JP6878464B2 - 組換えアデノウイルスベクター性fmdvワクチンとその使用 - Google Patents
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Description
(関連出願の相互引用)本出願は米国仮特許出願(2016年1月29日出願)の優先権を主張する。
(技術分野)
本発明は、動物の口蹄疫ウイルス(FMDV)感染と闘う組成物に関する。本開示は、FMDV抗原を含む医薬組成物、FMDVに対抗しワクチン免疫する方法、並びにそのような方法及び組成物に関して使用されるキットを提供する。
FMDは、その短い潜伏期間、強い伝染性、口内及び脚先端の潰瘍形成、及び時に若齢獣の死亡を特徴とする。FMDは、多数の動物種、特に畜牛、ブタ、ヒツジ及びヤギを冒す。この疾患の原因因子は、ピコルナウイルス科のアフトウイルス属に属するリボ核酸(RNA)ウイルスである(Cooper et al., 1978, Intervirology 10, 165-180)。現在、以下の少なくとも7つの型の口蹄疫ウイルス(FMDV)が知られている:ヨーロッパ型(A、O及びC)、アフリカ型(SAT1、SAT2及びSAT3)、及びアジア型(アジア1)。多数の亜型もまた区別されている(Kleid et al., 1981, Science 214, 1125-1129)。
母獣由来抗体(MDA)は、仔ウシ(2歳齢以下の畜牛)のFMDVに対するワクチン免疫への応答を抑制する能力を有することが報告されている(Graves, 1963, Journal of Immunology 91:251-256;Brun et al., 1977, Developments in Biological Standardisation, 25:117-122)。
組換えウイルスベクターはワクチン及び/又は医薬組成物に処方することができる。そのようなワクチン又は組成物を用いて動物をワクチン免疫し、同種及び異種FMDV株に対して防御を提供することができる。医薬的又は獣医的に許容できる担体、賦形剤、アジュバント又はベヒクルとともに処方されたワクチン又は組成物は、熱安定性改善及び温度変動処理能力を提供する。
通常動物及び母獣由来抗体陽性(MDA陽性)動物でFMDV感染に対する防御を強化する方法が提供される。少なくとも1つの抗原性ポリペプチド又はそのフラグメント若しくは変種及び使用のための指示を含むキットもまた提供される。
動物で免疫原性応答を引き出す、FMDV抗原を発現する組換えウイルスベクターを含む組成物又はワクチンが提供される。当該組換えウイルスベクターは、FMDV抗原を発現するアデノウイルスベクターでもよい。当該抗原を発現する組換えウイルスベクターをワクチン又は医薬組成物に処方して、動物で防御応答を引き出し又は刺激するために用いることができる。ある実施態様では、当該ポリペプチド抗原は、FMDV構造タンパク質P1(VP4-VP2-Vp3-VP1)、非構造タンパク質P2(2A、2B及び2C)又は非構造タンパク質P3(3A、3B、3C及び3D)又は前記の活性フラグメント若しくは変種である。
本開示の抗原性ポリペプチドは、完全長ポリペプチド又はその活性なフラグメント若しくは変種でもよいことは承知されている。“活性なフラグメント”又は“活性な変種”とは、当該フラグメント又は変種が当該ポリペプチドの抗原性の性質を保持することを意図する。したがって、本開示は、動物で免疫原性応答を引き出すFMDVポリペプチド、抗原、エピトープ又は免疫原を包含する。FMDVポリペプチド、抗原、エピトープ又は免疫原は、動物(例えばヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類)で応答を引き出し、誘発し又は刺激する、任意のFMDVポリペプチド、抗原、エピトープ又は免疫原(例えばタンパク質、ペプチド又はそのフラグメント若しくは変種(ただしこれらに限定されない))でありうる。
キャプシドタンパク質の単純な結合が、プロトマー或いは5S分子(前記はFMDVキャプシドの初期構成成分である)を形成する。続いて、このプロトマーはペンタマーへと複合化し、12S分子を形成する。ビリオンは、12の12Sペンタマーの集合によるゲノムRNA分子の被包化から生じ、したがって146S粒子を構成する。ウイルスキャプシドはまた、その内部にRNA分子が存在しなくても形成されうる(以下では“空キャプシド”)。空キャプシドはまた70S粒子と称される。空キャプシドの形成はウイルス複製時に自然に生じるか、又は化学的処理によって人工的に生じうる。
いくつかの実施態様では、ワクチンはさらに、アジュバント、例えば米国特許7,371,395に記載された水中油(O/W)エマルジョンを含む。
さらに他の実施態様では、アジュバントは、TS6、TS7、TS8及びTS9エマルジョン、LR3、LR4及びLR6エマルジョン、LF2エマルジョン、CARBIGENTMアジュバント、ENABL(商標)アジュバント、ポリアクリル酸、水酸化アルミニウム若しくはリン酸アルミニウム、サポニン、CpG、油中水エマルジョン、及び水中油エマルジョン、又は前記の組合せを含む。
いくつかの実施態様では、動物の応答は防御免疫応答である。
特段の説明がなければ、本明細書で用いられる全ての技術用語及び学術用語は、本開示が属する分野の業者が一般的に理解する意味と同じ意味を有する。単数用語“a”、“an”及び“the”は、文脈が明瞭にそうではないことを示していないかぎり複数の対応語を含む。同様に、“or”という語は、文脈が明らかにそうではないことを示していないかぎり“and”を含むことが意図される。
組成物又はワクチンに対する“免疫学的応答”は、当該宿主における問題の組成物又はワクチンに対する細胞性及び/又は抗体媒介性免疫応答の発生である。通例、“免疫学的応答”には以下の作用の1つ以上が含まれる(ただしこれらに限定されない):問題の組成物又はワクチンに含まれる1つ又は複数の抗原を特異的に指向する抗体、B細胞、ヘルパーT細胞、及び/又は細胞傷害性T細胞の産生。好ましくは、宿主は治療的又は防御的な免疫学的応答のどちらかを示し、したがって新たな感染に対する耐性が強化され、及び/又は当該疾患の臨床的重篤度が軽減されるであろう。そのような防御は、感染宿主によって通常示される症状の軽減又は欠如、より迅速な回復期間、及び/又は感染宿主におけるウイルス力価の低下によって提示されるであろう。
したがって、エピトープを発現するポリヌクレオチドの最小限構造は、それが、FMDVポリペプチドのエピトープ又は抗原性決定基をコードするヌクレオチドを含むか又は本質的に前記から成るか又は前記から成るということである。FMDVポリペプチドのフラグメントをコードするポリヌクレオチドは、当該ポリペプチドをコードする配列の最小限15ヌクレオチド、約30−45ヌクレオチド、約45−75、又は少なくとも57、87又は150の連続的な又は切れ目のないヌクレオチドを含むか、又は本質的に前記から成るか、又は前記から成ることができる。
本開示はさらに、FMDV抗原、エピトープ又は免疫原をコードするポリヌクレオチドの相補鎖を含む。相補鎖はポリマーで任意の長さであることができ、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、及び任意の組合せのアナローグを含むことができる。
