に達したら、マウスを安楽死させた。図15には、(A)対照群(ビヒクル対照(実線)と対照TCB(破線)を含む)、(B)83A10−TCBcv(2.6nM/kg)群、及び(C)BCMA50−BiTE(登録商標)(2.6nM/kg)という実験群ごとに、各個別マウスのTVが示されている。83A10−TCBcv(2.6nM/kg)群では、9匹のマウスのうち6匹(67%)において、腫瘍が退縮し、d19、すなわち、1回目のTCBによる処置を行った日に記録したTVまでを下回り、腫瘍の退縮は、調査終了まで維持された。83A10−TCBcv(2.6nM/kg)処置群のマウスのうち、腫瘍が退縮しなかった3匹は、d19に、TVがそれぞれ、376mm3、402mm3及び522mm3であった。これに対して、週に1回のスケジュールで3週間、等モル用量のBCMA50−BiTE(登録商標)(2.6nM/kg)で処置した9匹のマウスのうち、いずれかの時点に、腫瘍が退縮したマウスはいなかった(0%)。表25には、すべての実験群における経時的な腫瘍体積の進行が示されている。d19〜d43に腫瘍成長率を算出し、83A10−TCBcv(2.6nM/kg)群とBCMA50−BiTE(登録商標)(2.6nM/kg)群との間で比較した(図16)。結果から、83A10−TCBcv(2.6nM/kg)群においては、TG(%)が一貫してかつ有意に低下するとともに、BCMA50−BiTE(登録商標)(2.6nM/kg)と比べると、そのTG(%)が常に低いことが示されている。表26には、19〜43日目における腫瘍体積(TV)の中央値と腫瘍成長率(TG(%))が示されている。全体的な結果から、等モル用量で、週に1回のスケジュールで3週間投与すると、インビボで抗腫瘍活性を誘導するには、83A10−TCBcvの方がBCMA50−BiTE(登録商標)よりも優れていることが明確に示されている。
H929骨髄腫細胞株の代わりに、H929よりも、表面BCMAの発現レベルが低いとともに、一次骨髄腫細胞で検出されるレベルを表しているヒト骨髄腫RPMI−8226細胞株を腫瘍異種移植片として使用する。簡潔に述べると、調査の0日目(d0)に、50:50でマトリゲル(フランスのBD Biosciences)を含む0.9%NaCl溶液200μl中の10×106〜20×106個のヒト骨髄腫細胞株RPMI−8226(ATCC(登録商標)CCL−155(商標))を、8〜10週齢の免疫不全NOD/Shi−scid IL2rγ(null)(NOG)雌マウス(デンマーク、リユのTaconic)の右側の背側腹側部に皮下(SC)注射する。RPMI−8226細胞株のSC移植の24〜72時間前に、すべてのマウスに、γ源(1.44Gy、60Co、フランス、ブルトゥニエールのBioMep)で全身照射を行った。腫瘍体積が少なくとも100〜150mm3に達したのを受けて、9日目(d9)と45日目(d45)との間に1回、NOGマウスに、2×107個のヒトPBMC(PBS1×(pH7.4)500μL中)を1回、腹腔内(IP)注射した。ヒトPBMCの特徴付けは、免疫表現型分析(フローサイトメトリー)によって行う。続いて、Vivo manager(登録商標)というソフトウェア(フランス、クテルノンのBiosystems)を用いて、マウスを慎重に、種々の処置群と対照群(n=9匹/群)に無作為に分け、統計的検定(分散分析)を行って、群間の均質性について検定する。ヒトPBMCのIP注射の少なくとも24時間〜48時間後、かつ、すべてのマウスにおいて、腫瘍体積が少なくとも100〜150mm3に達したら、抗体による処置を開始する。TCB抗体による処置スケジュールは、事前の薬物動態結果に基づいており、3週間まで、1週間に1回または2回、尾静脈を介してIV投与すること(すなわち、TCB抗体を合わせて3回注射すること)から構成されていた。各処置の1時間前、2回目の処置の2時間前及び最後に、血液試料を頚静脈/下顎静脈穿刺(麻酔下)によって採取する。凝固活性化剤の入ったチューブ(T MGチューブ、チェリーレッドのキャップ、Capiject(登録商標)、Terumo(登録商標))に、血液試料をすぐに移す。チューブを室温で30分置いて、凝固させる。続いて、クロット/血清の分離のために、チューブを1,300gで5分間遠心分離する。血清アリコートを調製し、液体窒素で急速冷凍し、さらなる解析を行うまで、−80℃で保存する。調査中に、腫瘍体積(TV)をノギスによって測定し、TVの群間比較によって進行を評価する。腫瘍成長率(TG(%)として定義した)は、TG(%)=100×(解析群のTV中央値)/(対照ビヒクル処置群のTV中央値)によって割り出す。
形質細胞性白血病(PCL)は、原発的に発症するかまたは臨床的に既存の多発性骨髄腫(MM)に起因するかのいずれかである、骨髄腫の白血病異型である。現在利用可能な治療は、かなり限られており、主に、MM薬と化学療法を組み合わせたものから構成されている。これまで、侵襲性と致死性の高いこの疾患用に明示的に登録された療法はなかった。BCMAは、正常形質細胞の生存において不可欠な役割を果たし、形質細胞性白血病患者の形質細胞性白血病の治療に、本発明による抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体を用いることができる。Ficollを用いる密度勾配またはその他の匹敵する方法によって、形質細胞を80%超含む高白血球数の形質細胞性白血病患者試料に由来する、新たな末梢血単核球(PBMC)を単離し、24時間及び48時間、0.1pM〜30nMの抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体濃度または対照抗体とともに、37℃で、加湿空気環境においてインキュベートした。形質細胞性白血病患者の全骨髄穿刺液も試料として用いることができる。各投与時点は、トリプリケートで行う。全集団と、CD138陽性細胞のアネキシン/プロピジウムアイオダイド染色によって、Divaというソフトウェア(BD)を用いるFACSCaliburで、アポトーシスを割り出す。プロピジウムアイオダイド/CD138−FITC二重染色によって、フローサイトメトリー(FACSCalibur、Bectone Dickinson)を用いて、形質細胞及びPBMC全集団の生存能を調べる。FACSDiva Software(Bectone Dickinson)を用いて、データ解析を行う。それぞれの培地対照(MC)のトリプリケートにおける平均に対して、平均値を正規化する。統計的解析では、片側t検定を使用する。10nMの濃度における、PCL細胞の成長の最大阻害率(IMAX10)と、1nMにおいて測定した阻害率(IMAX1)をそれぞれ、培地対照に対する割合で求める。培地対照との比較における、対照TCB抗体の最大阻害率(10または30nM)も測定する。