KR20220012314A - Bcma에 결합하는 항체 및 그의 용도 - Google Patents

Bcma에 결합하는 항체 및 그의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20220012314A
KR20220012314A KR1020217041996A KR20217041996A KR20220012314A KR 20220012314 A KR20220012314 A KR 20220012314A KR 1020217041996 A KR1020217041996 A KR 1020217041996A KR 20217041996 A KR20217041996 A KR 20217041996A KR 20220012314 A KR20220012314 A KR 20220012314A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
gly
thr
ser
ala
cys
Prior art date
Application number
KR1020217041996A
Other languages
English (en)
Inventor
존 리
용 탕
성웨이 리
밍 저우
밍지우 천
슈카이 시아
Original Assignee
살루브리스 (청두) 바이오테크 코., 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 살루브리스 (청두) 바이오테크 코., 리미티드 filed Critical 살루브리스 (청두) 바이오테크 코., 리미티드
Publication of KR20220012314A publication Critical patent/KR20220012314A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

인간 BCMA에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부가 제공된다. 상기 항체 또는 그의 항원-결합부를 암호화하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포 및 상기 항체 또는 그의 항원-결합부를 발현하기 위한 방법도 또한 제공된다. 상기 항체 또는 그의 항원-결합부를 포함하는 면역접합체, 이중특이성 분자, 키메라 항원 수용체, 종양용해성 바이러스 및 약학 조성물뿐 아니라, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합부를 사용한 치료 방법이 또한 제공된다.

Description

BCMA에 결합하는 항체 및 그의 용도
본 개시내용은 일반적으로, 높은 친화성 및 기능성 하에 인간 BCMA에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체, 특히 마우스, 키메라 또는 인간화 단일클론 항체, 또는 그의 항원-결합부에 관한 것이다. 상기 항체 또는 그의 항원-결합부를 암호화하는 핵산 분자, 상기 항체 또는 그의 항원-결합부를 발현하기 위한 발현 벡터, 숙주 세포 및 방법도 또한 제공된다. 본 개시내용은 또한 상기 항체 또는 그의 항원-결합부를 포함하는 면역접합체, 이중특이성 분자, 키메라 항원 수용체, 종양용해성 바이러스 및 약학 조성물뿐 아니라, 본 개시내용의 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합부를 사용하는 진단 또는 치료 방법을 제공한다.
종양 괴사인자 수용체 상과 구성원 17(TNFRS17)로도 지칭되는 B 세포 성숙화 항원(BCMA)은 시스테인-풍부 세포외 도메인을 갖는 막관통 단백질이다(문헌[Madry C et al., (1998) Int Immunol. 10(11):1693-702]; 문헌[Laabi Y et al., (1994) Nucleic Acids Res 22(7):1147-54]; 문헌[Laabi Y et al., (1992) EMBO J 11(11):3897-904]). 상기 항원은, 2개의 TNFR 상과 구성원 B-세포 활성화 인자 수용체(BAFF-R) 및 막관통 활성화제 및 칼슘 조절제 및 사이클로필린 리간드 상호작용제(TACI)와 함께, 체액성 면역, B-세포 발생 및 항상성, 특히 B 세포 증식, 생존, 성숙 및 형질 세포(PC)로의 분화를 조절한다(문헌[Mackay F et al., (2003) Annu Rev Immunol 21:231-64]; 문헌[Marsters SA et al., (2000) Curr Biol 10(13):785-8]; 문헌[Gross JA et al., (2000), Nature 404(6781): 995-9]; 문헌[Thompson JS et al., (2000) J Exp Med 192(1):129-35]). BCMA는 또한 수명이 긴 PC 생존에 중요하다.
BCMA는 오직 형질아세포 및 분화된 PC의 표면에서만 발현되며, 정상 PC보다 악성세포 상에서 더 높게 발현된다(문헌[Carpenter RO et al., (2013) Clin Cancer Res 19(8):2048-60]; 문헌[O'Connor BP et al., (2004) J Exp Med 199(1):91-8]; 문헌[Benson MJ et al., (2008) J Immunol 180(6):3655-9]; 문헌[Yang M et al., (2005) J Immunol 175(5):2814-24]; 문헌[Avery DT et al., (2003) J Clin Invest 112(2):286-97]; 문헌[Novak AJ et al., (2004) Blood 103(2):689-94]; 문헌[Chiu A et al., (2007) Blood 109(2): 729-39]; 문헌[Lee L et al., (2018) Blood 131(7):746-58]; 문헌[Carpenter RO et al., (2013) supra]; 문헌[Tai YT et al., (2014) Blood 123(20): 3128-38]; 문헌[Claudio JO et al., (2002) Blood 100(6):2175-86]; 문헌[Seckinger A et al., (2017) Cancer Cell 31(3):396-410]). 상기 BCMA는 백혈병, 림프종 및 다발성 골수종에 연관되었다. 예를 들면, 상승된 혈장 BCMA 수준이 만성 림프구성 백혈병을 가진 환자들에서 관찰되었으며, 이것은 임상 상태와 상관되었다(문헌[Kyle A Udd et al., (2015) Blood. 126(23):2931]). 또한, BCMA는 다발성 골수종 종양 세포에서 고도로 발현되는 것으로 밝혀졌으며, 상기 세포들에서 BCMA 과발현 또는 BCMA에 대한 APRIL 결합은 생체내에서 세포 성장 및 생존을 상당히 촉진한다(문헌[Tai YT et al., (2016) Blood 127(25): 3225-36]; 문헌[Matthes T et al., (2011) Blood 118(7):1838-44]). 또한, APRIL 및 BAFF는, BCMA 및 TACI에 대한 결합을 통해, NFκB 경로를 더 활성화시키고 항세포자멸 단백질(Mcl-1, Bcl-2, Bcl-xL)을 상향조절하여 다발성 골수종 종양 세포를 덱사메타손- 및 혈청 결핍-유도 세포 사멸로부터 보호한다(문헌[Moreaux J et al., (2004) Blood 103(8):3148-57]; 문헌[Neri P et al., (2007) Clin Cancer Res 13(19):5903-9]; 문헌[Shen X et al., (2016) Cell Biochem Funct 34(2):104-10]).
두번째로 만연한 조혈 악성종양으로서, 다발성 골수종은 순환계로 퍼지기 전에 골수내 여러 부위에서; 신생으로 또는 의미불명 단일클론성 감마글로불린병증(MGUS)으로부터 진행되어 발생하는 클론성 B-세포 악성종양이다. 상기 다발성 골수종은 보통 파라단백질 및 파골세포 활성의 증가뿐 아니라, 고칼슘혈증, 혈구감소증, 신기능부전, 과점도 및 말초 신경병증을 특징으로 한다. 정상 항체 수준 및 호중구 수 둘 다의 감소도 또한 일반적으로, 감염에 대해 생명을 위협하는 민감성을 초래한다. CD38 및 SLAMF7을 표적으로 하는 2개의 단일클론 항체들이 재발 및 난치성 다발성 골수종의 치료를 위해 2015년 말에 승인되었으나, 정상 조직에서 두 항원의 광범위한 발현으로 인해 이들의 장기간 임상 사용이 제한되었다. 그에 반해서, BCMA는 그의 제한된 발현 패턴 및 막관통 구조로 인해 잠재적인 치료 표적으로 부상되었다. 첫번째 치료용 항-BCMA 항체-약물 접합체(ADC)인 GSK2857916은 2개의 뮤린 모델에서 다발성 골수종 세포를 신속하게 제거하고 마우스의 생존을 상당히 연장시킨다(문헌[Tai YT et al., (2014) supra]). 또 다른 항-BCMA ADC인 HDP-101은 시험관내에서 피코몰농도 범위에서 다발성 골수종 세포에 대해 세포독성을 나타내어, 양호한 내성하에 유의적인 종양 퇴행을 야기하였다. 여러 항-BCMA CAR-T 세포 치료법들이 또한 인상적인 임상 결과를 보였다(문헌[Shih-Feng Cho et al., (2018) Frontiers in Immunology 9: 1821]).
항체를 포함하여, 더 안전하고 더 강력한 더 많은 BCMA 결합 모이어티를 찾기 위한 노력들이 계속 시도중이다.
본 개시내용은, BCMA(예를 들면, 인간 BCMA, 및 원숭이 BCMA)에 결합하고 GSK2857916의 BCMA-결합부와 같은 선행 기술의 항-BCMA 항체에 비해 BCMA에 대해 필적하거나 더 높은 결합 친화성을 갖는, 단리된 단일클론 항체, 예를 들면, 마우스, 인간, 키메라 또는 인간화 단일클론 항체, 또는 그의 항원-결합부를 제공한다.
본 개시내용의 항체 또는 항원-결합부는 BCMA 단백질의 검출 및 BCMA 연관 질환, 예를 들어, 암, 자가면역질환 및 감염성 질환의 치료 및 예방을 포함한 다양한 용도들에 사용될 수 있다.
따라서, 한 양태에서, 본 개시내용은 CDR1 영역, CDR2 영역 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 갖는, BCMA에 결합하는 단리된 단일클론 항체(예를 들면, 마우스, 키메라 또는 인간화 항체) 또는 그의 항원-결합부에 관한 것으로, 이때 상기 CDR1 영역, CDR2 영역 및 CDR3 영역은 (1) 서열번호 1 (X1=H 또는 F), 3 및 5 각각; 또는 (2) 서열번호 2, 4 및 6 각각에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
한 양태에서, 본 개시내용의 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부는 서열번호 13, 14 (X1=I, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F; X1=V, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F; X1=I, X2=V, X3=T, X4=C, X5=F; X1=I, X2=A, X3=S, X4=C, X5=F; X1=I, X2=A, X3=Y, X4=C, X5=Y; X1=V, X2=V, X3=S, X4=S, X5=Y; 또는 X1=V, X2=V, X3=S, X4=C, X5=Y), 15, 16 (X1=I, X2=N, X3=F; X1=V, X2=N, X3=F; X1=I, X2=T, X3=F; X1=I, X2=N, X3=Y; 또는 X1=V, X2=T, X3=Y), 또는 17에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 이때 상기 항체 또는 그의 항원 결합부는 BCMA에 결합한다.
한 양태에서, 본 개시내용의 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부는 CDR1 영역, CDR2 영역 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이때 상기 CDR1 영역, CDR2 영역 및 CDR3 영역은 (1) 서열번호 7 (X1=H 또는 F), 9 (X1=N 또는 T) 및 11 각각; 또는 (2) 서열번호 8, 10 및 12 각각에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 CDR1 영역, CDR2 영역 및 CDR3 영역은 (1) 서열번호 7 (X1=H), 9 (X1=N) 및 11 각각; (2) 서열번호 7 (X1=F), 9 (X1=T) 및 11 각각; 또는 (3) 서열번호 8, 10 및 12 각각에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
한 양태에서, 본 개시내용의 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부는 서열번호 18, 19 (X1=L, X2=P, X3=P, X4=W, X5=Y; X1=M, X2=P, X3=P, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=A, X3=P, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=P, X3=L, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=P, X3=P, X4=L, X5=Y; X1=L, X2=P, X3=P, X4=W, X5=F; 또는 X1=M, X2=A, X3=P, X4=L, X5=F), 20, 21 (X1=S, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=F; X1=A, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=L, X3=W, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=P, X3=L, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=P, X3=W, X4=F, X5=F; X1=S, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=Y; X1=A, X2=P, X3=L, X4=F, X5=Y) 또는 22에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이때 상기 항체 또는 그의 항원-결합부는 BCMA에 결합한다.
한 양태에서, 본 개시내용의 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부는 각각 CDR1 영역, CDR2 영역 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이때 상기 중쇄 가변 영역 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 경쇄 가변 영역 CDR1, CDR2 및 CDR3은 (1) 서열번호 1 (X1=H), 3, 5, 7 (X1=H), 9 (X1=N) 및 11 각각; (2) 서열번호 1 (X1=F), 3, 5, 7 (X1=F), 9 (X1=T) 및 11 각각; 또는 (3) 서열번호 2, 4, 6, 8, 10 및 12 각각에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산을 포함하고, 이때 상기 항체 또는 그의 항원-결합부는 BCMA에 결합한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부는, (1) 서열번호 13 및 18 각각; (2) 서열번호 14 (X1=I, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F; X1=V, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F; X1=I, X2=V, X3=T, X4=C, X5=F; X1=I, X2=A, X3=S, X4=C, X5=F; X1=I, X2=A, X3=Y, X4=C, X5=Y; X1=V, X2=V, X3=S, X4=S, X5=Y; 또는 X1=V, X2=V, X3=S, X4=C, X5=Y) 및 19 (X1=L, X2=P, X3=P, X4=W, X5=Y) 각각; (3) 서열번호 14 (X1=I, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F) 및 19 (X1=M, X2=P, X3=P, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=A, X3=P, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=P, X3=L, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=P, X3=P, X4=L, X5=Y; 또는 X1=L, X2=P, X3=P, X4=W, X5=F) 각각; (4) 서열번호 14 (X1=I, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F; 또는 X1=V, X2=V, X3=S, X4=C, X5=Y) 및 19 (X1=M, X2=A, X3=P, X4=L, X5=F) 각각; (5) 서열번호 15 및 20 각각; (6) 서열번호 16 (X1=I, X2=N, X3=F; X1=V, X2=N, X3=F; X1=I, X2=T, X3=F; X1=I, X2=N, X3=Y; 또는 X1=V, X2=T, X3=Y) 및 21 (X1=S, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=F) 각각; (7) 서열번호 16 (X1=I, X2=N, X3=F) 및 21 (X1=A, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=L, X3=W, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=P, X3=L, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=P, X3=W, X4=F, X5=F; 또는 X1=S, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=Y) 각각; (8) 서열번호 16 (X1=I, X2=N, X3=F; 또는 X1=V, X2=T, X3=Y) 및 21 (X1=A, X2=P, X3=L, X4=F, X5=Y) 각각; 또는 (9) 서열번호 17 및 22 각각에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부는 다이설파이드 결합에 의해 연결된 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역을 포함하고 상기 경쇄는 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하며, 이때 상기 중쇄 가변 영역의 C 말단은 중쇄 불변 영역의 N 말단에 연결되고, 상기 경쇄 가변 영역의 C 말단은 경쇄 불변 영역의 N 말단에 연결되고, 상기 중쇄 가변 영역 및 상기 경쇄 가변 영역은 전술한 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항체 또는 그의 항원-결합부는 BCMA에 결합한다. 상기 중쇄 불변 영역은, 예를 들면, 서열번호 23에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG1 불변 영역일 수 있고, 상기 경쇄 불변 영역은, 예를 들면, 서열번호 24에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 인간 카파 불변 영역일 수 있다. 서열번호 23 및 24의 아미노산 서열들은 서열번호 28 및 29 각각에 나타낸 뉴클레오티드 서열들에 의해 암호화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하거나 또는 이들로 이루어지며, 이때 각각의 중쇄는 중쇄 불변 영역, 중쇄 가변 영역 또는 상기 언급한 CDR 서열을 포함하고, 각각의 경쇄는 경쇄 불변 영역, 경쇄 가변 영역 또는 상기 언급한 CDR 서열을 포함하며, 상기 항체는 BCMA에 결합한다. 본 개시내용의 항체는, 예를 들면, IgG1, IgG2 또는 IgG4 이소타입의 전장 항체일 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다. 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 단일쇄 가변 단편(scFv) 항체 또는 항체 단편, 예를 들어, Fab 또는 Fab'2 단편일 수 있다.
본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부는, 선행 기술의 항-BCMA 항체, 예를 들어, GSK2857916의 BCMA 결합부보다 인간 BCMA 및 원숭이 BCMA에 대해, 더 높지 않은 경우, 필적하는 결합 친화성/능력을 가지며, BCMA에 대한 BAFF 또는 APRIL의 결합을 억제한다.
본 개시내용은 또한 세포독소와 같은 치료제에 결합된, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부를 포함하는 면역접합체를 제공한다. 본 개시내용은 또한 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부와 상이한 결합 특이성을 갖는 제 2의 기능성 모이어티(예를 들면, 제 2 항체)에 연결된, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부를 포함하는 이중특이성 분자를 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부는 키메라 항원 수용체(CAR)의 일부로 될 수 있다. T 세포와 같은 키메라 항원 수용체를 포함하는 면역 세포도 또한 제공된다. 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부는 또한 종양용해성 바이러스에 의해 암호화되거나 또는 상기 바이러스와 함께 사용될 수 있다.
본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부, 또는 면역접합체, 이중특이성 분자, 종양용해성 바이러스, CAR 또는 CAR-T 세포, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물도 또한 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 약학 조성물은 항-종양제 및/또는 사이토카인을 추가로 함유할 수 있다.
본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부를 암호화하는 핵산 분자뿐 아니라, 상기 핵산을 포함하는 발현 벡터 및 상기 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포도 또한 본 개시내용에 포함된다. (i) 숙주 세포에서 항체를 발현시키고, (ii) 숙주 세포 또는 그의 세포 배양물로부터 상기 항체를 단리하는 단계를 포함하는, 상기 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 사용하여 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합부를 제조하는 방법도 또한 제공된다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은, 대상에게 치료 효과량의 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부를 투여하는 것을 포함하는, 증가된 BCMA 발현과 연관된 종양을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 종양은 백혈병, 림프종, 다발성 골수종 등을 포함한 비-고형 종양이거나, 또는 고형 종양일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 본 개시내용의 조성물, 이중특이성 분자, 면역접합체, 예를 들어, 항체-약물 접합체, CAR-T 세포, 또는 항체-암호화 또는 항체-함유 종양용해성 바이러스, 또는 양자택일로 대상에서 이들을 발현할 수 있는 핵산 분자 또는 벡터를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1개의 추가 항암 항체, 예를 들어, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체, 항-CTLA-4 항체 및/또는 항-TIM 3 항체를 본 개시내용의 상기 항체 또는 그의 항원-결합부와 함께 투여할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부는 사이토카인(예를 들면, IL-2, IL-21, TNF-α, IFN-γ 및/또는 IL-4), 또는 공자극 항체(예를 들어, 항-CD137 항체, 항-OX40 항체 및/또는 항-GITR 항체)와 함께 투여된다. 본 개시내용의 항체는, 예를 들면, 마우스, 인간, 키메라 또는 인간화 항체일 수 있다.