本明細書で用いられる“精製された”という用語は絶対的な純度を必要とせず、むしろ相対的用語として意図される。したがって、例えば、精製されたポリペプチド調製物は、当該ポリペプチドがその天然の環境中の当該ポリペプチドよりも濃縮されている調製物である。いくつかの実施態様では、当該ポリペプチドは細胞成分から分離されている。“実質的に精製された”とは、当該ポリペプチドが、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、若しくは少なくとも98%の、又は前記を越える細胞性成分又は物質が取り除かれたいくつかの実施態様にあることを意図する。同様に、当該ポリペプチドを部分的に精製することも可能である。“部分的に精製された”とは、細胞性成分又は物質の60%未満が除去されることを意図する。同じことがポリヌクレオチドにも適用される。本明細書に開示されるポリペプチドは当業界で公知の任意の手段によって精製することができる。
“変種”は実質的に類似の配列を意味することが意図される。ポリヌクレオチドについては、変種は、自然のままのポリヌクレオチド内の1つ以上の部位における1つ以上のヌクレオチドの欠失及び/又は付加、及び/又は自然のままのポリヌクレオチドの1つ以上の部位における1つ以上のヌクレオチドの置換を含む。本明細書で用いられるように、“自然のままの”ポリヌクレオチド又はポリペプチドは、それぞれ天然に存在するヌクレオチド配列又はアミノ酸配列を含む。本開示の個々のポリヌクレオチドの変種(例えば参照ポリヌクレオチド)はまた、変種ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドと参照ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドとの間のパーセント配列同一性の比較によって評価することができる。“変種”タンパク質は、自然のままのタンパク質の1つ以上の部位における1つ以上のアミノ酸の欠失又は付加、及び/又は自然のままのタンパク質の1つ以上の部位における1つ以上のアミノ酸の置換によって誘導されたタンパク質を意味することが意図される。本開示に包含される変種タンパク質は生物学的に活性である。すなわち、それらは免疫応答を引き出す能力を有する。
ある特徴では、本開示はヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類のFMDV単離株に由来するFMDVポリペプチドを提供する。別の特徴では、本開示は、配列番号:2、4、6又は8に示される配列を有するポリペプチド、及び前記の変種又はフラグメントを提供する。
“保存的変型”という用語は、あるアミノ酸残基の別の生物学的に類似の残基による入替え又は核酸配列中のヌクレオチドの入替えを指し、後者ではその結果、コードされるアミノ酸残基は変化しないか又は別の生物学的に類似する残基である。これに関しては、特に好ましい置換は概ね上記に記載したように本質的に保存的であるだろう。
配列に関して“同一性”は、2つの配列の短い方の配列中のヌクレオチド又はアミノ酸の数で割った、同一ヌクレオチド又はアミノ酸を有する位置の数を指し、この場合、2つの配列のアラインメントは、WilburとLipmanのアルゴリズム(1983, Proc Natl Acad Sci, 80:pp726-730)にしたがって決定できる。2つのアミノ酸配列の配列同一性若しくは配列類似性、又は2つのヌクレオチド配列の配列同一性は、Vector NTIソフトウェアパッケージ(Invitrogen, 1600 Faraday Ave., Carlsbad, CA)を用いて決定することができる。RNA配列がDNA配列と類似する又はある配列同一性若しくは相同性の程度を有するというとき、DNA配列中のチミジン(T)はRNA配列中のウラシル(U)と等価と考えられる。したがって、RNA配列は本開示の範囲内であり、DNA配列中のチミジン(T)をRNA配列中のウラシル(U)と等価と考えることによってDNA配列から誘導することができる。
ハイブリダイゼーション反応は種々の“ストリンジェンシー”条件下で実施できる。例えば以下の文献を参照されたい:“Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, second edition(Sambrook et al., 2014)。
“ベクター”は、標的細胞にin vitro又はin vivoでデリバリーされる異種ポリヌクレオチドを含む、組換えDNA若しくはRNAプラスミド又はウイルスを指す。当該異種ポリヌクレオチドは予防又は治療の目的のために対象の配列を含むことができ、場合によって発現カセットの形態であってもよい。本明細書で用いられるように、ベクターは最終標的細胞又は対象生物で複製する能力を有する必要はない。前記用語はクローニングベクター及びウイルスベクターを含む。
“組換え体”という用語は、天然には存在しないか、又は天然では見出されない配置で別のポリヌクレオチドに連結されている、半合成又は合成起源のポリヌクレオチドを意味する。
“異種”は、ある実在物が比較されている当該実在物の残りの部分と遺伝学的に別個の実在物に由来することを意味する。例えば、あるポリヌクレオチドを異なる供給源に由来するプラスミド又はベクター中に遺伝子操作によって配置することができ、前記ポリヌクレオチドは異種ポリヌクレオチドである。自然のままのコード配列から取り出され、当該自然のままの配列以外のコード配列に作動できるように連結されたプロモーターは異種プロモーターである。
本開示は、ヒツジ類、ウシ類、ヤギ類及びブタ類のワクチン又は医薬若しくは免疫学的組成物に関し、前記は、有効量の組換えFMDV抗原及び医薬的若しくは獣医的に許容できる担体、アジュバント、賦形剤又はベヒクルを含むことができる。
本明細書に記載の内容は、部分的には、バキュロウイルス/昆虫細胞発現系で調製されたFMDV抗原に関連する組成物及び方法を対象とし、前記抗原は、同種及び異種FMDV株のチャレンジに対して高度に免疫原性であり動物を防御する。
本開示はFMDVワクチン又は組成物に関し、前記は有効量の組換えFMDV抗原及び医薬的若しくは獣医的に許容できる担体、賦形剤、アジュバント又はベヒクルを含むことができる。ある実施態様では、FMDVワクチン又は組成物はFMDV抗原を発現する組換えウイルスベクターを含む。
本開示のある実施態様は、FMDV抗原を発現するウイルスベクターを含むワクチン又は組成物に関する。当該FMDV抗原は、下記領域のcDNAの発現によって得られる:P1(VP4-VP2-VP3-VP1)、2A/2B’/3B’及び3C、又はP1(VP4-VP2-VP3-VP1)、2A/2B/2C及び3A/3B/3C/3D。構造領域P1及び非構造領域P2又はP3は、同じFMDV血清型又は異なる血清型(キメラ抗原)に由来しうる。
本開示は、動物(例えばヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類)で免疫原性応答を引き出すFMDVポリペプチド、抗原、エピトープ又は免疫原を包含する。FMDVポリペプチド、抗原、エピトープ又は免疫原は、動物(例えばヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類)で応答を引き出し、誘発し又は刺激する任意のFMDVポリペプチド、抗原、エピトープ又は免疫原(例えばタンパク質、ペプチド又はそのフラグメントであるが、ただし前記に限定されない)でありうる。