IMAX値(Microsoft Excel(登録商標)、Microsoft Office Professional 2013)を除き、R3.1.19及びBioconductor2.1310を用いて演算処理を行った。対応する統計的検定のP値が5%未満(*)、1%未満(**)または0.1%未満(***)である場合に、作用を統計的に有意であるとみなす。形質細胞性白血病患者試料由来のPBMC CD138+形質細胞において、BCMAの発現も測定するとともに、エフェクター細胞と腫瘍細胞の比率(E:T)も割り出す。図20に示されているように、これらの結果から、2つの形質細胞性白血病患者試料では、培地対照と比べて、42−TCBcvによって、生存骨髄形質細胞白血病細胞が有意に低下した(すなわち、骨髄形質細胞白血病細胞の溶解が多く見られた)ことが明確に示されている。表27には、10nM(IMAX10)及び1nM(IMAX1)の抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体によって誘導された、患者骨髄穿刺液または末梢血由来の形質細胞白血病細胞の最大阻害率(培地対照に対するもの)が示されている。これらの結果から、42−TCBcvが、患者骨髄形質細胞白血病細胞の殺傷を誘導するのに非常に強力であることが示されている。骨髄形質細胞白血病細胞の特異的溶解が、抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体によって誘導されたとともに、骨髄試料で観察された(PCL患者1)にもかかわらず、骨髄微小環境(BMME)は、それぞれの試料において、影響を受けなかった(データは示されていない)。
ALアミロイドーシスは、骨髄の傷害を原因とする希少疾患であり、通常、50〜80歳の人が罹患し、患者の3分の2は男性である。ALアミロイドーシスは、形質細胞による抗体/免疫グロブリンタンパク質の異常な産生によって映し出される。ALアミロイドーシスでは、抗体の軽鎖(LC)がミスフォールディングし、LCのミスフォールディングした異常なタンパク質に起因して、アミロイドが形成される。これらのミスフォールディングアミロイドタンパク質は、組織、神経及び器官の中及び周囲に沈着する。器官、神経または組織にアミロイドが蓄積すると、それらの機能を徐々に損傷し、悪影響を与える。ALアミロイドーシス患者は、1つ以上の器官を冒されることが多い。BCMAは、正常形質細胞の生存において不可欠な役割を果たすので、ALアミロイドーシスにおける形質細胞の殺傷における抗BCMA/抗CD3 T細胞二重特異性抗体の作用を評価するのは非常に理にかなっている。新たに採取したALアミロイドーシス患者全骨髄試料/穿刺液を直接、抗BCMA/抗CD3 TCB抗体に暴露するか、またはCD138磁気マイクロビーズ(ドイツ、ベルギッシュグラートバッハのMiltenyi Biotec)で染色して、autoMACSという細胞分離カラムに通し、十分な残存数のALアミロイドーシス形質細胞(通常、4%超)を含む回収画分を、さらなる実験で用いる。24ウェルプレートにおいて、1ウェル当たり500,000個の細胞をインキュベートし、48時間培養する。0.1pM〜30nMの最終TCB濃度になるように、抗BCMA/抗CD3 TCB抗体と対照抗体の希釈液を各ウェルに加える。各投与時点は、トリプリケートで行う。プロピジウムアイオダイド/CD138−FITC二重染色によって、フローサイトメトリー(FACSCalibur、Bectone Dickinson)を用いて、形質細胞と骨髄微小環境の細胞の生存能を調べる。FACSDiva Software(Bectone Dickinson)を用いて、データ解析を行う。それぞれの培地対照(MC)のトリプリケートにおける平均に対して、平均値を正規化する。統計的解析では、片側t検定を使用する。10nMの濃度における、PCL細胞の成長の最大阻害率(IMAX10)と、1nMにおいて測定した阻害率(IMAX1)をそれぞれ、培地対照に対する割合で求める。培地対照との比較における、対照TCB抗体の最大阻害率(10または30nM)も測定する。IMAX値(Microsoft Excel(登録商標)、Microsoft Office Professional 2013)を除き、R3.1.19及びBioconductor2.1310を用いて演算処理を行った。対応する統計的検定のP値が、5%未満(*)、1%未満(**)または0.1%未満(***)である場合に、作用を統計的に有意であるとみなす。ALアミロイドーシス患者試料由来の骨髄CD138+形質細胞において、BCMAの発現も測定するとともに、エフェクター細胞と腫瘍細胞の比率(E:T)を割り出す。
Claims (15)
- B細胞成熟抗原(BCMA)に特異的に結合する多特異性抗体であって、前記多特異性抗体は、
a)配列番号21のCDR1H領域、配列番号22のCDR2H領域、配列番号17のCDR3H領域、配列番号27のCDR1L領域、配列番号28のCDR2L領域及び配列番号20のCDR3L領域;
b)配列番号21のCDR1H領域、配列番号22のCDR2H領域、配列番号17のCDR3H領域、配列番号25のCDR1L領域、配列番号26のCDR2L領域及び配列番号20のCDR3L領域;または
c)配列番号21のCDR1H領域、配列番号22のCDR2H領域、配列番号17のCDR3H領域、配列番号23のCDR1L領域、配列番号24のCDR2L領域及び配列番号20のCDR3L領域
を含む、多特異性抗体。 - 前記多特異性抗体が、BCMA及びCD3に特異的に結合する、請求項1に記載の多特異性抗体。
- 前記多特異性抗体が、配列番号1のCDR1H領域、配列番号2のCDR2H領域、配列番号3のCDR3H領域、配列番号4のCDR1L領域、配列番号5のCDR2L領域及び配列番号6のCDR3L領域を含むCD3結合部分を含む、請求項2に記載の多特異性抗体。
- 前記CD3結合部分が、配列番号7のVH領域及び配列番号8のVL領域を含む、請求項3に記載の多特異性抗体。
- 前記多特異性抗体が、三重特異性抗体である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の多特異性抗体。
- B細胞成熟抗原(BCMA)に特異的に結合する抗原結合部分であって、前記抗原結合部分は、
a)配列番号21のCDR1H領域、配列番号22のCDR2H領域、配列番号17のCDR3H領域、配列番号27のCDR1L領域、配列番号28のCDR2L領域及び配列番号20のCDR3L領域;
b)配列番号21のCDR1H領域、配列番号22のCDR2H領域、配列番号17のCDR3H領域、配列番号25のCDR1L領域、配列番号26のCDR2L領域及び配列番号20のCDR3L領域;または
c)配列番号21のCDR1H領域、配列番号22のCDR2H領域、配列番号17のCDR3H領域、配列番号23のCDR1L領域、配列番号24のCDR2L領域及び配列番号20のCDR3L領域