본 개시내용의 다른 특징들 및 이점들은 하기의 상세한 설명 및 실시예로부터 명백할 것이며, 이들은 제한하는 것으로 이해해서는 안된다. 본 출원 전체에 걸쳐 인용된 모든 참조문헌, 진뱅크(Genbank) 등록사항, 특허 및 공개된 특허출원의 내용들은 명백히 본원에 참고로 도입된다.
도 1A 및 1B는 인간 BCMA에 대한 마우스 항체들 B1A1 및 B1C1 (A), 및 B1G3 (B)의 결합 능력을 보여준다.
도 2A 및 2B는 인간 BCMA-BAFF 상호작용에 대한 마우스 항체들 B1A1 및 B1C1 (A), 및 B1G3 (B)의 차단 능력을 보여준다.
도 3A 및 3B는 벤치마크(Benchmark)-인간 BCMA 결합을 차단하는 마우스 항체들 B1A1 및 B1C1 (A), 및 B1G3 (B)의 능력을 보여준다.
도 4A 내지 4C는 인간 BCMA에 대한 인간화 항체 huB1G3-V1 내지 huB1G3-V5 (A), huB1G3-V6 내지 huB1G3-V10 (B) 및 huB1G3-V11 내지 huB1G3-V15 (C)의 결합 능력을 보여준다.
도 5A 내지 5C는 인간 BCMA에 대한 인간화 항체 huB1C1-V1 내지 huB1C1-V7 (A), huB1C1-V8 내지 huB1C1-V9 (B) 및 huB1C1-V11 내지 huB1C1-V13 (C)의 결합 능력을 보여준다.
도 6은 인간 BCMA에 대한 인간화 항체 huB1G3-V13의 결합 능력을 보여준다.
도 7은 인간 BCMA-BAFF 상호작용에 대한 인간화 항체 huB1G3-V13의 차단 능력을 보여준다.
도 8은 벤치마크-인간 BCMA 상호작용에 대한 인간화 항체 huB1G3-V13의 차단 능력을 보여준다.
도 9는 인간 BCMA에 대한 인간화 항체 huB1C1-V13의 결합 능력을 보여준다.
도 10은 인간 BCMA-BAFF 상호작용에 대한 인간화 항체 huB1C1-V13의 차단 능력을 보여준다.
도 11은 벤치마크-인간 BCMA 상호작용에 대한 인간화 항체 huB1C1-V13의 차단 능력을 보여준다.
본 개시내용이 보다 용이하게 이해될 수 있도록, 특정 용어들을 먼저 정의한다. 추가의 정의들은 상세한 설명 전체에 걸쳐 나타나 있다.
용어 "BCMA"는 B 세포 성숙화 항원 또는 종양 괴사 인자 수용체 상과 구성원 17을 지칭한다. 용어 "BCMA"는 변이체, 동형, 동족체, 이종상동체 및 동종상동체를 포함한다. 예를 들면, 특정한 경우에, 인간 BCMA 단백질에 특이적인 항체는 원숭이 같은 인간이 아닌 종으로부터의 BCMA 단백질과 교차-반응할 수 있다. 다른 실시양태에서, 인간 BCMA 단백질에 특이적인 항체는 인간 BCMA 단백질에 완전히 특이적일 수 있고 다른 종에 또는 다른 유형의 단백질에 대해서는 교차-반응성을 나타내지 않을 수 있거나, 또는 모든 다른 종으로부터는 아니지만 특정한 다른 종으로부터의 BCMA와 교차-반응할 수 있다.
용어 "인간 BCMA"는 NP_001183.2의 진뱅크 수탁번호를 갖는 인간 BCMA의 아미노산 서열 또는 서열번호 25에 나타낸 아미노산 서열과 같은, 인간으로부터의 아미노산 서열을 갖는 BCMA 단백질을 지칭한다. 용어 "원숭이 또는 레서스원숭이 BCMA" 및 "마우스 BCMA"는 원숭이 및 마우스 BCMA 서열 각각, 예를 들면, 진뱅크 수탁번호 XP_001106892.1 및 NP_035738.1 각각을 갖는 아미노산 서열을 갖는 원숭이 및 마우스 BCMA를 지칭한다.
본원에 언급된 바와 같은 용어 "항체"는 전 항체 및 그의 임의의 항원 결합 단편(즉, "항원-결합부") 또는 단일쇄를 포함한다. 전 항체는 다이설파이드 결합에 의해 서로 연결된 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 상기 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3으로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 상기 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인 CL로 이루어진다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 지칭되는, 보다 더 보존되는 영역들이 산재되어 있는, 상보성 결정 영역(CDR)으로 지칭되는, 초가변성을 갖는 영역들로 더 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단에서 카복시-말단으로 다음 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4로 배열된, 3개의 CDR 및 4개의 FR로 이루어진다. 상기 중쇄 및 경쇄의 가변 영역들은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체들의 불변 영역들은 전형적인 보체계의 면역계(예를 들면, 작동체 세포) 및 제 1 보체(C1q)의 다양한 세포들을 포함하여, 숙주 조직 또는 인자들에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 항체의 "항원-결합부"(또는 간단히 "항체 부분")란 용어는 항원(예를 들면, BCMA 단백질)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편들에 의해 수행될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 항체의 "항원-결합부"란 상기 용어 안에 포함된 결합 단편들의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인들로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 다이설파이드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 가지의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편(문헌[Ward et al., (1989) Nature 341:544-546]); (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR); 및 (viii) 단일 가변 도메인 및 2개의 불변 도메인을 함유하는 중쇄 가변 영역인 나노바디를 포함한다. 더욱이, Fv 단편의 2개 도메인, VL 및 VH는 별개의 유전자들에 의해 암호화되지만, 이들은, 재조합 방법을 이용하여, VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자(단일 쇄 Fv(scFv)로 알려짐; 예를 들면, 문헌[Bird et al., (1988) Science 242:423-426]; 및 문헌[Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883] 참조)를 형성하는 단일 단백질 쇄로 만들어 질 수 있게 하는 합성 링커에 의해 연결될 수 있다. 상기 단일 쇄 항체는 또한 항체의 "항원-결합부"란 용어에 포함되는 것이다. 상기 항체 단편들은 당해 분야의 숙련가들에게 공지된 통상의 기술들을 이용하여 수득되며, 상기 단편들은 미손상 항체들과 동일한 방식으로 유용성을 검사한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체들이 실질적으로 없는 항체를 지칭하는 것이다(예를 들면, BCMA 단백질에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 BCMA 단백질이 아닌 다른 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, 인간 BCMA 단백질에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 종으로부터의 BCMA 단백질과 같은 다른 항원들에 대해 교차-반응성을 가질 수 있다. 게다가, 단리된 항체는 실질적으로 다른 세포 물질 및/또는 화학물질을 함유하지 않을 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단일클론 항체" 또는 "단일클론 항체 조성물"은 단일 분자 조성의 항체 분자들의 제제를 지칭한다. 단일클론 항체 조성물은 단일 결합 특이성 및 특정 에피토프에 대한 친화성을 나타낸다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "마우스 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역이 둘 다 마우스 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것이다. 더욱이, 상기 항체가 불변 영역을 함유하는 경우, 상기 불변 영역은 또한 마우스 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본 개시내용의 마우스 항체는 마우스 생식세포계열 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(예를 들면, 시험관내 랜덤 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "마우스 항체"는 또 다른 포유동물 종의 생식세포계열로부터 유래된 CDR 서열이 마우스 프레임워크 서열상에 그래프트된 항체를 포함하지는 않는 것이다.
용어 "키메라 항체"는 비-인간 공급원으로부터의 유전 물질을 인간으로부터의 유전 물질과 조합시켜 제조된 항체를 지칭한다. 또는, 보다 일반적으로, 키메라 항체는 특정 종으로부터의 유전 물질을 또 다른 종으로부터의 유전 물질과 함께 갖는 항체이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간화 항체"는 그 단백질 서열이 인간에서 자연적으로 생성된 항체 변이체에 대한 유사성을 증가시키도록 변형된 비-인간 종으로부터의 항체를 지칭한다.
용어 "이소타입"은 중쇄 불변 영역 유전자들에 의해 암호화되는 항체 부류(예를 들면, IgM 또는 IgG1)를 지칭한다.
"항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"란 어구는 본원에서 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 호환적으로 사용된다.
본원에서 사용된 바와 같이, "인간 BCMA에 특이적으로 결합하는" 항체는 인간 BCMA 단백질(및 아마도 하나 이상의 비-인간 종으로부터의 BCMA 단백질)에 결합하지만 비-BCMA 단백질에는 실질적으로 결합하지 않는 항체를 지칭하는 것이다. 바람직하게, 상기 항체는 "높은 친화성" 하에, 즉 5.0 x10-8 M 이하, 보다 바람직하게는 1.0 x 10-8 M 이하, 보다 바람직하게는 7.0 x 10-9 M 이하의 KD 하에 인간 BCMA에 결합한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 단백질 또는 세포에 "실질적으로 결합하지 않는다"란 용어는 단백질 또는 세포에 결합하지 않거나 또는 단백질 또는 세포에 높은 친화성 하에 결합하지 않는, 즉, 1.0 x 10-6 M 이하, 보다 바람직하게는 1.0 x 10-5 M 이하, 보다 바람직하게는 1.0 x 10-4 M 이하, 보다 바람직하게는 1.0 x 10-3 M 이하, 보다 더 바람직하게는 1.0 x 10-2 M 이하의 KD 하에 단백질 또는 세포에 결합하는 것을 의미한다.
IgG 항체에 대한 "높은 친화성"이란 용어는 표적 항원에 대해 1.0 x 10-6 M 이하, 보다 바람직하게는 5.0 x 10-8 M 이하, 보다 더 바람직하게는 1.0 x 10-8 M 이하, 보다 더 바람직하게는 7.0 x 10-9 M 이하, 보다 더 바람직하게는 1.0 x 10-9 M 이하의 KD를 갖는 항체를 지칭한다. 그러나, "높은 친화성" 결합은 다른 항체 이소타입에 대해 달라질 수 있다. 예를 들면, IgM 이소타입에 대한 "높은 친화성" 결합은 10-6 M 이하, 보다 바람직하게는 10-7 M 이하, 보다 더 바람직하게는 10-8 M 이하의 KD를 갖는 항체를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "Kassoc" 또는 "Ka"는 특정한 항체-항원 상호작용의 결합 속도를 지칭하는 것인 반면, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "Kdis" 또는 "Kd"는 특정한 항체-항원 상호작용의 해리 속도를 지칭하는 것이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "KD"는 Kd 대 Ka의 비(즉, Kd/Ka)로부터 수득되고 몰 농도(M)로 나타내는 해리 상수를 지칭하는 것이다. 항체에 대한 KD 값은 당해 분야에서 확립되어 있는 방법들을 이용하여 측정할 수 있다. 항체의 KD를 측정하기 위한 바람직한 방법은 표면 플라즈몬 공명을 사용하는 것, 바람직하게는 비아코어(Biacore)™ 시스템과 같은 바이오센서 시스템을 사용하는 것이다.
반-최대 효과 농도로도 알려진 용어 "EC50"은 기준선과 특정 노출 시간 후 최대치 사이 중간의 반응을 유도하는 항체의 농도를 지칭한다.
반-최대 억제 농도로도 알려진 용어 "IC50"은 특정한 생물학적 또는 생화학적 기능을 항체 부재시에 비해 50% 억제하는 항체의 농도를 지칭한다.
용어 "대상"은 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 포함한다. 용어 "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들면, 포유동물 및 비-포유동물, 예를 들어, 비-인간 영장류, 양, 개, 고양이, 소, 말, 닭, 양서류 및 파충류를 포함하지만, 비-인간 영장류, 양, 개, 고양이, 소 및 말과 같은 포유동물이 바람직하다.
용어 "치료 효과량"은 질환 또는 병태(예를 들어, 암)와 연관된 증상을 방지 또는 개선하고/하거나 질환 또는 병태의 중증도를 감소시키기에 충분한, 본 개시내용의 항체의 양을 의미한다. 치료 효과량은 치료되는 병태의 맥락 안에서 이해되며, 이때 실제 효과량은 당해 분야의 숙련가에 의해 용이하게 파악된다.
본 개시내용의 다양한 양태들을 하기의 세부항목들에서 더 상세히 기술한다.
인간 BCMA에 대한 증가된 결합 친화성 및 더 우수한 항-종양 효과를 갖는 항-BCMA 항체
본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부는, 전술한 항-BCMA 항체, 예를 들어, GSK2857916의 BCMA-결합부에 비해, 더 우수하지 않다면, 필적하는 결합 친화성/능력 하에 인간 BCMA에 특이적으로 결합한다.
추가의 기능적 성질은 BCMA-BAFF 상호작용 또는 BCMA-APRIL 상호작용을 차단하는 능력을 포함한다.
본 개시내용의 바람직한 항체는 인간화 단일클론 항체이다. 추가로 또는 양자택일로, 항체는, 예를 들면, 키메라 단일클론 항체일 수 있다.
단일클론 항-BCMA 항체
본 개시내용의 항체는 구조적으로 및 화학적으로 하기에 및 하기 실시예에서 기술되는 바와 같이 특성화되는 단일클론 항체이다. 상기 항체의 중쇄/경쇄 가변 영역의 아미노산 서열번호는 하기 표 1에 요약되어 있으며, 일부 항체들은 동일한 VH 또는 VL을 공유한다. 상기 항체들에 대한 중쇄 불변 영역은, 예를 들면, 서열번호 23에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역일 수 있고, 상기 항체들에 대한 경쇄 불변 영역은, 예를 들면, 서열번호 24에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 인간 카파 불변 영역일 수 있다. 상기 항체들은 또한 마우스 IgG1 중쇄 불변 영역 및 마우스 카파 불변 영역을 함유할 수 있다.
표 1의 중쇄 가변 영역 CDR 및 경쇄 가변 영역 CDR은 카밧(Kabat) 번호 체계에 의해 정의되었다. 그러나, 당해 분야에 공지된 바와 같이, CDR 영역들은 또한, 중쇄/경쇄 가변 영역 서열을 기반으로, 초티아(Chothia), 및 IMGT, AbM 또는 콘택트(Contact) 번호 체계/방법과 같은 다른 체계들에 의해 결정될 수도 있다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
인간 BCMA에 결합하는 다른 항-BCMA 항체들의 VH 및 VL 서열(또는 CDR 서열)을 본 개시내용의 항-BCMA 항체의 VH 및 VL 서열(또는 CDR 서열)과 "혼합 및 매치"할 수 있다. 바람직하게, VH 및 VL 쇄(또는 상기 쇄 안의 CDR)를 혼합 및 매치하는 경우, 특정한 VH/VL 쌍으로부터의 VH 서열을 구조적으로 유사한 VH 서열로 대체한다. 유사하게, 바람직하게는 특정한 VH/VL 쌍으로부터의 VL 서열을 구조적으로 유사한 VL 서열로 대체한다.
따라서, 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합부는 다음을 포함한다:
(a) 상기 표 1에 열거된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
(b) 상기 표 1에 열거된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 또는 인간 BCMA에 특이적으로 결합하는 또 다른 항-BCMA 항체의 VL.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합부는 다음을 포함한다:
(a) 상기 표 1에 열거된 중쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역; 및
(b) 상기 표 1에 열거된 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역, 또는 인간 BCMA에 특이적으로 결합하는 또 다른 항-BCMA 항체의 CDR.
또 다른 실시양태에서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합부는, 인간 BCMA와 결합하는 다른 항체들의 CDR들, 예를 들면, 중쇄 가변 영역으로부터의 CDR1 및/또는 CDR3과 조합된 항-BCMA 항체의 중쇄 가변 CDR2 영역, 및/또는 상이한 항-BCMA 항체의 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3을 포함한다.
또한, CDR1 및/또는 CDR2 도메인(들)과 무관하게 CDR3 도메인은 단독으로 동족 항원에 대한 항체의 결합 특이성을 결정할 수 있고 공통 CDR3 서열을 기반으로 동일한 결합 특이성을 갖는 여러 항체들이 예상대로 생성될 수 있음은 당해 분야에서 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌[Klimka et al.,, British J. of Cancer 83(2):252-260 (2000)]; 문헌[Beiboer et al.,, J. Mol. Biol. 296:833-849 (2000)]; 문헌[Rader et al.,, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95:8910-8915 (1998)]; 문헌[Barbas et al.,, J. Am. Chem. Soc. 116:2161-2162 (1994)]; 문헌[Barbas et al.,, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92:2529-2533 (1995)]; 문헌[Ditzel et al.,, J. Immunol. 157:739-749 (1996)]; 문헌[Berezov et al.,, BIAjournal 8: Scientific Review 8 (2001)]; 문헌[Igarashi et al.,, J. Biochem (Tokyo) 117:452-7 (1995)]; 문헌[Bourgeois et al.,, J. Virol 72:807-10 (1998)]; 문헌[Levi et al.,, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:4374-8 (1993)]; 문헌[Polymenis and Stoller, J. Immunol. 152:5218-5329 (1994)] 및 문헌[Xu and Davis, Immunity 13:37-45 (2000)]을 참조하시오. 또한, 미국특허 제 6,951,646 호; 미국특허 제 6,914,128 호; 미국특허 제 6,090,382 호; 미국특허 제 6,818,216 호; 미국특허 제 6,156,313 호; 미국특허 제 6,827,925 호; 미국특허 제 5,833,943 호; 미국특허 제 5,762,905 호 및 미국특허 제 5,760,185 호를 참조하시오. 이들 참조문헌 각각은 전체로 본원에 참고로 도입된다.