ある実施態様では、P1(VP4-VP2-VP3-VP1)-2A/部分的2B/部分的3B及び3Cポリペプチドがウイルスベクターで発現され、発現は1つ以上のプロモーター配列によって調節されうる。別の実施態様では、FMDV抗原は以下を含むキメラ抗原でもよい:P1(VP4-VP2-VP3-VP1)-2A-部分的2B(FMDV A24血清型由来)及び部分的3B(FMDV A12血清型由来)及び3C抗原(FMDV A24血清型由来)。さらに別の実施態様では、FMDV抗原はP1(VP4-VP2-VP3-VP1)-2A-2B-部分的2C-部分的3A-3B-3Cでもよい。
別の実施態様では、FMDV抗原は以下に由来することができる:FMDV O1 Manisa、O1 BFS又はCampos、A24 Cruzeiro、A12、Asia 1 Shamir、A Iran’96、Asia/IRN/05、A22 Iraq、SAT2 Saudi Arabia。
別の実施態様では、医薬的若しくは獣医的に許容できる担体、賦形剤、アジュバント又はベヒクルは、油中水エマルジョンでもよい。さらに別の実施態様では、医薬的若しくは獣医的に許容できる担体、賦形剤、アジュバント又はベヒクルは、水中油エマルジョンでもよい。
本開示はさらに、ベクター分子又は発現ベクターに含まれ、プロモーターエレメントに及び場合によってエンハンサーに作動できるように連結されたFMDVポリヌクレオチドを包含する。
別の特徴では、本開示は、本開示の抗原性ポリペプチド、特に配列番号:2、4、6又は8に示される配列を有するポリペプチドと少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、96%、97%、98%又は99%配列同一性を有するポリペプチドを提供する。
さらに別の特徴では、本開示は、上記で識別したFMDVポリペプチド(配列番号:2、4、6又は8)のフラグメント及び変種を提供し、前記は分子生物学的技術を用いて当業者によって容易に調製され得る。
FMDVポリペプチドの免疫原性フラグメントは、配列番号:2、4、6又は8に示される配列を有するFMDVポリペプチドの連続する少なくとも8、10、15、又は20アミノ酸、少なくとも21アミノ酸、少なくとも23アミノ酸、少なくとも25アミノ酸、又は少なくとも30アミノ酸、又は前記の変種を含む。別の実施態様では、FMDVポリペプチドのフラグメントは、完全長FMDVポリペプチドで見いだされる固有の抗原性エピトープを含む。
別の特徴では、本開示は、配列番号:1、3、5又は7に示されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド又はその変種を提供する。さらに別の特徴では、本開示は、配列番号:1、3、5又は7に示される配列を有するポリヌクレオチドの1つと少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、96%、97%、98%又は99%配列同一性を有するポリヌクレオチド又はその変種を提供する。
本開示のポリヌクレオチドは、追加的配列、例えば同じ転写ユニット内の追加的コード配列、制御エレメント、例えばプロモーター、リボソーム結合部位、エンハンサー、5’UTR、3’UTR、転写終了因子、ポリアデニル化部位、同じ又は異なるプロ―モーター下の追加的転写ユニット、クローニング、発現、相同組換え及び宿主細胞の形質転換を可能にする配列、並びに本開示の実施を提供するために所望できる任意の構築物を含むことができる。
プラスミドは、FMDV抗原、エピトープ又は免疫原をコードするポリヌクレオチ(場合によって異種ペプチド配列と融合される)に加えて、変種、アナローグ又はフラグメントを含むか、又は前記を収納するか、又は本質的に前記から成り、それらはプロモーターに作動できるように連結されるか、プロモーターの制御下にあるか、又はプロモーターに依存する。概して、真核細胞で機能する強力なプロモーターを利用することが有利である。強力なプロモーターは、ヒト又はネズミ起原(又は場合によって別の起原(例えばラット又はモルモット))の最初期サイトメガロウイルスプロモーター(CMV-IE)、スーパープロモーターでもよいが、ただし前記に限定されない(Ni, M.et al., Plant J.7, 661-676, 1995)。CMV-IEプロモーターは実際のプロモーター部分を含むことができ、前記はエンハンサー部分と結合しても結合してなくてもよい。EP-A-260148、EP-A-323597、米国特許5,168,062号、5,385,839号及び4,968,615号とともにPCT出願WO87/03905を参照されたい。複数の実施態様で、CMV-IEプロモーターはヒトCMV-IE(Boshart et al., 1985, Cell 41(2): 521-30)又はネズミCMV-IEである。
より大まかに言えば、プロモーターはウイルス起源、植物起原又は細胞性起原である。本発明の実施で利用できるCMV-IE以外の強力なウイルスプロモーターは、SV40ウイルスの初期/後期プロモーター又はラウス肉腫ウイルスのLTRプロモーターである。本開示の実施で有用でありうる強力な細胞性プロモーターは、骨格遺伝子のプロモーター、例えばデスミンプロモーター(Kwissa et al., 2000, Vaccine 18(22): 2337-44)又はアクチンプロモータ(Miyazaki et al., 1989, Gene 79(2): 269-77)である。
プラスミド及びポックスウイルス以外のウイルスベクターのためのポリアデニル化シグナル(ポリA)に関しては、ウシ成長ホルモン(bGH)遺伝子のポリ(A)シグナル(US5,122,458参照)又はウサギβ-グロビン遺伝子のポリ(A)シグナル又はSV40ウイルスのポリ(A)シグナルの使用がより有用でありうる。
“宿主細胞”は、外因性ポリヌクレオチド(例えば組換えプラスミド又はベクター)の投与によって遺伝的に変化を受けたか又は遺伝的に変化を受ける能力を有する原核細胞又は真核細胞を指す。遺伝的に変化した細胞というとき、当該用語は、当初の変化した細胞及びその子孫の両方を指す。
ある実施態様では、組換えFMDV抗原は昆虫細胞で発現される。
ある実施態様では、本明細書に開示する内容はヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類をワクチン免疫する方法に向けられ、前記方法は、ヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類に有効量のワクチンを投与する工程を含み、前記ワクチンは、FMDV抗原を発現する組換えウイルスベクター及び医薬的若しくは獣医的に許容できる担体、賦形剤、アジュバント又はベヒクルを含むことができる。
本開示のある実施態様では、前記方法は、本開示のエマルジョンとともに処方されたワクチン組成物のただ1回の投与を含む。例えば、ある実施態様では、当該免疫学的又はワクチン組成物はFMDV抗原を発現する組換えウイルスベクターを含む。
