JP6865426B2 - Ｕｖ感受性軽減剤、ｄｎａ修復促進剤、細胞死抑制剤、及び食品組成物 - Google Patents
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Description
本発明は、ＵＶ感受性軽減剤、ＤＮＡ修復促進剤、細胞死抑制剤、及び食品組成物に関する。
エゾウコギ(Eleutherococcus senticosus)は古くから滋養強壮、精神安定、疲労回復、性機能の回復、虚弱体質改善などを目的に民間薬として用いられている植物である。エゾウコギエキスの多様な作用についてはin vivoレベルでの評価が先行しており、多くの研究成果が報告されている。また、エゾウコギエキスにはエレウテロシドと称される配糖体が多数含まれており、例えばエレウテロシドＢには抗疲労・抗ストレス作用、エレウテロシドＢ１前駆体のイソフラキシジンには沈静・抗圧作用、エレウテロシドＥには抗アレルギー作用などの研究成果が同様に報告されている。（例えば、非特許文献１、２参照）が、細胞レベルでのメカニズムを解析した報告はきわめて少ない。
Alternative Medicine Review vol.11 No.2 pp.151-155, 2006
和漢薬 No.751 pp.5-6，2015
本発明は、細胞レベルで用いられるＵＶ感受性軽減剤、ＤＮＡ修復促進剤、細胞死抑制剤、および食品組成物を提供することを目的とする。
本発明の一実施態様は、エゾウコギを有効成分として含有する、細胞レベルで用いられるＵＶ感受性軽減剤、ＤＮＡ修復促進剤、または細胞死抑制剤である。
前記エゾウコギが、エゾウコギの抽出物であってもよい。前記いずれの剤もエレウテロシド類（ただし、エゾウコギの抽出物を除く）を有効成分として含有してもよい。前記いずれの剤もエレウテロシド類を有効成分として１０重量％以上含有してもよい。前記いずれの剤も、試薬、医薬、または化粧品であってもよい。前記医薬または化粧品が塗布剤であってもよい。
本発明のさらなる一実施態様は、エレウテロシド類を有効成分として含有する、ＵＶ感受性軽減用食品組成物、ＤＮＡ修復促進用食品組成物、または細胞死抑制用食品組成物である。前記食品がエゾウコギであってもよい。
本発明によって、細胞レベルで用いられる、ＵＶ感受性軽減剤、ＤＮＡ修復促進剤、細胞死抑制剤、および食品組成物を提供することが可能になった。
本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的に実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
＝＝エゾウコギ(Eleutherococcus senticosus)抽出物の調製＝＝
本発明で使用するエゾウコギは、植物体のどの部位であっても良く、葉、茎、根のいずれであってもかまわないが、根であることが好ましく、根皮であることがより好ましい。
本発明で使用するエゾウコギは、植物体のどの部位であっても良く、葉、茎、根のいずれであってもかまわないが、根であることが好ましく、根皮であることがより好ましい。
エゾウコギの形状も特に限定されない。そのまま乾燥して粉末にしてもよいが、溶媒を用いて抽出物とすることが好ましい。エゾウコギの抽出物の具体的な製造方法として、公知の方法を用いることができ、例えば、エゾウコギを乾燥した後に、破砕、粉砕、または、切断などによって分解物とし、溶媒を用いてエゾウコギの抽出物を抽出することができる。その後、残渣を除去してもよく、さらに、得られた抽出物から溶媒を除去して濃縮してもよい。ほぼ完全に溶媒を除去して固体状にしてもよく、得られた固体をさらに粉末状にしてもよい。以上の抽出過程のいずれのものも、本発明のエゾウコギの抽出物として使用することができる。さらに、いずれかの抽出物を、再度溶媒を用いて溶解したり、希釈したりしたものも抽出物として用いることができる。