따라서, 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 항-BCMA 항체의 중쇄 가변 영역의 CDR2 및 적어도 항-BCMA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR3, 또는 또 다른 항-BCMA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR3을 포함하며, 이때 상기 항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합할 수 있다. 이들 항체는 바람직하게는 (a) BCMA와 결합을 두고 경쟁하고; (b) 기능적 특성들을 유지하고; (c) 동일한 에피토프에 결합하고/하거나; (d) 본 개시내용의 항-BCMA 항체와 유사한 결합 친화성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 항체는 또한 항-BCMA 항체의 경쇄 가변 영역의 CDR2, 또는 또 다른 항-BCMA 항체의 경쇄 가변 영역의 CDR2를 포함할 수 있으며, 이때 상기 항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 항-BCMA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR1, 또는 또 다른 항-BCMA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR1을 포함할 수 있으며, 이때 상기 항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합할 수 있다.
보존적 변형
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는, 하나 이상의 보존적 변형에 의해 본 개시내용의 항-BCMA 항체와 상이한 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열들의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 항원 결합을 제거하지 않는 특정한 보존적 서열 변형이 이루어질 수 있는 것으로 당해 분야에서 인지된다. 예를 들면, 문헌[Brummell et al., (1993) Biochem 32:1180-8]; 문헌[de Wildt et al., (1997) Prot. Eng. 10:835-41]; 문헌[Komissarov et al., (1997) J. Biol. Chem. 272:26864-26870]; 문헌[Hall et al., (1992) J. Immunol. 149:1605-12]; 문헌[Kelley and O'Connell (1993) Biochem.32:6862-35]; 문헌[Adib-Conquy et al., (1998) Int. Immunol.10:341-6] 및 문헌[Beers et al., (2000) Clin. Can. Res. 6:2835-43]을 참조하시오.
따라서, 한 실시양태에서, 상기 항체는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 이때
(a) 상기 중쇄 가변 영역 CDR1 서열은 상기 표 1에 열거된 서열 및/또는 그의 보존적 변형을 포함하고/하거나;
(b) 상기 중쇄 가변 영역 CDR2 서열은 상기 표 1에 열거된 서열 및/또는 그의 보존적 변형을 포함하고/하거나;
(c) 상기 중쇄 가변 영역 CDR3 서열은 상기 표 1에 열거된 서열 및/또는 그의 보존적 변형을 포함하고/하거나;
(d) 상기 경쇄 가변 영역 CDR1 및/또는 CDR2 및/또는 CDR3 서열은 상기 표 1에 열거된 서열(들); 및/또는 그의 보존적 변형을 포함하고;
(e) 상기 항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합한다.
본 개시내용의 항체는, 하기의 전술한 기능적 성질들, 예를 들어, 인간 BCMA에 대한 고 친화성 결합, 및 BCMA-발현 세포에 대해 ADCC 또는 CDC를 유도하는 능력 중 하나 이상을 갖는다.
다양한 실시양태에서, 상기 항체는, 예를 들면, 마우스, 인간, 인간화 또는 키메라 항체일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "보존적 서열 변형"은 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합 특성에 유의적으로 영향을 미치거나 결합 특성을 변화시키지 않는 아미노산 변형을 지칭하는 것이다. 상기 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 변형은 당해 분야에 공지된 표준 기법, 예를 들어, 부위-지향 돌연변이유발 및 PCR-매개 돌연변이유발에 의해 본 개시내용의 항체내에 도입될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기들의 군들은 당해 분야에서 정의되었다. 이들 군은 염기성 측쇄(예를 들면, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들면, 아스파트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄(예를 들면, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예를 들면, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지된 측쇄(예를 들면, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들면, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산들을 포함한다. 따라서, 본 개시내용의 항체의 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산 잔기가 동일한 측쇄 군의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고, 변이된 항체는 본원에 기술된 기능 분석법들을 이용하여 유지된 기능(즉, 상기에 나타낸 기능들)에 대해 검사할 수 있다.
조작 및 변형된 항체
본 개시내용의 항체는, 변형된 항체를 조작하기 위한 출발 물질로서 본 개시내용의 항-BCMA 항체의 VH/VL 서열들 중 하나 이상을 갖는 항체를 사용하여 제조할 수 있다. 1개 또는 2개 가변 영역(즉, VH 및/또는 VL) 내, 예를 들면, 하나 이상의 CDR 영역 내 및/또는 하나 이상의 프레임워크 영역 내의 하나 이상의 잔기를 변형시킴으로써 항체를 조작할 수 있다. 추가로 또는 양자택일로, 예를 들면, 항체의 작동체 기능(들)을 변화시키기 위해, 불변 영역(들) 내의 잔기들을 변형시킴으로써 항체를 조작할 수 있다.
특정한 실시양태에서, 항체의 가변 영역을 조작하기 위해 CDR 그래프팅을 이용할 수 있다. 항체들은 주로 6개의 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)에 위치한 아미노산 잔기들을 통해 표적 항원과 상호작용한다. 이러한 이유로, CDR 내의 아미노산 서열은 CDR 밖의 서열들보다 개개 항체들 사이에서 더 다양하다. CDR 서열들이 대부분의 항체-항원 상호작용을 담당하기 때문에, 상이한 성질을 갖는 상이한 항체로부터의 프레임워크 서열 위에 그래프트된 특정 천연 항체로부터의 CDR 서열을 포함하는 발현 벡터를 제작함으로써 특정 천연 항체들의 성질을 모방하는 재조합 항체를 발현시키는 것이 가능하다(예를 들면, 문헌[Riechmann et al., (1998) Nature 332:323-327]; 문헌[Jones et al., (1986) Nature 321:522-525]; 문헌[Queen et al., (1989) Proc. Natl. Acad] 참조. 또한, U.S.A. 86:10029-10033; 미국특허 제 5,225,539 호; 미국특허 제 5,530,101 호; 미국특허 제 5,585,089 호; 미국특허 제 5,693,762 호 및 미국특허 제 6,180,370 호 참조).
따라서, 본 개시내용의 또 다른 실시양태는, 전술한 바와 같은 본 개시내용의 서열들을 포함하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및/또는 전술한 바와 같은 본 개시내용의 서열들을 포함하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원 결합부에 관한 것이다. 이들 항체는 본 개시내용의 단일클론 항체의 VH 및 VL CDR 서열을 함유하지만, 이들은 상이한 프레임워크 서열을 함유할 수 있다.
상기 프레임워크 서열들은 공공 DNA 데이터베이스 또는 생식세포계열 항체 유전자 서열을 포함하는 공개된 참조문헌들로부터 수득할 수 있다. 예를 들면, 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자들에 대한 생식세포계열 DNA 서열들은 "브이베이스(VBase)" 인간 생식세포계열 서열 데이터베이스(인터넷 상에 www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase에서 이용가능함)뿐 아니라, 상기에서 인용된 문헌[Kabat et al., (1991)]; 문헌[Tomlinson et al., (1992) J. Mol. Biol. 227:776-798]; 및 문헌[Cox et al., (1994) Eur. J. Immunol. 24:827-836]에서 찾을 수 있으며; 이들 각각의 내용은 명백히 본원에 참고로 도입된다. 또 다른 예로서, 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자에 대한 생식세포계열 DNA 서열들은 진뱅크 데이터베이스에서 찾을 수 있다. 예를 들면, HCo7 HuMAb 마우스에서 확인된 하기의 중쇄 생식세포계열 서열들은 첨부한 진뱅크 수탁 번호: 1-69 (NG--0010109, NT--024637 & BC070333), 3-33 (NG--0010109 & NT--024637) 및 3-7 (NG--0010109 & NT--024637)에서 이용가능하다. 또 다른 예로서, HCo12 HuMAb 마우스에서 확인된 하기의 중쇄 생식세포계열 서열들은 첨부한 진뱅크 수탁 번호: 1-69 (NG--0010109, NT--024637 & BC070333), 5-51 (NG--0010109 & NT--024637), 4-34 (NG--0010109 & NT--024637), 3-30.3 (CAJ556644) & 3-23 (AJ406678)에서 이용가능하다.
항체 단백질 서열들은, 당해 분야의 숙련가들에게 공지되어 있는 갭 BLAST(Gapped BLAST)(문헌[Altschul et al., (1997), supra])로 불리는 서열 유사성 검색 방법들 중 하나를 이용하여, 컴파일링된 단백질 서열 데이터베이스와 비교한다.
본 개시내용의 항체에 사용하기에 바람직한 프레임워크 서열은 본 개시내용의 항체들에 의해 사용된 프레임워크 서열과 구조적으로 유사한 것들이다. VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열은 프레임워크 서열이 유래된 생식세포계열 면역글로불린 유전자에서 확인되는 바와 동일한 서열(들)을 갖는 프레임워크 영역 위로 그래프트될 수 있거나, 또는 상기 CDR 서열들은 생식세포계열 서열과 비교하여 하나 이상의 돌연변이를 함유하는 프레임워크 영역 위로 그래프트될 수 있다. 예를 들면, 특정한 경우에서, 항체의 항원 결합 능력을 유지하거나 증대시키기 위해 프레임워크 영역 내의 잔기들을 돌연변이시키는 것이 유리한 것으로 밝혀졌다(예를 들면, 미국특허 제 5,530,101 호; 미국특허 제 5,585,089 호; 미국특허 제 5,693,762 호 및 미국특허 제 6,180,370 호 참조).
가변 영역 변형의 또 다른 유형은 VH 및/또는 VL CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 영역 내의 아미노산 잔기를 돌연변이시킴으로써 관심 항체의 하나 이상의 결합 성질(예를 들면, 친화성)을 개선하는 것이다. 부위-지향 돌연변이유발 또는 PCR-매개 돌연변이유발을 수행하여 돌연변이(들)를 도입할 수 있고, 항체 결합 또는 다른 관심 기능 성질에 대한 영향을 당해 분야에 공지된 바와 같은 시험관내 또는 생체내 분석법으로 평가할 수 있다. 바람직하게, 보존적 변형(당해 분야에 공지된 바와 같은)을 도입한다. 돌연변이는 아미노산 치환, 부가 또는 결실일 수 있으나, 치환이 바람직하다. 또한, 전형적으로 CDR 영역 내에 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이하의 잔기가 변이된다.
따라서, 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은, (a) 본 개시내용의 서열, 또는 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1 영역; (b) 본 개시내용의 서열, 또는 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2 영역: (c) 본 개시내용의 서열, 또는 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3 영역; (d) 본 개시내용의 서열, 또는 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1 영역; (e) 본 개시내용의 서열, 또는 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 영역; 및 (f) 본 개시내용의 서열, 또는 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 항-BCMA 단일클론 항체 또는 그의 항원 결합부를 제공한다.
본 개시내용의 조작된 항체는, 예를 들면, 항체의 성질을 개선하기 위해 VH 및/또는 VL 내의 프레임워크 잔기들에 변형이 이루어진 항체들을 포함한다. 전형적으로, 상기 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 감소시키도록 이루어진다. 예를 들면, 한가지 접근방법은 하니 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식세포계열 서열로 "역돌연변이"시키는 것이다. 보다 특히, 체세포 돌연변이가 일어난 항체는 상기 항체가 유래된 생식세포계열 서열과 상이한 프레임워크 잔기를 함유할 수 있다. 상기 잔기는 항체 프레임워크 서열을 상기 항체가 유래된 생식세포계열 서열과 비교함으로써 확인할 수 있다.
프레임워크 변형의 또 다른 유형은 프레임워크 영역 내, 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내의 하나 이상의 잔기를 돌연변이시켜 T 세포 에피토프를 제거함으로써 항체의 잠재적인 면역원성을 감소시키는 것을 포함한다. 상기 접근방법은 또한 "탈면역화"로 지칭되며, 미국 특허 공개 제 2003/0153043 호에 더 상세히 기술되어 있다.
게다가, 또는 프레임워크 또는 CDR 영역 내에 이루어진 변형에 대한 대안으로서, 본 개시내용의 항체는, 전형적으로 항체의 하나 이상의 기능적 성질, 예를 들어, 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합 및/또는 항원-의존성 세포성 세포독성을 변화시키기 위해 Fc 영역 내에 변형을 포함하도록 조작할 수 있다. 더욱이, 본 개시내용의 항체는 화학적으로 변형되거나(예를 들면, 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있다) 또는 그의 글리코실화를 변화시키도록 변형되어, 다시 항체의 하나 이상의 기능적 성질을 변화시킬 수 있다.
한 실시양태에서, CH1의 힌지 영역은, 힌지 영역 중 시스테인 잔기의 수가 변화되도록, 예를 들면, 증가하거나 감소되도록 변형된다. 상기 접근방법은 미국특허 제 5,677,425 호에 더 기술되어 있다. CH1의 힌지 영역 중 시스테인 잔기의 수는, 예를 들면, 경쇄 및 중쇄의 조립을 축진하도록, 또는 항체의 안정성을 증가 또는 감소시키도록 변화된다.
또 다른 실시양태에서, 항체의 Fc 힌지 영역은 항체의 생물 반감기를 감소시키도록 돌연변이된다. 보다 특히, 항체가 천연 Fc-힌지 도메인 SpA 결합에 비해 손상된 스태필로코커스 단백질 A(SpA) 결합을 갖도록 하는 하나 이상의 돌연변이가 Fc-힌지 단편의 CH2-CH3 도메인 계면 영역 내에 도입된다. 상기 접근방법은 미국특허 제 6,165,745 호에 더 상세히 기술되어 있다.
또 다른 실시양태에서, 항체의 글리코실화를 변형시킨다. 예를 들면, 탈글리코실화된 항체를 제조할 수 있다(즉, 항체에 글리코실화가 결여되어 있다). 글리코실화는, 예를 들먼, 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키도록 변화될 수 있다. 상기 탄수화물 변형은, 예를 들면, 항체 서열 내의 하나 이상의 글리코실화 부위를 변화시킴으로써 달성될 수 있다. 예를 들면, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위의 제거를 야기함으로써 그 부위에서 글리코실화를 배제시키는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 상기 비글리코실화는 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시킬 수 있다(예를 들면, 미국특허 제 5,714,350 호 및 미국특허 제 6,350,861 호 참조).
추가로 또는 양자택일로, 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖는 저푸코실화 항체 또는 증가된 이등분 GlcNac 구조를 갖는 항체와 같이, 변화된 유형의 글리코실화를 갖는 항체가 제조될 수 있다. 상기 변화된 글리코실화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되었다. 상기 탄수화물 변형은, 예를 들면, 변화된 글리코실화 시스템을 갖는 숙주 세포에서 항체를 발현시킴으로써 달성될 수 있다. 변화된 글리코실화 시스템을 갖는 세포가 당해 분야에서 기술되었으며, 본 개시내용의 재조합 항체를 발현시킴으로써 변화된 글리코실화를 갖는 항체를 생성하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 세포주 Ms704, Ms705, 및 Ms709는 푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8(α(1,6)-푸코실트랜스퍼라제)이 결여되어, 상기 Ms704, Ms705, 및 Ms709 세포주에서 발현된 항체는 그 탄수화물 상에 푸코스가 결여된다. Ms704, Ms705, 및 Ms709 FUT8-/- 세포주는 2개의 치환 벡터를 사용하여 CHO/DG44 세포에서 FUT8 유전자의 표적화된 파괴에 의해 생성되었다(예를 들면, 미국특허 공개 제 2004/0110704 호 및 문헌[Yamane-Ohnuki et al., (2004) Biotechnol Bioeng 87:614-22] 참조). 또 다른 예로서, EP 1,176,195 호는, 푸코실 트랜스퍼라제를 암호화하는, 기능적으로 파괴된 FUT8 유전자를 가진 세포주를 기술하고 있으며, 따라서 상기 세포주에서 발현된 항체는 α-1,6 결합-관련 효소를 감소 또는 제거함으로써 저푸코실화를 나타낸다. EP 1,176,195 호는 또한 항체의 Fc 영역에 결합하지 않거나 효소 활성을 갖지 않는 N-아세틸글루코사민에 푸코스를 부가시키기 위한 낮은 효소 활성을 갖는 세포주, 예를 들면, 래트 골수종 세포주 YB2/0(ATCC CRL 1662)을 기술하고 있다. PCT 공개 WO 03/035835 호는 Asn(297)-연결된 탄수화물에 푸코스를 부착시키는 능력이 감소되어 또한 숙주 세포에서 발현된 항체의 저푸코실화를 야기하는 변이 CHO 세포주인 Lec13 세포를 기술하고 있다(또한 문헌[Shields et al., (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740] 참조). 변형된 글리코실화 프로필을 갖는 항체도 또한 PCT 공개 WO 06/089231 호에 기술된 바와 같이, 계란에서 생성될 수 있다. 또는, 변형된 글리코실화 프로필을 갖는 항체를 부평초(Lemna)와 같은 식물 세포에서 생성할 수 있다. 식물계에서 항체를 생성하는 방법이 2006년 8월 11일자로 출원된, 알스톤 앤 버드(Alston & Bird) LLP 대리인 사건 번호 040989/314911에 상응하는 미국 특허출원에 개시되어 있다. PCT 공개 WO 99/54342 호는 당단백질-변형 글리코실 트랜스퍼라제(예를 들면, β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII))를 발현하도록 조작된 세포주를 기술하고 있으며, 상기 조작된 세포주에서 발현된 항체는 항체의 증가된 ADCC 활성을 야기하는 증가된 이등분 GlcNac 구조를 나타낸다(또한 문헌[Umana et al., (1999) Nat. Biotech. 17:176-180] 참조). 또는, 상기 항체의 푸코스 잔기는 푸코시다제 효소를 사용하여 분리될 수 있고; 예를 들면, 푸코시다제 α-L-푸코시다제는 항체로부터 푸코실 잔기를 제거한다(문헌[Tarentino et al., (1975) Biochem. 14:5516-23]).