本開示の別の実施態様では、当該方法は2つの異種ワクチン組成物のただ1回の投与を含む。当該異種ワクチン又は組成物は、異なるタイプのワクチン、例えばFMDV VLPワクチン又はFMDVウイルスベクターワクチンでもよい。当該異種ワクチンはまた、異なるFMDV血清タイプ(例えばA24、A12、O1 Manisa、Asia又はIraq株)のキャプシドを発現する同じタイプのワクチンであってもよい。
ある実施態様では、本明細書に開示する内容はヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類をワクチン免疫する方法に向けられ、前記方法は、FMDV抗原をin vivoで発現する組換えウイルスベクターを含むワクチンをヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類に投与する工程を含む。
ある実施態様では、本明細書に開示する内容は免疫応答を引出す方法に向けられ、前記方法は、FMDV抗原をin vivoで発現する組換えウイルスベクターを含むワクチンをヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類に投与する工程を含む。
同種及び異種FMDV株の両方をチャレンジに用いて、ワクチンの有効性を試験する。投与は皮下又は筋肉内に実施できる。投与は注射針を用いないで実施できる(例えばピグジェット(Pigjet)又はバイオジェット(Biojet))。
哺乳動物である標的種のための組成物の用量体積(例えばヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類のための組成物の用量体積)は、ウイルスベクター(例えば非ポックスウイルスウイルスベクター系組成物)を基準にして、概ね約0.1から約5.0mL、約0.1から約3.0mL、及び約0.5mLから約2.5mLである。
ワクチンの有効性は、最後の免疫から約2から4週間後に、動物(例えばヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類)をFMDVの病毒株(例えばFMDV O1 Manisa、O1 BFS又はCampos、A24 Cruzeiro、A12、Asia 1 Shamir、A Iran’96、Asia/IRN/05、A22 Iraq、SAT2 Saudi Arabia株)でチャレンジすることによって試験できる。
プライム-ブースト投与は、有利には1から6週間離して、例えば約3週間離して実施することができる。ある実施態様にしたがえば、半年ブースター又は1年ブースターもまた想定され、有利にはウイルスベクター系ワクチンが用いられる。動物は、最初の投与時に有利には少なくとも6から8週齢又は約6カ月齢である。
プライム-ブーストプロトコルで用いられる本開示の組換え抗原ポリペプチドを含む組成物は、医薬的若しくは獣医的に許容できるベヒクル、希釈剤、アジュバント又は賦形剤中に含まれる。本開示のプロトコルは、ヒツジ類、ウシ類、ヤギ類又はブタ類のFMDVから動物を防御し、及び/又は感染動物で疾患の進行を予防する。
本開示は、本開示にしたがって作製された治療組成物の有効量を少なくとも1回動物に投与することを意図する。動物は雄、雌、妊娠雌及び新生仔でよい。この投与は、多様な経路(筋肉内(IM)、皮内(ID)若しくは皮下注射、又は鼻内若しくは経口投与を含む)を介することができる。本開示の治療組成物はまた、無針装置(例えばピグジェット、デルモジェット(Dermojet)、バイオジェクター(Biojector)、アビジェット(Avijet)(Merial, GA, USA)、ベトジェット(Vetjet)又はビタジェット(Vitajet)装置(Bioject, Oregon, USA))によって投与できる。プラスミド組成物投与の別のアプローチはエレクトロポレーションの使用である(例えば以下を参照されたい:Tollefsen et al., 2002;Tollefsen et al., 2003;Babiuk et al., 2002;PCT出願WO99/01158)。
ある実施態様では、本明細書に開示する内容は、感染動物とワクチン接種動物とを弁別(DIVA)するための検出方法を提供する。
本開示のワクチン又は組成物の使用が動物のFMDV感染の検出を可能にすることが本明細書で開示される。感染動物とワクチン接種動物とを弁別(DIVA)することによって、本開示のワクチン又は組成物の使用は動物の感染の検出を可能にすることが本明細書で開示される。FMDV非構造タンパク質を用いて動物でFMDV感染を診断する方法(例えばFMDV 3ABC又は3D-特異的ELISA)が本明細書で開示される。
ある実施態様では、本明細書に開示する内容は免疫応答を引き出し又は誘発する方法を実施するためのキットに向けられ、前記キットは、組換えFMDV免疫学的組成物若しくはワクチン、又は不活化FMDV免疫学的組成物若しくはワクチン、組換えFMDVウイルス組成物若しくはワクチンのいずれか1つ、及び当該方法を実施するための指示を含むことができる。
本開示の別の実施態様は、FMDVに対する免疫学的又は防御的応答を動物で誘発する方法を実施するためのキットであり、前記は、本開示のFMDV抗原を含む組成物又はワクチン及び組換えFMDVウイルス免疫学的組成物又はワクチン、及び動物で免疫応答を引き出すために有効な量でデリバリーする方法を実施するための指示を含む。
本開示の別の実施態様は、FMDVに対する免疫学的又は防御的応答を動物で誘発する方法を実施するためのキットであり、前記キットは、本開示のFMDV抗原を含む組成物又はワクチン及び不活化FMDV免疫学的組成物又はワクチン、及び動物で免疫応答を引き出すために有効な量でデリバリーする方法を実施するための指示を含む。
本開示のさらに別の特徴は、上記に記載した本開示のプライム-ブーストワクチン免疫のためのキットに関する。前記キットは以下の少なくとも2つのバイアルを含むことができる:第一のバイアルは本開示のプライムワクチン免疫のためのワクチン又は組成物を含み、第二のバイアルは本開示のブーストワクチン免疫のためのワクチン又は組成物を含む。前記キットは、追加のプライムワクチン免疫又は追加のブーストワクチン免疫のために追加の第一又は第二のバイアルを含むことができる。
第四級アンモニウム塩を含む陽イオン性脂質(プラスミドにとって有益ではあるが絶対的にというわけではない)は、有利には以下の式を有するものである:
これらの陽イオン性脂質の中では、特にDMRIE(N-(2-ヒドロキシエチル)-N,N-ジメチル-2,3-bis(テトラデシロキシ)-1-プロパンアンモニウム(WO96/34109))が好ましく、前記は有利には中性脂質(有利にはDOPE(ジオレオイル-ホスファチジル-エタノールアミン(Behr, 1994))と結合してDMRIE-DOPEを形成する。
DOPEが存在するとき、DMRIE:DOPEのモル比は約95:約5から約5:約95、又は約1:約1、例えば1:1である。
DMRIE又はDMRIE-DOPEアジュバント:プラスミド重量比は、約50:約1から約1:約10、例えば約10:約1から約1:約5、及び約1:約1から約1:約2、例えば1:1からから1:2である。