抽出や溶解・希釈に用いる溶媒の種類は、当業者であれば適切に選択することができるが、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、２−プロパノール、１，４−ジオキサン、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であっても良く、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であることが好ましく、水、エタノール、または、水およびエタノールの混合溶媒であることがより好ましい。混合溶媒を用いる場合の、各溶媒の混合比は特に限定されないが、例えば水およびエタノールの混合溶媒を用いる場合には、水とエタノールとの体積比は、１：９９〜９９：１であっても良く、３：９７〜８０：２０であることが好ましく、５：９５〜５０：５０であることがより好ましく、１０：９０〜４０：６０であることが特に好ましい。
溶媒として、水、または、水との混合溶媒を用いる場合には、熱水、または、熱水との混合溶媒であることが好ましい。水、または、水との混合溶媒は塩を含んでいても良く、塩を含む溶媒の例として、バッファー（緩衝液）であっても良い。バッファーのｐＨは、特に限定されず、酸性、中性、または、アルカリ性のいずれであっても良い。バッファーに用いる塩の種類は特に限定されず、例として、クエン酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩、酢酸塩および炭酸塩などが挙げられる。
抽出液から溶媒を除去する方法は、特に限定されず公知の方法を用いることができる。例えば、減圧留去、凍結乾燥、または噴霧乾燥であっても良い。
＝＝エゾウコギの用途＝＝
本発明の一実施態様は、上述したようなエゾウコギを有効成分として含有する、細胞レベルで用いられる、ＵＶ感受性軽減剤、ＤＮＡ修復促進剤、および細胞死抑制剤である。すなわち、エゾウコギは、細胞レベルで、ＵＶ感受性軽減剤、ＤＮＡ修復促進剤、または細胞死抑制剤として用いることができる。
本発明の一実施態様は、上述したようなエゾウコギを有効成分として含有する、細胞レベルで用いられる、ＵＶ感受性軽減剤、ＤＮＡ修復促進剤、および細胞死抑制剤である。すなわち、エゾウコギは、細胞レベルで、ＵＶ感受性軽減剤、ＤＮＡ修復促進剤、または細胞死抑制剤として用いることができる。
本明細書において、「ＵＶ感受性軽減」とは、ＵＶＢ照射による細胞活性の低下を抑制することをいう。「ＤＮＡ修復促進」とは、それによって、ＤＮＡに変異などのダメージが生じた場合に、自然修復過程より早く、ダメージが回復することをいう。このＤＮＡダメージを生じる原因は特に限定されず、化学変異原や放射線（紫外線、Ｘ線、α線など）などの変異原や、化学的刺激や物理的刺激などでもよいが、ＵＶ照射であることが好ましい。また、「細胞死抑制」とは、ＤＮＡダメージによって細胞死を起こす細胞数を減少させることをいう。細胞死は、ネクローシスでもアポトーシスでもよいが、特にアポトーシス抑制に好適に用いることができる。また、「細胞レベル」とは、分子レベルから個体レベルまでの様々なレベルのうち、生体から採取した細胞、細胞塊、組織、器官などを細胞培養法を活用して培養した培養物、あるいは株化した細胞やそれに由来する培養物などを用いた培養細胞レベルのことをいう。
培養する対象としては、細胞、細胞塊、組織、器官など、細胞が含まれていれば特に限定されない。そして、培養している細胞に投与することによって、その細胞に対し、ＵＶ感受性軽減、ＤＮＡ修復促進、及び細胞死抑制という作用を起こすことができる。培養方法は特に限定されず、in vivo 、in vitro、ex vivoなどのいずれであってもよい。投与方法は特に限定されず、予め培地に含有させてもよく、培養中に培地に添加してもよいが、ＤＮＡダメージを起こす変異原や刺激を与えた後、特にいずれかの変異原や刺激によってＤＮＡダメージが生じた後に培地に添加することが好ましい。培地中のエゾウコギの濃度は、有効量であれば特に限定されない。