본 개시내용이 고려하는 본원의 항체의 또 다른 변형은 페길화이다. 예를 들면, 항체의 생물(예를 들면, 혈청) 반감기를 증가시키기 위해 항체를 페길화할 수 있다. 항체를 페길화하기 위해, 항체 또는 그의 단편을 전형적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 예를 들어, PEG의 반응성 에스터 또는 알데하이드 유도체와, 하나 이상의 PEG 기가 항체 또는 항체 단편에 부착되는 조건하에서 반응시킨다. 바람직하게, 페길화는 반응성 PEG 분자(또는 유사한 반응성 수-용해성 중합체)와의 아실화 반응 또는 알킬화 반응을 통해 수행된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "폴리에틸렌 글리콜"은 다른 단백질을 유도체화하기 위해 사용된 임의 형태의 PEG, 예를 들면, 모노 (C1-C10) 알콕시-또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드를 포함하는 것이다. 특정한 실시양태에서, 페길화될 항체는 비글리코실화 항체이다. 단백질을 페길화시키는 방법은 당해 분야에 공지되어 있으며, 본 개시내용의 항체들에 적용될 수 있다(예를 들면, EP 0 154 316 호 및 EP 0 401 384 호 참조).
항체의 물리적 성질
본 개시내용의 항체는 그를 검출하고/하거나 그의 다양한 부류들을 구분하기 위해 그의 다양한 물리적 성질에 의해 특성화할 수 있다.
예를 들면, 항체는 경쇄 또는 중쇄 가변 영역에 하나 이상의 글리코실화 부위를 함유할 수 있다. 상기 글리코실화 부위는 항체의 증가된 면역원성 또는 변화된 항원 결합으로 인한 항체의 pK의 변화를 야기할 수 있다(문헌[Marshall et al (1972) Annu Rev Biochem 41:673-702]; 문헌[Gala and Morrison (2004) J Immunol 172:5489-94]; 문헌[Wallick et al (1988) J Exp Med 168:1099-109]; 문헌[Spiro (2002) Glycobiology 12:43R-56R]; 문헌[Parekh et al (1985) Nature 316:452-7]; 문헌[Mimura et al., (2000) Mol Immunol 37:697-706]). 글리코실화는 N-X-S/T 서열을 함유하는 모티프에서 일어나는 것으로 알려졌다. 일부 경우에서는, 가변 영역 글리코실화를 함유하지 않는 항-BCMA 항체를 갖는 것이 바람직하다. 이것은 가변 영역에 글리코실화 모티프를 함유하지 않는 항체를 선택함으로써 또는 글리코실화 영역 내의 잔기를 돌연변이시킴으로써 달성될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 항체는 아스파라긴 이성질체화 부위를 함유하지 않는다. 아스파라긴의 탈아미드화는 N-G 또는 D-G 서열에서 일어날 수 있으며, 폴리펩티드 쇄 내에 결합을 도입하고 그의 안정성을 감소시키는(이소아스파트산 효과) 이소아스파트산 잔기의 생성을 야기할 수 있다.
각각의 항체는, 일반적으로 6 내지 9.5의 pH 범위에 속하는 독특한 등전점(pI)을 가질 것이다. IgG1 항체에 대한 pI는 전형적으로 7 내지 9.5의 pH 범위에 속하고, IgG4 항체에 대한 pI는 전형적으로 6 내지 8의 pH 범위에 속한다. 정상 범위 밖의 pI를 갖는 항체는 생체내 조건하에서 약간의 풀림 및 불안정성을 가질 수 있다는 추론이 있다. 따라서, 정상 범위에 속하는 pI 값을 갖는 항-BCMA 항체를 갖는 것이 바람직하다. 이것은 정상 범위의 pI를 갖는 항체를 선택함으로써 또는 하전된 표면 잔기를 돌연변이시킴으로써 달성될 수 있다.
본 개시내용의 항체를 암호화하는 핵산 분자
또 다른 양태에서, 본 개시내용은, 본 개시내용의 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역 또는 CDR을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다. 상기 핵산 분자는 전 세포 중에, 세포 용해물 중에, 또는 부분적으로 정제되거나 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 핵산은, 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예를 들면, 다른 세포 핵산 또는 단백질로부터 표준 기법에 의해 정제될 때 "단리"되거나 또는 "실질적으로 순수하게 된다". 본 개시내용의 핵산은, 예를 들면, DNA 또는 RNA일 수 있고, 인트론 서열을 함유하거나 함유하지 않을 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 상기 핵산은 cDNA 분자이다.
본 개시내용의 핵산은 표준 분자 생물 기법을 이용하여 수득할 수 있다. 하이브리도마(예를 들면, 하기에 더 기술하는 바와 같은 인간 면역글로불린 유전자를 갖는 유전자전이 마우스로부터 제조된 하이브리도마)에 의해 발현된 항체의 경우, 하이브리도마에 의해 제조된 항체의 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 cDNA는 표준 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝 기법에 의해 수득할 수 있다. 면역글로불린 유전자 라이브러리로부터 수득된(예를 들면, 파지 디스플레이 기법에 의해) 항체의 경우, 상기 항체를 암호화하는 핵산은 유전자 라이브러리로부터 회수할 수 있다.
본 개시내용의 바람직한 핵산 분자는 BCMA 단일클론 항체 또는 CDR의 VH 및 VL 서열을 암호화는 핵산 분자를 포함한다. 일단 VH 및 VL 분절을 암호화하는 DNA 단편들이 수득되면, 이들 DNA 단편은, 예를 들면, 가변 영역 유전자들을 전장 항체 쇄 유전자로, Fab 단편 유전자로 또는 scFv 유전자로 전환시키도록 표준 재조합 DNA 기법에 의해 더 조작할 수 있다. 상기 조작에서, VL- 또는 VH-암호화 DNA 단편은 또 다른 단백질, 예를 들어, 항체 불변 영역 또는 유연성 링커를 암호화하는 또 다른 DNA 단편에 작동가능하게 연결된다. 이와 관련하여 사용된 바와 같이, 용어 "작동가능하게 연결된"은, 2개의 DNA 단편이, 상기 2개의 DNA 단편에 의해 암호화된 아미노산 서열이 인-프레임으로 유지되도록 결합되는 것을 의미하는 것이다.
VH 영역을 암호화하는 단리된 DNA는 VH-암호화 DNA를 중쇄 불변 영역(CH1, CH2 및 CH3)을 암호화하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결시킴으로써 전장 중쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당해 분야에 공지되어 있으며, 상기 영역들을 포함하는 DNA 단편들은 표준 PCR 증폭에 의해 수득할 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역일 수 있으나, 가장 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역이다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우, VH-암호화 DNA는 중쇄 CH1 불변 영역만을 암호화하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결될 수 있다.
VL 영역을 암호화하는 단리된 DNA는 VL-암호화 DNA를 경쇄 불변 영역 CL을 암호화하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결시킴으로써 전장 경쇄 유전자(뿐 아니라 Fab 경쇄 유전자)로 전환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당해 분야에 공지되어 있으며, 상기 영역들을 포함하는 DNA 단편들은 표준 PCR 증폭에 의해 수득할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다.
scFv 유전자를 생성하기 위해, VH- 및 VL-암호화 DNA 단편들은 유연성 링커를 암호화하는, 예를 들면, 아미노산 서열 (Gly4-Ser)3을 암호화하는 또 다른 단편에 작동가능하게 연결되어, VH 및 VL 서열은 인접한 단일-쇄 단백질로서 발현될 수 있으며, 이때 상기 VL 및 VH 영역은 상기 유연성 링커에 의해 연결된다(예를 들면, 문헌[Bird et al., (1988) Science 242:423-426]; 문헌[Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883]; 문헌[McCafferty et al.,, (1990) Nature 348:552-554] 참조).
본 개시내용의 단일클론 항체의 생성
본 개시내용의 단일클론 항체(mAb)는 문헌[Kohler and Milstein (1975) Nature 256: 495]의 공지된 체세포 하이브리드화(하이브리도마) 기법을 이용하여 생성할 수 있다. 단일클론 항체를 생성하기 위한 다른 실시양태는 B 림프구의 바이러스 또는 종양발생 형질전환 및 파지 디스플레이 기법을 포함한다. 키메라 또는 인간화 항체도 또한 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 그 내용이 본원에 전체로 참고로 도입되는 미국특허 제 4,816,567 호; 미국특허 제 5,225,539 호; 미국특허 제 5,530,101 호; 미국특허 제 5,585,089 호; 미국특허 제 5,693,762 호 및 미국특허 제 6,180,370 호를 참조하시오.
본 개시내용의 단일클론 항체를 생성하는 형질주입체의 생성
본 개시내용의 항체는 또한, 예를 들면, 당해 분야에 공지되어 있는 바와 같이 재조합 DNA 기법과 유전자 형질주입 방법의 조합을 이용하여 숙주 세포 형질주입체에서 생성할 수 있다(예를 들면, 문헌[Morrison, S. (1985) Science 229:1202]). 한 실시양태에서, 표준 분자 생물 기법에 의해 수득된 부분 또는 전장 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 DNA는, 상기 유전자들이 전사가능하고 번역가능한 조절 서열들에 작동가능하게 연결되도록 하나 이상의 발현 벡터 내에 삽입한다. 이와 관련하여, 용어 "작동가능하게 연결된"은 벡터 내의 전사가능하고 번역가능한 조절 서열이 항체 유전자의 전사 및 번역을 조절하는 그의 의도한 기능을 수행하도록 항체 유전자가 벡터 내에 접합되는 것을 의미하는 것이다.
용어 "조절 서열"은 항체 유전자의 전사 또는 번역을 조절하는 프로모터, 인핸서 및 다른 발현 조절 요소들(예를 들면, 폴리아데닐화 신호)을 포함하는 것이다. 상기 조절 서열은, 예를 들면, 문헌[Goeddel (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990))]에 기술되어 있다. 포유동물 숙주 세포 발현에 바람직한 조절 서열은 포유동물 세포에서 높은 수준의 단백질 발현을 유도하는 바이러스 요소들, 예를 들어, 사이토메갈로바이러스(CMV), 시미안 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스, 예를 들면, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터(AdMLP) 및 폴리오마로부터 유래된 프로모터 및/또는 인핸서를 포함한다. 또는, 비바이러스성 조절 서열, 예를 들어, 유비퀴틴 프로모터 또는 β-글로빈 프로모터를 사용할 수 있다. 더욱이, 조절 요소들은 인간 T 세포 백혈병 바이러스 1형의 SV40 초기 프로모터 및 긴말단 반복서열로부터의 서열을 함유하는 SRα 프로모터 시스템과 같은 상이한 공급원으로부터의 서열로 이루어졌다(문헌[Takebe et al., (1988) Mol. Cell. Biol. 8:466-472]). 발현 벡터 및 발현 조절 서열은 사용된 발현 숙주 세포와 상용가능하도록 선택한다.
항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 동일하거나 별개의 발현 벡터 내에 삽입할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, VH 분절이 벡터 내의 CH 분절(들)에 작동가능하게 연결되고 VL 분절이 벡터 내의 CL 분절에 작동가능하게 연결되도록, 목적하는 이소타입의 중쇄 불변 및 경쇄 불변 영역을 이미 암호화하는 발현 벡터 내에 가변 영역들을 삽입함으로써 임의 항체 이소타입의 전장 항체 유전자를 생성하기 위해 가변 영역을 사용한다. 추가로 또는 양자택일로, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포로부터의 항체 쇄의 분비를 촉진하는 신호 펩티드를 암호화할 수 있다. 상기 항체 쇄 유전자는, 신호 펩티드가 항체 쇄 유전자의 아미노 말단에 인-프레임으로 연결되도록 벡터내에 클로닝될 수 있다. 신호 펩티드는 면역글로불린 신호 펩티드 또는 이종 신호 펩티드(즉, 비-면역글로불린 단백질로부터의 신호 펩티드)일 수 있다.
항체 쇄 유전자 및 조절 서열에 더하여, 본 개시내용의 재조합 발현 벡터는 추가의 서열, 예를 들어, 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예를 들면, 복제 기점) 및 선택성 마커 유전자를 가질 수 있다. 선택성 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 용이하게 한다(예를 들면, 미국특허 제 4,399,216 호; 미국특허 제 4,634,665 호 및 미국특허 제 5,179,017 호 참조). 예를 들면, 전형적으로 선택성 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에 G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트와 같은 약물에 대한 내성을 부여한다. 바람직한 선택성 마커 유전자는 다이하이드로폴레이트 리덕타제(DHFR) 유전자(메토트렉세이트 선택/증폭과 함께 dhfr-숙주 세포에 사용하기 위해) 및 네오 유전자(G418 선택을 위해)를 포함한다.
경쇄 및 중쇄의 발현을 위해, 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 발현 벡터(들)를 표준 기법에 의해 숙주 세포내에 형질주입시킨다. 용어 "형질주입"의 다양한 형태들은 원핵 또는 진핵 숙주 세포 내에 외인성 DNA의 도입에 일반적으로 사용되는 매우 다양한 기법들, 예를 들면, 전기천공, 인산칼슘 침전, DEAE-덱스트란 형질주입 등을 포함하는 것이다. 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 본 개시내용의 항체를 발현하는 것이 이론적으로 가능하지만, 진핵 세포, 가장 바람직하게는 포유동물 숙주 세포에서의 항체 발현이 가장 바람직한데, 그 이유는 상기 진핵 세포, 특히 포유동물 세포가 원핵 세포보다 적절하게 접히고 면역적으로 활성인 항체를 조립하고 분비할 가능성이 더 크다.
본 개시내용의 재조합 항체를 발현하기에 바람직한 포유동물 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소(CHO 세포)(문헌[Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기술된 dhfr- CHO 세포 포함, 예를 들면, 문헌[R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) J. Mol. Biol. 159:601-621]에 기술된 바와 같은 DHFR 선택성 마커와 함께 사용됨), NSO 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 특히, NSO 골수종 세포와 함께 사용하기 위해, 또 다른 바람직한 발현 시스템은 WO 87/04462 호, WO 89/01036 호 및 EP 338,841 호에 개시된 GS 유전자 발현 시스템이다. 항체 유전자를 암호화하는 재조합 발현 벡터가 포유동물 숙주 세포 내에 도입되는 경우, 숙주 세포에서 항체의 발현, 보다 바람직하게는 숙주 세포가 성장하는 배양 배지 내로의 항체의 분비를 가능하게 하기에 충분한 시간동안 숙주 세포를 배양함으로써 항체를 생성한다. 항체는 표준 단백질 정제 방법을 이용하여 배양 배지로부터 회수할 수 있다.
면역접합체
본 개시내용의 항체는 치료제에 접합되어 항체-약물 접합체(ADC)와 같은 면역접합체를 형성할 수 있다. 적합한 치료제는 세포독소, 알킬화제, DNA 작은홈 결합제, DNA 삽입제, DNA 가교결합제, 히스톤 디아세틸라제 억제제, 핵외이송 억제제, 프로테아좀 억제제, 토포이소머라제 I 또는 II 억제제, 열충격 단백질 억제제, 티로신 키나제 억제제, 항생물질 및 항유사분열제를 포함한다. ADC에서, 항체 및 치료제는 바람직하게는 펩티딜, 다이설파이드 또는 하이드라존 링커와 같이 절단가능한 링커를 통해 접합된다. 보다 바람직하게, 링커는 Val-Cit, Ala-Val, Val-Ala-Val, Lys-Lys, Pro-Val-Gly-Val-Val, Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Ala-Ala-Asn, Cit-Cit, Val-Lys, Lys, Cit, Ser, 또는 Glu와 같은 펩티드 링커이다. ADC는 미국특허 제 7,087,600 호; 미국특허 제 6,989,452 호; 및 미국특허 제 7,129,261 호; PCT 공개 WO 02/096910 호; WO 07/038,658 호; WO 07/051,081 호; WO 07/059,404 호; WO 08/083,312 호; 및 WO 08/103,693 호; 미국특허 공개 제 2006/0024317 호; 미국특허 공개 제 2006/0004081 호; 및 미국특허 공개 제 2006/0247295 호에 기술된 바와 같이 제조할 수 있으며; 상기 문헌들의 개시내용은 본원에 참고로 도입된다.