油を乳化剤と組み合わせて用いてエマルジョンを形成する。乳化剤は非イオン性界面活性剤でもよい。前記は例えば以下である:エステルであって、一方ではソルビタン、マンニド(例えば無水オレイン酸マンニトール)、グリセロール、ポリグリセロール又はプロピレングリコールのエステル、及び他方ではオレイン酸、イソステアリン酸、リシノール酸又はヒドロキシステアリン酸のエステル(前記エステルは場合によってエトキシル化される)、又はポリオキシプロピレン-ポリオキシエチレンコポリマーブロック(例えばプルロニック(Pluronic)、例えばL121。
無水マレイン酸-アルケニル誘導体コポリマーに関しては、EMATM(Monsanto)が好ましい。前記は、直鎖又は架橋されたエチレン-無水マレイン酸のコポリマーであり、それらは例えばジビニルエーテルによって架橋される。
構造に関しては、アクリル酸又はメタクリル酸ポリマー及びEMA(商標)は、好ましくは以下の式を有する基本ユニットによって形成される:
R1及びR2は同じでも異なっていてもよく、H又はCH3であり、
x=0又は1で、好ましくはx=1であり、
y=1又は2で、x+y=2である。
EMA(商標)の場合はx=0及びy=2であり、カルボマーの場合はx=y=1である。
これらのポリマーは水又は生理学的食塩溶液に可溶性で(20g/L NaCl)、pHは、例えばナトリウム化合物(NaOH)によって7.3から7.4に調整されて、アジュバント溶液が提供され、前記アジュバント溶液に発現ベクターを取り込むことができる。最終的な免疫学的組成物又はワクチン組成物におけるポリマーの濃度は、約0.01から約1.5% w/v、約0.05から約1% w/v、及び約0.1から約0.4% w/vの範囲でよい。
本開示は、例えば複数の活性成分を、有利には一緒にかつアジュバント、担体、サイトカイン、及び/又は希釈剤とともに混合することによるそのような組合せ組成物の調製を包含する。
バキュロウイルス/昆虫細胞発現ポリペプチドを土台とする免疫学的組成物及び/又はワクチンの場合、1用量は、約1μgから約2000μg、約50μgから約1000μg、約100μgから約500μgのFMDV抗原、エピトープ又は免疫原を含むことができる。当該用量は、約102から約1020、約103から約1018、約104から約1016、約105から約1012のVLP(ウイルス様粒子)を含むことができる。FMDV抗原を発現するウイルスベクターを土台とする免疫学的組成物及び/又はワクチンの場合、1用量は、約103ウイルス粒子から約1015ウイルス粒子、約103ウイルス粒子から約1014ウイルス粒子、約103ウイルス粒子から約1013ウイルス粒子、約103ウイルス粒子から約1012ウイルス粒子を含むことができる。ウイルス粒子は以下を含む(ただしこれらに限定されない)任意のウイルス力価測定方法を基準にして計算できる:FFA(フォーカス形成アッセイ)若しくはFFU(フォーカス形成単位)、TCID50(50%組織培養感染用量)、PFU(プラーク形成単位)、及びFAID50(50%蛍光抗体感染用量)。用量体積は約0.1から約10mL、約0.2から約5mLであることができる。
以下の非限定的な例によって、これから本開示をさらに説明するであろう。
実施例1.2:組換えヒトアデノウイルス5ベクター性FMDVキメラA24-A12抗原の構築
そのゲノム(GV11骨格、米国特許8,323,663号参照)のE1、E3及びE4領域に欠失を有するヒトアデノウイルスC、血清型5(Ad5)ベクター(アデノウイルスベクター)を用いて、キメラFMDVタンパク質を発現する組換えFMDVワクチンを構築した。当該キメラFMDVタンパク質は、FMDV血清型A24の構造性キャプシド遺伝子(A24 P1)及び非構造性遺伝子A24(2A-部分的2B)、FMDV血清型A12の非構造性部分的3B遺伝子及びプロテアーゼ遺伝子(部分的3B-3C)を含んでいる(配列番号:2)。
FMDV A24(P1-2A-部分的2B)-A12(部分的3B-3C)をコードするキメラポリヌクレオチドをシャトルプラスミドに導入した(図2及び3参照)。直鎖化GV11プラスミド(カナマイシン耐性遺伝子を保有する)及びキメラFMDVポリヌクレオチドを含む直鎖化シャトルプラスミドによるBJDE3大腸菌細胞の共同形質転換後に、カナマイシン耐性大腸菌クローンを選別した。組換えプラスミドを保有するクローンはRFLPによって確認された。単一クローンを選別し、プラスミドを直鎖化してM2A細胞にトランスフェクトした。M2A細胞トランスフェクションから得られる溶解物を連続継代して、組換えアデノウイルスベクター性キメラFMDVワクチンの抗力価ストックを作製した。
CMV配列の後にスプライスドナー配列を含む人工非翻訳領域(UTR)が続く。発現されるべき遺伝子のオープンリーディングフレームが3'スプライス部位配列に続き、サルウイルス40(SV40)初期ポリアデニル化シグナルは当該オープンリーディングフレームの3’に配置され転写を終了させる。
RBA遺伝子構造同一性(GSI)アッセイのためにプライマー対を設計した。GSIアッセイはPCRを用いて骨格の生物学的因子及び発現カセットを識別する。GSIブロット(図4参照)は正確な骨格及びA24-A12 FMDV発現カセットを示した。A24-A12発現カセットの配列分析もまた、シャトルプラスミドと組換えアデノウイルスベクター性キメラA24-A12 FMDVワクチンから抽出されたDNAとの間のヌクレオチド配列同一性を立証した。
組換えアデノウイルスベクター性キメラA24-A12 FMDVワクチンは、293細胞でA24タンパク質をin vitroで発現することがウェスタンブロットアッセイによって確認され、約28KDaの位置に泳動する反応性タンパク質が得られた(図5参照)。ウェスタンブロットアッセイで検出に用いられた抗体はモノクローナル抗体である。組換えアデノウイルスベクター性キメラA24-A12 FMDVワクチンから発現されるA24タンパク質の分子量は、陽性コントロールのシャトルプラスミドを293細胞へトランスフェクトした後に観察されるタンパク質の分子量と区別できなかった(図5参照)。
そのゲノム(GV11骨格、米国特許8,323,663号参照)のE1、E3及びE4領域に欠失を有するヒトアデノウイルスC、血清型5(Ad5)ベクター(アデノウイルスベクター)を用いて、FMDVタンパク質を発現する組換えFMDVワクチンを構築した。当該FMDVタンパク質は、FMDV O1/Man/87株に由来する構造性キャプシドP1(VP4-VP2-VP3-VP1)並びに非構造性タンパク質2ABC及び3ABC(完全長プロテアーゼ3Cを含む)を含んでいる(配列番号:4)。
FMDV O1M Pl(VP4-VP2-VP3-VP1-2ABC’3A’BC)をコードする合成ポリヌクレオチド(配列番号:3)をシャトルプラスミドに導入した(図6参照)。組換えアデノウイルスベクター性O1M FMDVワクチンを実施例1.2に記載の手順にしたがって構築した。
O1M87 FMDV発現カセット(E1領域欠失接合部に位置する)は、ウイルスゲノムのRNA転写では右から左に読取りが進む。当該挿入カセットのフランキングヌクレオチド配列には既知の調節シグナルは存在しない。CMVエンハンサー/プロモーターは転写開始を制御する。この配列内に、ウイルス性エンハンサーCAATボックス、TATAボックス、転写開始部位、及び5'スプライス部位配列が存在する。