を含む、抗原結合部分。 - 前記抗原結合部分が、Fab、Fab’、F(ab’)2またはscFvである、請求項6に記載の抗原結合部分。
- 請求項1〜5のいずれか1項に記載の多特異性抗体、または請求項6もしくは7に記載の抗原結合部分であって、前記多特異性抗体または抗原結合部分が、
a)配列番号10のVH領域及び配列番号14のVL領域;
b)配列番号10のVH領域及び配列番号13のVL領域;または
c)配列番号10のVH領域及び配列番号12のVL領域
を含む、多特異性抗体または抗原結合部分。 - 請求項1〜5もしくは8のいずれか1項に記載の多特異性抗体、または請求項6〜8のいずれか1項に記載の抗原結合部分の調製方法であって、
a)宿主細胞を
b)前記多特異性抗体または抗原結合部分の軽鎖及び重鎖をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換するステップと、
c)前記抗体分子の合成を可能にする条件で、前記宿主細胞を培養するステップと、
d)前記抗体分子を培養物から回収するステップと
を含む、方法。 - 請求項1〜5もしくは8のいずれか1項に記載の多特異性抗体、または請求項6〜8のいずれか1項に記載の抗原結合部分と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
- 医薬として用いるための、請求項10に記載の医薬組成物。
- 形質細胞障害の治療で用いるための、請求項10に記載の医薬組成物。
- 多発性骨髄腫、全身性ループスエリテマトーデス、形質細胞性白血病またはALアミロイドーシスの治療で用いるための、請求項10に記載の医薬組成物。
- 請求項1〜5もしくは8のいずれか1項に記載の多特異性抗体、または請求項6〜8のいずれか1項に記載の抗原結合部分をコードする核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞。
- 抗体−薬物コンジュゲート体であって、前記抗体は、B細胞成熟抗原(BCMA)に特異的に結合し、かつ
a)配列番号21のCDR1H領域、配列番号22のCDR2H領域、配列番号17のCDR3H領域、配列番号27のCDR1L領域、配列番号28のCDR2L領域及び配列番号20のCDR3L領域;
b)配列番号21のCDR1H領域、配列番号22のCDR2H領域、配列番号17のCDR3H領域、配列番号25のCDR1L領域、配列番号26のCDR2L領域及び配列番号20のCDR3L領域;または
c)配列番号21のCDR1H領域、配列番号22のCDR2H領域、配列番号17のCDR3H領域、配列番号23のCDR1L領域、配列番号24のCDR2L領域及び配列番号20のCDR3L領域
を含み、必要に応じて、前記抗体は、治療剤、細胞障害剤または放射性標識とコンジュゲートしている、抗体−薬物コンジュゲート体。
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CN107849137B (zh) | 2015-10-02 | 2021-11-26 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 双特异性抗ceaxcd3 t细胞活化性抗原结合分子 |
JP7325186B2 (ja) | 2015-12-09 | 2023-08-14 | エフ・ホフマン-ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | 抗薬物抗体の形成を減少させるためのii型抗cd20抗体 |
MX2018008347A (es) | 2016-01-08 | 2018-12-06 | Hoffmann La Roche | Metodos de tratamiento de canceres positivos para ace utilizando antagonistas de union a eje pd-1 y anticuerpos biespecificos anti-ace/anti-cd3. |
CN108778329B (zh) | 2016-02-17 | 2022-09-16 | 西雅图基因公司 | Bcma抗体和其用以治疗癌症和免疫病症的用途 |
FI3433280T3 (fi) | 2016-03-22 | 2023-06-06 | Hoffmann La Roche | Proteaasin aktivoimia t-solubispesifisiä molekyylejä |
EP3519437B1 (en) | 2016-09-30 | 2021-09-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Bispecific antibodies against p95her2 |
BR112019008426A2 (pt) * | 2016-11-02 | 2019-09-03 | Engmab Sarl | anticorpo biespecífico contra bcma e cd3 e um fármaco imunológico para uso combinado no tratamento de mieloma múltiplo |
EP3577134A1 (en) | 2017-01-31 | 2019-12-11 | Novartis AG | Treatment of cancer using chimeric t cell receptor proteins having multiple specificities |
WO2018201056A1 (en) | 2017-04-28 | 2018-11-01 | Novartis Ag | Cells expressing a bcma-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor |
WO2018201051A1 (en) | 2017-04-28 | 2018-11-01 | Novartis Ag | Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor |
WO2019035938A1 (en) | 2017-08-16 | 2019-02-21 | Elstar Therapeutics, Inc. | MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF |
JP2020533383A (ja) | 2017-09-14 | 2020-11-19 | グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッドGlaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | 癌の組合せ治療 |