＝＝エレウテロシド類の調製＝＝
本明細書において、「エレウテロシド類」とは、エレウテロシドＡ、エレウテロシドＢ１、エレウテロシドＢ、エレウテロシドＣ、エレウテロシドＤ、エレウテロシドＥ、エレウテロシドＦ、エレウテロシドＧ、エレウテロシドＨ、エレウテロシドＩ、エレウテロシドＪ、エレウテロシドＫ、エレウテロシドＬ、エレウテロシドＭ、イソフラキシジン、クロロゲン酸、β―シトステロール、セサミン、フリーデリンなどをいうものとする。エレウテロシド類の化合物がラセミ体の場合、立体異性体の配合比率は問わない。
本明細書において、「エレウテロシド類」とは、エレウテロシドＡ、エレウテロシドＢ１、エレウテロシドＢ、エレウテロシドＣ、エレウテロシドＤ、エレウテロシドＥ、エレウテロシドＦ、エレウテロシドＧ、エレウテロシドＨ、エレウテロシドＩ、エレウテロシドＪ、エレウテロシドＫ、エレウテロシドＬ、エレウテロシドＭ、イソフラキシジン、クロロゲン酸、β―シトステロール、セサミン、フリーデリンなどをいうものとする。エレウテロシド類の化合物がラセミ体の場合、立体異性体の配合比率は問わない。
これらのエレウテロシド類の製法は特に限定されず、含有されることが知られている植物体から抽出しても、公知の方法で化学合成してもかまわない。
＝＝エレウテロシド類の用途＝＝
本発明の一実施態様は、エレウテロシド類を有効成分として含有する、ＵＶ感受性軽減剤、ＤＮＡ修復促進剤、または細胞死抑制剤である。これらは、薬品（すなわち試薬または医薬）、化粧品、またはそれらの組成物であってもよい。また、本発明の他の一実施態様は、エレウテロシド類を有効成分として含有する、ＵＶ感受性軽減用食品組成物、ＤＮＡ修復促進用食品組成物、または細胞死抑制用食品組成物である。食品は、これらの食品組成物のいずれかを含有すれば特に限定されないが、エゾウコギであることが好ましい。
本発明の一実施態様は、エレウテロシド類を有効成分として含有する、ＵＶ感受性軽減剤、ＤＮＡ修復促進剤、または細胞死抑制剤である。これらは、薬品（すなわち試薬または医薬）、化粧品、またはそれらの組成物であってもよい。また、本発明の他の一実施態様は、エレウテロシド類を有効成分として含有する、ＵＶ感受性軽減用食品組成物、ＤＮＡ修復促進用食品組成物、または細胞死抑制用食品組成物である。食品は、これらの食品組成物のいずれかを含有すれば特に限定されないが、エゾウコギであることが好ましい。
薬品、化粧品、食品、またはそれらの組成物における、エレウテロシド類の含有量は特に限定されないが、３重量％以上であることが好ましく、５重量％以上であることがより好ましく、７重量％以上であることがさらに好ましく、１０重量％以上であることがさらに好ましく、１５重量％以上であることがさらに好ましく、２０重量％以上であることがさらに好ましく、２５重量％以上であることがさらに好ましく、５０重量％以上であることがさらに好ましい。また、エレウテロシド類として、上述したエレウテロシド類のうち、１種類含有しても、複数種類含有してもよいが、少なくともエレウテロシドＡ、エレウテロシドＢ、エレウテロシドＣ、エレウテロシドＤ、エレウテロシドＥ、またはイソフラキシジンを含有することが好ましい
医薬の場合、公知の方法で剤型化し、個体に投与できる。投与経路は特に限定されないが、塗布剤または経口剤であることが好ましい。投与量は医師などの投与者が適宜判断できる。試薬の場合も、公知の方法で剤型化し、細胞に投与できる。投与方法などは、エゾウコギの場合と同様である。化粧品の場合も、通常塗布剤として用いられる。
医薬の場合、公知の方法で剤型化し、個体に投与できる。投与経路は特に限定されないが、塗布剤または経口剤であることが好ましい。投与量は医師などの投与者が適宜判断できる。試薬の場合も、公知の方法で剤型化し、細胞に投与できる。投与方法などは、エゾウコギの場合と同様である。化粧品の場合も、通常塗布剤として用いられる。
［エゾウコギの抽出物の調製方法］
エゾウコギ抽出物の３０％エタノール溶液は、丸善製薬株式会社によって以下のように製造された。