이중특이성 분자
또 다른 양태에서, 본 개시내용은, 적어도 2개의 상이한 결합 부위 또는 표적 분자에 결합하는 이중특이성 분자를 생성하기 위해 적어도 1개의 다른 기능성 분자, 예를 들면, 또 다른 펩티드 또는 단백질(예를 들면, 또 다른 항체 또는 수용체에 대한 리간드)에 연결된 본 개시내용의 하나 이상의 항체를 포함하는 이중특이성 분자를 특징으로 한다. 따라서, 본원에서 사용된 바와 같이, "이중특이성 분자"는 2개 이상의 특이성을 갖는 분자를 포함한다.
한 실시양태에서, 이중특이성 분자는, 항-Fc 결합 특이성 및 항-BCMA 결합 특이성 이외에, 제 3의 특이성을 갖는다. 상기 제 3의 특이성은 항-강화 인자(EF), 예를 들면, 세포독성 활성에 수반된 표면 단백질에 결합함으로써 표적 세포에 대한 면역 반응을 증가시키는 분자에 대한 것일 수 있다. 예를 들면, 항-강화 인자는 세포독성 T 세포(예를 들면, CD2, CD3, CD8, CD28, CD4, 또는 ICAM-1을 통해) 또는 다른 면역 세포에 결합하여, 표적 세포에 대해 증가된 면역 반응을 야기할 수 있다.
이중특이성 분자는 많은 상이한 구성방식 및 크기를 가질 수 있다. 크기 스펙트럼의 한쪽 끝에서, 이중특이성 분자는, 동일한 특이성을 갖는 2개의 결합 가지를 갖는 대신 각각 상이한 특이성을 갖는 2개의 결합 가지를 갖는 것을 제외하고, 전통적인 항체 구성방식을 유지한다. 다른 쪽 끝에는 펩티드 쇄에 의해 연결된 2개의 단일-쇄 항체 단편들(scFv')로 이루어진 이중특이성 분자, 소위 Bs(scFv)2 구조물이 있다. 중간-크기를 갖는 이중특이성 분자는 펩티딜 링커에 의해 연결된 2개의 상이한 F(ab) 단편들을 포함한다. 상기 및 다른 구성방식을 갖는 이중특이성 분자는 유전 공학, 체세포 하이브리드화 또는 화학적 방법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들면, 상기 인용된 쿠퍼 등(Kufer et al)의 문헌; 문헌[Cao and Suresh, Bioconjugate Chemistry, 9 (6), 635-644 (1998)]; 및 문헌[van Spriel et al., Immunology Today, 21 (8), 391-397 (2000)], 및 이들에 인용된 참조문헌을 참조하시오.
항체-암호화 또는 항체-함유 종양용해성 바이러스
종양용해성 바이러스는 선택적으로 암 세포를 감염시키고 사멸시킨다. 본 개시내용의 항체는 종양용해성 바이러스와 함께 사용될 수 있다. 또는, 본 개시내용의 항체를 암호화하는 종양용해성 바이러스를 인체내에 도입할 수 있다.
키메라 항원 수용체
본원에서는 본원에 기술된 CDR 및 중쇄/경쇄 가변 영역을 포함하는 항-BCMA scFv를 함유하는 키메라 항원 수용체(CAR)가 또한 제공된다.
항-BCMA CAR은 (a) 항-BCMA scFv를 포함하는 세포외 항원 결합 도메인; (b) 막관통 도메인; 및 (c) 세포내 신호전달 도메인을 포함할 수 있다.
CAR은, 발생기 수용체를 소포체 내로 유도하는 세포외 항원 결합 도메인의 N-말단에 신호 펩티드, 및 수용체를 결합에 보다 유용하게 하는 세포외 항원 결합 도메인의 N-말단에 힌지 펩티드를 함유할 수 있다. CAR은 바람직하게는 상기 세포내 신호전달 도메인에서 1차 세포내 신호전달 도메인 및 하나 이상의 공-자극 신호전달 도메인을 포함한다. 주로 사용되고 가장 효과적인 1차 세포내 신호전달 도메인은, 그의 포스포릴화가 T 세포 활성화를 야기하는 ITAM을 함유하는 CD3-제타 세포질 도메인이다. 공-자극 신호전달 도메인은 CD28, CD137 또는 OX40과 같은 공-자극 단백질로부터 유래될 수 있다.
CAR은 T 세포 증식, 지속성 및 항-종양 활성을 증대시키는 인자들, 예를 들어, 사이토카인 및 공-자극 리간드를 추가로 부가할 수 있다.
또한 본원에서 제공된 CAR을 포함하는, 조작된 면역 작동체 세포도 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 면역 작동체 세포는 T 세포, NK 세포, 말초혈 단핵 세포(PBMC), 조혈 줄기 세포, 만능 줄기 세포 또는 배아 줄기 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 작동체 세포는 T 세포이다.
약학 조성물
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 약학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화된 본 개시내용의 하나 이상의 항체(또는 그의 항원-결합부, 또는 이중특이성 분자, CAR-T 세포, 종양용해성 바이러스, 면역접합체)를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 상기 항체(또는 그의 항원-결합부, 또는 이중특이성 분자, CAR-T 세포, 종양용해성 바이러스, 면역접합체)는, 상기 조성물이 하나보다 많은 항체(또는 그의 항원-결합부, 또는 이중특이성 분자, CAR-T 세포, 종양용해성 바이러스, 면역접합체)를 함유하는 경우 따로따로 조제될 수 있다. 상기 조성물은 선택적으로 하나 이상의 추가의 약학적으로 활성인 성분들, 예를 들어, 또 다른 항체, 또는 항-종양 약물과 같은 약물을 함유할 수 있다.
약학 조성물은 많은 부형제를 포함할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는 담체, 표면 활성제, 증점제 또는 유화제, 고체 결합제, 분산 또는 현탁 보조제, 가용화제, 착색제, 향미제, 코팅제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 보존제, 등장화제, 또는 그들의 조합을 포함한다. 적합한 부형제의 선택 및 사용은 문헌[Gennaro, ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed. (Lippincott Williams & Wilkins 2003)]에 교지되어 있으며, 그의 개시내용은 본원에 참고로 인용된다.
바람직하게, 약학 조성물은 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척추 또는 표피 투여에 적합하다(예를 들면, 주사 또는 주입에 의해). 투여 경로에 따라, 활성 성분을 산 및 상기 성분을 불활성화시킬 수 있는 다른 자연 조건의 작용으로부터 보호하는 물질로 활성 성분을 코팅할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "비경구 투여"란 어구는, 통상적으로 주사에 의해, 장 및 국소 투여가 아닌 투여 방식을 의미하며, 제한 없이 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다. 또는, 본 개시내용의 항체는 비-경구 경로, 예를 들어, 국소, 표피 또는 점막 투여 경로를 통해, 예를 들면, 비강내, 경구, 질, 직장, 설하 또는 국소적으로 투여될 수 있다.
약학 조성물은 멸균 수용액 또는 분산액의 형태일 수 있다. 상기 조성물은 또한 미세유화액, 리포좀, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 규칙적인 구조로 제형화될 수 있다.
단일 투여형을 생성하기 위해 담체 물질과 혼합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 대상 및 특정한 투여 방식에 따라 달라질 것이며, 일반적으로 치료 효과를 제공하는 조성물의 양일 것이다. 일반적으로, 100% 중에서, 상기 양은 활성 성분의 약 0.01% 내지 약 99%, 바람직하게는 약 0.1% 내지 약 70%, 가장 바람직하게는 약학적으로 허용되는 담체와 함께 활성 성분의 약 1% 내지 약 30%의 범위일 것이다.
투여 요법은 최적의 목적하는 반응(예를 들면, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들면, 단일 볼루스를 투여할 수 있거나, 여러개의 분할 용량을 시간에 따라 투여할 수 있거나, 또는 상기 용량은 치료 상황의 긴급함으로 나타남에 따라 비례적으로 감소 또는 증가시킬 수 있다. 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 투여 단위형으로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용된 바와 같이 투여 단위형은 치료될 대상에 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 별개의 단위들을 지칭하고; 각각의 단위는 필요한 약학 담체와 함께 목적하는 치료 효과를 제공하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 성분을 함유한다. 또는, 항체는 서방성 제형으로 투여될 수 있으며, 이 경우 투여가 덜 빈번해야 한다.
조성물의 투여를 위해, 투여량은 숙주 체중의 약 0.0001 내지 100 mg/kg, 보다 통상적으로는 0.01 내지 5 mg/kg 체중의 범위일 수 있다. 예를 들면, 투여량은 0.3 mg/kg 체중, 1 mg/kg 체중, 3 mg/kg 체중, 5 mg/kg 체중 또는 10 mg/kg 체중이거나 또는 1 내지 10 mg/kg 체중의 범위 이내일 수 있다. 전형적인 치료 요법은 1주에 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 1개월에 1회, 3개월에 1회 또는 3 내지 6개월에 1회를 수반한다. 본 개시내용의 항-BCMA 항체에 바람직한 투여 요법은 정맥내 투여를 통한 1 mg/kg 체중 또는 3 mg/kg 체중을 포함하며, 이때 상기 항체는 하기 투약 스케줄들 중 하나를 이용하여 제공된다: (i) 6개 투여량에 대해 4주마다에 이어, 3개월마다; (ii) 3주마다; (iii) 3 mg/kg 체중 1회 후에 3주마다 1 mg/kg 체중 투여. 일부 방법에서, 투여량은 약 1 내지 1000 μg/mL 및 일부 방법에서는 약 25 내지 300 μg/mL의 혈장 항체 농도를 달성하도록 조정된다.
본 개시내용의 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합부, 또는 이중특이성 분자, CAR-T 세포, 종양용해성 바이러스, 면역접합체의 "치료 효과적인 투여량"은 질환 증상의 중증도의 감소, 질환 무증상 시기의 빈도 및 기간의 증가, 또는 질환의 고통으로 인한 손상 또는 장애의 예방을 제공한다. 예를 들면, 종양을 갖는 대상을 치료하는 경우, "치료 효과적인 투여량"은 바람직하게는 종양 성장을 미치료 대상에 비해 적어도 약 20%, 보다 바람직하게는 적어도 약 40%, 보다 더 바람직하게는 적어도 약 60%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 80% 억제한다. 치료 항체의 치료 효과량은 대상에서 종양 크기를 감소시키거나 아니면 증상을 개선할 수 있으며, 상기 대상은 전형적으로 인간이거나 또는 또 다른 포유동물일 수 있다.
약학 조성물은 임플란트, 경피 패치 및 미세캡슐화 전달 시스템을 포함하여, 방출 조절형 제형일 수 있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예를 들어, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오쏘에스터 및 폴리락트산을 사용할 수 있다. 예를 들면, 문헌[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978]을 참조하시오.
치료 조성물은 (1) 무침 피하 주사 장치(예를 들면, 미국특허 제 5,399,163 호; 미국특허 제 5,312,335 호; 미국특허 제 5,064,413 호; 미국특허 제 4,941,880 호; 미국특허 제 4,790,824 호; 및 미국특허 제 4,596,556 호); (2) 미세-주입 펌프(미국특허 제 4,487,603 호); (3) 경피용 장치(미국특허 제 4,486,194 호); (4) 주입 기구(미국특허 제 4,447,233 호 및 미국특허 제 4,447,224 호); 및 (5) 삼투 장치(미국특허 제 4,439,196 호 및 미국특허 제 4,475,196 호)와 같은 의료 장치들을 통해 투여할 수 있으며; 상기 특허들의 개시내용은 본원에 참고로 도입된다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 단일클론 항체는 생체내에서 적절한 분포를 보장하도록 제형화될 수 있다. 예를 들면, 본 개시내용의 치료 항체가 혈뇌 장벽을 확실하게 통과하도록 하기 위해, 이들은 리포좀에 제형화될 수 있으며, 이것은 특정 세포 또는 기관으로의 선택적 수송을 증대시키기 위해 표적화 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들면, 미국특허 제 4,522,811 호; 미국특허 제 5,374,548 호; 미국특허 제 5,416,016 호; 및 미국특허 제 5,399,331 호; 문헌[V. V. Ranade (1989) J. Clin.Pharmacol.29:685]; 문헌[Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038]; 문헌[Bloeman et al., (1995) FEBS Lett.357:140]; 문헌[M. Owais et al., (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180]; 문헌[Briscoe et al., (1995) Am. J. Physiol. 1233:134]; 문헌[Schreier et al., (1994) J. Biol. Chem. 269:9090]; 문헌[Keinanen and Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123]; 및 문헌[Killion and Fidler (1994) Immunomethods 4:273]을 참조하시오.
본 개시내용의 용도 및 방법
본 개시내용의 항체 또는 그의 항원-결합부, 또는 이중특이성 분자, CAR-T 세포, 종양용해성 바이러스, 면역접합체를 포함하는 조성물은, 예를 들면, 증가된 BCMA 발현과 연관된 종양의 치료를 포함하여 많은 시험관내 및 생체내 유용성을 갖는다.
BCMA-발현 종양 세포의 증식 및 생존을 억제하는 본 개시내용의 항-BCMA 항체의 능력을 고려할 때, 본 개시내용은, 대상에서 종양의 성장이 억제되도록 본 개시내용의 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 종양 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공한다. 본 개시내용의 항체에 의해 치료될 수 있는 종양의 비-제한 예는 백혈병, 림프종 및 다발성 골수종을 포함하나, 이로 한정되지는 않는다. 또한, 그 성장이 본 개시내용의 항체를 사용하여 억제될 수 있는 난치성 또는 재발성 악성종양을 포함한다.
일반적으로 말하면, 본 개시내용의 항체는 대상에서 면역 반응을 증대시키기 위해 사용할 수 있다.
병용 요법
또 다른 양태에서, 본 개시내용은, 본 개시내용의 항-BCMA 항체 또는 그의 항원-결합부, 또는 이중특이성 분자, CAR-T 세포, 종양용해성 바이러스, 면역접합체를 대상에서 종양 성장을 억제하는데 효과적인 하나 이상의 추가의 항체와 동시투여하는 병용 요법 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용은 대상에게 항-BCMA 항체(또는 그의 항원-결합부, 또는 CAR-T 세포, 종양용해성 바이러스, 면역접합체), 및 하나 이상의 추가의 항체, 예를 들어, 항-OX40 항체, 항-TIM-3 항체, 항-CD137 항체, 항-GITR 항체, 항-LAG-3 항체, 항-PD-L1 항체, 및 항-PD-1 항체 및/또는 항-CTLA-4 항체를 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 종양 성장을 억제하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 대상은 인간이다.
BCMA 신호전달 활성화도 또한 표준 암 치료와 병용될 수 있다. 예를 들면, BCMA 신호전달 활성화는 CTLA-4 및/또는 LAG-3 및/또는 PD-1 차단 및 또한 화학치료 요법과 병용할 수 있다. 예를 들면, 화학치료제를 항-BCMA-항체와 함께 투여할 수 있으며, 상기 화학치료제는 세포독성제일 수 있다. 예를 들면, 에피루비신, 옥살리플라틴 및 5-FU를 항-BCMA 요법을 받는 환자에게 투여한다.
선택적으로, 항-BCMA와 하나 이상의 추가 항체(예를 들면, 항-CTLA-4 및/또는 항-LAG-3 및/또는 항-PD-1 항체)의 병용은 암성 세포, 정제된 종양 항원(재조합 단백질, 펩티드 및 탄수화물 분자 포함), 및 면역 자극 사이토카인을 암호화하는 유전자로 형질감염된 세포와 더 병용될 수 있다(문헌[He et al., (2004) J. Immunol. 173:4919-28]). 사용될 수 있는 종양 백신의 비-제한 예는 흑색종 항원의 펩티드, 예를 들어, gp100, MAGE 항원, Trp-2, MART1 및/또는 티로시나제, 또는 사이토카인 GM-CSF를 발현하도록 형질감염된 종양 세포의 펩티드를 포함한다.
항-BCMA 항체와 병용될 수 있는 다른 요법은 인터루킨-2(IL-2) 투여, 방사선, 수술 또는 호르몬 박탈을 포함하나, 이로 한정되지는 않는다.
본원에서 논의된 치료제들의 혼합물은 약학적으로 허용되는 담체 중의 단일 조성물로서 동시에, 또는 약학적으로 허용되는 담체 중에 각각의 약제를 갖는 별개의 조성물로서 동시에 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 치료제들의 혼합물은 순차적으로 투여될 수 있다.
더욱이, 병용 요법의 하나보다 많은 용량을 순차적으로 투여하는 경우, 순차적 투여의 순서는 각각의 투여 시점에서 역전되거나 동일한 순서로 유지될 수 있고, 순차적 투여는 동시 투여와 병용될 수 있거나, 또는 이들의 임의의 조합으로 수행될 수 있다.
본 개시내용은 하기의 실시예로 더 예시하며, 이들은 더 제한하는 것으로 이해해서는 안된다. 본 출원 전체에 걸쳐 인용된 모든 도면 및 모든 참조문헌, 진뱅크 서열, 특허 및 공개된 특허출원들의 내용은 명백히 본원에 참고로 도입된다.