CA3075714A1 (en) | 2017-09-14 | 2019-03-21 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Combination treatment for cancer |
JP2020533380A (ja) | 2017-09-14 | 2020-11-19 | グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッドGlaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | 癌の組合せ治療 |
CR20200195A (es) * | 2017-10-13 | 2020-08-14 | Harpoon Therapeutics Inc | Proteínas de unión a antigenos de maduraciòn de celulas b |
TWI829655B (zh) | 2017-10-18 | 2024-01-21 | 瑞士商諾華公司 | 用於選擇性蛋白質降解的組合物及方法 |
JP2021502979A (ja) | 2017-11-15 | 2021-02-04 | ノバルティス アーゲー | Bcmaターゲティングキメラ抗原受容体、cd19ターゲティングキメラ抗原受容体及び併用療法 |
KR20200096253A (ko) | 2017-11-30 | 2020-08-11 | 노파르티스 아게 | Bcma-표적화 키메라 항원 수용체, 및 이의 용도 |
CN112218651A (zh) | 2018-01-08 | 2021-01-12 | 诺华公司 | 用于与嵌合抗原受体疗法组合的免疫增强rna |
US20210038659A1 (en) | 2018-01-31 | 2021-02-11 | Novartis Ag | Combination therapy using a chimeric antigen receptor |
CN116041516A (zh) * | 2018-02-01 | 2023-05-02 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 全人源的抗b细胞成熟抗原(bcma)单链抗体及其应用 |
AU2019218959A1 (en) | 2018-02-08 | 2020-09-03 | Genentech, Inc. | Bispecific antigen-binding molecules and methods of use |
WO2019160956A1 (en) | 2018-02-13 | 2019-08-22 | Novartis Ag | Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15 |
US11401336B2 (en) | 2018-02-21 | 2022-08-02 | Celgene Corporation | BCMA-binding antibodies and uses thereof |
WO2019190969A1 (en) * | 2018-03-26 | 2019-10-03 | Sutro Biopharma, Inc. | Anti-bcma receptor antibodies, compositions comprising anti bcma receptor antibodies and methods of making and using anti-bcma antibodies |
CN111936514A (zh) | 2018-03-30 | 2020-11-13 | 美勒斯公司 | 多价抗体 |
EP4218762A3 (en) | 2018-05-23 | 2023-08-16 | Celgene Corporation | Antiproliferative compounds and bispecific antibody against bcma and cd3 for combined use |
AU2019277029C1 (en) | 2018-06-01 | 2024-01-04 | Novartis Ag | Binding molecules against BCMA and uses thereof |
AU2019297451A1 (en) | 2018-07-03 | 2021-01-28 | Marengo Therapeutics, Inc. | Anti-TCR antibody molecules and uses thereof |
TW202019479A (zh) * | 2018-08-08 | 2020-06-01 | 美商蜻蜓醫療公司 | 結合bcma、nkg2d及cd16之多特異性結合蛋白及使用方法 |
CN109134665B (zh) * | 2018-08-24 | 2021-06-11 | 上海先博生物科技有限公司 | 一种基于单域抗体的bcma嵌合抗原受体及应用 |
EP3844267A2 (en) | 2018-08-31 | 2021-07-07 | Novartis AG | Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells |
WO2020047449A2 (en) | 2018-08-31 | 2020-03-05 | Novartis Ag | Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells |
JP7425049B2 (ja) | 2018-09-25 | 2024-01-30 | ハープーン セラピューティクス,インク. | Dll3結合タンパク質および使用方法 |
CN109503716B (zh) * | 2018-10-08 | 2021-04-27 | 浙江生研生物科技有限公司 | 一种双特异性嵌合抗原受体分子及其在肿瘤治疗上的应用 |
WO2020089437A1 (en) | 2018-10-31 | 2020-05-07 | Engmab Sàrl | Combination therapy |
WO2020089794A1 (en) | 2018-10-31 | 2020-05-07 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Methods of treating cancer |
WO2020092854A2 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Juno Therapeutics, Inc. | Chimeric antigen receptors specific for g protein-coupled receptor class c group 5 member d (gprc5d) |