CMV配列の後にスプライスドナー配列を含む人工非翻訳領域(UTR)が続く。発現されるべき遺伝子のオープンリーディングフレームが3'スプライス部位配列に続き、サルウイルス40(SV40)初期ポリアデニル化シグナルは当該オープンリーディングフレームの3’に配置され転写を終了させる。
GSIブロットは正確な骨格及びO1M87 FMDV発現カセットを示した。O1M87 FMDV発現カセットの配列分析もまた、シャトルプラスミドと組換えアデノウイルスベクター性O1M87 FMDVワクチンから抽出されたDNAとの間のヌクレオチド配列同一性を立証した。組換えアデノウイルスベクター性O1M87 FMDVワクチンは、293細胞でO1M87タンパク質をin vitroで発現することがウェスタンブロットアッセイによって確認された。
そのゲノム(GV11骨格、米国特許8,323,663号参照)のE1、E3及びE4領域に欠失を有するヒトアデノウイルスC、血清型5(Ad5)ベクター(アデノウイルスベクター)を用いて、FMDVタンパク質を発現する組換えFMDVワクチンを構築した。合成FMDVキャプシドコード配列P1並びにFMDV血清型A/Irn/05の非構造性遺伝子2A、2B、部分的2C(2C’)、部分的3A(3A’)、3B及び3Cのプロテアーゼコード配列をシャトルプラスミドに導入した(図7参照)。組換えアデノウイルスベクター性Irn FMDVワクチンは実施例1.2に記載の手順にしたがって構築した。
Irn FMDV発現カセット(E1領域欠失接合部に位置する)は、ウイルスゲノムのRNA転写では右から左に読取りが進む。当該挿入カセットのフランキングヌクレオチド配列には既知の調節シグナルは存在しない。CMVエンハンサー/プロモーターは転写開始を制御する。この配列内に、ウイルス性エンハンサーCAATボックス、TATAボックス、転写開始部位、及び5'スプライス部位配列が存在する。
CMV配列の後にスプライスドナー配列を含む人工非翻訳領域(UTR)が続く。発現されるべき遺伝子のオープンリーディングフレームが3'スプライス部位配列に続き、サルウイルス40(SV40)初期ポリアデニル化シグナルは当該オープンリーディングフレームの3’に配置され転写を終了させる。
組換えアデノウイルスベクター性Irn FMDVワクチンは、PCR系遺伝子構造同一性(GSI)アッセイを用いて識別され、ウェスタンブロット技術によるタンパク質の発現で立証された。
そのゲノム(GV11骨格、米国特許8,323,663号参照)のE1、E3及びE4領域に欠失を有するヒトアデノウイルスC、血清型5(Ad5)ベクター(アデノウイルスベクター)を用いて、FMDVタンパク質を発現する組換えFMDVワクチンを構築した。合成FMDVキャプシドコード配列P1並びにFMDV Asia/Leb/89の非構造性遺伝子2A、2B、部分的2C(2C’)、部分的3A(3A’)、3B及び3Cのプロテアーゼコード配列をシャトルプラスミドに導入した(図8参照)。組換えアデノウイルスベクター性Asia FMDVワクチンは実施例1.2に記載の手順にしたがって構築した。
Asia FMDV発現カセット(E1領域欠失接合部に位置する)は、ウイルスゲノムのRNA転写では右から左に読取りが進む。当該挿入カセットのフランキングヌクレオチド配列には既知の調節シグナルは存在しない。CMVエンハンサー/プロモーターは転写開始を制御する。この配列内に、ウイルス性エンハンサーCAATボックス、TATAボックス、転写開始部位、及び5'スプライス部位配列が存在する。
CMV配列の後にスプライスドナー配列を含む人工非翻訳領域(UTR)が続く。発現されるべき遺伝子のオープンリーディングフレームが3'スプライス部位配列に続き、サルウイルス40(SV40)初期ポリアデニル化シグナルは当該オープンリーディングフレームの3’に配置され転写を終了させる。
組換えアデノウイルスベクター性Asia FMDVワクチンは、293細胞でAsiaタンパク質をin vitroで発現することがウェスタンブロットアッセイによって確認され、約38KDaの位置に泳動する反応性タンパク質が得られた。ウェスタンブロットアッセイで検出に用いられた抗体はFMD VP2ポリクローナル抗体である。発現されたAsiaSS.2Bタンパク質の分子量は、陽性コントロールプラスミドを293細胞へトランスフェクトした後に観察されるタンパク質の分子量と区別できなかった。
畜牛及びブタをA24-A12 FMDVワクチン又はO1M87 FMDVワクチンで0日目に1回IMによりワクチン免疫し、14日目に多くの血清型(例えばA24、A12、O1、Asia、Irn及びIraq株)でチャレンジした。
図9は、3通りの異なる用量のFMDVチャレンジに対するO1 FMDVワクチンの動物及びコントロールにおける防御を示す。この用量滴定実験では、組換えアデノベクター性O1M FMDVワクチンは、ワクチン接種後14日(14dpv)の直接的IDL同種チャレンジ後にFMD普遍化病変(足病巣)に対して防御を付与する能力について評価された。健康な6カ月齢の雌のホルスタイン畜牛を4つの処置グループの1つにランダムに分けた。コントロールナイーブ畜牛(T01;n=4)をただ1回2mL用量の最終処方緩衝液(FFB)を用いて筋肉内により免疫した。T02−T04(n=7/グループ)の畜牛には、ENABLTMC1アジュバント中で処方したマスターウイルス継代2(MSV+2)から調製した活性成分の用量を下げながらワクチン免疫を実施した(抗アデノウイルスヘキソンフォーカス形成単位(FFU)又はフォーカス形成アッセイ(FFA);log10)。T02−T04にはそれぞれ、総用量2.38x105、5.94x104FFU、又は1.49x104FFUが投与された。ワクチン接種後2週間(チャレンジ日)で、T02及びT03ワクチン接種動物の100%がFMDV O1 Manisa血清ウイルス中和(SVN)力価を有し、それに対して、最低ワクチン用量処置グループ(T04)では43%であった。FMDV O1 Manisaの1x104ウシ50%感染用量単位(BID50)による舌皮内チャレンジ後、T01コントロールナイーブ畜牛の100%が普遍化病変(足病巣)を示した。対照的に、ワクチン接種グループの普遍化病変に対する防御レベルは、86%(T04)から100%(T02及びT03)の範囲であった。4匹のコントロール畜牛(T01)の全てが、チャレンジ後1−3日(1−3dpc)に収集した血漿でFMDV陽性であったが、21匹のワクチン接種動物ではいずれも1−5dpcにはウイルス血症を示さなかった。T01では、2−5dpcに収集した鼻サンプルの88%がウイルス陽性であり、それに対して2−5dpc検査サンプルの25%(T03)、27%(T02)及び36%(T04)が陽性であった。図10は、3通り用量のO1 FMDVワクチン及びコントロールにおける血清学を示す。
これらの結果は、ENABL C1アジュバント中で処方された組換えアデノベクターO1M FMDVワクチンの活性成分は高度に免疫原性で畜牛のIDL同種FMDVチャレンジに対して有効であり、最小限の概算防御用量に関するデータを提供することを示している。