실시예
실시예 1 하이브리도마 기법을 이용한 마우스 항_BCMA 단일클론 항체의 생성
면역화
마우스를 문헌[E Harlow, D. Lane, Antibody: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1998]에 기술된 바와 같은 방법에 따라 면역화시켰다. C-말단에 인간 IgG1 Fc 태그를 갖는 재조합 인간 BCMA 단백질(Cat#BC7-H5254, 아크로 바이오시스템즈(Acro biosystems))을 면역원으로 사용하였다. 인간 BCMA-his 단백질(Cat#BCA-H522Y, 아크로 바이오시스템즈)을 항-혈청 역가를 측정하는데 및 항원-특이성 항체를 분비하는 하이브리도마를 선별하는데 사용하였다. 면역화 투여량은 1차 및 추가 면역화 둘 다에 있어 25 μg 인간 BCMA-Fc 단백질/마우스/주사를 함유하였다. 면역 반응을 증가시키기 위해, 완전 프로이트(Freud) 보조제 및 불완전 프로이트 보조제(시그마(Sigma), 미국 미주리주 세인트루이스 소재)를 1차 및 추가 면역화에 각각 사용하였다. 간략하게, 먼저 바이알 내의 보조제를 볼텍스를 사용하여 약하게 혼합함으로써 보조제-항원 혼합물을 제조하였다. 목적하는 양의 보조제를 오토클레이브화 1.5 mL 미세원심분리 튜브로 옮겼다. 항원은 0.5 내지 1.0 mg/mL 범위의 농도를 사용하여 PBS 또는 식염수 중에 제조하였다. 이어서, 계산된 양의 항원을 보조제와 함께 미세원심분리 튜브에 첨가하고, 생성된 혼합물을 2 분동안 약하게 볼텍싱하여 혼합시켜 유중수적형 유화액을 생성하였다. 이어서, 보조제-항원 유화액을 동물 주입에 적절한 주사기에 뽑아내었다. 총 25μg의 항원을 50 내지 100 μL의 부피로 주사하였다. 각각의 동물을 면역화시킨 다음, 항-혈청 역가에 따라 2 또는 3회 추가접종하였다. 우수한 역가를 갖는 동물들에게 하이브리도마 융합 전에 복강내 주사로 최종 추가접종을 제공하였다.
하이브리도마 융합 및 선별
뮤린 골수종 세포주(SP2/0-Ag14, ATCC#CRL-1581)의 세포를 하이브리도마 융합 직전에 대수기 단계에 도달하도록 배양하였다. 면역화된 마우스로부터의 비장 세포를 멸균하여 준비하고 문헌[Kohler G, and Milstein C, "Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity," Nature, 256: 495-497(1975)]에 기술된 바와 같은 방법에 따라 골수종 세포와 융합시켰다. 융합된 "하이브리드 세포"를 이어서 DMEM/20% FCS/HAT 배지 중에 96-웰 플레이트 내에 분배하였다. 생존하는 하이브리도마 콜로니를 융합 7일 내지 10일후에 현미경하에 관찰하였다. 2주후에, 각 웰로부터의 상등액을 재조합 인간 BCMA-his 단백질을 사용하여 ELISA-기반 선별에 적용하였다. 간략하게, ELISA 플레이트를 4 ℃에서 60 μL의 인간 BCMA-his(Cat#BCA-H522Y, 아크로 바이오시스템즈, PBS 중 2.0 μg/mL)로 밤새 코팅하였다. 플레이트를 PBST로 4회 세척하고, 200 μL의 차단 완충액(PBST 중 5% w/v 무지방 우유)으로 차단하였다. 희석한 하이브리도마 상등액(60 μL)을 각 웰에 첨가하고 37 ℃에서 40 분동안 배양하였다. 이어서, 플레이트를 4회 세척하고, HRP-염소 항-마우스-IgG(잭슨 이뮤노 리서치(Jackson Immuno research), Cat#115-036-071)를 검출에 사용하였으며, 450 nm에서 결합 OD를 관찰하였다. 이어서, 인간 BCMA-his 단백질에 결합하는 양성 하이브리도마 분비 항체를 선택하고 24-웰 플레이트로 옮겼다. 높은 특이적 인간 BCMA 결합 및 BCMA-BAFF 리간드 차단 활성을 나타낸 항체들을 생성하는 하이브리도마 클론들을 세포주의 클론형성능을 보장하기 위해 제한 희석으로 서브클로닝한 다음, 단일클론 항체들을 정제하였다. 간략하게, 단백질 A 세파로스 컬럼(베스트크롬(상하이) 바이오사이언시즈로부터, Cat#AA0273)을 5 내지 10 컬럼 부피의 PBS 완충액을 사용하여 세척하였다. 세포 상등액을 컬럼에 통과시킨 다음, 단백질에 대한 흡광도가 기준선에 도달할 때까지 컬럼을 PBS 완충액을 사용하여 세척하였다. 컬럼을 용출 완충액(0.1 M 글리신-HCl, pH 2.7)으로 용출시키고, 즉시 중화 완충액(1 M 트리스(Tris)-HCl, pH 9.0)으로 1.5 mL 튜브내에 수집하였다. 면역글로불린을 함유하는 분획들을 모으고 4 ℃에서 밤새 PBS에 투석시켰다. 이어서, 정제된 단일클론 항체의 시험관내 기능 활성을 다음과 같이 특성화하였다.
실시예 2 비아코어 표면 플라즈몬 공명 기법을 이용한 마우스 항-BCMA 단일클론 항체의 친화성 측정
실시예 1에서 생성된 정제된 항-BCMA 단일클론 항체(mAb)를 비아코어(Biacore) T200 시스템(GE 헬쓰케어, 미국 펜실베이니아주 피츠버그 소재)으로 친화성 및 결합 동역학에 대해 특성화하였다.
간략하게, 염소 항-마우스 IgG(GE 헬쓰케어, Cat#BR100838,　마우스 항체 포획 키트)를 비아코어(GE 헬쓰케어, 미국 펜실베이니아주 피츠버그 소재)에서 제공하는 표준 아민 커플링 키트를 사용하여, 1차 아민을 통해 CM5 칩(카복시 메틸 덱스트란 코팅 칩)에 공유적으로 결합시켰다. 바이오센서 표면 상의 미반응 모이어티들을 에탄올아민으로 차단하였다. 이어서, 정제된 항-BCMA 항체 및 BCMA 벤치마크(GSK2857916의 BCMA-결합 부분을 함유하는 항체, BCMA-mab1 또는 BM으로도 지칭됨, 서열번호 26 및 27에 나타낸 중쇄 및 경쇄 아미노산을 사용하여 제조)를 10.0 μg/mL의 농도에서 10 μL/분의 유량으로 칩 상에 흘려보냈다. 이어서, HBS EP 완충액(비아코어 제공) 중의 80 nM, 40 nM, 20 nM 또는 10 nM 재조합 인간 BCMA-his(아크로 바이오시스템즈, Cat#BCA-H522Y, MW: 7.8kDa) 또는 사이노몰거스 원숭이 BCMA-Fc 단백질(아크로 바이오시스템즈, Cat#BCA-C5253, MW: 32.1kDa)을 30 μL/분의 유량으로 칩 상에 흘려보냈다. 항원-항체 결합 동역학이 2 분동안 이어졌으며, 해리 동역학이 10 분동안 이어졌다. 결합 및 해리 곡선을 BIA 평가 소프트웨어를 이용하여 1:1 랭뮤어(Langmuir) 결합 모델에 적합화시켰다. KD, Ka 및 Kd 값을 측정하고 하기 표 2에 요약하였다.
마우스 항-BCMA 항체의 결합 친화성
비아코어 상에서의 동역학
인간 BCMA-his 사이노몰거스 BCMA-Fc
Ka Kd KD Ka Kd KD
마우스 mAb (M-1s-1) (s-1) (M) (M-1s-1) (s-1) (M)
B1A1 2.45E+06 1.61E-03 6.36E-10 1.63E+06 1.48E-02 9.08E-09
B1G3 5.88E+05 4.01E-04 6.97E-10 2.87E+05 5.77E-04 2.01E-09
B1C1 5.75E+05 5.06E-04 8.80E-10 3.54E+05 6.59E-04 1.86E-09
BM 3.30E+05 2.45E-04 7.42E-10 / / /
본 개시내용의 항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합하였으며, 그의 결합 친화성은 벤치마크 항체와 필적하거나 약간 더 우수하였다. B1A1, B1G3 및 B1C1 항체는 또한 원숭이 BCMA에도 특이적으로 결합하였다.
실시예 3 마우스 항-BCMA 단일클론 항체의 결합 활성
마우스 항-BCMA 항체의 결합 활성을 포획 ELISA 및 유세포분석(FACS)으로 측정하였다.
포획 ELISA의 경우, 96-웰 마이크로플레이트를 PBS 중의 2 μg/mL 염소 항-마우스 IgG Fcγ 단편(잭슨 이뮤노 리서치, Cat#115-005-071, 100 μL/웰, 본 개시내용의 마우스 항-BCMA 항체에 특이적) 또는 염소 항-인간 IgG F(ab')2 단편(잭슨 이뮤노 리서치, Cat#109-005-097, 100 μL/웰, 벤치마크 BM에 특이적)으로 코팅하고, 4 ℃에서 밤새 배양하였다. 플레이트를 세척 완충액(PBS+0.05% 트윈(Tween)-20, PBST)으로 4회 세척한 다음, 37 ℃에서 200 μL/웰 차단 완충액(PBST 중 5% w/v 무지방 우유)으로 2 시간동안 차단하였다. 플레이트를 다시 세척하고, 37 ℃에서 100 μL/웰의 정제된 마우스 항-BCMA 항체, 벤치마크 BM, 및 음성 대조군 hIgG(정맥내 주사용 인간 면역글로불린(pH4), 후알란 바이올로지컬 엔지니어링 인코포레이티드(Hualan Biological Engineering Inc.))(10000 ng/mL 또는 66.67 nM에서 출발하여, PBST 중 2.5% 무지방 우유에 5배 희석)와 함께 40 분동안 배양한 다음, 다시 4회 세척하였다. 포획된 항-BCMA 항체를 함유하는 플레이트들을 37 ℃에서 비오틴-표지된 인간 BCMA-his 단백질(Cat#BCA-H522Y, 아크로 바이오시스템즈, PBST 중 2.5% 무지방 우유 중 0.28 nM, 100 μL/웰)과 함께 40 분동안 배양하고, 4회 세척하고, 37 ℃에서 스트렙타비딘 접합된 HRP(PBST에 1:10000 희석, 잭슨 이뮤노 리서치, Cat#016-030-084, 100 μL/웰)와 함께 40 분동안 배양하였다. 최종 세척 후에, 플레이트를 100 μL/웰 ELISA 기질 TMB(이노리에이전츠(Innoreagents), Cat#TMB-S-002)와 함께 배양하였다. 25 ℃에서 15 분내에 50 μL/웰 1M H2S04로 반응을 중단시키고, 450 내지 630 nm에서 흡광도를 판독하고, 항체 농도에 대해 도표화하였다. 데이터를 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism) 소프트웨어를 사용하여 분석하고 EC50 값을 기록하였다.
유세포분석(FACS)에 의한 U266 세포의 표면에 대한 항-BCMA 항체의 결합을 위해, 인간 골수종 세포주 U266(ATCC®　TIB-196™)을 세포 배양 플라스크로부터 수거하고, 2회 세척하고, 2% v/v 소 태아 혈청을 함유하는 포스페이트 완충 식염수(PBS)(FACS 완충액)에 재현탁하였다. 96-웰 플레이트에서 웰 당 2 x 105 세포를 얼음 상에서 FACS 완충액 중의 다양한 농도의 항-BCMA 항체 또는 대조군과 함께 40 분동안 배양하였다. 세포를 FACS 완충액으로 2회 세척하고, 100 μL/웰 R-피코에리트린 어피니퓨어(R-Phycoerythrin　AffiniPure)　F(ab')2　단편 염소 항-마우스　IgG(H+L)(FACS 완충액에 1:1000 희석, 잭슨 이뮤노 리서치, Cat#115-116-146)을 첨가하였다. 어두운 상태로 4 ℃에서 40 분동안 배양한 후에, 세포를 3회 세척하고, FACS 완충액에 재현탁하였다. 벡톤 디킨슨 FACS 칸토(Becton Dickinson FACS Canto) II-HTS 장치를 사용하여 형광을 측정하였다. 데이터를 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 사용하여 분석하고, EC50 값을 U266 세포에 대한 최대 BCMA 항체 결합의 50%를 달성하는 항체 농도로서 기록하였다.
결과를 하기 표 3에 요약하고, 도 1A 및 1B에 나타내었다.
마우스 항-BCMA 항체의 결합 활성
마우스 mAb FACS 세포 결합
(EC50, nM)		 결합 포획 ELISA
(EC50, nM)
B1A1 2.66 1.06
B1C1 5.84 0.84
BM / 1.27
B1G3 3.95 0.67
BM / 1.11
상기 결과는 본 개시내용의 항체가 벤치마크 항체에 비해 유사하거나 더 낮은 EC50 값하에 인간 BCMA에 특이적으로 결합한 것을 보여주었다. 또한, 도 1A 및 1B에서 볼 수 있듯이, B1A1/B1G3/B1C1 군에서의 최대 흡광도는 벤치마크 항체와 유사하거나 약간 더 낮았다.
실시예 4 경쟁 ELISA를 사용한 기능 분석
4.1 리간드 차단 ELISA
BCMA-BAFF 상호작용을 차단하는 항-BCMA 항체의 능력을 경쟁 ELISA 분석을 이용하여 측정하였다. 간략하게, 100 μL 인간 BCMA-his 단백질(아크로 바이오시스템즈, Cat#BCA-H522Y)을 PBS 중 2 μg/mL로 96-웰 마이크로플레이트 상에 코팅하고, 4 ℃에서 밤새 배양하였다. 다음 날, 플레이트를 세척 완충액(PBS+0.05% w/v 트윈-20, PBST)으로 세척하고, 37 ℃에서 PBST 중 5% w/v 무지방 우유로 2 시간동안 차단하였다. 이어서, 플레이트를 다시 세척 완충액을 사용하여 세척하였다.
PBST 중 2.5% w/v 무지방 우유 중의 멸균 희석된 본 개시내용의 항-BCMA 항체 또는 대조군(4배 연속 희석 하에 200 nM 또는 30000 ng/mL에서 출발)을 플레이트에 웰 당 100 μL를 첨가하고, 37 ℃에서 인간 BCMA-his 단백질과 함께 40 분동안 배양하였다. 플레이트를 세척 완충액을 사용하여 4회 세척한 다음, 0.25 nM 비오틴-표지된 인간 BAFF-Fc 단백질(시노 바이올로지컬 인코포레이티드(Sino biological inc.), Cat#10056-H01H)을 첨가하고, 37 ℃에서 40 분동안 배양하였다. 세척 완충액을 사용하여 플레이트를 다시 세척하였다. 100 μL/웰의 스트렙타비딘 접합된 HRP를 첨가하고 37 ℃에서 40 분동안 배양하였다. 세척 완충액을 사용하여 플레이트를 다시 세척하였다. 마지막으로, TMB를 첨가하고, 1M H2S04를 사용하여 반응을 중단시키고, 450 내지 630 nm에서 흡광도를 판독하였다. 데이터를 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 사용하여 분석하고 IC50 값을 기록하였다.
4.2 벤치마크 차단 ELISA
벤치마크 BM-인간 BCMA 결합을 차단하는 본 개시내용의 항-BCMA 항체의 능력을 경쟁 ELISA 분석을 이용하여 측정하였다. 간략하게, 벤치마크를 96-웰 마이크로플레이트 상에서 PBS 중의 2 μg/mL로 웰 당 100 μL로 코팅하고, 4 ℃에서 밤새 배양하였다. 다음 날, 플레이트를 세척 완충액으로 4회 세척하고, 37 ℃에서 PBST 중 2.5% w/v 무지방 우유로 2 시간동안 차단하였다. 차단하는 동안, 연속 희석한 항-BCMA 항체 또는 대조군(4배 연속 희석 하에, 100 nM 또는 15000 ng/mL에서 출발)을 비오틴 표지된 인간 BCMA-his 단백질(Cat#BCA-H522Y, 아크로 바이오시스템즈)(PBST 중 2.5% 무지방 우유 중의 0.22 nM)과 혼합하고, 혼합물을 25 ℃에서 40 분동안 배양하였다. 플레이트 세척 후에, 항체/비오틴 표지된 인간 BCMA-his 혼합물을 BM 코팅된 플레이트에 웰 당 100 μL로 첨가하였다. 37 ℃에서 40 분동안 배양한 후, 플레이트를 세척 완충액을 사용하여 세척하였다. 이어서, 100 μL/웰의 스트렙타비딘 접합된 HRP를 첨가하고 37 ℃에서 40 분동안 배양하였다. 세척 완충액을 사용하여 플레이트를 다시 세척하였다. 마지막으로, TMB를 첨가하고, 1M H2S04를 사용하여 반응을 중단시키고, 450 내지 630 nm에서 흡광도를 판독하였다. 데이터를 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 사용하여 분석하고 IC50 값을 기록하였다.
두 분석의 결과를 하기 표 4에 요약하였고, 도 2A, 2B, 3A 및 3B에 나타내었다.
항-BCMA 항체의 기능 분석 결과
마우스 mAb BCMA-BAFF 차단 ELISA (IC50, nM) 벤치마크 차단 ELISA (IC50, nM)
B1A1 7.00 1.91
B1C1 8.04 2.69
BM 9.61 1.93
B1G3 5.84 3.12
BM 10.67 2.64
표 4에서 본 개시내용의 항-BCMA 항체가 벤치마크 항체에 비해 더 낮은 IC50 값에서 인간 BCMA-BAFF 상호작용을 차단할 수 있었음을 알 수 있다. 또한, 도 2A 및 2B에 나타낸 바와 같이, B1A1/B1C1과 벤치마크 항체 사이에 분명한 흡광도 차이가 확인되지 않았으며, B1G3은 벤치마크 항체보다 더 우수한 차단 능력을 나타내었다.