CN109678961A (zh) * | 2019-01-15 | 2019-04-26 | 深圳市南科生物工程有限公司 | 一种基于bmca纳米抗体序列的嵌合抗原受体的构建方法及其应用 |
EP3930763A1 (en) | 2019-02-25 | 2022-01-05 | Novartis AG | Mesoporous silica particles compositions for viral delivery |
WO2020191316A1 (en) | 2019-03-21 | 2020-09-24 | Novartis Ag | Car-t cell therapies with enhanced efficacy |
EP3953455A1 (en) | 2019-04-12 | 2022-02-16 | Novartis AG | Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells |
WO2020219742A1 (en) | 2019-04-24 | 2020-10-29 | Novartis Ag | Compositions and methods for selective protein degradation |
WO2020219978A1 (en) | 2019-04-25 | 2020-10-29 | Celgene Corporation | Bcma/cd3 bispecific trivalent t-cell engaging (tce) antibodies and their use to treat hematological malignancies |
CN110229232B (zh) * | 2019-06-19 | 2020-05-19 | 北京智仁美博生物科技有限公司 | 双特异性抗体及其用途 |
KR20220068984A (ko) * | 2019-07-30 | 2022-05-26 | 상하이 한서 바이오메디컬 컴퍼니 리미티드 | 항-bcma 항체, 이의 항원-결합 단편 및 이의 의학적 용도 |
CN114502593A (zh) | 2019-08-06 | 2022-05-13 | 葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司 | 生物药物组合物和相关方法 |
CN112574308A (zh) * | 2019-09-30 | 2021-03-30 | 和铂医药(苏州)有限公司 | 靶向bcma的抗体、双特异性抗体及其用途 |
WO2021068761A1 (zh) * | 2019-10-10 | 2021-04-15 | 苏州亲为药业有限公司 | 靶向bcma的具有人猴交叉的人源化单克隆抗体 |
IL292704A (en) * | 2019-11-05 | 2022-07-01 | Bristol Myers Squibb Co | Methods of treatment with antibodies against bcma and cd3 |
EP4065158A2 (en) | 2019-11-26 | 2022-10-05 | Novartis AG | Chimeric antigen receptors binding bcma and cd19 and uses thereof |
KR20220012314A (ko) * | 2020-01-03 | 2022-02-03 | 살루브리스 (청두) 바이오테크 코., 리미티드 | Bcma에 결합하는 항체 및 그의 용도 |
WO2021136308A1 (en) * | 2020-01-03 | 2021-07-08 | Biosion Inc. | Antibodies binding bcma and uses thereof |
CN111234020B (zh) * | 2020-01-23 | 2020-10-23 | 和铂医药(苏州)有限公司 | 一种bcma结合蛋白及其制备方法和应用 |
CN111171147B (zh) * | 2020-02-11 | 2021-07-20 | 北京康普美特创新医药科技有限责任公司 | 一种抗补体c3分子的全人源单克隆抗体及应用 |
AU2021221123A1 (en) * | 2020-02-12 | 2022-10-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Anti-BCMA therapy in autoimmune disorders |
EP4110377A2 (en) | 2020-02-27 | 2023-01-04 | Novartis AG | Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells |
CA3173394A1 (en) | 2020-02-27 | 2021-09-02 | Novartis Ag | Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells |
MX2022013465A (es) | 2020-04-30 | 2023-01-11 | Bristol Myers Squibb Co | Metodos para tratar eventos adversos relacionados con citocinas. |
EP4165169A1 (en) | 2020-06-11 | 2023-04-19 | Novartis AG | Zbtb32 inhibitors and uses thereof |
WO2022035793A1 (en) * | 2020-08-10 | 2022-02-17 | Precision Biosciences, Inc. | Antibodies and fragments specific for b-cell maturation antigen and uses thereof |
WO2022040586A2 (en) | 2020-08-21 | 2022-02-24 | Novartis Ag | Compositions and methods for in vivo generation of car expressing cells |
WO2022094245A1 (en) | 2020-10-30 | 2022-05-05 | Vor Biopharma, Inc. | Compositions and methods for bcma modification |