エゾウコギ抽出物の３０％エタノール溶液は、丸善製薬株式会社によって以下のように製造された。
まず、エゾウコギの根茎の細切り１０ｋｇに３０体積％エタノール約５０Ｌを加え、ゆるやかに加熱抽出した後、濾過した。残渣は、さらに３０体積％エタノール約５０Ｌで同様に２回抽出し、全抽出液を合わせて、５０℃で約５Ｌにまで減圧濃縮を行った。この液に、無水エタノールを加え、エタノール濃度を３０％に調整した。７〜１０日冷所で放置し、濾過後、３０体積％エタノールを加えて、５０Ｌとした（エゾウコギの最終濃度１０ｇ／Ｌ）。
［実施例１］
３５ｍｍ径の細胞培養シャーレ（住友ベークライト株式会社）を用いてヒト正常皮膚角化細胞であるＮＨＥＫ細胞（クラボウ（倉敷紡績株式会社））を２．４×１０4細胞、２ｍＬの専用培地（Ｈｕ−ＭｅｄｉａＫＧ２：クラボウ（倉敷紡績株式会社））で培養した。３日後、３×１０5細胞時点にて培地を吸引除去し、１ｍＬのＨＥＰＥＳ緩衝液（クラボウ（倉敷紡績株式会社））で洗浄し、CL-1000Ultraviolet Crosslinker（ＵＶＰ社）を用いて３０２ｎｍのＵＶＢ（８Ｗ）を照射した。照射量はそれぞれ０，２，５，１０，２０，５０，１００，２００ｍＪ／ｃｍ2とした。その後、２０μＬのエゾウコギ抽出物（１０μｇ／μＬ）または０．３体積％エタノールを含む専用培地２ｍＬをそれぞれ加え（以下、それぞれ、ＥＳＥ群およびコントロール群と称する）、２４時間培養後、１５ｍＬの遠心管に培地上清を移した。さらにシャーレを１ｍＬのＨＥＰＥＳ緩衝液で洗浄し、洗浄液も同じ遠心管に加えて、HITACHIhi-mac CR21（株式会社日立製作所）で２５００回転／分（１１３０×ｇ）で遠心分離し、上清を除去した。シャーレはアキュターゼ（ナカライテスク株式会社）１ｍＬにて１０分〜２０分間処理してシャーレ底面から剥離させ、上清を除去した１５ｍＬチューブに加え、その混合物を１．５ｍＬのチューブに移し、HITACHI hi-macCF15Rで４℃、５０００回転／分（２３８６×ｇ）で５分間遠心した。上清を除き、１％ＢＳＡを含むＰＢＳ１ｍＬにて再懸濁後、１０μＬの細胞液および１０μＬのトリパンブルー溶液を混合して、ＴＣ−２０セルカウンター（ＢｉｏＲａｄ社）により細胞数を計測した。
３５ｍｍ径の細胞培養シャーレ（住友ベークライト株式会社）を用いてヒト正常皮膚角化細胞であるＮＨＥＫ細胞（クラボウ（倉敷紡績株式会社））を２．４×１０4細胞、２ｍＬの専用培地（Ｈｕ−ＭｅｄｉａＫＧ２：クラボウ（倉敷紡績株式会社））で培養した。３日後、３×１０5細胞時点にて培地を吸引除去し、１ｍＬのＨＥＰＥＳ緩衝液（クラボウ（倉敷紡績株式会社））で洗浄し、CL-1000Ultraviolet Crosslinker（ＵＶＰ社）を用いて３０２ｎｍのＵＶＢ（８Ｗ）を照射した。照射量はそれぞれ０，２，５，１０，２０，５０，１００，２００ｍＪ／ｃｍ2とした。その後、２０μＬのエゾウコギ抽出物（１０μｇ／μＬ）または０．３体積％エタノールを含む専用培地２ｍＬをそれぞれ加え（以下、それぞれ、ＥＳＥ群およびコントロール群と称する）、２４時間培養後、１５ｍＬの遠心管に培地上清を移した。さらにシャーレを１ｍＬのＨＥＰＥＳ緩衝液で洗浄し、洗浄液も同じ遠心管に加えて、HITACHIhi-mac CR21（株式会社日立製作所）で２５００回転／分（１１３０×ｇ）で遠心分離し、上清を除去した。シャーレはアキュターゼ（ナカライテスク株式会社）１ｍＬにて１０分〜２０分間処理してシャーレ底面から剥離させ、上清を除去した１５ｍＬチューブに加え、その混合物を１．５ｍＬのチューブに移し、HITACHI hi-macCF15Rで４℃、５０００回転／分（２３８６×ｇ）で５分間遠心した。上清を除き、１％ＢＳＡを含むＰＢＳ１ｍＬにて再懸濁後、１０μＬの細胞液および１０μＬのトリパンブルー溶液を混合して、ＴＣ−２０セルカウンター（ＢｉｏＲａｄ社）により細胞数を計測した。