A24-A12及びO1M87ワクチンの両方が試験され、仔ウシ及びマウスで安全であった。
アジュバント添加ワクチンは最低防御用量(MPD)を減少させ、より有効なワクチンをもたらすことができる。MPD減少はアジュバント費用及び供給保証によって比較考量できる。しかしながら、いくつかのアジュバントはワクチンの有効性を低下させうる。アジュバントは望ましくない応答へ免疫系を向かわせることがあり、又はアジュバントは免疫物質に対して有害なことがある(例えば安定性の欠如)。
本試験の目的は、アジュバントの血清学的有効性を評価することであった。血清学的有効性試験を畜牛で実施し、並行してウイルス死滅/安定性試験を実施して、5つのアジュバントのいずれかがアデノウイルスFMDVワクチンに対して有害な作用を有するか否かを決定した。各用量は、それぞれのアジュバントを含む2mL用量中に200μLの最終AI(活性成分)/用量から成っている。アジュバントは、ポリアクリル酸、LF2エマルジョン、LR6エマルジョン、CARBIGENTM及びENABL(商標)C1である(下記表11参照)。
TS6*:US 7,608,279及びUS 7,371,395に記載のTS6アジュバント/エマルジョン
LR4**:US7,691,368に記載のLR4アジュバント/エマルジョン
CARBIGENTM:カルボマー系(Carbopol 934P)アジュバント懸濁物(MVPラボラトリーズ社(MVP Laboratories, Inc)の製品)
ENABL(商標)C1:VaxLiantから市場で購入した畜牛用アジュバント製品
本実験の目的は、種々のアジュバントを用いて又は用いないで処方したアデノベクター性FMDV O1 Manisaを投与した後の畜牛の血清学的抗体応答を評価することである。
普通に飼育した55匹の仔ウシ(約5カ月齢)をそれぞれ、下記の表4に示すように6通りの処置グループの1つにランダムに分けた。
各ワクチン接種後に少なくとも1時間、仔ウシを断続的に急性全身性の有害事象の臨床的徴候について観察した。全ての畜牛から血液サンプルを、-1日目(ワクチン接種前)、7、15、21(ワクチン接種前)、28、及び35日目に収集した。全ての畜牛の血清サンプルをFMDV抗体について血清ウイルス中和(SNV)により検査した。加えて、アデノウイルスに対する抗体応答(SAV)を、-1日目及び35日目に収集したサンプルで全てのグループの全ての動物で決定した。SVN及びSAVの結果をLog10で示し、0.6Log10以下の値は血清抗体について陰性とみなした。
ワクチン接種後の安全性評価は、各ワクチン接種後の少なくとも3日間の直腸温度、目視観察及び注射部位の触診を含んでいた。注射部位の局所性有害事象を有する乳牛は異常の寛解まで断続的に観察した。本実験は最後の血液収集後35日目で終了した。
全てのグループの全ての動物が実験の開始前にFMDV抗体について陰性であった。全ての監視用動物は実験を通してFNDV抗体について陰性であった。ワクチン接種後の血清転換は0.9を超えるLog10力価の増加と定義した。14日目までに(最初のワクチン接種から2週間)、ENABL(商標)C1(グループ1)の仔ウシで5/10(50%)が血清転換した。残りのワクチン接種グループ(2−5)では、20−40%の仔ウシが血清転換した。加えて、グループの平均抗体力価はグループ1(ENABL(商標)C1)でわずかに高く、グループ2(LF)及び3(ポリアクリル酸)がその後に続いた(図13)。
35日目までに(2回目のワクチン接種から2週間)、全てのワクチン接種動物(グループ1、ENABL(商標)C1;グループ2、LF;グループ5、アジュバント無し)が血清転換し、
グループ3(ポリアクリル酸)及びグループ4(Carbigen M)のそれぞれ90%及び80%が後に続いた。LFアジュバントとともにワクチン接種された動物、続いてアジュバント無しでワクチン接種された動物(グループ5)、及びENABL(商標)C1(グループ1)アジュバントでワクチン接種された動物が、2用量ワクチン免疫レジメンの後でより高い抗体応答を示した(図13参照)。
全ての監視用動物及びワクチン接種動物は、-1日目のSN抗体力価でアデノウイルス陰性であった(Log10は0.6以下)。35日目までに、ワクチン接種仔ウシの全て(グループ5の1匹(ID 134)を除く)が血清転換し、アジュバントを含むワクチンでワクチン接種された動物のグループ(グループ1−4)で全体的により高い幾何平均を示した(図14参照)。
これらの結果は、いくつかのグループにおける最初のワクチン接種後14日目の血清学的応答を示した。2回目のワクチン接種から2週間後に、より高い抗体応答が、LFアジュバントでワクチン接種された仔ウシで観察され、アジュバント無しでワクチン接種された動物及びENABL C1アジュバントでワクチン接種された動物が続いた。
これらの結果は、アジュバントの有無にかかわらず、単回ワクチン接種後の抗体応答は小さいことを示唆している。しかしながら、2回ワクチン接種(プライム-ブースト)レジメンを用いるとき、抗体応答は全体的に高くなる。ワクチン構築物を筋肉内に2回(3週間離して)投与したとき、全身的有害事象は観察されなかった。
本実験の目的は一価ワクチン処方物の投与後の仔ブタで抗体応答を評価することである。一価ワクチン処方物は、アデノ5ベクター性FMDV O1 Manisa及び/又はFMDVバキュロウイルス発現O1 Manisa組換えウイルス様粒子(VLP)を含んでいる。
20匹の普通に飼育した仔ブタ(約5週齢)を2通りの処置グループ(各々10匹の仔ブタを含む)にランダムに分けた。グループの組成は下記の表5に示されている。
FMDV抗体を用いる血清ウイルス中和(SVN)Log10によるFMD血清学的応答の結果を下記に記載する。全ての監視用動物は本実験の前及び終了時にFMDV抗体陰性であった。
28日目までに(2回目のワクチン接種後1週間)、グループ1の全仔ブタが血清転換した(力価は1.20Log10以上)(図15参照)。ワクチン接種に起因する全身性及び/又は局所性有害作用は観察されなかった。これらの結果は、最初のワクチン接種後にワクチン接種グループが小さな抗体応答しか持たなかったとしても、2回目の(プライム-ブースト)ワクチン接種後の抗体応答は実験終了時までに高くなったことを明瞭に示した。
本実験の目的は、畜牛又はブタで2用量ワクチン接種の血清学的応答を評価することであり、このとき2回の組換えアデノウイルスベクター性FMDVワクチン、1回の組換えアデノウイルスベクター性FMDVワクチン及び1回のバキュロウイルス発現組換えFMDVウイルス様粒子(VLP)ワクチン、又は2回のFMDV VLPワクチンが用いられ、さらに種々の投与経路(経皮、皮下、又は皮内経路)が用いられる。本実験はまた、複数ワクチンが投与されるときの干渉問題に注目するために設計される。
アジュバントは、ポリアクリル酸、LF2エマルジョン、LR6エマルジョン、CARBIGENTM、及びENABL(商標)C1である。処置グループは下記の表6に提示される。
ワクチン接種後安全性評価は、各ワクチン接種後の少なくとも3日間の直腸温度、目視観察及び注射部位の触診を含んでいた。注射部位の局所性有害事象を有する乳牛は異常の寛解まで断続的に観察される。