상기 데이터는 또한 본 개시내용의 항체가 인간 BCMA-벤치마크 상호작용을 차단할 수 있었음을 보여주어, 본 개시내용의 항체가 벤치마크 항체가 결합하는 것과 동일하거나 유사한 에피토프에 결합함을 시사하였다.
실시예 5 키메라 항체의 생성 및 특성화
항-BCMA 마우스 mAb의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인들을 서열분석하였으며, 서열번호는 표 1에 요약하였다.
항-BCMA 마우스 mAb의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 인간 IgG1 중쇄(서열번호 23) 및 인간 카파 경쇄 불변 영역(서열번호 24)에 각각 인프레임으로 클로닝하였으며, 이때 가변 영역의 C 말단은 각각의 불변 영역의 N 말단에 연결되었다.
생성된 키메라 항체의 활성을 결합 포획 ELISA 및 경쟁 ELISA 분석으로 상기 실시예의 프로토콜에 따라 확인하였다.
데이터는 하기 표 5에 나타낸 바와 같이 키메라 및 마우스 항체가 유사한 결합 능력을 가졌음을 보여주었다.
키메라 항체들의 결합 및 기능 활성
항체 포획 결합 ELISA (EC50,nM) BCMA-BAFF 차단 ELISA (IC50, nM) 벤치마크 차단 ELISA
(IC50, nM)
마우스 B1G3 0.54 3.03 3.91
키메라 B1G3 1.47 9.04 9.89
마우스 B1C1 0.73 2.61 3.61
키메라 B1C1 1.25 2.29 3.01
실시예 6 항-BCMA 마우스 단일클론 항체 B1G3 및 B1C1의 인간화
마우스 항-BCMA 항체 B1G3 및 B1C1을 인간화 및 추가 연구를 위해 선택하였다. 마우스 항체의 인간화는 하기에 상세하게 기술된 바와 같은 확립된 CDR-그래프팅 방법을 이용하여 수행하였다.
마우스 항체 B1H2, B1G3 및 B1C1의 인간화를 위한 수용 프레임워크를 선택하기 위해, 마우스 B1H2, B1G3 및 B1C1의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 서열들을 인간 면역글로불린 유전자 데이터베이스에 대해 BLAST하였다. 마우스 B1G3 및 B1C1에 대해 최고의 상동성을 갖는 인간 생식세포계열을 인간화를 위한 수용 프레임워크로 선택하였다. 마우스 항체 중쇄/경쇄 가변 영역 CDR들을 선택된 프레임워크 내에 삽입하고, 더 많은 후보 중쇄/경쇄 가변 영역들을 수득하기 위해 프레임워크 내의 잔기(들)를 추가로 돌연변이시켰다. 총 15개의 인간화 B1G3 항체(즉, huB1G3-V1 내지 huB1G3-V15), 및 12개의 인간화 B1C1 항체(huB1C1-V1 내지 huB1C1-V9, 및 huB1C1-V11 내지 huB1C1-V13)를 수득하였으며, 이들의 중쇄/경쇄 가변 영역 서열번호는 표 1에 있다.
인간 IgG1 중쇄 불변 영역(서열번호 23)에 연결된 인간화 B1G3/B1C1 중쇄 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오티드를 함유하는 벡터 각각, 및 인간 카파 경쇄 불변 영역(서열번호 24)에 연결된 인간화 경쇄 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오티드를 함유하는 벡터 각각을, 60 μg/mL PEI 하에, 20 mL의 293F 현탁 세포 배양물에 47.62% 대 52.38% 경쇄 대 중쇄 구조물의 비로 일시적으로 형질감염시켰다. 6 일 후에 진탕 플라스크에 세포 상등액을 수거하고, 스핀다운시켜 세포를 펠릿화하고, 면역글로불린 분리를 위해 0.22 μm 필터를 통해 여과시켰다. 항체들을 단백질 A 친화 크로마토그래피로 정제하였다. 간략하게, 단백질 A 세파로스 컬럼(베스트크롬(상하이) 바이오사이언시즈, Cat#AA0273)을 PBS 완충액을 사용하여 5 내지 10 컬럼 부피로 세척하였다. 세포 상등액을 컬럼에 통과시킨 다음, 단백질에 대한 흡광도가 기준선에 도달할 때까지 PBS 완충액을 사용하여 컬럼을 세척하였다. 컬럼들을 용출 완충액(0.1 M 글리신-HCl, pH 2.7)으로 용출시키고, 바로 중화 완충액(1 M 트리스-HCl, pH 9.0)을 사용하여 5 mL 튜브 내에 수거하였다. 면역글로불린을 함유하는 분획들을 모으고, 4 ℃에서 PBS에 밤새 투석시켰다.
실시예 7 인간화 B1G3 및 B1C1 항체의 특성화
인간화 B1G3 및 B1C1 항체들을 또한 인간 및 사이노몰거스 BCMA에 대한 그의 결합 친화성/능력, 및 다른 기능 활성들에 대해 비아코어, 포획 ELISA, 및 경쟁 분석으로 상기 실시예들의 프로토콜에 따라 검사하였다. 포획 ELISA에서는, 96-웰 마이크로플레이트를 2 μg/mL 염소 항-인간 IgG(어피니퓨어 염소 항-인간 IgG, F(ab')2 단편 특이적, 잭슨 이뮤노리서치, Cat#109-005-097), 및 비-BCMA 단백질(사내 제조)에 결합하는 마우스 대조군 항체를 추가로 사용하였다.
인간화 B1G3 및 B1C1 항체의 인간 BCMA에 대한 결합 활성
mAb 포획 ELISA (EC50, ng/mL) mAb 포획 ELISA (EC50, ng/mL) mAb 포획 ELISA (EC50, ng/mL)
마우스 B1G3 0.942 마우스 B1G3 1.089 마우스 B1G3 0.898
키메라 B1G3 1.701 키메라 B1G3 2.143 키메라 B1G3 2.387
huB1G3-V1 1.880 huB1G3-V6 2.136 huB1G3-V11 1.937
huB1G3-V2 1.888 huB1G3-V7 1.949 huB1G3-V12 1.753
huB1G3-V3 2.265 huB1G3-V8 - huB1G3-V13 1.801
huB1G3-V4 1.745 huB1G3-V9 2.263 huB1G3-V14 1.977
huB1G3-V5 1.759 huB1G3-V10 1.841 huB1G3-V15 2.011
BM 1.088 BM 1.155 BM 1.033
마우스 IgG - 마우스 IgG - 마우스 IgG -
인간 IgG - 인간 IgG - 인간 IgG -
마우스 B1C1 0.638 마우스 B1C1 0.663 마우스 B1C1 1.201
키메라 B1C1 0.832 키메라 B1C1 1.122 키메라 B1C1 1.050
huB1C1-V1 0.675 huB1C1-V8 0.859 huB1C1-V11 1.331
huB1C1-V2 0.705 huB1C1-V9 0.769 huB1C1-V12 1.184
huB1C1-V3 0.670 BM 0.801 huB1C1-V13 1.140
huB1C1-V4 0.709 마우스 IgG - BM 1.228
huB1C1-V5 0.753 인간 IgG - 마우스 IgG -
huB1C1-V6 - 인간 IgG -
huB1C1-V7 0.573
BM 0.591
마우스 IgG -
인간 IgG -
포획 ELISA 결과는 상기 표 6 및 도 4A 내지 4C 및 5A 내지 5C에 요약하였다. huB1G3-V8 및 huB1C1-V6은 인간 BCMA에 결합하지 않았고, 나머지 항체들은 그들의 모 항체 또는 벤치마크 항체들에 비해 필적하거나 약간 더 낮은 활성을 갖는 것을 볼 수 있다.
인간화 항체 huB1G3-V13 및 huB1C1-V13을 더 특성화하였다. 간략하게, 이들 2개 항체를 인간 및 원숭이 BCMA에 대한 그들의 결합 능력, 및 또한 BCMA-BAFF 또는 벤치마크-BCMA 상호작용을 차단하는 그들의 능력에 대해 전술한 프로토콜에 따라 검사하였다.
결과는 하기 표 7 및 도 6 내지 11에 요약하였다.
항체 huB1G3-V13은 포획 ELISA 분석에서 인간 BCMA에 대한 우수한 결합 활성을 나타내었는데, 이것은 벤치마크 항체에 필적하였고(도 6), 벤치마크 항체보다 인간 또는 원숭이 BCMA에 대해 약간 더 낮은 결합 친화성을 나타내었다. 또한, 상기 항체는 벤치마크 항체와 비교하여 거의 동일한 차단 능력하에 BCMA-BAFF 상호작용을 효과적으로 차단할 수 있고(도 7), 또한 벤치마크-BCMA 상호작용을 차단할 수 있다(도 8).
항체 huB1C1-V13은 포획 ELISA 분석에서, 벤치마크 항체보다 약간 더 낮은, 인간 BCMA에 대한 우수한 결합 활성(도 9), 및 또한 인간 또는 원숭이 BCMA에 대해 벤치마크보다 약간 더 낮은 결합 친화성을 나타내었다. 더욱이, 상기 항체는 벤치마크 항체와 비교하여 거의 동일한 차단 능력하에 BCMA-BAFF 상호작용을 효과적으로 차단할 수 있고(도 10), 또한 벤치마크-BCMA 상호작용을 차단할 수 있다(도 11).
인간화 항체 huB1G3-V13 및 huB1C1-V13의 결합 및 기능 활성
BCMA mAb 결합 분석 기능 분석
인간 BCMA 사이노몰거스 BCMA 경쟁 ELISA (IC50, nM)
결합 포획 ELISA (EC50, nM.) 비아코어
(KD, M)		 비아코어
(KD, M)		 BCMA/BAFF-Fc
리간드-차단
ELISA		 벤치마크-차단
ELISA
huB1G3-V13 1.33 2.03E-09 8.87E-09 3.86 6.41
키메라 B1G3 1.47 2.22E-09 미검사 9.04 9.89
마우스 B1G3 0.54 6.83E-10 2.01E-09 3.03 3.91
BM 0.71 7.42E-10 5.99E-10 3.64 2.23
huB1C1-V13 1.60 2.05E-09 5.11E-08 4.05 6.16
키메라 B1C1 1.25 1.25E-09 / 2.29 3.01
마우스 B1C1 0.73 8.79E-10 1.86E-09 2.61 3.61
BM 0.93 7.42E-10 5.99E-10 3.59 1.64
본 개시내용을 하나 이상의 실시양태들과 관련하여 전술하였지만, 본 개시내용이 이들 실시양태로 한정되지 않음을 이해해야 하며, 설명은 첨부된 청구범위의 진의 및 범위 내에 포함될 수 있는 바와 같은 모든 대체물, 변경 및 등가물을 포함하는 것이다. 본원에서 인용된 모든 참조문헌들은 또한 전체로 참고로 도입된다.
본 출원의 서열들을 하기에 요약한다.
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
SEQUENCE LISTING <110> Salubris (Chengdu) Biotech Co., Ltd <120> ANTIBODIES BINDING BCMA AND USES THEREOF <140> PCT/CN2020/141148 <141> 2020-12-30 <150> US 62/956,643 <151> 2020-01-03 <160> 61 <170> SIPOSequenceListing 1.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH CDR1 for mouse, chimeric and humanized B1G3 and B1C1 <400> 1 Asn Xaa Gly Met Asn 1 5 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH CDR1 for mouse, chimeric and humanized B1A1 <400> 2 Ser Ala Tyr Tyr Trp Asn 1 5 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH CDR2 for mouse, chimeric and humanized B1G3 AND B1C1 <400> 3 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH CDR2 for mouse, chimeric and humanized B1A1 <400> 4 Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn 1 5 10 15 <210> 5 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH CDR3 for mouse, chimeric and humanized B1G3 AND B1C1 <400> 5 Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH CDR3 for mouse, chimeric and humanized B1A1 <400> 6 Tyr Asp Tyr Asp Glu Val Phe Ala Tyr 1 5 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL CDR1 for mouse, chimeric and humanized B1G3 AND B1C1 <400> 7 Arg Ala Ser Ser Ser Val Xaa Tyr Met His 1 5 10 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL CDR1 for mouse, chimeric and humanized B1A1 <400> 8 Lys Ala Ser Gln Glu Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL CDR2 for mouse, chimeric and humanized B1G3 AND B1C1 <400> 9 Ala Thr Ser Xaa Leu Ala Ser 1 5 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL CDR2 for mouse, chimeric and humanized B1A1 <400> 10 Trp Ala Ser Met Arg His Thr 1 5 <210> 11 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL CDR3 for mouse, chimeric and humanized B1G3 AND B1C1 <400> 11 Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL CDR3 for mouse, chimeric and humanized B1A1 <400> 12 Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 13 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for mouse and chimeric B1G3 <400> 13 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Asn Leu Arg Ile Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 14 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1G3-V1, huB1G3-V6- huB1G3-V10, huB1G3-V12, VH for huB1G3-V2, VH for huB1G3-V3, VH for huB1G3-V4, VH for huB1G3-V5, VH for huB1G3-V11 and huB1G3-V13, VH for huB1G3-V14 and huB1G3-V15 <400> 14 Glu Xaa Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Xaa Xaa Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Xaa Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Xaa Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 15 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for mouse and chimeric B1C1 <400> 15 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Asp Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Asn Ser Ala Ser Thr Ala Ser 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asp Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 16 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1C1-V1, huB1C1-V5- huB1C1-V9, and huB1C1-V12, VH for huB1C1-V2, VH for huB1C1-V3, VH for huB1C1-V4, VH for huB1C1-V11 and huB1C1-V13 <400> 16 Glu Xaa Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Xaa Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Xaa Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 17 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for B1A1 <400> 17 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Ala 20 25 30 Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asn Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Pro Tyr Asp Tyr Asp Glu Val Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 18 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for mouse and chimeric B1G3 <400> 18 Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Pro Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 19 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1G3-V1- huB1G3-V5, huB1G3-V11, and huB1G3-V14, VL for huB1G3-V6, VL for huB1G3-V7, VL for huB1G3-V8, VL for huB1G3-V9, VL for huB1G3-V10, VL for huB1G3-V12, huB1G3-V13 and huB1G3-V15 <400> 19 Asp Ile Gln Xaa Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Xaa Pro Lys Xaa Xaa Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 20 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for mouse and chimeric B1C1 <400> 20 Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Thr Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Glu Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Phe Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Ser Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 21 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1C1-V1- huB1C1-V4 and huB1C1-V11, VL for huB1C1-V5, VL for huB1C1-V6, VL for huB1C1-V7, VL for huB1C1-V8, VL for huB1C1-V9, VL for huB1C1-V12 and huB1C1-V13 <400> 21 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Phe Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Xaa Pro Lys Xaa Xaa Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Xaa Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Xaa Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 22 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for B1A1 <400> 22 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Glu Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Met Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Ile Ile Thr Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 23 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> Heavy chain constant region for chimeric and humanized antibodies <400> 23 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 24 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> Light chain constant region for chimeric and humanized antibodies <400> 24 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 25 <211> 184 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> Human BCMA <400> 25 Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 15 Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45 Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu 50 55 60 Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile 65 70 75 80 Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu 85 90 95 Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu 100 105 110 Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys 115 120 125 Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe 130 135 140 Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys 145 150 155 160 Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu 165 170 175 Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg 180 <210> 26 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> Heavy chain of Benchmark <400> 26 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Thr Tyr Arg Gly His Ser Asp Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Ile Tyr Asp Gly Tyr Asp Val Leu Asp Asn Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Glu Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 27 <211> 214 <212> PRT <213> Light chain of Benchmark <220> <221> <223> VH-CDR1 for mouse, chimeric and humanized C1C1 antibodies, defined by kabat numbering system <400> 27 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Lys Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 28 <211> 993 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> Heavy chain constant region for chimeric and humanized antibodies <400> 28 Gly Cys Thr Ala Gly Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly Gly Gly Cys Cys 1 5 10 15 Cys Ala Thr Cys Gly Gly Thr Cys Thr Thr Cys Cys Cys Cys Cys Thr 20 25 30 Gly Gly Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Gly 35 40 45 Ala Gly Cys Ala Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Cys Ala 50 55 60 Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Cys Thr Gly Gly Gly Cys Thr Gly 65 70 75 80 Cys Cys Thr Gly Gly Thr Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Thr Ala Cys 85 90 95 Thr Thr Cys Cys Cys Cys Gly Ala Ala Cys Cys Gly Gly Thr Gly Ala 100 105 110 Cys Gly Gly Thr Gly Thr Cys Gly Thr Gly Gly Ala Ala Cys Thr Cys 115 120 125 Ala Gly Gly Cys Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Ala Gly Cys 130 135 140 Gly Gly Cys Gly Thr Gly Cys Ala Cys Ala Cys Cys Thr Thr Cys Cys 145 150 155 160 Cys Gly Gly Cys Thr Gly Thr Cys Cys Thr Ala Cys Ala Gly Thr Cys 165 170 175 Cys Thr Cys Ala Gly Gly Ala Cys Thr Cys Thr Ala Cys Thr Cys Cys 180 185 190 Cys Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Gly Thr Gly Gly Thr Gly Ala 195 200 205 Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly 210 215 220 Cys Thr Thr Gly Gly Gly Cys Ala Cys Cys Cys Ala Gly Ala Cys Cys 225 230 235 240 Thr Ala Cys Ala Thr Cys Thr Gly Cys Ala Ala Cys Gly Thr Gly Ala 245 250 255 Ala Thr Cys Ala Cys Ala Ala Gly Cys Cys Cys Ala Gly Cys Ala Ala 260 265 270 Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Ala Gly 275 280 285 Ala Ala Ala Gly Thr Thr Gly Ala Gly Cys Cys Cys Ala Ala Ala Thr 290 295 300 Cys Thr Thr Gly Thr Gly Ala Cys Ala Ala Ala Ala Cys Thr Cys Ala 305 310 315 320 Cys Ala Cys Ala Thr Gly Cys Cys Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Cys 325 330 335 Cys Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys Thr Gly Ala Ala Cys Thr Cys Cys 340 345 350 Thr Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Cys Cys Gly Thr Cys Ala Gly Thr 355 360 365 Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Thr Cys Cys Cys Cys Cys Cys Ala 370 375 380 Ala Ala Ala Cys Cys Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys Cys Cys 385 390 395 400 Thr Cys Ala Thr Gly Ala Thr Cys Thr Cys Cys Cys Gly Gly Ala Cys 405 410 415 Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Thr Cys Ala Cys Ala Thr Gly Cys 420 425 430 Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Ala Cys Gly Thr Gly Ala 435 440 445 Gly Cys Cys Ala Cys Gly Ala Ala Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala 450 455 460 Gly Gly Thr Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys Ala Ala Cys Thr Gly Gly 465 470 475 480 Thr Ala Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys Gly Gly Cys Gly Thr Gly Gly 485 490 495 Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr Ala Ala Thr Gly Cys Cys Ala Ala 500 505 510 Gly Ala Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys Gly Cys Gly Gly Gly Ala Gly 515 520 525 Gly Ala Gly Cys Ala Gly Thr Ala Cys Ala Ala Cys Ala Gly Cys Ala 530 535 540 Cys Gly Thr Ala Cys Cys Gly Thr Gly Thr Gly Gly Thr Cys Ala Gly 545 550 555 560 Cys Gly Thr Cys Cys Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Cys Thr Gly 565 570 575 Cys Ala Cys Cys Ala Gly Gly Ala Cys Thr Gly Gly Cys Thr Gly Ala 580 585 590 Ala Thr Gly Gly Cys Ala Ala Gly Gly Ala Gly Thr Ala Cys Ala Ala 595 600 605 Gly Thr Gly Cys Ala Ala Gly Gly Thr Cys Thr Cys Cys Ala Ala Cys 610 615 620 Ala Ala Ala Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys 625 630 635 640 Cys Cys Ala Thr Cys Gly Ala Gly Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Thr 645 650 655 Cys Thr Cys Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys Ala Ala Ala Gly Gly Gly 660 665 670 Cys Ala Gly Cys Cys Cys Cys Gly Ala Gly Ala Ala Cys Cys Ala Cys 675 680 685 Ala Gly Gly Thr Gly Thr Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Cys Cys 690 695 700 Cys Cys Cys Ala Thr Cys Cys