その結果、図１に示すように、ＥＳＥ群では、コントロール群に比べ、１０ｍＪ／ｃｍ2では約３％、２０ｍＪ／ｃｍ2では約２０％、３０ｍＪ／ｃｍ2では約１３％の細胞生存率の回復が見られた。そして、ＥＣ５０は、エゾウコギ抽出物の添加により、１７．２ｍＪ／ｃｍ2（コントロール群）から２９．３ｍＪ／ｃｍ2（ＥＳＥ群）に増加した。このように、エゾウコギ抽出物は、ＵＶ感受性を軽減する。
［実施例２］
実施例１と同様にして、ＮＨＥＫ細胞に対し、１０ｍＪ／ｃｍ2のＵＶＢ（３０２ｎｍ、８Ｗ）を照射し、２０μＬのエゾウコギ抽出物または０．３体積％エタノールを含む専用培地２ｍＬをそれぞれ加えた後、０、０．５、１、４、８、１２、２４、４８時間培養し、実施例１と同様にして細胞を回収し、総細胞数を測定した。さらに、２×１０5細胞相当の細胞をMuse（登録商標） H2A.X Activation Dual Detection Kitを用いて、DNA損傷の指標であるγ−Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の割合を調べた。
実施例１と同様にして、ＮＨＥＫ細胞に対し、１０ｍＪ／ｃｍ2のＵＶＢ（３０２ｎｍ、８Ｗ）を照射し、２０μＬのエゾウコギ抽出物または０．３体積％エタノールを含む専用培地２ｍＬをそれぞれ加えた後、０、０．５、１、４、８、１２、２４、４８時間培養し、実施例１と同様にして細胞を回収し、総細胞数を測定した。さらに、２×１０5細胞相当の細胞をMuse（登録商標） H2A.X Activation Dual Detection Kitを用いて、DNA損傷の指標であるγ−Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の割合を調べた。
その結果、図２Ａに示すように、ＵＶを照射した場合、コントロール群では、２４時間後までの総細胞数がＵＶ処理時から変化せず、４８時間後に当初の２．５倍程度まで増加した。これは照射から２４時間の間に、ＵＶによって傷ついたＤＮＡが修復されており、その間細胞増殖が休止状態にあったことを意味する。一方で、ＥＳＥ群では照射後２４時間後には既に２倍程度に増加しており、４８時間後には総細胞数は照射時に比べて３倍程度にまで増加していた。このように、エゾウコギ抽出物は、ＵＶＢ照射による細胞増殖の遅延を短縮する。
また、図２Ｂに示すように、γ−Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の割合は、ＵＶＢ照射後４時間以内でコントロール群、ＥＳＥ群ともに、同レベルに一過的に上昇した（４５〜５５％程度）が、コントロール群とＥＳＥ群では、その後の経過が異なっていた。コントロール群では、γ−Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の割合は、照射後１時間でピークを迎え約５０％であった。その後１２時間後には２０％程度まで低下したが、少なくとも４８時間後まではγ−Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の割合は十分には低下せず、ＵＶＢ無照射のレベルにまで戻ることはなかった。一方で、ＥＳＥ群では、ＵＶＢ照射により誘導されるγ−Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の割合が１２時間後にすでにＵＶＢ無照射のレベルまで戻った。このように、エゾウコギ抽出物は、ＵＶＢによる細胞内のＤＮＡのダメージの蓄積を抑制するのではなく、ＤＮＡダメージからの回復を促進する。
［実施例３］
ＵＶＢ（３０２ｎｍ、８Ｗ）の強度を２０ｍＪ／ｃｍ2にする以外は、実施例１と同様にして、ＮＨＥＫ細胞に対してＵＶＢ（８Ｗ）を照射し、２０μＬのエゾウコギ抽出物または０．３体積％エタノールを含む専用培地２ｍＬをそれぞれ加えた後、２４時間培養し、顕微鏡下で観察した。その後、実施例１と同様にして細胞を回収し、総細胞数を測定した。さらに、実施例２と同様にして、γ−Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の割合を調べた。