プライム-ブーストは全グループに影響を与えるが、プライム-ブースト効果はアデノウイルスワクチンのプライムを受けた後にバキュロウイルスFMD構築物のブーストを受けた動物で大きいことを結果は示している。さらにまた、投与経路は血清学的応答及び防御に影響するとともに免疫持続期間にも影響を及ぼす。特定の投与経路及び/又は投与経路(TD、IM及びSQ)の組み合わせは、免疫応答を激化させ、防御をさらに高め、干渉を克服し、さらに母獣由来抗体陽性(MDA陽性)動物を防御するように思われる。
ブタをプライム-ブーストレジメンで21日離して2回FMD(いくつかの血清型)に対してワクチン免疫し、14dpvに多くのFMDV血清型(例えばA24、A12、O1、Asia、Irn及びIraq株)でチャレンジする。プライム-ブーストレジメンでは、異種プライム-ブーストプロトコル(アデノプライムに続いてバキュロブースト)とともに同種プライム-ブースト(アデノ-アデノ、バキュロ-バキュロ)が考察される。
用量滴定試験では、組換えアデノベクター性FMDVワクチンが、ワクチン接種後14日(14dpv)の同種及び異種チャレンジ後のFMD普遍化病変(足病巣)に対する防御付与能力について評価される。本実験では実施例2に記載の手順を用い、プライム-ブースト投与レジメンにおける免疫防御用量を決定する。
結果は、プライム-ブーストプロトコルで用いられた組換えアデノベクターFMDVワクチンは、ブタの同種及び異種FMDVチャレンジで高度に免疫原性で有効であること、干渉を克服し母獣由来抗体陽性(MDA陽性)動物を防御することを明瞭に示している。
畜牛に最初に組換えアデノウイルスベクター性FMDVワクチンを接種し、21日離して通常の殺滅FMDワクチン又はバキュロウイルス発現FMDV VLPワクチンでブーストし、さらに第二のワクチン接種後14日で多くのFMDV血清型(例えばA24、A12、O1、Asia、Irn及びIraq株)でチャレンジする。
用量滴定試験では、組換えアデノベクター性FMDVワクチンが、ワクチン接種後14日(14dpv)の直接的な同種及び異種チャレンジ後のFMD普遍化病変(足病巣)に対する防御付与能力について評価される。本実験では実施例2に記載の手順を用い、プライム-ブースト投与レジメンにおける免疫防御用量を決定する。
これらの結果は、プライム-ブースト投与レジメンは、畜牛で同種及び異種FMDVチャレンジに対して高度に免疫原性で有効であること、FMDV感染に対する防御を動物に提供し、干渉を克服し、かつ母獣由来抗体陽性(MDA陽性)動物を防御することを明瞭に示している。
* * * * * * * *
本明細書で引用又は言及された全ての資料(“本明細書引用資料”)、及び本明細書引用資料で引用又は言及された全ての資料は、本明細書に又は本明細書に参照により含まれる任意の資料に記載された任意の製造業者の指示、説明書、製品仕様書及び任意の製品についてのプロダクトシートとともに参照により本明細書に含まれ、かつ本発明の実施で利用することができる。
Claims (13)
- 口蹄疫ウイルス(FMDV)抗原を発現する組換えウイルスベクターを含む、非ヒト動物でFMDVに対する免疫応答を引き出すための組成物又はワクチンであって、前記FMDV抗原は、配列番号:2、4、6又は8に示される配列又は配列番号:2、4、6又は8に示される配列と少なくとも80%配列同一性を有する配列を有するポリペプチドを含む、前記組成物又はワクチン。
- 前記ウイルスベクターがアデノウイルスである、請求項1に記載の組成物又はワクチン。
- 前記FMDV抗原が配列番号:1、3、5又は7に示される配列を有するポリヌクレオチドによってコードされる、請求項1又は2に記載の組成物又はワクチン。
- 医薬的又は獣医的に許容できる担体、賦形剤、アジュバント又はベヒクルをさらに含む、請求項1−3のいずれか1項に記載の組成物又はワクチン。
- 前記医薬的又は獣医的に許容できる担体、賦形剤、アジュバント又はベヒクルが、ポリアクリル酸、LF2エマルジョン、LR6エマルジョン、TS6エマルジョン、LR4エマルジョン、カルボマー、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、サポニン、CpG、油中水エマルジョン、水中油エマルジョン及びカルボマー系アジュバントから成る群から選択される、請求項4に記載の組成物又はワクチン。
- FMDV感染感受性非ヒト動物をワクチン免疫するか、又は前記非ヒト動物でFMDVに対する免疫応答を引き出す方法であって、請求項1−5のいずれか1項に記載の組成物又はワクチンを少なくとも1回投与する工程を含む、前記方法。
- プライム-ブースト投与レジメンを含む、請求項6に記載の方法。
- 前記プライム-ブーストレジメンが、請求項1−5のいずれか1項に記載の組成物又はワクチンのプライム投与、及びFMDV抗原をin vivoで発現するためのポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターを含む組成物、又はFMDV抗原を含む組成物、又はFMDV抗原を含む不活化ウイルス組成物のブースト投与を含み、FMDVから前記非ヒト動物を防御し、及び/又は感染非ヒト動物における疾患の進行を予防する、請求項7に記載の方法。
- 前記プライム-ブーストレジメンが、FMDV抗原をin vivoで発現するためのポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターを含む組成物、又はFMDV抗原を含む組成物、又はFMDV抗原を含む不活化ウイルス組成物のプライム投与、及び請求項1−5のいずれか1項に記載の組成物又はワクチンのブースト投与を含み、FMDVから前記非ヒト動物を防御し、及び/又は感染非ヒト動物における疾患の進行を予防する、請求項7に記載の方法。
- FMDV感染感受性動物をワクチン免疫するか、又は前記動物でFMDVに対する免疫応答を引き出す方法に使用するための、請求項1−5のいずれか1項に記載の組成物又はワクチン。
- 前記方法がプライム-ブースト投与レジメンを含む、請求項10に記載の組成物又はワクチン。
- 前記プライム-ブーストレジメンが、請求項1−5のいずれか1項に記載の組成物又はワクチンのプライム投与、及びFMDV抗原をin vivoで発現するためのポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターを含む組成物、又はFMDV抗原を含む組成物、又はFMDV抗原を含む不活化ウイルス組成物のブースト投与を含み、FMDVから前記動物を防御し、及び/又は感染動物における疾患の進行を予防する、請求項11に記載の組成物又はワクチン。
- 前記プライム-ブーストレジメンが、FMDV抗原をin vivoで発現するためのポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターを含む組成物、又はFMDV抗原を含む組成物、又はFMDV抗原を含む不活化ウイルス組成物のプライム投与、及び請求項1−5のいずれか1項に記載の組成物又はワクチンのブースト投与を含み、FMDVから前記動物を防御し、及び/又は感染動物における疾患の進行を予防する、請求項11に記載の組成物又はワクチン。
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