CN112321713B (zh) * | 2020-12-31 | 2021-05-25 | 北京艺妙神州医药科技有限公司 | 一种抗bcma的抗体及其应用 |
BR112023020832A2 (pt) | 2021-04-08 | 2023-12-19 | Marengo Therapeutics Inc | Moléculas multifuncionais ligadas a tcr e seus usos |
TW202309294A (zh) | 2021-04-27 | 2023-03-01 | 瑞士商諾華公司 | 病毒載體生產系統 |
US11931420B2 (en) | 2021-04-30 | 2024-03-19 | Celgene Corporation | Combination therapies using an anti-BCMA antibody drug conjugate (ADC) in combination with a gamma secretase inhibitor (GSI) |
BR112023024804A2 (pt) | 2021-05-28 | 2024-02-15 | Glaxosmithkline Ip Dev Ltd | Terapias de combinação para tratar câncer |
KR20240040786A (ko) | 2021-08-03 | 2024-03-28 | 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 | 생물제약 조성물 및 안정한 동위원소 표지 펩티드 맵핑 방법 |
WO2023019398A1 (en) * | 2021-08-16 | 2023-02-23 | Utc Therapeutics (Shanghai) Co., Ltd. | Bcma targetting antibodies, chimeric antigen receptors, and uses thereof |
CA3229746A1 (en) | 2021-08-20 | 2023-02-23 | Novartis Ag | Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells |
CA3233953A1 (en) | 2021-10-05 | 2023-04-13 | Matthew Bruce | Combination therapies for treating cancer |
WO2023144702A1 (en) | 2022-01-25 | 2023-08-03 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Combination therapy for cancer |
WO2024031091A2 (en) | 2022-08-05 | 2024-02-08 | Juno Therapeutics, Inc. | Chimeric antigen receptors specific for gprc5d and bcma |
Family Cites Families (79)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US6410516B1 (en) | 1986-01-09 | 2002-06-25 | President & Fellows Of Harvard College | Nuclear factors associated with transcriptional regulation |
EP0307434B2 (en) | 1987-03-18 | 1998-07-29 | Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. | Altered antibodies |
ATE120761T1 (de) | 1987-05-21 | 1995-04-15 | Creative Biomolecules Inc | Multifunktionelle proteine mit vorbestimmter zielsetzung. |
US5202238A (en) | 1987-10-27 | 1993-04-13 | Oncogen | Production of chimeric antibodies by homologous recombination |
US5204244A (en) | 1987-10-27 | 1993-04-20 | Oncogen | Production of chimeric antibodies by homologous recombination |
US5273743A (en) | 1990-03-09 | 1993-12-28 | Hybritech Incorporated | Trifunctional antibody-like compounds as a combined diagnostic and therapeutic agent |
US5837821A (en) | 1992-11-04 | 1998-11-17 | City Of Hope | Antibody construct |
JP3720353B2 (ja) | 1992-12-04 | 2005-11-24 | メディカル リサーチ カウンシル | 多価および多重特異性の結合タンパク質、それらの製造および使用 |
AU6796094A (en) | 1993-04-29 | 1994-11-21 | Raymond Hamers | Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of (camelidae) |
US5885573A (en) | 1993-06-01 | 1999-03-23 | Arch Development Corporation | Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies |
CN1183802A (zh) | 1994-12-30 | 1998-06-03 | 行星生物技术有限公司 | 在植物中生产含有保护性蛋白质的免疫球蛋白的方法和应用 |
GB9501079D0 (en) | 1995-01-19 | 1995-03-08 | Bioinvent Int Ab | Activation of T-cells |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
EP0739981A1 (en) | 1995-04-25 | 1996-10-30 | Vrije Universiteit Brussel | Variable fragments of immunoglobulins - use for therapeutic or veterinary purposes |