Cys Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly 705 710 715 720 Ala Thr Gly Ala Cys Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Cys Ala Gly Gly 725 730 735 Thr Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Thr Gly Cys Cys Thr 740 745 750 Gly Gly Thr Cys Ala Ala Ala Gly Gly Cys Thr Thr Cys Thr Ala Thr 755 760 765 Cys Cys Cys Ala Gly Cys Gly Ala Cys Ala Thr Cys Gly Cys Cys Gly 770 775 780 Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Ala Gly Ala Gly Cys Ala Ala 785 790 795 800 Thr Gly Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Gly Gly Ala Gly Ala Ala Cys 805 810 815 Ala Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly Cys 820 825 830 Cys Thr Cys Cys Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Gly Ala Cys Thr Cys 835 840 845 Cys Gly Ala Cys Gly Gly Cys Thr Cys Cys Thr Thr Cys Thr Thr Cys 850 855 860 Cys Thr Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Ala Ala Gly Cys Thr Cys Ala 865 870 875 880 Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Ala Gly Ala Gly Cys Ala Gly 885 890 895 Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala Ala Cys 900 905 910 Gly Thr Cys Thr Thr Cys Thr Cys Ala Thr Gly Cys Thr Cys Cys Gly 915 920 925 Thr Gly Ala Thr Gly Cys Ala Thr Gly Ala Gly Gly Cys Thr Cys Thr 930 935 940 Gly Cys Ala Cys Ala Ala Cys Cys Ala Cys Thr Ala Cys Ala Cys Gly 945 950 955 960 Cys Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Cys Cys Cys 965 970 975 Thr Gly Thr Cys Thr Cys Cys Gly Gly Gly Thr Ala Ala Ala Thr Gly 980 985 990 Ala <210> 29 <211> 324 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> Light chain constant region for chimeric and humanized antibodies <400> 29 Cys Gly Thr Ala Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Cys 1 5 10 15 Cys Ala Thr Cys Thr Gly Thr Cys Thr Thr Cys Ala Thr Cys Thr Thr 20 25 30 Cys Cys Cys Gly Cys Cys Ala Thr Cys Thr Gly Ala Thr Gly Ala Gly 35 40 45 Cys Ala Gly Thr Thr Gly Ala Ala Ala Thr Cys Thr Gly Gly Ala Ala 50 55 60 Cys Thr Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr Gly Thr Gly Thr Gly 65 70 75 80 Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Thr Ala Ala Cys Thr Thr Cys 85 90 95 Thr Ala Thr Cys Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Gly Gly Cys Cys Ala 100 105 110 Ala Ala Gly Thr Ala Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala Gly Gly Thr 115 120 125 Gly Gly Ala Thr Ala Ala Cys Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala 130 135 140 Thr Cys Gly Gly Gly Thr Ala Ala Cys Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly 145 150 155 160 Ala Gly Ala Gly Thr Gly Thr Cys Ala Cys Ala Gly Ala Gly Cys Ala 165 170 175 Gly Gly Ala Cys Ala Gly Cys Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly Cys 180 185 190 Ala Cys Cys Thr Ala Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Ala Gly Cys Ala 195 200 205 Gly Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Gly Cys Thr Gly Ala Gly 210 215 220 Cys Ala Ala Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly Ala Gly 225 230 235 240 Ala Ala Ala Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Thr Cys Thr Ala Cys Gly 245 250 255 Cys Cys Thr Gly Cys Gly Ala Ala Gly Thr Cys Ala Cys Cys Cys Ala 260 265 270 Thr Cys Ala Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Thr Cys Gly 275 280 285 Cys Cys Cys Gly Thr Cys Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Gly Cys Thr 290 295 300 Thr Cys Ala Ala Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Ala Gly Thr Gly 305 310 315 320 Thr Thr Gly Ala <210> 30 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH CDR1 for mouse, chimeric and humanized B1G3 <400> 30 Asn His Gly Met Asn 1 5 <210> 31 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL CDR1 for mouse, chimeric and humanized B1G3 <400> 31 Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met His 1 5 10 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL CDR2 for mouse, chimeric and humanized B1G3 <400> 32 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 33 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1G3-V1, huB1G3-V6- huB1G3-V10, huB1G3-V12 <400> 33 Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Cys Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 34 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1G3-V2 <400> 34 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Cys Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 35 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1G3-V3 <400> 35 Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Cys Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 36 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1G3-V4 <400> 36 Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Cys Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 37 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1G3-V5 <400> 37 Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Cys Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 38 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1G3-V11 and huB1G3-V13 <400> 38 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 39 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1G3-V14 and huB1G3-V15 <400> 39 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Cys Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 40 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1G3-V1- huB1G3-V5, huB1G3-V11, and huB1G3-V14 <400> 40 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 41 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1G3-V6 <400> 41 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 42 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1G3-V7 <400> 42 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 43 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1G3-V8 <400> 43 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 44 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1G3-V9 <400> 44 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Pro Leu Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 45 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1G3-V10 <400> 45 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 46 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1G3-V12, huB1G3-V13 and huB1G3-V15 <400> 46 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val His Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH CDR1 for mouse, chimeric and humanized B1C1 <400> 47 Asn Phe Gly Met Asn 1 5 <210> 48 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL CDR1 for mouse, chimeric and humanized B1C1 <400> 48 Arg Ala Ser Ser Ser Val Phe Tyr Met His 1 5 10 <210> 49 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL CDR2 for mouse, chimeric and humanized B1C1 <400> 49 Ala Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 50 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1C1-V1, huB1C1-V5- huB1C1-V9, and huB1C1-V12 <400> 50 Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Asn Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 51 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1C1-V2 <400> 51 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Asn Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 52 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1C1-V3 <400> 52 Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 53 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1C1-V4 <400> 53 Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Asn Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 54 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VH for huB1C1-V11 and huB1C1-V13 <400> 54 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Phe 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 55 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1C1-V1- huB1C1-V4 and huB1C1-V11 <400> 55 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Phe Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 56 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1C1-V5 <400> 56 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Phe Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 57 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1C1-V6 <400> 57 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Phe Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 58 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1C1-V7 <400> 58 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Phe Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 59 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1C1-V8 <400> 59 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Phe Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 60 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1C1-V9 <400> 60 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Phe Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 61 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> <223> VL for huB1C1-V12 and huB1C1-V13 <400> 61 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Phe Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Thr Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105

Claims (19)

  1. (1) 서열번호 1 (X1=H 또는 F), 3 및 5 각각; 또는 (2) 서열번호 2, 4 및 6 각각에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 영역, CDR2 영역 및 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, B 세포 성숙화 항원(BCMA)에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부.
  2. 제 1 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역이 서열번호 13, 14 (X1=I, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F; X1=V, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F; X1=I, X2=V, X3=T, X4=C, X5=F; X1=I, X2=A, X3=S, X4=C, X5=F; X1=I, X2=A, X3=Y, X4=C, X5=Y; X1=V, X2=V, X3=S, X4=S, X5=Y; 또는 X1=V, X2=V, X3=S, X4=C, X5=Y), 15, 16 (X1=I, X2=N, X3=F; X1=V, X2=N, X3=F; X1=I, X2=T, X3=F; X1=I, X2=N, X3=Y; 또는 X1=V, X2=T, X3=Y), 또는 17에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부.
  3. 제 1 항에 있어서,
    (1) 서열번호 7 (X1=H), 9 (X1=N) 및 11 각각; (2) 서열번호 7 (X1=F), 9 (X1=T) 및 11 각각; 또는 (3) 서열번호 8, 10 및 12 각각에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 영역, CDR2 영역 및 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부.
  4. 제 3 항에 있어서,
    경쇄 가변 영역이 서열번호 18, 19 (X1=L, X2=P, X3=P, X4=W, X5=Y; X1=M, X2=P, X3=P, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=A, X3=P, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=P, X3=L, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=P, X3=P, X4=L, X5=Y; X1=L, X2=P, X3=P, X4=W, X5=F; 또는 X1=M, X2=A, X3=P, X4=L, X5=F), 20, 21 (X1=S, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=F; X1=A, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=L, X3=W, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=P, X3=L, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=P, X3=W, X4=F, X5=F; X1=S, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=Y; X1=A, X2=P, X3=L, X4=F, X5=Y) 또는 22에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부.
  5. 제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 (1) 서열번호 1 (X1=H), 3, 5, 7 (X1=H), 9 (X1=N) 및 11 각각; (2) 서열번호 1 (X1=F), 3, 5, 7 (X1=F), 9 (X1=T) 및 11 각각; 또는 (3) 서열번호 2, 4, 6, 8, 10 및 12 각각에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부.
  6. 제 5 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이 (1) 서열번호 13 및 18 각각; (2) 서열번호 14 (X1=I, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F; X1=V, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F; X1=I, X2=V, X3=T, X4=C, X5=F; X1=I, X2=A, X3=S, X4=C, X5=F; X1=I, X2=A, X3=Y, X4=C, X5=Y; X1=V, X2=V, X3=S, X4=S, X5=Y; 또는 X1=V, X2=V, X3=S, X4=C, X5=Y) 및 19 (X1=L, X2=P, X3=P, X4=W, X5=Y) 각각; (3) 서열번호 14 (X1=I, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F) 및 19 (X1=M, X2=P, X3=P, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=A, X3=P, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=P, X3=L, X4=W, X5=Y; X1=L, X2=P, X3=P, X4=L, X5=Y; 또는 X1=L, X2=P, X3=P, X4=W, X5=F) 각각; (4) 서열번호 14 (X1=I, X2=A, X3=T, X4=C, X5=F; 또는 X1=V, X2=V, X3=S, X4=C, X5=Y) 및 19 (X1=M, X2=A, X3=P, X4=L, X5=F) 각각; (5) 서열번호 15 및 20 각각; (6) 서열번호 16 (X1=I, X2=N, X3=F; X1=V, X2=N, X3=F; X1=I, X2=T, X3=F; X1=I, X2=N, X3=Y; 또는 X1=V, X2=T, X3=Y) 및 21 (X1=S, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=F) 각각; (7) 서열번호 16 (X1=I, X2=N, X3=F) 및 21 (X1=A, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=L, X3=W, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=P, X3=L, X4=Y, X5=F; X1=S, X2=P, X3=W, X4=F, X5=F; 또는 X1=S, X2=P, X3=W, X4=Y, X5=Y) 각각; (8) 서열번호 16 (X1=I, X2=N, X3=F; 또는 X1=V, X2=T, X3=Y) 및 21 (X1=A, X2=P, X3=L, X4=F, X5=Y) 각각; 또는 (9) 서열번호 17 및 22 각각에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부.
  7. 제 6 항에 있어서,
    중쇄 가변 영역에 연결된, 서열번호 23의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역, 및 경쇄 가변 영역에 연결된, 서열번호 24의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부.
  8. 제 1 항에 있어서,
    (a) 인간 또는 원숭이 BCMA에 결합하고; (b) 인간 BCMA-인간 BAFF 또는 APRIL 상호작용을 차단하는, 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부.
  9. 제 1 항에 있어서,
    마우스, 인간, 키메라 또는 인간화 항체인, 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부.
  10. 제 1 항에 있어서,
    IgG1, IgG2 또는 IgG4 이소타입인, 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부.
  11. 제 1 항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.
  12. 제 11 항에 있어서,
    항-종양제 및/또는 사이토카인을 추가로 포함하는 약학 조성물.
  13. 제 1 항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 그의 항원-결합부, 또는 제 11 항에 따른 약학 조성물의 치료 효과량을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 증가된 BCMA 발현과 연관된 종양을 치료하는 방법.
  14. 제 13 항에 있어서,
    암 질환이 비-고형 종양 또는 고형 종양인, 방법.
  15. 제 13 항에 있어서,
    암 질환이 백혈병, 림프종 또는 다발성 골수종인, 방법.
  16. 제 13 항에 있어서,
    면역관문 항체, 공자극 항체 및/또는 사이토카인을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  17. 제 16 항에 있어서,
    면역관문 항체가 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-CTLA-4 항체, 항-LAG-3 항체, 항-TIM3 항체 또는 그들의 조합인, 방법.
  18. 제 16 항에 있어서,
    공자극 항체가 항-CD137 항체, 항-OX40 항체 또는 항-GITR 항체인, 방법.
  19. 제 16 항에 있어서,
    사이토카인이 IL-2, IL-21, IFN-γ, TNF-α 및/또는 IL-4인, 방법.
KR1020217041996A 2020-01-03 2020-12-30 Bcma에 결합하는 항체 및 그의 용도 KR20220012314A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202062956643P 2020-01-03 2020-01-03
US62/956,643 2020-01-03
PCT/CN2020/141148 WO2021136323A1 (en) 2020-01-03 2020-12-30 Antibodies binding bcma and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220012314A true KR20220012314A (ko) 2022-02-03

Family

ID=76686521

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217041996A KR20220012314A (ko) 2020-01-03 2020-12-30 Bcma에 결합하는 항체 및 그의 용도

Country Status (3)

Country Link
KR (1) KR20220012314A (ko)
TW (1) TW202128769A (ko)
WO (1) WO2021136323A1 (ko)

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX341884B (es) * 2009-03-10 2016-09-07 Biogen Ma Inc Anticuerpos anti-antigeno de maduracion de celulas b (bcma).
LT3415531T (lt) * 2011-05-27 2023-09-25 Glaxo Group Limited Bcma (cd269/tnfrsf17) – surišantys baltymai
TW201425336A (zh) * 2012-12-07 2014-07-01 Amgen Inc Ｂｃｍａ抗原結合蛋白質
DK3226897T3 (da) * 2014-12-05 2021-04-19 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antistoffer der rammer b-cellemodningsantigen og fremgangsmåder til anvendelse
CA3219684A1 (en) * 2015-04-13 2016-10-13 Pfizer Inc. Anti-bcma antibodies, anti-cd3 antibodies and bi-specific antibodies binding to bcma and cd3
US10683369B2 (en) * 2015-08-03 2020-06-16 Engmab Sàrl Monoclonal antibodies against BCMA
WO2019089969A2 (en) * 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021136323A1 (en) 2021-07-08
TW202128769A (zh) 2021-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7456075B2 (ja) 抗体結合ｂｃｍａ及びその使用
JP7331298B2 (ja) 抗体結合ｔｓｌｐ及びその使用
US10662249B1 (en) Antibodies targeting CD40 and uses thereof
AU2021240769B2 (en) Antibodies binding Siglec15 and uses thereof
WO2021197335A1 (en) Antibodies binding cd40 and uses thereof
US20230105029A1 (en) Antibodies binding il4r and uses thereof
KR20210010998A (ko) 항체 결합 피디 1 및 그의 용도
JP7440724B2 (ja) Ｃｔｌａ４に結合する抗体及びその使用
WO2021136323A1 (en) Antibodies binding bcma and uses thereof
US20200332017A1 (en) Antibodies or antigen-binding portions binding cd40 and uses thereof
WO2023202672A1 (en) Antibodies targeting sirp-alpha and uses thereof
WO2021115465A1 (en) Antibodies binding rankl and uses thereof
JP2023527583A (ja) Ｌａｇ３に結合する抗体およびその使用

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
WITB Written withdrawal of application