ＵＶＢ（３０２ｎｍ、８Ｗ）の強度を２０ｍＪ／ｃｍ2にする以外は、実施例１と同様にして、ＮＨＥＫ細胞に対してＵＶＢ（８Ｗ）を照射し、２０μＬのエゾウコギ抽出物または０．３体積％エタノールを含む専用培地２ｍＬをそれぞれ加えた後、２４時間培養し、顕微鏡下で観察した。その後、実施例１と同様にして細胞を回収し、総細胞数を測定した。さらに、実施例２と同様にして、γ−Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の割合を調べた。
その結果、顕微鏡下の観察において、図３Ａに示すように、２０ｍＪ／ｃｍ2ＵＶ処理による細胞死が見られたが、ＥＳＥ群では、濃度依存的に生着している生細胞の割合が増加した。また、トリパンブルー染色の結果においては、図３Ｂに示すように、ＵＶＢを照射することで生細胞率は３０〜４０％程度にまで低下したが、ＥＳＥ群では、濃度依存的に生細胞の割合は増加し、１００μｇ／ｍＬ処理群では６０〜７０％にまで回復した。また、図３Ｃに示すように、２０ｍＪ／ｃｍ2ＵＶ処理後２４時間のγ−Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の割合は、６０％程度にまで上昇していたが、ＥＳＥ１００μｇ／ｍＬでは約４０％（回復率約６０％）にまで有意に低下した。
このように、エゾウコギ抽出物は、ＵＶＢによる細胞死を抑制する。
［実施例４］
エレウテロシドＡ（Chengdu Biopurify Phytochemicals Ltd.）およびエレウテロシドＥ（Wuhan ChemFaces Biochemical Co., Ltd）を１０ｍＭでＤＭＳＯに溶解し、エレウテロシドＢ（Chengdu Biopurify Phytochemicals Ltd.）、エレウテロシドＣ（Wuhan ChemFaces Biochemical Co., Ltd）、エレウテロシドＤ（Wuhan ChemFaces Biochemical Co., Ltd）、およびイソフラキシジン（和光純薬工業株式会社）はそれぞれ１０ｍＭで３０体積％エタノール溶液に溶解した。
エレウテロシドＡ（Chengdu Biopurify Phytochemicals Ltd.）およびエレウテロシドＥ（Wuhan ChemFaces Biochemical Co., Ltd）を１０ｍＭでＤＭＳＯに溶解し、エレウテロシドＢ（Chengdu Biopurify Phytochemicals Ltd.）、エレウテロシドＣ（Wuhan ChemFaces Biochemical Co., Ltd）、エレウテロシドＤ（Wuhan ChemFaces Biochemical Co., Ltd）、およびイソフラキシジン（和光純薬工業株式会社）はそれぞれ１０ｍＭで３０体積％エタノール溶液に溶解した。
実施例３と同様にして、ＮＨＥＫ細胞に対してＵＶＢ（８Ｗ）を照射し、終濃度１μＭのエレウテロシドＡ、エレウテロシドＢ、エレウテロシドＣ、エレウテロシドＤ、エレウテロシドＥ、イソフラキシジンまたは０．３体積％エタノール、または０．１％ＤＭＳＯを含む専用培地２ｍＬをそれぞれ加えた後、２４時間培養し、その後、実施例１と同様にして細胞を回収し、総細胞数を測定した。さらに、実施例２と同様にして、γ−Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の割合を調べた。
その結果、トリパンブルー染色の結果においては、図４Ａに示すように、２０ｍＪ／ｃｍ2ＵＶＢを照射することで生細胞率は３０〜４０％程度にまで低下したが、エレウテロシドＡ、エレウテロシドＢ、エレウテロシドＣ、エレウテロシドＤ、エレウテロシドＥ、イソフラキシジンの添加により、それぞれ、約８０％、４６％、５４％、６２％、８８％、６４％まで回復した。また、図４Ｂに示すように、２０ｍＪ／ｃｍ2ＵＶ処理後２４時間のγ−Ｈ２Ａ．Ｘ陽性細胞の割合は、６０％程度にまで上昇していたが、エレウテロシドＡ、エレウテロシドＢ、エレウテロシドＣ、エレウテロシドＤ、エレウテロシドＥ、イソフラキシジンの添加により、それぞれ、約３０％、４６％、３８％、３７％、２６％、４５％程度にまで減少していた。このように、エゾウコギ抽出物に含有されるエレウテロシド類は、ＵＶＢによる細胞死を抑制し、ＤＮＡ修復促進作用を持つ。