ES2176574T3 (es) | 1996-09-03 | 2002-12-01 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Utilizacion de anticuerpos bi y triespecificos para la induccion de inmunidad tumoral. |
AU7266898A (en) | 1997-04-30 | 1998-11-24 | Enzon, Inc. | Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof |
US6194551B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
AU3657899A (en) | 1998-04-20 | 1999-11-08 | James E. Bailey | Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity |
GB9809951D0 (en) | 1998-05-08 | 1998-07-08 | Univ Cambridge Tech | Binding molecules |
HUP0104865A3 (en) | 1999-01-15 | 2004-07-28 | Genentech Inc | Polypeptide variants with altered effector function |
US20020142000A1 (en) | 1999-01-15 | 2002-10-03 | Digan Mary Ellen | Anti-CD3 immunotoxins and therapeutic uses therefor |
EP2275540B1 (en) | 1999-04-09 | 2016-03-23 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Method for controlling the activity of immunologically functional molecule |
UA74798C2 (uk) | 1999-10-06 | 2006-02-15 | Байоджен Айдек Ма Інк. | Спосіб лікування раку у ссавця за допомогою поліпептиду, що протидіє взаємодії april з його рецепторами |
WO2001024812A1 (en) | 1999-10-06 | 2001-04-12 | N.V. Nutricia | USE OF TRANSFORMING GROWTH FACTOR β AND GROWTH FACTORS IN THE TREATMENT AND PREVENTION OF DISEASES OF THE INTESTINAL MUCOSA |
EP1229125A4 (en) | 1999-10-19 | 2005-06-01 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | PROCESS FOR PRODUCING A POLYPEPTIDE |
EP1332209B1 (en) | 2000-09-08 | 2009-11-11 | Universität Zürich | Collections of repeat proteins comprising repeat modules |
CA2424977C (en) | 2000-10-06 | 2008-03-18 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for purifying antibody |
CA2424602C (en) | 2000-10-06 | 2012-09-18 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Antibody composition-producing cell |
GB0029407D0 (en) | 2000-12-01 | 2001-01-17 | Affitech As | Product |
JP2004533997A (ja) | 2001-02-20 | 2004-11-11 | ザイモジェネティクス,インコーポレイティド | Bcma及びtaciの両者を結合する抗体 |
DK1419179T3 (da) | 2001-08-10 | 2010-06-21 | Univ Aberdeen | Antigenbindingsdomæner fra fisk |
ES2276735T3 (es) | 2001-09-14 | 2007-07-01 | Affimed Therapeutics Ag | Anticuerpos fv multimericos de cadena sencilla en tandem. |
ES2283368T3 (es) | 2001-11-14 | 2007-11-01 | Affimed Therapeutics Ag | Anticuerpos biespecificos anti-cd19 y anti-cd16 y usos de los mismos. |
US7317091B2 (en) | 2002-03-01 | 2008-01-08 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants |
GB0230201D0 (en) | 2002-12-27 | 2003-02-05 | Domantis Ltd | Retargeting |
ES2574993T3 (es) | 2003-01-22 | 2016-06-23 | Roche Glycart Ag | Construcciones de fusión y uso de las mismas para producir anticuerpos con mayor afinidad de unión al receptor de Fc y función efectora |
AU2004215489B2 (en) | 2003-02-25 | 2010-07-15 | Nykode Therapeutics ASA | Modified antibody |
CA2533830A1 (en) | 2003-08-07 | 2005-02-24 | Epitomics, Inc. | Methods for humanizing rabbit monoclonal antibodies |
CA2545603A1 (en) | 2003-11-12 | 2005-05-26 | Biogen Idec Ma Inc. | Neonatal fc receptor (fcrn)-binding polypeptide variants, dimeric fc binding proteins and methods related thereto |
US7235641B2 (en) | 2003-12-22 | 2007-06-26 | Micromet Ag | Bispecific antibodies |
AU2005250055B2 (en) | 2004-06-02 | 2008-09-11 | Adalta Pty Ltd | Binding moieties based on shark IgNAR domains |
ATE425186T1 (de) | 2005-01-05 | 2009-03-15 | F Star Biotech Forsch & Entw | Synthetische immunoglobulindomänen mit in regionen des moleküls, die sich von den die komplementarität bestimmenden bereichen unterscheiden, modifizierten bindeeigenschaften |
US10011858B2 (en) | 2005-03-31 | 2018-07-03 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association |
CA2605024C (en) | 2005-04-15 | 2018-05-22 | Macrogenics, Inc. | Covalent diabodies and uses thereof |
EP1888649A2 (en) | 2005-05-09 | 2008-02-20 | GlycArt Biotechnology AG | Antigen binding molecules having modified fc regions and altered binding to fc receptors |
AU2006281980A1 (en) | 2005-08-15 | 2007-02-22 | Cephalon Australia Pty Ltd | Engineered antibodies with new world primate framework regions |
US20070071745A1 (en) | 2005-08-26 | 2007-03-29 | Pablo Umana | Modified antigen binding molecules with altered cell signaling activity |
EP1931709B1 (en) | 2005-10-03 | 2016-12-07 | Xencor, Inc. | Fc variants with optimized fc receptor binding properties |
AU2006301492B2 (en) | 2005-10-11 | 2011-06-09 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof |
WO2007117600A2 (en) | 2006-04-07 | 2007-10-18 | Macrogenics, Inc. | Combination therapy for treating autoimmune diseases |
JP2009538273A (ja) | 2006-04-14 | 2009-11-05 | トルビオン ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 改造されたFCエフェクター機能を持つ、免疫グロブリン・ヒンジ領域とFc領域とを備える結合タンパク質 |
EP2626372B1 (en) | 2007-03-29 | 2018-03-21 | Genmab A/S | Bispecific antibodies and methods for production thereof |
MX2009010611A (es) | 2007-04-03 | 2010-03-26 | Micromet Ag | Enlazadores biespecificos, especificos para especies. |
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EP3974453A3 (en) * | 2010-11-16 | 2022-08-03 | Amgen Inc. | Agents and methods for treating diseases that correlate with bcma expression |
PT2691417T (pt) | 2011-03-29 | 2018-10-31 | Roche Glycart Ag | Variantes de fc de anticorpos |
US20130101599A1 (en) | 2011-04-21 | 2013-04-25 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Bcma-based stratification and therapy for multiple myeloma patients |
PT3415531T (pt) * | 2011-05-27 | 2023-09-12 | Glaxo Group Ltd | Proteínas de ligação a bcma (cd269/tnfrsf17 |
TWI679212B (zh) * | 2011-11-15 | 2019-12-11 | 美商安進股份有限公司 | 針對bcma之e3以及cd3的結合分子 |
CA2869562C (en) * | 2012-04-11 | 2023-09-12 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen |
JP6636803B2 (ja) * | 2013-02-05 | 2020-01-29 | エンクマフ エスアーエールエル | Bcmaに対する抗体の選択のための方法 |
AR095374A1 (es) * | 2013-03-15 | 2015-10-14 | Amgen Res (Munich) Gmbh | Moléculas de unión para bcma y cd3 |
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