Claims (12)
- エレウテロシドＣ、およびエレウテロシドＤからなる群より選択される一以上の化合物が有効成分として添加された細胞死抑制剤（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加されたものを除く）。
- 試薬、医薬、食品または化粧品である、請求項１に記載の細胞死抑制剤（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加されたものを除く）。
- 医薬または化粧品であって、塗布剤である、請求項１に記載の細胞死抑制剤（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加されたものを除く）。
- エレウテロシドＣ、およびエレウテロシドＤからなる群より選択される一以上の化合物が有効成分として添加された細胞死抑制用食品組成物（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加されたものを除く）。
- 請求項４に記載の細胞死抑制用食品組成物（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加されたものを除く）を含有する細胞死抑制用食品。
- エレウテロシドＣ、およびエレウテロシドＤからなる群より選択される一以上の化合物が有効成分として添加された細胞死抑制用化粧品組成物（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加されたものを除く）。
- 請求項６に記載の細胞死抑制用食品組成物（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加されたものを除く）を含有する細胞死抑制用化粧品。
- 細胞死抑制剤の製造方法であって、
エレウテロシドＣ、およびエレウテロシドＤからなる群より選択される一以上の化合物を有効成分として添加する工程（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加する工程を除く）を含む、細胞死抑制剤の製造方法。 - 細胞死抑制用食品組成物の製造方法であって、
エレウテロシドＣ、およびエレウテロシドＤからなる群より選択される一以上の化合物を有効成分として食品組成物に添加する工程（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加する工程を除く）を含む、細胞死抑制用食品組成物の製造方法。 - 細胞死抑制用食品の製造方法であって、
請求項９に記載の細胞死抑制用食品組成物（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加されたものを除く）を用いて食品を製造する工程を含む、細胞死抑制用食品の製造方法。 - 細胞死抑制用化粧品組成物の製造方法であって、
エレウテロシドＣ、およびエレウテロシドＤからなる群より選択される一以上の化合物を有効成分として化粧品組成物に添加する工程（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加する工程を除く）を含む、細胞死抑制用化粧品組成物の製造方法。 - 細胞死抑制用化粧品の製造方法であって、
請求項１１に記載の細胞死抑制用化粧品組成物（刺五加のメタノール抽出物及び水抽出物を添加されたものを除く）を用いて化粧品を製造する工程を含む、細胞死抑制用化粧品の製造方法。
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